JPH07224076A - ホスホリパーゼａ２の阻害剤 - Google Patents
ホスホリパーゼａ２の阻害剤Info
- Publication number
- JPH07224076A JPH07224076A JP3637194A JP3637194A JPH07224076A JP H07224076 A JPH07224076 A JP H07224076A JP 3637194 A JP3637194 A JP 3637194A JP 3637194 A JP3637194 A JP 3637194A JP H07224076 A JPH07224076 A JP H07224076A
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- JP
- Japan
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- group
- inhibitor
- phospholipase
- phospholipid
- docosahexaenoyl
- Prior art date
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、細胞質ホスホリパーゼＡ2に対
して優れた阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提
供し、抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての開発を
可能とならしめることを目的とする。 【構成】 グリセロールの１位に脂肪族アシル基を有
し、２位にイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサ
エノイル基を有するリン脂質を有効成分とする細胞質ホ
スホリパーゼＡ2阻害剤。
して優れた阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提
供し、抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての開発を
可能とならしめることを目的とする。 【構成】 グリセロールの１位に脂肪族アシル基を有
し、２位にイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサ
エノイル基を有するリン脂質を有効成分とする細胞質ホ
スホリパーゼＡ2阻害剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は一般式（Ｉ）
【０００２】
【化２】
【０００３】（式中、Ｒ1は脂肪族アシル基であり、Ｒ2
はイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサエノイル
基を表わし、Ｘは極性基を表わす。）で表されるリン脂
質を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤に
関するものである。
はイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサエノイル
基を表わし、Ｘは極性基を表わす。）で表されるリン脂
質を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤に
関するものである。
【０００４】
【従来技術】ホスホリパーゼＡ2阻害剤はホスホリパー
ゼＡ2の加水分解作用を阻害することによってグリセロ
リン脂質より遊離するリゾグリセロリン脂質とアラキド
ン酸の生成を抑え、その結果として血小板活性化因子や
エイコサノイドとして知られるプロ−炎症メディエイタ
−の産生を調節せんとするもので、炎症性障害を治療す
る薬剤として期待されている。この炎症に関わっている
と考えられているホスホリパーゼＡ2としては、例えば
マクロファージ細胞株や血小板可溶性画分から精製され
た約８５ｋＤａの細胞質ホスホリパーゼＡ2が知られて
いる〔蛋白質核酸酵素, Vol.36, No.3, p325-332(199
1)〕。この細胞質ホスホリパーゼＡ2に対して、一般式
（Ｉ）で表されるリン脂質が該酵素の活性を阻害すると
の報告はこれまでない〔例えば、蛋白質核酸酵素, Vol.
36, No.3, p333-341(1991)〕。
ゼＡ2の加水分解作用を阻害することによってグリセロ
リン脂質より遊離するリゾグリセロリン脂質とアラキド
ン酸の生成を抑え、その結果として血小板活性化因子や
エイコサノイドとして知られるプロ−炎症メディエイタ
−の産生を調節せんとするもので、炎症性障害を治療す
る薬剤として期待されている。この炎症に関わっている
と考えられているホスホリパーゼＡ2としては、例えば
マクロファージ細胞株や血小板可溶性画分から精製され
た約８５ｋＤａの細胞質ホスホリパーゼＡ2が知られて
いる〔蛋白質核酸酵素, Vol.36, No.3, p325-332(199
1)〕。この細胞質ホスホリパーゼＡ2に対して、一般式
（Ｉ）で表されるリン脂質が該酵素の活性を阻害すると
の報告はこれまでない〔例えば、蛋白質核酸酵素, Vol.
36, No.3, p333-341(1991)〕。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は炎症に関わっ
ているとされる細胞質ホスホリパーゼＡ2に対して優れ
た阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提供し、抗
炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての開発を可能とな
らしめることを目的とする。
ているとされる細胞質ホスホリパーゼＡ2に対して優れ
た阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提供し、抗
炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての開発を可能とな
らしめることを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ウサギ洗
浄血小板より部分精製した細胞質ホスホリパーゼＡ
2（ｃＰＬＡ2）を用いて、下記一般式（Ｉ）で表される
リン脂質がｃＰＬＡ2阻害活性を有しているという新し
い知見に基づき本発明を完成した。すなわち、本発明は
一般式（Ｉ）
浄血小板より部分精製した細胞質ホスホリパーゼＡ
2（ｃＰＬＡ2）を用いて、下記一般式（Ｉ）で表される
リン脂質がｃＰＬＡ2阻害活性を有しているという新し
い知見に基づき本発明を完成した。すなわち、本発明は
一般式（Ｉ）
【０００７】
【化３】
【０００８】（式中、Ｒ1は脂肪族アシル基であり、Ｒ2
はイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサエノイル
基を表わし、Ｘは極性基を表わす。）で表されるリン脂
質を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤を
提供する。本発明の阻害剤は細胞質ホスホリパーゼＡ2
に対して優れた阻害活性を有しており、炎症性の治療薬
として、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬として
期待できる。
はイコサペンタエノイル基またはドコサヘキサエノイル
基を表わし、Ｘは極性基を表わす。）で表されるリン脂
質を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤を
提供する。本発明の阻害剤は細胞質ホスホリパーゼＡ2
に対して優れた阻害活性を有しており、炎症性の治療薬
として、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬として
期待できる。
【０００９】前記一般式（Ｉ）において、Ｒ1の脂肪族
アシル基としては直鎖脂肪族アシル基あるいは分岐状脂
肪族アシル基であっもよく、例えばアセチル基、プロピ
オニル基、ブチリル基、バレリル基、カプロイル基、エ
ナントイル基、カプリロイル基、ペラゴイル基、デカノ
イル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル
基、ステアロイル基、エイコサノイル基、ヘンエイコサ
ノイル基、ドコサノイル基、トリコサノイル基、テトラ
コサノイル基、ペンタコサノイル基、ヘキサコサノイル
基、ヘプタコサノイル基、オクタコサノイル基、ノナコ
サノイル基、トリアコンタノイル基、ヘントリアコンタ
ノイル基、ドトリアコンタノイル基、トリトリアコンタ
ノイル基、テトラコンタノイル基などを挙げることがで
きる。
アシル基としては直鎖脂肪族アシル基あるいは分岐状脂
肪族アシル基であっもよく、例えばアセチル基、プロピ
オニル基、ブチリル基、バレリル基、カプロイル基、エ
ナントイル基、カプリロイル基、ペラゴイル基、デカノ
イル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル
基、ステアロイル基、エイコサノイル基、ヘンエイコサ
ノイル基、ドコサノイル基、トリコサノイル基、テトラ
コサノイル基、ペンタコサノイル基、ヘキサコサノイル
基、ヘプタコサノイル基、オクタコサノイル基、ノナコ
サノイル基、トリアコンタノイル基、ヘントリアコンタ
ノイル基、ドトリアコンタノイル基、トリトリアコンタ
ノイル基、テトラコンタノイル基などを挙げることがで
きる。
【００１０】また、Ｘの極性基としては、例えばコリ
ン、エタノールアミン、イノシトール、セリン、グリセ
ロールのそれぞれの炭素骨格に結合しているＯＨを除い
た残基を挙げることができる。
ン、エタノールアミン、イノシトール、セリン、グリセ
ロールのそれぞれの炭素骨格に結合しているＯＨを除い
た残基を挙げることができる。
【００１１】これらのリン脂質は、魚油あるいは卵黄等
よりの分離精製および／または合成によって得ることが
できる。
よりの分離精製および／または合成によって得ることが
できる。
【００１２】本発明のリン脂質の投与量は、年齢、性
別、体重、症状、あるいは投与形態により異なるが、一
般には、リン脂質の量として、１日あたり約４０〜８０
００ｍｇであり、１回あるいは数回に分けて服用されう
る。
別、体重、症状、あるいは投与形態により異なるが、一
般には、リン脂質の量として、１日あたり約４０〜８０
００ｍｇであり、１回あるいは数回に分けて服用されう
る。
【００１３】本発明の阻害剤は経口的あるいは非経口的
に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆
粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロッ
プ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができ
る。また、非経口投与剤として注射剤とすることができ
る。
に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆
粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロッ
プ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができ
る。また、非経口投与剤として注射剤とすることができ
る。
【００１４】これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤
学的に認容される製造助剤を加えることにより常法に従
って製造される。更に公知の技術により持続性製剤とす
ることも可能である。その他、公知の製造法、例えば日
本薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な改良
を加えた方法によっても製造することができる。
学的に認容される製造助剤を加えることにより常法に従
って製造される。更に公知の技術により持続性製剤とす
ることも可能である。その他、公知の製造法、例えば日
本薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な改良
を加えた方法によっても製造することができる。
【００１５】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に
説明する。
説明する。
【００１６】試験方法 細胞質ホスホリパーゼＡ2は、ウサギ洗浄血小板より以
下の方法により部分精製し、用いた。ウサギ１０羽の全
血液より常法にて単離した血小板を、10mMトリス塩酸緩
衝液〔(pH 7.5)/1mM エチレンジアミン四酢酸(EDTA)/0.
14M NaCl〕で洗浄し、50mlの50mMトリス塩酸緩衝液〔(p
H 7.5)/1mM EDTA/0.1M NaCl〕（以下緩衝液Ａ）に懸濁
して超音波破砕した。この溶液を、４℃で3000xg、５分
間遠心分離した。上清をさらに100,000xgで１時間遠心
分離し、その上清をヘパリン−セファロースCL6Bカラム
に添加した。緩衝液Ａで展開し、夾雑物はカラムに吸着
させることで除去し、流出液を回収した。これをさらに
DEAE−セファセルカラムに添加し、50mMトリス塩酸緩衝
液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.15M NaCl〕でカラムをよく洗
浄した後、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/
0.6M NaCl〕で目的画分を溶出した。この画分はさらに
ブチル−トヨパール 650Mに添加し、50mMトリス塩酸緩
衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕でよく洗浄した
後、10mMグリシン-NaOH緩衝液（pH 11.5）で溶出させ
た。この画分をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動し
た後、ニトロセルロースフィルターにブロットし、細胞
質PLA2に特異的なモノクローナル抗体、および細胞質PL
A2とII型PLA2に反応するモノクローナル抗体を用いてバ
ンドの検出を行った。その結果、本画分には８５ｋＤａ
細胞質PLA2のみが検出され、他のホスホリパーゼＡ2の
混入がないことを確認した。検体は、基質〔１−パルミ
トイル−２−アラキドノイル−グリセロホスホエタノ−
ルアミン（ＡＡ−ＰＥ）〕25nmolと共にクロロホルムに
溶解し、溶媒を窒素ガスを用いて除去した後、蒸留水を
加えてソニケートしたものを試験液として使用した。反
応は、1Mトリス−塩酸(pH 9.0)25μl:2%牛血清アルブミ
ン(脂肪酸フリー)12.5μl:50mM塩化カルシウム溶液20μ
lの混合緩衝溶液に、試験液を加え200μlとし、37℃に
加温した。この溶液にｃＰＬＡ2溶液50μlを添加し37℃
で20分間反応させた。ドライアイス−メタノール中で急
速冷凍することで反応を停止した後、凍結乾燥し、残滓
をメタノール0.1mlに懸濁した。内部標準としてヘプタ
デカノイン酸1μgを添加し、さらに9-アントリルジアゾ
メタンの酢酸エチル溶液(0.5mg/ml,100μl)を加え１時
間暗所で反応させた。蒸留水1mlを加えた後、n-ヘキサ
ン(0.2ml)で脂肪酸の9-アントリルジアゾメチルを抽出
し、これを逆相ＨＰＬＣで分離定量した。
下の方法により部分精製し、用いた。ウサギ１０羽の全
血液より常法にて単離した血小板を、10mMトリス塩酸緩
衝液〔(pH 7.5)/1mM エチレンジアミン四酢酸(EDTA)/0.
14M NaCl〕で洗浄し、50mlの50mMトリス塩酸緩衝液〔(p
H 7.5)/1mM EDTA/0.1M NaCl〕（以下緩衝液Ａ）に懸濁
して超音波破砕した。この溶液を、４℃で3000xg、５分
間遠心分離した。上清をさらに100,000xgで１時間遠心
分離し、その上清をヘパリン−セファロースCL6Bカラム
に添加した。緩衝液Ａで展開し、夾雑物はカラムに吸着
させることで除去し、流出液を回収した。これをさらに
DEAE−セファセルカラムに添加し、50mMトリス塩酸緩衝
液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.15M NaCl〕でカラムをよく洗
浄した後、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/
0.6M NaCl〕で目的画分を溶出した。この画分はさらに
ブチル−トヨパール 650Mに添加し、50mMトリス塩酸緩
衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕でよく洗浄した
後、10mMグリシン-NaOH緩衝液（pH 11.5）で溶出させ
た。この画分をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動し
た後、ニトロセルロースフィルターにブロットし、細胞
質PLA2に特異的なモノクローナル抗体、および細胞質PL
A2とII型PLA2に反応するモノクローナル抗体を用いてバ
ンドの検出を行った。その結果、本画分には８５ｋＤａ
細胞質PLA2のみが検出され、他のホスホリパーゼＡ2の
混入がないことを確認した。検体は、基質〔１−パルミ
トイル−２−アラキドノイル−グリセロホスホエタノ−
ルアミン（ＡＡ−ＰＥ）〕25nmolと共にクロロホルムに
溶解し、溶媒を窒素ガスを用いて除去した後、蒸留水を
加えてソニケートしたものを試験液として使用した。反
応は、1Mトリス−塩酸(pH 9.0)25μl:2%牛血清アルブミ
ン(脂肪酸フリー)12.5μl:50mM塩化カルシウム溶液20μ
lの混合緩衝溶液に、試験液を加え200μlとし、37℃に
加温した。この溶液にｃＰＬＡ2溶液50μlを添加し37℃
で20分間反応させた。ドライアイス−メタノール中で急
速冷凍することで反応を停止した後、凍結乾燥し、残滓
をメタノール0.1mlに懸濁した。内部標準としてヘプタ
デカノイン酸1μgを添加し、さらに9-アントリルジアゾ
メタンの酢酸エチル溶液(0.5mg/ml,100μl)を加え１時
間暗所で反応させた。蒸留水1mlを加えた後、n-ヘキサ
ン(0.2ml)で脂肪酸の9-アントリルジアゾメチルを抽出
し、これを逆相ＨＰＬＣで分離定量した。
【００１７】試験例１ 検体として、１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノ
イル−グリセロホスホエタノ−ルアミン（ＤＨＡ−Ｐ
Ｅ）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2による遊離
脂肪酸量を測定した。結果を表１に示す。
イル−グリセロホスホエタノ−ルアミン（ＤＨＡ−Ｐ
Ｅ）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2による遊離
脂肪酸量を測定した。結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】 ＤＨＡ−ＰＥはそれ自体ｃＰＬＡ2の基質とはならずに
（表１）、ＡＡ−ＰＥからのアラキドン酸の遊離を抑制
し、優れたｃＰＬＡ2阻害活性を示した。
（表１）、ＡＡ−ＰＥからのアラキドン酸の遊離を抑制
し、優れたｃＰＬＡ2阻害活性を示した。
【００１９】試験例２ 検体として、１−パルミトイル−２−イコサペンタエノ
イル−グリセロホスホエタノ−ルアミン（ＥＰＡ−Ｐ
Ｅ）を用い、試験例１と同様に遊離脂肪酸量を測定し
た。その結果を表２に示す。
イル−グリセロホスホエタノ−ルアミン（ＥＰＡ−Ｐ
Ｅ）を用い、試験例１と同様に遊離脂肪酸量を測定し
た。その結果を表２に示す。
【００２０】
【表２】 ＥＰＡ−ＰＥはｃＰＬＡ2によってＥＰＡを遊離したが
（表２）、ＡＡ−ＰＥからのアラキドン酸の生成を抑制
しており、ｃＰＬＡ2阻害活性を示した。
（表２）、ＡＡ−ＰＥからのアラキドン酸の生成を抑制
しており、ｃＰＬＡ2阻害活性を示した。
【００２１】
【発明の効果】本発明の阻害剤は、細胞質ホスホリパー
ゼＡ2に対して阻害活性を有するため炎症性疾患の治療
薬、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての用
途が期待できる。
ゼＡ2に対して阻害活性を有するため炎症性疾患の治療
薬、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬としての用
途が期待できる。
フロントページの続き (72)発明者 高山 喜好 東京都文京区本郷７−３−１ 東京大学薬 学部内 (72)発明者 工藤 一郎 東京都文京区本郷７−３−１ 東京大学薬 学部内
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｒ1は脂肪族アシル基であり、Ｒ2はイコサペン
タエノイル基またはドコサヘキサエノイル基を表わし、
Ｘは極性基を表わす。）で表されるリン脂質を有効成分
とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3637194A JPH07224076A (ja) | 1994-02-10 | 1994-02-10 | ホスホリパーゼａ２の阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3637194A JPH07224076A (ja) | 1994-02-10 | 1994-02-10 | ホスホリパーゼａ２の阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07224076A true JPH07224076A (ja) | 1995-08-22 |
Family
ID=12467986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3637194A Pending JPH07224076A (ja) | 1994-02-10 | 1994-02-10 | ホスホリパーゼａ２の阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07224076A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013079247A (ja) * | 2003-05-27 | 2013-05-02 | Vascular Biogenics Ltd | 酸化脂質、ならびに炎症性の疾患および障害の治療におけるその使用 |
-
1994
- 1994-02-10 JP JP3637194A patent/JPH07224076A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013079247A (ja) * | 2003-05-27 | 2013-05-02 | Vascular Biogenics Ltd | 酸化脂質、ならびに炎症性の疾患および障害の治療におけるその使用 |
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