JPH07246235A

JPH07246235A - 骨形成用移植体

Info

Publication number: JPH07246235A
Application number: JP6065661A
Authority: JP
Inventors: Retsu Ishikawa; 烈石川; Atsuhiro Kinoshita; 淳博木下; Shigeru Oda; 茂小田
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-03-09
Filing date: 1994-03-09
Publication date: 1995-09-26
Anticipated expiration: 2018-07-07
Also published as: JP3424049B2

Abstract

(57)【要約】【目的】骨形成用移植体を提供する。【構成】骨誘導因子（ＢＭＰ）と二相性リン酸カルシ
ウム（ＢＣＰ）とを含んで構成される。【効果】生体内で速やかに骨形成を誘導し、新生骨に
徐々に置換し、移植体の残存を完全に無くするかあるい
は最小限に抑え、良好な骨組織を形成することができ、
抗原性等の点で安全で、適応時の操作性及び整形性にも
優れている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、骨形成用移植体に関す
る。特には、二相性リン酸カルシウムからなる担体に骨
誘導因子を担持してなる骨形成用移植体に関する。

【０００２】

【従来の技術】骨誘導因子（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇ
ｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ：ＢＭＰ）は、皮下組織
又は筋組織内の未分化間葉系細胞に作用して、これを軟
骨芽細胞又は骨芽細胞に分化させ、軟骨又は骨を形成さ
せる活性タンパク質である。ＢＭＰは、ウシ脱灰骨基質
中に存在する異所性骨誘導活性を示す物質として発見さ
れたが、純粋に単離されず、具体的な構造は未解明のま
まであった。しかし、遺伝子工学の技術により、ヒトＢ
ＭＰをコードする遺伝子がクローニングされ、アミノ酸
配列が明らかになった。また、ヒトＢＭＰは、アミノ酸
配列が相同性を有する複数の近縁タンパク質からなる一
群のファミリーを構成することも判明し、多数の種類の
組換えヒト骨誘導因子（ｒｈＢＭＰ）が創製されてきた
〔ＳｃｉｅｎｃｅＶｏｌ．２４２，ｐｐ．１５２８−
１５３４（１９８８）；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡＶｏｌ．８７，ｐｐ．２２２０−
２２２４（１９９０）；ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＧｒ
ｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．
１，ｐｐ．２６７−２８０（１９８９）；特表平２−５
００２４１号、特表平３−５０３６４９号、特表平３−
５０５０９８号、ＷＯ９１／１８０９８、ＷＯ９２／０
５１９９、ＷＯ９３／０９２２９の各公報〕。また、形
質転換体による生産も行われている。

【０００３】前記のＢＭＰを利用して、骨又は軟骨の損
傷、欠損あるいは形成不全等の治療を行う方法は、その
ＢＭＰの構造が未解明であった頃から種々提案されてお
り、組換えヒトＢＭＰの生産に伴って更に盛んになって
いる。ＢＭＰを利用する際には、ＢＭＰを単独で局所に
埋植して骨形成を誘導させることが極めて困難であるの
で、一般的には、ＢＭＰを担体に担持させた形で局所に
埋植する。これは、ＢＭＰによる局所での骨誘導には数
日ないし数週間が必要であり、少なくともその間にＢＭ
Ｐを拡散させずにその局所に留めることが主要な目的で
ある。このように、ＢＭＰ用担体はＢＭＰと共に生体内
に埋植されるので、ＢＭＰ活性を損なわずに、低毒性、
低発癌性及び低抗原性等の特性を有することが要求さ
れ、更に入手容易性や、場合により生分解性を有するこ
とも望まれる。既に提案されている技術としては、例え
ば、セラミックス材料支持体にＢＭＰとコラーゲン担体
とを含浸させた移植体（特開昭６０−２５３４５５号公
報）や、ｒｈＢＭＰと多孔性生体分解性ポリマーと自家
血とからなる組成物（アメリカ特許第５，１７１，５７
９号明細書）等がある。しかし，これらの移植体は抗原
性等の安全性、手術時の操作性、整形性等の点で更に改
善が望まれるものであった。

【０００４】一方、歯や骨の欠損部分を補填する無機焼
結体として、二相性リン酸カルシウム（Ｂｉｐｈａｓｉ
ｃＣａｌｃｉｕｍＰｈｏｓｐｈａｔｅ：ＢＣＰ）を
用いることが知られていた〔特開平３−９４７６１号公
報；歯科ジャーナル，３６（２）：１６７−１７７，１
９９２〕。ＢＣＰは、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）と
β−トリカルシウムホスフェート（β−ＴＣＰ）との焼
結体である。その結晶構造はＸ線解析パターンによって
ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）相とβ−トリカルシウム
ホスフェート（β−ＴＣＰ）相との混合体であることも
確認されており、更に、ヒドロキシアパタイトとβ−ト
リカルシウムホスフェートとの混合比を調節して種々の
ＢＣＰを調製することができる。前記の特開平３−９４
７６１号公報は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）とβ−
トリカルシウムホスフェート（β−ＴＣＰ）との重量比
が２：８〜８：２で、両者の合計が９０重量％以上であ
る顆粒状焼結体・ＢＣＰが、充分な生体親和性と、骨と
の活発な置換作用を有していることを記載している。し
かし、ＢＣＰ補填補綴材を用いると骨形成の立ち上がり
がかなり遅く、初期段階ではＢＣＰ補填補綴材を用いて
いないコントロール試験よりも骨形成量が逆に少なくな
る（前記の歯科ジャーナル）。従って、充分な骨形成を
得るには長期間を必要とするという欠点があった。な
お、このＢＣＰをＢＭＰの担体として用いることは従来
全く知られていなかった。むしろ、ＢＣＰの構成成分で
あるヒドロキシアパタイトにＢＭＰを担持させても、Ｂ
ＭＰが急速に拡散して骨誘導が生じないことが報告され
ていた（Ｔａｋａｏｋａ，ｅｔａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｏｒ
ｔｈｏｐ．２３４：２５０−２５４，１９８８）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は、ＢＭＰ用
担体として求められる前記の特性を有し、しかも適応時
の操作性や整形性に優れた担体に関する研究を行ったと
ころ、従来はＢＭＰ用担体として使用されたことのない
ＢＣＰが極めて優れた担体であると共に、ＢＣＰ上にＢ
ＭＰを担持してなる骨形成用移植体は生体内で速やかに
骨形成を誘導することができることを見出した。この点
は、ヒドロキシアパタイトとＢＭＰとの組み合わせでは
骨誘導が生じないとする従来の知見から判断すると、驚
くべきことである。従って、本発明の目的は、生体内で
速やかに骨形成を誘導し、しかも新生骨に徐々に置換
し、移植体の残存が無いか或は最小限に抑えられた、良
好な骨組織を形成し得る移植体であって、抗原性等の点
で安全で、しかも適応時の操作性、整形性に優れた骨形
成用移植体を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明に
よる、骨誘導因子（ＢＭＰ）と二相性リン酸カルシウム
（ＢＣＰ）とを含むことを特徴とする、骨形成用移植体
によって達成することができる。

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
移植体は、主に生体内で骨（軟骨を含む）を形成すべき
部位に移植して使用する。本発明の移植体を生体内に移
植すると、埋植した局所でＢＭＰが作用して骨形成を誘
発する。ＢＣＰは、このＢＭＰを局所に留め、望ましい
形態の骨を形成させるデリバリー・システムの役割を果
たしながら、それ自体も徐々に生体内で吸収を受け、新
生骨に置換される。ＢＣＰは、ヒドロキシアパタイト相
に由来する骨伝導能とβ−トリカルシウムホスフェート
相に由来する生体内吸収性を併せもち、ＢＭＰに骨形成
の場を与え、骨誘導能を有効に発現させると共に、徐々
に新生骨と置換されることにより、その後の残存する移
植体に起因する感染症等の影響を受けにくい生体由来の
既存の骨と同等の良好な骨組織を形成させる。また、Ｂ
ＣＰは、それ自体免疫反応を生じない安全性の高い担体
であると同時に、ＢＭＰの担体としてコラーゲン等と組
み合わせなくても骨形成を誘導することができ、安全性
の上で有利である。更に、ＢＣＰはその多孔性の性状に
より、ＢＭＰの担持性が良好であると共に、ＢＭＰにそ
の骨形成に好適な微小環境を付与する点で有利である。
また、本発明の移植体は手術時の調製が容易であり、操
作性及び整形性にも優れている。

【０００８】本発明で使用することのできる骨誘導因子
（ＢＭＰ）は、未分化の間葉系細胞に作用して、これを
軟骨細胞や骨芽細胞へ分化させ、軟骨又は骨を形成させ
る活性を有するタンパク質であれば特に限定されず、そ
の調製方法も限定されない。しかし、免疫性等の臨床上
の安全性及び品質の安定した材料を大量に入手すること
ができる点で遺伝子組換え技術により製造されたヒトＢ
ＭＰが好ましい。すなわち、ヒト骨誘導因子をコードす
る塩基配列を含む組換えＤＮＡを含有する形質転換体
（細胞又は微生物）を培養し、それら形質転換体によっ
て産生された組換えヒト骨誘導因子を単離、精製して調
製した組換えヒト骨誘導因子（ｒｈＢＭＰ）である。こ
れらのヒト骨誘導因子（ｒｈＢＭＰ）としては、例え
ば、ｒｈＢＭＰ−２、ｒｈＢＭＰ−３、ｒｈＢＭＰ−４
（ｒｈＢＭＰ−２Ｂともいう）、ｒｈＢＭＰ−５、ｒｈ
ＢＭＰ−６、ｒｈＢＭＰ−７、ｒｈＢＭＰ−８、ｒｈＢ
ＭＰのヘテロダイマー又はこれらの改変体や一部欠損体
を挙げることができる。これらのタンパク質を単独で又
は２種以上の混合物として用いることができる。

【０００９】これらのｒｈＢＭＰは、哺乳動物細胞（例
えば、ＣＨＯ細胞）、微生物（例えば、大腸菌）又は酵
母細胞等で発現したものであることができる。既に大量
生産法及び精製法が確立しているｒｈＢＭＰとしてはｒ
ｈＢＭＰ−２があるが、その他のｒｈＢＭＰを同様に製
造し、精製して用いることができる〔Ｐｒｏｇｒｅｓｓ
ｉｎＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｓｅａｒｃ
ｈ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．２６７−２８０（１９８
９）〕。既に知られている精製ｒｈＢＭＰ−２は、Ｎ末
端アミノ酸配列が異なる複数の単量体からなる成熟ペプ
チドであって、分子量約３０，０００の二量体タンパク
質である。それぞれの単量体は、Ａｓｎ⁵⁶残基にハイ・
マンノース型の糖鎖を有している〔Ａｂｓｔｒａｃｔ
ＳｉｘｔｈＩｎｔｅｒｒａｃｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓ
ｉｕｍｏｆｔｈｅＰｒｏｔｅｉｎＳｏｃｉｅｔ
ｙ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９２）〕。

【００１０】本発明で使用することのできる二相性リン
酸カルシウム（ＢＣＰ）も特に限定されるものではない
が、ヒドロキシアパタイトとβ−トリカルシウムホスフ
ェートとを合計で９０重量％以上含むＢＣＰは生体親和
性が良好であり好ましい。ヒドロキシアパタイトは、本
来的に良好な骨伝導能を有しているが、生体内では吸収
されにくい。一方、β−トリカルシウムホスフェート
は、骨伝導能は低いが生体内で吸収される。従って、ヒ
ドロキシアパタイトとβ−トリカルシウムホスフェート
との構成比を変化させることにより、前記のとおり、Ｂ
ＣＰの骨伝導性と生体内吸収性とを適切に調節すること
ができる。

【００１１】本発明の移植体で用いるＢＣＰは、ヒドロ
キシアパタイトの骨伝導性を維持しつつ、しかもＢＭＰ
によって誘導される新生骨と良好に置換する程度の吸収
性を有していることが好ましい。こうした好ましい特性
を有するＢＣＰでは、ヒドロキシアパタイト／β−トリ
カルシウムホスフェート比（重量）が、５０／５０ない
し１０／９０の範囲内にある。更に、ヒドロキシアパタ
イト／β−トリカルシウムホスフェート重量比が約３０
／７０以下になると移植されたＢＣＰの大部分が生体内
で吸収され、約２０／８０以下では完全に生体内で吸収
されるので特に好ましい。前記の重量比が５０／５０を
超えると新生骨内部のヒドロキシアパタイトの残留量が
増加し、リモデリング等による骨吸収や感染症の原因と
なり、一方、１０／９０未満になるとヒドロキシアパタ
イトの骨伝導能が不十分となるので好ましくない。

【００１２】ＢＣＰは、公知の方法で調製することがで
きる（特公昭６０−２５３８３号、特公昭６０−５０７
４４号、特開平３−９４７６１号、特開平３−１３７０
７９号、特開平４−２３５５号、特開平５−１１７０５
６号又は特開平５−１６１７０７号各公報）。例えば、
ヒドロキシアパタイトとβ−トリカルシウムホスフェー
トとを約１１００〜１２００℃の焼成段階で混合させて
調製する。

【００１３】前記の方法により、ＢＣＰは、通常は多孔
質顆粒体として調製される。この多孔質顆粒状ＢＣＰを
そのまま本発明移植体の担体として用いることができ
る。顆粒状担体の大きさは特に制限されないが、移植体
を調製及び移植する際の操作性や適応性の点から、好ま
しくは約５ｍｍ以下、より好ましくは１００〜１０００
μｍ、特に好ましくは４００〜６００μｍである。ま
た、多孔質顆粒状担体の比表面積も特に制限されない
が、ＢＭＰの担持効率や骨形成の場を提供する点から、
好ましくは約０．３ｍ² ／ｇ以上、より好ましくは０．
５〜１．０ｍ² ／ｇ、特に好ましくは０．７〜０．８ｍ
² ／ｇである。

【００１４】ＢＣＰを、所定の形状を有する多孔質ブロ
ック状成形体として得ることもでき、この多孔質ブロッ
ク状成形体を本発明移植体の担体として用いることがで
きる。多孔質ブロック状成形体は、公知の方法で、前記
のヒドロキシアパタイトとβ−トリカルシウムホスフェ
ートとから焼成により直接成形するか、又は顆粒状ＢＣ
Ｐを再焼成して調製することができる。この多孔質ブロ
ック状成形体は、調製時に形状を調整するだけでなく、
成形後（特に、移植時）にも簡単に所望の形状に変える
ことができる。多孔質ブロック状成形体の大きさや形状
は移植部位や移植目的に応じて適宜調整すればよい。ま
た、比表面積も特に限定されないが、前記の多孔質顆粒
体と同様の理由で、前記と同様の範囲であるのが好まし
い。

【００１５】前記のＢＣＰ担体にＢＭＰを担持させて、
本発明の移植体を調製する方法は特に制限されるもので
はなく、例えば、適当な液体中のＢＭＰ溶液（又は懸濁
液）をＢＣＰ担体に浸漬、含浸、噴霧、塗布又は滴下等
の方法により添加し、続いて、乾燥（好ましくは減圧又
は凍結乾燥）して容易に所望の移植体を得ることができ
る。好適には減圧下に含浸させた後に凍結乾燥する。い
ずれの場合も、ＢＭＰの活性を失わせることなく、ＢＣ
Ｐの多孔質部分の全体にＢＭＰをほぼ均一に分散させる
ことのできる方法が好ましい。こうして、多孔質顆粒状
担体からは多孔質顆粒状移植体を得ることができ、多孔
質ブロック状担体からは多孔質ブロック状移植体を得る
ことができる。更に、前記の多孔質顆粒状移植体の一群
を、生体内で数時間若しくは数日以内に迅速に分解する
生体適合性の適当な容器、例えば、カプセル（例えば、
ゼラチンカプセル、ソフトカプセル等）、袋状のシート
（例えばゼラチン膜）に収納して、あるいは同様の生体
分解性シート等に包んで、手術時の操作性に優れるパッ
ケージ移植体とすることもできる。

【００１６】更に、本発明の移植体は、前記の多孔質顆
粒状ＢＣＰにＢＭＰを付与する前、後又は同時に増粘剤
を加え、所望の形状に成形した固体、半固体、粘土状、
ペースト状、又は高粘性流動体の凝集体であることもで
きる。増粘剤としては、生体適合性、安全性、及び好ま
しくは生体分解性を有し、顆粒状ＢＣＰと共に所望の凝
集体を成形することのできるものである限り特に制限は
ないが、例えば、セルロース系高分子化合物、例えばヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルセルロース又はカルボキシメチルセルロース；ポリ乳
酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＬＧ）、又はこれ
らのコポリマー（ＰＬＧＡ）；ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポ
リグリコール酸（ＰＬＧ）又はこれらのコポリマー（Ｐ
ＬＧＡ）とポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とのコポ
リマー；ヒアルロン酸；アルギン酸；ゼラチン；フィブ
リン糊；又はコラーゲン等を挙げることができる。

【００１７】前記の多孔質顆粒状担体に増粘剤を加える
方法も特に制限されるものではなく、例えば、前記のＢ
ＭＰの担持方法と同様に、適当な液体中の増粘剤溶液
（又は懸濁液）を担体に浸漬、含浸、噴霧、塗布又は滴
下等の方法により添加し、続いて、乾燥（好ましくは減
圧又は凍結乾燥）すればよい。好適には減圧下で含浸さ
せた後に凍結乾燥する。いずれの場合も、ＢＭＰの活性
を失わせることなく、ＢＣＰの多孔質部分の全体に増粘
剤をほぼ均一に分散させることのできる方法が好まし
い。こうして、本発明による凝集体状移植体を得ること
ができる。

【００１８】移植体のＢＭＰの担持量は、骨形成を引き
起こすのに必要最小限のＢＭＰ濃度（最小骨形成発現濃
度）より多ければよい。ＢＭＰ濃度の増加にともなって
骨形成量は増加するが、ある値以上では骨形成量はほぼ
一定となる。一般にこの骨形成量は、移植体の大きさ
（又は顆粒状移植体群の占める体積）にほぼ一致する。
すなわち、過度に濃度を増加しても移植体の大きさ以上
の骨は形成されない。

【００１９】適当な濃度のＢＭＰを含んだ移植体を埋植
して形成される骨の大きさと形状は、移植体の大きさ及
び形状に原則として依存する。従って、具体的な混合比
やＢＭＰ濃度は、ＢＣＰの種類、形状、多孔性の程度、
移植体の適用部位、好ましい骨形成速度等に応じて適宜
決定することができる。例えば、顆粒状ＢＣＰ担体とｒ
ｈＢＭＰ−２を用いて本発明移植体を調製する場合に
は、ｒｈＢＭＰ−２を１μｇ／形成すべき骨又は軟骨の
容量１ｍｌ以上、好ましくは５〜１、０００μｇ／同１
ｍｌ、より好ましくは１０〜３００μｇ／同１ｍｌの量
で担持させるのが好ましい。

【００２０】本発明の移植体は、前記以外の成分を含有
することができる。それらの所望成分として、具体的に
は、安定化剤、保存剤、可溶化剤、ｐＨ調整剤又は増粘
剤等を挙げることができる。また、骨又は軟骨形成に有
用な追加成分、例えば、リン酸カルシウム、ヒドロキシ
アパタイト等のミネラル成分、骨若しくは軟骨形成補助
因子等の作用促進成分、フィブロネクチン、オステオネ
クチン、又は非抗原性のＩＢＭ（不溶性骨マトリック
ス）等を含むこともできる。これらの所望成分は、本発
明移植体を製造する好適な段階で、適宜に好適な方法に
より添加することができる。

【００２１】本発明の移植体は、使用時に調製されても
よく、あるいは調製後使用時まで適切な条件下で保存さ
れてもよい。本発明の移植体は、各種の骨又は軟骨の欠
損を修復するために、当該分野に知られた方法で、患部
に移植することができる。すなわち、従来知られている
移植体と同様に、生体に適用することができ、その目
的、用途、適応部位、患者の状態等に応じて、当業者の
常法に従って適宜適用することができる。

【００２２】本発明の移植体は、前記のように形成され
る新生骨の形状を実質的に規定する。すなわち、その移
植体の形状に対応して骨形成が生じる。具体的には、本
発明移植体が埋植された部位において、移植体周囲に集
まったマクロファージによりＢＣＰが徐々に貪食吸収さ
れ、ＢＭＰにより誘導された新生骨に置換される。従っ
て、骨形成を期待する形状に沿って、本発明の移植体を
成形することが望ましい。また、本発明の移植体は、移
植手術後の取り出し手術の必要がない。

【００２３】本発明による前記の各種の移植体は、それ
を単独で用いるだけでなく、それらを任意に組み合わせ
て用いてもよい。また、本発明移植体と別の公知移植体
とを組み合わせて用いてもよい。例えば、人工インプラ
ント材料の周囲に、本発明による顆粒状移植体及び／又
はブロック状移植体を付着させて移植することができ
る。特に歯科領域の適用においては、本発明による顆粒
状移植体とＧＴＲ法の併用が効果的である。更に、人工
歯根を埋植する際に、骨穿孔部との接触部に本発明移植
体を付着させることも有効である。本発明移植体の局所
への固定、形状の維持あるいは強度が十分でない場合に
は、他の公知の補強材を併用することもできる。補強材
は、例えば、移植体を固定するための生体適合性の膜、
例えばコラーゲン膜やＧＴＲ法に用いるゴアテックス膜
又はポリ乳酸膜等、あるいは本発明移植体と生体内組織
（特に骨）との固定具、例えば金属プレート、骨結合用
ピン又は固定釘等であり、これらの補強材は、必要があ
れば、骨形成後に、外科的に取り除くこともできる。ま
た、他の公知の移植体と併用して用いてもよい。

【００２４】

【実施例】以下、実施例によって本発明を更に具体的に
説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものでは
ない。実施例１（１）移植体の調製ＢＣＰ担体としては、β−トリカルシウムホスフェート
８０％とヒドロキシアパタイト２０％とを焼成段階（焼
成温度１１５０℃）で混合させて製造した顆粒状ＢＣＰ
（粒径：４２０〜５９０μｍ；比重：３．１；比表面
積：０．０７６ｍ² ／ｇ；日本特殊陶業ＫＫ製）を用
い、ＢＭＰとしては、山之内製薬より提供されたｒｈＢ
ＭＰ−２のアルギニン（０．５Ｍ）／Ｌ−ヒスチジン
（１０ｍＭ）水溶液（ｐＨ６．５）を用いた。ＢＣＰ顆
粒約７００μｌを、ｒｈＢＭＰ−２水溶液（ｒｈＢＭＰ
−２の配合量：５０μｇ及び１０μｇ）に減圧下で約１
時間浸漬させた後、凍結乾燥を行い顆粒状移植体を得
た。この２種類の移植体をゼラチンカプセルに入れて、
移植試験実施時まで−２０℃で保存した。

【００２５】（２）骨形成試験Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（７週齢）（各群５匹）の背
部に皮膚切開を入れ、皮下の疎性結合組織内に、前記
（１）で調製した移植体の入ったカプセルを移植埋入し
た。コントロールとしては、ｒｈＢＭＰ−２を担持して
いないＢＣＰ顆粒のみを封入して含むカプセルを同様に
移植した。移植から３週間経過後、背部皮膚を丁寧に剥
離し、移植物を一塊として取り出し、直ちにホルマリン
固定を行い、その後、Ｘ線撮影を行った。通法に従って
脱灰パラフィン切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジ
ン染色を施して、光学顕微鏡にて観察した。

【００２６】（３）結果ｒｈＢＭＰ−２を５０μｇ配合した移植体を埋植した群
では５例全例において、骨様組織の形成が観察された。
骨様組織のほとんどの場合は、細胞を中心に球状に形成
された小さな骨様組織の集団と、その集団に連続した層
板様構造を有する新生骨組織として観察された。この１
例の顕微鏡写真を図１に示す。ｒｈＢＭＰ−２を１０μ
ｇ配合した移植体を埋植した群では５例中１例におい
て、一部のＢＣＰ顆粒中央部に上記と同様の骨様組織の
形成が見られたが、他の４例においては明らかな骨様組
織の形成は認められなかった。コントロール群において
は、明らかな骨様組織の形成は認められず、ＢＣＰ顆粒
内に多数の細胞が、ＢＣＰ顆粒周囲に多核の巨細胞が観
察された。上記試験で、主に顆粒中央部に、小さな骨様
組織の集団が観察され、その集団のいくつかに連続した
顆粒間相当部に比較的分化した新生骨組織が観察された
ことから、本発明の多孔質移植体を移植した場合、最初
に小さな球形の骨様組織が移植体内部に形成され、その
後、周囲にさらに分化した骨組織が形成されたと考えら
れる。上記の異所性骨誘導モデルにおいて、移植からわ
ずか３週間で上記のような骨形成が観察され、しかも生
体内で低炎症であることが確認された。従って、本発明
移植体は、生体内で速やかに骨形成を誘導し、しかも新
生骨に徐々に置換し、移植体の残存を完全に無くすかあ
るいは最小限に抑えることができ、良好な骨組織を形成
することができ、しかも抗原性等の点で安全であること
が示された。なお、実施例１（１）で調製した顆粒状移
植体を、歯周病によって生じた歯槽骨の欠損部に補填し
て適用することもできる。更に、ＧＴＲ法を併用して前
記の顆粒状移植体を固定してもよい。

【００２７】実施例２（１）移植を行う骨欠損の形状に合わせて成形した円柱
状の多孔質ＢＣＰブロックに、ｒｈＢＭＰ−２のアルギ
ニン（０．５Ｍ）−Ｌ−ヒスチジン（１０ｍＭ）水溶液
（ｐＨ６．５）を、ｒｈＢＭＰ−２の１００μｇ／ＢＣ
Ｐブロック１ｍｌの量で減圧下に浸漬させ、続いて凍結
乾燥を行い、ブロック状移植体を調製する。こうして得
られたブロック状移植体を、骨欠損部に補填して適用す
ることができ、更にこのブロック状移植体と残存骨とを
金属プレートで固定してもよい。（２）実施例１（１）と同様のＢＣＰ顆粒に、ｒｈＢＭ
Ｐ−２とアテロコラーゲンを含む水溶液を減圧下で浸漬
させ、凍結乾燥を行い、顆粒状移植体を調製する。（３）実施例１（１）と同様のＢＣＰ顆粒に、ｒｈＢＭ
Ｐ−２を含む水溶液を浸漬させ、乾燥させた後に、粘性
のあるポリ乳酸（分子量６５０）−ポリエチレングリコ
ール（分子量２００）ブロック共重合体（ＰＬＡ−ＰＥ
Ｇ）を加えて、高粘性ゲル状移植体を調製する。（４）ＰＬＡ−ＰＥＧに代えてカルボキシメチルセルロ
ースを用いること以外は前記実施例２（３）と同様の操
作により、粘土状の移植体を調製する。

【００２８】

【発明の効果】本発明移植体は、生体内で速やかに骨形
成を誘導し、しかも新生骨に徐々に置換し、移植体の残
存を完全に無くするかあるいは最小限に抑え、良好な骨
組織を形成することができ、抗原性等の点で安全で、し
かも適応時の操作性及び整形性にも優れている。従っ
て、外傷、疾病又は先天性の欠陥等によって引き起こさ
れた各種の骨又は軟骨の欠損を修復するために、当該分
野に知られた方法で患部に適用することができる。本発
明移植体は生体内に移植された際に、起炎性が低く生体
適合性に優れている。また、新生される骨と生体内の既
存の骨との連続性も良好であり、自然に近い状態で骨又
は軟骨の修復が可能になる。本発明移植体は、各種の分
野に適用することができ、例えば、骨折等の外傷、腫瘍
あるいは炎症性、変性ないし壊死性骨疾患等の疾患、脳
外科あるいは整形外科手術等の手術に伴う採骨等による
骨又は軟骨の欠損部位の修復、各種骨折の治癒促進、人
工関節、人工骨若しくは人工歯根等の人工インプラント
周囲での骨の形成、人工インプラント使用時の固着促
進、脊椎固定促進、脚延長等の整形外科分野における骨
の補填、軟骨の再生、関節の再建、形成外科分野での骨
又は軟骨の補填、あるいは歯科領域での骨、軟骨又はセ
メント質の修復やインプラント使用のための骨の増大等
に好適である。

【００２９】本発明移植体のうち、顆粒状移植体及び凝
集体移植体は、特に骨又は軟骨の小規模な欠損の修復、
各種骨折の治癒促進、あるいは歯科領域における骨、軟
骨又はセメント質の修復やインプラント使用のための骨
の補充等、移植体の固定が容易な骨（軟骨）欠損に対し
て有用性が高い、一方、大規模な骨欠損、一定の強度を
必要とする部位、あるいは特定の形状の維持が必要とさ
れる部位における骨欠損に対しては、成形されたブロッ
ク状移植体を用いるのが有利である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で実施した、ｒｈＢＭＰ−２（５０μ
ｇ）配合移植体を埋植したラットにおける骨形成組織像
を示す図面に代わる写真である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】骨誘導因子と二相性リン酸カルシウムと
を含むことを特徴とする、骨形成用移植体。
【請求項２】二相性リン酸カルシウムが、ヒドロキシ
アパタイトとβ−トリカルシウムホスフェートとを合計
で９０重量％以上含み、それらのヒドロキシアパタイト
とβ−トリカルシウムホスフェートとの重量比が５０：
５０〜１０：９０である、請求項１に記載の骨形成用移
植体。
【請求項３】骨誘導因子が、ヒト骨誘導因子をコード
する塩基配列を含む組換えＤＮＡを含有する形質転換体
によって産生された組換えヒト骨誘導因子（ｒｈＢＭ
Ｐ）である、請求項１又は２に記載の骨形成用移植体。