JPH07155170A - 微生物、植物または動物の振盪培養用具および培養方法 - Google Patents
微生物、植物または動物の振盪培養用具および培養方法Info
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- JPH07155170A JPH07155170A JP30685293A JP30685293A JPH07155170A JP H07155170 A JPH07155170 A JP H07155170A JP 30685293 A JP30685293 A JP 30685293A JP 30685293 A JP30685293 A JP 30685293A JP H07155170 A JPH07155170 A JP H07155170A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ガス供給能力に優れかつ培養細胞に負担をか
けることなく培養効率を向上させる。 【構成】 少なくとも内面に熱融着性合成樹脂層を有し
かつ両側部を内側に折り込んで形成された可撓性シート
状筒状体よりなり、該シート状筒状体における該両折り
込み部の最奥部先端間に相当する該シート状筒状体の底
部および該最奥部先端から両側部の端部にかけて斜上方
に向って熱融着させ、該シート状筒状体の上端部付近に
培養液供給口を設け、かつ前記シート状筒状体の少なく
とも一方の面の上部付近に形成された開口部を孔径の異
なる少なくとも２種類の雑菌を通過させずかつガス供給
能力に優れたフィルタ部材で閉塞してなる可撓性容器よ
りなる好気性微生物、植物または動物の振盪培養用具お
よびこれを用いてなる振盪培養方法である。
けることなく培養効率を向上させる。 【構成】 少なくとも内面に熱融着性合成樹脂層を有し
かつ両側部を内側に折り込んで形成された可撓性シート
状筒状体よりなり、該シート状筒状体における該両折り
込み部の最奥部先端間に相当する該シート状筒状体の底
部および該最奥部先端から両側部の端部にかけて斜上方
に向って熱融着させ、該シート状筒状体の上端部付近に
培養液供給口を設け、かつ前記シート状筒状体の少なく
とも一方の面の上部付近に形成された開口部を孔径の異
なる少なくとも２種類の雑菌を通過させずかつガス供給
能力に優れたフィルタ部材で閉塞してなる可撓性容器よ
りなる好気性微生物、植物または動物の振盪培養用具お
よびこれを用いてなる振盪培養方法である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、雑菌を通過させずかつ
ガス供給能力に優れたフィルタを有する可撓性容器より
なる振盪培養用具およびこれを用いた振盪培養方法に関
するものである。詳しく述べると、容器内部と外部、ま
た培養液と容器内気体とをガス交換能に優れ、培養効率
を向上させた好気微生物、植物または動物の振盪培養用
具およびこれを用いた振盪培養方法に関するものであ
る。
ガス供給能力に優れたフィルタを有する可撓性容器より
なる振盪培養用具およびこれを用いた振盪培養方法に関
するものである。詳しく述べると、容器内部と外部、ま
た培養液と容器内気体とをガス交換能に優れ、培養効率
を向上させた好気微生物、植物または動物の振盪培養用
具およびこれを用いた振盪培養方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】従来より液体培養を行う際に、培養液中
へのガスの取り込みを良くするため、振盪させることに
より気液の接触面積を増加させる方法を取っており、こ
れらの容器としては三角フラスコ等のガラス容器が用い
られていた。しかしながら、これらのガラス容器を用い
て振盪させた場合、気液の接触面積を増加させるには限
界があり、場合によっては容器内に障害物を設けて乱流
を発生させ、振盪時の気液の接触面積を増加させる等の
方法をとってきたが、その際培養細胞にストレスを与え
たり、傷つけたりするという欠点があった。
へのガスの取り込みを良くするため、振盪させることに
より気液の接触面積を増加させる方法を取っており、こ
れらの容器としては三角フラスコ等のガラス容器が用い
られていた。しかしながら、これらのガラス容器を用い
て振盪させた場合、気液の接触面積を増加させるには限
界があり、場合によっては容器内に障害物を設けて乱流
を発生させ、振盪時の気液の接触面積を増加させる等の
方法をとってきたが、その際培養細胞にストレスを与え
たり、傷つけたりするという欠点があった。
【０００３】またガラス容器ではなく実開平３−１２
６，８５０号のような合成樹脂からなる不定型容器を使
用した場合、瀘材によってはガス交換が充分に行うこと
ができず、培養細胞が壊死したり、また培養代謝ガスの
発生速度に瀘材のガス交換能が追い付かず、容器が膨張
したり、破裂したりすることがあった。
６，８５０号のような合成樹脂からなる不定型容器を使
用した場合、瀘材によってはガス交換が充分に行うこと
ができず、培養細胞が壊死したり、また培養代謝ガスの
発生速度に瀘材のガス交換能が追い付かず、容器が膨張
したり、破裂したりすることがあった。
【０００４】また内面に熱接着性合成樹脂層を有する２
枚のシート状の表、裏面材および該表、裏面材の間にあ
って、それぞれの下縁部に接続した内方に二つ折り状の
底面材とからなる包装袋において、該表、裏面材のいず
れか一方の面材と該面材に対向した底面材の折曲面との
間に、前記包装袋の二つ折り状の底面材を開く開底補助
具を装填してなり折り畳み可能な自立性包装袋は公知で
ある（実願平２−１０，５８４号）。
枚のシート状の表、裏面材および該表、裏面材の間にあ
って、それぞれの下縁部に接続した内方に二つ折り状の
底面材とからなる包装袋において、該表、裏面材のいず
れか一方の面材と該面材に対向した底面材の折曲面との
間に、前記包装袋の二つ折り状の底面材を開く開底補助
具を装填してなり折り畳み可能な自立性包装袋は公知で
ある（実願平２−１０，５８４号）。
【０００５】しかしながら、このような包装袋を振盪培
養に使用した場合、内部底面に装填されるシート状の開
底補助具が振盪培養を行っている間に揺動して内部底面
との間に摩擦を生じたり、あるいは内容物、特に培養細
胞にストレスを与えたり、傷つけたりするという欠点が
依然としてあった。
養に使用した場合、内部底面に装填されるシート状の開
底補助具が振盪培養を行っている間に揺動して内部底面
との間に摩擦を生じたり、あるいは内容物、特に培養細
胞にストレスを与えたり、傷つけたりするという欠点が
依然としてあった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、ガス供給能力に優れかつ培養細胞に負担をかけ
ることなく培養効率を向上させる好気性微生物、植物ま
たは動物細胞の振盪培養方法を提供することにある。
目的は、ガス供給能力に優れかつ培養細胞に負担をかけ
ることなく培養効率を向上させる好気性微生物、植物ま
たは動物細胞の振盪培養方法を提供することにある。
【０００７】本発明の他の目的は、優れた通気効果を発
揮しかつ大量培養が可能な好気性微生物、植物または動
物細胞の振盪培養用具およびこれを用いた培養方法を提
供することにある。
揮しかつ大量培養が可能な好気性微生物、植物または動
物細胞の振盪培養用具およびこれを用いた培養方法を提
供することにある。
【０００８】
【課題を達成するための手段】上記諸目的は、少なくと
も内面に熱融着性合成樹脂層を有しかつ両側部を内面に
折り込んで形成された可撓性シート状筒状体よりなり、
該シート状筒状体における該両折り込み部の最奥部先端
間に相当する該シート状筒状体の底部および該最奥部先
端から両側部の端部にかけて斜上方に向って熱融着さ
せ、該シート状筒状体の上端部付近に培養供給口を設
け、かつ前記シート状筒状体の少なくとも一方の面の上
部付近に形成された開口部を孔径の異なる少なくとも２
種類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフィ
ルタ部材で閉塞してなる可撓性容器よりなる好気性微生
物、植物または動物の振盪培養用具により達成される。
も内面に熱融着性合成樹脂層を有しかつ両側部を内面に
折り込んで形成された可撓性シート状筒状体よりなり、
該シート状筒状体における該両折り込み部の最奥部先端
間に相当する該シート状筒状体の底部および該最奥部先
端から両側部の端部にかけて斜上方に向って熱融着さ
せ、該シート状筒状体の上端部付近に培養供給口を設
け、かつ前記シート状筒状体の少なくとも一方の面の上
部付近に形成された開口部を孔径の異なる少なくとも２
種類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフィ
ルタ部材で閉塞してなる可撓性容器よりなる好気性微生
物、植物または動物の振盪培養用具により達成される。
【０００９】上記諸目的は、少なくとも内面に熱融着性
合成樹脂層を有しかつ両側部を内面に折り込んで形成さ
れた可撓性シート状筒状体よりなり、該シート状筒状体
における該両折り込み部の最奥部先端間に相当する該シ
ート状筒状体の底部および該最奥部先端から両側部の端
部にかけて斜上方に向って熱融着させ、該シート状筒状
体の上端部付近に培養液供給口を設け、かつ前記シート
状筒状体の少なくとも一方の面の上部付近に形成された
開口部を孔径の異なる少なくとも２種類の雑菌を通過さ
せずかつガス供給能力に優れたフィルタ部材で閉塞して
なる可撓性容器よりなる好気性微生物、植物または動物
の振盪培養用具に培養液を供給し、前記培養用具を少な
くとも底部付近の外壁を規制する規制部材に挿入して振
盪しながら培養することを特徴とする好気性微生物、植
物または動物の振盪培養方法によっても達成される。
合成樹脂層を有しかつ両側部を内面に折り込んで形成さ
れた可撓性シート状筒状体よりなり、該シート状筒状体
における該両折り込み部の最奥部先端間に相当する該シ
ート状筒状体の底部および該最奥部先端から両側部の端
部にかけて斜上方に向って熱融着させ、該シート状筒状
体の上端部付近に培養液供給口を設け、かつ前記シート
状筒状体の少なくとも一方の面の上部付近に形成された
開口部を孔径の異なる少なくとも２種類の雑菌を通過さ
せずかつガス供給能力に優れたフィルタ部材で閉塞して
なる可撓性容器よりなる好気性微生物、植物または動物
の振盪培養用具に培養液を供給し、前記培養用具を少な
くとも底部付近の外壁を規制する規制部材に挿入して振
盪しながら培養することを特徴とする好気性微生物、植
物または動物の振盪培養方法によっても達成される。
【００１０】
【作用】つぎに、図面に基づいて本発明を詳細に説明す
る。すなわち、図１〜３に示すように、少なくとも内面
に熱融着性合成樹脂層を有しかつ互いに相対する２枚の
シート状第１の側面材１，２の間に、シート状物を内側
に二つ折りして形成される折り込み部５，６を有する第
２の側面材３，４を挟持させて、該第２の側面材３，４
の外端部７，８を前記第１の側面材１，２の外端部とそ
れぞれ熱融着させてシート状筒状体を形成させる。
る。すなわち、図１〜３に示すように、少なくとも内面
に熱融着性合成樹脂層を有しかつ互いに相対する２枚の
シート状第１の側面材１，２の間に、シート状物を内側
に二つ折りして形成される折り込み部５，６を有する第
２の側面材３，４を挟持させて、該第２の側面材３，４
の外端部７，８を前記第１の側面材１，２の外端部とそ
れぞれ熱融着させてシート状筒状体を形成させる。
【００１１】このような筒状体において、少なくとも前
記折り込み部５，６の最奥部先端ａ，ｂ間に相当する該
シート状筒状体の底部９および該最奥部先端ａ，ｂから
両側部１，２の外端部７，８にかけて斜上方に向って前
記第１の側面材１，２と第２の側面材３，４とをそれぞ
れ熱融着させる。
記折り込み部５，６の最奥部先端ａ，ｂ間に相当する該
シート状筒状体の底部９および該最奥部先端ａ，ｂから
両側部１，２の外端部７，８にかけて斜上方に向って前
記第１の側面材１，２と第２の側面材３，４とをそれぞ
れ熱融着させる。
【００１２】このようにして形成されるシート状筒状体
の上部付近の少なくとも一方の面に側面開口部１１を形
成し、該開口部１１には、孔径の異なる少なくとも２種
類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフィル
タ部材１２，１３で閉塞させることにより可撓性容器が
得られる。
の上部付近の少なくとも一方の面に側面開口部１１を形
成し、該開口部１１には、孔径の異なる少なくとも２種
類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフィル
タ部材１２，１３で閉塞させることにより可撓性容器が
得られる。
【００１３】このようなフィルタ部材１２，１３を取付
ける面としては、例えば側面材１，２，３，４のうち、
１面、相対する２面、隣接する２面、３面、４面等があ
るが好ましくは相対する２面または隣接する２面であ
る。すなわち、１面では通気性が不充分な場合があり、
一方、３〜４面では筒状体の強度が不充分となる場合が
ある。
ける面としては、例えば側面材１，２，３，４のうち、
１面、相対する２面、隣接する２面、３面、４面等があ
るが好ましくは相対する２面または隣接する２面であ
る。すなわち、１面では通気性が不充分な場合があり、
一方、３〜４面では筒状体の強度が不充分となる場合が
ある。
【００１４】なお、フィルタ部材１２，１３の取付け
は、図３に示すように、側面材１，２の外側に熱融着ま
たは接着により行ってもよいが、図４に示すように側面
材１，２の両側に同様な方法で行ってもよく、また図示
しないが側面材１，２の内側に同様な方法で行ってもよ
い。
は、図３に示すように、側面材１，２の外側に熱融着ま
たは接着により行ってもよいが、図４に示すように側面
材１，２の両側に同様な方法で行ってもよく、また図示
しないが側面材１，２の内側に同様な方法で行ってもよ
い。
【００１５】なお、筒状体底部の熱融着は、前記個所に
加えて図２に示すように底部全体に施してもよく、ま
た、底部全体に施すことなく、前記斜上方の熱融着部１
４，１５に沿ってその外側を切断してもよい。
加えて図２に示すように底部全体に施してもよく、ま
た、底部全体に施すことなく、前記斜上方の熱融着部１
４，１５に沿ってその外側を切断してもよい。
【００１６】このようにして形成されたシート状筒状体
には、図３に示すように、上端部付近に培養液供給口１
６が設けられてもよい。この場合には、該培養液供給口
１６の両側の側面材１，２，３，４は、該供給口１６か
ら第１の側面材１，２の斜下方に向って、それぞれ第２
の側面材３，４と熱融着されて熱融着部１７，１８が形
成される。この熱融着部１７，１８に沿ってその外側を
切断してもよいが、さらに該供給口１６の両側の側面材
１，２，３，４の上端部付近に熱融着を施して熱融着部
１９，２０を形成してもよい。
には、図３に示すように、上端部付近に培養液供給口１
６が設けられてもよい。この場合には、該培養液供給口
１６の両側の側面材１，２，３，４は、該供給口１６か
ら第１の側面材１，２の斜下方に向って、それぞれ第２
の側面材３，４と熱融着されて熱融着部１７，１８が形
成される。この熱融着部１７，１８に沿ってその外側を
切断してもよいが、さらに該供給口１６の両側の側面材
１，２，３，４の上端部付近に熱融着を施して熱融着部
１９，２０を形成してもよい。
【００１７】なお、前記フィルタ部材１２，１３は、図
５に示すように側面材１，２に部分的に設けてもよい。
５に示すように側面材１，２に部分的に設けてもよい。
【００１８】側面材１，２，３，４を形成するシート状
側面材は、少なくとも内面（互いに融着すべき面）が熱
融着性合成樹脂よりなりかつ耐水性を有するものであれ
ばよく、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエ
チレン−ポリプロピレン混合物、エチレン−酢酸ビニル
共重合体等の単一シートまたは、これらを他の材料にラ
ミネートまたはコーティングしたものでも良い。光を透
過させたり培養状況を観察するためにも、すべて透明で
あることが望ましい。
側面材は、少なくとも内面（互いに融着すべき面）が熱
融着性合成樹脂よりなりかつ耐水性を有するものであれ
ばよく、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエ
チレン−ポリプロピレン混合物、エチレン−酢酸ビニル
共重合体等の単一シートまたは、これらを他の材料にラ
ミネートまたはコーティングしたものでも良い。光を透
過させたり培養状況を観察するためにも、すべて透明で
あることが望ましい。
【００１９】フィルタ部材１２，１３の取付開口部１１
は、培養液収納後振盪させても、その液体が達しないほ
ど充分な高さのところに設けられる。フィルタ材１２，
１３としては、空気および培養代謝ガスは自由に流通し
得るが、雑菌等は通過し得ない径のものであることが必
要である。具体的には、第１のフィルタ部材は、最大孔
径０．１〜５０μｍ、好ましくは０．４〜２０μｍ、空
孔率３０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、透気度１
〜３０秒／１００ｃｃ、好ましくは１〜１０秒／１００
ｃｃの性能を有するものであり、また、第２のフィルタ
部材は、最大孔径１０〜５０μｍ、好ましくは１０〜３
０μｍ、空孔率２０〜９０％、好ましくは６０〜９０
％、透気度０．５〜１０秒／１００ｃｃ、好ましくは１
〜５秒／１００ｃｃである。そして、第１のフィルタ部
材を内側に、かつその外側に第２のフィルタ部材を設け
ることが好ましい。なお、ここに最大孔径はＡＳＴＭ
Ｅ１２８−６１、空孔率はＡＳＴＭ Ｄ２８７３、また
透気度はＪＩＳ Ｐ−８１１７（ガーレ法）により測定
した値である。
は、培養液収納後振盪させても、その液体が達しないほ
ど充分な高さのところに設けられる。フィルタ材１２，
１３としては、空気および培養代謝ガスは自由に流通し
得るが、雑菌等は通過し得ない径のものであることが必
要である。具体的には、第１のフィルタ部材は、最大孔
径０．１〜５０μｍ、好ましくは０．４〜２０μｍ、空
孔率３０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、透気度１
〜３０秒／１００ｃｃ、好ましくは１〜１０秒／１００
ｃｃの性能を有するものであり、また、第２のフィルタ
部材は、最大孔径１０〜５０μｍ、好ましくは１０〜３
０μｍ、空孔率２０〜９０％、好ましくは６０〜９０
％、透気度０．５〜１０秒／１００ｃｃ、好ましくは１
〜５秒／１００ｃｃである。そして、第１のフィルタ部
材を内側に、かつその外側に第２のフィルタ部材を設け
ることが好ましい。なお、ここに最大孔径はＡＳＴＭ
Ｅ１２８−６１、空孔率はＡＳＴＭ Ｄ２８７３、また
透気度はＪＩＳ Ｐ−８１１７（ガーレ法）により測定
した値である。
【００２０】また、本発明で使用される可撓性容器の筒
状体は、必ずしも図１〜４に示すように側面材３，４を
互いに熱融着したものである必要はなく、筒状体を中折
りして同様な構造を形成したものであってもよい。
状体は、必ずしも図１〜４に示すように側面材３，４を
互いに熱融着したものである必要はなく、筒状体を中折
りして同様な構造を形成したものであってもよい。
【００２１】培養液供給口１６は、培養液の供給ならび
に試料のサンプリング等の関係からいって、筒状体の上
端部中央に設けることが望ましいが、側面材の上端部付
近に設けてもよいことはもちろんである。
に試料のサンプリング等の関係からいって、筒状体の上
端部中央に設けることが望ましいが、側面材の上端部付
近に設けてもよいことはもちろんである。
【００２２】第２の側面材３，４の中折り部の最奥部
ａ，ｂ間の距離Ｄは、後述するように、培養液を該用具
に収納する場合に、底面をなるべく正方形に近くするた
めには、なるべく最小にすることが望ましいが、培養液
供給口１６を筒状体の上端部中央に設けた場合には、そ
の外径の分に左右される。しかしながら、側面材の上端
部付近に設けられた場合には該間隔Ｄはほばゼロにする
ことができる。
ａ，ｂ間の距離Ｄは、後述するように、培養液を該用具
に収納する場合に、底面をなるべく正方形に近くするた
めには、なるべく最小にすることが望ましいが、培養液
供給口１６を筒状体の上端部中央に設けた場合には、そ
の外径の分に左右される。しかしながら、側面材の上端
部付近に設けられた場合には該間隔Ｄはほばゼロにする
ことができる。
【００２３】前記培養液供給口１６には、直接ゴム栓や
綿栓を取付けて閉塞することもできるが、さらに、図７
〜８に示すように、安全弁２１を取付けてもよい。すな
わち、邪魔板部材２２ａ，２２ａまたは邪魔板部材２２
ｂ，２２ｂを内部に形成させた管状体の上端開口部にフ
ィルタ部材（綿栓でもよい）２３を取付ける。このよう
な邪魔板により振盪培養中に発生する飛沫同拌によるフ
ィルタ部材２３の汚損が防止される。
綿栓を取付けて閉塞することもできるが、さらに、図７
〜８に示すように、安全弁２１を取付けてもよい。すな
わち、邪魔板部材２２ａ，２２ａまたは邪魔板部材２２
ｂ，２２ｂを内部に形成させた管状体の上端開口部にフ
ィルタ部材（綿栓でもよい）２３を取付ける。このよう
な邪魔板により振盪培養中に発生する飛沫同拌によるフ
ィルタ部材２３の汚損が防止される。
【００２４】このようにして形成された本発明の可撓性
容器は、図２に示すように、不使用時には内部に空間が
全くないシート状であるが、使用時には図６に示すよう
に、断面がほぼ正方形に近い筒状体となるので充分な空
間を保ち、かつ側面材１，２，３，４が自立性を保持す
ることを可能にする。
容器は、図２に示すように、不使用時には内部に空間が
全くないシート状であるが、使用時には図６に示すよう
に、断面がほぼ正方形に近い筒状体となるので充分な空
間を保ち、かつ側面材１，２，３，４が自立性を保持す
ることを可能にする。
【００２５】このように形成された可撓性容器（培養用
具）は、培養液を収納したのちに該用具の断面積にほぼ
相当する規制部材２４に収容するか、あるいは該用具を
規制部材２４に収容したのち、該培養用具に培養液供給
口１６により供給し、振盪培養に供される。
具）は、培養液を収納したのちに該用具の断面積にほぼ
相当する規制部材２４に収容するか、あるいは該用具を
規制部材２４に収容したのち、該培養用具に培養液供給
口１６により供給し、振盪培養に供される。
【００２６】本発明によれば、好気性であればいずれも
微生物、植物および動物も培養できるが、一例を挙げる
と、例えば微生物として、シュードマナス・オヴァリス
（Pseudomonas ovalis) 等の発酵微生物、サッカロマイ
セス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisias) 、サッ
カロマイセス・カールスベルゲンシス(Saccharomycesca
rlsbergensis)、等の酵母菌類、ヒラタケ（Pleurotus o
streatus)、シイタケ(Lentinus edodes) 、エノキタケ
(Flammulina velutipes)等の担子菌類等の好気微生物、
ポプラ(Populus nigra) 、カラマツ（Larix leptolepi
s) 、コチョウラン(Phalaenopsis amabilisu)、ニチニ
チソウ(Catharantus roseus)、ムラサキ(Lithospermum
erythrorhizon)等の植物等がある。また、動物において
は、インターフェロン等の有用物質の生産目的で、ナマ
ルバ細胞（リンパ芽球）、ヒト腎細胞等の培養が可能で
ある。
微生物、植物および動物も培養できるが、一例を挙げる
と、例えば微生物として、シュードマナス・オヴァリス
（Pseudomonas ovalis) 等の発酵微生物、サッカロマイ
セス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisias) 、サッ
カロマイセス・カールスベルゲンシス(Saccharomycesca
rlsbergensis)、等の酵母菌類、ヒラタケ（Pleurotus o
streatus)、シイタケ(Lentinus edodes) 、エノキタケ
(Flammulina velutipes)等の担子菌類等の好気微生物、
ポプラ(Populus nigra) 、カラマツ（Larix leptolepi
s) 、コチョウラン(Phalaenopsis amabilisu)、ニチニ
チソウ(Catharantus roseus)、ムラサキ(Lithospermum
erythrorhizon)等の植物等がある。また、動物において
は、インターフェロン等の有用物質の生産目的で、ナマ
ルバ細胞（リンパ芽球）、ヒト腎細胞等の培養が可能で
ある。
【００２７】また、培地としては通常この分野で使用さ
れる液体培地のいずれもが使用可能であるが、一例を挙
げると、例えば、微生物用培地としては、ポテトデキス
トロース培地、トリプトソブイヨン培地、普通ブイヨン
培地、ＹＣＣ液体培地、ハートインフュジョン培地等が
あり、また植物用培地としてはＭＳ培地(Murashige &Sk
oog) 、ＫＣ培地（Knudson,C.) 、ＶＷ培地(Vacio & We
nt)、Ｂ５地(Gamborgetc.B5) 、Ｈｈｉｔｅ培地等があ
り、また動物用培地としては、イーグル培地、ＲＰＭＩ
培地およびこれらの培地に血清等を添加して修正した培
地等がある。
れる液体培地のいずれもが使用可能であるが、一例を挙
げると、例えば、微生物用培地としては、ポテトデキス
トロース培地、トリプトソブイヨン培地、普通ブイヨン
培地、ＹＣＣ液体培地、ハートインフュジョン培地等が
あり、また植物用培地としてはＭＳ培地(Murashige &Sk
oog) 、ＫＣ培地（Knudson,C.) 、ＶＷ培地(Vacio & We
nt)、Ｂ５地(Gamborgetc.B5) 、Ｈｈｉｔｅ培地等があ
り、また動物用培地としては、イーグル培地、ＲＰＭＩ
培地およびこれらの培地に血清等を添加して修正した培
地等がある。
【００２８】
【実施例】つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明する。
に説明する。
【００２９】実施例１ 最大孔径２μｍ、空孔率５０％および透気度７秒／１０
０ｃｃを有するポリプロピレン製の第１のフィルタ部材
およびその外側に最大孔１２μｍ、空孔率８０％および
透気度１秒／１００ｃｃを有するポリプロピレン製の第
２のフィルタ部材を設けてなる図１〜３および図６に示
す構造を有する本発明による細胞培養用具について、亜
硫酸酸化法によりｋL ａの測定を行った。なお、亜硫酸
酸化法は、水１リットル中に亜硫酸ナトリウム０．４モ
ル（５０ｇ／リットル）および硫酸銅１０-3モルを含有
する３０℃の水溶液を供給し、酸素電極で気相の酸素分
圧を、広瀬らの方法(Agr.Biol.Chem.,Vol.30.No.1.pp49
-58,1966) により測定して行った。液容量とｋL ａとの
関係を偏心幅ｅを種々変えて図９〜１１に示す（直線Ａ
1 〜Ａ3 ）。
０ｃｃを有するポリプロピレン製の第１のフィルタ部材
およびその外側に最大孔１２μｍ、空孔率８０％および
透気度１秒／１００ｃｃを有するポリプロピレン製の第
２のフィルタ部材を設けてなる図１〜３および図６に示
す構造を有する本発明による細胞培養用具について、亜
硫酸酸化法によりｋL ａの測定を行った。なお、亜硫酸
酸化法は、水１リットル中に亜硫酸ナトリウム０．４モ
ル（５０ｇ／リットル）および硫酸銅１０-3モルを含有
する３０℃の水溶液を供給し、酸素電極で気相の酸素分
圧を、広瀬らの方法(Agr.Biol.Chem.,Vol.30.No.1.pp49
-58,1966) により測定して行った。液容量とｋL ａとの
関係を偏心幅ｅを種々変えて図９〜１１に示す（直線Ａ
1 〜Ａ3 ）。
【００３０】なおこのときの用具の寸法は、長さ１９０
ｍｍ、幅１５０ｍｍ、高さ３５５ｍｍで、フィルタ部材
取付開口は５０ｍｍ×１９０ｍｍで、相対する側面材の
２面の上端部付近に形成した。
ｍｍ、幅１５０ｍｍ、高さ３５５ｍｍで、フィルタ部材
取付開口は５０ｍｍ×１９０ｍｍで、相対する側面材の
２面の上端部付近に形成した。
【００３１】比較例１ 実施例１において、図１〜３に示す細胞培養用具の代り
に、特願平４−１４９，２１３号に記載の培養容器（容
量１．８リットル）（ただし、最大孔径４０μｍ、空孔
率９０％および透気度１秒／１００ｃｃを有するポリプ
ロピレン製フィルタ部材を２面に各１枚づつ使用）を使
用した以外は、同様な方法を行ったところ、図９〜１１
に示す結果が得られた（直線Ｂ1 〜Ｂ3 ）。
に、特願平４−１４９，２１３号に記載の培養容器（容
量１．８リットル）（ただし、最大孔径４０μｍ、空孔
率９０％および透気度１秒／１００ｃｃを有するポリプ
ロピレン製フィルタ部材を２面に各１枚づつ使用）を使
用した以外は、同様な方法を行ったところ、図９〜１１
に示す結果が得られた（直線Ｂ1 〜Ｂ3 ）。
【００３２】比較例２ 実施例１において、図１〜３に示す細胞培養用具の代わ
りに線栓を施した三角フラスコ（容量５００ｍｌ）を用
いた以外は、同様な方法を行ったところ、図９〜１１に
示す結果が得られた（直線Ｃ1 〜Ｃ3 ）。
りに線栓を施した三角フラスコ（容量５００ｍｌ）を用
いた以外は、同様な方法を行ったところ、図９〜１１に
示す結果が得られた（直線Ｃ1 〜Ｃ3 ）。
【００３３】実施例２ 実施例１において使用したのと同じ細胞培養用具に、グ
ルコース３％、リン酸二水素カリウム０．８％、粉末酵
母エキス０．８％、硫酸アンモニウム０．４％および硫
酸マグネシウム（７水塩）０．２％を含有する水溶液を
ｐＨ６．０に調整してなる３０℃の培地に、サッカロマ
イセス・セレビジェ（Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｌ）を接種し、このときの時間の経
過とエタノールの発生、グルコースの消費量および５８
０ｎｍにおける吸光度を測定したところ、図１２に示す
結果が得られた。
ルコース３％、リン酸二水素カリウム０．８％、粉末酵
母エキス０．８％、硫酸アンモニウム０．４％および硫
酸マグネシウム（７水塩）０．２％を含有する水溶液を
ｐＨ６．０に調整してなる３０℃の培地に、サッカロマ
イセス・セレビジェ（Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｌ）を接種し、このときの時間の経
過とエタノールの発生、グルコースの消費量および５８
０ｎｍにおける吸光度を測定したところ、図１２に示す
結果が得られた。
【００３４】比較例３ 実施例２の方法において、図１〜３に示す細胞培養用具
の代りに比較例１のの培養容器を用いた以外は、同様な
方法を行ったところ、図１３に示す結果が得られた。
の代りに比較例１のの培養容器を用いた以外は、同様な
方法を行ったところ、図１３に示す結果が得られた。
【００３５】比較例４ 実施例２の方法において、図１〜３に示す細胞培養用具
の代りに比較例２の三角フラスコを用いた以外は、同様
な方法を行ったところ、図１４に示す結果が得られた。
の代りに比較例２の三角フラスコを用いた以外は、同様
な方法を行ったところ、図１４に示す結果が得られた。
【００３６】
【発明の効果】以上述べたように、本願発明は、少なく
とも内面に熱融着性合成樹脂層を有しかつ両側部を内側
に折り込んで形成された可撓性シート状筒状体よりな
り、該シート状筒状体における該両折り込み部の最奥部
先端間に相当する該シート状筒状体の底部および該最奥
部先端から両側部の端部にかけて斜上方に向って熱融着
させ、該シート状筒状体の上端部付近に培養液供給口を
設け、かつ前記シート状筒状体の少なくとも一方の面の
上部付近に形成された開口部を孔径の異なる少なくとも
２種類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフ
ィルタ部材で、閉塞してなる可撓性容器よりなる好気性
微生物、植物または動物の振盪培養用具および該用具を
用いてなる振盪培養方法であるから、該用具が折りたた
んだ状態で保管できるので省スペースになるだけでな
く、軽量であるので輸送および取り扱いに有利であり、
破損の心配がない、また従来の三角フラスコ培養の場合
は、傾斜があるために上方に向うほど気液接触面積が小
さくなり、振盪培養を行った場合でも気液接触面積はそ
れほど増加せず、ガスの供給は不充分であったが、前記
培養用具は、内空間を保持しているため、上方に向って
も気液接触面積はほとんど変わらずらず、なおかつ振盪
培養を行った場合も培養液が飛散することなく、三角フ
ラスコと比較した場合、同じ振盪数の場合では三角フラ
スコの約２倍の気液接触面積となり、ガス供給も充分に
行うことができる。また前記性能を有するフィルタによ
り、袋内に培養代謝ガスが充満することなく容器内部と
外部のガス交換を効率よく行うことができる。
とも内面に熱融着性合成樹脂層を有しかつ両側部を内側
に折り込んで形成された可撓性シート状筒状体よりな
り、該シート状筒状体における該両折り込み部の最奥部
先端間に相当する該シート状筒状体の底部および該最奥
部先端から両側部の端部にかけて斜上方に向って熱融着
させ、該シート状筒状体の上端部付近に培養液供給口を
設け、かつ前記シート状筒状体の少なくとも一方の面の
上部付近に形成された開口部を孔径の異なる少なくとも
２種類の雑菌を通過させずかつガス供給能力に優れたフ
ィルタ部材で、閉塞してなる可撓性容器よりなる好気性
微生物、植物または動物の振盪培養用具および該用具を
用いてなる振盪培養方法であるから、該用具が折りたた
んだ状態で保管できるので省スペースになるだけでな
く、軽量であるので輸送および取り扱いに有利であり、
破損の心配がない、また従来の三角フラスコ培養の場合
は、傾斜があるために上方に向うほど気液接触面積が小
さくなり、振盪培養を行った場合でも気液接触面積はそ
れほど増加せず、ガスの供給は不充分であったが、前記
培養用具は、内空間を保持しているため、上方に向って
も気液接触面積はほとんど変わらずらず、なおかつ振盪
培養を行った場合も培養液が飛散することなく、三角フ
ラスコと比較した場合、同じ振盪数の場合では三角フラ
スコの約２倍の気液接触面積となり、ガス供給も充分に
行うことができる。また前記性能を有するフィルタによ
り、袋内に培養代謝ガスが充満することなく容器内部と
外部のガス交換を効率よく行うことができる。
【００３７】さらに、培養液供給口を設ければ、培養液
の供給ならびに培養操作およびサンプリングが容易であ
り、また、邪魔板部材を有するフィルタを設ければ、培
養液の飛散が阻止できるのでフィルタの汚損を防止する
ことができる。また、フィルタ部材として孔径の異なる
少なくとも２枚のものを使用するので、外部のホコリ等
が完全に除去されて目づまりすることなく雑菌の侵入を
防止でき、しかも充分な通気性を保つことができる。
の供給ならびに培養操作およびサンプリングが容易であ
り、また、邪魔板部材を有するフィルタを設ければ、培
養液の飛散が阻止できるのでフィルタの汚損を防止する
ことができる。また、フィルタ部材として孔径の異なる
少なくとも２枚のものを使用するので、外部のホコリ等
が完全に除去されて目づまりすることなく雑菌の侵入を
防止でき、しかも充分な通気性を保つことができる。
【図１】は、本発明による振盪培養用具の組立部材の概
略を示す斜視図である。
略を示す斜視図である。
【図２】は、本発明による振盪培養用具の正面図であ
る。
る。
【図３】は、図２のＡ−Ａ線に沿う拡大断面図である。
【図４】は、図２のＡ−Ａ線に沿う他の拡大断面図であ
る。
る。
【図５】は、本発明よる振盪培養用具の他の例を示す正
面図である。
面図である。
【図６】は、本発明による振盪培養用具の使用状態を示
す斜視図である。
す斜視図である。
【図７】は、安全弁の一例を示す断面図である。
【図８】は、安全弁の他の例を示す断面図である。
【図９】は、本発明による振盪培養用具を用いたときの
ｋL ａと液容量との関係を示すグラフである。
ｋL ａと液容量との関係を示すグラフである。
【図１０】は、本発明以外の容器を用いたときのｋL ａ
と液容量との関係を示すグラフである。
と液容量との関係を示すグラフである。
【図１１】は、三角フラスコを用いたときのｋL ａと液
容量との関係を示すグラフである。
容量との関係を示すグラフである。
【図１２】は、本発明の振盪培養用具を用いたときの時
間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費量お
よび吸光度の変化との関係を示すグラフである。
間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費量お
よび吸光度の変化との関係を示すグラフである。
【図１３】は、本発明以外の振盪培養用具を用いたとき
の時間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費
量および吸光度の変化との関係を示すグラフである。
の時間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費
量および吸光度の変化との関係を示すグラフである。
【図１４】は、本発明以外の振盪培養用具を用いたとき
の時間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費
量および吸光度の変化との関係を示すグラフである。
の時間に対するエタノールの生成量、グルコースの消費
量および吸光度の変化との関係を示すグラフである。
１，２，３，４…側面材、 ５，６…折り込み部、 ７，８…外端部、 ９…底部、 １１…側面開口部、 １２，１３…フィルタ部材、 １４，１５，１７，１８，１９，２０…熱融着部、 １６…培養液供給口、 ２１…安全弁、 ２２ａ、２２ｂ…邪魔板部材、 ２２…フィルタ部材。
Claims (6)
- 【請求項１】 少なくとも内面に熱融着性合成樹脂層を
有しかつ両側部を内面に折り込んで形成された可撓性シ
ート状筒状体よりなり、該シート状筒状体における該両
折り込み部の最奥部先端間に相当する該シート状筒状体
の底部および該最奥部先端から両側部の端部にかけて斜
上方に向って熱融着させ、該シート状筒状体の上端部付
近に培養液供給口を設け、かつ前記シート状筒状体の少
なくとも一方の面の上部付近に形成された開口部を孔径
の異なる少なくとも２種類の雑菌を通過させずかつガス
供給能力に優れたフィルタ部材で閉塞してなる可撓性容
器よりなる好気性微生物、植物または動物の振盪培養用
具。 - 【請求項２】 該シート状筒状体の上端部付近は熱融着
されてシールされるとともに培養液供給口が設けられて
なる請求項１に記載の振盪培養用具。 - 【請求項３】 該培養液供給口の開口部には邪魔板部材
が設けられたフィルタ部材が取付けられてなる請求項２
に記載の振盪培養用具。 - 【請求項４】 少なくとも内面に熱融着性合成樹脂層を
有しかつ両側部を内面に折り込んで形成された可撓性シ
ート状筒状体よりなり、該シート状筒状体における該両
折り込み部の最奥部先端間に相当する該シート状筒状体
の底部および該最奥部先端から両側部の端部にかけて斜
上方に向って熱融着させ、該シート状筒状体の上端部付
近に培養液供給口を設け、かつ前記シート状筒状体の少
なくとも一方の面の上部付近に形成された開口部を孔径
の異なる少なくとも２種類の雑菌を通過させずかつガス
供給能力に優れたフィルタ部材で閉塞してなる可撓性容
器よりなる好気性微生物、植物または動物の振盪培養用
具に培養液を供給し、前記培養用具を少なくとも底部付
近の外壁を規制する規制部材に挿入して振盪しながら培
養することを特徴とする好気性微生物、植物または動物
の振盪培養方法。 - 【請求項５】 該シート状筒状体の上端部付近は熱融着
されてシールされるとともに培養液供給口が設けられて
なる請求項４に記載の振盪培養方法。 - 【請求項６】 該培養液供給口の開口部には邪魔板部材
が設けられたフィルタ部材が取付けられてなる請求項５
に記載の振盪培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30685293A JP3531956B2 (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 微生物、植物または動物の振盪培養用具および培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30685293A JP3531956B2 (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 微生物、植物または動物の振盪培養用具および培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07155170A true JPH07155170A (ja) | 1995-06-20 |
| JP3531956B2 JP3531956B2 (ja) | 2004-05-31 |
Family
ID=17962031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30685293A Expired - Lifetime JP3531956B2 (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 微生物、植物または動物の振盪培養用具および培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3531956B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006314276A (ja) * | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Toyo Seikan Kaisha Ltd | 細胞培養容器 |
| US9005971B2 (en) | 2005-04-22 | 2015-04-14 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US9376655B2 (en) | 2011-09-29 | 2016-06-28 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| WO2016120708A1 (ja) * | 2015-01-29 | 2016-08-04 | 藤森工業株式会社 | 振とう型培養装置及びこれを用いた培養方法 |
| US9643133B2 (en) | 2011-09-30 | 2017-05-09 | Life Technologies Corporation | Container with film sparger |
| US10123940B2 (en) | 2014-06-26 | 2018-11-13 | Advanced Scientific, Inc. | Bag assembly and system for use with a fluid |
| US10589197B2 (en) | 2016-12-01 | 2020-03-17 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
-
1993
- 1993-12-07 JP JP30685293A patent/JP3531956B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US10934514B2 (en) | 2011-09-29 | 2021-03-02 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
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| US11890557B2 (en) | 2016-12-01 | 2024-02-06 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3531956B2 (ja) | 2004-05-31 |
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