NO177639B - Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen - Google Patents
Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen Download PDFInfo
- Publication number
- NO177639B NO177639B NO912447A NO912447A NO177639B NO 177639 B NO177639 B NO 177639B NO 912447 A NO912447 A NO 912447A NO 912447 A NO912447 A NO 912447A NO 177639 B NO177639 B NO 177639B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- conjugate
- sample
- light emission
- antibody
- antigen
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 16
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 title claims description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 2
- -1 methylene, ethylene, propylene Chemical group 0.000 claims description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 13
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002030 1,2-phenylene group Chemical group [H]C1=C([H])C([*:1])=C([*:2])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000001989 1,3-phenylene group Chemical group [H]C1=C([H])C([*:1])=C([H])C([*:2])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000001140 1,4-phenylene group Chemical group [H]C1=C([H])C([*:2])=C([H])C([H])=C1[*:1] 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 63
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 24
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 17
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 17
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- IYRYQBAAHMBIFT-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 IYRYQBAAHMBIFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KUKONHWWHFEDCS-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carbonyl chloride;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(C(=O)Cl)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 KUKONHWWHFEDCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- UQSQSQZYBQSBJZ-UHFFFAOYSA-M fluorosulfonate Chemical compound [O-]S(F)(=O)=O UQSQSQZYBQSBJZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZBCDNEFWYPYAGB-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carbonitrile Chemical compound C1=CC=C2C(C#N)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 ZBCDNEFWYPYAGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QBFNAVMTMIICEI-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carboxamide Chemical class C1=CC=C2C(C(=O)N)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 QBFNAVMTMIICEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YSHNVXLTJASRCS-UHFFFAOYSA-N 2-[acridine-9-carbonyl(benzenesulfonyl)amino]acetic acid Chemical compound C=12C=CC=CC2=NC2=CC=CC=C2C=1C(=O)N(CC(=O)O)S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 YSHNVXLTJASRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFSBYRQLGZRYBY-UHFFFAOYSA-N 4-[acridine-9-carbonyl(phenyl)sulfamoyl]benzoic acid hydrobromide Chemical compound Br.C1(=CC=CC=C1)N(C(=O)C=1C2=CC=CC=C2N=C2C=CC=CC12)S(=O)(=O)C1=CC=C(C=C1)C(=O)O KFSBYRQLGZRYBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical class O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 3
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- CUWXKUBGALEMGF-UHFFFAOYSA-N 3-[acridine-9-carbonyl-(4-methoxyphenyl)sulfamoyl]benzoic acid hydrobromide Chemical compound Br.COC1=CC=C(C=C1)N(C(=O)C=1C2=CC=CC=C2N=C2C=CC=CC12)S(=O)(=O)C1=CC(=CC=C1)C(=O)O CUWXKUBGALEMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- MFQSXJBIQGSPIN-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-[acridine-9-carbonyl-(4-methoxyphenyl)sulfamoyl]benzoate Chemical compound COC1=CC=C(C=C1)N(C(=O)C=1C2=CC=CC=C2N=C2C=CC=CC12)S(=O)(=O)C1=CC(=CC=C1)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 MFQSXJBIQGSPIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIVNNOITJRLSRC-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[acridine-9-carbonyl(phenyl)sulfamoyl]benzoate Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N(C(=O)C=1C2=CC=CC=C2N=C2C=CC=CC12)S(=O)(=O)C1=CC=C(C=C1)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 PIVNNOITJRLSRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N butyl acetate Chemical compound CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000002359 drug metabolite Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- MBXNQZHITVCSLJ-UHFFFAOYSA-N methyl fluorosulfonate Chemical compound COS(F)(=O)=O MBXNQZHITVCSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- NBOMNTLFRHMDEZ-UHFFFAOYSA-N thiosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1S NBOMNTLFRHMDEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 1H-imidazole Chemical group C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 2,2,5,8-tetramethyl-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound C1CC(C)(C)OC2=C1C(C)=C(O)C=C2C MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQGIZHVCKWLYLG-UHFFFAOYSA-N 2-(acridine-9-carbothioyloxy)acetic acid Chemical compound C(=O)(O)COC(=S)C=1C2=CC=CC=C2N=C2C=CC=CC=12 CQGIZHVCKWLYLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- KZCYXBGKUZGYFT-UHFFFAOYSA-N Br.C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C(=C12)C(=O)N Chemical compound Br.C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C(=C12)C(=O)N KZCYXBGKUZGYFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPFTUNCRGUEPRZ-QLFBSQMISA-N Cyclohexane Natural products CC(=C)[C@@H]1CC[C@@](C)(C=C)[C@H](C(C)=C)C1 OPFTUNCRGUEPRZ-QLFBSQMISA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- CWVZGJORVTZXFW-UHFFFAOYSA-N [benzyl(dimethyl)silyl]methyl carbamate Chemical compound NC(=O)OC[Si](C)(C)CC1=CC=CC=C1 CWVZGJORVTZXFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDQRMEBGHYKVLA-UHFFFAOYSA-N acridine-1-sulfonamide Chemical class C1=CC=C2C=C3C(S(=O)(=O)N)=CC=CC3=NC2=C1 BDQRMEBGHYKVLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POZJERCVPSQRFG-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)Cl)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 POZJERCVPSQRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940027998 antiseptic and disinfectant acridine derivative Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- QXOJVTZGWQBPOP-UHFFFAOYSA-N benzyl 2-(benzenesulfonamido)acetate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)CNS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 QXOJVTZGWQBPOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N methyl methanesulfonate Chemical compound COS(C)(=O)=O MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIRDBPQYVWXNSJ-UHFFFAOYSA-N methyl trifluoromethansulfonate Chemical compound COS(=O)(=O)C(F)(F)F OIRDBPQYVWXNSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005053 phenanthridines Chemical class 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical class C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N potassium cyanide Chemical compound [K+].N#[C-] NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- AAZYNPCMLRQUHI-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;2-propan-2-yloxypropane Chemical compound CC(C)=O.CC(C)OC(C)C AAZYNPCMLRQUHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical group 0.000 description 1
- 125000005000 thioaryl group Chemical group 0.000 description 1
- QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CS1 QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940103494 thiosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- QDNCLIPKBNMUPP-UHFFFAOYSA-N trimethyloxidanium Chemical compound C[O+](C)C QDNCLIPKBNMUPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
Oppfinnelsens gjenstand er kjemiluminescerende acridinfor-bindelser og deres anvendelse i luminescensimmunoanalyser.
Lumineseerende forbindelser har allerede mangfoldig anvendelse. De anvendes som indikatorer i bioanalyser, enzymimmunoanalyser og luminescensimmunoanalyser (sammenlign W.P. Collins "Alternative Immunoassays", Verlag John Wiley & Sons Ltd., Chichester, 1985), anvendes imidlertid også i nukleinsyre-hybridiseringsanalyser (sammenlign J.A. Matthews et al. "Analytical Biochemistry". 151, 205-209, 1985). Dessuten anvendes kjemiluminescerende forbindelser i vaeskekromatograf i, i strømningsforkning og i kunstige lyskilder.
Ved kjemiluminescensimmunoanalyser har spesielt to struktur-typer av kjemiluminescerende markeringsstoffer fått større betydning. Det dreier seg herved på den ene side om luminol-resp. isoluminolderivater, som er beskrevet ved H.R. Schroeder et al., "Methods in Enzymology", Academic Press Inc., New York, Vol. LVII, 1978, 424 og følgende, samt i GB-PS 2 008 247 og 2 041 920, i DE-PS 26 18 419 og 26 18 511, samt i EP-søknad 135 071. Et oversyn over den praktiske anvendelse av isoluminolforbindeler som luminescensindika-torer finnes hos W.G. Wood, "J. Clin. Chem. Clin. Biochem." 22, 1984, 905-918.
På den annen side har også acridiniumesterforbindelser funnet anvendelse som kjemiluminescerende markeringsstoffer. Slike acridiumestere er kjent fra US-PS 3 352 791, GB-PS 1 316 363 og 1 461 877, samt fra EP-søknad 82 636. Anvendelsen av acridiniumestere som markeringsstoffer i immunoanalyser er omtalt i Weeks et al., "Clin. Chem." 29/8 (1983), 1474-1479. Også anvendelsen av fenantridiniumestere som markeringsstoff i luminescensimmunoanalyser er allerede kjent fra EP-søknad 170 415.
Kjemiluminescensen av acridiniumestere kan startes ved tilsetning av alkalisk I^C^-oppløsning. For mekanismen av kjemiluminescensen har F. McCapra, "Acc.Chem.Res." 9, 201, 1976, gitt en overbevisende forklaring. Derved er tydelig typen av den avspaltbare gruppe avgjørende så vel for lysquantutbyttet som også for den hydrolyttiske stabilitet.
De hittil allerede kjente acridiniumestere har i forhold til luminol- og isoluminolforbindelsene fordelen av høyere lysquantutbytte, som også ikke påvirkes av til indikatoren bundede proteiner (sammenlign Weeks et al., "Clin.Chem." 29/8
(1983), 1474-1479).
Skjønt de fra EP-søknad 82 636 kjente acridiniumfenylestere ved energisering av kjemiluminescensen ved milde oksydasjons-midler, utmerker seg ved en høy påvisningsfølsomhet, har de for den praktiske anvendelse forstyrrende ulemper. Fremfor alt er fenylesterbindingene i vandige systemer også allerede ved værelsestemperatur meget labil. Dertil kommer at under de der angitte oksydasjonsbetingelsene viser acridiniumfenyl-esterene en lysemmisjon som er først sterkt avsluttet efter ca. 10 sek., det vil si til over 95 #. Sammenligning hertil har andre ikke isotopiske analysefremgangsmåter meget kortere måletider, og muliggjør derved en høyere prøveproduksjon.
Oppfinnelsens oppgave var derfor å stille til disposisjon nye acridiniumforbindelser som ved høy lysquanteutbytte har en hurtigere reaksjonskinetik og dermed muliggjør kortere måletider for en luminescensimmunoanalyse.
Det ble nå funnet at disse krav oppfylles av kjemiluminescerende forbindelser som inneholder acridiniumderivater med formel I
der
R<1> er hydrogen, C1_4alkyl, R2 og R<3> er hydrogen, R<4> er en substituert sulfonamidgruppe med formel V
eller med formel VI eller en tioalkyl- eller tioarylrest med formel II
hvorved
X er en metylen-, etylen-, propylen- eller en orto-, meta-eller parafenylengruppe og R<5> er en reaktiv gruppe,
A~ er et anion som ikke påvirker kjemiluminescensen, og R<6> i formel V og VI er fenyl eller naftyl som også kan være substituert med C^_4alkoksy,
bundet direkte til eller over et bro-molekyl til et protein, et polypeptid eller til et annet stoff av biologisk interesse under dannelse av et stabilt, immunologisk aktivt konjugat.
Stoffer av biologisk interesse er fremfor alt antigener. Under dette begrep faller også hormoner, steroider, lege-midler, legemiddelmetabolitter, toksiner, alkaloider og også antistoffer.
Anionene som ikke påvirker kjemiluminescensen kan være et tetrafluoroborat-, perklorat-, halogenid-, alkylsulfat-, halosulfonat-, alkylsulfonat- eller arylsulfonatantion. Også et hvert annet anion kan anvendes så vidt det ikke slukker eller svekker kjemiluminescensen.
Med aryl menes aromatiske hydrokarboner, spesielt fenyl og naftyl. Med heteroatomholdige aromatiske grupper menes aromatiske hydrokarboner som inneholder et nitrogen- eller oksygenatom, spesielt kinolin, indol, pyrol og pyridin. Med halogener menes fluor, klor, brom og jod.
De substituerte aminogrupper er fortrinnsvis C^_4~alkyl-eller Ci_4-dialkylaminer, idet alkylrestene på sin side for eksempel kan være monosubstituert med hydroksy. Likeledes jan det ved de substituerte aminer dreie seg om en morfolinrest. De for R<2> og R<3> angitte alkoksyrester er fortrinnsvis slike med 1 til 4 C-atomer i alkyldelen.
De for X angitte forgrenede eller uforgrenede alifatiske grupper er fortrinnsvis C-j^alkylengrupper.
Vanligvis velges acridiniumderivater der X betyr en metylen-, etylen-, propylen- eller en orto-, meta- eller para-fenylen-gruppe. Til forbedring av acridiniumderivatenes vannopp-løselighet kan disse grupper også ha heteroatomholdige hydrofile substituenter.
Av spesiell betydning for anvendelsesmulighetene av acri-diniumder ivatene ifølge oppfinnelsen er substituenten R^. Ved det egnede valg av denne gruppe får acridinderivatet en så høy reaktivitet, at det allerede under milde betingelser selektivt kan inngå en binding med en funksjonell gruppe av det biologiske stoff som skal påvises. Egnede reaktive grupper fremgår av følgende oppstilling:
I mange tilfeller har acridiniumsalter ifølge oppfinnelsen hvor R<5> betyr en gruppe med formel III vist seg egnet:
Dessuten foretrekkes også acridiniumforbindelser der R<1> er en metylgruppe. Spesielt ofte anvendes acridiniumforbindelser ifølge oppfinnelsen som tilsvarer formel IV:
der A og X har ovennevnte betydning.
Når i acridiniumderivatene ifølge oppfinnelsen resten R<4> er en sulfonamidrest, kan den fortrinnsvis tilsvare formel V: eller formel VI: i det X og R15 har den ovenfor nevnte betydning, og R^ i formel V kan bety en Ci_irj-alkyl- eller C^_10-alkenylrest, en fortrinnsvis med C^_4-alkylmono- eller disubstituert aminogruppe, en morfolino-, en benzyl- eller en arylgruppe som også kan være substituert med hydroksy, amino, 4alkoksy eller aryloksy, og R<6> i formel VI i tillegg også kan bety hydrogen.
Typiske representanter av disse klasser av acridiniumderivater ifølge oppfinnelsen tilsvarer formel VII:
der Å og X har ovennevnte betydninger:
Ved foreliggende oppfinnelse stilles det altså til disposisjon to nye klasser av acridiniumf orbindelser idet den ene klasse utmerker seg ved en tiolestergruppering og dne andre ved en sulfonamidstruktur. Acridiniumacylsulfonamidderivatene har en høyere stabilitet, tiolesteren er en hurtigere kinetikk enn de tidligere kjente acridiniumfenylesterfor-bindelsene. Begge forbindelsesklasser utmerker seg dessuten ved et høyere lysutbytte.
En betydelig fordel ved acridiniumforbindelsen ifølge oppfinnelsen med tiolesterholdige avspaltbare grupper, i forhold til de u fra EP-søknad 82 636 kjente acridiniumfenylestere, ligger i den vesentlig hurtigere reaksjons-kinetikk av lysemisjonen. Således gir den ifølge eksempel 1 fremstilte acridiniumtioester ifølge oppfinnelsen (forbindelse 6) ved 1 sekunds måletid, et rundt faktor 10 høyere lysutbytte under de samme oksydasjonsbetingelsene. Dette høye lysutbytte ved samtidig korte måletider, muliggjør et vesentlig høyere prøveproduksjon til luminometeret.
Således viser fig. 1 kinetikken av lysemisjonen av antistoff-konjugat fra den ifølge eksempel 1 fremstilte acridiniumtioester (forbindelse 6) og fig. 2 denne av antistoffkonjugatet av 4-(2-succinimidyl-oksykarbonyletyl)-fenyl-10-metyl-acidinium-9-karboksylat-metosulfat (EP-søknad 82 636, side 10). 100 "pl av de respektive traceroppløsninger energiseres ved tilsetning av 350 pl (0,05 m KCl/NaOH-buffer, pH 13 + 0,1 % H2O2 til kjemiluminescens og opptegnes over et tidsrom på 10 sekunder.
I figur 1 oppnås den maksimale lysemisjon allerede efter 0,66 sek. og er efter 0,88 sek. allerede falt igjen til halvparten. Derimot oppnås i figur 2 den maksimale lysemisjon først efter 1,77 sek. og er først efter 2,88 sek. igjen falt til halvparten.
Helt uventet er at ved amidnitrogenet sulfonylsubstituerte acridinium-9-karboksylsyreamider har en utmerket kjemiluminescens, for det er kjent at acridinium-9-karboksylsyreamid i motsetning til acridinium-9-karboksylsyreesteren ikke viser kjemiluminescens (sammenlign. F. McCapra i "W. Carruthers og J.K. Sutherland: Progess in Organic Chem.", vol. 8, 231-277, 1973, Butterworth, London).
Åcridinium-9-karboksylsyretioesterene ifølge oppfinnelsen lar seg fremstille på følgende måte: Acridin eller dets derivater med R<2> og/eller R<3> i de påkondenserte fenylringer omsettes efter den av Lehmstedt og Hundertmark i "Ber." 63, 1229 (1930) angitte fremgangsmåte i etanol/iseddik med kalsiumcyanid til 9-cyanacridin. Herav fremstilles efter omkrystallisering ved omsetning med svovelsyre og natriumnitritt tilsvarende den av Lehmstedt og Wirth i "Ber." 61, 2044, (1928), omtalte fremgangsmåte acridin-9-karboksylsyre henholdsvis R<2>/R<3->substituerte acridin-9-karboksylsyre. Ved omsetning av acridin-9-karb-oksylsyren henholdsvis den R<2>/R<3->substituerte acridin-9-karboksylsyren med tionyl fremstilles forbindelsen med formel
VIII
der Y er klor. I steden for et halogen kan det i forbindelsen VIII for Y også innføres en oksykarbonyl-Ci_5-alkyl-, oksokarbonylaryl- eller imidazolidgruppe.
De R<2>/R<3->substituerte acridinderivater kan enkelt fremstiles efter litteraturkjente fremgangsmåter. Slike synteser er eksempelvis omtal i: "Comprehensive Heterocyclic Chemistry", Editors A. Katritzky, C.W. Rees, vol. 2, s. 395ff, Pergamon Press, 1984 eller med "Heterocyclic Compounds", vol. 9, "Acridines and Cond." 2<nd> Edition, R.M. Acheson, John Wiley and Sons, 1973.
Syrekloridet (VIII) omsettes derefter med en tiolkarboksyl-syre med formel IX,
for eksempel med 2-merkaptobenzosyre under alkaliske betingelser til tiolesterkarboksylsyre som derefter forestres med en for fremstilling av resten R^ egnet forbindelse, for eksempel med N-hydroksysuccinimid. Derefter alkyleres acridinforbindelsene efter litteraturkjente fremgangsmåter i 10-stilling. For en metylering egner seg fremfor alt trimetyloksoniumtetrafluorsulfonat, imidlertid oppnår man også med dimetylsulfonat, metylfluorsulfonat, toluensulfon-syremetylester eller trifluorometansulfonsyremetylester gode utbytter av den kjemiluminescerende acridiniumforbindelse. Til fremstilling av acridiniumsulfonamidderivatene ifølge oppfinnelsen går man likeledes ut fra acridin-9-karboksyl-syreklorid (VIII). Denne forbindelse omsettes derefter med et primært eller sekundært sulfonamid, fortrinnsvis med en beskyttet sulfonamidkarboksylsyre med formel X eller formel XI
der X og R^ har den ovenfor nevnte betydning og Z betyr en rest som beskytter karboksygruppen som derefter avspaltes. For eksempel kan det for denne reaksjon som beskyttelses-gruppe anvendes en benzensulfonylglycinbenzylester. Den efter avspaltning av beskyttelsesgruppen dannede syre overføres derefter til resten R^ med en egnet imid, for eksempel med N-hydroksysuccinimid. Herav fremstilles det kjemiluminescerende acridiniumforbindelser ifølge litteraturkjente fremgangsmåter ved alkylering ved nitrogenet i 10-stilling.
De dannede acridiniumforbindelser lar seg derefter omsette med et stoff av biologisk interesse, for eksempel et antigen, et antistoff, et hormon, et legemiddel, en legemiddelmeta-bolit, et toksin eller et alkaloid, til en luminescerende forbindelse. Derved bindes acridiniumderivatet enten direkte eller over et bromolekyl som polylysin, polyglutaminsyre eller polyvinylamid, til det biologiske interessante stoff under dannelse av et stabilt immunologisk aktivt konjugat. Dette konjugat betegnes også som tracer og anvendes i den nedenfor omtalte luminescensimmunoanalyse. For luminescensimmunoanalysen ifølge oppfinnelsen til bestemmelsen av et antigent stoff i en vaeskeprøve efter en kompetitiv eller en sandwichfremgangsmåte kreves minst en immunologisk aktiv komponent som er immobilisert på en fast fase og dessuten den luminescerende tracer. Luminescensimmunoanalysen kan nå gjennomføres på forskjellig måte.
En mulighet består i at man inkuberer det med antigenet spesifikt reagerende immobiliserte antistoff med en prøve av væsken som skal undersøkes på et konjugat av antigenet og et kjemiluminescerende acridiniumderivat (antigen-tracer), separerer prøven og den ikke-bundne tracer, sammenfører den bundne tracer med et oksydasjonsmiddel for å frembringe en lysemisjon og derefter bestemmer mengden av det tilstedeværende antigen fra den målte styrke av lysemisjonen.
En annen mulighet for gjennomføring av luminescensimmunoanalysen består i at man inkuberer etmed antigenet spesifikt reagerende immobilisert antistoff med en prøve av væsken som skal undersøkes med et konjugat fra et andre spesifikt reagerende antistoff og et kjemiluminescerende acridiniumderivat, separerer prøven og det ikke-bundne markerte konjugat, sammenfører det bundne markerte konjugat med et oksydasjonsmiddel for å frembringe en lysemisjon, og bestemmer mengden av tilstedeværende antigener fra den målte styrke av lysemisjonen.
De ovenfor luminescensimmunoanalyser kan også gjennomføres slik at man separerer væsken som skal undersøkes fra immobilisert antistoff før tilsetning av det markerte konjugat.
I en annen ifølge oppfinnelsen gjennomførbar luminescensimmunoanalyse, er det ikke antistoffet men antigenet som er immobilisert. Således kan et ved antistoffet spesifikt reagerende immobilisert antigen inkuberes med en prøve av væsken som skal undersøkes og en oppløsning av et konjugat fra antistoffet, og et kjemiluminescerende acridiniumderivat hvorefter prøven separeres fra det ikke-bundne markerte konjugat, og det bundne markerte konjugat sammenføres med et oksydasjonsmiddel. Derefter opptrer en lysemisjon fra hvis styrke kan bestemmes mengden av tilstedeværende antigen.
En ytterligere variant består i at man inkuberer et med antistoffet spesifikt reagerende immobilisert antigen med en oppløsning av et konjugat av antistoffet, og et kjemiluminescerende acridiniumderivat, separerer det ikke omsatte markerte konjugat, tilsetter en prøve av væsken som skal undersøkes, igjen separeres prøven og sammenfører det bundne markerte konjugat med et oksydasjonsmiddel for å frembringe en lysemisjon, og fra denne- derefter bestemmer mengden av tilstedeværende antigen.
Endelig er luminescensimmunoanalysen også gjennomførbar således at man inkuberer et med antistoffet spesifikt reagerende immobilisert antigen med en oppløsning av et konjugat av antistoffet og et kjemiluminescerende acridiniumderivat, tilsetter en prøve av væsken som skal undersøkes, separerer prøven og ikke-bundet konjugat, sammenfører det bundne markerte konjugat med et oksydasjonsmiddel og derefter bestemmer mengden av tilstedeværende antigen fra den målte lysemisjon.
Fremstillingen av acridiniumforbindelsen ifølge oppfinnelsen vises i eksemplene 1 til 3.
Eksempel 1
9- cyanacridin ( 1)
Til acridin (10 g) i 45 ml etanol setter man 3,3 ml iseddik og dråpevis en oppløsning av 5,25 g kaliumcyanid i 8 ml vann, oppvarmer reaksjonsblandingen i 2 timer under tilbake-løp, avkjøler og fjerner de flyktige bestanddeler under vakuum. Resten utrøres med 30 ml 2 N NaOH, suges fra og, efter to gangers vasking med 2 N NaOH og vann, hensettes noen tid fuktig i luften. Råproduktet røres ut i metylenklorid, uoppløst stoff suges fra og vaskes med metylenklorid, de forenede organiske faser sammenføres og det rå 9-cyanacridin omkrystalliseres fra n-butylacetat.
Utbytte: 50 % Smeltepunkt: 183-5°C.
IR: 2 230 cm-<1>.
Acridin- 9- karboksylsyre ( 2 )
9-cyanacridin (5 g) settes langsomt porsjonsvis til 40 ml konsentrert H2SO4 og blandingen oppvarmes i 2 timer ved 90-95°C efter tilsetning av 8,5 g NaN0£ og omrøres ytterligere i 2 timer ved denne temperatur. Den varme oppløsning helles
under hurtig omrøring i 620 ml isvann, precipitatet suges fra og oppløses i minst mulig 2 N NaOH. Oppløsningen filtreres og surgjøres med 50 #-ig H2SO4 hvorefter den utfelte acridin-9-karboksylsyre suges fra og tørkes under vakuum.
Utbytte: 95 % Smeltepunkt 288-9°C.
IR: 3440(br), 3200(br), 2600-2500(br), 1980; 1650; 1605; 1420"<1>.
Acridin- 9- karboksvlsvreklorid- hvdroklorid ( 3)
Acridin-9-karboksylsyre (5 g) settes porsjonsvis til 50 ml nydestillert SOClg og oppvarmes i 5 timer under tilbakeløp hvorefter den klare oppløsning konsentreres ved destillering inntil begynnende precipitering og denne fullføres ved cyklo-heksantilsetning og det hele avkjøles. Frasugning av precipitatet og tørking i vakuum gir acridin-9-karboksylsyre-kloridhydroklorid.
( Fenyl- 2'- karboksvlsvrelacridin- 9- tiokarboksvlat ( 4) Acridin-9-karboksylsyreklorid-hydroklorid (30 g) suspenderes i 720 ml metylenklorid. det tilsettes tiosalicylsyre (17,7 g) og 50 ml trietylamin og oppløsningen som er blitt klar, efteromrøres i 10 minutter ved værelsestemperatur. Efter fjerning av oppløsningsmidlet blandes resten med 35 g soda og 1 400 ml vann' og den resulterende oppløsning dampes inn til opptreden av en utfelling hvorefter denne suges fra. Filtratet mettes med NaCl og det derved dannede precipitat suges fra. Den vandige oppløsning av de forenede precipitater surgjøres ved 80°C med iseddik, det dannede produkt suges fra og tørkes i vakuum.
Utbytte: 80 % Smeltepunkt: 261-5°C
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 7,6-8,4 ppm, kompleks multiplett
IR: 1680 cm-<1> (s), 1720 (m) 1260 (s).
2 ' - ( succinimidoyloksykarbonyl) fenvlacridin- 9- tiokarboksvlat-151
Til suspensjonen av 10 g av tiolesterkarboksylsyren i 190 ml tørr" tetrahydrofuran setter man ved 0°C 3,2 g N-hydroksysuccinimid, derefter, ved -20°C, 6,9 g dicykloheksylkarbodi-imid (DCC) og det omrøres ved -20° C i 2 timer og derefter natten over ved værelsestemperatur. Efter tilsetning av 0,28 ml iseddik omrøres det il time, derefter tilsettes eddik-ester (25 ml) og precipitatet filtreres fra. Filtratet dampes inn og gir efter omkrystallisasjon fra klorbenzen et blekgult 2'-(succinimidoyloksykarbonyl)fenylacridin-9-tiokarboksylat.
Utbytte: 80 % Smeltepunkt: 198-200°C
IR: 1810 cm-<1>, 1780, 1745, 1225, 1205
NMR (DMSO), 100 MHz): S = 2,95 ppm (s, 4H), 7,7-8,4 pm (m,12H).
2'-( succinimidoyloksykarbonyl) fenyl- 10- metylacridinium- 9-tiokarboksylat- tetrafluoroborat ( 6) 3 g N-hydroksysuccinimidester (5) varmes opp med 7,8 g trimetyloksoniumtetrafluoroborat i 40 ml 1,2-dikloretan i 8 timer ved 80° C og efteromrøres natten over ved værelsestemperatur. Precipitatet filtreres fra og kokes ut med 1,2-dikloretan. De forenede organiske faser dampes inn og omkrystalliseres fra aceton-diisopropyleter.
Utbytte: 40 % Smeltepunkt: 245°C.
IR: 3440 cm-<1> (br), 1800, 1780, 1740 (s), 1670, 1065 (s), NMR DMSO, 100 MHz); § = 3,0 ppm (s, 4H), 4,95 ppm (s, svakt utbredt, 3H), 7,9-8,6 (m, 10H), 9,9 ppm (d, 2H).
Eksempel 2
Fremstillingen av succinimidoyloksykarbonylmetyl-10-metyl-acridninium-9-tiokarboksylat-tetrafluoroborat, foregår analogt fremstillingen av (6) idet man går ut fra syreklorid (3) og tiglykolsyre. Utbyttene av de enkelte syntesetrinn, samt den spektroskopiske karakterisering av produkt (7) til
(9) er angitt nedenfor:
Karboksymetylacridin- 9- tioarboksylat ( 7 )
Utbytte: 60 Smeltepunkt: 218°C (de kompo)
IR: 3440 cm_<1>(br), 2400(br), 1950(br), 1710(m), 1660(s),
1070(m)
NMR (DMSO, 100 MHz): 5 = 4,25 ppm (s, 2H); 7,6-8,4 (m, 8H).
Succinimidoyloksykarbonylmetylacridin- 9- tiokarboksylat ( 8) Utbytte: 80 #
IR: 3440 cm-<1>(br), 2930, 1820, 1785, 1740(s), 1205, 1165
NMR (DMSO, 100 MHz); S = 2,95 ppm (s, 4H), 4,77 ppm (s, 2H), 7,6-8,3 ppm (m, 8H).
Succinimidoyloksykarbonylmetyl- 10- metylacridinium- 9- tiokarboksylat- tetrafluoroborat ( 9)
Utbytte: 40 # Smeltepunkt: 250°C
IR: 3440 cm_<1>(br), 1810, 1780, 1735(s), 1538, 1350, 1060
NMR (DMSO, 100 MHz): § =2,9 ppm (s, 4H), 4,8 (s, 2H), 4,9 ppm, (s, 3H), 7,7-9,0 (m, 8H).
Eksempel 3
N- benzensulfonyl- N-( benzyl ok sykarbony Ime tyl ) acridin- 9-karboksylsyreamid ( 10)
3,3 g N-benzensulfonylglycinbenzylester blandes i 110 ml tetrahydrofuran med 130 mg 4(dimetylamino )-pyridin og 6 ml trietylamid, efter 10 minutter tilsetter man 3 g acridin-9-karboksylsyreklorid-hydroklorid og varmer opp den dannede suspensjon i 6 timer under tilbakeløp. Utfellingen suges fra, oppløsningsmidlet fjernes, resten tas opp i metylenklorid og
røres kort ut med 2 N NaOH. Den organiske fase dampes inn efter tørking over MgS04 og den resulterende rest omkrystalliseres fra toluen/heptan.
Utbytte: 70 1o Smeltepunkt: 58° C
IR: 3440 cm_<1>(br), 1735, 1680, 1357, 1165
NMR (DMSO, 100 MHz): § = 5,2 ppm (s, 2H), 5,3 ppm (s, 2H), 7,0-8,4 ppm (m, 18H).
N- benzensul f onyl- N-( karboksymetyl ) acridin- 9- karboksylsyre-amid( 11)
I g N-benzensulfonyl-N(benzyloksykarbonylmetyl)acridin-9-karboksylsyreamid i 60 ml iseddik hydrogeneres under tilsetning av 2 ml konsentrert HC1 og Pd/C (10 %) ved værelsestemperatur og normaltrykk; efter reaksjonens avslutning suges katalysatoren fra og fra filtratet får man ved inndamping karoksylsyren som gult faststoff.
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 5,0 ppm (s, 2H), 7,1-8,5 ppm (m, 13H).
Forbindelsen (11) omsettes med N-hydroksysuccinimid analogt fremstillingen av (5) til N-benzensulfonyl-N-(succinimidoyloksykarbonylmetylacridin-9-karboksylsyreamid (12). (12) quarterniseres med trimetyloksoniumtetrafluoroborat, som omtalt i forbindelse med (6) til N-benzensulfonyl-N-(succinimidoyloksykarbonylmetyl)-10-metylacridinium-9-karboksylsyre-amid-tetrafluoroborat (13).
Eksempel 4
N- fenyl- N( 4 - b enzy 1 ok s yk ar bonyl benzen sul f onyl ) acridin- 9-karboksylsyreamid ( 14)
II g 4(N-fenylsulfamido)benzosyrebenzylester blandes i 300 ml metylenklorid med 360 mg 4(dimetylamino)pyridin og 16,6 ml trietylamin og efter 10. minutter tilsetter man 8,34 g acridin-9-karboksylsyreklorid-hydroklorid (3) og oppvarmer i 16 timer under tilbakeløp. Den avkjølte oppløsning røres kort ut med 2 N NaOH, den separerte organiske fase vaskes med vann, tørkes over Na2S04 og dampes inn. Resten omkrystalliseres fra toluen/heptan.
Utbytte: 70 % Smeltepunkt: 161-163°C
NMR (DMSO, 100 MHz): 5 = 5,5 ppm (s, 2H), § = 6,8-8,6 ppm (m, 22H).
N- f enyl - N-( 4- karboksybenzensulfonyl) acridin- 9- karboksylsyre-amid- hydrobromid ( 15)
8,58 g N-fenyl-N-(4-benzyloksykarbonylbenzensulfonyl)acridin-9-karboksylsyreamid (14) oppvarmes i 30 ml 33 % HBr i iseddik i 2 timer ved 60°C, efter avkjøling tilsetter man 60 ml diisopropyleter, suger fra presipitatet og tørker under vakuum.
Utbytte: 95 % Smeltepunkt: 225°C
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 6,8-9 ppm (m)
N- fenyl- N-( 4- succinimidoyloksykarbonylbenzensulfonyl )-acridin- 9- karboksylsyreamid ( 16)
5,63 g N-fenyl-N-(4-karboksybenzensulfonyl)acridin-9-karboksylsyreamid-hydrobromid (15) i 250 ml tetrahydrofuran blandes med 2,8 ml trietylamin og avkjøles til -15°C og blandes med 0,96 ml klormaursyreetylester. Man efteromrører i 20 minutter, tilsetter 1,15 g N-hydroksysuccinimid, omrører i 3 timer ved -15° C, lar det tine til værelsestemperatur og efteromrører over natten. Precipitatet suges fra, filtratet dampes inn, resten tas opp med metylenklorid, den resulterende oppløsning vaskes med vann, NaHC03~oppløsning og vann og tørkes over Na2S04. Den organiske fase dampes inn og resten' omkrystalliseres fra toluen.
Utbytte: 50 % Smeltepunkt: 226°C (under spaltning). NMR (DMSO, 100 MHz): § = 2,95 ppm (s, 4H), S = 6,8-8,7 ppm (m, 17H). N- f enyl- N-( 4- succinimidovioksykarbonylbenzensul fonyl )- 10-metylacridinium- 9- karboksylsyreamid- fluorosulfonat ( 17). 1,16 g N-feny-N-(4-succinimidoyloksykarbonylbenzensulfonyl)-acridin-9-karboksylsyreamid (16) omrøres i 60 ml 1,2-dikloretan med 0,3 ml metylf luorosulf onat i 24 timer ved værelsestemperatur, det dannede precipitat suges fra og tørkes i vakuum.
Utbytte: 65 %
IR: 3420 cm_<1>(br), 3100(br), 1805(w), 1770(m), 1745(s), 1700(m), 1385(m), 1280(m), 1255(s), 1230(s), 1205(s)
NMR (DMSO, 100 MHz): § = 2,95 ppm (s, 4H), S = 4,75 ppm (s, br, 3H), S = 7,0-9,0 ppm (m, 17H).
Massespektrum: m/z = 594 : M<+> (kation).
Eksempel 5
Fremstillingen av N-(4-metoksyfenyl)-N-(4-succinimidoyloksy-karb onyl benzen sul f onyl) -10-metylacr i dinium-9 -karboksyl syre-amid-fluorosulfonat (21), foregår analogt fremstillingen av (17) (se eksempel 4), idet man går ut fra 4-[N- (4' -metoksy-fenyl)sulfamido]-benzosyrebenzylester og acridin-9-karboksyl-syreklorid-hydroklorid (3). Utbyttene av de enkelte syntesetrinn samt den spektroskopiske karakterisereing er angitt nedenfor.
N- ( 4- metoksyf enyl )- N- ( 4- benzvloksykarbonyl- benzensulfonyl )-acridin- 9- karboksylsyreamid ( 18)
Utbytte: 70 % Smeltepunkt: 182-183°C
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 3,5 ppm (s, 3H), 5 = 5,5 ppm (s, 2H), S = 6,35-6,63 ppm (d, br, 2H), S = 7,05-7,2 ppm (d, br, 2H), $ = 7,35-8,5 ppm (m, 17H).
N-( 4- metoksyf enyl)- N-( 4- karboksybenzensulfonyl ) acridin- 9-karboksylsyreamid- hydrobromid ( 19 ).
Utbytte: 95 % Smeltepunkt: 273°C (under spalting) NMR (DMSO, 100 MHz): $ = 3,5 ppm (s, 3H), § = 6,4-6,6 ppm
(d, br, 2H), S = 7,05-7,2 ppm (d, br, 2E), S = 7,7-8,5 ppm (m, 12H).
N-( 4- metoksyfenyl)- N-( 4- succinimidoyloksykarbonylbenzensulfonyl) acridin- 9- karboksylsyreamid ( 20 ).
Utbytte: 50 % Smeltepunkt: 232-234 °C
NMR (DMSO, 100 MHz): § = 2,95 ppm (s, 4H), § = 3,5 ppm (s, 3H), $ = 6,4-6,6 ppm (d, br, 2H), S = 7,05-7,25 ppm (d, br, 2H), S = 7,8-8,6 ppm (m, 12H).
IR: 3050 cm-<1>, 1805(w), 1780(m), 1740(s), 1700(m), 1505(m), 1370(m), 1250(m), 1200(s), 1185.
N-( 4- metoksyfenyl)- N-( 4- succinimidoyloksykarbonylbenzensulfonyl)- 10- metylacridinium- 9- karboksylsyreamid- fluorosulfonat ( 21)
Stoffet faller ikke ut ved reaksjonen, det utvinnes ved inndamping av oppløsningen og utrøring av resten av diisopropyleter.
Utbytte: 80 %
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 2,95 ppm (s, 4H) , S = 3,5 ppm (s, 3H), § = 4,8 ppm (s, br, 3H), § = 6,45-6,7 ppm (d, br, 2H), S = 7,2-7,4 ppm (d, br, 2H); S = 7,7-9 ppm (m, 12H).
Massespektrum: m/z = 624 M<+> (kation)
IR: 3440 cm_<1>(br), 3100, 2950, 1805(w), 1775(m), 1740(s), 1695(m), 1610(m), 1505(m), 1375(m), 1280(m), 1250(s), 1205(s ) .
Eksempel 6
Fremstillingen av N-(4-metoksyfenyl )-N-(3-succinimidoyloksykarbonyl-benzensulfonyl)-10-metylacridinium-9-karboksylsyre-amid-fluorosulfonat (25) foregår analogt til fremstilingen av (17) (se eksempel 4) idet man går ut fra 3-[N-(4 '-metoksy-fenyl)sulfamido]-benzosyrebenzylester og acridin-9-karboksyl-syreklorid-hydroklorid (3). Utbyttet av de enkelte syntesetrinn, samt den spektroskopiske karakterisering er angitt nedenfor.
N-( 4- metoksyf enyl )- N- ( 3- benzvloksykarbonylbenzensulf onyl )-acridin- 9- karboksylsyreamid ( 22)
Utbytte: 70 % Smeltepunkt: 168-170°C
NMR (DMSO, 100 MHz): B =3,5 ppm (s, 3H), S = 5,45 ppm (s, 2H), § = 6,5 ppm (s, br, 2H), S = 7,1 ppm (br, 2H), S = 7,3-8,8 ppm (m, 17H).
N - ( 4- metoksyf enyl )- N- ( 3- karboksvlbenzensulf onyl ) acridin- 9-karboksylsyreamid- hydrobromid ( 23)
Utbytte: 90 % Smeltepunkt: 264°C
NMR (DMSO, 100 MHz): 5 = 3,5 ppm (s, 3H), S = 6,4-6,6 ppm (d, br, 2H), S = 7,0-7,2 ppm (d, br, 2H), S 7,6-8,8 ppm (m, 12H).
N- ( 4- metoksyfenyl)- N-( 3- succinimidoyloksykarbonylbenzensulfonyl) acridin- 9- karboksylsyreamid ( 24)
Utbytte: 50 SÉ Smeltepunkt: 223-225°C
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 2,95 ppm (s, 4H), § = 3,5 ppm (s, 3H), 5 = 6,4-6,6 ppm (d, br, 2H), S = 7,0-7,2 ppm (d, br, 2H), 5 = 7,4-8,9 ppm (m, 12H).
IR: 3500 cm_<1>(br), 3060, 2950, 2840, 1805(w), 1785(m) 1740(s), 1700(m), 1510(m), 1380(m), 1250(m), 1205(m), 1165(m).
N-( 4- metoksyfenyl)- N-( 3- succinimidoyloksykarbonylbenzen-sul f onyl)- 10- metylacrIdinium- 9- karboksylsvreamid- fluoro-sulf onat ( 25)
Utbytte: 90 %
NMR (DMSO, 100 MHz): S = 2,95 ppm (s, 4H), S = 3,55 ppm (s, 3H), S = 4,8 ppm (s, br, 3H), S = 6,45-6,7 (d, br, 2H), S = 7,05-7,3 ppm (d, br, 2H), S = 7,5-8,9 ppm (m, 12H).
IR: 3500 cm-<1> (br), 3080, 2950, 1805(w), 1780(m), 1740(s), 35 1700(m), 1610(m), 1510(m), 1380(m), 1250(s), 1205(s), 1170(s ).
Masse: m/z = 624 M<+> (kation).
Eksempel 7
Tracer- fremstilling for a- fetoprotein- kjemiluminescensimmuno-analvse
100 pl antistoff (1 mg/ml), 11,5 pl av den ifølge eksempel 1 fremstilte acridiniumtioester (forbindelse (6)) (1 mg/ml i DMSO og 600 pl konjugasjonsbuffer (0,01 M fosfat, pH 8,0) inkuberes i 15 minutter. Derefter tilsettes 200 pl lysin (10 mg/ml) og det hele inkuberes i ytterligere 15 minutter. Denne blanding overføres på en PD 10-søyle ("Sephadex" G 25 medium, 0,1 M fosfat, pH 6,3 som elueringsmiddel). 10 dråper/fraksjon samles. De enkelte fraksjoner undersøkes efter egnet fortynning på kjemiluminescensaktivitet (350 pl oksydasjonsmiddel: 0,1 % ' E- 2°2 1 °»1 N NaOH). Tracerf raks j onene (1. aktivitetstopp) samles og lagres ved 4°C.
Eksempel 8
Gjennomføring av a- feto<p>roteinkjemoluminescensimmunoanalyse. 50 pl standard/prøve og 150 pl buffer (fosfat; 0,1 M pH 6,3, 1 % Tween 20, 0,1 % storf ealbumin, 0,1 M NaCl, 0,01 % NaN3) rystes i 15 minutter med monoklonalt anti-AFP-antistoff-belagte smårør, derefter vaskes det med 2 x 1 ml buffer. 200 pl tracer tilsettes i egnet fortynning og rystes i 15 minutter. Igjen vaskes det med 2 x 1 ml buffer. Kjemilumin-escensmålingen startes med 350 pl oksydasjonsmiddel (0,1 % > H202 i 0,1 N NaOH, 2 sek. måletid).
Figur 3 viser det typiske forløp av en standardkurve av en immunokjemiluminometrisk analyse (ICMA) for a-fetoprotein
(AFP).
Claims (9)
1.
Luminescensforbindelse, karakterisert ved at den omfatter et acridiniumderivat med formel I
der
R<1> er hydrogen, C^_4alkyl, R<2> og R<3> er hydrogen, R<4> er en substituert sulfonamidgruppe med formel V
eller med formel VI
eller en tioalkyl- eller tioarylrest med formel II
hvorved
X er en metylen-, etylen-, propylen- eller en orto-, meta-eller parafenylengruppe og R<5> er en reaktiv gruppe,
A" er et anion som ikke påvirker kjemiluminescensen, og i formel V og VI er fenyl eller naftyl som også kan være substituert med C^_4alkoksy,
bundet direkte til eller over et bro-molekyl til et protein, et polypeptid eller til et annet stoff av biologisk interesse under dannelse av et stabilt, immunologisk aktivt konjugat.
2.
Anvendelse av en luminescens-forbindelse ifølge krav 1 som tracer ved bestemmelse av et antigenstoff i en væskeprøve i hvilken, i en kompetitiv eller en sandwich-fremgangsmåte minst en immunologisk aktiv komponent er immobilisert på en fast fase.
3.
Anvendelse ifølge krav 2 der a) et med et antigent, spesifikt reagerende, immobilisert antistoff inkuberes med en prøve av væsken som skal undersøkes og et konjugat av antigenet og en kjemiluminescerende acridiniumforbindelse ifølge krav 1, b) prøven og det ikke bundne, markerte konjugat separeres, c) det bundne, markerte konjugat sammenføres med et oksydasjonsmiddel for å frembringe lysemisjon, og d) mengden av tilstedeværende antigen bestemmes fra den målte styrke av lysemisjonen.
4.
Anvendelse ifølge krav 2 der væsken som skal undersøkes separeres fra immobilisert antistoff før tilsetting av det markerte konjugat.
5 .
Anvendelse ifølge krav 2 der a) et med et antigent, spesifikt reagerende, immobilisert antistoff inkuberes med en prøve av væsken som skal undersøkes og et konjugat av antigenet og en kjemiluminescerende acridiniumforbindelse ifølge krav 1, b) prøven og det ikke bundne, markerte konjugat separeres, c) det bundne, markerte konjugat sammenføres med et oksydasjonsmiddel for å frembringe lysemisjon, og d) mengden av tilstedeværende antigen bestemmer mengden av tilstedeværende antigen fra den målte styrke av lysemisjonen.
6.
Anvendelse ifølge krav 5 der væsken som skal undersøkes separeres fra det immobiliserte antistoff tilsetningen av det markerte konjugat.
7.
Anvendelse ifølge krav 2 der a) et med antistoffet spesifikt reagerende immobiliserte antigen inkuberes med en prøve av væsken som skal undersøkes og en oppløsning av et konjugat og antistoffet og den kjemiluminescerende acridinderivat ifølge krav 1, b) prøven av det ikke bundne markerte konjugat separeres, c) det bundne, markerte konjugat sammenføres med et oksydasjonsmiddel for å frembringe lysemisjon, og d) mengden av tilstedeværende antigen bestemmes fra den målte styrke av lysemisjonen.
8.
Anvendelse ifølge krav 2 der a) et med antistoffet spesifikt reagerende imobilisert antigen inkuberes med en oppløsning av et konjugat av antistoffet og en kjemiluminescerende acridiniumderivat ifølge krav 1, b) det ikke omsatte, markerte konjugat separeres, c) en prøve av væsken som skal undersøkes tilsettes, d) prøven igjen separeres, e) det bundne, markerte konjugat føres sammen med et oksydasjonsmiddel for å frembringe en lysemisjon, og f) mengden av tilstedeværende antigen bestemmes fra styrken av lys-emisjonen.
9.
Anvendelse ifølge krav 2 der a) et med antistoffet spesifikt reagerende immobiliserte antigen inkuberes med en oppløsning av et konjugat av antistoffet og en kjemiluminescerende acridiniumderivat ifølge krav 1, b) en prøve av væsken som skal undersøkes tilsettes, c) prøven og det ikke bundne konjugat separeres, d) det bundne, markerte konjugat føres sammen med et oksydasjonsmiddel for å frembringe en lysemisjon, og e) mengden av tilstedeværende antigen bestemmes fra den målte styrke av lysemisjonen.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NO912447A NO177639C (no) | 1986-08-22 | 1991-06-21 | Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3628573A DE3628573C2 (de) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | Chemilumineszierende Acridinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
NO873520A NO171725C (no) | 1986-08-22 | 1987-08-20 | Kjemiluminescerende acridinderivater |
NO912447A NO177639C (no) | 1986-08-22 | 1991-06-21 | Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO912447L NO912447L (no) | 1988-02-23 |
NO912447D0 NO912447D0 (no) | 1991-06-21 |
NO177639B true NO177639B (no) | 1995-07-17 |
NO177639C NO177639C (no) | 1995-10-25 |
Family
ID=27194753
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO912447A NO177639C (no) | 1986-08-22 | 1991-06-21 | Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
NO (1) | NO177639C (no) |
-
1991
- 1991-06-21 NO NO912447A patent/NO177639C/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO912447L (no) | 1988-02-23 |
NO912447D0 (no) | 1991-06-21 |
NO177639C (no) | 1995-10-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK171437B1 (da) | Kemiluminescerende acridinderivater og fremgangsmåde til deres fremstilling | |
US5532171A (en) | Phenothiazine derivatives, their production and use | |
US4334069A (en) | Chemiluminescent phthalhydrazide-labeled hapten conjugates | |
US5284951A (en) | Hydrolytically stable chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom | |
CA1339390C (en) | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays | |
JPS64662B2 (no) | ||
US4225485A (en) | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled polypeptides and proteins | |
US4226993A (en) | Amino-functionalized phthalhydrazides | |
US4238395A (en) | Dimethyl 7-[ω-N-(phthalimido)alkyl]aminonaphthalene-1,2-dicarboxylates | |
US6171520B1 (en) | Reagents for labeling SH groups, process for the preparation of them and method for labeling with them | |
US4297273A (en) | Chemiluminescent phthalhydrazide-labeled protein and polypeptide conjugates | |
NO177639B (no) | Luminescensforbindelse og luminescensanalyse under anvendelse av forbindelsen | |
US6002007A (en) | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays | |
US4331808A (en) | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled haptens | |
DK173972B1 (da) | Luminescensforbindelse indeholdende kemoluminescerende acridiniumderivat samt luminescensimmunbestemmelse ved anvendelse af forbindelsen | |
DK173875B1 (da) | Luminescerende forbindelse og luminescensimmunanalyse, hvor den anvendes | |
US4212805A (en) | Bis-phthalimides | |
US4226992A (en) | Amino-functionalized naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrozides | |
IE83772B1 (en) | Acridinium derivatives and their use in luminescence immunoassays | |
IE19960911A1 (en) | Acridinium derivatives and their use in luminescence immunoassays | |
NO303657B1 (no) | FremgangsmÕte for fremstilling av en luminiscent forbindelse samt anvendelse av den fremstilte forbindelsen i en luminiscens-immunoanalyse for bestemmelse av et antigenisk stoff i en vµskepr°ve | |
CA1150283A (en) | DIMETHYL 7-[.omega.-N-(PHTHALIMIDO)ALKYL]AMINO- NAPHTHALENE-1,2-CARBOXYLATE AND N-ALKYL DERIVATIVES THEREOF |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |