JPH07500352A

JPH07500352A - マクロライドの糖誘導体

Info

Publication number: JPH07500352A
Application number: JP5515662A
Authority: JP
Inventors: コウチ，ケビン
Original assignee: フアイザー・インコーポレイテツド
Priority date: 1992-03-02
Filing date: 1993-01-28
Publication date: 1995-01-12
Anticipated expiration: 2011-12-11
Also published as: DK0629209T3; DE69310721T2; WO1993018050A1; US5747465A; FI107535B; IL104817A0; MX9301060A; CA2131372A1; ATE153027T1; DE69310721D1; FI944017A; CA2131372C; GR3024048T3; ES2102642T3; FI944017A0; JP2563080B2; AU3586293A; EP0629209B1; EP0629209A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は医学分野で有用な新規化合物に関する。より特定的には、本発明は免疫抑制剤として哺乳動物、特にヒトに投与するのに有用な新規化合物に関する。これらの新規免疫抑制剤は米国特許第４，８９４，３６６号により詳細に記載されているＦＫ−５０６及びＦＫ−５２０として知られるマクロライドに匹敵し得る。本発明の新規化合物は特に皮膚又は器官移植手術後の移植片拒否反応の予防又は治療、並びに慢性関節リウマチ及び転摩のような自己免疫疾患の予防又は治療に適用すると特に有用である。更に、これらのマクロライド誘導体は真菌類に起因する感染症の予防又は治療にも使用される。

移植手術後の移植片又は移植器官拒否反応は一般に、外来抗原が宿主の免疫応答系により認識される場合に発生する。宿主の免疫応答系は外来組織から自己自身を「保護する」ために細胞及び体液貯蔵分を放出する。抗体は外来組織を攻撃し、その結果、合併症を誘発し、該組織の拒否反応をもたらすことが多い。

同様に、自己免疫及び慢性炎症性疾患における免疫調節不全の発生も周知である。状態の病因に関係なく、種々の自己抗体及び自己反応性リンパ球が状態を合併することが多い。

免疫応答系をターゲットとする治療は系の完全な機能停止をもたらすことが多く、身体の感染防御能を低下させる。

これは機能停止の原因となった元の状態と同様に危険であり得る。

現在、移植片拒否反応の予防又は治療用の主要な医療物質は、１９８３年に米国食品医薬品局により認可されたシクロスポリンＡである。この薬剤は身体の免疫応答系が移植片の外来タンパク質を拒絶するために天然保護物質の貯蔵分を移動させないようにすることにより作用する。シクロスポリンは移植片拒否反応には有効であるが、腎不全、肝損傷及び潰瘍を誘発し得るという欠点があり、これらは多くの場合は非常に重度であり得る。免疫応答系に作用する能力においてより選択的であり且つ副作用の少ないより安全な薬剤は不断の要求である。

米国特許第４．８９４，３６６号は、「移植抵抗」、自己免疫疾患及び感染症の治療を始めとする免疫抑制剤として特にマクロライドＦＫ−５０６及びＦＫ−５２０を開示している。国際特許公開第Ｗ０９１１０２７３６号は、ＦＫ−５０６、ＦＫ−５２０及び関連マクロライドの誘導体を開示している。ヨーロッパ特許出願公開１４２８．３６５　Ａ１号はＦＫ−５０６、ＦＫ−５２０及び関連マクロライドの種々の他の誘導体を開示している。

発明の要約本発明は式：［式中、ｎは１又は２であり；破線はＲ２がＨである場合には任意の二重結合を表し；Ａ及びＢは別々にＡがＨであり且つＢがＨ又はＯＨであるか、あるいはＡ及びＢは一緒になって＝Ｏを形成し：Ｒ２はＨ，（Ｃｚ　Ｃｓ）アルカノイルオキシ又は−ＯＲ”であり：Ｒ３は（ＣＩ　Ｃ３）アルキル又はアリルであり；Ｒ１及びＲＯは各々Ｈ１（ＩＩ）　（１１１）であり；Ｒ４は出現毎に独立して一〇〇、Ｒ’、−ＣＯ！Ｈ１−ＣＨ。

ＯＨ，Ｈ，ＣＨｓ、−ＣＯＮＨ，、−ＣＯＮＨＲ”、−ＣＯＮＲｚ’１　ＣＨ２０ＣＯＲ”、−ＣＨ！ＯＣＯ，Ｒｊ、−ｃＨ２０ＣＯＮＨＲ−ＣＨｚＯＣＯＮＲｔ”又は−ＣＨ，ＯＲ６であり；Ｒ５、Ｒｅ及びＲ１は出現毎に独立して（Ｃ１０４）アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＯＨ，−０ＣＯＲ’、　ＯＣＯ！Ｒ”又１’！　Ｏ８ｉ　（Ｒ’）３であり；Ｒａは（ＣＩ−Ｃ８）７／Ｌｚキル；　（Ｃ３−Ｃｓ）　シクｏ’ｙルキル；アリル；ピリジル；チェニル；ベンジル；１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（ＣＩ　Ｃａ）アルコキシ基で種々に置換されたベンジル；フェニル；又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（ＣＩ　Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（ＣＩ　Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルであり；但しＲ１とＲｅが同時にＨになることはない］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩に関する。

本発明の化合物の好適群は、破線が非結合を表し且つＲ２が−ＯＨである式（１）の化合物の群である。

好適化合物群のうちで本発明の化合物のより好適な化合物群は、ｎが２であり、破線が非結合を表し、ＡとＢが一緒になって＝０を形成し、Ｒ２が−ＯＨであり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ１がであり、Ｒ４が−ＣＨｔ　ＯＨ、−ＣＨｓ、−ＣＨｌＯＣＯＣＨ３、ＣＨｘＯＣＯＣＨ１ＣｓＨｓ又バー　ＣＯｘ　ＣＨａ　’Ｃ’あり、Ｒ’ＳＲ’及びＲ’が各々独立シＴ：　ＯＨ、−ＯＣＯＣＨａ　又は−０ＣＯＣＨｚＣｓＨｓである化合物である。

この群のうちではＲ１がである化合物が特に好適である。

本発明の化合物の第２の好適群は、ｎが２であり、Ａ及びＢが別々に各々Ｈであり、破線が非結合を表し、Ｒ１が−ＯＨであり且つＲ３がエチルである式（１）の化合物群である。

式（１）の化合物は免疫抑制剤として活性である。この活性により、これらの化合物は移植片拒否反応の治療及び予防に有用である。更に、この活性により、これらの化合物は哺乳動物、特にヒトにおける慢性関節リウマチ及び転摩のような自己免疫疾患の予防及び治療にを用である。

従って、本発明は更に、治療を要する哺乳動物に式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、治療を要する哺乳動物における移植抵抗の治療方法も包含する。

上記及び下記に使用する「移植」なる用語は、同一個体の別の部分又は別の個体から抽出した組織もしくは器官（臓器）を個体の一部に移植することを意味する。典型的且つ非限定的な移植の例としては、骨髄、心臓、腎臓、腿及び膵臓十二指腸移植を挙げることができる。

上記及び下記に使用する「移植片」なる用語は、移植に使用される任意の非結合組織又は器官（臓器）を意味する。

典型的且つ非限定的な移植片の例としては、皮膚、骨、脂肪及び神経移植片を挙げることができる。

更に、本発明は治療を要する哺乳動物に式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、治療を要する哺乳動物における自己免疫疾患（例えば慢性関節リウマチ又は転摩）の治療方法も包含する。

更に、本発明は移植抵抗治療に有効な量の式（１）の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物も包含する。

更に、本発明は自己免疫疾患（例えば慢性関節リウマチ又は転摩）の治療に有効な量の式（１）の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物も包含する。

更に、本発明の式（１）の化合物は抗真菌活性を有する。

従って、これらの化合物は真菌類に起因する哺乳動物の感染を治療又は予防するために使用することができる。

従って、本発明は治療を要する哺乳動物に有効量の式（１）の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、治療を要する哺乳動物における真菌類に起因する疾患の治療方法を包含する。

更に、本発明は真菌類感染症の治療に有効な量の式（Ｉ）の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物も包含する。

詳細な説明本発明の式（ｒ）の化合物は容易に製造される。最も一般的には下式（ｒＶ）又は（Ｖ）：（ＩＶ）（ｖ）のマクロライドを式：（式中、Ｘはブロモ又はクロロのようなハロである）の適当な糖ハロゲン化物誘導体とカップリングさせる。カップリング（即ちグリコジル化）したマクロライドを以下のように更に修飾する。

式（ｒＶ）及び（Ｖ）のマクロライドの製造は文献から周知である。これらのマクロライドの一般に好適な製造経路はストレプトミセス属に属する微生物の生物学的発酵である。Ｒ３がアリルである式（ＩＶ）及び（Ｖ）の化合物は旦ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ　Ｎｏ、９９９３　（Ｆｅｒｍ　ＢＰ−９２７）の発酵により得られる。Ｒ３がエチルである式（■）の化合物及びＲ３がメチルである式（ＴＶ）の化合物はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＦｌ’ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　５ｕｂｓｐ、　ａｓｃ。

ｍｙｃｅｔｉｃｕｓ　ＡＴＣＣ１４８９１の発酵により得られる。

Ｃ１４８９１の凍結乾燥サンプルはブダペスト条約の規定に基づき、１９９２年１月１３日付けで米国、１２３０１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、　２０８５２に所在のＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉＯｎに寄託された。この新規寄託培養物は新寄託番号ＡＴＣＣ５５２７６を付与された。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓＮｏ、９９９３　（Ｆｅ　ｒｍ　ＢＰ−９２７）は、ブダペスト条約の規定に基づき、工業技術院微生物工業技術研究所（日本国茨城県筑波郡谷田部町東１丁目１−３）に現在寄託中である。ブダペスト条約の規定に基づき、微生物の新鮮なサンプルをＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎに寄託する予定である。

上記微生物を水性栄養培地に別々に置くと、式■及びＶの上記化合物を生成する。該微生物を発酵させてこれらのマクロライドを生成するには、参考資料として本発明の一部とする米国特許第４，８９４．３６６号の開示に実質的に従う。既存の施設装置を適応させるように開示手順を任意に変更することができ、このような変更については下記製造例１及び２に記載する。

ＲｏがＨであり且つＲ１が式（ＩＩ）又は（ｍ）の糖置換基である式（１）の化合物を製造するためには、式（ＩＶ）又は（Ｖ）のマクロライドを式（ＶＩ）又は（■）の糖ハロゲン化物とカップリングさせる。

式（Ｖｌ）又は（■）の糖ハロゲン化物と式（ｒＶ）又は（Ｖ）のマクロライドとのカップリング（即ちグリコジル化）反応は、当業者に周知の化学反応を使用して簡単に実施される。カップリング反応は一般に糖の過アセチル化形態を使用して実施される。反応不活性溶剤中で式（ＶＩ）又は（■）の適当な糖ハロゲン化物約２〜４モル当量を式（ＩＶ）又は（Ｖ）のマクロライドと混合する。この型の反応に有用な反応不活性溶剤としては、塩素化溶剤（例えばクロロホルム、塩化メチレン及び二塩化エチレン）、エーテル溶剤（例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ンオキサン及びジメトキシエタン）、芳香族溶剤（例えばベンゼン、トルエン及びキシレン）及び双極性非プロトン性溶剤（例えばＮ、Ｎ −ジメチルボルムアミド、アセトニトリル及びＮ−メチルピロリドン）を挙げることができる。

好適溶剤は塩素化溶剤であり、特に好適な溶剤は塩化メチレンである。一般に、反応体が溶剤により溶解又は懸濁されるように十分な溶剤を使用することが望ましい。典型的には、溶剤の使用量は１０−１〜１ｏ−３モルのマクロライド溶液を与えるような量とし、１０−’モルが好適である。無水溶剤を使用し、反応混合物に脱水剤を加えることにより、反応工程中脱水条件を維持する。この目的に使用するのに典型的な脱水剤はモレキュラーシーブ、硫酸カルシウム及び硫酸マグネシウムである。好適な脱水剤は４人モレキュラーシーブである。試薬の初期混合は約−７８℃〜約７０℃の温度で実施する。好適温度は約−７８℃〜約０℃ である。製造を容易にするには反応温度を一７８℃に維持する冷却浴を使用すると特に好適である。

上記反応体を混合し、温度を一７８℃に平衡後、反応混合物を炭酸水銀、炭酸銀、硝酸水銀又は硝酸銀のような適切な塩基で処理する。この反応に好適な塩基は炭酸銀である。該塩基の添加後、反応混合物を触媒で処理する。この反応に典型的な触媒としては、使用される特定塩基に会合したカチオンのトリフルオロメタンスルホン酸塩、過塩素酸塩及びテトラフルオロホウ素酸塩を挙げることができる。

好適触媒はトリフルオロメタンスルホン酸銀である。

全反応体及び試薬の添加後、反応混合物を０℃に昇温させ、０℃で０．５〜２４時間撹拌した後、室温までゆっくりと昇温させる。反応混合物を室温で更に０．５〜２４時間撹拌する。一般に、反応混合物を０℃で５時間撹拌し、３時間かけて室温まで昇温させた後、室温で１６時間撹拌する。次に当業者に公知の技術を使用して生成物を反応混合物から単離する。例えばＣｅ１ｉｔｅ（登録商標）のような濾過助剤で単なる濾過後、蒸発させて得た残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製する。当業者に承知の通り、カラムクロマトグラフィーはシリカゲルのような固相成分と、混合物から化合物を分離精製するために有利な溶剤混合物から構成される液相成分とを使用する。クロマトグラフィー後に溶剤を除去するとグリコジルマクロライドが得られる。

一般に、カップリング反応はマクロライドの３つのアルコール部位のただ１つでしか行われず、この部位はＣ−４′アルコール官能基である（式■参照）。この選択性は、マクロライドの好適配座ではこの位置のヒドロキシル基を極めて利用し易いためであると思われる。しかしながら、特に反応性の糖ハロゲン化物の場合などのように、少量のジグリコシル化物質（式中、Ｒ”＝　ＯＲ’）が形成される場合がある。この物質は反応の進行のモニター中に検出され、一般に常法に従って薄層クロマトグラフィーにより実施される。ジグリコシル化物質はモノグリコジル化物質について記載したと同様に単離及び精製されるが、大きな相違点として、ジグリコシル化物質はクロマトグラフィーから単離される最初の物質であり、モノグリコジル化物は後期フラクションとして単離される。付加当量の糖塩化物を使用−ターを変更してもジグリコシル化物質の収率に影響し得る。

Ｒ１がＨであり且つＲＯが式（ＩＩ）又は（ｍ）の糖置換基である式（１）の化合物を製造するためには、式（ＩＶ）又は（Ｖ）のマクロライドをまず最初にＣ −４′位でヒドロキシル保護基で保護する。この目的に適切なヒドロキシル保護基の非限定的な例としてはアルコールの炭酸エステル、カルボキシルエステル及びシリルエーテルのような基を挙げることができる。保護基は周知の有機化学方法を使用してアルコールに付加される。選択性、結合し易さ及び脱離し易さでは嵩高なシリルエーテルが好適である。簡便な方法としては、式（ＩＶ）又は（Ｖ）のマクロライドを約り℃〜約３０℃の温度の反応不活性溶剤に溶解する。この種の反応の反応不活性溶剤の例としては、双極性非プロトン性溶剤（例えばジメチルホルムアミド、アセトニトリル及びＮ−メチルピロリドン）、塩素化溶剤（例えばクロロホルム、ジクロロメタン及び１．２−ジクロロエタン）及びエーテル溶剤（例えばジエチルエーテル、ジオキサン及びテトラヒドロフラン）を挙げることができる。選択溶剤は多くの場合はジメチルホルムアミドである。シリル化剤、通常はシリルトリフルオロメタンスルホネート（例えばｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート）又は塩化シリル（塩化ジメチル−ｔ −ブチルシリル、トリメチルクロロシラン又はトリフェニルクロロシラン）を有機アミン（例えばトリエチルアミン、トリメチルアミン又はイミダゾール）と共に加える。一般にはイミダゾールが好適塩基である。反応混合物を典型的には室温で約１時間〜約２４時間撹拌した後、生成物を当業者に周知の方法で反応ブロスから単離する。

こうしてＣ−４′位を保護したマクロライドを上述のように式（ＶＩ）又は（■ ）の糖ハロゲン化物とカップリングすることができる。このようなカップリング反応の生成物は式（Ｉ）の化合物の誘導体であり、Ｃ−１４位には酸素により糖誘導体が結合しており、Ｃ−４１位は保護されている。当業者に周知の標準有機化学方法を使用することにより、Ｃ−４′位を脱保護して遊離ヒドロキシル化合物を得ることができる。典型的には、好適シリルエーテル保護基を脱離するためには、式（Ｉ）のＣ−４′シリル保護化合物を約０℃〜３０℃の温度の反応不活性溶剤（例えばアセトニトリル）又はエーテル溶剤（例えばテトラヒドロフラン又はジエチルエーテル）に溶解し、弗化水素又は弗化テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムのようなフッ素源で処理する。反応物を約１時間〜約２４時間撹拌した後、当業者に周知の標準有機化学方法を使用することにより生成物を単離する。

Ａ及びＢが別々に各々Ｈである式（Ｉ）の本発明の化合物（以下、Ｃ−２デスオキソマクロライドと呼称する）を製造するためには、α−ケトアミドの還元のための標準条件を使用して、Ａ及びＢが一緒になって＝Ｏである式（１）の化合物を還元する。この還元法は、分子中の他のカルボニルに作用せずにアミドに隣接するカルボニルを選択的に還元するものである。一般に、式（１）のＣ−２オキソマクロライドを反応不活性溶剤又は溶剤混合物に溶解し、硫化水素ガスを室温で６〜２４時間混合物に発泡する。簡便のために、一般にはガスを反応混合物に一晩発泡する。この反応に適切な反応不活性溶剤の非限定的な例としては、有機塩基（例えばジエチルアミン、トリエチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン及びアニリン）、双極性非プロトン性溶剤（例えばＮ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド及びＮ−メチルピロリドン）及びアルコール溶剤（例えばメタノール、エタノール及びプロパツール）を挙げることができる。最適収率に達するため又は還元工程を変更するためにこれらの溶剤の２種以上を組み合わせて使用する場合もある。例えば、ＡがＨであり且つＢがＯＨであるマクロライドは、溶剤としてメタノールを使用することにより製造される。Ｃ−２デスオキソマクロライドを提供するために特に好適な溶剤系は等量のピリジン及びＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドである。反応が完了したら、当業者に理解されるように標準有機化学技術を使用して生成物を単離する。

あるいは、上記手順を使用してグリコジル化前に式（ＩＶ）又は（Ｖ）のマクロライドを還元してもよい。還元後、マクロライドを上述のようにグリコジル化することができる。

破線が結合を表し且つＲ２が水素である式（１）の本発明の化合物を製造するためには、Ｒ２が−ＯＨであり且つ破線が非結合を表す式（１）の化合物（以下、 β−ヒドロキシケトンと呼称する）をヨーロッパ特許出願第３２３０４２号に開示されているように脱水する。一般には、触媒量の有機酸を含有する反応不活性溶剤にβ−ヒドロキシケトンを溶解する。適切な反応不活性溶剤はベンゼン、トルエン、キシレン等のような芳香族溶剤であり、トルエンが好適である。有機酸は一般にトルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸等のような酸から選択され、トルエンスルホン酸が好適である。反応混合物を約５分間〜約１時間約５０℃〜約１２０℃に加熱する。一般には蒸気浴温度（約１００℃）が好適であり、完全な反応のためには５分間で一般に十分である。当業者により十分理解される方法に従って反応生成物を単離する。反応は一般に既にグリコジル化された化合物で実施される。

Ｒ８、Ｒ６及びＲ７がヒドロキシであり且っＲ４がヒドロキシメチルである式（Ｉ）の本発明の化合物を製造するためには、下記のような当業者に公知の標準条件を使用して、Ｒｓ、Ｒａ及びＲ７がアセトキシであり且っＲ４がアセトキシメチルである式（Ｉ）の化合物を脱アセチル化する。この選択的脱アセチル化は存在するアミドに影響せず、０℃のアルコール溶剤中で脱アセチル化すべき物質の溶液にアルコキシド塩基を加えることにより容易に実施される。一般には触媒量（例えばｏ、ｏｉ当量）の塩基を使用する。通常、使用される特定アルコール溶剤のアルコキシド塩基が好適である。使用し易さと反応性の点では、メタノールが溶剤であり且つナトリウムメトキシドが塩基である系が最適である。生成物の単離は、当業者に周知の常法により実施される。

式（Ｖｌ）及び（■）の糖ハロゲン化物誘導体を容易に入手できない場合には、当業者に周知の標準ハロゲン化方法を使用することにより、式（■）及び（■）：［式中、Ｒ”はＨｌ　（ＣＩ　Ｃ４）アルキル又は（Ｃｚ　Ｃ４）アルカノイルである］の容易に入手可能な糖から製造すると簡便である。臭素化が選択方法であり、場合によっては塩素化を使用してもよい。臭素化は式（■）又は（ＩＸ）の１−ヒドロキシ、アルコキシ又はアルカノイルオキシ糖誘導体を酢酸のような有機酸溶剤に溶解することにより実施される。糖が１−ヒドロキシ又は１−アルコキシ糖である場合には、一般に１〜１０当量の酢酸無水物を加える。好適基質は１−アセトキシ糖誘導体である。温度が約−２０℃〜約０℃となるように反応混合物を冷却する。一般に好適な温度は約０℃である。冷却反応混合物を臭化水素酸の酸溶剤溶液で処理する。一般に多量（例えば１０〜４０モル当量）の臭化水素酸を使用する。反応混合物を室温に昇温させ、反応が完了するまで撹拌する。一般には簡便さの理由で反応混合物を一晩撹拌したままにする。臭素化物の単離は当業者に周知の簡単な方法で実施される。多くの場合、単に溶剤を減圧下に除去する。場合によってはより完全に溶剤を除去するために、反応溶剤を共沸するトルエンのような補助溶剤を使用する。カラムクロマトグラフィーを使用して更に精製してもよい。

Ｒ４が−ＣＨ２０ＣＯＲｓであり、Ｒ５、Ｒ’及びＲ’が一０ＣＯＲｓであり、Ｒ”カー　ＣＯＲｓテアル式（ＶＷ）　及Ｕ　（ＩＸ）の化合物を製造するためには、Ｒ４が−ＣＨ２０Ｈであり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が−ＯＨであり且つＲ１１１がＨである式（■）又は（ＩＸ）の化合物を標準アシル化反応で基質として使用する。典型的には該基質を約り℃〜約２５℃で適切な溶剤（例えば酢酸）中で適切なアシル化剤（非限定的な例として酢酸無水物）と反応させる。当業者に周知の標準有機化学技術を使用して生成物を単離する。

式（■）又は（ＩＸ）の糖誘導体は一般に容易に入手可能であり、大部分は天然に存在する糖である。

Ｒ４が−ＣＯＯＨである式（■）及び（ＩＸ）の糖誘導体は容易に入手可能であり、対応する糖の天然に存在するウロン酸誘導体である。Ｒ４が−ＣＯＮ　Ｈ、、−ＣＯＮＨＲ８、ＣＯＮ　Ｒ２”又ハＣＯ２Ｒｓテア６式（■）及び（ＩＸ）　（７）糖誘導体は容易に入手可能でない場合でも、当業者に公知の周知エステル化又はアミド化方法を使用して容易に製造される。

Ｒ４が−ＣＯＯＨである式（１）の化合物を製造するためには、式（Ｖｌ）又は（■）の糖ハロゲン化物を上述のように式（ｒＶ）又は（Ｖ）のマクロライドとカップリングする。カップリング後、当業者に公知の有機化学法の標準脱エステル化法を使用してＲ８基を除去し、Ｒ４が−ＣＯＯＨである式（１）の化合物を得る。

Ｒ４が−ＣＯ２Ｈである場合のように本発明の式（１）の化合物が酸である場合には、本発明は更に式（１）の該化合物の医薬的に許容可能な塩も包含する。

このような用途のための典型的な医薬的に許容可能なカチオン塩としては、アルカリ金属塩（例えばナトリウム及びカリウム）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム及びカルシウム）、アルミニウム塩、アンモニウム塩及び有機アミン（例えばベンザチン（Ｎ、Ｎ’　−ジベンンルエチレンジアミン）、コリン、ジェタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、ベネタミン（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、ジエチルアミン、ピペラジン、トロメタミン（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）及びプロヵイン）との塩を挙げることができる。特に好適なこのような塩はナトリウム塩である。

本発明の医薬的に許容可能なカチオン塩は補助溶剤中で酸形態を通常１当量の適当な塩基と反応させることにより容易に製造される。典型的な塩基は水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、ベンザチン、コリン、ジェタノールアミン、ピペラジン及びトロメタミンである。塩は濃縮乾個又は非溶剤の添加により単離される。多くの場合、塩は好ましくは酸の溶液をカチオンの種々の塩（ナトリウムエチルヘキサノエート、カリウムエチルヘキサノエート、マグネシウムオレエート）の溶液と混合し、溶剤（例えば酢酸エチル）を使用して所望のカチオン塩沈殿を析出させるか、又は濃縮及び／又は非溶剤の添加により単離することができる。

本発明の式（１）のマクロライドについては、不斉炭素原子及び二重結合により光学異性体及び幾何異性体のような配座異性体又は立体異性体形が存在すると理解すべきであり、このような異性体も本発明の範囲に含まれる。

こうして製造された式（１）の化合物は移植抵抗及び慢性関節リウマチ又は転摩のような自己免疫疾患の治療に有用である。移植抵抗の治療において、式（Ｉ）の化合物は予防的に使用してもよいし、移植器官又は組織を移植する患者による有害反応に応答して使用してもよい。予防的に使用する場合には、式（１）の化合物を移植手術前に患者又は移植すべき組織もしくは器官に投与する。予防処置は更に、移植手術後で移植に対する有害反応の徴候が観察される前の医薬投与も含み得る。有害反応に応答して投与する場合には、移植抵抗の外見的徴候が現れた後に式（１）の化合物を患者に直接投与し、該移植抵抗を治療する。

ヒトを含む哺乳動物における移植抵抗及び慢性関節リウマチ又は転摩のような自己免疫疾患の治療に使用するためには、疾患治療に有効な量を含有する適切な医薬組成物に式（１）の化合物を製剤化する。投与する式（１）の特定化合物の力価に依存して、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約３０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ体重／日を治療すべき哺乳動物に１日１回又は数回に分けて投与する。より好適な範囲は０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重／日であるが、特別の場合には臨床医の裁量で広い範囲外の用量が必要な場合もある。好適投与経路は一般に経口であるが、該当ターゲットに経口投与が不適切な場合や、患者が種々の理由で薬剤を摂取できない場合など特殊な場合には非経口投与（例えば静脈内、筋肉内、皮下又は髄内）が好適である。

患者が転摩のような皮膚疾患に罹患している場合や、組織又は器官の表面に薬剤を投与するのが最適であると臨床医が判断した場合には、局所投与でもよい。

こうして製造された式（１）の化合物は、真菌類に起因する感染の治療にも有用である。ヒトを含む哺乳動物における該真菌類感染の治療に使用する際には、疾患治療に有効な量を含有する医薬組成物に式（１）の化合物を製剤化する。投与する式（１）の特定化合物の力価に依存して、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重／日を被治療哺乳動物に１日１回又は数回に分けて投与する。

より好適な範囲は０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約２Ｑｍｇ／ｋｇ体重／日であるが、特定の場合には臨床医の裁量で広い範囲外の用量が必要な場合もある。好適投与経路は一般に経口であるが、該当ターゲットに経口投与が不適切な場合や、患者が種々の理由により薬剤を摂取できない場合など特殊な場合には、非経口投与（例えば静脈内、筋肉内、皮下又は髄内）が好適である。組織又は器官の表面に薬剤を投与するのが最良であると臨床医が判断した場合には、局所投与でもよい。

本発明の化合物は一般に、医薬的に許容可能なビヒクル又は希釈剤と共に少なくとも１種の式（１）の化合物を含有する医薬組成物形態で投与される。このような組成物は一般に、投与法に応じて固体又は液体ビヒクル又は希釈剤を使用して常法で製剤化され、経口投与の場合には、タブレット、硬軟ゼラチンカプセル、懸濁液、顆粒、粉末等であり、非経口投与の場合には注射可能溶液又は懸濁液等であり、局所投与の場合には溶液、ローション、軟膏、ロウ膏等である。

移植抵抗及び慢性関節リウマチ又は転摩のような自己免疫疾患の治療における薬剤としての本発明の化合物の効用は、下記生物学的スクリーンにおける該化合物の活性により立証される。該生物学的スクリーンは、式（１）の化合物の活性を他の公知化合物の活性と比較することが可能な手段も提供する。これらの比較の結果は、移植抵抗並びに慢性関節リウマチ及び転摩のような自己免疫疾患の治療用としてヒトを含む哺乳動物における用量レベルを決定するために有用である。

ヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を使用してｉｎ　ｖｉｔｒｏ免疫応答を発生し、３Ｈ−チミジン取り込みにより測定する。このスクリーンは、修正２方向ＭＬＲで末梢血液単核細胞を使用する。ＨＬＡ型り抗原の相違を確保し、こうして刺激を最大にするためには、凍結ドナー細胞のプールを刺激種集団として使用し、新しく単離した細胞を応答種集団として使用する。

０．５％　ＭＥＭ非必須アミノ酸（１００Ｘ）溶液、１％　Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）　、１％ＭＥＭビタミン（１００Ｘ）、１％ペニシリンストレプトマイシン溶液（１０，０００単位／　ｍ　Ｌ　）及び１５％熱失活ヒトＡＢ血清（ＮＡＢりを加えたＲＰＭＩ−１６４０に新たに取り出した単核細胞を懸濁する。

細胞を計数し、密度を５×１０５細胞／　ｍ　Ｌに調整する。次に溶液を丸底９６穴プレートに１００μＬ／ウエルの割合で移す。これらのプレートはこうして応答種細胞を含む。

刺激種細胞は数種の異なる個体から収集した単核細胞をプールすることにより調製される。細胞を９０％ヒトＡＢ血清及び１０％ＤＭＳＯに懸濁し、細胞計数が２Ｘ１０’細胞／　ｍ　Ｌとなるようにする。細胞を液体窒素中で保存する。ＭＬＲのために生存可能な細胞を５Ｘ１０’細胞／ｍＬに希釈し、応答種細胞を含むプレートに１００μＬ／ウエルを加える。応答種細胞及び刺激種細胞の混合物を含む各ウェルに化合物溶液５０μＬを加える。各用量毎に３つのウェルを使用する。プレートを５％ＣＯ８雰囲気下に３７℃でインキュベートし、５日間給温する。各ウェルに３Ｈ−チミジン１μＣ４を加え、更に１８時間インキュベーションを続ける。ＬＫＢβプレートシステムを使用して集菌する。

刺激対照の阻害百分率は下式を使用して得られる。

ｃｐｍなる略称はカウント毎分として定義される。ＲＰＭｌ−１６４０はＳｉｇｍａ社から市販されている組織培地である。

上記ＭＬＲスクリーンにおける活性は、移植抵抗並びに慢性関節リウマチ及び転摩のような自己免疫疾患の治療における活性化合物の有用性の指標となる。

種々の真菌類に対する本発明のマクロライドの抗菌活性は、サブロー寒天中の系列寒天希釈法により決定される。

３０℃で２４時間インキュベーション後に最小阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃ＞が得られる。

以下、実施例により本発明を説明する。しかしながら、本発明はこれらの実施例の具体的内容に限定されないものと理解されたい。特に指定しない限り、全反応は窒素のような不活性雰囲気下で実施される。ＴＨＦｌＤＭＳＯ，ＤＡＳＴ、ＤＭＡＰ及びＡｃなる略称を使用する場合には、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルアミノ三フッ化硫黄、４−ジメチルアミノピリジン及びアセチルを夫々意味する。糖ハロゲン化物は、特に指定しない限り、５　ｒ　ｇｍａ又はＡｌｄｒｉｃｈのような信頼で垂る販売業者から糖のまま購入した。無水溶剤を使用したが、無水とは実質的に水を含まないものと定義される。

下記に「反応不活性溶剤」なる表現を使用する場合には、所望の生成物の収率を悪化させるように出発物質、試薬、中間体又は生成物と反応しない溶剤を意味する。

製造例１及び２に使用する用語又は頭文字語を以下に詳述する。

ＰＹＥＡ寒天はＤｉｒｃｏマルトース（１０ｇ）　、Ｄｉｆｃｏ酵母エキス（４ｇ）、デキストロース（４ｇ）、Ｄｉｒｃｏ寒天（１５ｇ）及びフレッシュココナツミルク（５０ｍＬ）を十分な脱イオン水に溶解して１リツトル溶液とすることにより調製し、溶液をＩＮ　ＮａＯＨでｐＨ７，３に調整する。

ＡＴＣＣ１７２２培地は、グルコース（１０ｇ、）、可溶性澱粉（２０ｇ）、酵母エキス（５ｇ）　、ＮＺ−アミンＡ（Ｄｉｆｃｏ、５ｇ）及び炭酸カルシウム（１ｇ）を十分な脱イオン水に溶解し、１リツトル溶液とすることにより調製し、溶液をＩＮ　ＫＯＨでｐＨ７，０に調整する。

ＪＤＹＴＴ培地は、セレローズ（１０ｇ）、トウモロコシ澱粉（５ｇ）、コーンステイープリカー（５ｇ）　、ＮＺ−アミンＹＴＴ　（５ｇ）　、塩化コバルト（０，００２ｇ）及び炭酸カルシウム（３ｇ）を十分な脱イオン水に溶解して１リツトル溶液とすることにより調製し、溶液をｌＮＮａＯＨでｐＨ７，２に調整する。

ＮＺ−アミンＡ及びＮＡ−アミンＹＴＴは上記培地の成分のほとんどと同様にＤｉｒｃｏの市販品である。

上記ＭＬＲプロトコルにおいて、ＲＰＭＩ−１６４０はＭＬＲ試験の標準培地であり、ＭＥＭは最小必須培地として定義され、ＮＡＢＩは製造元である。

実施例１１７−エチル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−［２’　〜（４’−（２”、３ ′’、４”−１−リーＯ−アセチルーα−Ｄ−フコピラノシルオキシ）−３１− メトキシシクロヘキシル）−１′−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ− １３，１９，２１，２７−チトラメチルー１１゜２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，３，１，０４９］−オクタコメ−１８−エン−２，３，１０，１６−チトラオン製造例１の標記化合物（６，４１ｇ、０．００８１ｍｍｏ１）、α−Ｌ−アセトクロロフコース（Ｓ　ｉ　ｇｍａ。

５．０ｇ、　０．０１６ｍｍｏｌ）及び４人モレキュラーシーブ（粉砕、５．０ｇ）を−７８℃塩化メチレン（無水、１５０ｍＬ）に懸濁してなるスラリーを撹拌しながら、このスラリーに炭酸銀（１３，３６ｇ、０．０３２４ｍｍ。

１）、次いでトリフルオロメタンスルホン酸銀（０，８３ｇ、０．００３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８時間かけて室温まで昇温させた後、更に５時間撹拌した。得られた黄褐色スラリーをＣｅ１ｉｔｅで濾過し、濾液を減圧下に蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチル（２／１）を溶離剤として残渣をシリカゲル上で精製し、アノマーの混合物（９，０ｇ、５２％）として生成物を得た。

実施例２〜１１ α−Ｌ−アセトクロロフコース各モル当量を適当な糖塩化物１モル当量に置き換えた以外は実施例１の方法を使用して以下の化合物を調製した。

実施例１２メタノール（１００ｍＬ）中の実施例１の標記化合物（１，０ｇ、ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にナトリウムメトキシド（２０ｍｇ、ｍｍｏ　１）を加えた。反応混合物を０℃で８時間撹拌した後、酢酸１滴で処理した。溶剤を減圧下に除去し、ＴＨＦを溶離剤として残渣をシリカゲルで精製し、泡状物６１０ｍｇを得た（７２％）。質量スペクトル（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ＝９６０．６（分子イオン＋Ｎａ”）。

実施例１３〜２１実施例１の標記化合物各モル当量を実施例２〜１１の適当な標記化合物１モル当量で置き換えた以外は実施例１２と同様の方法により、以下の化合物を調製した。

実施例２１１７−エチル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−［２’　−（４″−（２”、３ ”、４”　−）リーＯ−アセチｌレーα−Ｄ−ラムノピラノシルオキシ）−３′ −メトキシシクロヘキシル）−１′−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ −１３，１９，２１，２７−チトラメチル−１１゜２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，３，１，０４９］　−オクタニス−１８−エン−３，１０，１６−ト１ノオン実施例３の標記化合物（１，０ｇ）をＤＭＦ　（１５ｍＬ）及びピリジン（１５ｍＬ）に溶解し、硫化水素ガスを室温で１６時間反応混合物に発泡した。Ｃｈｌｏｒｏｘ　（登録商標）トラップにより過剰の硫化水素が大気中基こ漏れなＬ亀ようにした。１６時間後、反応混合物をトルエン（５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ）で洗った。溶剤１をＭｇ　Ｓ　Ｏ４で脱水し、溶剤を減圧下に除去した。残渣をシ１ツカゲルパッドに通し、酢酸エチル／ヘキサン（２／１）で溶離し、標記化合物を得た。質量スペクトル（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ＝１０７２．７　（分子イオン＋Ｎａ”）　。”Ｃ−ＮＭＲ：δ２１５．３．　１７４．０．　１７０．３．　１７０．１．　１６９．４．　１４１．１及び１３２．６゜製造例１１７−エチル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−［２’　−（４″−ヒドロキシ −３＃−メトキシシクロヘキシル）−１′−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３゜１９．２１．２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４− アザトリシクロ［２２，３，１，０’・０］−オクタニス−１８−エン−２，３，１０，１６−チトラオンＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　５ｕｂｓｐ、ａｓｃｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ培養物ＡＴＣＣ１４８９１をＰＹＥＡ寒天斜面培地（Ｄｉｒｃｏマルトース１０ｇ／ＬＳＤｉｆｃｏ酵母エキ酵母エキス４デ／Ｌトロース４ｇ／Ｌ、Ｄｉｒｃｏ寒天１５ｇ／Ｌ及びフレ・ソシュココナツミルク５　ＱｍＬを脱イオン水で１す・ソトルまで希釈した後、ＩＮ　ＮａＯＨでｐＨ７，３に調整）Ｉこ接種した。調製物を２８℃で１０〜１２日間インキュベートした後、ＡＴＣＣ１７２培地（グルコース１０　ｇ／Ｌ、可溶性澱粉２０ｇ／Ｌ、酵母エキス５ｇ／ＬＳＮＺ−アミンＡ　５　ｇ　／　Ｌ及び炭酸カルシウム１　ｇ／Ｌ）１　ＱｍＬを入れた無菌１×６振盪チユーブに移した。ｐＨをＩＮ　ＫＯＨで７．０に調整した。チューブを２８℃でインキュベートし、回転振盪機で約１５０〜２００サイクル／分で振盪した。４〜５日後、ブロスをグリセロール及びＡＴＣＣ１７２培地で４０％に希釈した後、無菌状態で冷凍チューブに移した。各チューブにブロス１　／　２　ｍ　Ｌを充填した。チューブを保存中−８０℃で凍結した。

３００ｍＬ容振盪フラスコ中の無菌ＪＤＹＴＴ培地５０培地５丸ーブを種子接種物として使用して接種フラスコを調製した。

ＪＤＹＴＴ培地（７）Ｍ成は（＝レロース１０ｇ／Ｌ，ＮＺー７ミンＹＴＴ５ｇ／Ｌ，塩化コバルト０．００２ｇ／Ｌ及び炭酸カルシウム３ｇ／Ｌであった。ＪＤＹＴＴ培地のｐＨをＩＮ　ＮａＯＨでｐＨ７．２に調整した。振盪フラスコを回転振盪機で約１５０７２００サイクル／分及び２８℃で振盪及びインキュベートした。

約３〜５日齢振盪フラスコ接種物２ｍＬを使用して３Ｌ容ジャーファーメンタ− 中でＪＤＹＴＴ培地８０培地８金コシ澱粉４５ｇ／Ｌ、コーンステイープリカー１　０　ｇ／Ｌ。

アンバー又はパン乾燥酵母１　０　ｇ／Ｌ，炭酸カルシウム３ｇ／Ｌ及び塩化コバルト０．００５ｇ／Ｌであった。ｐＨをＩＮ　ＮａＯＨで約６．４〜６．８に調整した。消泡剤Ｐ−２０００１ｍＬを大豆油１００ｍＬと共にジャーファーメンタ−に加えた。ｐＨをＩＮ　ＮａＯＨで約６．４〜６．８に調整し、材料を１７０Ｏｒｐｍで撹拌した。温度は２８℃に維持し、無菌空気を１容量／容量／分の割合で培地に通した。

接種後、消泡のために無菌大豆油を使用した。より長時間の発酵では使用培地に依存して糖含有量をモニターし、糖補給を４０．６０及び９０時間毎に使用して還元糖濃度を０．０５％以上に維持した。発酵は４６時間続けた。

標準薄層クロマトグラフィー及びＨＰＬＣ方法を使用して発酵ブロスをモニターし、相対力価を計算した。

生成物は主に菌糸中に見いだされたが、全ブロスの精製が好適である。そこで、発酵工程の終了後、全ブロスをその容量の１／３〜１／２のメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）で２回抽出した。ＤｅＬａｖａ　Ｉセパレーター又はＰｏｄｂｉｅｌｎａｃｋ抽出器により層を分離した。溶剤層を清澄化し、まず真空炉、次いでロータリーエバポレーターで濃縮した。ヘプタン／アセトニトリル１０／１システムカーボイ当たり上層１０リツトル及び下層１リツトルを使用して２０リツトル容カーポイ内で濃縮物を４チユ一ブ向流分配した。活性な下層を収集して合わせ、濃縮した。

材料をＦｌｏｒｉｓｉｌで濾過することにより更に精製した（塩化メチレンを漸増させなからヘキサン、ヘキサン／塩化メチレン及び塩化メチレンで順次洗った）。活性の大部分は塩化メチレンフラクション中に検出された。これらのフラクションを合わせて濃縮した。シリカゲル（ヘプタン、塩化メチレン、塩化メチレン／酢酸エチル及び酢酸エチルで洗浄）を使用して第２の濾過ステップを実施した。

活性は大部分が塩化メチレン／酢酸エチル混合物を含有すン中に検出された。これらのフラクションをあわせて濃縮し、塩化メチレンに再溶解し、ＤＡＲＣＯＧ６０で処理した。次にサンプルを１２〜１５ｇ部分に分割し、１００％塩化メチレン→１００％酢酸エチルの直線勾配を溶離剤とし、シリカゲルカラムを使用して各サンプルをＰｒｅｐ５００液体クロマトグラフィーにかけた。活性フラクションをあわせて濃縮し、アセトン→１００％水の直線勾配を溶離剤とし、逆相（１８ｃ）シリカゲルを使用してＰｒｅｐ５００上でクロマトグラフィーにかけた。カラムから単離される最終成分として透明な生成物を得た。

下記バイオアッセイを使用して上記発酵手順における活性フラクションを決定した。

１２．５ｍｍディスクを寒天表面に直接当てた。ＣａｎＤ３７３７並びにＢｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ　ｆｕｌｖａＦＭｌｏ、３００　（Ｓ）及びＦＭＩｏ、４６４　（Ｒ）の感受性株を使用した。Ｃａｎｄｉｄａ及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙ　ｃ　ｅ　ｓプレートを３７℃で１８時間インキュベートした後、プレートの活性を試験した。Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓを２８℃でインキュベートし、１８時間後に読み取った。ＦＫ５０６及びＦＫ５２０　（ＣＰ−１０５０５１）のみを含むプレートがＢｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ株に対して活性であった。（ナイジェリシンを含有する）不純物フラクションも同様に他の株に対して活性であった。

フラクションの純度を決定するためにもＨＰＬＣ法を使用した。該方法はＤｕｐｏｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　ＣＮカラム（４，６ｍｍｘ２５ｃｍ）　、５５／４５水／アセトニトリルからなるアイソクラチックシステム及び流速１ｍＬ／分を使用した。検出は２１４ｎｍで実施した。ブロスサンプル（２０ｍＬ）をＭＩＢＫ　（２０ｍＬ）と混合し、約４〜５分間振盪した。層を分離し、溶剤を濃縮してほぼ乾個させた。残渣を純アセトニトリル１ｍＬにとり、５μＬサンプルをＨＰＬＣに注入した。ＦＫ５２０の滞留時間はこれらの条件下で約１２．７分である。

製造例２１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２［２’　−（４′−ヒドロキシ− ３２−メトキシシクロヘキシル）−１′−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３゜１９．２１．２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，３，１，０”］−］オクタスス−１８−エン−２，３１０，１６−チトラオンＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓＮｏ、９９９３　ＦＥＲＭ　ＢＰ−９２７をＰＹＥＡ寒天領瀉培地（Ｄｉｆｃｏｖルトース１０ｇ／Ｌ、ＤｉｆｃＯ酵母エキ酵母エキ２４デ／Ｌトロース４ｇ／Ｌ、ＤｉｆＣＯ寒天１５　ｇ／Ｌ及びフレッシュココナツミルク５０ｍＬを脱イオン水で１リツトルまで希釈し、ＩＮ　ＮａＯＨでｐＨ７，３に調整）に接種した。

調製物を２８℃で１０〜１２日間インキュベートした後、ＡＴＣＣ１７２培地（グルコース１０ｇ／Ｌ、可溶性澱粉２０ｇ／Ｌ、酵母エキス５ｇ／ＬＳＮＺ−アミンＡ５ｇ／Ｌ及び炭酸カルシウム１ｇ／Ｌから調製し、ｐＨをＩＮ　ＫＯＨで７．０に調整）１０ｍｌを入れた無菌１×６振盪チユーブに胞子を移した。チューブを回転振盪機で約１５０〜２００サイクル／分で２８℃で振盪培養した。４〜５日後、ブロスをグリセロール及びＡＴＣＣ１７２培地で４０％に希釈した後、冷凍チューブに無菌的に移した。各チューブにブロス１／２ｍＬを充填した。

チューブを保存中−８０℃で凍結した。

３００ｍＬ容振盪フラスコ中の無菌ＪＤＹＴＴ培地５０培地５起ーブを種子接種物として使用し、接種フラスコを調製した。

ＪＤＹＴＴ培地の組成はセレローズ１０ｇ／Ｌ，ＮＺ−アミンＹＴＴ　５ｇ／Ｌ、塩化コバルト０．００２ｇ／Ｌ及び炭酸カルシウム３ｇ／Ｌであった。ＪＤＹＴＴ培地のｐＨはＩＮ　ＮａＯＨでｐＨ７．２に調整した。振盪フラスコを回転振盪機で１５０〜２００サイクル／分及び２８℃で振盪し、インキュベートした。

約３〜５日齢振盪フラスコ接種物２ｍＬを使用して、３Ｌジャーファーメンタ− 中にＪＤＹＴＴ培地８０培地８金ロコシ澱粉４５ｇ／Ｌ，コーンステイープリカー１０ｇ／Ｌ１アンバー又はパン乾燥酵母１０ｇ／Ｌ，炭酸カルシウム３ｇ／Ｌ及び塩化コバルト０．００５ｇ／Ｌであった。

ｐＨをＩＮ　ＮａＯＨで約６．４〜６．８に調整した。消泡剤Ｐ−２０００　１ｍＬを大豆油１００ｍＬと共にジャーファーメンタ−に加えた。ｐＨをＩＮ　ＮａＯＨで約６。

４〜６．８に調整し、材料を１７０Ｏｒｐｍで撹拌した。

温度を２８℃に維持し、無菌空気を１容量／容量／分の割合で培地に散布した。

接種後、消泡のための無菌大豆油を使用した。より長時間の発酵では、使用する培地に依存して糖含有量をモニターし、４０、６０及び９０時間毎に糖補給を使用し、還元糖濃度を０．０５％以上に維持してもよい。発酵は４６時間続けた。

標準薄層クロマトグラフィー及びＨＰＬＣ法を使用して発酵ブロスをモニターし、相対力価を計算した。

ファーメンタ−を停止し、その容量の１／２のメチルイソブチルケトン（Ｍ　Ｉ　Ｂ　Ｋ）で２回抽出した。溶剤層を吸引及び減圧上濃縮により分離し、粘性油とした。油状物にヘキサン、ジエチルエーテル及び塩化メチレンを加えて粉砕し、活性フラクション（ジエチルエーテルフラクション）をフロリジル上でクロマトグラフィーにかけた。フロリジルをジエチルエーテル、塩化メチレン、酢酸エチル及びアセトンで順次溶離した。溶離液を濃縮し、活性炭で処理した。濃縮物を濾過し、酢酸エチルに溶解した。ヘキサンを加え、生成物を結晶化させた。

Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ　ｆｕｌｖａ株を使用してブロス及びその後の回収流の生物活性をモニターした。純酢酸エチルを溶離剤として使用するＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＦ（商標）プレート上のクロマトグラフィーによりブロス及び回収流中の成分を可視化した。展開したプレートにバニリン試薬（エタノール７５ｍＬ及び８５％リン酸２５ｍＬ中バニリン３ｇ）を噴霧し、８０℃に加熱した。

生成物は紫色スポットとして出現した。

製造例３２、３．５−トリー〇ーベンジルーβーアラビノフラノシルブロミド２、３．５−トリー〇ーベンジルー１ー０ーｐーニトロベンゾイル−β−アラビノフラノシド（Ｓ　ｉ　ｇｍａ．　５。

６９ｇ．１０ｍｍｏｌ）を０℃塩化メチレン（２５ｍＬ）に溶解し、酢酸（Ｆ　Ｉ　ｕ　ｋ　ａ．　２　５ｍＬ）中３３％ＨＢｒで処理した。混合物を室温で２時間撹拌した。溶剤を減圧下に除去し、残渣をトルエンから共沸させ、茶色がかった油状物を得（収率９８％）、そのまま使用した。

製造例４〜６Ｋａｒｔｈａ，に、Ｐ．Ｒ．及びＨ．Ｊ．Ｊｅｎｎｉｎｇｓ．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，７７７−７８１　（１９９０）により記載されている手順を実施することにより、下記化合物を調製した。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）゛エエ。工。□２８閤

Claims

【特許請求の範囲】

１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｎは１又は２であり；破線はＲ２がＨである場合には任意の二重結合を表し；Ａ及びＢは別々に各々独立してＨ又はＯＨであるか、あるいはＡ及びＢは一緒になって＝Ｏを形成し；Ｒ２はＨ、（Ｃ２−Ｃ５）アルカノイルオキシ又は−ＯＲ０であり；Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル又はアリルであり；Ｒ１及びＲ０は各々Ｈ、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼であり；Ｒ４は出現毎に独立して−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ２８、−ＣＨ２ＯＣＯＲ８、− ＣＨ，ＯＣＯ２Ｒ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＨＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８又は− ＣＨ２ＯＲであり；Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＯＨ、−ＯＣＯＲ８、−ＯＣＯ２Ｒ８又は−ＯＳｉ（Ｒ９）３であり：Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル；（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル；アリル；ピリジル；チェニル；ベンジル；１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１ −Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたベンジル；フェニル：又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルであり；但しＲ１とＲ０が同時にＨになることはない］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩。
２．破線が非結合を表し且つＲ２が−ＯＨである請求項１に記載の化合物。
３．ｎが２であり且つＡとＢが一緒になって＝Ｏを形成する請求項２に記載の化合物。
４．Ｒ３がメチル、エチル又はアリルである請求項３に記載の化合物。
５．Ｒ３がエチルである請求項４に記載の化合物。
６．Ｒ１が ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼である請求項５に記載の化合物。
７．Ｒ４が−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５又は−ＣＯ２ＣＨ３であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が各々独立して− ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ８又は−ＯＣＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５である請求項６に記載の化合物。
８．Ｒ１が ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項７に記載の化合物。
９．Ｒ４が−ＣＨ３であり、Ｒ５が−ＯＣＯＣＨ３であり、Ｒ４が−ＯＣＯＣＨ３であり且つＲ７が−ＯＣＯＣＨ３である請求項８に記載の化合物。
１０．Ｒ４が−ＣＨ３であり、Ｒ５が−ＯＨであり、Ｒ６が−ＯＨであり且つＲ７が−ＯＨである請求項８に記載の化合物。
１１．Ｒ１が ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項７に記載の化合物。
１２．Ｒ４が−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ３であり且つＲ５、Ｒ６及びＲ７が各々−ＯＣＯＣＨ３である請求項１１に記載の化合物。
１３．Ｒ４が−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ３であり且つＲ５、Ｒ６及びＲ７が各々−ＯＨである請求項１１に記載の化合物。
１４．ｎが２であり、ＡとＢが別々に各々Ｈであり、破線が非結合を表し、Ｒ２が−ＯＨであり且つＲ３がエチルである請求項１に記載の化合物。
１５．Ｒ１が ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項１４に記載の化合物。
１６．ｎが２であり、ＡとＢが一緒になって＝Ｏを形成し、破線が非結合を表し、Ｒ２がＯＲ０であり、Ｒ３がエチルであり且つＲ０及びＲ１が ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項１に記載の化合物。
１７．移植抵抗の治療を要する哺乳動物に該治療に有効な量の請求項１に記載の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、該治療を要する哺乳動物における移植抵抗治療方法。
１８．自己免疫疾患の治療を要する哺乳動物に該治療に有効な量の請求項１に記載の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、該治療を要する哺乳動物における自己免疫疾患の治療方法。
１９．真菌症の治療を要する哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物又は医薬的に許容可能なその塩を投与することからなる、該治療を要する哺乳動物における真菌症の治療方法。
２０．移植抵抗の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
２１．自己免疫疾患の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
２２．真菌類感染症の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
２３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｎは１又は２であり；Ｒ２は（Ｃ２−Ｃ５）アルカノイルオキシ又は−ＯＲ０でありＲ３は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル又はアリルであり；Ｒ１及びＲ０は各々Ｈ、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼であり；Ｒ４は出現毎に独立して−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｈ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯ２Ｒ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８又は−ＣＨ２ＯＲ８であり；Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＯＲ８、−ＯＣＯＣＨ２Ｒ８又は−ＯＳｉ（Ｒ８）３であり；Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ８）アルキル；（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル：アリル；ピリジル；チェニル；ベンジル；１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１ −Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたベンジル；フェニル；又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルであり；但しＲ１とＲ０が同時にＨになることはない］の化合物の製造方法であって、約 −７８℃〜約−７０℃の反応不活性溶剤中、モレキュラーシーブ、硫酸カルシウム及び硫酸マグネシウムから成る群から選ばれた脱水剤と、炭酸水銀、炭酸銀、硝酸水銀及び硝酸銀から成る群から選ばれた塩基と、トリフルオロメタンスルホン酸銀、過塩素酸銀、テトラフルオロ硼酸銀、トリフルオロメタンスルホン酸水銀、過塩素酸水銀及びテトラフルオロ硼酸水銀から成る群から選はれた触媒の存在下で約０．５〜約２４時間かけて約０℃まで昇温させながら、式：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル又はアリルであり、ｈは１又は２である］の化合物を、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼［式中、Ｘはハロであり；Ｒ４は出現毎に独立して−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｈ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ２８、−ＣＨ２ＯＣＯＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯ２Ｒ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＨＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８又は−ＣＨ２ＯＲ８であり；Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＯＲ８、−ＯＣＯ２Ｒ８又は−ＯＳｉ（Ｒ９）３であり；Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル；（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル；アリル；ピリジル：チェニル；べンジル；１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１ −Ｃ４）アルコキシ基で程々に置換されたベンジル；フェニル；又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルである］から成る群から選ばれた化合物２〜４モル当量と反応させる段階と、その後、室温で約０．５〜２４時間撹拌する段階とを含む方法。
２４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ｎは１又は２であり；Ｒ２は（Ｃ２−Ｃ５）アルカノイルオキシ又は−ＯＲ０でありＲ３は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル又はアリルであり；Ｒ１及びＲ０は各々Ｈ、 ▲数式、化学式、表等があります▼ であり；Ｒ４は出現毎に独立して−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＲ２８、−ＣＨ２ＯＣＯ２Ｒ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＨＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８又は−ＣＨ２ＯＲ８であり；Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、べンジルオキシ、−ＯＨ、−ＯＣＯ２Ｒ８又は−ＯＳｉ（Ｒ８）３であり；Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル；（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル；アリル；ピリジル：チェニル；べンジル：１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１ −Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたベンジル：フェニル；又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルであり；但しＲ１とＲ０が同時にＨになることはない］の化合物の製造方法であって、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｎは１又は２であり；Ｒ２は（Ｃ２−Ｃ５）アルカノイルオキシ又は−ＯＲ０であり；Ｒ３は（Ｃ１− Ｃ３）アルキル又はアリルであり；Ｒ１及びＲ０は各々Ｈ、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼であり；Ｒ４は出現毎に独立して−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｈ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯＲ８、−ＣＨ２ＯＣＯ２Ｒ８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８、−ＣＨ２ＯＣＯＮＲ２８又は−ＣＨ２ＯＲ８であり；Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＯＲ８、−ＯＣＯＣＨ２Ｒ８又は−ＯＳｉ（Ｒ８）３であり；Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル；（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル；アリル；ピリジル；チェニル；ベンジル；１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１ −Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたベンジル；フェニル；又は１〜５個のハロゲン原子、−ＯＨ基もしくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基で種々に置換されたフェニルであり；Ｒ９は出現毎に独立して（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル又はベンジルであり；但しＲ１とＲ０が同時にＨになることはない］の化合物を０℃アルコール溶剤中で触媒量のアルコキシド塩基と反応させることからなる方法。