JPH07255476A - 免疫応答ヒトプロテアソームサブユニット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 細胞のヒトプロテアソームのサブユニットＸ
およびＹのポリペプチド、および該サブユニットの各ポ
リペプチドをコードする遺伝子を提供する。 【構成】 分子中に配列番号１のアミノ酸配列の全部ま
たは一部を含有するヒトプロテアソームサブユニットＸ
のポリペプチド。また、分子中に配列番号２の塩基配列
の全部または一部を含有するヒトプロテアソームサブユ
ニットＸのポリペプチドをコードする遺伝子。また、分
子中に配列番号３のアミノ酸配列の全部または一部を含
有するヒトプロテアソームサブユニットＹのポリペプチ
ド。更に、分子中に配列番号４の塩基配列の全部または
一部を含有するヒトプロテアソームのサブユニットＹの
ポリペプチドをコードする遺伝子。 【効果】 ヒトプロテアソームの酵素的機能の解明に役
立つ。また、免疫疾患をはじめとする各種病態の診断お
よび治療法を確立するために有用な技術を提供すること
ができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロテアソームに関す
るものであり、さらに詳しくは細胞内ヒトプロテアソー
ムのサブユニットＸおよびＹのポリペプチド、および該
サブユニットの各ポリペプチドをコードする遺伝子に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】プロテアソームは、別名、多機能プロテ
アーゼと呼ばれ、不活性型で細胞内に局在し、エネルギ
ー依存性蛋白質分解系を構成する主要酵素である。本酵
素は、酵母からヒトに至る真核生物に広く存在してお
り、また、すべての組織に存在し、なかでも肝臓では、
全可溶性蛋白質の１％も占める。該酵素は、同一分子内
に複数の触媒活性部位を持ち、トリプシン型酵素の基質
である塩基性アミノ酸、キモトリプシン型酵素の基質で
ある中性アミノ酸のペプチド結合を切断する活性があ
り、そしてプロテアーゼとしては稀な、酸性アミノ酸を
含む合成ペプチドのカルボキシ末端のペプチド結合を切
断する活性がある。しかしながら、種々の阻害剤の中で
特異的で有効に作用するものはないことから、該酵素
は、既知のプロテアーゼとは異なる触媒活性部位を持つ
と推定されている。

【０００３】また、該酵素は、構造的には、１４種類の
異なるコンポーネントからなる総数２８個の多成分複合
体であり、沈降係数２０Ｓ、分子量は約７５万と推定さ
れ、プロテアーゼとしては例外的に大きい。また、該酵
素を電子顕微鏡で観察すると、環状型あるいは円筒型の
特異的な分子形状を有していることが認められた。

【０００４】さらに、ヒトプロテアソームは、高速液体
クロマトグラムの分離パターンより、少なくとも１４種
類のコンポーネントより構成されていることがわかり、
このうち、コンポーネントHC2 、HC3, HC5, HC8, HC9
(Biochim. Biophys. Acta., 1089, 95-102, 1991), hZE
TA (Biochim. Biophys. Acta., 1079, 29-38,1991),LMP
7 (Nature, 353, 357-360, 1991), LMP2 ( Nature, 3
53, 667-668, 1991)の１次構造が明かになった。

【０００５】かかるプロテアソームは、非リソゾーム系
蛋白質分解経路における主要酵素であり、蛋白質の修飾
による機能制御や蛋白質の代謝回転の調節など多彩な生
理作用を有していると推定される。また、最近、MHC ク
ラスII領域にプロテアソームサブユニットであるLMP2/L
MP7 がコードされていたことがわかり、これらのサブユ
ニットが免疫応答遺伝子であると共に、内在性抗原提示
機構に関与していることが示唆されている(Trendsin Ce
ll Biol., 2, 81,1992)。

【０００６】しかしながら、ヒトプロテアソームを構成
するサブユニットのうち、免疫応答に関わっているサブ
ユニットは、これまで上記LMP2/LMP7 以外に明らかにさ
れておらず、他のサブユニットの詳細を明かにすること
が強く要請されていた。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本願発明者等
は、このような状況を踏まえ、前記プロテアソームにつ
いて、その構成成分である個々のコンポーネントの構
造、機能等について詳細に検討すると共に、免疫疾患を
はじめとする各種病態の診断、および治療法を確立する
ことを目標として、鋭意研究を重ねた結果、新規な免疫
応答に関与する多機能プロテアーゼ、すなわち、ヒトの
プロテアソームの構成成分であるＸおよびＹについて解
明することに成功して、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明はヒトプロテアソームの
構成成分のサブユニットＸおよびＹの各ポリペプチドを
提供することを目的とするものである。

【０００９】また、本発明は、ヒトプロテアソームの構
成成分のうち、ＸおよびＹの各ポリペプチドをコードす
る遺伝子を提供することを目的とするものである。

【００１０】また、これらのサブユニットを明らかにす
ることにより、該酵素の機能の解明に役立つのみなら
ず、免疫疾患をはじめとする各種病態の診断、および治
療法を確立する技術を提供することを目的とするもので
ある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、免疫応答
に関与するプロテアーゼについて、鋭意研究を重ねてき
た結果、ヒトプロテアソームのサブユニットのうち、Ｘ
およびＹのポリペプチドをコードする遺伝子を単離し、
そのアミノ酸配列を明らかにすることに成功した。

【００１２】本発明によれば、次式（１）で表されるア
ミノ酸配列の全部または一部を含有するヒトプロテアソ
ームのサブユニットＸのポリペプチドが提供される。 式（１） MLHGTTTLAFKFRHGVIVAADSRATAGAYIASQTVKKVIEINPYLLGTMAGGAADCSFWE RLLARQCRIYELRNKERISVAAASKLLANMVYQYKGMGLSMGTMICGWDKRGPGLYYVDS EGNRISGATFSVGSGSVYAYGVMDRGYSYDLEVEQAYDLARRAIYQATYRDAYSGGAVNL YHVREDGWIRVSSDNVADLHEKYSGSTP

【００１３】また、本発明によれば、次式（２）で表さ
れるアミノ酸配列の全部または一部を含有するヒトプロ
テアソームのサブユニットＹのポリペプチドが提供され
る。 式（２） MAATLLAARGAGPAPAWGPERFTPDWESREVSTGTTIMAVQFDGGVVLGADSRTTTGSYI ANRVTDKLTPIHDRIFCCRSGSAADTQAVADAVTYQLGFHSIELNEPPLVHTAASLFKEM CYRYREDLMAGIIIAGWDPQEGGQGYSVPMGGMMVRQSFAIGGSGSSYIYGYVDATYREG MTKEECLQETANALALAMERDGSSGGVIRLAAIAESGVERQVLLGDQIPKFAVATLPPA

【００１４】本発明のヒトのサブユニットＸおよびＹ
は、上記のアミノ酸配列のＮ末端にメチオニンが結合し
ていないポリペプチド、および上記アミノ酸配列のＮ末
端にヒトプロテアソームのサブユニットＸ、Ｙのための
シグナルペプチドの部分もしくは全部が結合、または欠
損した中間体も含包する。また、自然の変異により、ま
たは人工の変異により、ポリペプチドの主たる活性に変
化を与えることなく、ポリペプチドをコードするＤＮＡ
の構造の一部を変化させることが可能である。本発明の
ヒトプロテアソームのサブユニットＸおよびＹのポリペ
プチドは、前記アミノ酸配列を含有する相同変異体に相
当する構造を有するポリペプチドも含包する。

【００１５】本発明のもう一つの態様によれば、前記式
（１）で表されるアミノ酸配列の全部または一部を含有
するヒトプロテアソームのサブユニットＸのポリペプチ
ドをコードする次式（３）で表される塩基配列の全部ま
たは一部を含有するデオキシリボ核酸が提供される。

【００１６】 式（３） ATGCTTCATG GAACAACCAC CCTGGCCTTC AAGTTCCGCC ATGGAGTCAT AGTTGCAGCT GACTCCAGGG CTACAGCGGG TGCTTACATT GCCTCCCAGA CGGTGAAGAA GGTGATAGAG ATCAACCCAT ACCTGCTAGG CACCATGGCT GGGGGCGCAG CGGATTGCAG CTTCTGGGAA CGGCTGTTGG CTCGGCAATG TCGAATCTAT GAGCTTCGAA ATAAGGAACG CATCTCTGTA GCAGCTGCCT CCAAACTGCT TGCCAACATG GTGTATCAGT ACAAAGGCAT GGGGCTGTCC ATGGGCACCA TGATCTGTGG CTGGGATAAG AGAGGCCCTG GCCTCTACTA CGTGGACAGT GAAGGGAACC GGATTTCAGG GGCCACCTTC TCTGTAGGTT CTGGCTCTGT GTATGCATAT GGGGTCATGG ATCGGGGCTA TTCCTATGAC CTGGAAGTGG AGCAGGCCTA TGATCTGGCC CGTCGAGCCA TCTACCAAGC CACCTACAGA GATGCCTACT CAGGAGGTGC AGTCAACCTC TACCACGTGC GGGAGGATGG CTGGATCCGA GTCTCCAGTG ACAATGTGGC TGATCTACAT GAGAAGTATA GTGGCTCTAC CCCC

【００１７】また、本発明のもう一つの態様によれば、
前記式（２）で表されるアミノ酸配列の全部または一部
を含有するヒトプロテアソームのサブユニットＹのポリ
ペプチドをコードする次式（４）で表される塩基配列の
全部または一部を含有するデオキシリボ核酸が提供され
る。

【００１８】 式（４） ATGGCGGCTA CCTTACTAGC TGCTCGGGGA GCCGGGCCAG CACCGGCTTG GGGGCCGGAG GCATTCACTC CAGACTGGGA AAGCCGAGAA GTTTCCACTG GGACCACTAT CATGGCCGTG CAGTTTGACG GGGGCGTGGT TCTGGGGGCG GACTCCAGAA CAACCACTGG GTCCTACATC GCCAATCGAG TGACTGACAA GCTGACACCT ATTCACGACC GCATTTTCTG CTGTCGCTCA GGCTCAGCTG CTGATACCCA GGCAGTAGCT GATGCTGTCA CCTACCAGCT CGGTTTCCAC AGCATTGAAC TGAATGAGCC TCCACTGGTC CACACAGCAG CCAGCCTCTT TAAGGAGATG TGTTACCGAT ACCGGGAAGA CCTGATGGCG GGAATCATCA TCGCAGGCTG GGACCCTCAA GAAGGAGGGC AGGGGTACTC AGTGCCTATG GGGGGTATGA TGGTAAGGCA GTCCTTTGCC ATTGGAGGCT CCGGGAGCTC CTACATCTAT GGCTATGTTG ATGCTACCTA CCGGGAAGGC ATGACCAAGG AAGAGTGTCT GCAATTCACT GCCAATGCTC TCGCTTTGGC CATGGAGCGG GATGGCTCCA GTGGAGGAGT GATCCGCCTG GCAGCCATTG CAGAGTCAGG GGTAGAGCGG CAAGTACTTT TGGGAGACCA GATACCCAAA TTCGCCGTTG CCACTTTACC ACCCGCC

【００１９】本発明のヒトのサブユニットＸのポリペプ
チドをコードする遺伝子およびＹのポリペプチドをコー
ドする遺伝子は、上記のアミノ酸配列のＮ末端にメチオ
ニンが結合していないポリペプチド、および上記アミノ
酸配列のＮ末端にヒトプロテアソームのサブユニット
Ｘ、Ｙのためのシグナルペプチドの部分もしくは全部が
結合、または欠損した中間体をコードする遺伝子も含包
する。また、自然の変異により、または人工の変異によ
り、ポリペプチドの主たる活性に変化を与えることな
く、ポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の一部を変
化させることが可能である。本発明のヒトプロテアソー
ムのサブユニットＸおよびＹの各ポリペプチドをコード
する遺伝子は、前記アミノ酸配列を有する相同変異体に
相当する構造を有するポリペプチドをコードする遺伝子
も含包する。

【００２０】続いて、本発明の構成について詳細に説明
する。本発明のヒトプロテアソームのサブユニットは、
これを用いることにより、該酵素の機能の解明に役立つ
のみならず、免疫疾患をはじめとする各種病態の診断お
よび治療法を解明する技術が提供される。

【００２１】まず、本発明者等がサブユニットＸおよび
Ｙを見い出すに至った経緯について説明すると以下の通
りである。IFN-γは、免疫インターフェロンとも呼ば
れ、MHC 遺伝子群の発現応答などを介して免疫調節に中
心的な役割を果たしている。そこで、本発明者等は、ヒ
ト大腸癌SW620 細胞と単球系白血病J111細胞を用いプロ
テアソームの発現に対するIFN-γの影響を詳しくノザン
ブロティング法で検討した結果、MHC 領域のプロテアソ
ーム遺伝子LMP2/LMP7 がIFN-γで強く誘導されたが、MH
C 領域以外の染色体上に存在する多数のプロテアソーム
遺伝子群の発現にはほとんど影響せず、LMP2/LMP7 の遺
伝子は、IFN-γ応答遺伝子として、特殊な遺伝子発現の
制御下にあることが明らかになった。

【００２２】次に、IFN-γ処理でLMP-2/LMP7のサブユニ
ットが導入されたプロテアソームの分子機能を解明する
ために、その蛋白質分解機能を解析した。細胞の粗胞抽
出液をグリセリン密度勾配遠心法で分別し、細胞内のプ
ロテアソームの動態を解析した結果、プロテアソームの
ペプチダーゼ活性はIFN-γ処理で大きく変動した。特
に、20S プロテアソームの分画位置に見られる不活性型
のキモトリプシン様活性がほぼ完全に活性型に転換され
ており、またトリプシン様活性の著しい増加も観察され
た。他方、酸性アミノ酸のC-末端側を分解する活性は大
きく減少した。このようなプロテアソームの蛋白分解活
性の変動は大腸癌細胞のみならずヒト腎癌細胞などでも
観察された。

【００２３】一方、最近、細胞表面膜に提示されている
MHC クラスI 分子と結合している抗原ペプチドの解析が
飛躍的に進み、そのC-末端側のアミノ酸残基を調べてみ
るとほとんど全てが、中性アミノ酸か塩基性アミノ酸で
あり、酸性アミノ酸は存在しないことが判明している。
このことはプロテアソームにおける酵素活性の変化とき
わめて良く一致しており、プロテアソームが抗原のプロ
セシングに関与している可能性を確かなものにしてい
る。

【００２４】そこで、次に、プロテアソームの分子構成
に対するIFN-γの影響を調べ、プロテアソームの機能変
化との関連性について検討した。IFN-γで処理したSW62
0 細胞を³⁵S-メチオニンでパルス標識した後、抗プロテ
アソーム抗体で免疫沈降させ、新たに生合成されたプロ
テアソームのサブユニット構成を調べた結果、図１に示
す様に、IFN-γにより、LMP2/LMP7 のスポットが増加す
ることはノザンブロット分析の結果と一致したが、興味
深いことに、それら以外の成分にも顕著な変動が観察さ
れ、特にX 、Y と名付けた成分は、ほとんど完全に消失
した。従って、IFN-γ処理でLMP2/LMP7 とX 、Y との置
換がおきている可能性が考えられる。

【００２５】このように、IFN-γで処理した細胞でのプ
ロテアソームのサブユニット構成は大きく変化し、分子
構成の異なるプロテアソームの存在が示唆されたこと
は、IFN-γ処理でプロテアソームの分子構成が変化し、
その結果が機能状態の変動に反映したものと推定され
た。これらのことより、プロテテアソームサブユニット
ＸおよびＹは、ガンマ型インターフェロン（IFN-γ）に
応答して消失するサブユニットであることから、免疫応
答などを介した免疫調節に中心的な役割を果たしている
と考えらる。従って、本発明のヒトプロテアソームのサ
ブユニットは、免疫系の抗原提示のメカニズムの解明、
自己免疫疾患などの診断および治療、免疫抑制剤の開発
に有効である。

【００２６】また、これ以外にもプロテアソームの遺伝
子は、肝癌細胞、腎癌細胞 (CancerRes., 51, 6677-668
5, 1991) 、白血病細胞などの悪性腫瘍細胞 (Proc. Nat
l.Acad. Sci. U.S.A., 88, 139-143, 1990) において正
常細胞に比較して異常に高く発現し、さらに、これらの
腫瘍細胞の核に多機能プロテアーゼが、異常蓄積するこ
とが観察されている。従って、本発明の多機能プロテア
ーゼのコンポーネントを用いることにより、癌化のメカ
ニズムの解明や癌の診断および治療に有用である。

【００２７】さらに、アルツハイマー病患者の脳内には
ユビキチンが異常蓄積し、少なくともこの疾患の原因の
一つに細胞内における蛋白質分解系の異常のあることが
示唆された。また、この疾患の発現にかかわる遺伝子の
機能ドメインにはプロテアーゼ阻害剤がコードされてい
ることも判明し(Nature, 331, 530-532, 1988)、非リソ
ソーム系の蛋白分解に関与すると考えられる多機能プロ
テアーゼがアルツハイマー病に本質的に関係しているこ
とが考えられる。従って、本発明のヒトプロテアソーム
のコンポーネントは、その機能および阻害メカニズムの
解明により、アルツハイマー病と本酵素との関係や異常
の生じるメカニズムのヒトにおける研究に有用である。

【００２８】本発明のＤＮＡは、前記式（３）あるいは
（４）の５’末端にＡＴＧが結合していない塩基配列か
らなるＤＮＡを含包する。本発明のＤＮＡは、また、ヒ
トプロテアソームのサブユニットＸあるいはＹのシグナ
ルペプチドの部分または全部をコードする５’フランキ
ングＤＮＡを含むＤＮＡも含包する。

【００２９】また、自然の変異により、または人工的変
異により、主たる活性に変化を与えることなく、ＤＮＡ
の構造およびそれから演繹されるポリペプチドの構造の
一部を変異せしめることが可能である。従って、本発明
のＤＮＡは、前述のすべてのポリペプチドの相同異性体
に相当する構造を有するポリペプチドをコードする塩基
配列を含有することも可能である。

【００３０】さらに、遺伝暗号の縮重に従い、遺伝子か
ら生産されるポリペプチドのアミノ酸配列を変えること
なくその遺伝子の塩基配列の少なくとも一つの塩基を他
の種類の塩基に置換することができる。従って、本発明
のＤＮＡは、また、遺伝暗号の縮重に基づく置換によっ
て、変換された塩基配列を含有することも可能である。
この場合、上記置換により得られた塩基配列より演繹さ
れるアミノ酸配列は、前記に定義した式（１）および
（２）のアミノ酸配列と一致する。

【００３１】本発明のヒトプロテアソームのサブユニッ
トの特性を有するポリペプチドを得る方法、および該ポ
リペプチドをコードする遺伝子を得る方法の概要につい
て説明すると以下の通りである。

【００３２】上記ヒトプロテアソームＸおよびＹのアミ
ノ酸配列の決定法は、以下のごとく行うことができる。
ヒトプロテアソームは、田中等の方法(Tanaka, T., et
al.,J. Biol. Chem., 261, 15197-15230, 1986; Tanaka
K., et al., J. Biol. Chem., 263, 16209-16217、198
8) に従って、ヒト腎臓から、バイオゲルーＡ、Ｑーセ
ファロス、ハイドロキシアパタイト、ヘパリンセファロ
ースを吸着体としたクロマトグラフィー等の操作で単一
に精製することができる。次いで、上記方法によって精
製したヒトプロテアソームの構成サブユニットは２次元
電気泳動により分離できる。

【００３３】２次元電気泳動後、ゲルをクマシー染色す
ると、分子量21000-33000、等電点4-10の十数個のスポ
ットとして観察される。これらのスポットから、サブユ
ニットＸ、Ｙを単離するには、インターフェロン−γ
（IFN-γ) の誘導によって減少するサブユニットＸ、Ｙ
の位置を同定することによって、調べることができる。

【００３４】２次元電気泳動より分離されたコンポーネ
ントは、ポリビニリデン ジフルオロダイド（ＰＶＤ
Ｆ）等にトランスファー後、各種酵素処理後、自動アミ
ノ酸シークエンサー等を用いてアミノ酸配列を決定する
ことができる。

【００３５】上記の解析によって得られたアミノ酸配列
の情報をもとに遺伝子の検索に必要なプローブは、得ら
れたペプチドのうち縮重頻度の低いものを選択し、これ
に対応する相補的ポリヌクレオチドとして合成すること
ができる。

【００３６】また、上記に従い得られるサブユニットＸ
およびＹのＤＮＡの塩基配列の決定は、例えば、マキサ
ムーギルバート(Maxiam-Gilbert)法(Methods in Enzymo
logy, 65, 499-560, 1980)、ジデオキシ法 (Messing,
J. et al., Nucleic Acids Research, 9, 309, 198
1)、アプライドバイオシステム社製DNA シークエンサー
を用いたTaq サイクルシークエンシング等により行なう
ことができる。以上のようにして、ヒトプロテソームの
コンポーネントＸおよびＹをコードするＤＮＡが得られ
る。

【００３７】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
は、（ｉ）ヒトプロテアソーム産生細胞からメッセンジ
ャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を分離し、（ｉｉ）該ｍＲＮＡ
から、単鎖の相補鎖ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、次いで、２
重鎖ＤＮＡを合成し、（ｉｉｉ）２重鎖ＤＮＡをプラス
ミドまたはファージに組み込み、（ｉＶ）得られた組み
換えプラスミドまたはファージで宿主を形質転換し、
（ｖ）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から、
適当な方法、例えば、コロニーハイブリダイゼーション
またはプラークハイブリダイゼーションにより、目的と
するＤＮＡを含有するプラスミドまたはファージを単離
し、（Ｖｉ）そのプラスミドまたはファージから目的と
するＤＮＡを切り出し、（ｖｉｉ）該クローン化ＤＮＡ
を適当なプラスミドにサブクローニングすることにより
取得できる。ただし、（ｉｉｉ）で組み込んだプラスミ
ドが、（ｖｉｉ）でサブクローニングするプラスミドと
同じ場合は、（ｖｉ）、（ｖｉｉ）の操作は省略でき
る。

【００３８】ヒトプロテアソームのサブユニットＸおよ
びＹの各ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、種々の
動物の組織、器官、産生細胞から、より具体的には、肝
臓、腎臓、心臓、脳、肺、胸腺、肝癌細胞株、腎臓癌細
胞株などから得ることができる。

【００３９】該酵素産生細胞から全ＲＮＡを調製する方
法としては、グアニジウム／セシウムクロライド法(Gua
nidiumu/Cesiumu Chroroide method, Maniatis, T., Fr
itsch E. F., and Sambrook, J., Molecular Cloning,
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 194-196, 198
2) や、グアニジウムチオシアネート法 (Chomczynski,
P. et al., Analytical Biochemistry, 162, 156-159,
1987)等が一般に用いられる。

【００４０】上記操作により得られる全ＲＮＡからのｍ
ＲＮＡの分離、精製は、例えば、オリゴｄＴーセルロー
ス〔コラボレイティブ リサーチ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａ
ｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）社製〕や、オリゴテック
スーｄＴ３０（日本合成ゴム社、日本ロッシュ社製）等
を用いて吸着カラム法またはバッチ法により実施でき
る。

【００４１】このようにして得られたｍＲＮＡを鋳型と
して、逆転写酵素を用いて、例えば、オカヤマーバーグ
法 (Okayama, H. and Berg, P., Molecular and Cellul
ar Bology, 3, 280, 1983)や、グブラーとホフマンの方
法 (Gubler, V. and Hoffman, B.J., Gene, 25, 263-26
9, 1983)等に従い、ｃＤＮＡを合成し、得られたｃＤＮ
Ａをプラスミドやファージに組み込み、ｃＤＮＡのライ
ブラリーを調製する。

【００４２】ｃＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、
例えば、PBR322 (Gene, 2, 95,1977), PBR325 (Gene,
4, 121, 1978), PUC12 (Gene, 19, 259, 1982), PUC13
(Gene,19, 259,1982), PUC18 (Gene, 33, 103, 1985),
PUC19 (Gene, 33,103,1985),PUC118 (Methods in Enzym
ology, 153, 3, 1987), PUC119 (Methods in Enzymolog
y, 153, 3, 1987), Bluescript II 、λZAPII 〔ストラ
タジーン (Stratagene)社製〕、などが挙げられるが、
その他のものであっても、宿主内で複製保持されるもの
であれば、いずれも用いることができる。また、ｃＤＮ
Ａを組み込むファージベクターとしては、例えば、λｇ
ｔ１０(Huynh,T.V., Young, R.A. and Davis, R.W., D
NA cloning, A Practical Approach, IRL Press, Oxfor
d, 1, 49, 1985) やλｇｔ１１(Proc. Natl. Acad. Sc
i., U.S.A., 80, 1194, 1983)などが、挙げられるが、
その他のものであっても、宿主内で増殖できるものであ
れば良い。

【００４３】プラスミドにｃＤＮＡを組み込む方法とし
ては、例えば、サンブルーク(Sambrook, J.)らの方法(M
olecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory Press, 1.53-1.73, 1989)などが挙
げられる。また、ファージベクターにｃＤＮＡを組み込
む方法としては、例えば、Hyunh, T.V. 等の方法 ( DNA
cloning, A Practical Approach, IRL Press, Oxford,
1, 49, 1985) などが挙げられる。

【００４４】上記のごとくして得られたプラスミドやフ
ァージベクターは、これを適当な宿主、例えば、エシェ
リヒア コリ(Escherichia Coli)、バチルスス ブチリ
ス(Bacillus subtilis) 、サッカロミセス セレビシア
エ (Saccharomyces cerevisiae) 等に導入して、これを
形質転換できる。

【００４５】プラスミドベクターで宿主を形質転換する
方法としては、例えば、モレキュラークローニング (Mo
lecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss,1.74-1.84, 1989)記載のエレクトロポーレーション
法あるいはカルシウムクロライド法などが挙げられる。
また、ファージベクターでは、例えば、増殖させた大腸
菌にインビトロパッケージング法を用いて導入すること
ができる。

【００４６】上記により、得られるｃＤＮＡから目的の
ヒトプロテアソームのサブユニットのｃＤＮＡを選出す
るには、例えば、ラベル化したプローブを用いたコロニ
ーハイブリダイゼーション法、またはプラークハイブリ
ダイゼーション法 (Molecular Cloning, Cold Spring H
arbor Laboratory Press, 1.85-1.104、または2.112-2.
120, 1989)などが挙げられる。

【００４７】上記のハイブリダイゼーションにおけるプ
ローブとして用いるＤＮＡとしては、サブユニットＸお
よびＹとハイブリダイズするＤＮＡであれば、何でも良
く、例えば、サブユニットＸおよびＹのアミノ酸配列に
基づいて化学合成したオリゴヌクレオチドあるいはプロ
テアソームの他のコンポーネントをコードするｃＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡ、化学合成ＤＮＡ、およびこれらの部
分ＤＮＡ等が挙げられる。以上のようにして、ヒトプロ
テアソームのサブユニットＸあるいはＹをコードするＤ
ＮＡが得られる。

【００４８】本発明のヒトプロテアソームサブユニット
ＸあるいはＹのポリペプチドをコードするcＤＮＡを含
むＤＮＡは、上記の方法の他に、ヒト、ラット、マウス
などのゲノムＤＮＡのライブラリーからのクローニング
によっても得ることができる。また、サブユニットＸあ
るいはＹの各ポリペプチドをコードするＤＮＡは、目的
により、そのままあるいは制限酵素で切断して使用する
ことができる。

【００４９】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。

【００５０】実施例 １ ヒトプロテアソームのサブユニットＸ、Ｙの同定 ヒト大腸癌細胞SW620は、１０％血清を含むDME培養液で
培養した。これに、IFN-γ(500U/ml) を添加しない系と
添加した系で３日間培養した後、³⁵-S標識化メチオニン
とシステイン（アマシャム社製）で2 重標識した。細胞
をラバーポリスマンではがし、1mM DTT を含む50mM Tri
s-HCl (pH7.5) 中でソニケーションし、20,000 x g, 4
℃で30分間、遠心し、上清を得た。これを抗プロテアソ
ーム抗体で免疫沈降し、O'Farrell 等による２次元電気
泳動法 ( J. Biol. Chem., 250, 4007-4021, 1975)を行
った。1 次元目は、2.5 から10.5のｐＨ勾配の等電点電
気泳動を行い、２次元目は、12.5％のＳＤＳーポリアク
リルアミド電気泳動を行った。これをエンライトニング
（NEN 社製）で処理し、オートラジオグラフィーを行っ
た。その結果を、図１に示す。図１A は、ＳＷ620 細胞
をIFN-γ無添加の場合、図１B は、ＳＷ620細胞をIFN-
γ添加の場合の２次元電気泳動パターンを示し、図１Ｃ
は、LMP2/KMP7 、およびX,Y の位置を図式化したもので
ある。

【００５１】実施例 ２ （１）ヒトプロテアソームのサブユニットＸ、Ｙの精製 ヒトプロテアソームは、田中等により報告されている方
法 (Tanaka, T., et al., J. Biol. Chem., 261, 15197
-15230, 1986; Tanaka K., et al., J. Biol.Chem., 26
3, 16209-16217)に従って、ヒト腎臓から精製した。次
いで、上記方法によって精製した５０μｇのヒトプロテ
アソームをO'Farrell 等による２次元電気泳動法を用い
て分離した。電気泳動が終わったゲルは、イモビロン−
ＰＶＤＦメンブラン（ミリポア社製）にセミドライエレ
クトロブロッティング装置を用いてトランスファーし
た。蛋白質をブロットした膜フィルターは、蒸留水で洗
浄した後、クマシーブルー染色液（0.2％クマシーブリ
リアントブルーＲ250を含む40％メタノール、１０％酢
酸溶液）で染色後、脱色液（６０％メタノール溶液）に
浸し、振とうしてバックグラウンドを脱色した。このメ
ンブランを蒸留水で洗浄した後、図２に示したＸ、Ｙの
位置のスポットを切り出した。図２に示されるごとく、
ヒトプロテアソームのサブユニットＸ及びＹは、分子量
２２９００（Ｘ分子量），２５３００（Ｙ分子量）、等
電点Ｘ；８．６７，Ｙ；４．６５であることが確認され
た。

【００５２】（２）ブロットされたタンパク質のアミノ
酸配列分析 (2-1) 蛋白質の還元、カルボキシメチル化 上記記載のＰＶＤＦ膜から切り出したＸ、Ｙのスポット
各３５枚を還元用緩衝液（５Ｍグアニジン塩酸, ２M Tr
is-HCl (pH8.5), 1mM EDTA, 2%アセトニトリル）に浸
し、終濃度10 mg/mlでジチオスライトールを加え、窒素
存在下で６０℃で１時間、還元を行った。さらに、モノ
ヨード酢酸を加え、遮光下で２０分間Ｓーカルボキシメ
チル化を行い、メンブランを蒸留水で良く洗浄した。

【００５３】(2-2) リジルエンドペプチダーゼによる切
断 メンブランを、３７℃で３０分間、0.5％ポリビニルピ
ロリドン40、100 mM酢酸溶液で処理を行った。これを蒸
留水で洗浄後、１０％アセトニトリルを含む0.1Ｍ重炭
酸アンモニウム緩衝液に移し、リジルエンドペプチダー
ゼ（Acromobacter Protease I; 和光純薬社製）50 pM
を加え、３７℃で２４時間処理を行った。

【００５４】(2-3) 高速液体クロマトグラフィーによる
分析およびアミノ酸配列の決定 次いで、これをWaters社製635LCシステムを用いて、Ｏ
ＤＳカラム（Waters社製、Bondasphere カラム, 直径2.
1mm 、長さ150 mm、ｃ18、100 オングストローム）に付
加し、切断されたＸ、Ｙのペプチド０.１％トリフルオ
ロ酢酸を含むアセトニトリルの濃度勾配（0-60％）によ
って分離した。ペプチドのアミノ酸配列は、ガスシーク
エンス法で測定し、アプライドバイオシステムズ社プロ
テインシークエンサー４７７A 型分析装置により同定し
た。

【００５５】図３に、ヒトプロテアソームのサブユニッ
トＸをリジルエンドペプチダーゼで切断したフラグメン
トの逆相高速液体クロマトグラフィーの分離パターンと
決定した３個のアミノ酸配列（ＹＳＧＳＴＰ、ＥＲＩＳ
ＶＡＡＡＳＫ、ＴＴＸＬＡＦＫ）を示す。同様にして、
Ｙの１個のフラグメント（ＦＡＶＡＴＬＰＰＡ）のアミ
ノ酸配列を決定した。

【００５６】（３）プローブの調製 Ｘの３個のフラグメント（ＹＳＧＳＴＰ、ＥＲＩＳＶＡ
ＡＡＳＫ、ＴＴＸＬＡＦＫ）およびＹの１個のフラグメ
ント（ＦＡＶＡＴＬＰＰＡ）から、これに対応する相補
的オリゴヌクレオチドをＤＮＡ合成機３８０Ｂ（アプラ
イドバイオシステムズ社製）で合成した。合成したオリ
ゴヌクレオチドの精製は、オリゴヌクレオチドカートリ
ッジ（アプライドバイオシステムズ社製）を使用した。

【００５７】（４）ｃＤＮＡライブラリーの調製 ヒト肝癌細胞HepG2 から、グアニジウムチオシアネイト
法 (Anal. Biochem.,162, 156-159, 1987) によって全
ＲＮＡを分離した。全ＲＮＡをオリゴｄＴラテックスビ
ーズに結合させ、kuribayasi等の方法（Nucleic Acids
Symp. Ser., vol. 19, P61, 1988) によってポリ（Ａ）
＋ＲＮＡを得た。

【００５８】上記の方法によって得られたポリ（Ａ）＋
ＲＮＡからファルマシア社製ｃＤＮＡ合成キットに従っ
て、ｃＤＮＡを合成した。即ち、オリゴｄＴプライマー
を上記ｍＲＮＡのポリＡにアニールさせ、逆転写酵素に
より、１本鎖ＤＮＡを合成し、ＤＮＡポリメラーゼ１に
より、２本鎖ｃＤＮＡを合成した。このｃＤＮＡをKlen
ow酵素で処理し、Blunt-end のｃＤＮＡを調製した。こ
のｃＤＮＡの両端にEcoR I/Not Iアダプターを付加する
ため、Ｔ４ＤＮＡライゲース処理およびポリヌクレオチ
ドキナーゼ処理を行った。次に、過剰のアダプターを除
去するために、セファロースＣＬ−４Ｂを用いて精製
し、これにより、両端にEcoR I制限酵素切断部位をもつ
ｃＤＮＡを得ることができた。

【００５９】得られたｃＤＮＡはクローニングベクター
であるλ ZAPII（ストラタジーン社製）のマルチクロー
ニング部位のEcoR I間にＴ４ＤＮＡライゲースを用い
て、挿入した。λライブラリーは、in vitro packaging
kit (Gigapack II Glod, ストラタジーン社製）を用い
てパッケージングを行い、宿主大腸菌であるE.coli XL1
-Blueに感染させた。

【００６０】（５）クローンの単離 上記のλ ZAPIIを感染させた大腸菌はアンピシリンを１
００μg/mlを含むＬＢプレート上にまいた。このプレー
ト上にナイロンフィルター（アマシャム社製、ハイボン
ドＮ＋）をのせ、水酸化ナトリウムで固定後、ハイブリ
ダイゼーションを行った。プローブは、（３）で得られ
た相補的オリゴヌクレオチドを用い、その５’末端を³²
ＰーＡＴＰで標識化して使用し、サブユニットＸおよび
Ｙのクローンを得た。

【００６１】（６）塩基配列の決定 サブユニットＸおよびＹのｃＤＮＡの塩基配列の決定
は、アプライドバイオシステムズ社製DNAシークエンサ
ー373Aを用い、Ｔ７ターミネーター法により決定した。
決定したＸ及びＹの塩基配列及びこれに対応するアミノ
酸配列を図４及び図５に示す。この結果より、サブユニ
ットＸは２０８アミノ酸残基より構成され、分子量２２
８９７、等電点８．６７と計算された。また、Ｙは２３
９アミノ酸より構成され、分子量２５３１５、等電点
４．６５と計算された。

【００６２】なお、本明細書および図面において、塩基
やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−Ｉ
ＵＢによる略号、あるいは当該分野における慣用略号に
基づくものであり、その例を次に挙げる。また、アミノ
酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなけ
れば、Ｌ−体を示すものとする。

【００６３】 ＤＮＡの略号 デオキシリボ核酸 Ａ アデニン Ｃ シトシン Ｇ グアニン Ｔ チミン アミノ酸の略号 アミノ酸 Ａｌａ （Ａ） アラニン Ａｒｇ （Ｒ） アルギニン Ａｓｎ （Ｎ） アスパラギン Ａｓｐ （Ｄ） アスパラギン酸 Ｃｙｓ （Ｃ） システイン Ｇｌｎ （Ｑ） グルタミン Ｇｌｕ （Ｅ） グルタミン酸 Ｇｌｙ （Ｇ） グリシン Ｈｉｓ （Ｈ） ヒスチジン Ｉｌｅ （Ｉ） イシロイシン Ｌｅｕ （Ｌ） ロイシン Ｌｙｓ （Ｋ） リジン Ｍｅｔ （Ｍ） メチオニン Ｐｈｅ （Ｆ） フェニルアラニン Ｐｒｏ （Ｐ） プロリン Ｓｅｒ （Ｓ） セリン Ｔｈｒ （Ｔ） スレオニン Ｔｒｐ （Ｗ） トリプトファン Ｔｙｒ （Ｙ） チロシン Ｖａｌ （Ｖ） バリン

【００６４】

【発明の効果】本発明は、細胞のヒトプロテアソームの
サブユニットＸおよびＹのポリペプチド、および該サブ
ユニットの各ポリペプチドをコードする遺伝子に係るも
のであり、本発明によれば、次のような効果が奏され
る。 （１）ヒトプロテアソームの酵素的機能の解明に役立
つ。 （２）免疫疾患をはじめとする各種病態の診断および治
療法を確立するために有用な技術を提供することができ
る。

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Leu His Gly Thr Thr Thr Leu Ala Phe Lys Phe Arg His Gly Val 5 10 15 Ile Val Ala Ala Asp Ser Arg Ala Thr Ala Gly Ala Tyr Ile Ala Ser 20 25 30 Gln Thr Val Lys Lys Val Ile Glu Ile Asn Pro Tyr Leu Leu Gly Thr 35 40 45 Met Ala Gly Gly Ala Ala Asp Cys Ser Phe Trp Glu Arg Leu Leu Ala 50 55 60 Arg Gln Cys Arg Ile Tyr Glu Leu Arg Asn Lys Glu Arg Ile Ser Val 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ser Lys Leu Leu Ala Asn Met Val Tyr Gln Tyr Lys Gly 85 90 95 Met Gly Leu Ser Met Gly Thr Met Ile Cys Gly Trp Asp Lys Arg Gly 100 105 110 Pro Gly Leu Tyr Tyr Val Asp Ser Glu Gly Asn Arg Ile Ser Gly Ala 115 120 125 Thr Phe Ser Val Gly Ser Gly Ser Val Tyr Ala Tyr Gly Val Met Asp 130 135 140 Arg Gly Tyr Ser Tyr Asp Leu Glu Val Glu Gln Ala Tyr Asp Leu Ala 145 150 155 160 Arg Arg Ala Ile Tyr Gln Ala Thr Tyr Arg Asp Ala Tyr Ser Gly Gly 165 170 175 Ala Val Asn Leu Tyr His Val Arg Glu Asp Gly Trp Ile Arg Val Ser 180 185 190 Ser Asp Asn Val Ala Asp Leu His Glu Lys Tyr Ser Gly Ser Thr Pro 195 200 205 配列番号：２ 配列の長さ：６２４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ATGCTTCATG GAACAACCAC CCTGGCCTTC AAGTTCCGCC ATGGAGTCAT AGTTGCAGCT GACTCCAGGG CTACAGCGGG TGCTTACATT GCCTCCCAGA CGGTGAAGAA GGTGATAGAG ATCAACCCAT ACCTGCTAGG CACCATGGCT GGGGGCGCAG CGGATTGCAG CTTCTGGGAA CGGCTGTTGG CTCGGCAATG TCGAATCTAT GAGCTTCGAA ATAAGGAACG CATCTCTGTA GCAGCTGCCT CCAAACTGCT TGCCAACATG GTGTATCAGT ACAAAGGCAT GGGGCTGTCC ATGGGCACCA TGATCTGTGG CTGGGATAAG AGAGGCCCTG GCCTCTACTA CGTGGACAGT GAAGGGAACC GGATTTCAGG GGCCACCTTC TCTGTAGGTT CTGGCTCTGT GTATGCATAT GGGGTCATGG ATCGGGGCTA TTCCTATGAC CTGGAAGTGG AGCAGGCCTA TGATCTGGCC CGTCGAGCCA TCTACCAAGC CACCTACAGA GATGCCTACT CAGGAGGTGC AGTCAACCTC TACCACGTGC GGGAGGATGG CTGGATCCGA GTCTCCAGTG ACAATGTGGC TGATCTACAT GAGAAGTATA GTGGCTCTAC CCCC 配列番号：３ 配列の長さ：２３９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Ala Ala Thr Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Gly Pro Ala Pro Ala 5 10 15 Trp Gly Pro Glu Arg Phe Thr Pro Asp Trp Glu Ser Arg Glu Val Ser 20 25 30 Thr Gly Thr Thr Ile Met Ala Val Gln Phe Asp Gly Gly Val Val Leu 35 40 45 Gly Ala Asp Ser Arg Thr Thr Thr Gly Ser Tyr Ile Ala Asn Arg Val 50 55 60 Thr Asp Lys Leu Thr Pro Ile His Asp Arg Ile Phe Cys Cys Arg Ser 65 70 75 80 Gly Ser Ala Ala Asp Thr Gln Ala Val Ala Asp Ala Val Thr Tyr Gln 85 90 95 Leu Gly Phe His Ser Ile Glu Leu Asn Glu Pro Pro Leu Val His Thr 100 105 110 Ala Ala Ser Leu Phe Lys Glu Met Cys Tyr Arg Tyr Arg Glu Asp Leu 115 120 125 Met Ala Gly Ile Ile Ile Ala Gly Trp Asp Pro Gln Glu Gly Gly Gln 130 135 140 Gly Tyr Ser Val Pro Met Gly Gly Met Met Val Arg Gln Ser Phe Ala 145 150 155 160 Ile Gly Gly Ser Gly Ser Ser Tyr Ile Tyr Gly Tyr Val Asp Ala Thr 165 170 175 Tyr Arg Glu Gly Met Thr Lys Glu Glu Cys Leu Gln Glu Thr Ala Asn 180 185 190 Ala Leu Ala Leu Ala Met Glu Arg Asp Gly Ser Ser Gly Gly Val Ile 195 200 205 Arg Leu Ala Ala Ile Ala Glu Ser Gly Val Glu Arg Gln Val Leu Leu 210 215 220 Gly Asp Gln Ile Pro Lys Phe Ala Val Ala Thr Leu Pro Pro Ala 225 230 235 配列番号：４ 配列の長さ：７１７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ATGGCGGCTA CCTTACTAGC TGCTCGGGGA GCCGGGCCAG CACCGGCTTG GGGGCCGGAG GCATTCACTC CAGACTGGGA AAGCCGAGAA GTTTCCACTG GGACCACTAT CATGGCCGTG CAGTTTGACG GGGGCGTGGT TCTGGGGGCG GACTCCAGAA CAACCACTGG GTCCTACATC GCCAATCGAG TGACTGACAA GCTGACACCT ATTCACGACC GCATTTTCTG CTGTCGCTCA GGCTCAGCTG CTGATACCCA GGCAGTAGCT GATGCTGTCA CCTACCAGCT CGGTTTCCAC AGCATTGAAC TGAATGAGCC TCCACTGGTC CACACAGCAG CCAGCCTCTT TAAGGAGATG TGTTACCGAT ACCGGGAAGA CCTGATGGCG GGAATCATCA TCGCAGGCTG GGACCCTCAA GAAGGAGGGC AGGGGTACTC AGTGCCTATG GGGGGTATGA TGGTAAGGCA GTCCTTTGCC ATTGGAGGCT CCGGGAGCTC CTACATCTAT GGCTATGTTG ATGCTACCTA CCGGGAAGGC ATGACCAAGG AAGAGTGTCT GCAATTCACT GCCAATGCTC TCGCTTTGGC CATGGAGCGG GATGGCTCCA GTGGAGGAGT GATCCGCCTG GCAGCCATTG CAGAGTCAGG GGTAGAGCGG CAAGTACTTT TGGGAGACCA GATACCCAAA TTCGCCGTTG CCACTTTACC ACCCGCC

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で得られたヒト大腸癌細胞SW620 にお
けるプロテアソームの２次元電気泳動パターンを示す。
図１A は、SW620 細胞をIFN-γ無添加の場合、図１B
は、SW620 細胞をIFN-γ添加の場合、の２次元電気泳動
パターンを示し、図１Ｃは、LMP2/LMP7 およびX,Y の位
置を図式化したものである。

【図２】実施例２（１）で得られたヒト腎臓から得られ
たプロテアソームサブユニットの２次元電気泳動パター
ンを示す。横軸は等電点、縦軸は分子量を示す。Ｘ、Ｙ
の位置を丸印で、LMP2およびLMP7の位置は矢印で示す。
(IFN−γ↑）はインターフェロン−γの添加により発現
量の増大するサブユニットを、(IFN−γ↓）はインター
フェロン−γの添加により発現量の減少するサブユニッ
トを示す。

【図３】実施例２[(1),(2)] で得られたヒトプロテアソ
ームのサブユニットＸをリジルエンドペプチダーゼで切
断したフラグメントの逆相高速液体クロマトグラフィー
の分離パターンと決定したアミノ酸配列を示す。

【図４】実施例２[(6)] で得られたヒトプロテアソーム
のサブユニットＸの決定された塩基配列と、塩基配列に
対応するアミノ酸配列（Ｘの１次構造）を示す。図４中
の下線のアミノ酸配列は、実施例２の（２）(2-3) で得
られたＸのアミノ酸配列と一致する部分を示す。

【図５】実施例２[(6)] で得られたヒトプロテアソーム
のサブユニットＹの決定された塩基配列と、塩基配列に
対応するアミノ酸配列（Ｙの１次構造）を示す。図５中
の下線のアミノ酸配列は、実施例２の（２）(2-3) で得
られたＹのアミノ酸配列と一致する部分を示す。

【手続補正書】

【提出日】平成６年３月３１日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項６

【補正方法】変更

【補正内容】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 38/46 ＡＢＡ

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 分子中に以下のアミノ酸配列の全部また
   は一部を含有することを特徴とするヒトプロテアソーム
   サブユニットＸのポリペプチド。 MLHGTTTLAFKFRHGVIVAADSRATAGAYIASQTVKKVIEINPYLLGTMAGGAADCSFWE RLLARQCRIYELRNKERISVAAASKLLANMVYQYKGMGLSMGTMICGWDKRGPGLYYVDS EGNRISGATFSVGSGSVYAYGVMDRGYSYDLEVEQAYDLARRAIYQATYRDAYSGGAVNL YHVREDGWIRVSSDNVADLHEKYSGSTP
2. 【請求項２】 分子中に以下の塩基配列の全部または一
   部を含有することを特徴とする請求項１記載のヒトプロ
   テアソームサブユニットＸのポリペプチドをコードする
   遺伝子。 ATGCTTCATG GAACAACCAC CCTGGCCTTC AAGTTCCGCC ATGGAGTCAT AGTTGCAGCT GACTCCAGGG CTACAGCGGG TGCTTACATT GCCTCCCAGA CGGTGAAGAA GGTGATAGAG ATCAACCCAT ACCTGCTAGG CACCATGGCT GGGGGCGCAG CGGATTGCAG CTTCTGGGAA CGGCTGTTGG CTCGGCAATG TCGAATCTAT GAGCTTCGAA ATAAGGAACG CATCTCTGTA GCAGCTGCCT CCAAACTGCT TGCCAACATG GTGTATCAGT ACAAAGGCAT GGGGCTGTCC ATGGGCACCA TGATCTGTGG CTGGGATAAG AGAGGCCCTG GCCTCTACTA CGTGGACAGT GAAGGGAACC GGATTTCAGG GGCCACCTTC TCTGTAGGTT CTGGCTCTGT GTATGCATAT GGGGTCATGG ATCGGGGCTA TTCCTATGAC CTGGAAGTGG AGCAGGCCTA TGATCTGGCC CGTCGAGCCA TCTACCAAGC CACCTACAGA GATGCCTACT CAGGAGGTGC AGTCAACCTC TACCACGTGC GGGAGGATGG CTGGATCCGA GTCTCCAGTG ACAATGTGGC TGATCTACAT GAGAAGTATA GTGGCTCTAC CCCC
3. 【請求項３】 分子中に以下のアミノ酸配列の全部また
   は一部を含有することを特徴とするヒトプロテアソーム
   サブユニットＹのポリペプチド。 MAATLLAARGAGPAPAWGPERFTPDWESREVSTGTTIMAVQFDGGVVLGADSRTTTGSYI ANRVTDKLTPIHDRIFCCRSGSAADTQAVADAVTYQLGFHSIELNEPPLVHTAASLFKEM CYRYREDLMAGIIIAGWDPQEGGQGYSVPMGGMMVRQSFAIGGSGSSYIYGYVDATYREG MTKEECLQETANALALAMERDGSSGGVIRLAAIAESGVERQVLLGDQIPKFAVATLPPA
4. 【請求項４】 分子中に以下の塩基配列の全部または一
   部を含有することを特徴とする請求項３記載のヒトプロ
   テアソームのサブユニットＹのポリペプチドをコードす
   る遺伝子。 ATGGCGGCTA CCTTACTAGC TGCTCGGGGA GCCGGGCCAG CACCGGCTTG GGGGCCGGAG GCATTCACTC CAGACTGGGA AAGCCGAGAA GTTTCCACTG GGACCACTAT CATGGCCGTG CAGTTTGACG GGGGCGTGGT TCTGGGGGCG GACTCCAGAA CAACCACTGG GTCCTACATC GCCAATCGAG TGACTGACAA GCTGACACCT ATTCACGACC GCATTTTCTG CTGTCGCTCA GGCTCAGCTG CTGATACCCA GGCAGTAGCT GATGCTGTCA CCTACCAGCT CGGTTTCCAC AGCATTGAAC TGAATGAGCC TCCACTGGTC CACACAGCAG CCAGCCTCTT TAAGGAGATG TGTTACCGAT ACCGGGAAGA CCTGATGGCG GGAATCATCA TCGCAGGCTG GGACCCTCAA GAAGGAGGGC AGGGGTACTC AGTGCCTATG GGGGGTATGA TGGTAAGGCA GTCCTTTGCC ATTGGAGGCT CCGGGAGCTC CTACATCTAT GGCTATGTTG ATGCTACCTA CCGGGAAGGC ATGACCAAGG AAGAGTGTCT GCAATTCACT GCCAATGCTC TCGCTTTGGC CATGGAGCGG GATGGCTCCA GTGGAGGAGT GATCCGCCTG GCAGCCATTG CAGAGTCAGG GGTAGAGCGG CAAGTACTTT TGGGAGACCA GATACCCAAA TTCGCCGTTG CCACTTTACC ACCCGCC
5. 【請求項５】 アミノ酸配列が、主たる活性に変化を与
   えることなく変異せしめた相同異性体である請求項１記
   載のヒトプロテアソームサブユニットＸのポリペプチ
   ド。
6. 【請求項６】 アミノ酸配列が、主たる活性に変化を与
   えることなく変異せしめた相同異性体である請求項２記
   載のヒトプロテアソームサブユニットＹのポリペプチ
   ド。
7. 【請求項７】 塩基配列が、主たる活性に変化を与える
   ことなく変異せしめた相同異性体に相当する塩基配列、
   または遺伝暗号の縮重に基づく置換によって変換された
   塩基配列である請求項２記載のヒトプロテアソームサブ
   ユニットＸのポリペプチドをコードする遺伝子。
8. 【請求項８】 塩基配列が、主たる活性に変化を与える
   ことなく変異せしめた相同異性体に相当する塩基配列、
   または遺伝暗号の縮重に基づく置換によって変換された
   塩基配列である請求項４記載のヒトプロテアソームサブ
   ユニットＹのポリペプチドをコードする遺伝子。