JPH07170869A - バレイショマイクロチューバーの生産方法 - Google Patents
バレイショマイクロチューバーの生産方法Info
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- JPH07170869A JPH07170869A JP6321407A JP32140794A JPH07170869A JP H07170869 A JPH07170869 A JP H07170869A JP 6321407 A JP6321407 A JP 6321407A JP 32140794 A JP32140794 A JP 32140794A JP H07170869 A JPH07170869 A JP H07170869A
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- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
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- Y10S47/03—Propagation of plant by cuttings
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 圃場で直接栽培することができる大型のマイ
クロチューバーを効率よく生産することができるバレイ
ショマイクロチューバーの生産方法を提供すること。 【構成】 糖濃度の高い培地中でバレイショ植物を日長
条件下で約１週間ないし約４週間培養する工程と、次い
で該植物を暗黒下でマイクロチューバーが生産されるま
で培養する工程を含む、バレイショマイクロチューバー
の生産方法を提供した。
クロチューバーを効率よく生産することができるバレイ
ショマイクロチューバーの生産方法を提供すること。 【構成】 糖濃度の高い培地中でバレイショ植物を日長
条件下で約１週間ないし約４週間培養する工程と、次い
で該植物を暗黒下でマイクロチューバーが生産されるま
で培養する工程を含む、バレイショマイクロチューバー
の生産方法を提供した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、圃場で直接栽培できる
大型のマイクロチューバー（小塊茎）を効率的に生産す
ることができるバレイショマイクロチューバーの生産方
法に関する。
大型のマイクロチューバー（小塊茎）を効率的に生産す
ることができるバレイショマイクロチューバーの生産方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より広く行われているバレイショマ
イクロチューバーを生産する第１の従来法は、無菌植物
体を増殖する工程と、次いでマイクロチューバーを形
成、肥大させる工程とを含む。
イクロチューバーを生産する第１の従来法は、無菌植物
体を増殖する工程と、次いでマイクロチューバーを形
成、肥大させる工程とを含む。
【０００３】第２の従来法は、特開平３−３５７３８に
記載されており、ここには下記工程を含むバレイショマ
イクロチューバーの生産方法が記載されている。 （Ａ）バレイショを組織培養し、茎葉を有する無菌植物
体を生産する（照度：１０００〜１０００００ルクスで
６〜２４時間／日、２０〜３０℃）。 （Ｂ）低温（１０〜３０℃）かつ短日条件下で光照射
（１０００〜１０００００ルクス、１２時間以下）して
該植物体を培養し、該植物体の頂芽または腋芽を塊茎化
する状態に誘導する。 （Ｃ）塊茎化誘導した植物体の頂芽あるいは腋芽を暗黒
かつ低温条件（１０〜３０℃）下で塊茎化する。
記載されており、ここには下記工程を含むバレイショマ
イクロチューバーの生産方法が記載されている。 （Ａ）バレイショを組織培養し、茎葉を有する無菌植物
体を生産する（照度：１０００〜１０００００ルクスで
６〜２４時間／日、２０〜３０℃）。 （Ｂ）低温（１０〜３０℃）かつ短日条件下で光照射
（１０００〜１０００００ルクス、１２時間以下）して
該植物体を培養し、該植物体の頂芽または腋芽を塊茎化
する状態に誘導する。 （Ｃ）塊茎化誘導した植物体の頂芽あるいは腋芽を暗黒
かつ低温条件（１０〜３０℃）下で塊茎化する。
【０００４】第２の従来法においては、無菌植物の増殖
と塊茎形成・肥大の２つの工程の間に低温かつ短日条件
下で頂芽あるいは腋芽の塊茎化を誘導する工程が加えら
れている。この工程は、おそらく、低温や短日条件下で
塊茎形成が誘導されるというバレイショの一般的な性質
や文献を考慮に入れて挿入されたものと思われる。
と塊茎形成・肥大の２つの工程の間に低温かつ短日条件
下で頂芽あるいは腋芽の塊茎化を誘導する工程が加えら
れている。この工程は、おそらく、低温や短日条件下で
塊茎形成が誘導されるというバレイショの一般的な性質
や文献を考慮に入れて挿入されたものと思われる。
【０００５】従って、第２の従来法では、マイクロチュ
ーバーは、工程Ａ：無菌植物体の増殖、工程Ｂ：頂芽又
は腋芽の塊茎化誘導及び工程Ｃ：マイクロチューバーの
形成・肥大、という３つの工程により効率よく生産され
る。
ーバーは、工程Ａ：無菌植物体の増殖、工程Ｂ：頂芽又
は腋芽の塊茎化誘導及び工程Ｃ：マイクロチューバーの
形成・肥大、という３つの工程により効率よく生産され
る。
【０００６】第２の従来法のもう１つの特徴は、工程Ｃ
を暗黒かつ低温条件下で行うことである。一般的にはマ
イクロチューバーの形成・肥大は「暗黒」または「短
日」条件下で行われる。低温条件が必須である理由は不
明であるが、おそらく塊茎形成が低温において促進され
るからであろう。
を暗黒かつ低温条件下で行うことである。一般的にはマ
イクロチューバーの形成・肥大は「暗黒」または「短
日」条件下で行われる。低温条件が必須である理由は不
明であるが、おそらく塊茎形成が低温において促進され
るからであろう。
【０００７】茎葉増殖工程の後の短日処理により塊茎誘
導が促進され、塊茎形成数が増加することは確かと思わ
れるが、次の理由により圃場への直接栽培が可能な大型
の（０．５ｇ以上）マイクロチューバーの生産効率は低
く、実用的な技術ではない。
導が促進され、塊茎形成数が増加することは確かと思わ
れるが、次の理由により圃場への直接栽培が可能な大型
の（０．５ｇ以上）マイクロチューバーの生産効率は低
く、実用的な技術ではない。
【０００８】すなわち、第２の従来法においては、茎葉
増殖工程に続き、茎葉増殖工程と同じ培地を用いて低温
かつ短日条件下で塊茎を誘導する。この培地は糖濃度が
低く、高い糖濃度を有する培地と交換した直後にバレイ
ショ植物を暗黒条件下で培養し、塊茎を形成している。
このように、茎葉増殖が盛んなステージで糖濃度の低い
培地で低温かつ短日条件下で培養しているので、茎葉の
増殖を多くは望めず、総塊茎数は多くなっても大型のマ
イクロチューバーの数は極めて少ない。
増殖工程に続き、茎葉増殖工程と同じ培地を用いて低温
かつ短日条件下で塊茎を誘導する。この培地は糖濃度が
低く、高い糖濃度を有する培地と交換した直後にバレイ
ショ植物を暗黒条件下で培養し、塊茎を形成している。
このように、茎葉増殖が盛んなステージで糖濃度の低い
培地で低温かつ短日条件下で培養しているので、茎葉の
増殖を多くは望めず、総塊茎数は多くなっても大型のマ
イクロチューバーの数は極めて少ない。
【０００９】茎葉増殖及び塊茎化誘導は寒天培地を用い
て小型容器（０．３〜０．６リットル）内で行っている
ので大型容器を使用した液体通気培養に比べて茎葉の増
殖効率は低く、実用的なマイクロチューバー生産は望め
ない。
て小型容器（０．３〜０．６リットル）内で行っている
ので大型容器を使用した液体通気培養に比べて茎葉の増
殖効率は低く、実用的なマイクロチューバー生産は望め
ない。
【００１０】特開平３−３５７３８号に記載された方法
（上記第２の従来法）においては、工程Ｂ、Ｃは、それ
ぞれ「低温かつ短日条件下」及び「暗黒かつ低温条件
下」で培養するものであり、いずれも「低温条件下」で
培養することが必須条件である。しかしながら、上記公
開公報に記載されている２つの実施例の温度条件はいず
れもバレイショの組織培養の場合では一般的な温度条件
で、しかもマイクロチューバーの生産においても公知の
事実に含まれる温度の範囲である。
（上記第２の従来法）においては、工程Ｂ、Ｃは、それ
ぞれ「低温かつ短日条件下」及び「暗黒かつ低温条件
下」で培養するものであり、いずれも「低温条件下」で
培養することが必須条件である。しかしながら、上記公
開公報に記載されている２つの実施例の温度条件はいず
れもバレイショの組織培養の場合では一般的な温度条件
で、しかもマイクロチューバーの生産においても公知の
事実に含まれる温度の範囲である。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、圃場
で直接栽培することができる大型のマイクロチューバー
を効率よく生産することができるバレイショマイクロチ
ューバーの生産方法を提供することである。
で直接栽培することができる大型のマイクロチューバー
を効率よく生産することができるバレイショマイクロチ
ューバーの生産方法を提供することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、バレイショ植物を暗黒下で培養して塊茎形成
する前に植物を約１週間ないし約４週間糖濃度の高い培
地で培養することにより上記目的を達成することができ
ることを見出し本発明を完成した。
究の結果、バレイショ植物を暗黒下で培養して塊茎形成
する前に植物を約１週間ないし約４週間糖濃度の高い培
地で培養することにより上記目的を達成することができ
ることを見出し本発明を完成した。
【００１３】すなわち、本発明は、糖濃度の高い培地で
バレイショ植物を日長条件下で約１週間ないし約４週間
培養する工程と、次いで該植物を暗黒下でマイクロチュ
ーバーが生産されるまで培養する工程を含む、バレイシ
ョマイクロチューバーの生産方法を提供する。
バレイショ植物を日長条件下で約１週間ないし約４週間
培養する工程と、次いで該植物を暗黒下でマイクロチュ
ーバーが生産されるまで培養する工程を含む、バレイシ
ョマイクロチューバーの生産方法を提供する。
【００１４】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】以下の記載は当業者が本発明を容易に実施
できるように記載するものである。もっとも、本発明の
精神及び範囲から逸脱しない修飾及び変形が当業者によ
り可能であるので、以下の記載は、本発明を不当に限定
するように解釈してはならない。
できるように記載するものである。もっとも、本発明の
精神及び範囲から逸脱しない修飾及び変形が当業者によ
り可能であるので、以下の記載は、本発明を不当に限定
するように解釈してはならない。
【００１６】本明細書において、「日長条件」とは短日
条件及び長日条件の両方を含む。
条件及び長日条件の両方を含む。
【００１７】本明細書において、「短日条件」とは、１
日２４時間のうち、好ましくは約６時間ないし約１２時
間、さらに好ましくは約７時間ないし約１０時間、最も
好ましくは約８時間光を照射することを意味する。
日２４時間のうち、好ましくは約６時間ないし約１２時
間、さらに好ましくは約７時間ないし約１０時間、最も
好ましくは約８時間光を照射することを意味する。
【００１８】本明細書において、「長日条件」とは、１
日２４時間のうち、好ましくは約１２時間ないし約２４
時間、さらに好ましくは約１４時間ないし約２０時間、
最も好ましくは約１６時間光を照射することを意味す
る。
日２４時間のうち、好ましくは約１２時間ないし約２４
時間、さらに好ましくは約１４時間ないし約２０時間、
最も好ましくは約１６時間光を照射することを意味す
る。
【００１９】工程(1) ：植物の増殖 公知の方法（例えばHussey et al. (1981) Ann. Bot. 4
8:787-796)で育成したバレイショ無菌苗を腋芽と葉を有
する単節（２節以上でもよい）に切断し、例えば表１に
示した培養器に入れ、好ましくは１８〜２５℃、さらに
好ましくは１８〜２２℃、好ましくは照度３０００〜１
００００ルクス、さらに好ましくは４０００〜６０００
ルクス、１２〜２４時間日長条件下（すなわち、長日条
件）、液体通気培養により茎葉を増殖する。培地はムラ
シゲ・スクーグ培地（Murashigeet al. (1962) Physio
l. Plant. 15:473-497、以下「ＭＳ培地」ということが
ある）に２％ショ糖を加えた培地、ｐＨ５．８であって
よい。この培地を以下、「茎葉増殖培地」と呼ぶ。ホワ
イト培地（White's Medium, White (1963) The Cultiva
tion of Animal and Plant Cells）、リンスマイヤー・
スクーグ培地（Linsmayer and Skoog's Medium, Lynsma
yer and Skoog (1965) Physiol. Plant. 18)及び他の標
準的な植物組織培養培地をＭＳ培地に代えて用いること
ができる。培地中の糖（炭素源）としては、ショ糖に代
えてグルコース、フラクトース、マルトース等を用いる
ことができる。糖濃度は好ましくは０．５〜５％、さら
に好ましくは２〜３％であり、ｐＨは好ましくは４〜
８、さらに好ましくは５．５〜６．５である。
8:787-796)で育成したバレイショ無菌苗を腋芽と葉を有
する単節（２節以上でもよい）に切断し、例えば表１に
示した培養器に入れ、好ましくは１８〜２５℃、さらに
好ましくは１８〜２２℃、好ましくは照度３０００〜１
００００ルクス、さらに好ましくは４０００〜６０００
ルクス、１２〜２４時間日長条件下（すなわち、長日条
件）、液体通気培養により茎葉を増殖する。培地はムラ
シゲ・スクーグ培地（Murashigeet al. (1962) Physio
l. Plant. 15:473-497、以下「ＭＳ培地」ということが
ある）に２％ショ糖を加えた培地、ｐＨ５．８であって
よい。この培地を以下、「茎葉増殖培地」と呼ぶ。ホワ
イト培地（White's Medium, White (1963) The Cultiva
tion of Animal and Plant Cells）、リンスマイヤー・
スクーグ培地（Linsmayer and Skoog's Medium, Lynsma
yer and Skoog (1965) Physiol. Plant. 18)及び他の標
準的な植物組織培養培地をＭＳ培地に代えて用いること
ができる。培地中の糖（炭素源）としては、ショ糖に代
えてグルコース、フラクトース、マルトース等を用いる
ことができる。糖濃度は好ましくは０．５〜５％、さら
に好ましくは２〜３％であり、ｐＨは好ましくは４〜
８、さらに好ましくは５．５〜６．５である。
【００２０】容器当たりの培養節数（培養する移植体片
の数）、培地量、通気量は容器の大きさにより異なり、
好ましい範囲を下記表１に示す。移植片の数は培地１リ
ットル当たり通常１〜３０個であり、好ましくは１０〜
２０個である。１リットル容器当たりの培地量は通常
０．１〜０．５リットルであり、好ましくは０．２〜
０．３リットルである。通気量は通常０．０２〜０．５
リットル／リットル・分であり、好ましくは０．２〜
０．４リットル／リットル・分である。
の数）、培地量、通気量は容器の大きさにより異なり、
好ましい範囲を下記表１に示す。移植片の数は培地１リ
ットル当たり通常１〜３０個であり、好ましくは１０〜
２０個である。１リットル容器当たりの培地量は通常
０．１〜０．５リットルであり、好ましくは０．２〜
０．３リットルである。通気量は通常０．０２〜０．５
リットル／リットル・分であり、好ましくは０．２〜
０．４リットル／リットル・分である。
【００２１】
【表１】
【００２２】通気は容器底面付近の液体培地中に行うこ
とが好ましい。
とが好ましい。
【００２３】通常、培養３〜６週間で植物体は容器の高
さの約８０％に達する。
さの約８０％に達する。
【００２４】工程(2) ：塊茎化誘導工程 上述の工程において、植物体が容器の高さの約８０％
（約５０％以上であれば問題ない）に達した頃に残存し
ている培地を捨て、糖濃度６〜１０％（ｗ／ｖ）、好ま
しくは７〜９％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは８％（ｗ／
ｖ）の糖を含む培地（以下、「塊茎形成培地」と呼
ぶ」）を、好ましくは表１に示す量加える。この培地に
含まれる糖として有用なものの例としてショ糖、グルコ
ース、フラクトース及びマルトースが挙げられる。培地
は、上記工程(1) で述べたいずれの培地をも用いること
ができる。次いで、植物体を１〜４週間、短日条件下又
は長日条件下で培養する。小さいマイクロチューバーを
数多くとりたい場合は短日条件下で１週間程度、大きな
マイクロチューバーをとりたい場合には長日条件下で約
２週間培養することが好ましい。光の照度、温度、培地
量及び通気量は茎葉増殖工程(1) で述べた条件を採用す
ることができる。
（約５０％以上であれば問題ない）に達した頃に残存し
ている培地を捨て、糖濃度６〜１０％（ｗ／ｖ）、好ま
しくは７〜９％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは８％（ｗ／
ｖ）の糖を含む培地（以下、「塊茎形成培地」と呼
ぶ」）を、好ましくは表１に示す量加える。この培地に
含まれる糖として有用なものの例としてショ糖、グルコ
ース、フラクトース及びマルトースが挙げられる。培地
は、上記工程(1) で述べたいずれの培地をも用いること
ができる。次いで、植物体を１〜４週間、短日条件下又
は長日条件下で培養する。小さいマイクロチューバーを
数多くとりたい場合は短日条件下で１週間程度、大きな
マイクロチューバーをとりたい場合には長日条件下で約
２週間培養することが好ましい。光の照度、温度、培地
量及び通気量は茎葉増殖工程(1) で述べた条件を採用す
ることができる。
【００２５】工程(3) ：塊茎の形成・肥大工程 上記工程(2) の後、植物体を３〜１０週間、好ましくは
５〜９週間、暗黒下で培養する。培養条件は、暗黒下で
培養するということを除けば工程(2) と同様でよい。こ
の培養後、マイクロチューバーを収穫する。
５〜９週間、暗黒下で培養する。培養条件は、暗黒下で
培養するということを除けば工程(2) と同様でよい。こ
の培養後、マイクロチューバーを収穫する。
【００２６】工程(2) において、短日条件を採用した場
合には、暗黒下での培養開始数日後に塊茎形成が観察さ
れる。工程(2) において、長日条件を採用した場合に
は、暗黒下での培養開始１〜２週間後に塊茎形成が観察
される。暗黒下での培養開始後４〜５週間で個々の塊茎
はかなり肥大し、その後の肥大は緩慢となる。マイクロ
チューバーの収穫は暗黒条件下での培養開始後５週間目
頃から可能であるが、成熟したマイクロチューバーを得
るためには少なくとも茎葉の一部が枯凋してから収穫す
ることが望ましい。
合には、暗黒下での培養開始数日後に塊茎形成が観察さ
れる。工程(2) において、長日条件を採用した場合に
は、暗黒下での培養開始１〜２週間後に塊茎形成が観察
される。暗黒下での培養開始後４〜５週間で個々の塊茎
はかなり肥大し、その後の肥大は緩慢となる。マイクロ
チューバーの収穫は暗黒条件下での培養開始後５週間目
頃から可能であるが、成熟したマイクロチューバーを得
るためには少なくとも茎葉の一部が枯凋してから収穫す
ることが望ましい。
【００２７】本発明と従来技術との相違点 本発明の方法の１つの特徴は、日長条件下で植物に高糖
濃度の培地を効率よく吸収させ、茎葉に栄養を十分吸
収、蓄積させてその後の暗黒条件下でマイクロチューバ
ーが効率良く生産されるようにしたことである。
濃度の培地を効率よく吸収させ、茎葉に栄養を十分吸
収、蓄積させてその後の暗黒条件下でマイクロチューバ
ーが効率良く生産されるようにしたことである。
【００２８】上記した第２の従来法においては、「低温
かつ短日条件下」で塊茎形成が促進されることに注目
し、茎葉増殖後に「低温かつ短日条件下」で塊茎化を誘
導し、その後ショ糖濃度の高い培地に交換し、暗黒条件
下で塊茎を形成・肥大させる。この方法では、「短日条
件下で塊茎形成を誘導する」という発想のみで、「茎葉
増殖を促進する」という意図はない。
かつ短日条件下」で塊茎形成が促進されることに注目
し、茎葉増殖後に「低温かつ短日条件下」で塊茎化を誘
導し、その後ショ糖濃度の高い培地に交換し、暗黒条件
下で塊茎を形成・肥大させる。この方法では、「短日条
件下で塊茎形成を誘導する」という発想のみで、「茎葉
増殖を促進する」という意図はない。
【００２９】上記第１及び第２の従来法では、塊茎形成
用の糖濃度の高い培地に交換した後直ちに暗黒条件下で
塊茎形成を行う。しかしながら、暗黒条件下では植物体
の培地の吸収は緩慢であり、折角与えた栄養豊富な培地
は植物体に効率良く吸収されない。
用の糖濃度の高い培地に交換した後直ちに暗黒条件下で
塊茎形成を行う。しかしながら、暗黒条件下では植物体
の培地の吸収は緩慢であり、折角与えた栄養豊富な培地
は植物体に効率良く吸収されない。
【００３０】本発明ではこの点を改良しようとするもの
であり、３段階（工程）法という点では上記第２の従来
法と同じであるが、単に短日条件下で塊茎形成を誘導す
るというものではなく、糖濃度の高い培地に交換した後
も日長条件下で１〜４週間培養し、与えた栄養価の高い
培地を植物体に効率良く吸収させ、茎葉に十分に養分を
蓄えて充実させた後に暗黒条件下で塊茎を形成させるこ
とにより、マイクロチューバーを効率良く生産するとい
うものである。
であり、３段階（工程）法という点では上記第２の従来
法と同じであるが、単に短日条件下で塊茎形成を誘導す
るというものではなく、糖濃度の高い培地に交換した後
も日長条件下で１〜４週間培養し、与えた栄養価の高い
培地を植物体に効率良く吸収させ、茎葉に十分に養分を
蓄えて充実させた後に暗黒条件下で塊茎を形成させるこ
とにより、マイクロチューバーを効率良く生産するとい
うものである。
【００３１】つまり、養分の吸収効率が低い暗黒条件下
で培養する前に、養分の吸収効率が良い明条件下で塊茎
の形成・肥大に必要なエネルギーをなるべく多く茎葉に
蓄積させ、その後暗黒条件下でこのエネルギーを用いて
効率良く塊茎を形成・肥大させようとするものである。
で培養する前に、養分の吸収効率が良い明条件下で塊茎
の形成・肥大に必要なエネルギーをなるべく多く茎葉に
蓄積させ、その後暗黒条件下でこのエネルギーを用いて
効率良く塊茎を形成・肥大させようとするものである。
【００３２】
【発明の効果】(1) 容器当たり総塊茎数の増加及び大型の塊茎数の増加 短日処理後高糖濃度の培地に交換し暗黒条件下で塊茎の
形成を計った第１及び第２の従来法に比べて、本発明の
方法では明らかにマイクロチューバーの生産効率は高か
った（表２）。
形成を計った第１及び第２の従来法に比べて、本発明の
方法では明らかにマイクロチューバーの生産効率は高か
った（表２）。
【００３３】第２の従来法では、０．１ｇ以下の小さな
マイクロチューバーを含む総マイクロチューバー数は第
１の従来法よりも多かったが、０．１ｇ以上のマイクロ
チューバーの数では両者は同等であり、０．５ｇ以上の
マイクロチューバーの数では第２の従来法は第１の従来
法よりもかなり少なかった。０．５ｇ以上のマイクロチ
ューバーの生産数が低いので、第２の従来法は効率的な
方法ではない。０．５ｇ以上のマイクロチューバーが望
まれるのは、０．５ｇ以上であれば直接圃場に植え付け
ても普通の種いもと比べて萌芽や生育が大きく遅れるこ
とはなく、普通の種いもと同様な方法で栽培することが
できるのに対し、０．５ｇ未満では直接圃場に植え付け
た場合、萌芽や生育がかなり遅いからである。
マイクロチューバーを含む総マイクロチューバー数は第
１の従来法よりも多かったが、０．１ｇ以上のマイクロ
チューバーの数では両者は同等であり、０．５ｇ以上の
マイクロチューバーの数では第２の従来法は第１の従来
法よりもかなり少なかった。０．５ｇ以上のマイクロチ
ューバーの生産数が低いので、第２の従来法は効率的な
方法ではない。０．５ｇ以上のマイクロチューバーが望
まれるのは、０．５ｇ以上であれば直接圃場に植え付け
ても普通の種いもと比べて萌芽や生育が大きく遅れるこ
とはなく、普通の種いもと同様な方法で栽培することが
できるのに対し、０．５ｇ未満では直接圃場に植え付け
た場合、萌芽や生育がかなり遅いからである。
【００３４】塊茎化誘導工程において８時間日長処理条
件を採用した本発明の実施例においては、上記第１及び
第２の従来法より０．１ｇ以上のマイクロチューバーの
生産効率は著しく高くなり、総マイクロチューバー生産
数の増加に大きな効果が認められた。また、０．５ｇ以
上のマイクロチューバーの増加にも効果があった。
件を採用した本発明の実施例においては、上記第１及び
第２の従来法より０．１ｇ以上のマイクロチューバーの
生産効率は著しく高くなり、総マイクロチューバー生産
数の増加に大きな効果が認められた。また、０．５ｇ以
上のマイクロチューバーの増加にも効果があった。
【００３５】塊茎化誘導工程において１６時間日長処理
条件を採用した本発明の実施例においては、上記第１及
び第２の従来法に比べて０．５ｇ以上あるいは１ｇ以上
の大きなマイクロチューバーの生産数の増加に大きな効
果が認められた。また，０．１ｇ以上のマイクロチュー
バー生産数の増加にも効果があった。
条件を採用した本発明の実施例においては、上記第１及
び第２の従来法に比べて０．５ｇ以上あるいは１ｇ以上
の大きなマイクロチューバーの生産数の増加に大きな効
果が認められた。また，０．１ｇ以上のマイクロチュー
バー生産数の増加にも効果があった。
【００３６】(2) 成熟したマイクロチューバーの生産 塊茎化誘導工程において、光照射下（例えば５０００ル
クス）で培養することにより茎葉が充実してマイクロチ
ューバー生産数が増加するのみならず、培地が植物体に
速く吸収されるため、塊茎肥大期後半の茎葉の黄変及び
枯凋が従来法に比べて速く進み、従って貯蔵と圃場栽培
に好ましい成熟した良質のマイクロチューバーが得られ
る。
クス）で培養することにより茎葉が充実してマイクロチ
ューバー生産数が増加するのみならず、培地が植物体に
速く吸収されるため、塊茎肥大期後半の茎葉の黄変及び
枯凋が従来法に比べて速く進み、従って貯蔵と圃場栽培
に好ましい成熟した良質のマイクロチューバーが得られ
る。
【００３７】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
【００３８】実施例１ 培地交換前及び交換後の日長処理がマイクロチューバー
生産に及ぼす効果の検討 公知の方法（Hussey et al. (1981) Ann. Bot. 48:787-
796)で育成した無菌植物体（品種：Russet Burbank, Ti
ssue-Grown Corporationで保存管理していたものより増
殖）を単節に切断し、８節ずつを茎葉増殖培地０．６リ
ットルを含む直径１３ｃｍ、高さ１８ｃｍの容量約２リ
ットルのガラス瓶（発売元：Carolina Biological Supp
ly Company、以下、「２Ｌ容器」と記す）に入れ、２０
℃、照度５０００ルクス、１６時間日長、０．３５〜
０．４Ｌ／分の通気条件で培養した。
生産に及ぼす効果の検討 公知の方法（Hussey et al. (1981) Ann. Bot. 48:787-
796)で育成した無菌植物体（品種：Russet Burbank, Ti
ssue-Grown Corporationで保存管理していたものより増
殖）を単節に切断し、８節ずつを茎葉増殖培地０．６リ
ットルを含む直径１３ｃｍ、高さ１８ｃｍの容量約２リ
ットルのガラス瓶（発売元：Carolina Biological Supp
ly Company、以下、「２Ｌ容器」と記す）に入れ、２０
℃、照度５０００ルクス、１６時間日長、０．３５〜
０．４Ｌ／分の通気条件で培養した。
【００３９】培養開始約４週間後に植物は平均１５ｃｍ
の長さにまで生長していた。
の長さにまで生長していた。
【００４０】次いで、以下のａ）ないしｄ）の工程のい
ずれか１つを行った。 ａ）培養４週間後に残存培地を取り除き、塊茎形成培地
０．７リットルを加え、２０℃、照度５０００ルクス、
８時間日長、０．３５〜０．４Ｌ／分の通気条件で１８
日間培養（本発明）。 ｂ）培養４週間後に上記ａ）と同様に培地を交換し、２
０℃、照度５０００ルクス、１６時間日長、０．３５〜
０．４Ｌ／分の通気条件で２５日間培養（本発明）。 ｃ）培養４週間後に日長のみを８時間に変えた条件下で
さらに１７日間培養した後残存培地を取り除き、塊茎形
成培地０．７リットルを加える（第２の従来法）。 ｄ）上記条件下でさらに７週間培養を続けた後、培地を
交換（第１の従来法）。
ずれか１つを行った。 ａ）培養４週間後に残存培地を取り除き、塊茎形成培地
０．７リットルを加え、２０℃、照度５０００ルクス、
８時間日長、０．３５〜０．４Ｌ／分の通気条件で１８
日間培養（本発明）。 ｂ）培養４週間後に上記ａ）と同様に培地を交換し、２
０℃、照度５０００ルクス、１６時間日長、０．３５〜
０．４Ｌ／分の通気条件で２５日間培養（本発明）。 ｃ）培養４週間後に日長のみを８時間に変えた条件下で
さらに１７日間培養した後残存培地を取り除き、塊茎形
成培地０．７リットルを加える（第２の従来法）。 ｄ）上記条件下でさらに７週間培養を続けた後、培地を
交換（第１の従来法）。
【００４１】上記ａ）ないしｄ）のいずれか１つに記載
の工程の後、植物を暗黒条件下、２０℃で、０．３５〜
０．４リットル／分の通気量で培養して塊茎形成を図
り、暗黒条件下に移してから約９週間目に塊茎を収穫し
た。その結果を表２に示した。
の工程の後、植物を暗黒条件下、２０℃で、０．３５〜
０．４リットル／分の通気量で培養して塊茎形成を図
り、暗黒条件下に移してから約９週間目に塊茎を収穫し
た。その結果を表２に示した。
【００４２】
【表２】
【００４３】第１の従来法（対照区）に比べて、工程
ａ）（すなわち、培地交換後、８時間日長処理）を採用
した本発明方法では、容器当たりの０．１ｇ以上及び
０．５ｇ以上の塊茎数が著しく多かった。
ａ）（すなわち、培地交換後、８時間日長処理）を採用
した本発明方法では、容器当たりの０．１ｇ以上及び
０．５ｇ以上の塊茎数が著しく多かった。
【００４４】また、工程ｂ）（すなわち、培地交換後、
１６時間日長処理）を採用した本発明の方法では、０．
１ｇ以上の塊茎数は第１の従来法（対照区）と差はない
ものの、０．５ｇ以上又は１ｇ以上の大きなマイクロチ
ューバーの生産数が著しく多く、培地交換後の日長処理
がマイクロチューバーの生産に効果があることがわかっ
た。
１６時間日長処理）を採用した本発明の方法では、０．
１ｇ以上の塊茎数は第１の従来法（対照区）と差はない
ものの、０．５ｇ以上又は１ｇ以上の大きなマイクロチ
ューバーの生産数が著しく多く、培地交換後の日長処理
がマイクロチューバーの生産に効果があることがわかっ
た。
【００４５】一方、工程ｃ）（すなわち、培地交換前、
８時間日長処理）を採用した第２の従来法では、０．１
ｇ以下の小さな塊茎が多く生産されていた（データな
し）が、０．１ｇ以上の塊茎数は第１の従来法（対照
区）とは差はなく、むしろ０．５ｇ以上の塊茎数はかな
り少なく、効果はなかった。
８時間日長処理）を採用した第２の従来法では、０．１
ｇ以下の小さな塊茎が多く生産されていた（データな
し）が、０．１ｇ以上の塊茎数は第１の従来法（対照
区）とは差はなく、むしろ０．５ｇ以上の塊茎数はかな
り少なく、効果はなかった。
【００４６】実施例２ 品種Russet Burbankの無菌苗を実施例１と同様に４週間
茎葉増殖した後、培地を塊茎形成培地に交換した。次い
で下記ａ）ないしｄ）のいずれか１つの工程を行った。 ａ）８時間日長条件下で１週間培養した後暗黒条件下で
培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｂ）８時間日長条件下で２週間培養した後暗黒条件下で
培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｃ）１６時間日長条件下で２週間培養した後暗黒条件下
で培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｄ）培地交換後直ちに植物を暗黒条件下で培養した（第
１の従来法、対照区）。
茎葉増殖した後、培地を塊茎形成培地に交換した。次い
で下記ａ）ないしｄ）のいずれか１つの工程を行った。 ａ）８時間日長条件下で１週間培養した後暗黒条件下で
培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｂ）８時間日長条件下で２週間培養した後暗黒条件下で
培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｃ）１６時間日長条件下で２週間培養した後暗黒条件下
で培養して塊茎形成を行う（本発明）。 ｄ）培地交換後直ちに植物を暗黒条件下で培養した（第
１の従来法、対照区）。
【００４７】培地交換後、９週間目にマイクロチューバ
ーを収穫した。
ーを収穫した。
【００４８】この実施例では、２Ｌ容器の他に、一部の
処理区では直径１５ｃｍ、高さ２２ｃｍの容量約４リッ
トルのガラス瓶（発売元：Carolina Biological Supply
Company、以下、「４Ｌ容器」と記す）も使用した。４
Ｌ容器の培養条件は容器当たりの置床節数が１６節、通
気量が０．７〜０．８リットル／分、培地量（茎葉増殖
培地、塊茎形成培地とも）が１リットル／容器である他
は２Ｌ容器と同じである。
処理区では直径１５ｃｍ、高さ２２ｃｍの容量約４リッ
トルのガラス瓶（発売元：Carolina Biological Supply
Company、以下、「４Ｌ容器」と記す）も使用した。４
Ｌ容器の培養条件は容器当たりの置床節数が１６節、通
気量が０．７〜０．８リットル／分、培地量（茎葉増殖
培地、塊茎形成培地とも）が１リットル／容器である他
は２Ｌ容器と同じである。
【００４９】表３にその結果を示した。実施例１と同様
に、８時間日長処理では０．１ｇ以上の塊茎数が多くな
ること、１６時間日長処理では０．５ｇ及び１ｇ以上の
塊茎数が多くなることが確認された。
に、８時間日長処理では０．１ｇ以上の塊茎数が多くな
ること、１６時間日長処理では０．５ｇ及び１ｇ以上の
塊茎数が多くなることが確認された。
【００５０】
【表３】
【００５１】なお、本発明の方法では培養中又は収穫後
に次の特徴が観察された。 (i) 暗黒条件下に移す前の植物体は第２の従来法のもの
と比べて茎数は多く、葉はやや小さいものの厚く、茎葉
は良く充実していた。 (ii)８時間日長処理を採用した本発明の方法では、第２
の従来法よりは暗黒条件移行後速やかに塊茎が形成さ
れ、暗黒条件下移行後数日間のうちに塊茎形成が観察さ
れた。一方、１６時間日長処理を採用した本発明の方法
では、塊茎の形成は第１の従来法（対照区）と同様に暗
黒条件下に移行後１週間目頃から観察されたが、その後
の肥大が速く進んだ。 (iii) ８時間日長処理及び１６時間日長処理を採用した
両方の本発明の方法とも、第１の従来法（対照区）より
は遅く暗黒条件下に移したにもかかわらず塊茎形成後期
において茎葉の枯凋は第１の従来法（対照区）よりは速
く進み、そのためより成熟した良質の塊茎が得られた。
これは８時間日長処理区よりも１６時間日長処理区で顕
著であった。
に次の特徴が観察された。 (i) 暗黒条件下に移す前の植物体は第２の従来法のもの
と比べて茎数は多く、葉はやや小さいものの厚く、茎葉
は良く充実していた。 (ii)８時間日長処理を採用した本発明の方法では、第２
の従来法よりは暗黒条件移行後速やかに塊茎が形成さ
れ、暗黒条件下移行後数日間のうちに塊茎形成が観察さ
れた。一方、１６時間日長処理を採用した本発明の方法
では、塊茎の形成は第１の従来法（対照区）と同様に暗
黒条件下に移行後１週間目頃から観察されたが、その後
の肥大が速く進んだ。 (iii) ８時間日長処理及び１６時間日長処理を採用した
両方の本発明の方法とも、第１の従来法（対照区）より
は遅く暗黒条件下に移したにもかかわらず塊茎形成後期
において茎葉の枯凋は第１の従来法（対照区）よりは速
く進み、そのためより成熟した良質の塊茎が得られた。
これは８時間日長処理区よりも１６時間日長処理区で顕
著であった。
【００５２】実施例３ 品種Lemhi Russet（Tissue-Grown Corporationで保存管
理していたものを増殖）の培養苗を用いて、実施例２と
同様な培養条件で「培地交換後８時間日長、１週間処
理」の効果を検討した。表４に示した結果の通り、第１
の従来法（対照区）に比べて塊茎の生産数は多かった。
理していたものを増殖）の培養苗を用いて、実施例２と
同様な培養条件で「培地交換後８時間日長、１週間処
理」の効果を検討した。表４に示した結果の通り、第１
の従来法（対照区）に比べて塊茎の生産数は多かった。
【００５３】
【表４】
Claims (16)
- 【請求項１】 糖濃度の高い培地でバレイショ植物を日
長条件下で約１週間ないし約４週間培養する工程と、次
いで該植物を暗黒下でマイクロチューバーが生産される
まで培養する工程を含む、バレイショマイクロチューバ
ーの生産方法。 - 【請求項２】 前記糖は、ショ糖、グルコース、フラク
トース及びマルトースから成る群より選ばれる少なくと
も一種である請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 前記糖はショ糖である請求項２記載の方
法。 - 【請求項４】 前記高い糖濃度は６〜１０％ｗ／ｖであ
る請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】 前記糖濃度の高い培地は、８％ｗ／ｖの
ショ糖を含む請求項１ないし４のいずれか１項記載の方
法。 - 【請求項６】 前記培地は、８％ｗ／ｖショ糖を含むム
ラシゲ・スクーグ培地ｐＨ５．８、８％ｗ／ｖショ糖を
含むホワイト培地ｐＨ５．８又は８％ｗ／ｖショ糖を含
むリンスマイヤー・スクーグ培地ｐＨ５．８である請求
項５記載の方法。 - 【請求項７】 前記培地は、８％ｗ／ｖショ糖を含むム
ラシゲ・スクーグ培地ｐＨ５．８である請求項６記載の
方法。 - 【請求項８】 前記日長条件は、前記バレイショ植物を
１日当たり約６時間ないし約１２時間光照射する請求項
１ないし７のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項９】 前記日長条件は、前記バレイショ植物を
１日当たり約１２時間ないし約２４時間光照射する請求
項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記バレイショを前記日長条件下で約
１週間培養して小さなマイクロチューバーを生産する請
求項８記載の方法。 - 【請求項１１】 前記バレイショを前記日長条件下で約
２週間培養して大きなマイクロチューバーを生産する請
求項９記載の方法。 - 【請求項１２】 前記日長条件下での培養は、３０００
ないし１００００ルクスの照度下で１８〜２５℃の温度
下で、０．０２ないし０．５リットル／リットル・分の
通気条件下で行われる請求項１ないし１１のいずれか１
項記載の方法。 - 【請求項１３】 前記日長条件下での培養は、４０００
ないし６０００ルクスの照度下で１８〜２２℃の温度下
で、０．２ないし０．４リットル／リットル・分の通気
条件下で行われる請求項１２記載の方法。 - 【請求項１４】 前記バレイショ植物の前記暗黒下での
培養は３ないし１０週間行われる請求項１ないし１３の
いずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１５】 前記暗黒下での培養は、１８〜２５℃
の温度下で、０．０２ないし０．５リットル／リットル
・分の通気条件下で行われる請求項１４記載の方法。 - 【請求項１６】 前記暗黒下での培養は、１８〜２２℃
の温度下で、０．０２ないし０．５リットル／リットル
・分の通気条件下で行われる請求項１５記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/159,491 | 1993-11-30 | ||
| US08/159,491 US5498541A (en) | 1993-11-30 | 1993-11-30 | Method for producing potato microtubers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07170869A true JPH07170869A (ja) | 1995-07-11 |
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ID=22572794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32140794A Expired - Fee Related JP3405838B2 (ja) | 1993-11-30 | 1994-11-30 | バレイショマイクロチューバーの生産方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5498541A (ja) |
| EP (1) | EP0655192B1 (ja) |
| JP (1) | JP3405838B2 (ja) |
| CN (1) | CN1109706A (ja) |
| AT (1) | ATE194751T1 (ja) |
| CA (1) | CA2136940A1 (ja) |
| DE (1) | DE69425315T2 (ja) |
| DK (1) | DK0655192T3 (ja) |
| ES (1) | ES2148289T3 (ja) |
| GR (1) | GR3034467T3 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| US6060312A (en) * | 1991-06-17 | 2000-05-09 | J.R. Simplot Company | Method for in vitro culturing of potato clones resistant to blackspot bruising and the potatoes produced therefrom |
| JPH08214693A (ja) * | 1995-02-16 | 1996-08-27 | Japan Tobacco Inc | 接ぎ木植物によるバレイショの塊茎の生産方法 |
| WO1996031114A1 (fr) * | 1995-04-03 | 1996-10-10 | Japan Tobacco Inc. | Procede pour produire des micro-tubercules de pommes de terre |
| JP3505046B2 (ja) * | 1996-09-30 | 2004-03-08 | 日本たばこ産業株式会社 | バレイショ塊茎生産方法 |
| CN1074241C (zh) * | 1997-01-22 | 2001-11-07 | 中国科学院遗传研究所 | 培养容器及使用其生产马铃薯微型薯等植物材料的方法 |
| US6071746A (en) * | 1998-02-02 | 2000-06-06 | Agriculture And Agri-Food Canada | Regeneration of somatic embryos from plant tissues |
| WO2000005942A1 (fr) * | 1998-07-28 | 2000-02-10 | Institute Of Genetics, Chinese Academy Of Sciences | Recipient de culture et procede d'utilisation et de production de microtubercules de pommes de terre |
| GB9821078D0 (en) * | 1998-09-30 | 1998-11-18 | Robert Marshall & Associates | Aerial stem tubers as an alternative system for seed tuber production |
| WO2001011945A2 (en) * | 1999-08-17 | 2001-02-22 | Andrew Watson | Methods for mass production of plantlets |
| CN1460123A (zh) * | 2000-04-27 | 2003-12-03 | 吉·阿·辛普洛特公司 | 用于在体外选择对黑斑病损伤有抗性的马铃薯克隆的方法及由此生成的马铃薯 |
| CN100338213C (zh) * | 2004-04-10 | 2007-09-19 | 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所 | 水山药试管苗诱导微型块茎的培养基 |
| US7906703B2 (en) | 2005-10-24 | 2011-03-15 | Koe San County | Mass-production method for seedling of seed potato |
| US7472513B2 (en) * | 2006-01-12 | 2009-01-06 | Cets, Llc | Controlled environment system and method for rapid propagation of seed potato stocks |
| CN103070075A (zh) * | 2013-02-04 | 2013-05-01 | 河南师范大学 | 一种山药节段直接诱导微型块茎的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH078189B1 (ja) * | 1986-12-02 | 1995-02-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | |
| DE3734257A1 (de) * | 1987-10-09 | 1989-04-20 | Uk Nii Kartofelnogo Chozjajstv | Verfahren zum zuechten von kartoffelmikroknollen in vitro |
| US5047343A (en) * | 1988-04-29 | 1991-09-10 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Microtuber propagation of potatoes |
| JPH0648948B2 (ja) * | 1989-06-30 | 1994-06-29 | 全国農業協同組合連合会 | バレイショ小塊茎の生産法 |
| ES2083571T3 (es) * | 1990-03-23 | 1996-04-16 | Kirin Brewery | Metodo para la produccion de tuberculo. |
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1993
- 1993-11-30 US US08/159,491 patent/US5498541A/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-05-19 PT PT94303580T patent/PT655192E/pt unknown
- 1994-05-19 ES ES94303580T patent/ES2148289T3/es not_active Expired - Lifetime
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2000
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