JPH07179428A - 発光性化合物 - Google Patents
発光性化合物Info
- Publication number
- JPH07179428A JPH07179428A JP6131617A JP13161794A JPH07179428A JP H07179428 A JPH07179428 A JP H07179428A JP 6131617 A JP6131617 A JP 6131617A JP 13161794 A JP13161794 A JP 13161794A JP H07179428 A JPH07179428 A JP H07179428A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- antigen
- conjugate
- sample
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D219/00—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems
- C07D219/04—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Liquid Crystal Substances (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 下記式Ｉ
〔式中、Ｒ1は水素、１〜１０個の炭素原子を有するア
ルキル、アルケニルなど、Ｒ2およびＲ3は水素、１〜４
個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしくは未置換
アミノ基、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、シア
ノなど、Ｒ4はスルホンアミド基がその窒素原子を介し
てカルボニル基に直接結合している基など、Ａ-は化学
発光を妨げない陰イオンを示す〕で示される化学発光性
アクリジニウム誘導体を直接にかまたは架橋分子を介し
て、タンパク、ポリペクチドまたはその他の生物学的に
重要な物質に結合させて安定な免疫学的に活性な接合体
を形成する発光性化合物。 【効果】 化学発光イムノアッセイにおいて前記発光性
化合物を使用すると、高い光量子収率とともに、速い反
応速度が得られ、それにより発光イムノアッセイ測定時
間が短縮される。
ルキル、アルケニルなど、Ｒ2およびＲ3は水素、１〜４
個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしくは未置換
アミノ基、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、シア
ノなど、Ｒ4はスルホンアミド基がその窒素原子を介し
てカルボニル基に直接結合している基など、Ａ-は化学
発光を妨げない陰イオンを示す〕で示される化学発光性
アクリジニウム誘導体を直接にかまたは架橋分子を介し
て、タンパク、ポリペクチドまたはその他の生物学的に
重要な物質に結合させて安定な免疫学的に活性な接合体
を形成する発光性化合物。 【効果】 化学発光イムノアッセイにおいて前記発光性
化合物を使用すると、高い光量子収率とともに、速い反
応速度が得られ、それにより発光イムノアッセイ測定時
間が短縮される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は発光性化合物およびその
発光イムノアッセイへの使用に関する。
発光イムノアッセイへの使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】発光性化合物はすでに、広範にわたる様
々な用途を有している。それらはバイオアッセイ、酵素
イムノアッセイおよび発光イムノアッセイにおけるイン
ジケータとして用いられる〔W.P. Collins著「Alternat
ive Immunoassays」、John Wiley & Sons Ltd発行（198
5）参照〕ほか、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ
にも用いられる〔J.A. Matthews他著「Analytical Bioc
hemistry」、151、205〜209（1985）参照〕。化学発光
性化合物は更に、「フロー・インジェクション分析」、
液体クロマトグラフィのカラム後検出器、フロー研究に
および人工光源に用いられている。
々な用途を有している。それらはバイオアッセイ、酵素
イムノアッセイおよび発光イムノアッセイにおけるイン
ジケータとして用いられる〔W.P. Collins著「Alternat
ive Immunoassays」、John Wiley & Sons Ltd発行（198
5）参照〕ほか、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ
にも用いられる〔J.A. Matthews他著「Analytical Bioc
hemistry」、151、205〜209（1985）参照〕。化学発光
性化合物は更に、「フロー・インジェクション分析」、
液体クロマトグラフィのカラム後検出器、フロー研究に
および人工光源に用いられている。
【０００３】化学発光イムノアッセイにおいては、特に
２種類の構造タイプ化学発光マーキング物質が比較的重
要性の高いものとなっている。一方において、これらは
H.R.Schroeder他著「Methods in Enzymology」、Academ
ic Press Inc. 発行、Vol.LVII（1978）４２４以降、お
よび英国特許第２,００８,２４７号および第２,０４２,
９２０号、西独特許第２,６１８,４１９号および第２,
６１８,５１１号、および欧州特許出願第１３５,０７１
号に記載されているルミノールおよびイソルミノール誘
導体である。発光インジケータとしてのイソルミノール
化合物の実際の使用についての総括はW.G. Wood著、
「J. Clin. Chem. Clin. Biochem.」22（1984）、９０
５〜９１８にみることができる。
２種類の構造タイプ化学発光マーキング物質が比較的重
要性の高いものとなっている。一方において、これらは
H.R.Schroeder他著「Methods in Enzymology」、Academ
ic Press Inc. 発行、Vol.LVII（1978）４２４以降、お
よび英国特許第２,００８,２４７号および第２,０４２,
９２０号、西独特許第２,６１８,４１９号および第２,
６１８,５１１号、および欧州特許出願第１３５,０７１
号に記載されているルミノールおよびイソルミノール誘
導体である。発光インジケータとしてのイソルミノール
化合物の実際の使用についての総括はW.G. Wood著、
「J. Clin. Chem. Clin. Biochem.」22（1984）、９０
５〜９１８にみることができる。
【０００４】他方において、アクリジニウムエステル化
合物も化学発光マーキング物質として用いられている。
かかるアクリジニウムエステルは米国特許第３,３５２,
７９１号、英国特許第１,３１６,３６３号および第１,
４６１,８７７号および欧州特許出願第８２,６３６号に
より知られている。イムノアッセイにおいてアクリジニ
ウムエステルをマーキング物質として用いることはWeek
s他著「Clin. Chem.」29／8（1983）、1474〜1479に記
載されている。発光イムノアッセイにおいてフェナンス
リジニウムエステルをマーキング物質として用いること
はすでに欧州特許出願第１７０,４１５号により知られ
ている。
合物も化学発光マーキング物質として用いられている。
かかるアクリジニウムエステルは米国特許第３,３５２,
７９１号、英国特許第１,３１６,３６３号および第１,
４６１,８７７号および欧州特許出願第８２,６３６号に
より知られている。イムノアッセイにおいてアクリジニ
ウムエステルをマーキング物質として用いることはWeek
s他著「Clin. Chem.」29／8（1983）、1474〜1479に記
載されている。発光イムノアッセイにおいてフェナンス
リジニウムエステルをマーキング物質として用いること
はすでに欧州特許出願第１７０,４１５号により知られ
ている。
【０００５】アクリジニウムエステルの化学発光はアル
カリ性Ｈ2Ｏ2溶液の添加により開始することができる。
化学発光のメカニズムについての説明はF. McCapra著
「Acc.Chem. Res.」9, 201(1976）において行われてい
る。すなわち、離脱基の性質が光量子収率および加水分
解安定性のいずれに対しても明らかに決定的である。
カリ性Ｈ2Ｏ2溶液の添加により開始することができる。
化学発光のメカニズムについての説明はF. McCapra著
「Acc.Chem. Res.」9, 201(1976）において行われてい
る。すなわち、離脱基の性質が光量子収率および加水分
解安定性のいずれに対しても明らかに決定的である。
【０００６】ルミノールおよびイソルミノール化合物に
比べ、すでに今日まで知られているアクリジニウムエス
テルは光量子収率が高くしかもその収率がインジケータ
に結合したタンパクによって悪化することがない点で有
利である〔Weeks他著「Clin.Chem.」29／8（1983）、14
74〜1479参照〕。
比べ、すでに今日まで知られているアクリジニウムエス
テルは光量子収率が高くしかもその収率がインジケータ
に結合したタンパクによって悪化することがない点で有
利である〔Weeks他著「Clin.Chem.」29／8（1983）、14
74〜1479参照〕。
【０００７】欧州特許出願第８２,６３６号により知ら
れるアクリジニウムフェニルエステルは、化学発光を緩
和な酸化剤で刺激した場合、検出感度が高い点で優れて
いるが、実用化の妨げとなる欠点を有している。特に、
フェニルエステル結合は水性系において、室温において
さえ、極めて不安定である。更に、そこに述べられた酸
化条件下では、発光はわずか約１０秒後に大部分、すな
わち９５％以上も消失する。これに比較して、他の非ア
イソトープアッセイ法は測定時間がはるかに短く、それ
故にサンプルの処理量の増加を可能にする。
れるアクリジニウムフェニルエステルは、化学発光を緩
和な酸化剤で刺激した場合、検出感度が高い点で優れて
いるが、実用化の妨げとなる欠点を有している。特に、
フェニルエステル結合は水性系において、室温において
さえ、極めて不安定である。更に、そこに述べられた酸
化条件下では、発光はわずか約１０秒後に大部分、すな
わち９５％以上も消失する。これに比較して、他の非ア
イソトープアッセイ法は測定時間がはるかに短く、それ
故にサンプルの処理量の増加を可能にする。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は高い光量子収率と共により速い反応速度を有し、それ
により発光イムノアッセイ測定時間を短縮できる新しい
アクリジニウム誘導体を提供することにある。
は高い光量子収率と共により速い反応速度を有し、それ
により発光イムノアッセイ測定時間を短縮できる新しい
アクリジニウム誘導体を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】今般、これらの目的が式
Ｉ
Ｉ
【化２】 〔式中、Ｒ1は水素、１〜１０個の炭素原子を有するア
ルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベン
ジルもしくはアリール基であり、Ｒ2およびＲ3は水素、
１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしくは
未置換アミノ基、カルボキシル、アルコキシ、シアノも
しくはニトロ基またはハロゲンであり、Ｒ 4はスルホン
アミド基がその窒素原子を介してカルボニル基に直接結
合している基であるか、または式II
ルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベン
ジルもしくはアリール基であり、Ｒ2およびＲ3は水素、
１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしくは
未置換アミノ基、カルボキシル、アルコキシ、シアノも
しくはニトロ基またはハロゲンであり、Ｒ 4はスルホン
アミド基がその窒素原子を介してカルボニル基に直接結
合している基であるか、または式II
【００１０】−Ｓ−Ｘ−Ｒ5 (II) （式中、Ｘは分枝状もしくは非分枝状脂肪族基または芳
香族基（それはまたヘテロ原子を有することもできる）
であり、そしてＲ5は緩和な条件下に生物学的に重要な
物質中のアミノ、カルボキシルもしくはチオール基また
はその他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルまたはチオアリール基であ
り、そしてＡ-は化学発光を妨げない陰イオンである〕
で示される化学発光性アクリジニウム誘導体により達成
されることが見出された。
香族基（それはまたヘテロ原子を有することもできる）
であり、そしてＲ5は緩和な条件下に生物学的に重要な
物質中のアミノ、カルボキシルもしくはチオール基また
はその他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルまたはチオアリール基であ
り、そしてＡ-は化学発光を妨げない陰イオンである〕
で示される化学発光性アクリジニウム誘導体により達成
されることが見出された。
【００１１】生物学的に重要な物質とは、抗原と理解す
べきである。この用語はホルモン、ステロイド、医薬、
医薬代謝物、毒素、アルカロイドそして抗体なども包含
する。
べきである。この用語はホルモン、ステロイド、医薬、
医薬代謝物、毒素、アルカロイドそして抗体なども包含
する。
【００１２】化学発光を妨げない陰イオンはテトラフル
オボレート、パークロレート、ハライド、アルキルサル
フェート、ハロスルホネート、アルキルスルホネートま
たはアリールスルホネート陰イオンであってよい。化学
発光を消失しまたは弱めなければその他の任意の陰イオ
ンを用いることもできる。
オボレート、パークロレート、ハライド、アルキルサル
フェート、ハロスルホネート、アルキルスルホネートま
たはアリールスルホネート陰イオンであってよい。化学
発光を消失しまたは弱めなければその他の任意の陰イオ
ンを用いることもできる。
【００１３】アリールとは芳香族炭化水素、特にフェニ
ルおよびナフチルであると理解すべきである。ヘテロ原
子を有する芳香族基とは窒素原子または酸素原子を有す
る芳香族炭化水素、特にキノリン、インドール、ピロー
ルおよびピリジンなどであると理解すべきである。ハロ
ゲンとは弗素、塩素、臭素および沃素である。
ルおよびナフチルであると理解すべきである。ヘテロ原
子を有する芳香族基とは窒素原子または酸素原子を有す
る芳香族炭化水素、特にキノリン、インドール、ピロー
ルおよびピリジンなどであると理解すべきである。ハロ
ゲンとは弗素、塩素、臭素および沃素である。
【００１４】置換アミノ基は好ましくはＣ1〜Ｃ4アルキ
ルまたはＣ1〜Ｃ4ジアルキルアミンであり、またそれら
アルキル基の方も例えばヒドロキシルによりモノ置換さ
れていてもよい。置換アミンはモルホリン基であっても
よい。Ｒ2およびＲ3について記載されたアルコキシ基は
アルキル部分に１〜４個の炭素原子を有するものが好ま
しい。Ｘについて記載された分枝状または非分枝状脂肪
族基は好ましくは、Ｃ1〜Ｃ5−アルキレン基である。
ルまたはＣ1〜Ｃ4ジアルキルアミンであり、またそれら
アルキル基の方も例えばヒドロキシルによりモノ置換さ
れていてもよい。置換アミンはモルホリン基であっても
よい。Ｒ2およびＲ3について記載されたアルコキシ基は
アルキル部分に１〜４個の炭素原子を有するものが好ま
しい。Ｘについて記載された分枝状または非分枝状脂肪
族基は好ましくは、Ｃ1〜Ｃ5−アルキレン基である。
【００１５】一般的には、Ｘがメチレン、エチレン、プ
ロピレンまたはオルト−、メタ−もしくはパラ−フェニ
レン基であるアクリジニウム誘導体が選択される。これ
らの基はアクリジニウム誘導体の水溶性を向上させるべ
く、ヘテロ原子を有する親水性置換分を有していてもよ
い。
ロピレンまたはオルト−、メタ−もしくはパラ−フェニ
レン基であるアクリジニウム誘導体が選択される。これ
らの基はアクリジニウム誘導体の水溶性を向上させるべ
く、ヘテロ原子を有する親水性置換分を有していてもよ
い。
【００１６】本発明によるアクリジニウム誘導体を使用
する際特に重要なのは置換分Ｒ5である。この基を適切
に選択することにより、検出される生物学的物質の官能
基に対し緩和な条件下に選択的に結合され得るような高
い反応性をそのアクリジン誘導体に与えることができ
る。適当な反応性基の例を以下に列挙する。
する際特に重要なのは置換分Ｒ5である。この基を適切
に選択することにより、検出される生物学的物質の官能
基に対し緩和な条件下に選択的に結合され得るような高
い反応性をそのアクリジン誘導体に与えることができ
る。適当な反応性基の例を以下に列挙する。
【００１７】
【化３】
【００１８】
【化４】
【００１９】多くの場合、本発明のアクリジニウム誘導
体の中でＲ5が式III
体の中でＲ5が式III
【化５】 で示される基であるものが適していることが判ってい
る。
る。
【００２０】そのほか、Ｒ1がメチル基であるアクリジ
ニウム化合物も好ましい。それ故、式IV
ニウム化合物も好ましい。それ故、式IV
【化６】 （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）に相当する
本発明のアクリジニウム化合物が特によく用いられる。
本発明のアクリジニウム化合物が特によく用いられる。
【００２１】本発明のアクリジニウム誘導体中の基Ｒ4
がスルホンアミド基である場合には、それは、式Ｖ
がスルホンアミド基である場合には、それは、式Ｖ
【化７】 または式VI
【化８】 〔式中、ＸおよびＲ5は前記の意味を有し、そして式Ｖ
のＲ6は１〜１０個の炭素原子を有するアルキルもしく
はアルケニル基、好ましくはＣ1〜Ｃ4−アルキルにより
モノ−もしくはジ置換されたアミノ基、またはモルホリ
ノ、ベンジルもしくはアリール基（これらはヒドロキシ
ル、アミノ、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシま
たはアリールオキシにより置換されていてもよい）であ
り、そして式VIのＲ6はそのほかに水素を表わすことも
できる〕で示されるのが好ましい。
のＲ6は１〜１０個の炭素原子を有するアルキルもしく
はアルケニル基、好ましくはＣ1〜Ｃ4−アルキルにより
モノ−もしくはジ置換されたアミノ基、またはモルホリ
ノ、ベンジルもしくはアリール基（これらはヒドロキシ
ル、アミノ、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシま
たはアリールオキシにより置換されていてもよい）であ
り、そして式VIのＲ6はそのほかに水素を表わすことも
できる〕で示されるのが好ましい。
【００２２】本発明のこのアクリジニウム誘導体の典型
的代表例は式VII
的代表例は式VII
【化９】 （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）で示され
る。
る。
【００２３】本発明は２つの新しいアクリジニウム化合
物群を提供するが、その一方の群はチオエステル基によ
り区別され、他方はスルホンアミド構造により区別され
る。従来より知られているアクリジニウムフェニルエス
テル化合物よりも、アクリジニウムアシルスルホンアミ
ド誘導体は高い安定性を有し、そしてチオールエステル
は速い反応速度を有する。さらにこれらの化合物群は共
により高い光収率を与える点で優れている。
物群を提供するが、その一方の群はチオエステル基によ
り区別され、他方はスルホンアミド構造により区別され
る。従来より知られているアクリジニウムフェニルエス
テル化合物よりも、アクリジニウムアシルスルホンアミ
ド誘導体は高い安定性を有し、そしてチオールエステル
は速い反応速度を有する。さらにこれらの化合物群は共
により高い光収率を与える点で優れている。
【００２４】欧州特許出願第８２,６３６号により知ら
れるアクリジニウムフェニルエステルと比較した場合、
チオールエステル含有離脱基を有する本発明のアクリジ
ニウム化合物の著しい長所は発光の反応速度が相当に速
い点である。従って、実施例１に従って製造された本発
明のアクリジニウムチオエステル（化合物６）は同じ酸
化条件下に１秒の測定時間で１０倍高い光収率を有し
た。この高い光収率および同時に短い測定時間はルミノ
メータにおいて一段と高いサンプル処理量を可能にす
る。
れるアクリジニウムフェニルエステルと比較した場合、
チオールエステル含有離脱基を有する本発明のアクリジ
ニウム化合物の著しい長所は発光の反応速度が相当に速
い点である。従って、実施例１に従って製造された本発
明のアクリジニウムチオエステル（化合物６）は同じ酸
化条件下に１秒の測定時間で１０倍高い光収率を有し
た。この高い光収率および同時に短い測定時間はルミノ
メータにおいて一段と高いサンプル処理量を可能にす
る。
【００２５】従って、図１は実施例１により製造された
アクリジニウムチオエステル（化合物６）の抗体接合体
の発光速度を示し、そして図２は４−（２−スクシンイ
ミジル−オキシカルボニルエチル）フェニル−１０−メ
チルアクリジニウム９−カルボキシレートメトサルフェ
ート（欧州特許出願第８２,６３６号明細書、第１０
頁）の抗体接合体を示す。個々のトレーサ溶液１００μ
ｌを３５０μｌの０.０５Ｍ ＫＣｌ／ＮａＯＨ 緩衝液
（pH１３）＋０.１％のＨ2Ｏ2を添加することにより刺
激して化学発光させ、そして１０秒間にわたり記録す
る。
アクリジニウムチオエステル（化合物６）の抗体接合体
の発光速度を示し、そして図２は４−（２−スクシンイ
ミジル−オキシカルボニルエチル）フェニル−１０−メ
チルアクリジニウム９−カルボキシレートメトサルフェ
ート（欧州特許出願第８２,６３６号明細書、第１０
頁）の抗体接合体を示す。個々のトレーサ溶液１００μ
ｌを３５０μｌの０.０５Ｍ ＫＣｌ／ＮａＯＨ 緩衝液
（pH１３）＋０.１％のＨ2Ｏ2を添加することにより刺
激して化学発光させ、そして１０秒間にわたり記録す
る。
【００２６】図１において、０.６６秒後にすでに最大
発光に達し、０.８８秒後にはすでに再び半減してい
る。これに対し、図２においては、１.７７秒後にやっ
と最大発光に達しそして２.８８秒後になってやっと再
び半減している。
発光に達し、０.８８秒後にはすでに再び半減してい
る。これに対し、図２においては、１.７７秒後にやっ
と最大発光に達しそして２.８８秒後になってやっと再
び半減している。
【００２７】アクリジニウム９−カルボン酸アミドはア
クリジニウム９−カルボン酸エステルとは対照的に化学
発光を全く示さない〔F. McCapra、W. Carruthersおよ
びJ.K. Sutherland著「Progress in Organic Chem.」Vo
l. 8, 231-277（1973）Butterworth社発行参照〕ことか
ら、そのアミド窒素がスルホニルにより置換されたアク
リジニウム９−カルボン酸アミドが優れた化学発光を呈
することは全く予想外のことである。
クリジニウム９−カルボン酸エステルとは対照的に化学
発光を全く示さない〔F. McCapra、W. Carruthersおよ
びJ.K. Sutherland著「Progress in Organic Chem.」Vo
l. 8, 231-277（1973）Butterworth社発行参照〕ことか
ら、そのアミド窒素がスルホニルにより置換されたアク
リジニウム９−カルボン酸アミドが優れた化学発光を呈
することは全く予想外のことである。
【００２８】本発明によるアクリジニウム９−カルボン
酸チオエステルは次の方法により製造できる：アクリジ
ンまたはその縮合フェニル環にＲ2および／またはＲ3を
有する誘導体を、LehmstedtおよびHundertmarkによる、
Ber. 63, 1229（1930）に記載の方法によりエタノール
／氷酢酸およびシアン化カリウム中で９−シアノアクリ
ジンに変換する。再結晶後、この生成物をLehmstedtお
よびWirthによる、Ber. 61, 2044（1928）に記載の方法
に従って硫酸および亜硝酸ナトリウムと反応させること
によりアクリジン−９−カルボン酸またはＲ2／Ｒ3−置
換アクリジン−９−カルボン酸が得られる。アクリジン
−９−カルボン酸またはＲ2／Ｒ3−置換アクリジン−９
−カルボン酸をチオニルクロライドと反応させることに
より、式VIII
酸チオエステルは次の方法により製造できる：アクリジ
ンまたはその縮合フェニル環にＲ2および／またはＲ3を
有する誘導体を、LehmstedtおよびHundertmarkによる、
Ber. 63, 1229（1930）に記載の方法によりエタノール
／氷酢酸およびシアン化カリウム中で９−シアノアクリ
ジンに変換する。再結晶後、この生成物をLehmstedtお
よびWirthによる、Ber. 61, 2044（1928）に記載の方法
に従って硫酸および亜硝酸ナトリウムと反応させること
によりアクリジン−９−カルボン酸またはＲ2／Ｒ3−置
換アクリジン−９−カルボン酸が得られる。アクリジン
−９−カルボン酸またはＲ2／Ｒ3−置換アクリジン−９
−カルボン酸をチオニルクロライドと反応させることに
より、式VIII
【００２９】
【化１０】 （式中、Ｙは塩素を表わす）で示される化合物が得られ
る。ハロゲンに代えて、オキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ5−
アルキル、オキシカルボニルアリールまたはイミダゾリ
ド基を化合物VIIIのＹとして導入することもできる。
る。ハロゲンに代えて、オキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ5−
アルキル、オキシカルボニルアリールまたはイミダゾリ
ド基を化合物VIIIのＹとして導入することもできる。
【００３０】Ｒ2／Ｒ3−置換アクリジン誘導体は文献に
知られる方法により簡単に合成できる。このような合成
法は例えば「Comprehensive Heterocyclic Chemistr
y」、A.Katritzky, C.W. Ress編、Vol. 2, 395以降、Pe
rgamon Press Ltd. 発行、（1984）または「Heterocycl
ic Compounds」Vol. 9, “Acridines and Cond.”第２
版、R.M. Acheson著、John Wiley & Sons Ltd. 発行、
(1973）に記載されている。
知られる方法により簡単に合成できる。このような合成
法は例えば「Comprehensive Heterocyclic Chemistr
y」、A.Katritzky, C.W. Ress編、Vol. 2, 395以降、Pe
rgamon Press Ltd. 発行、（1984）または「Heterocycl
ic Compounds」Vol. 9, “Acridines and Cond.”第２
版、R.M. Acheson著、John Wiley & Sons Ltd. 発行、
(1973）に記載されている。
【００３１】前記酸クロライド（VIII）を次いで式IX ＨＳ−Ｘ−ＣＯＯＨ （IX） で示されるチオールカルボン酸、例えば２−メルカプト
安息香酸とアルカリ性条件下に反応させるとチオールエ
ステルカルボン酸が得られ、これを次いで基Ｒ5の製造
に適した化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド
でエステル化する。そのアクリジン化合物を次に、文献
に知られる方法により１０位においてアルキル化する。
特に、トリメチルオキソニウムテトラフルオボレートが
メチル化に適しているが、ジメチルサルフェート、メチ
ルフルオロスルホネート、メチルトルエンスルホネート
またはメチルトリフルオロメタンスルホネートを用いて
も化学発光性アクリジニウム化合物が良好な収率で得ら
れる。
安息香酸とアルカリ性条件下に反応させるとチオールエ
ステルカルボン酸が得られ、これを次いで基Ｒ5の製造
に適した化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド
でエステル化する。そのアクリジン化合物を次に、文献
に知られる方法により１０位においてアルキル化する。
特に、トリメチルオキソニウムテトラフルオボレートが
メチル化に適しているが、ジメチルサルフェート、メチ
ルフルオロスルホネート、メチルトルエンスルホネート
またはメチルトリフルオロメタンスルホネートを用いて
も化学発光性アクリジニウム化合物が良好な収率で得ら
れる。
【００３２】本発明によるアクリジニウムスルホンアミ
ド誘導体の製造にはアクリジン−９−カルボン酸クロラ
イド（VIII）も同様に出発物質として用いられる。次い
でこの化合物を第１または第２スルホンアミド、好まし
くは式Ｘ
ド誘導体の製造にはアクリジン−９−カルボン酸クロラ
イド（VIII）も同様に出発物質として用いられる。次い
でこの化合物を第１または第２スルホンアミド、好まし
くは式Ｘ
【化１１】 または式XI
【００３３】
【化１２】 （式中、ＸおよびＲ6は前記の意味を有し、そしてＺは
カルボキシル基を保護し、後で除去される基である）で
示される保護されたスルホンアミドカルボン酸と反応さ
せる。例えばＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジル
エステルをこの反応の保護基として用いることができ
る。保護基を除去した後に形成される酸は次いで、適当
な化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用い
て基Ｒ5に変換される。この生成物の１０位の窒素を文
献に知られる方法によりアルキル化することによって化
学発光性アクリジニウム化合物が得られる。
カルボキシル基を保護し、後で除去される基である）で
示される保護されたスルホンアミドカルボン酸と反応さ
せる。例えばＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジル
エステルをこの反応の保護基として用いることができ
る。保護基を除去した後に形成される酸は次いで、適当
な化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用い
て基Ｒ5に変換される。この生成物の１０位の窒素を文
献に知られる方法によりアルキル化することによって化
学発光性アクリジニウム化合物が得られる。
【００３４】得られたアクリジニウム化合物は、次い
で、生物学的に重要な物質、例えば抗原、抗体、ホルモ
ン、医薬、医薬代謝物、毒素またはアルカロイドと反応
させて発光性化合物とすることができる。アクリジニウ
ム誘導体は、それによって直接に、または架橋分子例え
ばポリリジン、ポリグルタミン酸またはポリビニルアミ
ンを介して、生物学的に重要な物質に結合されて安定な
免疫学的に活性な接合体を形成する。この接合体もまた
トレーサと呼ばれ、後述の発光イムノアッセイに用いら
れる。拮抗法またはサンドイッチ法による液体サンプル
中の抗原物質を測定するための本発明の発光イムノアッ
セイには固相に固定された少なくとも一つの免疫学的に
活性な成分と前記発光性トレーサが必要である。発光イ
ムノアッセイは現在、様々な方法で行うことができる。
で、生物学的に重要な物質、例えば抗原、抗体、ホルモ
ン、医薬、医薬代謝物、毒素またはアルカロイドと反応
させて発光性化合物とすることができる。アクリジニウ
ム誘導体は、それによって直接に、または架橋分子例え
ばポリリジン、ポリグルタミン酸またはポリビニルアミ
ンを介して、生物学的に重要な物質に結合されて安定な
免疫学的に活性な接合体を形成する。この接合体もまた
トレーサと呼ばれ、後述の発光イムノアッセイに用いら
れる。拮抗法またはサンドイッチ法による液体サンプル
中の抗原物質を測定するための本発明の発光イムノアッ
セイには固相に固定された少なくとも一つの免疫学的に
活性な成分と前記発光性トレーサが必要である。発光イ
ムノアッセイは現在、様々な方法で行うことができる。
【００３５】一つの可能性は、抗原と特異的に反応する
固定された抗体を、検査対象液のサンプルおよび抗原と
化学発光アクリジニウム誘導体との接合体（抗原トレー
サ）と共にインキュベートし、サンプルと非結合トレー
サを分離し、結合トレーサを酸化剤と混合して発光さ
せ、次いで測定された発光強度から抗原の存在量を測定
することである。
固定された抗体を、検査対象液のサンプルおよび抗原と
化学発光アクリジニウム誘導体との接合体（抗原トレー
サ）と共にインキュベートし、サンプルと非結合トレー
サを分離し、結合トレーサを酸化剤と混合して発光さ
せ、次いで測定された発光強度から抗原の存在量を測定
することである。
【００３６】もう一つの可能性は、抗原と特異的に反応
する固定された抗体を、検査対象液のサンプル、特異的
に反応する第２抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体
との接合体と共にインキュベートし、そのサンプルと非
結合の標識接合体を分離し、結合した標識接合体を酸化
剤と混合して発光させ、そして測定された発光強度から
抗原の存在量を測定することよりなる。
する固定された抗体を、検査対象液のサンプル、特異的
に反応する第２抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体
との接合体と共にインキュベートし、そのサンプルと非
結合の標識接合体を分離し、結合した標識接合体を酸化
剤と混合して発光させ、そして測定された発光強度から
抗原の存在量を測定することよりなる。
【００３７】前述の発光イムノアッセイは標識接合体を
添加する前に、検査対象液を固定された抗体から分離す
ることにより行うこともできる。
添加する前に、検査対象液を固定された抗体から分離す
ることにより行うこともできる。
【００３８】本発明により行うことができるその他の発
光イムノアッセイにおいては、抗体ではなく抗原の方を
固定する。すなわち、抗体と特異的に反応する固定され
た抗原を検査対象液のサンプルおよび抗体と化学発光性
アクリジニウム誘導体との接合体の溶液と共にインキュ
ベートし、次いでサンプルと非結合の標識接合体を分離
し、そして結合した標識接合体を次いで酸化剤と混合す
ることができる。次いで発光が生じ、その強度から抗原
の存在量を測定することができる。
光イムノアッセイにおいては、抗体ではなく抗原の方を
固定する。すなわち、抗体と特異的に反応する固定され
た抗原を検査対象液のサンプルおよび抗体と化学発光性
アクリジニウム誘導体との接合体の溶液と共にインキュ
ベートし、次いでサンプルと非結合の標識接合体を分離
し、そして結合した標識接合体を次いで酸化剤と混合す
ることができる。次いで発光が生じ、その強度から抗原
の存在量を測定することができる。
【００３９】もう一つの変法は抗体と特異的に反応する
固定された抗原を、抗体と化学発光性アクリジニウム誘
導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、未反応
の標識接合体を分離し、検査対象液のサンプルを添加
し、次いでサンプルを再び分離し、結合した標識接合体
を酸化剤と混合して発光させ、次いでこの発光から抗原
の存在量を測定することよりなる。
固定された抗原を、抗体と化学発光性アクリジニウム誘
導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、未反応
の標識接合体を分離し、検査対象液のサンプルを添加
し、次いでサンプルを再び分離し、結合した標識接合体
を酸化剤と混合して発光させ、次いでこの発光から抗原
の存在量を測定することよりなる。
【００４０】最後に、抗体と特異的に反応する固定され
た抗原を抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体との接
合体の溶液と共にインキュベートし、検査対象液のサン
プルを添加し、サンプルと非結合接合体を分離し、結合
した標識接合体を酸化剤と混合し、そして次に測定され
た発光から抗原の存在量を測定する方法によって発光イ
ムノアッセイを行うこともできる。
た抗原を抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体との接
合体の溶液と共にインキュベートし、検査対象液のサン
プルを添加し、サンプルと非結合接合体を分離し、結合
した標識接合体を酸化剤と混合し、そして次に測定され
た発光から抗原の存在量を測定する方法によって発光イ
ムノアッセイを行うこともできる。
【００４１】
【実施例】本発明によるアクリジニウム化合物の製造例
を実施例１〜３に示す。 実施例 １ ９−シアノアクリジン（１） ３.３mlの氷酢酸をエタノール４５ml中のアクリジン
（１０ｇ）に添加し、５.２５ｇのシアン化カリウムの
水８ml中の溶液を滴加し、反応混合物を２時間還流加熱
しそして冷却し、そして揮発性成分を真空留去する。残
留物を３０mlの２ＮＮａＯＨと共に撹拌し、吸引濾過
し、２Ｎ ＮａＯＨおよび水で２回洗浄し、そして湿っ
た状態で大気中にしばらく放置する。粗製生成物をメチ
レンクロライド中に撹拌混合し、非溶解物質を吸引濾過
し、メチレンクロライドで洗浄し、合一した有機相を濃
縮し、そして粗製９−シアノアクリジンをｎ−ブチルア
セテートから再結晶する。 収率：５０％、融点：１８３−５℃ ＩＲ：２２３０cm-1
を実施例１〜３に示す。 実施例 １ ９−シアノアクリジン（１） ３.３mlの氷酢酸をエタノール４５ml中のアクリジン
（１０ｇ）に添加し、５.２５ｇのシアン化カリウムの
水８ml中の溶液を滴加し、反応混合物を２時間還流加熱
しそして冷却し、そして揮発性成分を真空留去する。残
留物を３０mlの２ＮＮａＯＨと共に撹拌し、吸引濾過
し、２Ｎ ＮａＯＨおよび水で２回洗浄し、そして湿っ
た状態で大気中にしばらく放置する。粗製生成物をメチ
レンクロライド中に撹拌混合し、非溶解物質を吸引濾過
し、メチレンクロライドで洗浄し、合一した有機相を濃
縮し、そして粗製９−シアノアクリジンをｎ−ブチルア
セテートから再結晶する。 収率：５０％、融点：１８３−５℃ ＩＲ：２２３０cm-1
【００４２】アクリジン−９−カルボン酸（２） ９−シアノアクリジン（５ｇ）を４０mlの濃Ｈ2ＳＯ4に
少量ずつ徐々に添加し、そしてその混合物を９０〜９５
℃で２時間加熱し、また８.５ｇのＮａＮＯ2を添加後に
この温度で更に２時間撹拌する。その熱溶液を素早く撹
拌しながら６２０mlの氷水に注ぎ、そして沈殿を吸引濾
過し、できるだけ少量の２Ｎ ＮａＯＨに溶解する。溶
液を濾過し、濾液を５０％強度Ｈ2ＳＯ4で酸性化し、そ
して析出したアクリジン−９−カルボン酸を吸引濾過し
そして真空乾燥する。 収率：９５％、融点：２８８−９℃ ＩＲ：３４４０（ｂｒ），３２００（ｂｒ），２６００
−２５００（ｂｒ)，１９８０；１６５０；１６０５；
１４２０cm-1
少量ずつ徐々に添加し、そしてその混合物を９０〜９５
℃で２時間加熱し、また８.５ｇのＮａＮＯ2を添加後に
この温度で更に２時間撹拌する。その熱溶液を素早く撹
拌しながら６２０mlの氷水に注ぎ、そして沈殿を吸引濾
過し、できるだけ少量の２Ｎ ＮａＯＨに溶解する。溶
液を濾過し、濾液を５０％強度Ｈ2ＳＯ4で酸性化し、そ
して析出したアクリジン−９−カルボン酸を吸引濾過し
そして真空乾燥する。 収率：９５％、融点：２８８−９℃ ＩＲ：３４４０（ｂｒ），３２００（ｂｒ），２６００
−２５００（ｂｒ)，１９８０；１６５０；１６０５；
１４２０cm-1
【００４３】アクリジン−９−カルボン酸クロライド塩
酸塩（３） アクリジン−９−カルボン酸（５ｇ）を５０mlの用時蒸
留したＳＯＣｌ2に少量ずつ添加し、そしてその混合物
を５時間還流加熱する。その時点で透明となっている溶
液を沈殿形成が始まるまで蒸留により濃縮し、そしてシ
クロヘキサンの添加および冷却により沈殿を完了させ
る。沈殿を吸引濾過しそして真空乾燥してアクリジン−
９−カルボン酸クロライド塩酸塩を得る。 収率：９０％、融点：２２３℃ 元素分析（Ｃ14Ｈ9ＣｌＮＯ×ＨＣｌとして計算） 計算値 Ｃ ６０.５ Ｈ ２.８ Ｎ ５.０ Ｃｌ ２５.５ 実測値 Ｃ ５９.４ Ｈ ３.３ Ｎ ５.０ Ｃｌ ２５.２
酸塩（３） アクリジン−９−カルボン酸（５ｇ）を５０mlの用時蒸
留したＳＯＣｌ2に少量ずつ添加し、そしてその混合物
を５時間還流加熱する。その時点で透明となっている溶
液を沈殿形成が始まるまで蒸留により濃縮し、そしてシ
クロヘキサンの添加および冷却により沈殿を完了させ
る。沈殿を吸引濾過しそして真空乾燥してアクリジン−
９−カルボン酸クロライド塩酸塩を得る。 収率：９０％、融点：２２３℃ 元素分析（Ｃ14Ｈ9ＣｌＮＯ×ＨＣｌとして計算） 計算値 Ｃ ６０.５ Ｈ ２.８ Ｎ ５.０ Ｃｌ ２５.５ 実測値 Ｃ ５９.４ Ｈ ３.３ Ｎ ５.０ Ｃｌ ２５.２
【００４４】（フェニル−２′−カルボン酸）アクリジ
ン−９−チオカルボキシレート(４) アクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸塩（３０
ｇ）を７２０mlのメチレンクロライドに懸濁し、チオサ
リチル酸（１７.７ｇ）および５０mlのトリエチルアミ
ンを添加し、そして透明となっている溶液を次いで室温
で１０分間撹拌する。溶媒を除去後、３５ｇの炭酸ナト
リウムおよび１４００mlの水を残留物に添加し、得られ
る溶液を沈殿が現れるまで濃縮し、そしてこれを吸引濾
過する。濾液をＮａＣｌで飽和し、そしてそれにより分
離する沈殿を同様に吸引濾過する。合一した沈殿の水性
溶液を８０℃で氷酢酸を用いて酸性化し、そして析出し
た生成物を吸引濾過しそして真空乾燥する。 収率：８０％、融点：２６１−５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝７.６−８.４
ppm、コンプレックスマルチプレット ＩＲ：１６８０cm-1（ｓ），１７２０（ｍ），１２６０
（ｓ）
ン−９−チオカルボキシレート(４) アクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸塩（３０
ｇ）を７２０mlのメチレンクロライドに懸濁し、チオサ
リチル酸（１７.７ｇ）および５０mlのトリエチルアミ
ンを添加し、そして透明となっている溶液を次いで室温
で１０分間撹拌する。溶媒を除去後、３５ｇの炭酸ナト
リウムおよび１４００mlの水を残留物に添加し、得られ
る溶液を沈殿が現れるまで濃縮し、そしてこれを吸引濾
過する。濾液をＮａＣｌで飽和し、そしてそれにより分
離する沈殿を同様に吸引濾過する。合一した沈殿の水性
溶液を８０℃で氷酢酸を用いて酸性化し、そして析出し
た生成物を吸引濾過しそして真空乾燥する。 収率：８０％、融点：２６１−５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝７.６−８.４
ppm、コンプレックスマルチプレット ＩＲ：１６８０cm-1（ｓ），１７２０（ｍ），１２６０
（ｓ）
【００４５】２′−（スクシンイミドイルオキシカルボ
ニル）フェニルアクリジン−９−チオカルボキシレート
（５） ３.２ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを１０ｇのチ
オールエステルカルボン酸の乾燥テトラヒドロフラン１
９０ml中の懸濁液（０℃）に添加し、次いで６.９ｇの
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を−２０℃
で添加し、次にその混合物を−２０℃で２時間撹拌した
後室温で一夜撹拌する。０.２８mlの氷酢酸を添加後、
その混合物を１時間撹拌し、次いで酢酸エチル（２５m
l）を添加し、そして沈殿を濾過する。濾液を濃縮しそ
してクロロベンゼンから再結晶すると淡黄色の２′−
（スクシンイミドイルオキシカルボニル）フェニルアク
リジン−９−チオカルボキシレートが得られる。 収率：８０％、融点：１９８−２００℃ ＩＲ：１８１０cm-1，１７８０，１７４５，１２２５，
１２０５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），７.７−８.４ppm（ｍ，１２Ｈ）
ニル）フェニルアクリジン−９−チオカルボキシレート
（５） ３.２ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを１０ｇのチ
オールエステルカルボン酸の乾燥テトラヒドロフラン１
９０ml中の懸濁液（０℃）に添加し、次いで６.９ｇの
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を−２０℃
で添加し、次にその混合物を−２０℃で２時間撹拌した
後室温で一夜撹拌する。０.２８mlの氷酢酸を添加後、
その混合物を１時間撹拌し、次いで酢酸エチル（２５m
l）を添加し、そして沈殿を濾過する。濾液を濃縮しそ
してクロロベンゼンから再結晶すると淡黄色の２′−
（スクシンイミドイルオキシカルボニル）フェニルアク
リジン−９−チオカルボキシレートが得られる。 収率：８０％、融点：１９８−２００℃ ＩＲ：１８１０cm-1，１７８０，１７４５，１２２５，
１２０５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），７.７−８.４ppm（ｍ，１２Ｈ）
【００４６】２′−（スクシンイミドイルオキシカルボ
ニル）フェニル−１０−メチルアクリジニウム−９−チ
オカルボキシレートテトラフルオボレート（６） ３ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド−エステル（５）
を４０mlの１,２−ジクロロエタン中７.８ｇのトリメチ
ルオキソニウムテトラフルオボレートと共に８０℃で８
時間加熱し、そしてその混合物を次いで室温で一夜撹拌
する。沈殿を濾過し、そして１,２−ジクロロエタンと
共に沸騰させることにより抽出する。合一した有機相を
濃縮しそして残留物をアセトン−ジイソプロピルエーテ
ルから再結晶する。 収率：４０％、融点：２４５℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１８００，１７８０，１
７４０（ｓ），１６７０，１０６５（ｓ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.０ppm
（ｓ，４Ｈ），４.９５ppm(ｓ，やや拡散，３Ｈ)，７.
９−８.６（ｍ，１０Ｈ），９.９ppm（ｄ，２Ｈ）
ニル）フェニル−１０−メチルアクリジニウム−９−チ
オカルボキシレートテトラフルオボレート（６） ３ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド−エステル（５）
を４０mlの１,２−ジクロロエタン中７.８ｇのトリメチ
ルオキソニウムテトラフルオボレートと共に８０℃で８
時間加熱し、そしてその混合物を次いで室温で一夜撹拌
する。沈殿を濾過し、そして１,２−ジクロロエタンと
共に沸騰させることにより抽出する。合一した有機相を
濃縮しそして残留物をアセトン−ジイソプロピルエーテ
ルから再結晶する。 収率：４０％、融点：２４５℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１８００，１７８０，１
７４０（ｓ），１６７０，１０６５（ｓ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.０ppm
（ｓ，４Ｈ），４.９５ppm(ｓ，やや拡散，３Ｈ)，７.
９−８.６（ｍ，１０Ｈ），９.９ppm（ｄ，２Ｈ）
【００４７】実施例 ２ 酸クロライド（３）およびチオグリコール酸から出発す
るスクシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−
メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラ
フルオボレートの製造を（６）の合成と同様にして行
う。生成物（７）〜（９）の個々の合成工程の収率およ
び分光法による特性を下記に示す： カルボキシメチルアクリジン−９−チオカルボキシレー
ト（７） 収率：６０％ 融点：２１８℃（分解） ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），２４００（ｂｒ），１９
５０（ｂｒ），１７１０（ｍ），１６６０（ｓ），１０
７０（ｍ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝４.２５ppm
（ｓ，２Ｈ）；７.６−８.４（ｍ，８Ｈ）
るスクシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−
メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラ
フルオボレートの製造を（６）の合成と同様にして行
う。生成物（７）〜（９）の個々の合成工程の収率およ
び分光法による特性を下記に示す： カルボキシメチルアクリジン−９−チオカルボキシレー
ト（７） 収率：６０％ 融点：２１８℃（分解） ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），２４００（ｂｒ），１９
５０（ｂｒ），１７１０（ｍ），１６６０（ｓ），１０
７０（ｍ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝４.２５ppm
（ｓ，２Ｈ）；７.６−８.４（ｍ，８Ｈ）
【００４８】スクシンイミドイルオキシカルボニルメチ
ルアクリジン−９−チオカルボキシレート（８） 収率：８０％ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），２９３０，１８２０，１
７８５，１７４０（ｓ），１２０５，１１６５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），４.７７ppm（ｓ，２Ｈ），７.６−８.３
ppm（ｍ，８Ｈ）
ルアクリジン−９−チオカルボキシレート（８） 収率：８０％ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），２９３０，１８２０，１
７８５，１７４０（ｓ），１２０５，１１６５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），４.７７ppm（ｓ，２Ｈ），７.６−８.３
ppm（ｍ，８Ｈ）
【００４９】スクシンイミドイルオキシカルボニルメチ
ル−１０−メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレ
ートテトラフルオボレート（９） 収率：４０％ 融点：２５０℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１８１０，１７８０，１
７３５（ｓ），１５３８，１３５０，１０６０ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９ppm
（ｓ，４Ｈ），４.８（ｓ，２Ｈ），４.９ppm（ｓ，３
Ｈ），７.７−９.０（ｍ，８Ｈ）
ル−１０−メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレ
ートテトラフルオボレート（９） 収率：４０％ 融点：２５０℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１８１０，１７８０，１
７３５（ｓ），１５３８，１３５０，１０６０ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９ppm
（ｓ，４Ｈ），４.８（ｓ，２Ｈ），４.９ppm（ｓ，３
Ｈ），７.７−９.０（ｍ，８Ｈ）
【００５０】実施例 ３ Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（ベンジルオキシカルボ
ニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
０） １３０ｇの４−（ジメチルアミノ）−ピリジンおよび６
mlのトリエチルアミンを１１０mlのテトラヒドロフラン
中の３.３ｇのＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジ
ルエステルに添加し、３ｇのアクリジン−９−カルボン
酸クロライド塩酸塩を１０分後に添加し、そして生じた
懸濁液を６時間還流加熱する。沈殿を吸引濾過し、溶媒
を除去しそして残留物をメチレンクロライドにとりそし
て２ＮＮａＯＨで短時間撹拌する。ＭｇＳＯ4で乾燥
後、有機相を濃縮しそして得られる残留物をトルエン／
ヘプタンから再結晶する。 収率：７０％ 融点：５８℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１７３５，１６８０，１
３５７，１１６５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.２ppm
（ｓ，２Ｈ），５.３ppm（ｓ，２Ｈ），７.０−８.４pp
m（ｍ，１８Ｈ）
ニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
０） １３０ｇの４−（ジメチルアミノ）−ピリジンおよび６
mlのトリエチルアミンを１１０mlのテトラヒドロフラン
中の３.３ｇのＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジ
ルエステルに添加し、３ｇのアクリジン−９−カルボン
酸クロライド塩酸塩を１０分後に添加し、そして生じた
懸濁液を６時間還流加熱する。沈殿を吸引濾過し、溶媒
を除去しそして残留物をメチレンクロライドにとりそし
て２ＮＮａＯＨで短時間撹拌する。ＭｇＳＯ4で乾燥
後、有機相を濃縮しそして得られる残留物をトルエン／
ヘプタンから再結晶する。 収率：７０％ 融点：５８℃ ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），１７３５，１６８０，１
３５７，１１６５ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.２ppm
（ｓ，２Ｈ），５.３ppm（ｓ，２Ｈ），７.０−８.４pp
m（ｍ，１８Ｈ）
【００５１】Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（カルボキ
シメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１１） ６０mlの氷酢酸中の１ｇのＮ−ベンゼンスルホニル−Ｎ
（ベンジルオキシカルボニルメチル）アクリジン−９−
カルボン酸アミドを室温および常圧で２mlの濃ＨＣｌお
よびＰｄ／Ｃ（１０％）を添加して水素添加する。反応
が終了したら、触媒を吸引濾過し、そして濾液を濃縮す
るとカルボン酸が黄色固形物として得られる。 ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.０ppm
（ｓ，２Ｈ），７.１−８.５ppm（ｍ，１３Ｈ）
シメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１１） ６０mlの氷酢酸中の１ｇのＮ−ベンゼンスルホニル−Ｎ
（ベンジルオキシカルボニルメチル）アクリジン−９−
カルボン酸アミドを室温および常圧で２mlの濃ＨＣｌお
よびＰｄ／Ｃ（１０％）を添加して水素添加する。反応
が終了したら、触媒を吸引濾過し、そして濾液を濃縮す
るとカルボン酸が黄色固形物として得られる。 ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.０ppm
（ｓ，２Ｈ），７.１−８.５ppm（ｍ，１３Ｈ）
【００５２】化合物（１１）を（５）の製造と同様にし
てＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させてＮ−ベン
ゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミドイルオキシカル
ボニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
２）とする。（１２）を（６）についての記載と同様に
してトリメチルオキソニウムテトラフルオボレートで４
級化すると、Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシン
イミドイルオキシカルボニルメチル）−１０−メチルア
クリジニウム９−カルボン酸アミドテトラフルオボレー
ト（１３）が得られる。
てＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させてＮ−ベン
ゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミドイルオキシカル
ボニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
２）とする。（１２）を（６）についての記載と同様に
してトリメチルオキソニウムテトラフルオボレートで４
級化すると、Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシン
イミドイルオキシカルボニルメチル）−１０−メチルア
クリジニウム９−カルボン酸アミドテトラフルオボレー
ト（１３）が得られる。
【００５３】実施例 ４ Ｎ−フェニル−Ｎ（４−ベンジルオキシカルボニルベン
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド
（１４） ３６０mgの４−（ジメチルアミノ）ピリジンおよび１
６.６mlのトリエチルアミンを３００mlのメチレンクロ
ライド中の１１ｇのベンジル４−（Ｎ−フェニルスルフ
ァミド）ベンゾエートに添加し、１０分後に８.３４ｇ
のアクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸塩（３）
を添加しそしてその混合物を１６時間還流加熱する。冷
却溶液を２Ｎ ＮａＯＨと共に短時間撹拌し、そして有
機相を分離し、水洗し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥しそして濃縮
する。残留物をトルエン／ヘプタンから再結晶する。 収率：７０％ 融点：１６１−１６３℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.５ppm
（ｓ，２Ｈ），δ＝６.８−８.６ppm（ｍ，２２Ｈ）
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド
（１４） ３６０mgの４−（ジメチルアミノ）ピリジンおよび１
６.６mlのトリエチルアミンを３００mlのメチレンクロ
ライド中の１１ｇのベンジル４−（Ｎ−フェニルスルフ
ァミド）ベンゾエートに添加し、１０分後に８.３４ｇ
のアクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸塩（３）
を添加しそしてその混合物を１６時間還流加熱する。冷
却溶液を２Ｎ ＮａＯＨと共に短時間撹拌し、そして有
機相を分離し、水洗し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥しそして濃縮
する。残留物をトルエン／ヘプタンから再結晶する。 収率：７０％ 融点：１６１−１６３℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝５.５ppm
（ｓ，２Ｈ），δ＝６.８−８.６ppm（ｍ，２２Ｈ）
【００５４】Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−カルボキシベン
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド臭
化水素酸塩（１５） ８.５８ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−ベンジルオキシ
カルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド（１４）を氷酢酸中の３３％強度ＨＢｒ
３０ml中で６０℃に２時間加熱し、そして冷却後６０m
lのジイソプロピルエーテルを添加し、そして沈殿を吸
引濾過しそして真空乾燥する。 収率：９５％ 融点：２５５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝６.８−９ppm
（ｍ）
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド臭
化水素酸塩（１５） ８.５８ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−ベンジルオキシ
カルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド（１４）を氷酢酸中の３３％強度ＨＢｒ
３０ml中で６０℃に２時間加熱し、そして冷却後６０m
lのジイソプロピルエーテルを添加し、そして沈殿を吸
引濾過しそして真空乾燥する。 収率：９５％ 融点：２５５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝６.８−９ppm
（ｍ）
【００５５】Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミド
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジ
ン−９−カルボン酸アミド（１６） ２.８mlのトリエチルアミンを２５０mlのテトラヒドロ
フラン中の５.６３ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−カル
ボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン
酸アミド臭化水素酸塩（１５）に添加し、その混合物を
−１５℃に冷却し、そして０.９６mlのエチルクロロホ
ルメートを添加する。その混合物を次いで２０分間撹拌
し、１.１５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを添加
し、そして混合物を−１５℃で３時間撹拌し、室温まで
放置して暖め、次いで一夜撹拌する。沈殿を吸引濾過
し、濾液を濃縮し、残留物をメチレンクロライドにと
り、そして得られた溶液を水、ＮａＨＣＯ3溶液および
水で洗浄し、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥する。有機相を濃
縮し、そして残留物をトルエンから再結晶する。 収率：５０％ 融点：２２６℃（分解） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝６.８−８.７ppm（ｍ，１７Ｈ）
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジ
ン−９−カルボン酸アミド（１６） ２.８mlのトリエチルアミンを２５０mlのテトラヒドロ
フラン中の５.６３ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−カル
ボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン
酸アミド臭化水素酸塩（１５）に添加し、その混合物を
−１５℃に冷却し、そして０.９６mlのエチルクロロホ
ルメートを添加する。その混合物を次いで２０分間撹拌
し、１.１５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを添加
し、そして混合物を−１５℃で３時間撹拌し、室温まで
放置して暖め、次いで一夜撹拌する。沈殿を吸引濾過
し、濾液を濃縮し、残留物をメチレンクロライドにと
り、そして得られた溶液を水、ＮａＨＣＯ3溶液および
水で洗浄し、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥する。有機相を濃
縮し、そして残留物をトルエンから再結晶する。 収率：５０％ 融点：２２６℃（分解） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝６.８−８.７ppm（ｍ，１７Ｈ）
【００５６】Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミド
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メ
チルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロス
ルホネート（１７） １.１６ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミド
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン
−９−カルボン酸アミド（１６）を６０mlの１,２−ジ
クロロエタン中で０.３mlのメチルフルオロスルホネー
トと共に室温で２４時間撹拌し、そして分離した沈殿を
吸引濾過しそして真空乾燥する。 収率：６５％ ＩＲ：３４２０cm-1（ｂｒ），３１００（ｂｒ），１８
０５（ｗ），１７７０（ｍ），１７４５（ｓ），１７０
０（ｍ），１３８５（ｍ），１２８０（ｍ），１２５５
（ｓ），１２３０（ｓ），１２０５（ｓ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝４.７５ppm（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），δ
＝７.０−９.０ppm（ｍ，１７Ｈ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝５９４：Ｍ+（陽イオン）
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メ
チルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロス
ルホネート（１７） １.１６ｇのＮ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミド
イルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン
−９−カルボン酸アミド（１６）を６０mlの１,２−ジ
クロロエタン中で０.３mlのメチルフルオロスルホネー
トと共に室温で２４時間撹拌し、そして分離した沈殿を
吸引濾過しそして真空乾燥する。 収率：６５％ ＩＲ：３４２０cm-1（ｂｒ），３１００（ｂｒ），１８
０５（ｗ），１７７０（ｍ），１７４５（ｓ），１７０
０（ｍ），１３８５（ｍ），１２８０（ｍ），１２５５
（ｓ），１２３０（ｓ），１２０５（ｓ） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝４.７５ppm（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），δ
＝７.０−９.０ppm（ｍ，１７Ｈ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝５９４：Ｍ+（陽イオン）
【００５７】実施例 ５ ベンジル４−〔Ｎ−（４′−メトキシフェニル）スルフ
ァミド〕−ベンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート
（２１）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）と同
様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法によ
る特性を以下に記載する。 Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−ベンジルオ
キシカルボニル−ベンゼンスルホニル）−アクリジン−
９−カルボン酸アミド（１８） 収率：７０％ 融点：１８２−１８３℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝５.５ppm（ｓ，２Ｈ），δ＝６.３
５−６.６３ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.
２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.３５−８.５ppm
（ｍ，１７Ｈ）
ァミド〕−ベンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート
（２１）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）と同
様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法によ
る特性を以下に記載する。 Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−ベンジルオ
キシカルボニル−ベンゼンスルホニル）−アクリジン−
９−カルボン酸アミド（１８） 収率：７０％ 融点：１８２−１８３℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝５.５ppm（ｓ，２Ｈ），δ＝６.３
５−６.６３ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.
２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.３５−８.５ppm
（ｍ，１７Ｈ）
【００５８】Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４
−カルボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド臭化水素酸塩（１９） 収率：９５％ 融点：２７３℃（分解） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.０５−７.２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ
＝７.７−８.５ppm（ｍ，１２Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリ
ジン−９−カルボン酸アミド（２０） 収率：５０％ 融点：２３２−２３４℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４
−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.２５
ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.８−８.６ppm（ｍ，１
２Ｈ） ＩＲ：３０５０cm-1、１８０５（ｗ），１７８０
（ｍ），１７４０（ｓ），１７００（ｍ），１５０５
（ｍ），１３７０（ｍ），１２５０（ｍ），１２００
（ｓ），１１８５
−カルボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド臭化水素酸塩（１９） 収率：９５％ 融点：２７３℃（分解） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.０５−７.２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ
＝７.７−８.５ppm（ｍ，１２Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリ
ジン−９−カルボン酸アミド（２０） 収率：５０％ 融点：２３２−２３４℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４
−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.２５
ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.８−８.６ppm（ｍ，１
２Ｈ） ＩＲ：３０５０cm-1、１８０５（ｗ），１７８０
（ｍ），１７４０（ｓ），１７００（ｍ），１５０５
（ｍ），１３７０（ｍ），１２５０（ｍ），１２００
（ｓ），１１８５
【００５９】Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４
−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホ
ニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸
アミドフルオロスルホネート（２１） この物質は反応時には析出せず、溶液を濃縮して残留物
をジイソプロピルエーテルと共に撹拌することにより得
られる。 収率：８０％ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝４.８p
pm（ｄ，ｂｒ，３Ｈ），δ＝６.４５−６.７ppm（ｄ，
ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.２−７.４ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.７−９ppm（ｍ，１２Ｈ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝６２４Ｍ+（陽イオン） ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），３１００，２９５０，１
８０５（ｗ），１７７５（ｍ），１７４０（ｓ），１６
９５（ｍ），１６１０（ｍ），１５０５（ｍ），１３７
５（ｍ），１２８０（ｍ），１２５０（ｓ），１２０５
（ｓ）
−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホ
ニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸
アミドフルオロスルホネート（２１） この物質は反応時には析出せず、溶液を濃縮して残留物
をジイソプロピルエーテルと共に撹拌することにより得
られる。 収率：８０％ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝４.８p
pm（ｄ，ｂｒ，３Ｈ），δ＝６.４５−６.７ppm（ｄ，
ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.２−７.４ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.７−９ppm（ｍ，１２Ｈ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝６２４Ｍ+（陽イオン） ＩＲ：３４４０cm-1（ｂｒ），３１００，２９５０，１
８０５（ｗ），１７７５（ｍ），１７４０（ｓ），１６
９５（ｍ），１６１０（ｍ），１５０５（ｍ），１３７
５（ｍ），１２８０（ｍ），１２５０（ｓ），１２０５
（ｓ）
【００６０】実施例 ６ ベンジル３−〔Ｎ−（４′−メトキシフェニル）スルフ
ァミド〕−ベンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート
（２５）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）と同
様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法によ
る特性を以下に記載する。 Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−ベンジルオ
キシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９−
カルボン酸アミド（２２） 収率：７０％ 融点：１６８−１７０℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝５.４５ppm（ｓ，２Ｈ），δ＝６.
５ppm（ｓ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.１ppm（ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.３−８.８ppm（ｍ，１７Ｈ）
ァミド〕−ベンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート
（２５）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）と同
様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法によ
る特性を以下に記載する。 Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−ベンジルオ
キシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９−
カルボン酸アミド（２２） 収率：７０％ 融点：１６８−１７０℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝５.４５ppm（ｓ，２Ｈ），δ＝６.
５ppm（ｓ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.１ppm（ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.３−８.８ppm（ｍ，１７Ｈ）
【００６１】Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３
−カルボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド臭化水素酸塩（２３） 収率：９０％ 融点：２６４℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.０−７.２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝
７.６−８.８ppm（ｍ，１２Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリ
ジン−９−カルボン酸アミド（２４） 収率：５０％ 融点：２２３−２２５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４
−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０−７.２ppm
（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.４−８.９ppm（ｍ，１２
Ｈ） ＩＲ：３５００cm-1（ｂｒ），３０６０，２９５０，２
８４０，１８０５（ｗ），１７８５（ｍ），１７４０
（ｓ），１７００（ｍ），１５１０（ｍ），１３８０
（ｍ），１２５０（ｍ），１２０５（ｍ），１１６５
（ｍ）
−カルボキシベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カ
ルボン酸アミド臭化水素酸塩（２３） 収率：９０％ 融点：２６４℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝３.５ppm
（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.０−７.２ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝
７.６−８.８ppm（ｍ，１２Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリ
ジン−９−カルボン酸アミド（２４） 収率：５０％ 融点：２２３−２２５℃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝６.４
−６.６ppm（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０−７.２ppm
（ｄ，ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.４−８.９ppm（ｍ，１２
Ｈ） ＩＲ：３５００cm-1（ｂｒ），３０６０，２９５０，２
８４０，１８０５（ｗ），１７８５（ｍ），１７４０
（ｓ），１７００（ｍ），１５１０（ｍ），１３８０
（ｍ），１２５０（ｍ），１２０５（ｍ），１１６５
（ｍ）
【００６２】Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３
−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホ
ニル）−１０−メチルアクリジニウム９−カルボン酸ア
ミドフルオロスルホネート（２５） 収率：９０％ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝４.
８ppm（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），δ＝６.４５−６.７（ｄ，
ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.３ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.５−８.９ppm（ｍ，１２Ｈ） ＩＲ：３５００cm-1（ｂｒ），３０８０，２９５０，１
８０５（ｗ），１７８０（ｍ），１７４０（ｓ），３５
１７００（ｍ），１６１０（ｍ），１５１０（ｍ），
１３８０（ｍ），１２５０（ｓ），１２０５（ｓ），１
１７０（ｓ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝６２４Ｍ+（陽イオン）
−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンスルホ
ニル）−１０−メチルアクリジニウム９−カルボン酸ア
ミドフルオロスルホネート（２５） 収率：９０％ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）：δ＝２.９５ppm
（ｓ，４Ｈ），δ＝３.５５ppm（ｓ，３Ｈ），δ＝４.
８ppm（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），δ＝６.４５−６.７（ｄ，
ｂｒ，２Ｈ），δ＝７.０５−７.３ppm（ｄ，ｂｒ，２
Ｈ），δ＝７.５−８.９ppm（ｍ，１２Ｈ） ＩＲ：３５００cm-1（ｂｒ），３０８０，２９５０，１
８０５（ｗ），１７８０（ｍ），１７４０（ｓ），３５
１７００（ｍ），１６１０（ｍ），１５１０（ｍ），
１３８０（ｍ），１２５０（ｓ），１２０５（ｓ），１
１７０（ｓ） マススペクトル：ｍ／ｚ＝６２４Ｍ+（陽イオン）
【００６３】実施例 ７ α−フェトタンパク化学発光イムノアッセイ用トレーサ
調製 １００μｌの抗体（１mg／ml）、１１.５μｌの実施例
１により製造されたアクリジニウムチオエステル（化合
物６)(ＤＭＳＯ中１mg／ml）および６００μｌの接合反
応用緩衝液（０.０１Ｍホスフェート、pH８.０）を１５
分間インキュベートする。次に２００μｌのリジン（１
０mg／ml）を添加し、そしてその混合物を更に１５分間
インキュベートする。このバッチをＰＤ １０カラム（S
ephadexG25 媒質、０.１Ｍホスフェート、pH６.３を移
動相とする）に移す。１０滴／画分を集める。個々の画
分を適宜希釈後その化学発光活性について試験する（酸
化剤３５０μｌ：０.１Ｎ ＮａＯＨ中の０.１％Ｈ
2Ｏ2）。トレーサ画分（第１活性ピーク）をプールし４
℃で貯蔵する。
調製 １００μｌの抗体（１mg／ml）、１１.５μｌの実施例
１により製造されたアクリジニウムチオエステル（化合
物６)(ＤＭＳＯ中１mg／ml）および６００μｌの接合反
応用緩衝液（０.０１Ｍホスフェート、pH８.０）を１５
分間インキュベートする。次に２００μｌのリジン（１
０mg／ml）を添加し、そしてその混合物を更に１５分間
インキュベートする。このバッチをＰＤ １０カラム（S
ephadexG25 媒質、０.１Ｍホスフェート、pH６.３を移
動相とする）に移す。１０滴／画分を集める。個々の画
分を適宜希釈後その化学発光活性について試験する（酸
化剤３５０μｌ：０.１Ｎ ＮａＯＨ中の０.１％Ｈ
2Ｏ2）。トレーサ画分（第１活性ピーク）をプールし４
℃で貯蔵する。
【００６４】実施例 ８ α−フェトタンパク化学発光イムノアッセイ法 ５０μｌのスタンダード／サンプルおよび１５０μｌの
緩衝液（ホスフェート；０.１Ｍ pH６.３、１％Tween２
０、０.１％牛血清アルブミン、０.１Ｍ ＮａＣｌ、０.
０１％ ＮａＮ3）をモノクローナル抗−ＡＦＰ抗体で被
覆された試験管中で１５分間振盪する。次に２×１mlず
つの緩衝液で洗浄する。２００μｌのトレーサを適宜希
釈して添加し、そしてその混合物を１５分間振盪する。
再度１mlずつの緩衝液で２回洗浄する。化学発光測定を
３５０μｌの酸化剤（０.１ＮＮａＯＨ中０.１％ Ｈ2Ｏ
2、測定時間２秒）を用いて開始する。
緩衝液（ホスフェート；０.１Ｍ pH６.３、１％Tween２
０、０.１％牛血清アルブミン、０.１Ｍ ＮａＣｌ、０.
０１％ ＮａＮ3）をモノクローナル抗−ＡＦＰ抗体で被
覆された試験管中で１５分間振盪する。次に２×１mlず
つの緩衝液で洗浄する。２００μｌのトレーサを適宜希
釈して添加し、そしてその混合物を１５分間振盪する。
再度１mlずつの緩衝液で２回洗浄する。化学発光測定を
３５０μｌの酸化剤（０.１ＮＮａＯＨ中０.１％ Ｈ2Ｏ
2、測定時間２秒）を用いて開始する。
【図１】本発明のアクリジニウム誘導体例の抗体接合体
の発光速度を示す。
の発光速度を示す。
【図２】従来のアクリジニウム誘導体例の抗体接合体の
発光速度を示す。
発光速度を示す。
【図３】α−フェトタンパク（ＡＦＰ）についてのイム
ノ化学発光測定アッセイ（ＩＣＭＡ）の標準曲線の典型
例を示す。
ノ化学発光測定アッセイ（ＩＣＭＡ）の標準曲線の典型
例を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヘニング・リユバース ドイツ連邦共和国デー−6231シユヴアルバ ハ・アム・タウヌス．シユペヒトシユトラ ーセ17 (72)発明者 ヘルムート・シユトレツカー ドイツ連邦共和国デー−6102プフングシユ タト．オーデンヴアルトシユトラーセ56 (72)発明者 ゲルト・シユノル ドイツ連邦共和国デー−6268バートヴイル ベル．アウフデムラテイヒコプフ23 (72)発明者 トーニオ・キンケル ドイツ連邦共和国デー−6230フランクフル ト・アム・マイン80．ヘールゼルベルクシ ユトラーセ１
Claims (9)
- 【請求項１】 式Ｉ 【化１】 〔式中、Ｒ1は水素、１〜１０個の炭素原子を有するア
ルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベン
ジルもしくはアリール基であり、Ｒ2およびＲ3は水素、
１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしくは
未置換アミノ基、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキ
シ、シアノまたはニトロ基またはハロゲンであり、Ｒ4
はスルホンアミド基がその窒素原子を介してカルボニル
基に直接結合している基であるか、または式II −Ｓ−Ｘ−Ｒ5 (II) （式中Ｘは分枝状もしくは非分枝状脂肪族基または芳香
族基（それはまたヘテロ原子を含むこともできる）であ
り、そしてＲ5は穏やかな条件下に生物学的に重要な物
質中のアミノ、カルボキシルもしくはチオール基または
その他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルもしくはチオアリール基で
あり、そしてＡ-は化学発光を妨げない陰イオンであ
る〕で示される化学発光性アクリジニウム誘導体を直接
にかまたは架橋分子を介して、タンパク、ポリペクチド
またはその他の生物学的に重要な物質に結合させて安定
な免疫学的に活性な接合体を形成する発光性化合物。 - 【請求項２】 拮抗法またはサンドイッチ法において少
なくとも一つの免疫学的に活性な成分が固相に固定さ
れ、そして少なくとも一つの他の成分であるトレーサが
請求項１に記載の発光性化合物であることを特徴とする
液体サンプル中の抗原物質を測定するための発光イムノ
アッセイ。 - 【請求項３】 ａ） 抗原と特異的に反応する固定され
た抗体を、検査対象液のサンプルおよび抗原と請求項１
記載の化学発光アクリジニウム誘導体との接合体と共に
インキュベートし、 ｂ） そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離
し、 ｃ） 結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光さ
せ、そして ｄ） 測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る請求項２記載の発光イムノアッセイ。 - 【請求項４】 標識接合体を添加する前に検査対象液を
固定された抗体から分離する請求項３記載の発光イムノ
アッセイ。 - 【請求項５】 ａ） 抗原と特異的に反応する固定され
た抗体を、検査対象液のサンプルおよび特異的に反応す
る第２抗体と請求項１記載の化学発光アクリジニウム誘
導体との接合体と共にインキュベートし、 ｂ） そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離
し、 ｃ） 結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光さ
せ、そして ｄ） 測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る請求項２記載の発光イムノアッセイ。 - 【請求項６】 標識接合体を添加する前に検査対象液を
固定された抗体から分離する、請求項５記載の発光イム
ノアッセイ。 - 【請求項７】 ａ） 抗体と特異的に反応する固定され
た抗原を、検査対象液のサンプルおよび抗体と請求項１
記載の化学発光性アクリジニウム誘導体との接合体の溶
液と共にインキュベートし、 ｂ） そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離
し、 ｃ） 結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光さ
せ、そして ｄ） 測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る請求項２記載の発光イムノアッセイ。 - 【請求項８】 ａ） 抗体と特異的に反応する固定され
た抗原を、抗体と請求項１記載の化学発光性アクリジニ
ウム誘導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、 ｂ） 未反応の標識接合体を分離し、 ｃ） 検査対象液のサンプルを添加し、 ｄ） その後サンプルを再び分離し、 ｅ） 結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光さ
せ、そして ｆ） 測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る請求項２記載の発光イムノアッセイ。 - 【請求項９】 抗体と特異的に反応する固定された抗原
を、抗体と請求項１記載の化学発光性アクリジニウム誘
導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、 ｂ） 検査対象液のサンプルを添加し、 ｃ） そのサンプルおよび非結合の接合体を分離し、 ｄ） 結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光さ
せ、そして ｅ） 測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る請求項２記載の発光イムノアッセイ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3628573A DE3628573C2 (de) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | Chemilumineszierende Acridinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
| DE3628573:0 | 1986-08-22 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62206622A Division JPH0699401B2 (ja) | 1986-08-22 | 1987-08-21 | 化学発光性アクリジン誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07179428A true JPH07179428A (ja) | 1995-07-18 |
| JP2766780B2 JP2766780B2 (ja) | 1998-06-18 |
Family
ID=6307971
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62206622A Expired - Lifetime JPH0699401B2 (ja) | 1986-08-22 | 1987-08-21 | 化学発光性アクリジン誘導体 |
| JP6131617A Expired - Lifetime JP2766780B2 (ja) | 1986-08-22 | 1994-06-14 | 発光イムノアッセイ用トレーサー |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62206622A Expired - Lifetime JPH0699401B2 (ja) | 1986-08-22 | 1987-08-21 | 化学発光性アクリジン誘導体 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0647628B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0699401B2 (ja) |
| AT (2) | ATE132490T1 (ja) |
| CA (1) | CA1341402C (ja) |
| DE (4) | DE3628573C2 (ja) |
| DK (1) | DK171437B1 (ja) |
| ES (2) | ES2083949T3 (ja) |
| FI (1) | FI90542C (ja) |
| GR (1) | GR3019470T3 (ja) |
| IE (1) | IE74678B1 (ja) |
| NO (1) | NO171725C (ja) |
| PT (1) | PT85563B (ja) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0082636B2 (en) * | 1981-12-11 | 2006-10-18 | The Welsh National School of Medicine | Luminescent labelling materials and procedures |
| US4745181A (en) * | 1986-10-06 | 1988-05-17 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Polysubstituted aryl acridinium esters |
| EP0273115B1 (en) * | 1986-10-22 | 1994-09-07 | Abbott Laboratories | Chemiluminescent acridinium and phenanthridinium salts |
| FR2625565A1 (fr) * | 1987-12-31 | 1989-07-07 | London Diagnostics Inc | Esters, thioesters et amides chimioluminescents perfectionnes, et analyses les utilisant |
| NZ227506A (en) * | 1987-12-31 | 1992-06-25 | London Diagnostics Inc | Specific binding assays using chemiluminescent compounds |
| DE3844954C2 (de) * | 1988-02-20 | 1998-07-16 | Hoechst Ag | Spezielle chemilumineszierende Acridinderivate und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
| US6002007A (en) * | 1988-02-20 | 1999-12-14 | Dade Behring Marburg Gmbh | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays |
| US4950613A (en) * | 1988-02-26 | 1990-08-21 | Gen-Probe Incorporated | Proteted chemiluminescent labels |
| AU634716B2 (en) * | 1988-08-01 | 1993-03-04 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes |
| US5227489A (en) * | 1988-08-01 | 1993-07-13 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Stable hydrophilic acridinium esters suitable for liposome encapsulation |
| US5241070A (en) * | 1988-09-26 | 1993-08-31 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof |
| US5663074A (en) * | 1988-09-26 | 1997-09-02 | Chiron Diagnostics Corporation | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester conjugates and syntheses thereof |
| EP0511366A1 (en) * | 1990-11-21 | 1992-11-04 | Beckman Instruments, Inc. | Chemiluminescent compounds |
| DE4041080A1 (de) | 1990-12-21 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung eines analyten |
| DE4228839A1 (de) | 1992-08-29 | 1994-03-03 | Behringwerke Ag | Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung von Mediatoren |
| US5491072A (en) * | 1993-05-17 | 1996-02-13 | Lumigen, Inc. | N-alkylacridan carboxyl derivatives useful for chemiluminescent detection |
| BE1008216A4 (fr) * | 1994-01-25 | 1996-02-20 | Biocode Sa | Derives chemoluminescents heterocycliques. |
| WO1996000284A1 (de) * | 1994-06-24 | 1996-01-04 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Verfahren zur stabilisierung von hydrolyseempfindlichen molekülen oder molekülteilen |
| JPH10502958A (ja) * | 1994-07-15 | 1998-03-17 | アボツト・ラボラトリーズ | 化学発光信号の増強 |
| WO1996027785A1 (en) * | 1995-03-03 | 1996-09-12 | Abbott Laboratories | Article and method for conducting chemiluminescent reaction |
| US5731148A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-24 | Gen-Probe Incorporated | Adduct protection assay |
| EP0761652A1 (en) * | 1995-08-01 | 1997-03-12 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Acridinium compound having a plurality of luminescent groups and binding groups, and conjugate thereof |
| KR100259761B1 (ko) * | 1996-03-15 | 2000-07-01 | 타이도 나오카타 | 에스에이치기 표지용시약, 그의 제조방법 및 이를 이용한 표지법 |
| DK0915851T3 (da) * | 1996-07-16 | 2002-04-29 | Nederlanden Staat | Dibenzodihydropyridincarboxyl-estre og deres anvendelse i kemiluminiscens-analyse-fremgangsmåder |
| BE1011206A4 (fr) * | 1997-06-11 | 1999-06-01 | Biocode Sa | Derives chimioluminescents heterocycliques. |
| EP1496050A1 (en) | 2003-07-08 | 2005-01-12 | Roche Diagnostics GmbH | Novel chemiluminescent compounds and their use |
| WO2005015215A1 (en) | 2003-07-30 | 2005-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel chemiluminescent compounds and their use |
| WO2005015214A1 (en) | 2003-07-30 | 2005-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel chemiluminescent compounds and their use |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1461877A (en) * | 1974-02-12 | 1977-01-19 | Wellcome Found | Assay method utilizing chemiluminescence |
| GB2008247B (en) * | 1977-11-17 | 1982-12-15 | Welsh Nat School Med | Detecting or quantifying substances using labelling techniques |
| EP0082636B2 (en) * | 1981-12-11 | 2006-10-18 | The Welsh National School of Medicine | Luminescent labelling materials and procedures |
-
1986
- 1986-08-22 DE DE3628573A patent/DE3628573C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-22 DE DE3645292A patent/DE3645292C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-08-19 ES ES87112022T patent/ES2083949T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-19 AT AT87112022T patent/ATE132490T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-08-19 ES ES94119395T patent/ES2182835T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-19 DE DE3752357T patent/DE3752357D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-19 AT AT94119395T patent/ATE223903T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-08-19 EP EP94119395A patent/EP0647628B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-19 EP EP87112022A patent/EP0257541B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-19 DE DE3751659T patent/DE3751659D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-20 FI FI873609A patent/FI90542C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-08-20 PT PT85563A patent/PT85563B/pt unknown
- 1987-08-20 NO NO873520A patent/NO171725C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-08-21 IE IE224587A patent/IE74678B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-08-21 DK DK437187A patent/DK171437B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-08-21 CA CA000545036A patent/CA1341402C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-21 JP JP62206622A patent/JPH0699401B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-06-14 JP JP6131617A patent/JP2766780B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-03-29 GR GR960400849T patent/GR3019470T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK437187A (da) | 1988-02-23 |
| FI90542C (fi) | 1994-02-25 |
| GR3019470T3 (en) | 1996-06-30 |
| EP0257541A3 (en) | 1988-11-30 |
| FI873609A (fi) | 1988-02-23 |
| NO171725C (no) | 1993-04-28 |
| NO873520L (no) | 1988-02-23 |
| IE960911L (en) | 1988-02-22 |
| FI90542B (fi) | 1993-11-15 |
| JPH0699401B2 (ja) | 1994-12-07 |
| PT85563A (de) | 1987-09-01 |
| NO873520D0 (no) | 1987-08-20 |
| EP0647628A1 (de) | 1995-04-12 |
| IE74678B1 (en) | 1997-07-30 |
| DE3752357D1 (de) | 2002-10-17 |
| EP0257541B1 (de) | 1996-01-03 |
| ATE132490T1 (de) | 1996-01-15 |
| NO171725B (no) | 1993-01-18 |
| ES2083949T3 (es) | 1996-05-01 |
| CA1341402C (en) | 2002-11-26 |
| PT85563B (pt) | 1990-05-31 |
| JP2766780B2 (ja) | 1998-06-18 |
| EP0647628B1 (de) | 2002-09-11 |
| FI873609A0 (fi) | 1987-08-20 |
| ATE223903T1 (de) | 2002-09-15 |
| DE3751659D1 (de) | 1996-02-15 |
| DE3628573C2 (de) | 1994-10-13 |
| EP0257541A2 (de) | 1988-03-02 |
| JPS6357572A (ja) | 1988-03-12 |
| DK171437B1 (da) | 1996-10-28 |
| DE3628573A1 (de) | 1988-02-25 |
| ES2182835T3 (es) | 2003-03-16 |
| IE872245L (en) | 1988-02-22 |
| DE3645292C2 (de) | 1997-12-11 |
| DK437187D0 (da) | 1987-08-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH07179428A (ja) | 発光性化合物 | |
| US5532171A (en) | Phenothiazine derivatives, their production and use | |
| EP0273115B1 (en) | Chemiluminescent acridinium and phenanthridinium salts | |
| US6403807B1 (en) | Bridged fluorescent dyes, their preparation and their use in assays | |
| US4334069A (en) | Chemiluminescent phthalhydrazide-labeled hapten conjugates | |
| JP2602315B2 (ja) | 化学ルミネセンス性アクリジン誘導体 | |
| CA2478110A1 (en) | Novel fluorescent label compounds | |
| US4225485A (en) | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled polypeptides and proteins | |
| US4226993A (en) | Amino-functionalized phthalhydrazides | |
| US4238395A (en) | Dimethyl 7-[ω-N-(phthalimido)alkyl]aminonaphthalene-1,2-dicarboxylates | |
| US4297273A (en) | Chemiluminescent phthalhydrazide-labeled protein and polypeptide conjugates | |
| US6002007A (en) | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays | |
| US4331808A (en) | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled haptens | |
| DK173875B1 (da) | Luminescerende forbindelse og luminescensimmunanalyse, hvor den anvendes | |
| US4226992A (en) | Amino-functionalized naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrozides | |
| US4212805A (en) | Bis-phthalimides | |
| IE83772B1 (en) | Acridinium derivatives and their use in luminescence immunoassays | |
| IE19960911A1 (en) | Acridinium derivatives and their use in luminescence immunoassays | |
| DK173972B1 (da) | Luminescensforbindelse indeholdende kemoluminescerende acridiniumderivat samt luminescensimmunbestemmelse ved anvendelse af forbindelsen | |
| NO177639B (no) | Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080403 Year of fee payment: 10 |