JPH07501828A - セレクチン類で仲介される炎症のペプチド阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 セレクチン類で仲介される炎症のペプチド阻害剤本発明は、セレクチン類から誘 導されるペプチドを用いて炎症応答の治療と予防を行う方法の技術分野に関する 。

血管表面への血小板および白血球の粘着は炎症応答の極めて重要な要素であり、 かつ補体系、凝固系、および免疫系の同時に起こり相互に関連する活性化を伴う 複雑な反応シリーズの一部である。

トロンビンおよびヒスタミンのような°速効性°の活性化因子に暴露された内皮 は、２〜ｌＯ分以内に好中球に対して粘着性になり、一方、腫瘍壊死因子および インターロインキン−１のようなサイトカインに暴露された内皮は１〜６時間後 に粘着性になる。迅速な内皮依存性の白血球粘着性は、細胞表面での脂質メディ エタ血小板活性化因子（ＰＡＦ）の発現、および、他の内皮および白血球の表面 受容体の出現に関連がある。

セレクチン類は、３種の構造上関連する膜の糖タンパク質であって、血管の内皮 と血小板に対する白血球の粘着に関与する０　これは、ＭｃＥｖｅｒ、Ｔｈｒｏ ｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、、６６巻８０〜８７頁１９９１年に総説が記載さ れている。Ｐ−セレクチン（ＣＤ６２）は、ＧＭＰ−１４０またはＰＡＤＧＥＭ タンパク質として周知であるが、分泌顆粒膜から活性化血小板の原形質膜へ迅速 に輸送される、好中球と単球に対する受容体であり、Ｌａｒｓｅｎら、釦■、５ ９巻、３０５〜３１２頁（１９８９年１０月）および、ＨａｍｂｕｒｇｅｒとＭ ｃＥｖｅｒ、　Ｂｌｏｏｄ１７５巻、５５０〜５５４頁（１９９０年）に報告さ れている。また、内皮細胞に対する受容体であり、Ｇｅｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、 　３４３巻、７５７〜７６０頁（１９９０年）およびＬｏｒａｎｔら、Ｊ、Ｃｅ １ｌ　Ｂｉｏｌ、、１１５巻２２３〜２３４頁（１９９１年）に報告されている 。Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）は、好中球に対するサイトカイン誘発性内皮 細胞受容体であり、Ｂｅｖｉｌａｅｑｕａ、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓ ｃｉ、ＵＳＡ、８４巻　９２３８〜９２４２頁（１９８７年）に報告されている 。また単球に対する上記内皮細胞受容体であり、ＣＨｅ５ｓｉｏｎら、な赳」徂 上人■Ｌ江Ｌ■Δ、８７巻、１６７３〜１６７７頁（１９９０年）に報告され、 ならびに記憶Ｔ細胞に対する上記内皮細胞受容体であり、Ｐｉｃｋｅｒら、■Ｕ 匹、３４９巻、７９６〜７９９頁（１９９１年）およびＳｈｉｍｉｚｕら、Ｎａ ｔｕｒｅ。

３４９巻、７９９〜８０２頁（１９９１年）に報告されている。Ｌ−セレクチン （ＬＡＭ−１，ＬＥＣＡＭ−１，Ｌｅｕ−８／Ｍｅｌ　１４／ＴＱＩ抗原、リン パ球指向性受容体）は、骨髄細胞およびほとんどのリンパ球に発現されるタンパ ク質であり、好中球の炎症部位への濡出と、リンパ球の末梢リンパ節への指向に 関与している。Ｌａ５ｋｅｙら、釦ｕ１５６巻、１０４５〜１０５５頁（１９８ ９年）、Ｓｉｅｇｅｌｍａｎら、５ｃｉｅｎｃｅ。

２４３巻、１１６５〜１１７２頁（１９８９年）、Ｋｉｓｈｆｍｏｔｏら、５ｃ ｉｅｎｃｅ、　２４５巻、１２３８〜１２４１頁（１９８９年）　、Ｗａｔｓｏ ｎら、Ｎａｔｕｒｅ、　３４９巻、１６４〜１６７頁（１９９１年）に報告され ている。

白血球に対する、より緩慢なサイトカイン誘発性の内皮粘着は、少な（とも一部 がＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）によって仲介されており、このＥ−セレクチ ンは、サイトカインに暴露された後、内皮細胞によって合成され次いで細胞表面 に輸送され、そこで好中球と結合する。ＥＬＡＭ−１の単離、特性決定およびク ローニングについては、Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら、５ｃｆｅｎｃｅｑ　２４３巻 、１１６０〜１１６５頁（１９８９年）に総説が記載されている。Ｌ−セレクチ ンについては特性決定とクローン化がなされており、Ｌａ５ｋｙら、堕■、５６ 巻、１０４５〜１０５５頁、　（１９８９年）（マウス）およびＴｅｄｄｅｒら 、ＬＪ」し見Ｉよ、１７０巻、１２３〜１３３頁（１９１１９年）に報告されて いる。Ｐ−セレクチン（ＧＭＰ−１４０）は、最初に、ＭｃＥｖｅｒとＭａｒｔ ｉｎ、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５９巻、９７９９〜９８０４頁（１９１ １４年）によってヒト血小板から精製された。このタンパク質は、静止血小板の α顆粒中に存在しているが、血小板の活性化に続いて原形質膜に対して迅速に再 分布される。Ｓｔｅｎｂｅｒｇらの１９８５年の文献に報告されている。Ｐ−セ レクチンが内皮細胞内に存在し、これらの細胞によって生合成されることは、Ｍ ｃＥｖｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、７０（５）巻　５ｕｐｐ１．１：３５５ａ、　Ａｂ ｓｔｒａｃｔ　Ｎｏ、　１２７４　（１９１１７）に報告されている。

止血経路と炎症経路に関与するタンパク質は、ヒトの疾患の診断目的と治療にと って重要である。しかし、治療にタンパク質を用いることには多くの問題点があ る。タンパク質は、患者に投与するのに充分な量で製造するには通常費用がかか る。さらに、患者に１回以上投与した後、そのタンパク質に対して反応が起こる ことがある。それ故、そのタンノくり質と同じかまたはそれより優れた活性を有 し、合成するのに安価で再現性がありおよび比較的無害なペプチドを開発するこ とが要望されている。

炎症応答を阻害するのに用いるＧＭＰ−１４０（Ｐ−セレクチン）の機能は、１ ９８９年３月８日付けで出願した米国特許出願番号０７／３２０．４０８号にＭ ｃＥｖｅｒが記載している。ＧＭＰ−１４０由来のペプチド類については、Ｒｏ ｄｇｅｒ　Ｐ、　ＭｃＥｖｅｒが１９９０年７月１７日付けで出願した発明の名 称が”Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ　Ａｃｔｉｖｅ　５ｅｌｅｃｔｉｎ−Ｄｅｒｉ ｖｅｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”の米国の一部係属出願、出願番号０７１５５４．１ ９９号に記載されている。これらのペプチドは患者の出自応答と炎症応答が診断 と調節を行うのに有用であり、ＧＭＰ−１４０（Ｐ−セレクチン）の白血球によ る認識をプロ・ツクできるペプチドの治療上の有効量が患者に投与される。また １９９０年７月１７日（こ出願された米国特許出願番号０７１５５４．１９９号 には、Ｇ！ＩＰ−１４０のレクチン領域内にある配列は、他のタンノ（り質、特 １こＥＬＡＭ−１（Ｅ−セレクチン）とその指向性（ｈｏ＋ａｉｎｇ）受容体（ し−セレクチン）のレクチン領域との相同性を有し、好中球が精製ＧＭＰ−１４ ０ｉこ粘着するのを選択的に阻害し、それ故、これらの分子ζこよって結合が変 化したことを特徴とする患者と疾患の診断ア・ツセイ、上記の結合を変化させえ る化合物のスクリーニングアツセイ、および白血球と、凝固および／または炎症 のプロセス↓こ関与する血小板もしくは内皮細胞との相互作用を阻害もしく（家 調節するための臨床用途に用いることができると開示して（Ｘる。

Ｇｅｏｒｇｅ　Ａ、　ＴｌｅａｖｎｅｒｌｌＲｏｄｇｅｒ　Ｐ、　ＭｃＥｖｅｒ 、およびＪｉａｎ−Ｇｕ。

Ｇｅｎｇが１９９１年９月１０日付けで出願した、”　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｉｎｈ ｉｂｌ−ｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ 　５ｅｌｅｃｔｉｎｓ”という発明の名称の米国特許出願番号０７／７５７．１ ３１号、および１９９１年５月１４日付は出願の米国特許出願番号０７／６９９ ．６９３号には、ＧＮＰ−１４０のコア領域、残基５６〜６０および残基２３〜 ３０それぞれから誘導される合成ペプチドが開示されている。これらのペプチド はセレクチン類の結合を阻害するのに有用である。合成で製造することが可能で 、そのタンパク質自体から誘導されるペプチドと少な（とも等しいかまたは該ペ プチドより大きい活性を有するペプチドを開発することが好ましい。

それ故に本発明の目的は、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチ ンを含むセレクチン類によって認識される細胞と相互に作用するペプチドを提供 することである。

本発明の他の目的は、白血球が内皮もしくは血小板に粘着するのを阻害するのに これらのペプチドを使用する方法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、免疫応答および止血経路を調節するのにこれらのペ プチドを用いる方法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレク チンに関連する診断アッセイに用いるペプチドを提供することである。

発明の要約 Ｐ−セレクチン（ＧＭＰ−１４０）　、および類縁のセレクチン類であるＥ−セ レクチン（ＥＬＡＭ−１）とＬ−セレクチン（リンパ球指向性受容体）のレクチ ン領域の三つの領域から誘導されるペプチドは、セレクチン仲介の結合、例えば 好中球のＧＭＰ−１４０（Ｐ−セレクチン）との粘着を阻害することが見い出さ れた。下記の構造式で示されるこれらのペプチドおよび追加のペプチド、すなわ ち、下記式： ％式％（１） あるいは、その薬学的に許容される酸または塩基の付加物を合成した。

式中、ＡはＤ−もしくはＬ−グルタミン酸またはグリシンでありＢはＤ−もしく はＬ−アスパラギンまたはＤ−もしくはＬ−イソロイシンであり； ＣはＤ−もしくはＬ−トリプトファンであり；ＸおよびＹは０〜１６個の直鎖の アミノ酸であり；Ｒ１はＨ（遊離のＮ末端第一級アミ７基を意味する）、ホルミ ル・低級アルキル、アリール（ａｒｙｌ）　、低級アルカノイル、アロイル、ア ルキルオキシカルボニルまたはアリールアキジカルボニルであり、Ｒ２はＯＨ（ 遊離のＣ末端カルボキシル基を意味する）、低級アルキルもしくはアリールのエ ステルまたはＮＲ３Ｒ’　（式中、Ｒ３およびＲ′は各々独立して、■、低級ア ルキルもしくはアリールから選択される）である。

式Ｉのペプチドは、そのコア領域として、ＧＭＰ−１４０の７４〜７６位のアミ ノ酸配列の一部分と、シグナルペプチドを開裂した後の成熟タンパク質のＮ末端 として定義される残基１とをもっている。式！のペプチドの例は、３０〜１５０ ０μｍの範囲の濃度で、好中球がＰ−セレクチンと結合するのを阻害することを 示す。

Ｎ末端とＣ末端のフランキング領域のみならずコア配列内に変化があっても生物 活性が失われることがないということが見出された。

これらのペプチドは、診断薬として有用であり、および適切な薬学的担体と組み 合わせて凝固プロセスもしくは炎症プロセスを調節もしくは阻害する臨床用途に 有用である。

図面の簡単な説明 図１は、式１のいくつかのペプチドの、好中球のＧＭＰ−１４０とＮ結合を阻害 する活性を、阻害百分率体ペプチドの濃度（■Ｍ）で示す。ＲＫＥＡＥＩＷＴＤ Ｖ−Ｎ１３　（黒目角印）　；　ＴＮＩＡＧＩｌｒＡＷＮ−Ｎ１３（０四角印） 　；　ＫＫＡＬＴＮＥＡＥＮｌｒＡＤ−Ｎ１３（黒菱形印’）　；　ＣＸＡＬＴ ＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−Ｎ１３　（白菱形印）；　ＫＫＡＬＴＮＥＡＡＥＮＷＡＤ ＮＥＰＮＮＫＲＮＮＥＤ−ＮＨ３（黒三角印）　；　ＴＮＥＡＥＮＷＡＤ−Ｎ１ ３（山王角印）　；　ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−Ｎ１３　（黒丸印）　；　ＴＮＥ ＡＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮ−Ｎ１３（白丸印）；およびＡＥＩｆｆＡＤＮＥＰＮＮ −Ｎ１３（Ｘ印）。

発明の詳細な説明 ３〜１００個のアミノ酸からなりＰ−セレクチン様活性を宵すると定義されたペ プチド、これらのペプチドを含有する治療用組成物、これらペプチドの製造方法 、およびその使用方法を開示する。

それらの最も広い適用範囲において、これらのペプチドは、下記式： ％式％（） で表されるペプチドあるいはその薬学的に許容される塩であり、　； 式中、ＡはＤ−もしくはＬ−グルタミン酸またはグリシンでありＢはＤ−もしく はＬ−アスパラギンまたはＤ−もしくはＬ−イソロイシンであり； ＣはＤ−もしくはＬ−１−リプトファンであり；ＸとＹは０〜１６個の直鎖のア ミノ酸であり；Ｒ１はＨ（遊離のＮ末端第一級アミノ基を意味する）、ホルミル 、低級アルキル、アリール、低級アルカノイル、アロイル、アルキルオキシカル ボニルまたはアリールオキシカルボニルであり； Ｒ２は０■（遊離のＣ末端カルボキシル基を意味する）、低級アルキルもしくは アリールのエステル、またはＮＲ’Ｒ’であり、式中、Ｒ３とＲ４は各々独立し て、■、低級アルキルもしくはアリールから選択される。好ましいペプチドは、 ＣがＬ−トリプトファンであり、特にＲ１がＨでありＲ２がＮＲ’Ｒ’であるペ プチドである。

最も好ましいペプチドは以下のとおりである：Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ　−Ｌ ａｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｇ　１ｕ−Ａ　ｌａ　−Ｇ　１ｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ａ 　１ａ−ＡＳｐ−ＡＳｎ−ＮＨ，（６−シ不すＩＤＮｏ、コ）Ａ　１ａ−Ｌｅｕ −Ｔｈｒ−Ａｓ　ｎ　−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｕ−Ａｓ　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ ｌａ−Ａｓｐ（―己５すＩＤＮｏ、５） ＡＡｙ−Ｌａｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｇ　１ｕ−Ａｌａ　−Ｇ　１ｎ−Ａｓｎ−Ｔ ｒｐ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＮＨ。

（＠こ　ラ’Ｉ　より　Ｎｏ、６） Ｔｈｒ−Ａｓｎ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ａｌ ａ−Ａｓｐ−Ｍｎ−ＮＨ２（配　別　より　Ｎｏ、　８） Ｔｈｒ−Ａｓｎ−１１ａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ− 人５ｎ−ＮＨ。

（配ｌすＩＤＮｏ、９） Ｔｈｒ−Ａｓ　ｎ−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ ａ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−ＮＨ。

（配？Ｉ　ＩＤ　Ｎｏ、　１０１ 本願で用いる場合、′低級アルキル”という用語には、１〜６個の炭素原子を有 する分枝鎖、直鎖、および環状の飽和炭化水素、例えばメチル、エチル、プロピ ル、インプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、インペンチル 、ネオペンチルおよびヘキシルが含まれる。′低級アルカノイル”という用語は ＲＣ（０）　（Ｒは低級アルキル基）を意味する。

アロイルという用語はＡｒＣ（０）を意味し、式中Ａｒはアリール基であり、す なわち１〜３個のリングを有する芳香族もしく（マヘテロ芳香族構造であってリ ング融合構造であってもなくてもよく、ハロゲン、炭素、または窒素（Ｎ）、硫 黄（Ｓ）、１ノン（Ｐ）およびホウ素（Ｂ）のよな他のへテロ原子で置換されて いてもよい。

式ｌのペプチドは、遊離のペプチドまたは薬学的に許容される塩の形態で使用で きる。アミン塩は、ペプチドを酸と混合する公知の方法によって製造することが できる。適切な酸としては、無機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝 酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸、ならびに有機酸、たとえばギ酸、酢酸 、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コノ １り酸、マレイン酸、フマル酸、アントラニル酸、ケイ皮酸、ナフタレンスルホ ン酸、およびスルファニル酸が含まれる。

ペプチド中のカルボン酸基は、そのペプチドを塩基と混合する公知の方法にした がって塩に変換すること力ｆできる。適切な塩基としては、無機の塩基、たとえ （ｆ水酸イヒナト１ノウム、水酸化アンモニウムおよび水酸化カリウム、ならび に有機塩基たとえばモノ−、ジー、およびトリーアルキルおよびアリールアミン （たとえばトリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミンおよびジメ チルアミンおよび任意に置換されたモノ−、ジーおよびトリーエタノールアミン ）がある。

本願に引用する場合、ペプチドと、その製造に用いる所定の原料のアミノ酸成分 は、簡便にするため略号で示す。これらの略号は下記のとおりである。

（以下余白） アミノ酸　省略形 Ｄ−アロイソロイシン　Ｄ−Ａ　Ｉ　１　ｅＬ−アルギニン　Ａｒｇ　Ｒ Ｄ−アルギニン　Ｄ−Ａｒｇ　ｒ Ｄ−７Ｘ／ｆ５ギア　Ｄ−Ａｓｎ　Ｎ Ｌ−７２パラギン　Ｌ−Ａｓｎ　ｎ Ｌ−アスパラギン酸　Ａｓｐ　Ｄ Ｄ−アスパラギン酸　Ｄ−Ａｓｐ　ｄ Ｌ−システィン　（ｙｓ　Ｃ Ｄ−システィン　Ｄ−Ｃｙ　ｓ　ｃ Ｌ−グルタミン酸　Ｇｌｕ　Ｅ Ｄ−グルタミン酸　Ｄ−Ｇｌｕ　ｅ Ｌ−グルタミン　Ｇｌｎ　Ｑ Ｄ−グルタミン　［）−Ｇｌｎ　Ｑ グリシン　ｃｒｙ　Ｇ Ｌ−ヒスチジン　Ｈｌｓ　Ｈ Ｄ−ヒスチジン　Ｄ−Ｈｌｓ　ｈ Ｌ−インロイシン　１１ｅ　Ｉ Ｄ−リジン　Ｄ−Ｌｙｓ　ｋ Ｌ−プロリン　Ｐｒｏ　Ｆ Ｄ−プロリン　Ｉ）−Ｐ　ｒ　ｏ　ｐ Ｌ−ピログルタミン酸　ｐＧｌｕ Ｄ−ピログルタミン酸　Ｄ−ｐＧＩｕ Ｌ−セリン　Ｌ−Ｓｅｒ　Ｓ Ｄ−セリン　Ｄ−３ｅ　ｒ Ｌ−トレオニン　Ｌ−Ｔｈｒ　Ｔ Ｌ−チロシン　Ｌ−Ｔｙｒ　Ｙ Ｄ−チロシン　Ｄ−Ｔｙｒ　Ｖ Ｌ−トリプトファン　７ｒｐ　ｗ Ｄ−トリプトファン　Ｄ−Ｔｒｐ　ｗ Ｌ−バリン　Ｖａｔ　Ｖ 試薬　省略形 Ｎ、Ｎ−ジインプロピルエチルアミン　ＤＩＥＡＮ−メチルピロリドン　ＮＭＰ ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール　ＨＯＢＴジメチルスルホキシド　ＤＭＳＯ 無水酢酸　ＡＣ２０ ペプチドの製造方法 本発明のペプチドは、一般に、例えば引用刊行物に記載されている、下記の周知 の方法で製造することができる。なおその周知の方法は本願に援用するものとす る。好ましい方法では、本発明のペプチドは、Ｊ、Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅａ＋、Ｓ ｏｃ、、８５巻、２１４９〜２１５４頁（１９６３年）にＭｅｒｒｉｆ　１ｅｌ ｄが初めて報告した固相合成法にしたがって製造される。他の方法は、例えばＭ 、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　ｓＰｅ　ｔ’ｄｅ　Ｓ　ｎｔｈｅｓｉｓ、第２版（Ｊｏ ｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆５ｏｎｓ、１９７６年）、および当該技術分野の当業者にと って周知の他の参考論文に記載されている。

このような合成において使用可能な適切な保護基とその略号は、上記のテキスト およびＪ、Ｆ、Ｗ、ＭｃＯｍｉｅＳＰ　ｏｔｅｃｔ　ｗｅ　Ｇｒ。

隻ＬＬ−Ｌｌ」Σ口ａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ　（Ｐ］ｅｎｕ＋＊　Ｐｒｅｓ ｓ社、米国、ニューヨーク、１９７３年）に記載されている。本願に用いられる 共通の保護基は、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏａ）　、フルオレニルメト キシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、トシル（Ｔｏｓ）、０−ブ ロモフェニルメト牛ジカルボニル（ＢｒＣＢＺもしくはＢｒＺ）、フェニルメト キシカルボニル（ＣＢＺもしくはＺ）、２−クロロフェニルメトキシカルボニル （２−Ｃ１−ＣＢＺまたはＣＩ−Ｚ）、４−メトキシ−２，３４−トリメチルベ ンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、ホルミル（ＣＨＯ）、およびｔ−ブチル（ｔ−Ｂ ｕ）である。

固相法によって式！のペプチドを合成する一般的な合成手順は下ｇ己のとおりで ある。

Ｂ、Ｎ”−ＦＭＯＣ保護を用いた固相ペプチド合成のための一般的な合成手順Ｂ ｏｅまたはＦＭＯＣを用いて合成したへ°７°ｆドの脱保護された５ｃＡ−アミ ノ基の末端アセチル化はＮＭＰ中１０％Ａｃ２０と５％ＤＩＥＡで行われ、生成 したペプチドのレジンをＮＭＰおよび／またはＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。

これらのペプチドは、当該技術分野の当業者にとって周知の標準の遺伝子工学の 技術を用いても製造することができる。

例えば、本発明のペプチドは、そのペプチドをコードする核酸を発現ベクターに 挿入し、そのＤＮＡを発現させ、次いで必要なアミノ酸の存在下で該ＤＮＡをペ プチドに翻訳させることによって酵素的に製造することができる。生成したペプ チドはクロマトグラフィー法または電気泳動法を用いて精製するか、またはキャ リアータンパク質を用いて精製し得る。

キャリアータンパク質を用いる方法は、キャリアータンパク質をコードする核酸 配列と、ペプチドをコードする配列とをインフェイスで発現ベクターに挿入する ことによってペプチドに融合し、次いでペプチドから開裂することができる。こ の融合タンパク質−ペプチドは、クロマトグラフィー法、電気泳動法または免疫 学的方法を用いて単離することができる（例えば担体タンパク質に対する抗体を 通じて樹脂に結合させる）。得られたペプチドは、化学的方法または酵素による 方法例えば加水分解酵素を用いて開裂させることができる。

薬剤組成物の製造方法 これらのペプチドを含有する薬剤組成物を製造するために、式Ｉのペプチドまた はその塩基もしくは酸の付加塩を、活性成分として、通常の薬剤配合法にしたが って、薬剤担体と組み合わせる。この担体は、例えば舌下、直腸、鼻、経口、も しくは非経口の投与を行うのに要求される製剤の形態によって、広範囲の種類の 形態を取り得る。経口剤形の組成物を製造する際には、通常の薬剤媒体のいずれ でも用いることができる。例えば経口液体製剤（たとえば懸濁液剤、エリキシル 剤または水剤）を製造するのには、水、油、アルコール、香味剤、保存剤、およ び着色剤が用いられ、または経口の固形製剤（例えば散剤、カプセル剤または錠 剤）を製造するには、デンプン、糖、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤および 崩壊剤のような担体が用いられ得る。

生物学的利用率を増大する放出制御処方もしくは強化制御処方も使用し得る。投 与が容易なため、錠剤とカプセル剤は、固形薬剤担体を用いる場合、最も有利な 経口単位投与形である。所望の場合、錠剤は、標準的方法で糖衣錠にするかまた は腸溶性被膜とし得る。

非経口製品については、担体は通常滅菌水であるが、溶解性を補助するためまた は保存剤として、担体の成分を含有させ得る。注射用懸濁液剤も製造し得るが、 この場合適当な液体担体および懸濁剤を使用し得る。

また本発明のペプチドは、水剤もしくはクリーム剤を局所に塗布することによっ て、創傷もしくは炎症の部位に局部的に投与し得る。

あるいは、本発明のペプチドは、リポソームまたは微小球体（腸１ｃｒｏｓｐｈ ｅｒｅｓ）　（もしくは微小粒子）、または担体の埋包もしくはカプセルで包ん だ送達システムで投与し得る。患者に投与するリポソームおよび微小球体の製造 方法は当該技術分野の当業者に周知である。米国特許第４．７８９．７３４号に は、生物学的物質をリポソーム中に包みこむ方法が記載されている。特に、その 物質は溶解して水溶液とし、適切なリン脂質および脂質を必要に応じて界面活性 剤とともに添加され、および必要な場合その物質は透析もしくは音波処理に付さ れる。

周知の方法の優れた総説として、Ｇ、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、　１４章　”Ｌ ｉｐｏｓｏｍｅｓ、”　ｒｕ　Ｃａｒｒｉｅｒｓ　ｉｎ　Ｂｉｏ　ａ　ｄ　Ｍｅ ｄ　ｃ　ｅ　２８Ｔ〜３４１頁（ＡＨｄＨｉｃ　Ｐｒｅｓｓ社、１９７９年）に 記載されている。ポリマーまたタンパク質で形成された微小球体は当該技術分野 の当業者には周知であるので、胃腸器官を通して直接血液流に入るように調製し 得る。あるいは、本発明のペプチドは体内に組み込んでもよく、数日間〜数箇月 間の範囲の期間にわたってゆっくり放出するためのに移植する微小球体もしくは 微小球体の複合体でもよい。例えば米国特許第４．９０６．４７４号、同号４． ９２５．６７３号および同第３．６２５．２１４号参照。

結合を実証する方法 生物学的に活性なペプチドは、好中球、単球、リンパ球のサブセットあるいは他 の細胞がＧＭＰ−１４０のようなセレクチンに結合するのを阻害するペプチドか 、またはＥＬＡＭ−１およびまたはその指向性受容体によって仲介される白血球 が内皮に粘着するのを阻害するペプチドである。

ペプチドは、細胞に対する粘着、例えば好中球がプラスチック製ウェルに固定化 された精製ＧＭＰ−１４０に粘着するのを阻害する能力で、Ｇｅｎｇら、Ｎａｔ ｕｒｅ、　３４３巻、７５７〜７６０頁（１９９０年）に記載のアッセイを用い てスクリーニングし得る。

ヒト好中球は、Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社のＭｏｎｏ−Ｐｏｌｙ分 離媒体を用い密度勾配遠心分離にかけて、ヘパリン化した全血から単離し得る。

好中球懸濁液は９８％以上の純度であり、トリパンブルー排除法によって９５％ 以上が生きている。粘着性検定のために、好中球を、１．２６ｍＭ　Ｃａ”およ び、０．８１ｍＭ　Ｍｇ”　（ＨＢＳＳ、　Ｇｉｂｃｏ）を５ｍｇ／ｍｌヒト血 清アルブミン（ＨＢＳＳ／ＨＳＡ）とともに含有するハンクスの均衡塩類溶液中 に、２Ｘ１０’細胞／ｍｌの濃度で懸濁させる。粘着性アッセイは、９６ウエル マイクロタイタープレート、Ｃｏｒｎｉｎｇ社、で３個づつ、各種のタンノ（り 質溶液５０μｌとともに、４℃にて一夜インキユベートして行われる。

ＧＮＰ−１４０は、下記のように、抗体５１２−セファロースＴ１１による免疫 アフィニティクロマトグラフイーおよびＭｏｎｏ−Ｑ”カラム（ＦＬＰＣ，Ｐｈ ａｒｗ＋ａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）によるイオン交換り０マ ドグラフイーによって、ヒト血小板溶解物から単離する。

血液銀行から入手して４℃で貯蔵した古いヒト血小板ツク・ツク（１００単位） をプールし、ｐＨ７，５、ＳｍＭ　ＥＤＴＡに調節し、１す・ットルボトルで３ ０分間、４，０ＯＯｒｐ■で遠心分離し、１す・ノトルの０．ＩＭ　ＮａＣ１， ２０ｍＭ　）リスｐＨ７，５（ＴＢＳ）、５ｍＭ　ＥＤＴＡ、　５ｍＭベンズア ミジンで３回洗浄する。

得られたベレットを、最少量の洗浄緩衝液中に再懸濁して凍結した。凍結した血 小板を解凍し、５０ｍ１ＴＢＳ、　Ｓｄベンズアミン、５閣Ｍ　ＥＤＴＡ　ｐＨ ７，５，１００Ｍロイペプチン中に再懸濁させる。

得られた懸濁液を、６００冒ｌ凍結乾燥フラスコを用いてドライアイス−アセト ン浴中で、凍結と解凍を２回行い、次にガラス／テフロン乳鉢と乳棒でホモジナ イズして、ＤＩＦＰ中で１ｍＭにする。

ＮａＣ１の濃度は４Ｍ　Ｎａｃｌの貯蔵溶液を用いて０．５Ｍに調節する。得ら れた懸濁液を４℃で攪拌した後、ポリカーボネート試験管中で、３３．０００ｒ ｐ■にて６０分間、４℃にて遠心分離する。上澄み液（０，５Ｍ　ＮａＣ１洗浄 液）を除いて保管する。この上澄み液とともに、ベレットの頂部を除かないよう に注意する。そのベレツトを抽出緩衝液（ＴＢＳ、　Ｓ−Ｍベンズアミジン、５ 膳Ｍ　ＥＤＴＡ　ｐＨ７，ｓ。

１００μＭロイペプチン、２％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００）中でホモジナイズす る。１９．５０Ｏｒｐｍにて２５分間、４℃にて遠心分離した後、上澄み液を除 去する。この抽出操作をペレ・ノドについて繰り返し、生じた上澄み液は最初の 上澄み液と混合する。混合した抽出液はメンプラン状のＧＭＰ−１４０を含有し ているが、０．５Ｍ　Ｎａｃｌに調節する。

可溶性の画分（０，５Ｍ　Ｎａｅｌ洗浄水）およびメンプラン抽出物（これを０ ．５Ｍ　ＮａＣ１に調節する）は、Ｓａｇ／ｍｌの濃度で２時間４℃にてＡｆｆ ｉｇｅｌ　（Ｂｉｏｒａｄ社）に予め力・ノブリングさせたモノクローナル抗体 ５１２（ヒ）　ＧＭＰ−１４０に対する抗体）の別々のブールに吸収させる。樹 脂を静置させた後、上澄み液を除去する。

結合されたＧＭＰ−１４０を含有するＳｉ２　Ａｆｆｉｇｅｌを、カラムに注入 し、−夜、４℃にて、４００ｍ１のＯ，ＳＭ　Ｎａｃｌ、　２０ｍＭ）リスｐＨ ７、Ｓ、０．０１％Ｌｕｂｒｏｌ　ＰＸで洗浄する。

結合されたＧＭＰ−１４０を、８０％エチレングリコール、１■Ｍ　ＭＥＳｐＨ ６，ｏ、０．０１％Ｌｕｂｒｏｌ　ＰＸの１００ｍ１を用いて、Ｓ１２　Ａｆｆ ｉｇｅｌから溶出した。２ｇ０ｎｍの吸光度によるピーク画分をプールする。溶 出液を０，０５％Ｌｕｂｒｏｌを含有するＴＢＳに対して透析し、次に、Ｍｏｎ ｏ　ＱカラムＣＰｈａｒｍａｃｉａ社から入手できるＦＰＬＣ）にかける。

得られた濃縮タンパク質を、２Ｍ　ＮａＣ１，２０ｍＭ）リスｐＨ７，５（メン プラン画分に対しては０．０５％Ｌｕｂｒｏｌ　ＰＸをプラスする）で段階的に 溶出を行う。ピーク画分はＴＢＳ　ｐＨ７，５（メンプラン画分に対しては０． ０５％Ｌｕｂｒｏｌ　ＰＸをプラスする）に対して透析する。

ＧＭＰ−１４０を５μｇ／ｍｌでプレートし、対照のタンパク質類；　ヒト血清 アルブミン（Ａｌｂ）、血小板糖タンパク質１１ｂ／Ｈａ（ＩＩｂ）、フォノ・ ビルプラント因子（ｖＷＦ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、トロンボモジュリ ン（ＴＭ）、ゼラチン（ＧＥＬ）またはヒト血清（ＨＳ）を５０μｇ／ｍｌの濃 度でか添加する。全ウェルを、１０ｍｇ／ｍｌのＩ（ＳＡを含有する３００μｍ のＨＢＳＳで２２°Ｃにて２時間かけてブロックし、ついで０．１％Ｔｖｅｅｎ −２０含有のＨＢＳＳで３回洗浄し、次にＨＢＳＳで１回洗浄する。細胞（２Ｘ １０５／ウエル）をウェルに添加し、２２℃で２０分間インキュベートする。つ いでウェルをＩ（ＢＳＳ／）ＩＳＡで満たし、アセテートテープ（Ｄｙｎａｔｅ ｃｈ）でシールし、１５０　ｇにて５分間、逆転させて遠心分離する。粘着して いない細胞と上澄み液を廃棄した後、各ウェルの内容物を、２００μｌの０．５ ％ヘキサデシルトリメチルアンモニウムプロミド、５１ｇ１ａ社、を含有する５ ０ｍＭリン酸カリウム溶液（ｐＨ６，０）可溶化してミエロペルオキシダーゼ活 性についてアッセイする。

Ｌｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、７３巻、１３２４〜１３３０頁、　（１９８９年）。結 合された細胞の数を、ミエロペルオシダーゼ活性対細胞の数の基準曲線からめる 。すべてのアッセイ条件下で、細胞はミエロペルオキシダーゼと乳酸デヒドロゲ ナーゼの合計の５％より少ない量を放出する。

臨床用途 本発明のペプチドは、一般に約ｌμｇペプチド／体重１ｋｇを超える量で非経口 投与すると活性である。再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）を伴う場合、器官が 損傷するのを防止する処置のために、本発明のペプチドは、約０．０１〜約１０ ｍｇペプチド／１ｋｇ体重を非経口で投与され得る。一般に、炎症を減らさなけ ればならない他の疾患または症状の治療に同じ範囲の投与量が使用される。この 投与量は、１種以上のペプチドが投与されるか否かによって一部左右される。レ クチン領域の異なっているかもしくは重複した領域由来のペプチドを組み合わせ た場合、またはＧＭＰ−１４０のＥＧＦ領域由来のペプチドを組み合わせた場合 には、相乗作用がみられる。

セレクチン類は、白血球の粘着、炎症および凝固に関連するいくつもの機能をも っているので、ＧＭＰ−１４０，ＥＬＡＭ−１またはＬＡＭ−１の結合を阻害す る化合物は、これらの応答を調節するため臨床に用い得る。

例えば、これらのペプチドは、白血球の表面にあるＧＭＰ−１４０受容体に競合 して結合することによって白血球の粘着を競合して阻害するのに使用し得る。こ の種の治療は、白血球が仲介する炎症の、効果的であるが一時的な阻害が望まれ る急性症状に特に有用である。ペプチドを輸液することによる長期間の治療もい くつかの状況で実施できる。

炎症応答は抑制しないと宿主に損傷を引き起こすことがある。というのは白血球 は正常な組織を損傷しうる多くの毒性分子を放出するからである。これらの分子 としてはタンパク質分解酵素と遊離のラジカルがある。白血球が組織の損傷を起 こす場合がある病的な状態の例には、虚血と再潅流、細菌の種と汎発性血管向凝 固症候群、成人呼吸困難症候群、腫瘍の転移、慢性関節リウマチおよびアテロー ム性動脈硬化症に由来する損傷がある。

再潅流による損傷は臨床心臓学の大きな問題である。虚血心筋症における血球の 粘着を減らす治療剤は血栓溶解剤の治療効力を有意に増強することができる。組 織プラスミノーゲン活性化因子またはストレプトキナーゼのような薬剤を用いる 血栓を溶解させる治療を行うと、重篤な心筋虚血にかかつている多くの患者の冠 状動脈閉塞を、回復不能な心筋細胞死になる前に軽減することができる。しかし 多くのかような患者は、血液流を回復したにもかかわらず、依然として心筋神経 症にかかっている。この“再潅流損傷”は、白血球が、虚血領域の血管内皮に粘 着することに関連があることが知られている。というのは、恐らく、血小板と内 皮がトロンビンとサイトカイン類によって活性化されて、白血球に対して粘着性 になるからであろう（Ｒｏｗ＋ｓｏｎら、Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、　６７巻、 １０１６〜１０２３頁、１９８３年）。これらの粘着性白血球は、内皮を通過し て移行することができ、虚血心筋が血流の回復によって救助されている丁度その ときに虚血心筋を破壊する。

虚血と再潅流が、白血球が血管表面に粘着することによって仲介される器官損傷 をもたらす他の共通の臨床上の障害がいくつかある。すなわち、発作；腸間膜と 末梢血管の疾患；器官の移植；および循環系のショック（この場合は多くの器官 が、血流の回復に続いて損傷を受けることがある）である。

細菌による敗血症と汎発性血管向凝固症候群は、危篤状態の患者には同時に存在 している場合が多い。これらは、トロンビン、サイトカイン類および他の炎症メ ディエータの発生、血小板と内皮の活性化、および白血球の粘着および血小板の 血管系全体での凝集と関連がある。白血球依存性の器官の損傷はこれらの症状の 重要な特徴である。

成人呼吸困難症候群は、敗血症にかかっている患者または外傷に続いて起こる破 壊的な肺の障害であり、肺循環系内での白血球の広範囲にわたる粘着と凝集に関 連がある。この障害によって、多量の血漿が肺の中に浸潤して肺の組織を破壊す るに至り、この両現象はともに大部分が白血球生成物によって仲介される。

致命的なことが多い２つの類縁の肺の障害が、同種異系の骨髄移植を受けている 免疫を抑制された患者、およびインターロイキン２で処理されたＬＡＮ細胞（リ ンフ才力インで活性イヒされたリンパ球）による治療が原因の全身性血管漏洩力 ）ら生じる合併症にかかつている癌患者にみられる。ＬＡＮ細胞（よ、血管壁に 粘着し、恐らく内皮に対して毒性と思われる産物を放出することが知られている 。ＬＡＮ細胞が内皮に粘着する機構＋１知られていないが、このような細胞は、 内皮を活性イヒする分子を放出し、好中球の場合に作動するのと類似の機序によ って内皮に結合する可能性がある。

多くの悪性腫瘍（癌腫、リンフ寸腫および肉腫を含む）由来の腫瘍細胞は、血管 系を通じて離れた部位１こ転移すること力（できる。腫瘍細胞が内皮に粘着する 機構、及び弓ｌ続き起こる転移の機構は、充分理解されて℃＼なｌ、％力（、少 なくともｔ′１＜つかの場合における白血球の場合と類似してｔする。血／ｈ板 力ｆ転移する腫瘍細胞と会合することはよく報告されており、ある種の癌を広げ る場合の血小板の役割を示唆してｔ）る。

要であると考えられている。血小板＋１、単球カシ集まってアテローム性動脈硬 化症の斑を形成する役割をもって（Ｘる力）もしれない。単球の蓄積は、アテロ ーム発生中、最も初期（こ検出可能な事象の一つであることは知られて（する。

充分１こ発達した斑が破裂すると、血小板の沈着と活性イヒおよび血栓形成の促 進のみならず、好中球が虚血領域へ早期（こ集まるよう番ニなる。

潜在的用途がある他の領域は、慢性関節リウマチの治療のこれらのペプチドを用 いる治療方式に対する応答を評価する基準は、特定の症状によって指定され一般 に標準の医学的慣行にしたがっている。例えば、心筋梗塞の拡張を防止するため に有効な投与量の基準は、血漿中の心筋壊死のマーカー酵素を調べ、心電図、生 命徴候および臨床応答を監視することによって、当該技術分野の当業者が決定す ることができるであろう。急性の呼吸困難症候群を治療する場合は、動脈酸素の 改善、肺湿潤の消散および軽減された呼吸困難と頻呼吸で測定される臨床上の改 善が調べられるであろう。ショックの患者（低血圧）を治療する場合には、有効 な投与量は、臨床応答と、血圧が回復した後の肝臓と腎臓のような生命器官の機 能の特定との測定に基づいているであろう。発作を起こす患者については神経学 的機能が監視されるであろう。移植された器官の機能を監視するのに特定の試験 が用いられる。

例えば腎臓の移植を受けている患者の血清クレアチニン、尿の流量、および血清 電解質の試験である。

診断薬 本発明のペプチドは、セレクチンに対するリガンドが不完全であるヒトの障害を 検出するのにも使用できる。このような障害は、白血球が活性化された血小板ま たは内皮に結合できず、感染症にかかり易くなっている患者に恐ら（みられるで あろう。試験すべき細胞は通常白血球であるが、医学上承認された標準法によっ て集めて、スクリーニングされる。検た活性化細胞への結合、流動細胞計測法お よびその他の当該技術分野の当業者にとって公知の方法がある。レクチン領域ペ プチドの存在下および不存在下での結合の阻害は、セレクチンの結合性の欠如ま たは変化を検出するのに用いることができる。セレクチン類については、このよ うな障害は、ＧＭＰ−１４０に対する白血球リガンドが不完全なために、白血球 の血小板および内皮に対する結合が不完全であるような感染症にかかり易くなっ た患者に最もよく見られるようである。ペプチドには、放射能ラベル、蛍光標識 、酵素、または電子顕微鏡用の金のような電子密度の高い物質でラベルし得る。

被検出細胞は通常白血球であるが、標識を付けたペプチドとともにインキュベー トされ、ＧＭＰ−１４０に対する抗体を用いて上記の方法によるか、または当該 技術分野の当業者に公知の他の方法によって結合性が検定される。ＧＭＰ−１４ ０に対するリガンドが、血漿中に見出された場合、検出試薬として抗体の代わり に、標識を付けたＧＭＰ−１４０由来のペプチドを用いて標準のＥＬ　ＩＳＡ法 またはラジオイムノアッセイで測定することができる。

下記の実施例は本発明を例示するために提供するものであって本発明を特に限定 するものではない。実施例中、および明細書全体を通じて、置部はとくにことわ りがない限り重量部である。

実施例１：　リシルーリシルーアラニルーロイシルートレオニルーアスパラギニ ルーグルタミルーアラニルーグルタミルーアスパラギニルートリブトフイルーア ラニルーアスノイラギン酸アミド（配列番号ｌ）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｔｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミツ１Ｍ脂（０，６２ｇ、　。

、　５０ｍｍｏｌ）を合成に使用した。この樹脂の最終重量は、１．４６ｇであ った。１６ｍＬのＨＰ、１．５ｍＬのアニソールおよび１００μＬのチオフェノ ールを用い、０℃で６０分間かけて、ペプチドを上記樹脂（１，４６ｇ）から開 裂させた。開裂された樹脂をエーテルで洗い、５０％のＴＦＡの塩化メチレン溶 液２５ａＬでペプチドを抽出した。

溶液を蒸発させ、残渣をトリチュレーションして粗製ペプチド４７１１ｍｇを得 た。

トリプトファンは、０．１Ｍ水性ピペリジン１０ｈ＋Ｌを用ｔ）、０°Ｃで１時 間脱ホルミル化した。得られた反応混合物を蒸発して凍結乾燥した。得られた粗 製ペプチド（２４３ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１０μ、２．２　 Ｘ　２５ｃＩ１１）を用い、０．１％ＴＦＡ中５０％中上０ニトリルの２０〜６ ０％の勾配液で１８０分間かけて、流量３ｍＬ／分で溶出して精製した。両分を 集め、Ｉ（ＰＬＣで分析し、モして純品の画分をプールし凍結乾燥して３５ｆｔ １ｇを得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｌａ　３．００　（３＞、　Ａｓｘ　２ ．５６　（３）、　Ｇｌｘ　２．０３　（２）、　Ｌｅｕ　１０ｆｔ（１）、　 Ｌｙｓ　２．１０　（２＞、　Ｔｈｒ　１．００　（１）、Ｔｒｐ　ＮＤ　（１ ）。　ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ”　１４ｇ９　＜分子量１４８８．６３）。

実施例２：　システィニルーリシルーアラニルー口イシルートレオニルーアスパ ラギニルーグルタミルーアラニルーグルタミルーアスパラギニルートリブトフィ ルーアラニルーアスパルチルーアスパラギンアミド（配列番号３）の調製。

上記のべブチドを、標準ＢＯＣソフトウエアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｂｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０．６２ｇＳＯ．　５０＋ｕ ｏｌ）を合成に使用した。そのペプチド樹脂をエタノールで洗浄し次に乾燥した 。この樹脂の最終重量は、１．　３８ｇであった。

１３ｍＬのＨＦおよびアニソール（１．３■Ｌ）、ジチオトレイトール（１．０ ｇ＞を用い、０℃で６０分間かけて、ペプチドを上記樹脂（１．　３０ｇ）から 開裂させた。樹脂をエーテルで洗い、５０％のＴＦＡの塩化メチレン溶液（３Ｘ １２■Ｌ）でペプチドを抽出し７６０＋＋ｇの粗製ペプチドを得た。調製された べブチドをＤＭＦ　（４０ｍＬ）に溶解し、１％ピベリジン／水溶液（５０ｍＬ ）を添加した。０℃で１時間撹拌し、凍結乾燥して粗製ペプチド６５２ｍｇを得 た。

得られた粗製ペプチド（　６５０ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５ μ、５　ｘ　２５ｃｗ＋，　６５ｍｇ／注入）を用い、０．１％ＴＦＡ中８０％ アセトニトリルの１５〜４５％の勾配液で１２０分間かけて、流量１５０１Ｌ／ 分で溶出して精製した。画分を集めてＨＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし 、凍結乾燥し１　１ｍｇ，の白色粉末を得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｓｘ　 ３．５ｇ　（４）．　Ｔｈｒ　Ｏ．９２　（１）．　Ｇｌｘ　１．９９　（２） ，　Ａｌａ　３．００　（３）．　Ｃｙｓ　１．０４　（１）．　Ｌｅｕ　１． ０２　（１），　Ｌｙｓ　Ｏ．９８　（１）．　Ｔｒｐ０．５６　（１）．　Ｆ ＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ’　１５７８　（分子量１５７７．　７１＞。

実施例３：　リシルーリシルーアラニルー口イシルートレオニルーアスパラギニ ルーグルタミルーアラニルーグルタミルーアスパラギニルートリプトフィルーア ラニルーアスパルチルーアスパラギニルーグルタミルーブロリルーアスパラギニ ルーアスパラギニルーリシルーアルギニルーアスパラギニルーアスパラギニルー グルタミルーアスパラギン酸アミド（配列番号４）の調製。

上記のべブチドを、標準ＢＯＣソフトウエアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅ＋　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０．６２ｇ，　０．　５０ｍ ｍｏｌ）を合成に使用した。この樹脂の最終重量は、２．２０ｇであった。

２０ｍＬのＨＦおよび２ｍＬのアニソール用い、０℃で６０分間かけて、ペプチ ドを上記樹脂（　２．　０６ｇ）から開裂させた。樹脂をエーテルで洗い、５０ ％のＴＦＡの塩化メチレン溶液で抽出して粗製ペプチド０．７８ｇを得た。この ペプチドを０．１Ｍ水性ピペリジンを用い、０゜Ｃで１時間脱ホルミル化した。

得られた粗製ペプチド（　５００＋Ｉｌｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（ １０μ、２．　２ｘ　２５ｃｍ）を用い、０．１％ＴＦＡ中ア七トニトリルの５ 〜２２％の勾配液で１６０分間かけて、流量３ｍＬ／分で溶出して精製した。

両分を集めてＨＰＬＣで分析し、純品の両分をプールし凍結乾燥して３６ｍｇを 得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｓｘ　７．９０　（９）；　ＴｈｒＯ．９０　 （１）：　Ｇｌｘ　４．０ｇ　（４）；　Ａｌａ　２．８９　（３）；　Ｌｅｕ 　Ｏ．９９　（１）．　Ｌｙｓ　３．０？　（３）；　Ｔｒｐ　ＮＤ；　Ａｒｇ 　Ｏ．９Ｂ　（１）。　ＦＡＢＭＳ：　ＭＨ”　２１１１３　（分子量２８１３ ．　９６）。

実施例４：　トレオニルーアスパラギニルーグルタミルーアラニルーグルタミル ーアスパラギニルートリプトフィルーアラニルーアスパラギン酸アミド（配列番 号７）の調製。

上記のべブチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｏ．ａｚｇ，　ｏ．　ＳＯｍ ｉｏｌ）を合成に使用した。この樹脂の最終重量は、１．　１８ｇであった。

１４ｗ＋Ｌの旺、１．２ａ＋Ｌのアニソールおよび２００μＬのチオフェノール を用い、０゜Ｃで６０分間かけて、ベブチドを上記樹脂（１．１５ｇ）から開裂 させた。樹脂をエーテルで洗い、５０％のＴＦＡの塩化メチレン溶液５０ｍＬで 抽出した。溶液を蒸発させて、残渣をエーテルでトリチュレートして０．　４３ ｇの粗製ペプチドを得た。

トリブトファンは、０．１Ｍ水性ビペリジン１００ｍＬを用い、０°Ｃで１時間 脱ホルミル化した。得られた反応混合物を蒸発させて凍結乾燥した。

得られた粗製ペプチド（６２ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１０μ、 ２．２ｘ　２５ｃｍ）を用い、０．１ＸＴＦＡ中１８％アセトニトリルの無勾配 系で７５分間かけて、流量８ｍＬ／分で溶出して精製した。画分を集めてＨＰＬ Ｃで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して３２ｉｉｇを得た。アミノ酸分 析の結果：　Ａｌａ　２Ｊ３　（２）；　Ａｓｘ　２Ｊ８（３）：　ＧＩＸ　２ ．０９　（２）：　Ｔｈｒ　Ｏ．８８　（１）；　Ｔｒｐ　ＮＤ　（１）。ＦＡ Ｂ／ＭＳ：ＭＨ’　１０４９　（分子量ＩＱ４８．０４）。

実施例５：ｌ−レオニルーアスパラギニルーグルタミルーアラニルーグルタミル ーアスパラギニルートリプトフィルーアラニルーアスバルチルーアスパラギンア ミド（配列番号８）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹１１’ｔｔ　（ｏ．ａｚｇ，　ｏ ．　５０Ｉｌｍｏｌ）を合成に使用した。この樹脂の最終重量は、１．２６ｇで あった。

１２ＩＩＩＬのＨＦおよび１．　２ｏ＋Ｌのアニソールを用い、０℃で６０分間 かけて、ペプチドを上記樹脂（　１．　２０ｇ）から開裂させた。樹脂をｌ：　 １　塩化メチレン／エーテルで洗い、ペプチドを５０％のＴＦＡの塩化メチレン 溶液で抽出して粗製ペプチド６２０ｍｇを得た。

粗製ペプチド（　６０ｈｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５μ、５×２ ５ｃ＋＊）を用い、０．１％ＴＦＡ中８０％アセトニトリルの０〜４０％勾配液 で１２０分間かけて、流量２５ｉＬ／分で溶出して精製した。画分を集めてＨＰ ＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して８４＋ｉｇの純品のペプチド を得た。アミノ酸分析の結果：ＡＩａ２．００（２）．　Ａｓｘ　３．８８　（ ４）．　Ｇｌｘ　２．０６　（２），　Ｔｈｒ　Ｏ．９２　（１），　Ｔｒｐ　 ０．６２　（１）。ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ’　１１６３　（分子量１１６２．　 １５）。

実施例６：　トレオニルーアスパラギニルーインロイシルーアラニルークリシル ーインロインルートリプトフィルーアラニルートリプトフィルーアスパラギンア ミド（配列番号９）の調製０ 上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージタン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６２ｇ、　。

、　ＳＯｍｍｏｌ）を合成に使用した。１０％ピペリジンのＮ−メチルピロリジ ン（１０ｉＬ）溶液を用い、０°Ｃで２時間かけてペプチド樹脂（１，２５ｇ） を脱ホルミル化した。樹脂の最終重量は、１．１５ｇであった。

１２ｉＬのＩＰと１．．２ｍＬのアニソールを用い、０℃で６０分間かけて、ペ プチドを上記樹脂（１，１５ｇ）から開裂させた。樹脂をエーテルで洗い、ペプ チドを５０％のＴＦＡの塩化メチレン溶液で抽出して粗製ペプチド３５８Ｂを得 た。

粗製ペプチド（３５０ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５μ、５×１ ０ｃｍ）を用い、０．１％ＴＦＡ中８０％中上０ニトリルの１５〜６０％勾配液 で１２０分間かけて、流量ｉ　５ｍＬ／分で溶出して精製した。画分を集めてＨ ＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して９３Ｂの白色固体得た。ア ミノ酸分析の結果二Ａｌａ　２．０２　（２）、　Ａｓｘ　２．０７　（２）、 　Ｇｌｙ　１．０３　（１）、　ｌｉｅ　１．８５　（２）、　Ｔｈｒ　Ｏ，９ ３（１）。

Ｔｒｐ　１．３０　（２）。ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ”　１１４４　（分子量１１ ４４．３１）。

実施例７ニ　トレオニルーアスパラギニルーグルタミルーアラニルーグルタミル ーアスパラギニルートリブトフイルーアラニルーアスバルチルーアスパラギニル ーグルタミン酸アミド（配列番号１０）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６２ｇ５Ｏ、ＳＯｍｍｏ ｌ）を合成に使用した。樹脂の最終重量は、１．３２ｇであった。樹脂を、ＤＭ Ｆ１５％水中の１Ｍエタノールアミンで処理ピ（２×３０分間）、ＤＭＦエタノ ールで洗浄し、一定重量になるまで乾燥した。

１０−ＬのＨＦ、　０．５０ｇのｐ−クレオゾール（ｐ−ｃｒｅｏｓｏｌ）およ び０．５０ｇのｐ−チオクレオソール（ｐ−ｔｈｔｏｃｒｅｏｓｏｌ）を使用し 、０℃で１時間かけて樹脂（１，１７ｇ）を開裂させた。樹脂をエーテルで洗い 、ペプチドを５０％のＴＦＡの塩化メチレン溶液で抽出した。蒸発させた後、残 渣をエーテルでトリチュレートし、０．７５ｇの白色固体を得た。

粗製物質の３００ｍｇを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１０μ、２．２×２５ ｃｍ）を用い、１０％アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡで、流量８ｍＬ／分で 溶出して精製した。画分を集めてＨＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし、蒸 発させ凍結乾燥して３７ｍｇの白色固体得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｌａ　 ２．２１　（２）、　Ａｓｘ　３．２６　（４）、　Ｇｌｘ　３．２４（３）、 　Ｔｈｒ　Ｏ，９５（１）、　Ｔｒｐ　ＮＤ　（１）。　ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ ’　１２９２　（分子量１２９１．２６）。

実施例８：アセチルートレオニル−アスパラギニル−グルタミル−アラニル−グ ルタミル−アスパラギニル−トリプトフィル−アラニル−アスパルチル−アスパ ラギンアミド（配列番号８）の調製。

上記のペプチドを、標準ＦＭＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、Ａ ＢＩ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用い て調製した。　Ｂａｃｈｅｉ　ＦＭＯＣアミド樹脂（０，５９ｇ、　０．２５ｍ ｍｏｌ）を合成に使用した。９ｍＬのＴＦＡ、　０．５ｍＬのエタンジチオール および０、５＋ｍＬのｐ−クレゾールを用い、３５℃で２時間かけてペプチドを 樹脂から開裂させた。エーテルを加えて生成物を沈澱させ、濾過して単離し０． ２２ｇの生成物を得た。

得られた粗製ペプチド（０，２２ｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５μ 、ｓｘ　２５ｃｍ）を用い、０．１％ＴＦＡ中５０％中上０ニトリルの２６〜５ ０％勾配液で、１２０分かけて、流量１５ｉＬ／分で溶出して精製した。

画分を集めて１（ＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して２５ｍｇ の生成物を得た。アミノ酸分析の結果：　ＡＳＸ　３．６８（４）、　Ｔｈｒ　 Ｏ，９７（１）、　Ｇｌｘ　２．０９（２）、　Ａｌａ　２．０７（２）、　Ｔ ｒｐ　ＮＤ　（１）。

ＰＡＢ／ＭＳ：ＭＨ’　１２０５　（分子量１２０４．１８）。

実施例９：アセチルートレオニル−アスパラギニル−グルタミル−アラニル−グ ルタミル−アスパラギニル−トリブトフィル−アラニル−アスパルチル−アスパ ラギニル−グルタミル−プロリンアミド（配列番号１１）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアの７（−ジョン１．１２を用い、Ａ ＢＩ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用い て調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６２ｇ５Ｏ、ＳＯｍｍ ｏｌ）を合成に使用した。ペプチド−樹脂の最終重量は１．４３ｇであった。そ の樹脂−ペプチド（１，２９ｇ）を１．５ｍＬのアニソールおよび１５ｉＬの肝 でＯ℃〜４℃で１時間処理した。肝は窒素気流次いで吸引によって除去した。得 られた固体をジエチルエーテル（２×３０ｍＬ）でトリチコレートし、濾過して 集め、ジエチルエーテル（３ｘ　３０ｉＬ）で洗浄した。得られた固体を０゜１ Ｍの冷ピペリジンで抽出した（　５　Ｘ　２０ｉＬ）。抽出物を合せて０〜４° Ｃにて１時間撹拌し次に凍結乾燥した。脱ホルミル化した粗製ペプチドの収量は ７７４ｍｇであった。５２４ｍｇの粗製ペプチドを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラ ム（１０μ、２．２ｘ　２５ｃ＋ａ）を用いるＩ（ＰＬ、Ｃで、０．１％ＴＦＡ 中アセトニアセトニトリル〜２０％勾配液で、１２０分かけて、流量３ｍＬ／分 で溶出して精製した。画分を集め適切な画分をプールして６＋ｏｇの灰白色の固 体を得た。アミノ酸分析の結果：Ａｌａ　２．００　（２）、　Ａｓｘ　３．１ ０　（４）、　Ｇｌｘ　３．０７　（３＞、　Ｐｒｏ　０．９８　（１）、　Ｔ ｈｒ　Ｏ，９１（１）、　Ｔｒｐ　ＮＤ　（１）。ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ’　１ ３８９　（分子量１３８８、３８＞。

実施例１０：）レオニルーアスパラギニルーグルタミルーアラニルーグルタミル ーアスパラギニルートリプトフイルーアラニルーアスバルチルーアスパラギニル ーグルタミルーブロリルーアスパラギニルーアスパラギンアミド（配列番号１３ ）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，８０ｇ、　。

、　ＳＯｍｍｏｌ）を合成に使用した。樹脂の最終重量は１．３０ｇであった。

トリプトファンは、５％水性ＤＭＦ中の１Ｍエタノールアミンを用いて、樹脂上 で脱ホルミル化した（２×３０分間）。１０社のＨＦおよび１ｍＬのアニソール を用いて０°Ｃで６０分間力）６すてペプチドを樹脂（１，１８ｇ）から開裂さ せた。樹脂をエーテルで洗浄し、５０％ＴＦＡの塩化メチレン溶液で抽出して粗 製ペプチド０．４４ｇを得た。粗製ペプチドを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（ １０μ、２．２Ｘ　２５ｃｍ）ヲ用い、０．１％ＴＦＡ中アセトニアセトニトリ ル２７％勾配液で、４５分かけて、流量８ｍＬ／分で溶出して精製した。画分を 集めｌ’１ＰＬｃで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して３３ｍｇの生成 物を得た。アミノ酸分析の結果：　ＡＳＫ　５．８８　（６）、　Ｔｈｒ　１． ０？　（１）。

Ｇｌｘ　２．６１　（３）、　Ｐｒｏ　１．０６　（１）、　Ａｌａ　２．１８ 　（２）、　Ｔｒｐ　ＮＤ　（１）。

ＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ“１６１６　（分子量１６１６．５９）。

実施例１１：アスパラギニル−グルタミル−アラニル−グルタミル−アスパラギ ニル−トリブトフィル−アラニル−アスパルチル−アスパラギンアミド（配列番 号１４）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６２ｇ、　。

、　５０ＩＩ１ｍｏｌ）を合成に使用した。ペプチジル−樹脂をエタノールで洗 浄して乾燥した。樹脂の最終重量は１．１４ｇであった。

１２＋ａＬのＩＰおよび１．２ｍＬのアニソールを用いて０℃で６０分間かけて ペプチドを樹脂（１，１３ｇ）から開裂させた。樹脂をエーテルで洗浄し、次い でペプチドを１％ピペリジン／水（４ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた画分を Ｏ′Ｃで１時間撹拌し、次いで凍結乾燥して５２０ＩＩ１ｇの粗製ペプチドを得 た。

得られた粗製ペプチド（５００ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５μ 、５ｘ　２５ｃ＋ｎ）を用い、０１％ＴＦＡ中の８０％アセトニトリルの１０〜 ３０％勾配液で、１２０分かけて、流量１５ｍＬ／分で溶出して精製した。画分 を集めＨＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して３０■ｇの白色固 体を得た。アミノ酸分析の結果：Ａｌａｌ、９９　（２）、　Ａｓｘ　３．９２ 　（４）、　ＧＩＫ　２．０５　（２）、　Ｔｒｐ　０．６４　（１）。ＦＡＢ ／ＭＳ：　Ｍ［Ｉ’　１０６１　（分子量１０６１．０４）。

実施例１２：アラニルーグルタミルーアスパラギニルートリプトフィルーアラニ ルーアスバルチルーアスパラギニルーグルタミループロリルーアスパラギニルー アスパラギンアミド（配列番号１６）の調製。

上記のペプチドを、標＄ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６７ｇ、　０、５４ｍｍ ｏｌ）を合成に使用した。樹脂の最終重量は１゜２７ｇであった。

１０ｍＬのＨＦと１ｍＬのアニソールを用いて０℃で６０分間かけてペプチドを 樹脂（１，１８ｇ）から開裂させた。樹脂をエーテルで洗浄し、５０％ＴＦＡの 塩化メチレン溶液で抽出して０．５５ｇの粗製ペプチドを得た。そのペプチドを ０．１Ｍ水性ピベソジン１００ａ＋１中で、０℃で６０分かけて脱ホルミル化し た。

得られた粗製ペプチド（０，２０ｇ）を、Ｖｙｄａｅ　Ｃ−１８カラム（１０μ 、２．２　ｘ　２５ｃｍ）を用い、０．１％ＴＦＡ中のアセトニトリルの１０〜 １３．５％勾配液で、４５分かけて、流量８　ｍＬ／分で溶出して精製した。

画分を集めＨＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して４０ｍｇの生 成物を得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｓｘ　４．３６　（５）；　Ｇｌｘ　２ ．０ｇ　（２）；　Ｐｒｏ　１．０３　（１）；　Ａｌａ　２．１２　（２）； 　Ｔｒｐ　ＮＤＦＡＢ／ＭＳ：　ＭＨ”　１２７３（分子量１２７２．２６）。

実施例１３ニアラニルーグルタミルーアスパラギニルートリブトフイルーアラニ ルーアスパルチルーアスパラギニルーグルタミループロリルーアスパラギニルー アスパラギニルーリシルーアルギニルーアスパラギニルーアスパラギニルーグル タミルーアスパラギンアミド（配列番号１２）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミンｍＢ’ｆｌ　（０，６２ｇ、　０、 ０５＋ｓ＋ｇｏ＋）を合成に使用した。ペプチド−樹脂の最終重量は１．７０ｇ であった。１．６ｇの樹脂−ペプチドを１．６ｍＬのアニソールおよび１６ｍＬ のＨＦで０℃〜４°Ｃで１時間処理した。ＩＰを窒素気流で除き次いで吸引で除 去した。

得られた固体をジエチルエーテル（２Ｘ３０＋１Ｌ）でトリチュレートシ、濾過 して集めジエチルエーテルで洗浄した（２ｘ３０＋。

Ｌ）。得られた固体を０．１Ｍの冷ピペリジンで抽出した（５Ｘ２０ｍＬ）。抽 出物を０°Ｃ〜４°Ｃにて１時間撹拌し、次いで凍結乾燥した。粗製ペプチドの 収量は、１．２４ｇであった。得られたペプチドを、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｍｏ ｎｏ　Ｑ”　１０７１６カラムを用い、０．０２Ｍ〜０．５０Ｍの炭酸水素アン モニウムの６００ｍＬで６ａＬ／分の流量で溶出して精製した。８回の処理で得 た適切な画分をプールし、凍結乾燥して半純品のペプチド１７２ｍｇを得た。こ の半純品のペプチドを、　Ｖｙｄａｃ”　２２Ｘ２５０ｍｍ　Ｃ１ｇ、　１０μ 粒子径の３００オンク゛ストローム孔のパックされたカラムを用い、０．１％Ｔ ＦＡ中のアセトニトリルの０％〜２５％勾配液で、４５分かけて、流量１０ｍＬ ／分で溶出する逆相［ＩＰＬＣでさらに精製した。画分を集め適切な画分をプー ルして６９■ｇの白色固体を得た。アミノ酸分析の結果：　Ａｌａ　２．０７　 （２）、　Ａｒｇ　１．０２　（１）、　Ａｓｘ　７．４６　（８）、　ＧＩＸ 　３．１０　（３）、　Ｌｙｓ　Ｏ，９ｇ（１）、　Ｐｒｏ　Ｑ、９９　（１） 、　Ｔｒｐ　ＮＤ　（１）。　ＦＡＢ／ＭＳ：ＭＨ”　２０３０（分子量２０２ ９．０４）。

実施例１４：アルギニルーリシルーグルタミルーアラニルーグルタミルーインロ イシルートリプトフィルートレオニルーアスバルチルーバソンアミド（配列番号 １５）の調製。

上記のペプチドを、標準ＢＯＣソフトウェアのバージョン１．１２を用い、ＡＢ Ｉ　Ｍｏｄｅｌ　４３１Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて 調製した。４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０，６２Ｂ、０．５０＋＊ｍ ｏｌ）を合成に使用した。ペプチド樹脂をエタノールで洗浄し乾燥した。樹脂の 最終重量は１．５２ｇであった。保護されたペプチジル−樹脂（１，５ｇ）を、 ｌＯ％ピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液（１０＋ａＬ）中で、０℃で２時 間脱ホルミル化した。ペプチド樹脂をＮ−メチルピロリドン、塩化メチレンおよ びメタノールで洗浄し、乾燥して１４５ｇを得た。

ペプチドを、１３ｍＬのＨＦおよび１．３＋ｓＬのアニソールを用い、０℃で６ ０分かけて樹脂（１，３ｇ）から開裂させた。樹脂をエーテルおよびエーテル／ 塩化メチレン１：１で洗浄し、ペプチドを５０％ＴＦＡの塩化メチレン溶液で抽 出した（３Ｘ　１５ｍＬ）。溶媒を蒸発させ残渣をエーテルで処理した。沈澱を 濾過によって取り出し、エーテルで洗浄し、乾燥して粗製ペプチド６７４Ｂを得 た。

粗製ペプチド（６７０ｍｇ）を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１５μ、５×２ ５Ｃ■）を、用い、０．１％ＴＦＡ中の８０％アセトニトリルの０％〜５０％勾 配液で、１２０分かけて、流量１５ｍＬ／分で溶出して精製した。画分を集めて ＨＰＬＣで分析し、純品の画分をプールし凍結乾燥して白色固体２８７ｍｇを得 た。アミノ酸分析の結果：　Ａｌａ　０．９９　（１）。

Ａｒｇ　１．ＯＬ　（１）、　Ａｓｘ　１．０２　（１）、　Ｇ１１２．０２　 （２）、　ｌｉｅ　Ｏ，９５（１）、　Ｌｙｓ　１．０１　（１）、Ｔｈｒ　Ｏ ，８９（１）、　Ｔｒｐ　Ｏ，６４（１）、　Ｖａｌ　１．００　（１）。　Ｆ ＡＢ／ＭＳ：　ＭＨゝ１２４５．２　（分子量１２４５．４１）。

実施例１５　：　ＧＭＰ１４０でコートしたウェルに対する好中球の結合の阻害 。

上記のように、ＧＭＰ−１４０でコートしたウェルに対する種々のペプチドの結 合を比較した。試験結果を図１に示し、表１に要約した。

０．０３〜１．５ｍＭの範囲で種々の濃度のペプチドの結合を比較した。試験し たペプチドは以下の通りである：　ＲＫＥＡＥＩＷＴＤＶ−ＮＨ２；　ＴＮＩＡ ＧＩＷＡＩ−ＮＨ２；■ＡＬＴＮＥＡＥＮＷＡＤ−ＮＨ２；　ＣＫＡＬＴＮＥＡ ＥＮＷＡＤＮ−ＮＯ２；　ＩＫＡＬＴＮＥＡＥＮＩＡＤＮＥＰＮＮＫＲＮＮＥＤ −ＮＨ２；　ＴＮＥＡＥＮＷＡＤ−ＮＨ２；　ＴＮＥＡＥＮｌｒＡＤＮ−ＮＨ２ ：　ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮ−ＮＨ２；　ＡＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮ−ＮＨ ２；　ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮＥ−ＮＨ２：　Ａｃ−ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−ＮＨ ２；　ＴＮＥＡＥＮＩＡＤＮＥＰ−ＮＨ２；　ＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−ＮＨ２；　 Ａ）：！ｆｆＡＤＮＥＰＮＮＫＲＮＮＥＤ−Ｎｌｈ；およびＫＷＫＷＮＲＴＮＶ Ｔ−ＮＲ２（負のコントロール）。試験結果は、負のコントロールを除いて、試 験をしたペプチドのすべてが、固定化されたＧＭＰ−１４０に対する好中球の結 合を阻害することを示している。

表１：好中球の結合の阻害百分率 ＴＮ工ＡＧ工ＷＡＷＮ−ＮＨ２１Ｂ　２９　７４　１０２ＫＫＡＬＴＮＥＡＥＮ ＷＡＤ−ＮＨ，０２２９５１０１ＣＫＡＬＴＮＥＡＥＮ’ＷＡＤＮ−ＮＨ２７１ ８４３９１ＫＫＡＬＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮＫＲＮＮＥＤ−ＮＨ，０３４ ３６４ＴＮＥＡＥＮＷＡＤ−ＮＨ２４２５１８９９ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−Ｎｌ （２０６４７２８７ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮ−Ｎ）（２０２４３６５１Ａ ＥＮＷＡＤＮＥＰＮＮ−ＮＨ２００４０７３ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮＥ−ＮＨ，１ １１０５５Ａｃ−ＴＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−ＮＨ，９００９３３ＴＮＥＡＥＮＷＡ ＤＮＥＰ−ＮＨ，０１３６５ＮＥＡＥＮＷＡＤＮ−ＮＨ２１１７１２３５本発明 の、セレクチン類を含む結合反応を調節する合成ペプチドおよび方法の改変およ び変形は、上記の詳細な説明から当業者に自明である。このような改変および変 形は、添付の特許請求の範囲の適用範囲内にある。

配列表 （１）一般的情報： （ｉ）出願人二セントコ−，インコーポレイテッドら（百）発明の名称：セレク チン類で仲介される炎症のペプチド阻害剤（Ｉｉｉ）配列数：１７ （ｉｖ）関連住所： （＾）住所人：牛ルバトリック　アンド　コープイー（Ｂ）番地ニスイー）　２ ８００．　ピーチツリー　ストリート　１１００（Ｃ）市：　Ｔトランク （Ｄ）州：　シ゛遍−ゾ゛Ｔ （Ｅ）国：アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号：　３０３０９−４５３０（ｖ）コンビ１−ター読み出し形態： （Ａ）媒体型：フロッピーディスク ＜８）コンピューター：　ＩＢＭ　ＰＣ互換用（Ｃ）操作システム：　ＰＣ−Ｄ ＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：パテントインリリース＃１ｏ１バーン ッン１１．２５（ｖｉ）現在の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （ｖｌｉ）優先権の基礎となる出願のデータ（Ａ）出願番号：　ＵＳ　０７／８ ０９９４２（Ｂ）出願日：１９９１年１２月１８日（ｖｉｉｉ）代理人／事務所 情報： （Ａ）氏名：／ｆフスト、パトレア　エル。

（Ｂ）登録番号：　３１．２８４ ＜Ｃ＞照会／記録番号：　ＣＴＣ１０３（ｌｘ）ｉｉ話回線情報： （Ａ）電話：　４０４−４１５−６５０８（Ｂ）テレファックス：　４０４−８ １５−６５５５（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋１の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：１３アミノ酸 （Ｂ）！！２二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ＋）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル二Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス二Ｎ。

（ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　Ｉｌｌ　１１０：１　：Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｉａ　Ｌ ｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ａ ｓｐ１５１゜ （２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２の情報：（１）配列の特色： （＾）長さ：１４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （Ｉ　ｉ）配列の種ｗｉ：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル＝ＮＯ （ｉｖ）アンチセンス二Ｎ。

（ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス Ｃｘｉ＞配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３の情 報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：１４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル：Ｎ。

（１ｖ）アンチセンス二Ｎ０ （ｖ）フラグメントヤニＮ末端 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　）ＩＱ：３　：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４ の情報：（＋）配列の特色： （＾）長さ：２４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル：Ｎ０ （ｉｖ）アンチセンス：Ｎｏ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源； （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋５の情 報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ＝１１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセテイカル：Ｎ０ （ｉｖ）アンチセンス二Ｎ０ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６の情 報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （＋１）配列の種類：ペプチド （ｉ　ｉｉ）ハイポセティカル：Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス＝Ｎ。

（ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起ｆＩＡ＝ （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：６　：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：フの 情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｆｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル：ＮＯ （Ｉｖ）アンチセンス二Ｎ。

（ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ＞起源： （＾）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｌ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア：Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　 ＧＬｕ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ａｓｐ（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８の情報 ：（ｉ）配列の特色： （Ａ＞長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル：Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス＝Ｎ。

（ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：［ｌ：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９の 情報：（り配列の特色： （Ａ）長さ；１Ｇアミノ酸 （ＢＪ型コ二アミノ 酸Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ＞ハイポセティカル：Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス：Ｎｏ （ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１０の 清報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （Ｈｉ）ハイポセティカル：Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス＝ＮＯ （ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ＞起＃： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０：（２）ＳＥｏ　１０　ＮＯ・１１ の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ＞ハイポセティカル、Ｎ０ （１ｖ）アンチセンス＝ＮＯ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起！： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：１１：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２ の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：１７アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセテイカル＝ＮＯ （ｉｖ）アンチセンス＝ＮＯ （ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３ の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （Ｉｌ＋）ハイポセティカル：Ｎ。

（Ｉｖ）アンチセンス：Ｎｏ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （ｘｉ＞配列：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：１３　：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１ ４の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ＩＩ）配列の種類コペプチド （ｔｉ＋＞ハイボセティカル：Ｎ。

（ｉｖ）アンチセンス：Ｎ。

（Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：ホモ　サピエンス （！ｌ）配列：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：１４：＜２＞ＳＥＱ　１０　ＮＯ：ＩＳ の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ＝１０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （Ｈｉ＞ハイポセティカル二Ｎ０ （ｊｖ）アンチセンス二Ｎ０ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｉ）起源： （＾）ｌｌｆｆ名：ホモ　サピエンス （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５：（２）ＳＥｏ　１０　ＮＯ：１６ の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ＝１１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 、　、、、、、　ＰＣＴ／ＵＳ　９２／１０９８６フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　１４／６４５ （７２）発明者　マクエバー、ロジャー　ピー。

アメリカ合衆国　オクラホマ　７３１２０　オクラホマ　シティ、ギルフォード 　レーン（７２）発明者　グン、ジエンーグオ アメリカ合衆国　ミシガン　４９００１　カラマズー、アップジョン　カンパニ ー（番地なし） （７２）発明者　リージンガー、ダグラス　ジエイ。

アメリカ合衆国　ニューシャーシー ０８８２２　フレミントン、バイザー　ロード（７２）発明者　クルシンスキー 、マリアンアメリカ合衆国　ペンシルバニア　１９３８２ウエスト　チェスター 、アパートメントイー−２０，ウェスト　チェスター　バイツ１１００ （７２）発明者　エブス，レオン　エイ。

アメリカ合衆国　メリーランド　２１２０７ボルチモア、ヒルズミア　ロード　 ３４７９（７２）発明者　マービック、ミルジェンコアメリカ合衆国　ペンシル バニア　１９４０６キング　オブ　プラシャ，アパートメント２０１ービー、バ レイ　フォーン　アパートメンツ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下式を有する群から選択されるセレクチン類Ｒ１−Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙ−Ｒ ２、 またはその薬学的に許容され得る酸付加塩または塩基付加塩の結合を阻害するペ プチド： ここで、ＸはＮ末端アミノ酸であり、そしてＲ１はアミン官能基に結合した（Ｎ ＨＲ１）部分であり、そしてＹはＣ末端アミノ酸であり、そしてＲ２はカルボキ シル官能基における炭素に結合した（Ｃ（Ｏ）Ｒ２）部分であり；ＡはＤ−また はＬ−グルタミン酸またはグリシンであり；ＢはＤ−またはＬ−アスパラギンま たはＤ−またはＬ−イソロイシンであり； ＣはＤ−またはＬ−トリプトファンであり；ＸおよびＹは、０から１６個の直鎖 のアミノ酸であり；Ｒ１はＨ、ホルミル、低級アルキル、アリール、低級アルカ ノイル、アロイル、アルキルオキシカルボニル、またはアリールオキジカルボニ ルであり；そして Ｒ２はＨ、Ｏ（低級アルキル）、Ｏ（アリール）、またはＮＲ３Ｒ４であり、こ こでＲ３およびＲ４は独立して、Ｈ、低級アルキル、またはアリールである。 ２．Ｘが以下からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド： 【配列があります】またはＡｌａ． ３．Ｙが以下からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド： 【配列があります】および【配列があります】．４．下式を有するペプチド、お よびその薬学的に許容され得る酸付加塩または塩基付加塩からなる群より選択さ れる、請求項１に記載のペプチド： 【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ ．２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．３）；【配列があります】（配列 ＩＤＮＯ．４）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．５）；【配列があります 】（配列ＩＤＮＯ．６）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．７）；【配列が あります】（配列ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．９）； 【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ ．１０）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１１）；【配列があります】（ 配列ＩＤＮＯ．１２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１３）；【配列が あります】（配列ＩＤＮＯ．１４）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１６ ）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１２）；【配列があります】（配列Ｉ ＤＮＯ．１５）；５．経口投与、経口投与、局所投与、および放出制御処方に適 切な担体からなる群より選択される薬学的に許容され得る担体と組み合わせた、 請求項１に記載のペプチド。 ６．下式のペプチド Ｒ１−Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙ−Ｒ２、 またはその薬学的に許容され得る酸付加塩または塩基付加塩の調製方法であって 、 アミノ酸が、単独で、または前もってブロックされた形態のアミノ酸のいずれか で、適切に機能的にされた固相支持体に付加されることによる、方法： ここで、ＸはＮ末端アミノ酸であり、そしてＲ１はアミン官能基に結合した（Ｎ ＨＲ１）部分であり、そしてＹはＣ末端アミノ酸であり、そしてＲ２はカルボキ シル官能基における炭素に結合した（Ｃ（Ｏ）Ｒ２）部分であり；ＡはＤ−また はＬ−グルタミン酸またはグリシンであり；ＢはＤ−またはＬ−アスパラギンま たはＤ−またはＬ−イソロイシンであり； ＣはＤ−またはＬ−トリプトファンであり；ＸおよびＹは、０から１６値の直鎖 のアミノ酸であり；Ｒ１はＨ、ホルミル、低級アルキル、アリール、低級アルカ ノイル、アロイル、アルキルオキジカルボニル、またはアリールオキジカルボニ ルであり、そして Ｒ２はＯＨ、Ｏ（低級アルキル）、Ｏ（アリール）、またはＮＲ３Ｒ４であり、 ここでＲ３およびＲ４は独立して、Ｈ、低級アルキル、またはアリールである。 ７．Ｘが以下からなる群より選択される、請求項６に記載の方法：【配列があり ます】およびＡｌａ．８．Ｙが以下からなる群より選択される、請求項６に記載 の方法：あよび【配列があります】． ９．前記ペプチドが、下式を有するペプチドからなる群より選択されるペプチド 、およびその薬学的に許容され得る酸付加塩または塩基付加塩である、請求項６ に記載の方法：【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１）；【配列があります】 （配列ＩＤＮＯ．２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．３）；【配列があ ります】（配列ＩＤＮＯ．４）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．５）；【 配列があります】（配列ＩＤＮＯ．６）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ． ７）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】（配列Ｉ ＤＮＯ．９）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】 （配列ＩＤＮＯ．１０）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１１）；【配列 があります】（配列ＩＤＮＯ．１２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１ ３）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１４）；【配列があります】（配列 ＩＤＮＯ．１６）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１２）；【配列があり ます】（配列ＩＤＮＯ．１５）；１０．前記アミノ酸が、化学的な連結方法によ って、溶液または懸濁液中に、単独でまたは前もってブロックされた形態でのい ずれかで組み立てられることによる、請求項６に記載のペプチドの調製方法。 １１．前記アミノ酸が、酵素的な連結方法によって、溶液または懸濁液中に、単 独でまたは前もってブロックされた形態でのいずれかで組み立てられることによ る、請求項６に記載のペプチドの調製方法。 １２．前記ペプチドが、該ペプチドをコードする核酸を発現ベクターに挿入する こと、ＤＮＡを発現すること、および該ＤＮＡを該ペプチドに翻訳すること、に よって、酵素的に生産される、請求項６に記載のペプチドの調製方法。 １３．セレクチンの結合を改変する方法であって、該方法は、下式を有するペプ チド Ｒ１−Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙ−Ｒ２、 またはその薬学的に許容され得る、酸付加塩または塩基付加塩を、薬学的に許容 され得る担体と組み合わせて提供すること、および該ペプチドを阻害されるべき 結合を有する溶液に加えることを包含する、方法： ここで、ＸはＮ末端アミノ酸であり、そしてＲ１はアミン官能基に結合した（Ｎ ＨＲ１）部分であり、そしてＹはＣ末端アミノ酸であり、そしてＲ２はカルボキ シ官能基において−重結合した酸素に結合した（Ｃ（Ｏ）Ｒ２）部分であり；Ａ はＤ−またはＬ−グルタミン酸またはグリシンであり；ＢはＤ−またはＬ−アス パラギンまたはＤ−またはＬ−イソロイシンであり； ＣはＤ−またはＬ−トリプトファンであり；Ｒ１はＨ、ホルミル、低級アルキル 、アリール、低級アルカノイル、アロイル、アルキルオキジカルボニル、または アリールオキジカルボニルであり；そして Ｒ２はＯＨ、Ｏ（低級アルキル）、Ｏ（アリール）、またはＮＲ３Ｒ４であり、 ここでＲ３およびＲ４は独立して、Ｈ、低級アルキル、またはアリールである。 １４．Ｘが以下からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法：【配列が あります】またはＡｌａ．１５．Ｙが以下からなる群より選択される、請求項１ ３に記載の方法： １６．前記ペプチドが、下式を有するペプチドからなる群より選択されるペプチ ド、およびその薬学的に許容され得る酸付加塩または塩基付加塩である、請求項 １３に記載の方法【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１）；【配列があります 】（配列ＩＤＮＯ．２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．２）；【配列が あります】（配列ＩＤＮＯ．３）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．４）； 【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．５）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ ．６）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．７）；【配列があります】（配列 ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．９）；【配列があります 】（配列ＩＤＮＯ．８）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１０）；【配列 があります】（配列ＩＤＮＯ．１１）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１ ２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１３）；【配列があります】（配列 ＩＤＮＯ．１４）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１６）；【配列があり ます】（配列ＩＤＮＯ．１２）；【配列があります】（配列ＩＤＮＯ．１５）； １７．前記薬学的担体が、非経口投与、経口投与、局所投与、および放出制御処 方に適切な担体からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。 １８．前記ペプチドが、Ｐ−々レクチン、Ｅ−セレクチン、およびＬ−セレクチ ンからなる群より選択されるセレクチンの結合を阻害する、請求項１３に記載の 方法。 １９．前記ペプチドが、患者に投与されて、患者における炎症を阻害する、請求 項１３に記載の方法。 ２０．前記ペプチドが、患者に投与されて、患者における凝血を阻害する、請求 項１３に記載の方法。