JPH07118260A - 有機及び生物学的分子の化学ルミネセント・ラベルとしての１，２−ジオキセタン - Google Patents

有機及び生物学的分子の化学ルミネセント・ラベルとしての１，２−ジオキセタン

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JPH07118260A
JPH07118260A JP3227353A JP22735391A JPH07118260A JP H07118260 A JPH07118260 A JP H07118260A JP 3227353 A JP3227353 A JP 3227353A JP 22735391 A JP22735391 A JP 22735391A JP H07118260 A JPH07118260 A JP H07118260A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 式： 【化１】 （式中、Ｘは活性化剤により除去されて光を作る脱離基
であり、Ａは、カップリング置換基であり、Ａｒは、フ
ェニル及びナフチルから成る群から選ばれる置換基であ
る）の有機及び生物学的分子とカップルして、ラベルを
与えるジオキセタン。Ｒ1 は、任意のリンカー置換基で
いくつかの炭素原子が、酸素、硫黄、窒素又はリンであ
って炭素原子１〜３０を有する。Ａｒはフェニルが好ま
しい。 【効果】 ジオキセタン カップル分子はインジケータ
ーとして使用しうる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アツセイ等に使用され
る有機及び生物学的分子に結合する能力を有するトリガ
ラブルな（ｔｒｉｇｇｅｒａｂｌｅ）安定１，２−ジオ
キセタンに関する。特に、本発明は、生物学的物質の本
質的な機能を重大に変化させることなく、生物学的物質
と反応する能力を有する１，２−ジオキセタンに関す
る。
【０００２】
【従来の技術】
１．安定化された１，２−ジオキセタンの化学的誘発 化学的及び酵素的方法によって誘発され化学ルミネセン
スを生じることのできる熱的安定なジオキセタンが最近
発見されている（Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，米国特許出願
Ｎｏ．８８７，１３９，出願日１９８６年７月１７日；
Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｒ．Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｙ，ａｎ
ｄ Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｉ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅ
ｔｔ．，９３５（１９８７）；Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，
Ｔ．Ｓ．Ｃｈｅｎ，Ｒ．Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｙ，Ｒ．Ｄｅ
Ｓｉｌｖａ，ａｎｄ Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｉ，Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１１５５（１９８７）；ａｎ
ｄ Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｍ．Ｄ．Ｓａｎｄｉｓｏ
ｎ，ａｎｄ Ｒ．Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｙ，Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１１５９（１９８７））。
【０００３】いくつかの重要な特徴を有する、ジオキセ
タンを製造する新規合成方法が開発されている。即ち、
(1) スピロ環融合アダマンチル基（ｓｐｉｒｏ−ｆｕｓ
ｅｄａｄａｍａｎｔｙｌ ｇｒｏｕｐ）の安定力（ｉｎ
ｆｌｕｅｎｃｅ）を利用して、周囲温度下で何年もの貯
蔵寿命（ｓｈｅｌｆ ｌｉｖｅｓ）を有するジオキセタ
ンを得、そして(2) この安定化されたジオキセタンの化
学ルミネセント分解を誘発する新規方法が開発されてい
る。
【０００４】必要なアルケンは、アダマンタノンをＴＨ
Ｆ中のチタニウムトリクロリド／ＬＡＨを用いてケトン
の芳香族エステルと反応させることによって製造される
（Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，米国特許Ｎｏ．４，８５７，
６５２）。これが、これらの反応条件を用いてケトンと
エステルの分子内縮合によりビニルエーテルを形成する
最初の報告である。ＭｃＭｕｒｒｙは、それより前に、
ケトンとエステル官能基の分子内反応を研究したが、環
状ケトンとビニルでないエーテルがこの方法により製造
されている。（Ｊ．Ｅ．ＭｃＭｕｒｒｙ ａｎｄ Ｄ．
Ｄ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，１０５，１６６０（１９８３）ａｎｄ Ｊ．Ｅ．
ＭｃＭｕｒｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，８９，１５１３
（１９８９））。
【０００５】
【化４２】
【０００６】これらのビニルエーテルの光酸素化（ｐｈ
ｏｔｏｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ）は、望ましい熱安定性
を有し容易に取扱うことができる化合物であるジオキセ
タンを与える。例えば、以下に示すジオキセタンは活性
化エネルギー２８．４kcal／mol 及び２５℃で３．８年
の半減期を示す。ｏ−キシレン中のこのジオキセタンの
サンプルを実験室ベンチ上に数ヶ月間放置しても検知し
うる分解を示さなかった。
【０００７】
【化４３】
【０００８】しかしながら、このジオキセタンの化学ル
ミネセンス分解は、室温でフッ素イオンによりシリル保
護基を除去することにより好都合に誘発することがで
き、不安定でアリールオキシド型を発生し、これは開裂
（ｃｌｅａｖｅ）して強い青色光をもたらす。このアリ
ールオキシド置換ジオキセタンの半減期は、２５℃で５
秒である。
【０００９】ＤＭＳＯ中のこの化学ルミネセンスのスペ
クトルは４７０nmで最大を示し、これは該エステル開裂
生成物（メチル３−ヒドロキシルベンゾエート）の陰イ
オンの蛍光並びにこれらの条件下消費されたジオキセタ
ン溶液の蛍光と同一であった。アダマンタノン蛍光由来
の化学ルミネセンスは、発生しなかったようである。ル
ミノール標準に対して測定されたフッ化物で誘発された
分解の化学ルミネセンス量子収率（ｑｕａｎｔｕｍ ｙ
ｉｅｌｄ）は０．２５（又は化学ルミネセンス効率２５
％）と決定された。これらの条件下、このエステルの蛍
光量子収率の補正（φＦ＝０．４４）により、シングレ
ットの励起されたエステルの形成効率５７％、（これ
は、実験室で製造されたジオキセタンのかって報告され
た中で最も高いシングレットの化学励起（ｃｈｅｍｉｅ
ｘｃｉｔａｔｉｏｎ）効率である）が得られた。
【００１０】
【化４４】
【００１１】２．安定化された１，２−ジオキセタンの
酵素的誘発 イムノアッセイや酵素を含むＤＮＡハイブリダイゼーシ
ョンのような生物学的アッセイは、酵素と反応して色
（クロモジェニック）を形成するか又は蛍光（フルオジ
ェニック）となるどちらかのさまざまな基質を利用して
いる。トリガー法の研究の一部によって、化学ルミネセ
ント酵素基質として機能しうる最初のジオキセタンが発
見されている。（Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，米国特許出願
Ｎｏ．８８７，１３９；Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｒ．
Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｙ，ａｎｄ Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｉ，Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，９３５（１９８
７）；Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｔ．Ｓ．Ｃｈｅｎ，Ｒ．
Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｙ，Ｒ．ＤｅＳｉｌｖａ，ａｎｄ
Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｉ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔ
ｔ．，１１５５（１９８７）；Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，
Ｍ．Ｄ．Ｓａｎｄｉｓｏｎ，ａｎｄ Ｒ．Ｓ．Ｈａｎｄ
ｌｅｙ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１１５
９（１９８７）ａｎｄ Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｐｈｏ
ｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，４７Ｓ，５０Ｓ
（１９８８））。
【００１２】生物学的系においてこれらのパーオキシド
を使用するには、酵素的反応温度で熱的に安定であり且
つ水性バッファー中で瞬時の自発的な分解を起こさない
ジオキセタンが要求される。前記したスピロ環融合アダ
マンチルジオキセタンは、この要求を満たしている。酵
素的に修飾されてアリールオキシド型を作るジオキセタ
ンは調製されている。この不安定な中間体の分解によっ
てルミネセンスが得られる。アリールエステラーゼ、ア
セチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ及
びβ−ガラクトシダーゼを含む種々の酵素によって誘発
されるジオキセタンが合成されている。
【００１３】
【化４５】
【００１４】例えば、アルカリホスファターゼによる酵
素的誘発が、３−ヒドロキシ−９Ｈ−キサンテン−９−
オン及びアダマンタノン由来の上述のホスフェート置換
ジオキセタンで観察された。このオキセタンは、活性化
エネルギー３０．７Kcal／mol 及び２５℃で半減期１２
年を有し、熱的に安定である。このジオキセタンは有機
溶媒中で安定なだけでなく、水性バッファー中で非常に
ゆっくりした自発的分解を示す。
【００１５】ウシ腸粘膜からのアルカリホスファターゼ
及びホスフェート保護ジオキセタンを用いて、pH１０．
３で０．７５Ｍ ２−アミノ−２−メチル−１−プロパ
ノールバッファー中で誘発実験を行なった。全体の光放
出は、ジオキセタン濃度と直線的に依存することが見出
された。光放出の減少速度（ｄｅｃａｙ ｒａｔｅ）
は、酵素濃度の関数であり、同時に全体の光放出は、酵
素濃度からは独立している。ホスフェート触媒化分解の
化学ルミネセンススペクトルをバッファー溶液中で室温
で得た。
【００１６】この化学ルミネセンススペクトルと消費さ
れた反応混合物の蛍光スペクトル及びバッファー中のヒ
ドロキシキサントン開裂生成物の蛍光スペクトルと比較
すると、ジオキセタンからホスフェート基が酵素的に開
裂することによって、光放出が開始されて、ヒドロキシ
キサントンのシングレット励起陰イオンを発生する不安
定なアリールオキシドジオキセタンが得られることがわ
かる。
【００１７】
【化４６】
【００１８】メチル−３−ヒドロキシベンゾエート及び
アダマンタノン由来の上述のホスフェート保護ジオキセ
タンを用いて、０．７５Ｍ ２−アミノ−２−メチル−
１−プロパノールバッファー中、pH９．６で、アルカリ
ホスファターゼを用いて、ホスファターゼ誘発実験を行
なった。１０-4Ｍジオキセタン溶液へ酵素を添加して、
数分間に亘って放出する化学ルミネセンスが得られた。
【００１９】バッファー中のジオキセタンのゆっくりし
た加水分解からの非常に低いバックグランドのルミネセ
ンスの結果として、１０-18 モル（１ ａｔｔｏｍｏ
ｌ）未満のアルカリホスファターゼがエンハンサーの存
在下で検出された。（Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，Ｈ．Ａｋ
ｈａｖａｎ，ａｎｄ Ｌ．Ｊ．Ｒｏｍａｎｏ， Ｃｌｉ
ｎ．Ｃｈｅｍ．，３５，１８６３（１９８９）ａｎｄ
Ａ．Ｐ．Ｓｃｈａａｐ，米国特許出願Ｎｏ．０７／２２
４，６８１及び０７／３１７，５８５）。
【００２０】３．生物学的アッセイ用化学ルミネセント
直接ラベル (a) ルミノール及びイソルミノール アミノフタルヒドラジド、ルミノール及びイソルミノー
ルはＨ2 Ｏ2 及びパーオキシド酵素触媒と基礎的な条件
下、光の放出を伴って反応する。この反応は、Ｆｅ(II
I) ，Ｃｕ(II)及びＣｒ(III) を含むいくつかの金属イ
オンの少量によっても触媒される。ラベルとしてルミノ
ールを用いる最初の化学ルミネセントイムノアッセイ
は、ビオチンのアッセイでＳｃｈｒｏｅｄｅｒにより報
告されている。（Ｈ．Ｒ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｐ．
Ｏ．Ｖｏｇｅｌｈｕｔ，Ｒ．Ｊ．Ｃａｒｒｉｃｏ，Ｒ．
Ｃ．Ｂｏｇｕｓｌａｓｋｉ，Ｒ．Ｔ．Ｂｕｃｋｌｅｒ，
Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．４８，１９３３（１９７６））。
ラベルとしてのルミノール誘導体の使用したいくつかの
適用例がその後報告されている。（Ｈ．Ｒ．Ｓｃｈｒｏ
ｅｄｅｒ ｉｎ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍ．Ｓｅｒｉｏ ａｎｄ Ｍ．
Ｐａｚｚａｇｌｉ，Ｅｄｓ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ １２９−１４６（１９８
２）；Ｍ．Ｐａｚｚａｇｌｉ，Ｇ．Ｍｅｓｓｅｒｉ，
Ａ．Ｌ．Ｃａｌｄｉｎｉ，Ｇ．Ｍｏｎｅｔｔｉ，Ｇ．Ｍ
ａｒｔｉｎａｚｚｏ ａｎｄ Ｍ．Ｓｅｒｉｏ，Ｊ．Ｓ
ｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９，４０７（１９
８３）；Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃ
ｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＮｅｗ Ｐｅｒｓｐ
ｅｃｔｉｖｅｓ，Ｊ．Ｓｃｈｏｌｍｅｒｉｃｈ，等、Ｅ
ｄｓ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｃｈｉｃｈｅ
ｓｔｅｒ（１９８７））。
【００２１】種々のエンハンサーがルミノールの使用と
一緒に採用されて放出される光の強度を増加させてい
る。これらには、Ｄ−ルシフェリン（Ｔ．Ｐ．Ｗｈｉｔ
ｅｈｅａｄ，Ｇ．Ｈ．Ｔｈｏｒｐｅ，Ｔ．Ｊ．Ｃａｒｔ
ｅｒ，Ｃ，Ｇｒｏｕｃｕｔｔａｎｄ Ｌ．Ｊ．Ｋｒｉｃ
ｋａ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５，１５８（１９８３）），
及びｐ−ヨードフェノール（Ｇ．Ｈ．Ｔｈｏｒｐｅ，
Ｌ．Ｊ．Ｋｒｉｃｋａ，Ｓ．Ｂ．Ｍｏｓｅｌｙ ａｎｄ
Ｔ．Ｐ．Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅ
ｍ．，３１，１３３５（１９８５））を含む。
【００２２】
【化４７】
【００２３】(b) アクリジニウム及びフェナントリジニ
ウムエステル Ｎ−メチルアクリジニウム及びカルボン酸フェナントリ
ジニウムの芳香族エステルは、Ｈ2 Ｏ2 と塩基での処理
により化学ルミネセント反応を行なう。これらのエステ
ルの安定性は、高pHで顕著に減少する。以下に示すよう
に芳香族部分（ｍｏｉｅｔｙ）にリンカー基Ｒを組み込
むと、抗原、抗体又は固体サポートに化学ルミネセント
ラベルを付着することになる。
【００２４】この研究は、特許（Ｆ．ＭｃＣａｐｒａ，
Ｄ．Ｅ．Ｔｕｔｔ，Ｒ．Ｍ．Ｔｏｐｐｉｎｇ，英国特許
第１，４６１，８７７（１９７７））及び以下の文献に
報告されている（Ｉ．Ｗｅｅｋｓ，Ｉ．Ｂｅｈｅｓｈｔ
ｉ，Ｆ．ＭｃＣａｐｒａ，Ａ．Ｋ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ，
Ｊ．Ｓ．Ｗｏｏｄｈｅａｄ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，２
９，１４７４（１９８３）；Ｉ．Ｗｅｅｋｓ，Ａ．Ｋ．
Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｊ．Ｓ．Ｗｏｏｄｈｅａｄ，Ｃｌｉ
ｎ．Ｃｈｅｍ．，２９，１４８０（１９８３））。これ
らの化合物は、ＴＳＨ（ＬｕｍａＴａｇ（商標）；Ｌｏ
ｎｄｏｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，；Ｅｄ
ｅｎ Ｐｒａｉｒｉｅ，ＭＮ）、そして遊離チロキシン
（Ｍａｇｉｃ Ｌｉｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ；Ｃｉｂａ−Ｃ
ｏｒｎｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．；
メドフィールド、ＭＡ）の検出用商業用イムノアッセイ
キットでラベルとして使用されている。この技術は、ラ
ベルＤＮＡプルーブにも使用されている（Ｌ．Ｊ．Ａｒ
ｎｏｌｄ，Ｊｒ．，Ｐ．Ｗ．Ｈａｍｍｏｎｄ，Ｗ．Ａ．
Ｗｉｅｓｅ，Ｎ．Ｃ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅ
ｍ．，３５，１５８８（１９８９））。
【００２５】
【化４８】
【００２６】(c) 熱化学ルミネセント検出用アダマンチ
リデンアダマンタンジオキセタン アダマンチリデンアダマンタンジオキセタンの誘導体
は、抗体と蛋白質の直接ラベリング用として、Ｗｙｎｂ
ｅｒｇ及び共同研究者により調製されている。（Ｊ．
Ｃ．Ｈｕｍｍｅｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．Ｌｕｉｄｅｒ，Ｈ．Ｗ
ｙｎｂｅｒｇ，Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，５
９，６３９（１９８７）；Ｊ．Ｃ．Ｈｕｍｍｅｌｅｎ，
Ｔ．Ｍ．Ｌｕｉｄｅｒ，Ｈ．Ｗｙｎｂｅｒｇ．“Ｔｈｅ
ｒｍｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙｓ”，ｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ
Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｗ．Ｐ．Ｃｏｌｌｉｎ
ｓ，Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ｐ．１９１（１９８８）；Ｈ．Ｗｙｎｂｅｒ
ｇ，Ｅ．Ｗ．Ｍｅｉｊｅｒ，Ｊ．Ｃ．Ｈｕｍｍｅｌｅ
ｎ，“１，２−Ｄｉｏｘｅｔａｎｅｓ ａｓ Ｃｈｅｍ
ｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＰｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｌａ
ｂｅｌｓ”ｉｎ Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅａｎ
ｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，Ｍ．Ａ．Ｄ
ｅＬｕｃａ，Ｗ．Ｄ．ＭｃＥｌｒｏｙ，Ｅｄｓ．，Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ．６
８７（１９８１））。
【００２７】化学ルミネセンスの検出では、ラベルされ
たアナライト（ａｎａｌｙｔｅ）がプラスチックディス
ク上に固定化され、２５０から３００℃に加熱されるこ
とが必要である。この極端な温度は、水溶液中で実施さ
れる均一イムノアッセイ系の発展とは相容れないもので
ある。アダマンチリデンアダマンタンジオキセタンの熱
分解（ｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｓ）からの化学ルミネセン
ス量子収率は非常に低い（φCL＝１０-4）ので、高蛍光
アクセプターへのエネルギー移動のテクニックを採用し
て、より高い検出感度を達成しなければならなかった。
このことは第２のラベル、フルオレッサー（ｆｌｕｏｒ
ｅｓｃｅｒ）、も又化学的にアナライトか又は第１のラ
ベルかに付着することを要求している（Ｊ．Ｃ．Ｈｕｍ
ｍｅｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．Ｌｕｉｄｅｒ，Ｈ．Ｗｙｎｂｅｒ
ｇ，Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１３
３，５３１（１９８６））。ジオキセタンを蛋白質に化
学的に結合するのに使用される反応Ｒ基は以下に示すも
のを含んでいた。
【００２８】
【化４９】
【００２９】４．ラベリング手法 有機及び生物学的分子にラベルを化学的に結合するいろ
いろな方法が文献に記述されている（例えば、Ｌ．Ｊ．
Ｋｒｉｃｋａ，Ｌｉｇａｎｄ−ＢｉｎｄｅｒＡｓｓａｙ
ｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，１９８５，ｐｐ．１５−５１ ａｎｄ Ｍ．
Ｚ．Ａｔａｓｓｉ，“Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ，”Ｃｈａｐｔｅｒ １ ｉｎ Ｉｍｍｕ
ｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏ
ｌ．１，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９７７，ｐｐ．１−１６１，及び、その中のレフ
ァレンスを参照）。抗体及び蛋白質は、蛋白質中に存在
するある種の求核基（−ＳＨ，−ＯＨ，−ＮＨ2 ，−Ｃ
ＯＯＨ）を以下の表１に示すような化学的に反応性の基
を有するラベルと反応させることによって好都合にラベ
ルすることができる。適当に機能化された核酸及びＤＮ
Ａプルーブも又アミン又はチオール含有核酸を合成し、
これらの分子をジオキセタン上の対応する反応基と反応
させることによってラベルすることができる。
【００３０】あるいは、核酸（主にオリゴヌクレオチ
ド）は、ヒドロキシルを活性化されたホスホラミジトと
反応させることによって、ジオキセタンにリンクするこ
とができる。この場合、このホスホラミジトは核酸上に
位置することができ、そしてヒドロキシルは、ジオキセ
タン上に置かれ、この逆も同様である。ラベルされ得る
分子の他の型としては、酵素、蛋白質抗原、ハプテン、
ステロイド、炭水化物、脂肪酸、プロスタグランジン、
トロンボキサン、ロイコトリエン、ヌクレオシド及びヌ
クレオチドが含まれる。
【００３１】表１．有機および生物学的分子へのラベル
の化学結合のための反応基 １） アミン（−ＮＨ2 ）に対して反応性のある基
【００３２】
【化５０】
【００３３】２） チオール（−ＳＨ）に対して反応性
の基
【００３４】
【化５１】
【００３５】カルボン酸（−ＣＯ2 Ｈ）に対して反応性
の基 −ＮＨ2 −ＯＨ −ＮＨＮＨ2
【００３６】二官能性カップリング試薬も又おだやかな
反応基を有する有機及び生物学的分子にラベルをカップ
ルするのに使用できる（Ｌ．Ｊ．Ｋｒｉｃｋａ，Ｌｉｇ
ａｎｄ−Ｂｉｎｄｅｒ Ａｓｓａｙｓ，Ｍａｒｃｅｌ
Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８
５，ｐｐ．１８−２０，Ｔａｂｌｅ ２．２ ａｎｄ
Ｔ．Ｈ．Ｊｉ，“Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｒｅａｇ
ｅｎｔｓ，”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ，９１，５８０−６０９（１９８３）参照）。 二
官能性試薬には、最終の構造中に取り込まれるようなも
のと、そうではなくただ２つの試薬をカップルするのに
役立つものの２つの型がある。フルオレセインは、抗フ
ルオレセインを有するコンプレックスを形成するのに使
用される。更に、プソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎ）はＤ
ＮＡに共有結合するのに使用される。
【００３７】対象の分子への化学ルミネセントジオキセ
タンの物理的結合又はコンプレックス形成は、以下に示
すようにラベルをビオチン分子（ビタミンＨ）に化学的
に結合させ、そして対象の有機又は生物学的分子をアビ
ジン（ａｖｉｄｉｎ）又はストレプトアビジン（ｓｔｒ
ｅｐｔａｖｉｄｉｎ）のいずれかに化学的に結合させて
行なうことができる。後者の２つの化合物は、ビオチン
に対する４つの高親和性結合部位を有するバクテリアの
蛋白である（Ｒ．Ｍ．Ｂｕｃｋｌａｎｄ，Ｎａｔｕｒ
ｅ，３２０，５５７−５５８（１９８６）及びそのレフ
ァレンス）。
【００３８】ラベルされたビオチン又はラベルされたア
ビジン又はストレプトアビジンによる有機又は生物学的
分子（抗原）の検出
【００３９】
【化５２】
【００４０】Ａｇ、抗原；Ａｂ、抗体；Ｂ、ビオチンＳ
Ａ、ストレプトアビジン；Ｌ、ラベル
【００４１】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は、有機及び生物学的物質及び化合物を検出するのに使
用する方法及び化学ルミネセントなトリガラブルな１，
２−ジオキセタンを提供することである。更に、イムノ
アッセイ及びＤＮＡハイブリダイゼーションアッセイで
使用できる方法及び化学ルミネセントなトリガラブルな
１，２−ジオキセタンを提供することが本発明のもうひ
とつの課題である。
【００４２】
【課題を解決するための手段】本発明は、式：
【００４３】
【化５３】
【００４４】（式中、Ａｒは、フェニル及びナフチルか
ら成る群から選ばれる芳香族置換基、Ａは、有機又は生
物学的分子と化学的にカップルする置換基及び有機又は
生物学的分子に物理的にカップルして分子上のラベルと
してジオキセタン化合物を与える置換基から成る群から
選ばれ、Ｒ1 は任意であって、もし存在するとすれば１
から３０炭素原子及び任意に、炭素原子のいくつかを置
換した酸素、窒素、イオウ、及びリンから成る群から選
ばれたヘテロ原子を含むリンキング（ｌｉｎｋｉｎｇ）
置換基であり、Ｘは、活性化試薬により除去され、光を
ジオキセタンにより作るような化学的に不安定な置換基
であり、そして
【００４５】
【化５４】
【００４６】は、６から３０炭素原子を含むポリサイク
リックアルキレン置換基である）のジオキセタン化合物
に関する。
【００４７】本発明は又、上記１，２−ジオキセタン化
合物の製造に使用される次の式：
【００４８】
【化５５】
【００４９】（式中、Ａは、有機又は生物学的分子と化
学的にカップルする置換基及び有機又は生物学的分子と
物理的にカップルして分子上のラベルとしてジオキセタ
ン化合物を与える置換基から成る群から選ばれた置換基
であり、Ｒ1 は任意であり、存在するとすれば１から３
０炭素原子及び任意に、炭素原子のいくつかを置換した
酸素、窒素、イオウ、リンから成る群から選ばれるヘテ
ロ原子を含む結合置換基（ｌｉｎｋｉｎｇ ｓｕｂｓｔ
ｉｔｕｅｎｔ）であり、Ｘは活性化された試薬により除
去され、アルケン化合物及び６から３０炭素原子を含む
ポリサイクリックアルケン、
【００５０】
【化５６】
【００５１】から作られた１，２−ジオキセタンによ
り、光を作る化学的に不安定な基である）のアルケン化
合物に関する。
【００５２】この置換基
【化５７】
【００５３】は、好ましくはアダマンチルである。６か
ら３０炭素原子を含む他のポリサイクリックアルキレン
置換基も使用できる。Ｒ1 置換基は、好ましくは、
【００５４】
【化５８】
【００５５】（式中、ｎは１から３０の間の整数であ
る）か又は、
【００５６】
【化５９】
【００５７】（式中、ｎは、１から３０までの整数であ
る）か又は −（ＣＨ2 ）n （式中、ｎは、１から３０までである）である。
【００５８】Ａｒは、フェニル及びナフチルから成る群
から選ばれる。フェニルが好ましい。Ａは、好ましく
は、ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基、カルボン酸基、
ヒドロキシル基、ビオチン、抗体が分子と結合又は反応
して、抗体のラベルを与える抗体反応性分子、マレイミ
ド；アミン等である。無数のこのような化学的に反応性
のある基又はカップリング基が、前述した如くＡとして
機能しうる。Ａがビオチンのとき、好ましい分子として
は、
【００５９】
【化６０】
【００６０】（式中、ｍは２から３０の間の整数であ
る）である。本発明は、化学結合により、更にいくつか
の場合、物理的相互作用を通じて有機及び生物学的分子
と結合しうる化学的にトリガラブルな、安定な１，２−
ジオキセタンを含む。活性化試薬によってＸ基を除去す
ると自発的に分解して光を作る不安定なアリールオキシ
ドジオキセタンを発生する。得られる化学ルミネセンス
の強度は、ラベルされた有機又は生物学的分子の量の直
接的な計測を与える。ジオキセタンラベルのいくつかの
例を特異的反応性基Ａと脱離基Ｘと一緒に示す。種々の
基Ｒ1 は、ジオキセタンに付着した酸素原子と反応性基
Ａとの間のリンカーアーム（ｌｉｎｋｅｒ ａｒｍ）と
して役立っている。
【００６１】
【化６１】
【００６２】Ｒ1 は、鎖長１から３０原子の炭素及び酸
素、窒素、イオウ、リンのようなヘテロ原子からなる。
更に、炭素及びヘテロ原子を含むリングは、リンカーア
ームの部分として使用される。あるいは、Ａは、リンカ
ーアームなしに酸素原子に直接付着することができる。
可能な反応性基Ａには、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ド、マレイミド、ヨードアセテート、ホスホラミジト
（ｐｈｏｓｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）、イソシアネート、
イソチオシアネート、ヒドロキシル、スルフヒドリル、
アミノ、カルボキシル及び表１に示された他のものを含
む。可能なＸ基は、反応性基Ａを有機又は生物学的分子
と結合させる過程の間安定であるどのような化学的脱離
基も含む。基Ｘを有するラベルされた分子を適当な活性
化試薬とその後処置することによって化学ルミネセンス
を生じる。ここに示す実施例及び１９８６年７月１７日
に出願した米国特許出願Ｎｏ．８８７，１３９は化学的
及び酵素的に除去することのできる典型的なＸ基を説明
している。この対応するＸ−オキシ基は、ヒドロキシ
ル、アルキル、又はアリールカルボキシルエステル、無
機オキシ酸塩、アルキル又はアリールシリルオキシ及び
酸素−ピラノシドを含むがこれらに限定されない。除去
されて化学ルミネセンスを誘発しうるＸ基の別の例は、
保護基に関する標準的論文（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ
ｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎ
ｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８，ｐｐ１０−７２（１９８
１））に見出される。このような基は、Ｓｉ（ＣＨ3 ）
2 ｔＢｕ、ＳｉＰｈ2 ｔＢｕ、ＣＨ2 ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｓ
ｉ（ＣＨ3 ）3 、ＣＨ2 ＣＨ2 Ｓｉ（ＣＨ3 ）3 及びＳ
ｉ（ＣＨ2 ＣＨ3 ）2 ｉ−Ｐｒである。更に、ナフチル
のような他のアリール基がメタ−フェニルの代わりに使
用しうることに留意すべきである。ナフチルを有する−
ＡｒＯＸの例は、
【００６３】
【化６２】
【００６４】を含む。１，２−ジオキセタン化合物の合成 ジオキセタンは、ここに述べる手法を用いて、対応する
アルケンの光酸素化（ｐｈｏｔｏｏｘｙｇｅｎａｔｉｏ
ｎ）により製造する。代わりに、ジオキセタン中のひと
つの反応性基Ａをジオキセタン１を対応するジオキセタ
ン２へ変換するような化学反応によって他の基Ａに交換
することができる。ジオキセタン３ａ−ｃは、アルケン
１４、１７及び２０の光酸素化により調製する。
【００６５】
【化６３】
【００６６】合成されたジオキセタン
【００６７】
【化６４】
【００６８】
【化６５】
【００６９】装置 核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルをＧｅｎｅｒａｌ Ｅ
ｌｅｃｔｒｉｃ ＱＥ３００（商標）スペクトロメータ
ーでＣＤＣｌ3 中の溶液として、他に断わらない限り内
部標準としてテトラメチルシランを用いて得た。質量ス
ペクトルはＫｒａｔｏｓ ＭＳ−８０（商標）又はＡＥ
Ｉ ＭＳ−９０（商標）スペクトロメーターのどちらか
で得た。重量はＭｅｔｔｌｅｒ ＡＥ １６３（商標）
分析天秤で得た。化学ルミネセンス測定はＴｕｒｎｅｒ
か又はＡｐｐｌｅ Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ（商標）コンピ
ューターとインターフェースさせた本実験室製の装置を
用いて実施した。
【００７０】材料 種々の商業的源から得た溶媒及び試薬は入手し得る最高
級のグレードであり、特に断わらない限り更に精製する
ことなく使用した。溶媒を水酸化ナトリウム又は水酸化
カルシウムから蒸留により乾燥した。アルケンの合成 ２−クロロエチル ３−ヒドロキシベンゾエート
【００７１】
【化６６】
【００７２】２−クロロエタノール（７０ｍＬ、１．０
モル）中の３−ヒドロキシ安息香酸（１５．０ｇ、０．
１１モル）溶液と１ｍＬの濃硫酸を一晩還流した。ＴＬ
Ｃ分析（シリカゲル／２０％エチルアセテート／ヘキサ
ン）は新しい物質への明らかな変換を示した。過剰のク
ロロエタノールを蒸発により除去して茶色の溶液を得、
これをエチルアセテートに溶解し水で洗滌した。有機層
をＭｇＳＯ4 で乾燥し、濃縮して２１．０ｇの生成物を
白色固体として得た。ｍｐ５０℃； 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ3 ）δ３．８１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、
４．５７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、４．７７
（ｓ，１Ｈ）、７．０６−７．６６（ｍ，４Ｈ）、13Ｃ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ ４１．５２、６４．７５、
１１６．４３、１２０．７７、１２１．９８、１２９．
８０、１３０．７１、１５６．０４、１６６．５７；Ｍ
Ｓ ｍ／ｅ（ｒｅｌ．ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）２００（２
６）、１３８（５９）、１２１（１００）、９３（３
１）、６５（２１）、３９（１２）；ＭＳ ｅｘａｃｔ
ｍａｓｓ；理論値２００．０２４０、実測値２００．
０２４２。２−クロロエチル ３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシ
リルオキシ）ベンゾエート
【００７３】
【化６７】
【００７４】２−クロロエチル ３−ヒドロキシベンゾ
エート（４．０ｇ、０．０２モル）とｔｅｒｔ−ブチル
ジメチルシリルクロリド（４．５ｇ、０．０２９モル）
の５ｍＬのドライＤＭＦ中の溶液に、イミダゾール（９
２．７ｇ、０．０４モル）を徐々に添加した。それから
溶液を一晩攪拌した。ＴＬＣ分析（シリカゲル、２０％
エチル アセテート／ヘキサン）は、新物質への明らか
な変換を示した。この溶液を２５ｍＬの水の中に注ぎ、
エーテルで抽出した（３×２５ｍＬ）。合わせたエーテ
ル溶液を無水ＭｇＳＯ4 上で乾燥した。溶媒を蒸発させ
て油状物質を得、これを（エチルアセテート／ヘキサ
ン、１０：９０）を用いてシリカ上でクロマトグラフし
て生成物を無色液体として定量的に得た。 1Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ 3 ）δ０．２１８（ｓ，６Ｈ）、０．９９４
（ｓ，９Ｈ），３．８１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ）、４．５６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．０
５−７．６５（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3 ）δ −４．９７、１７．６６、２５．１２、４
１．０６、６３．９１、１２０．６１、１２２．１９、
１２４．６０、１２８．９５、１３０．５３、１５５．
３１、１６５．３５；ＭＳ ｍ／ｅ（ｒｅｌ．ｉｎｔｅ
ｎｓｉｔｙ）３１４（１４）、２５７（９）、２３５
（９）、２１３（１００）、１８５（６）、１４９
（７）；１３５（１０）、１２０（６）、９３（１
３）、８３（６）、６９（９）、５５（９）；ＭＳ ｅ
ｘａｃｔ ｍａｓｓ；理論値３１４．１１０４、実測値
３１４．１１１０。〔（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシフェニ
ル）（２−クロロエトキシ）メチレン〕アダマンタン
(7)
【００７５】
【化６８】
【００７６】還流コンデンサーを備えた１００ｍＬ ３
首フラスコをホットエアガン及び窒素パージングにより
乾燥した。これに乾燥ＴＨＦ２００mlを入れ、氷浴中に
冷却した。チタニウムトリクロリド（２４．５ｇ、０．
１６モル）；つづいてリチウムアルミニウムハイドライ
ド（３．０ｇ、０．０８モル）をはげしく攪拌しながら
小量づつ添加した。冷却浴を除去し、この黒色混合物を
温めて室温にした。トリエチルアミン（１５ｍＬ）を滴
下し、反応混合物を１時間還流した。２−クロロエチル
３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ベンゾ
エート（５．０ｇ、０．０１５モル）及びアダマンタノ
ン（７．１ｇ、０．０５モル）の溶液を、この還流中の
混合物に１時間かけて滴下した。１時間の還流後ＴＬＣ
分析（エチルアセテート／ヘキサン、１０：９０）は、
新しい物質への変換を示した。反応混合物を冷却し、ヘ
キサンで抽出した。溶媒の蒸発後、この粗物質を（エチ
ルアセテート／ヘキサン、３：９７）を用いてクロマト
グラフして５．０ｇ（７４％）のアルケン７を白色油状
物として得た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ０．１９
４（ｓ，６Ｈ）、０．９８２（ｓ，９Ｈ）、１．７８−
１．９８（ｍ，１２Ｈ）、２．６５（ｂｓ，１Ｈ）、
３．３４（ｂｓ，１Ｈ）、３．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝
５．７Ｈｚ）、３．６６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ）、６．８５−７．２９（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）δ −４．４６、１８．２１、２５．６
６、２８．２８、３０．２０、３２．３９、３８．９
４、３９．２０、４２．６１、６８．９５、１１９．６
２、１２１．０４、１２２．５０、１２９．０９、１３
２．７８、１３６．４０、１４１．１１、１５５．４
９；ＭＳ ｍ／ｅ（ｒｅｌ．ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）４３
２（１００）、３３１（２２）、２３５（１３）、１９
９（１０）、１５１（１９）、１０５（１７）、７３
（４４）、５７（１４）；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓ
ｓ；理論値４３２．２２５１、実測値４３２．２２４
７。〔（２−クロロエトキシ）（３−ヒドロキシフェニル）
メチレン〕アダマンタン(8)
【００７７】
【化６９】
【００７８】５ｍＬのＴＨＦ中の上記に示すｔｅｒｔ−
ブチルジメチルシリル保護−アルケン７の攪拌溶液
（２．０ｇ、０．００４モル）に、テトラブチルアンモ
ニウムフルオリドトリヒドレート（ＴＢＡＦ，１．４
ｇ、０．００４モル）を添加した。得られた溶液を１０
分間攪拌した。ＴＬＣ分析（エチルアセテート／ヘキサ
ン、２０：８０）は、新しい物質への転換を示した。溶
媒の蒸発後、粗生成物を水で洗滌し、エーテル中に入れ
た。有機層をＭｇＳＯ4 上で乾燥し、蒸発させて乾燥し
た。油状物質を（エチルアセテート／ヘキサン、２０：
８０）を用いてシリカゲル上でクロマトグラフして１．
３ｇ（１００％）のアルケン８を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．８１−１．９６
（ｍ，１２Ｈ）、２．６７（ｂｓ，１Ｈ）、３．３４
（ｂｓ，１Ｈ）、３．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈ
ｚ）、３．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、６．７
７−７．１９（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3 ）δ ２８．２１、３０．２４、３２．３５、３
７．０８、３８．９２、３９．１９、４２．５５、６
９．０５、１１４．７６、１１６．０５、１２１．９
２、１２９．３１，１３３．４１、１３６．６２、１４
０．７７、１５５．６４；ＭＳ ｍ／ｅ（ｒｅｌ．ｉｎ
ｔｅｎｓｉｔｙ）３１８（１００）、２２７（１９）、
２１３（２４）、１２１（９２）、１０７（２９）、９
３（３７），６９（２１）、５５（３６）、４１（４
０）；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ；理論値３１８．１
３８６、実測値３１８．１３８３。
【００７９】〔（３−ヒドロキシフェニル）（２−ヨー
ドエトキシ）メチレン〕アダマンタン(9)
【００８０】
【化７０】
【００８１】ヨー化ナトリウム（１４．０ｇ、０．０９
モル）及び〔（２−クロロエトキシ）（３−ヒドロキシ
フェニル）メチレン〕アダマンタン８（３．０ｇ、０．
００９モル）を乾燥アセトンに溶解し、６日間還流し
た。反応をＴＬＣ分析（エチルアセテート／ヘキサン、
１０：９０）で追跡し、反応の完了後、溶媒を蒸発させ
て白色固体を得た。この固体をメチレンクロリドで数回
洗滌し、この合わせた有機層を再度水で洗滌した。有機
層をＭｇＳＯ4 上で乾燥して、濃縮して３．８ｇ（１０
０％）のアルケン９を油状物質として得た。 1Ｈ ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．７８−１．９７（ｍ，１２
Ｈ）、２．６４（ｂｓ，１Ｈ）、３．１９（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝７．１Ｈｚ）、３．３５（ｂｓ，１Ｈ）、３．６９
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、６．７５−７．２１
（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ２．４
０、２８．１３、３０．４１、３２．３３、３６．９
９、３８．８６、３９．０９、６９．７４、１１４．８
６、１１６．００、１２１．７９、１２９．２８，１３
３．３７、１３６．４２、１４０．５１、１５５．６
６；ＭＳｍ／ｅ（ｒｅｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）４１０
（４２）、２５６（１９）、２２７（７５）、１５５
（１８）、１２１（１００）、１０７（３２）、９３
（２８）、７９（１４）、６５（１６）；ＭＳ ｅｘａ
ｃｔ ｍａｓｓ：理論値４１０．０７４４、実測値４１
０．０７４４。
【００８２】〔（２−アミノエトキシ）（３−ヒドロキ
シフェニル）メチレン〕アダマンタン(10)
【００８３】
【化７１】
【００８４】最小量のＴＨＦ中のアルケン９（３．０
ｇ、０．０１モル）の溶液をドライアイス中に設置した
シールされたチューブ中の１０ｍＬの液体アンモニアに
添加した。チューブを封印後、油浴中で４０℃で１７時
間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒を蒸発させて白
色固体を得た。この物質をメチレンクロリドで抽出し
た。合わせたこの有機層を水で洗滌し、ＭｇＳＯ4 上で
乾燥し、そして濃縮して、２．０ｇ（９０％）のアルケ
ン１０を白色固体として得た。ｍｐ５５℃、 1ＨＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）δ１．７７−１．９６（ｍ，１２Ｈ）、
２．６８（ｂｓ，１Ｈ）、２．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝
４．８Ｈｚ）、３．２３（ｂｓ，１Ｈ）、３．４８
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．４６（ｂｓ，２
Ｈ）、６．７０−７．１７（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）δ２８．１６、３０．２８、３２．１
９、３６．９９、３８．８８、３９．０４、４１．３
３、７０．４５、１１４．９７、１１６．１７、１２
０．６３、１２９．０２、１３１．８９、１３６．６
９、１４１．７９、１５６．８６；ＭＳ ｍ／ｅ（ｒｅ
ｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）２９９（１０）、２５６（１
００）、２３９（５）、１９９（６）、１３５（１
２）、１２１（２７）、９３（１２）、７７（５）；Ｍ
Ｓ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値２９９．１８８５、
実測値２９９．１８９１。
【００８５】３−クロロプロピル ３−ヒドロキシベン
ゾエート
【００８６】
【化７２】
【００８７】３−クロロプロパノール（７６ｇ、０．８
１モル）中の３−ヒドロキシ安息香酸（１６．０ｇ、
０．１１５モル）溶液及び０．５ｍＬの濃硫酸を一晩還
流した。過剰のアルコールを真空蒸留により除去した。
褐色の粘性のある残渣をエチルアセテート（６０ｍＬ）
中に溶解し、水で洗滌した（２×１５ｍＬ）。有機層を
無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮し
た。この褐色で粘性のある残渣をカラムクロマトグラフ
ィー（エチルアセテート／ヘキサン、３０：７０）によ
り精製して、生成物を白色固体として得た。（２３．３
ｇ、０．１０８ｍｏｌ、９３．７％）： 1Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）δ２．１９−２．２８（ｍ，２Ｈ）、
３．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）、４．４８
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、５．９２（ｓ，１Ｈ）、
７．０５−７．６４（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ ｅｘａｃｔ
ｍａｓｓ：理論値２１４．０３９６、実測値２１４．０
４００。
【００８８】３−クロロプロピル ３−（ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシリルオキシ）ベンゾエート
【００８９】
【化７３】
【００９０】無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３−クロロプ
ロピル ３−ヒドロキシベンゾエート（１２．０ｇ、
０．０５５モル）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
クロリド（ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、１０．００ｇ、０．０６
７モル）に、イミダゾール（７．６１ｇ、０．１１モ
ル）を添加した。反応混合物を１時間攪拌し、その後、
水（５０ｍＬ）で稀釈し、ヘキサンで抽出した（４×２
０ｍＬ）。ヘキサン層を水で洗滌し（２×１０ｍＬ）、
無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮し
て所望の化合物を得た。（１６．６４ｇ、０．０５０６
ｍｏｌ、９０％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ０．
２１６（ｓ，６Ｈ）、０．９９４（ｓ，９Ｈ、２．１９
−２．２７（ｍ，２Ｈ）、３．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝
６．３Ｈｚ）、４．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ）、７．０１−７．６４（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ ｅｘａ
ｃｔ ｍａｓｓ：理論値３２８．１２６４、実測値３２
８．１２５７。
【００９１】〔３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオ
キシフェニル）（３−クロロプロポキシ）メチレン〕ア
ダマンタン（11）
【００９２】
【化７４】
【００９３】還流コンデンサーを備えた１リットルの３
首フラスコをホットエアガンで乾燥し、アルゴンでパー
ジした。無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）を添加し氷浴中で冷
却した。チタニウムトリクロリド（３３．３２ｇ、０．
２１６モル）を攪拌しながら添加した。水素化リチウム
アルミニウム（４．１ｇ、０．１０８モル）をはげしく
攪拌しながら少量づつ添加した。冷却浴をとり除き、反
応混合物を温めて室温にした。トリエチルアミン（２０
ｍＬ）を滴下し、反応混合物を１時間還流した。無水Ｔ
ＨＦ中の３−クロロプロピル ３−ｔｅｒｔ−ブチルジ
メチルシリルオキシベンゾエート（６．０ｇ、０．０１
８モル）及びアダマンタノン（８．２２ｇ、０．０５４
モル）の溶液をこの還流混合物に１時間かけて滴下し
た。反応混合物を１時間還流して室温まで冷却した。ヘ
キサン（５００ｍＬ）を添加し、０．５時間攪拌後、溶
液を濾過し、減圧下濃縮した。淡黄色残渣をクロマトグ
ラフして（エチルアセテート／ヘキサン、３：９７）ア
ルケン１１を粘性油状物として得た。（４．７ｇ、０．
０１０ｍｏｌ、５８．４５％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3 ）δ０．１９（ｓ，６Ｈ）、０．９８（ｓ，９
Ｈ）、１．７６−２．０１（ｍ，１４Ｈ）、２．６２
（ｂｓ，１Ｈ）、３．２２（ｂｓ，１Ｈ）、３．５２
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、３．６３（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝６．６Ｈｚ）、６．７４−７．２０（ｍ，４Ｈ）；
ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値４４６．２４０
７、実測値４４６．２４１４。
【００９４】〔（３−クロロプロポキシ）（３−ヒドロ
キシフェニル）メチレン〕アダマンタン（12）
【００９５】
【化７５】
【００９６】無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のアルケン１１
（０．５ｇ、１ミリモル）の攪拌溶液に、ＴＢＡＦ
（０．３２ｇ、１．２ミリモル、１．２２ｍＬの１Ｍ溶
液）を添加し、反応混合物室温で０．５時間攪拌した。
溶媒を減圧下除去し、残渣をヘキサン（２０ｍＬ）中に
溶解した。この溶液を水（１０ｍＬ）で洗滌し、有機層
を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮
した。淡黄色油状物質をプレパラティブＴＬＣ（エチル
アセテート／ヘキサン、２０：８０）により精製して純
粋な化合物１２を得た（０．３４ｇ、１ mmol 、９２
％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．５−２．０３
（ｍ，１４Ｈ）、２．６５（ｂｓ，１Ｈ）、３．２２
（ｂｓ，１Ｈ）、３．５４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、
３．６３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、５．４５
（ｓ，１Ｈ）、６．７８−７．２６（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ
ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値３３２．１５４２、実
測値３３２．１５４０。
【００９７】〔（３−シアノプロポキシ）（ヒドロキシ
フェニル）メチレン〕アダマンタン（13）
【００９８】
【化７６】
【００９９】シアン化ナトリウム（９mg、０．１９ミリ
モル）を無水ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中に溶解し、この溶液
を９０℃に加熱した。アルケン１２（０．０２６ｇ、
０．０７８ミリモル）を上記溶液に添加し、反応混合物
を９０℃、０．７５時間攪拌した。水（１５ｍＬ）を添
加し、エーテルで抽出した（３×１０ｍＬ）。エーテル
層を水（１０ｍＬ）で洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で
乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。プレパラティブＴＬ
Ｃ（エチルアセテート／ヘキサン、２０：８０）によっ
て精製して純粋なニトリル１３を得た。（０．０２１
ｇ、０．０６５ mmol 、８４％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ3 ）δ１．６−２．０３（ｍ，１４Ｈ）、２．４８
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．６４（ｂｓ，１
Ｈ）、３．１８（ｂｓ，１Ｈ）、３．４９（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝６Ｈｚ）、４．９９（ｓ，１Ｈ）、６．７８−７．
２６（ｍ，４Ｈ）；ＩＲ（ＣＨＣｌ3 ）cm-1３６６０−
３６００、３０００、２９１０、２８４０、２２９０、
１４２０、１２００、１１００；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍ
ａｓｓ：理論値３２３．１８８５２、実測値３２３．１
８８２。
【０１００】〔（３−カルボキシプロポキシ）（３−ヒ
ドロキシフェニル）メチレン〕アダマンタン（14）
【０１０１】
【化７７】
【０１０２】水酸化ナトリウム（２mlの２Ｎ溶液）をニ
トリル１３（０．０１８ｇ、０．０５５ミリモル）に添
加し、反応混合物を１時間還流した。溶液を冷却して室
温にし、水（５ｍＬ）で稀釈した。この水溶液を稀酸
（１０ｍＬ）で洗滌し、この白色で濁った溶液を直ちに
エチルアセテート（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層
を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮
した。この粗残渣をプレパラティブＴＬＣ（エチルアセ
テート／ヘキサン、３０：７０）によって精製して純粋
な酸１４を得た。（０．０１２ｇ、０．０３５ mmol 、
６３％）： 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．６−２．０
３（ｍ，１６Ｈ）、２．４４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈ
ｚ）、２．６５（ｂｓ，１Ｈ）、３．２１（ｂｓ，１
Ｈ）、３．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、６．１−
７．４１（ｍ，５Ｈ）；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：
理論値３４２．１８３１、実測値３４２．１８３６。
【０１０３】〔（３−カルボキシプロピル）（３−ヒド
ロキシフェニル）メチレン〕アダマンタン Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル１５
【０１０４】
【化７８】
【０１０５】カルボン酸１４（０．００８ｇ、０．０２
ミリモル）を無水ジオキサン（１ｍＬ）中に溶解した。
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．００７
２ｇ、０．０３５ミリモル）及びＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミド（０．００４ｇ、０．０３５ミリモル）を上記
溶液に添加し、室温でアルゴン下１２時間攪拌した。白
色沈殿物を濾過し、この溶液を減圧下濃縮した。残渣を
プレパラティブＴＬＣ（メタノール／ジクロロメタン、
２：９８）により精製して純粋な生成物１５を得た。
（０．００９ｇ、０．０２ mmol 、８８％）： 1Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．７１−２．０５（ｍ，１４
Ｈ）、２．６８（ｂｓ，１Ｈ）、２．７８（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．８６（ｂｓ，４Ｈ）、３．２１
（ｂｓ，１Ｈ）、３．４７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、
５．９０（ｂｓ，１Ｈ）、６．７８−７．２６（ｍ，４
Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ２４．５６、２
５．４７，２７．４４、２８．１４、３０．２３、３
２．１５、３７．００、３８．８３、３９．０４、６
６．９０、６７．２３、９０．６４、１１４．５２、１
１５．７２、１２１．３４、１２８．９７、１３２．０
７、１３６．７５、１４１．５４、１５５．９８、１６
８．４１、１６９．５４；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓ
ｓ：理論値４３９．１９９４、実測値４３９．１９８
８。
【０１０６】アルケン１６
【０１０７】
【化７９】
【０１０８】イミダゾール（０．０１５ｇ、０．２２ミ
リモル）及びＴＢＤＭＳクロリド（０．０３３ｇ、０．
２２ミリモル）を無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解したア
ルケン１４（０．０２５ｇ、０．０７ミリモル）の溶液
に添加し室温で２時間攪拌した。反応混合物を水（１０
ｍＬ）で希釈し、エチルアセテートで抽出した（２×１
２ｍＬ）。有機層を水（７ｍＬ）で洗滌し、無水硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。プレパ
ラティブＴＬＣによるこの残渣を精製しようとしたが、
分解してしまった。従って、粗生成物１６を直接次の工
程に使用した。
【０１０９】〔（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
オキシフェニル）（３−カルボキシプロポキシ）メチレ
ン〕アダマンタン（17）
【０１１０】
【化８０】
【０１１１】ビス−シリルオキシアルケン１６（０．０
３９ｇ、０．０６８ミリモル）をメタノール（５ｍＬ）
に溶解し、そしてＨ2 Ｏ（２ｍＬ）中に溶解したＫ2 Ｃ
Ｏ3（２当量）を添加した。反応混合物を室温で１０分
間攪拌した。ＴＬＣは出発物質の痕跡を示さなかった。
溶液を稀酸（７ｍＬ）で冷却（ｑｕｅｎｃｈ）し、エチ
ルアセテート（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ
2 Ｏ（５ｍＬ）で洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥
し、濾過し、減圧下濃縮して１７を得た。（０．０２５
ｇ、０．０４３mmol、８３％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3 ）δ０．１９（ｓ，６Ｈ）、０．９８（ｓ，９
Ｈ）、１．７７−１．９７（ｍ，１４Ｈ）、２．４５
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、２．６２（ｂｓ，１
Ｈ）、３．２２（ｂｓ，１Ｈ）、３．４２（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝６．０Ｈｚ）、６．７４−７．２１（ｍ，４Ｈ）；
ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値４５６．２６９
５、実測値４５６．２６９２。
【０１１２】〔（３−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ
フェニル）（３−カルボキシプロポキシ）メチレンアダ
マンタン Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル１８
【０１１３】
【化８１】
【０１１４】カルボン酸１７（０．０２５ｇ、０．０５
６ミリモル）を無水ジオキサン（１ｍＬ）中に溶解し
た。ＤＣＣ（０．０２３ｇ、０．１１ミリモル）及びＮ
−ヒドロキシスクシンイミド（０．０１３ｇ、０．１１
ミリモル）を上記溶液に添加し、室温でアルゴン下８時
間攪拌した。白色沈殿物を濾過し、溶液を減圧下濃縮し
た。残渣をプレパラティブＴＬＣ（エチルアセテート／
ヘキサン、４０：６０）により精製してアルケン１８を
得た。（０．０２８ｇ、０．０５０mmol、９０％）： 1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ０．１８（ｓ，６Ｈ）、
０．９７（ｓ，９Ｈ）、１．７６−１．９５（ｍ，１４
Ｈ）、２．６１（ｂｓ，１Ｈ）、２．７２（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝７．８Ｈｚ）、２．８２（ｂｓ，４Ｈ）、３．２１
（ｂｓ，１Ｈ）、３．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ）、６．７４−７．２６（ｍ，４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）δ２４．８９、２５．５５、２５．６
５、２７．９４、２８．２８、３０．２７、３２．３
０、３３．９０、３７．１４、３８．９２、３９．１
６、４９．１７、６７．４２、１０４．９３、１１９．
４１、１２１．０２、１２２．４３、１２３．８４、１
２９．０３、１３１．９１、１３６．８３、１４１．６
６、１５５．３５、１６８．４７、１６９．０４。
【０１１５】アルケン１９
【０１１６】
【化８２】
【０１１７】イミダゾール（０．０５３ｇ、０．０００
７８モル）及びｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド
（０．２１６ｇ、０．０００７８モル）を無水ＤＭＦ
（２ｍＬ）に溶解した酸１４（０．０９０ｇ、０．００
０２６モル）の溶液に添加し、室温で２時間攪拌した。
反応混合物を水（６ｍＬ）で稀釈し、エチルアセテート
（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（７ｍＬ）で
洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧
下濃縮した。残渣をプレパラティブＴＬＣにより精製し
ようとしたが、分解してしまった。従って、粗生成物１
９を次の工程に直接使用した。
【０１１８】〔（３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリ
ルオキシフェニル）（３−カルボキシプロポキシ）メチ
レン〕アダマンタン（２０）
【０１１９】
【化８３】
【０１２０】ビス−シリルオキシアルカン１９（０．２
１５ｇ、０．０００２６モル）をメタノール（５ｍＬ）
中に溶解し、Ｈ2 Ｏ（２ｍＬ）中に溶解したＫ2 ＣＯ3
（２当量）を添加した。反応混合物を室温で２０分間攪
拌した。ＴＬＣは出発物質の痕跡を示さなかった。この
溶液を稀酸（７ｍＬ）でクエンチし、エチルアセテート
で抽出した（２×２０ｍＬ）。有機層をＨ2 Ｏ（７ｍ
Ｌ）で洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過
し、減圧下濃縮して２０を得た。（０．１２ｇ、０．０
００２ mol、８０％）： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ
１．１０（ｓ，９Ｈ）、１．４９−１．８８（ｍ，１４
Ｈ）、２．３１（ｂｓ，１Ｈ）、２．３４（ｄ，２
Ｈ）、３．１０（ｂｓ，１Ｈ）、３．１８（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝６Ｈｚ）、６．６０−７．７１（ｍ，１４Ｈ）、１
０．５（ｂｓ，１Ｈ）；ＭＳ ｅｘａｃｔｍａｓｓ：理
論値５８０．３００８、実測値５８０．３０１２。
【０１２１】〔（３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリ
ルオキシフェニル）（３−カルボキシプロポキシ）メチ
レン〕アダマンタン Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
エステル（２１）
【０１２２】
【化８４】
【０１２３】カルボン酸２０（０．０７０ｇ、０．００
０１２モル）を無水ジオキサン（４ｍＬ）中に溶解し
た。ＤＣＣ（０．０７５ｇ、０．０００３６モル）及び
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．０４１ｇ、０．０
００３６モル）を上記溶液に添加し、室温でアルゴン下
１２時間攪拌した。白色沈殿物を濾過し、溶液を減圧下
濃縮した。残渣をプレパラティブＴＬＣ（メタノール／
ジクロロメタン；３：９７）により精製して２１（０．
０７１ｇ、０．０００１０モル、８８％）を得た。
（０．０７１ｇ、 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．１
０（ｓ，９Ｈ）、１．５０−１．９５（ｍ，１４Ｈ）、
２．３６（ｂｓ，１Ｈ）、２．５８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝
７．２Ｈｚ）、２．８２（ｂｓ，４Ｈ）３．０９（ｂ
ｓ，１Ｈ）、３．１９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、６．
５８−７．７１（ｍ，１４Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3 ）δ１９．３６、２４．６９、２４．９０、２５．
５３、２６．４３、２７．８３、２８．１６、３０．１
０、３２．０７、３３．９１、３７．０７、３８．７
９、３８．９３、６７．１５、１１９．０２、１２０．
８５、１２２．１３、１２７．６９、１２８．９０、１
２９．８４、１３１．６３、１３２．７７、１３５．５
２、１３６．３９、１４１．３７、１５５．２４、１６
８．４５、１６９．０３；ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓ
ｓ：理論値６７７．８３３９、実測値 Ｍ−２３９。
【０１２４】ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシロキシ ３
−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシロキシ）ベンゾエー
ト（２２）
【０１２５】
【化８５】
【０１２６】イミダゾール（１．２３ｇ、０．０１８モ
ル）及びＤＰＴＢＳクロリド（４．９７ｇ、０．０１８
モル）を無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解したｍ−ヒド
ロキシ安息香酸（１．０ｇ、０．００７２モル）の溶液
に添加し、室温で４時間攪拌した。反応混合物を水（１
０ｍＬ）で稀釈し、エチルアセテート（２×１５ｍＬ）
で抽出した。有機層を水（１０ｍＬ）で洗滌し、無水硫
酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。ク
ロマトグラフィー（エチルアセテート／ヘキサン、１
０：９０）による精製によって２２を得た。（４．３８
ｇ、０．００７１mol 、９８％）。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ3 ）δ１．１０（ｓ，９Ｈ）、１．１８（ｓ，９
Ｈ）、７．０１−７．７９（ｍ，２４Ｈ）。ＭＳ ｅｘ
ａｃｔ ｍａｓｓ：理論値６１４．、実測値 Ｍ−５
７，５５７。
【０１２７】３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシロキシ
安息香酸（２３）
【０１２８】
【化８６】
【０１２９】このビス−シロキシ 化合物２２（４．０
ｇ、０．００６５モル）をメタノール（２５ｍＬ）に溶
解し、Ｈ2 Ｏ（１０ｍＬ）に溶解したＫ2 ＣＯ3 （２当
量）を添加した。反応混合物を室温で２０分間攪拌し
た。ＴＬＣを出発物質の痕跡を示さなかった。溶液を稀
酸（２０ｍＬ）でクエンチし、エチルアセテートで抽出
した（３×２０ｍＬ）。有機層をＨ2 Ｏ（１５ｍＬ）で
洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧
下濃縮して２３を得た。（２．４３ｇ、０．００６４mo
l 、９９％）。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．１３
（ｓ，９Ｈ）、６．８８−７．７４（ｍ，１４Ｈ）、
９．７（ｂｓ，１Ｈ）。ＭＳ ｅｘａｃｔｍａｓｓ：理
論値３７６．１４９５、実測値 ３７６．１５００。
【０１３０】プロパン−３−オール ３−（ｔｅｒｔ−
ブチルジフェニルシロキシ）ベンゾエート（２４）
【０１３１】
【化８７】
【０１３２】ＤＥＡＤ（０．１４ｇ、０．０００７９モ
ル）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解した酸２３
（０．３ｇ、０．０００７９モル）の溶液に添加した。
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（０．２
１ｇ、０．０００８モル）及び１，３−プロパンジオー
ル（０．０９１ｇ、０．００１１モル）の混合物を、上
記溶液中にゆっくり注入し、反応混合物を室温で２４時
間攪拌した。溶液をＨ2 Ｏ（１２ｍＬ）でクエンチし、
エチルアセテート（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層
を無水Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、減圧下濃縮した。プレ
パラティブＴＬＣ（エチルアセテート／ヘキサン、７
０：３０）による精製により純粋なエステル（２４）を
得た。（０．２５ｇ、０．０００５８モル、７３％）。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．１１（ｓ，９Ｈ）、
１．８８−１．９６（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｂｓ，１
Ｈ）。３．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、４．３８
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、６．８６−７．７２（ｍ，
１４Ｈ）。ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値４３
４．４１２６、実測値 Ｍ＋１、４３５。
【０１３３】〔（３−ヒドロキシプロポキシ）（３−ｔ
ｅｒｔ−ブチルジフェニルシロキシフェニル）メチレ
ン〕アダマンタン（２５）
【０１３４】
【化８８】
【０１３５】還流コンデンサを備えた１００ｍＬの３首
フラスコをホットエアガンで乾燥しアルゴンでパージし
た。チタニウムトリクロリド（１．１０ｇ、０．００６
８モル）を攪拌しながら無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）に添加
した。Ｚｎダスト（０．７０ｇ、０．０１０モル）を添
加し、溶液を温水浴中で１５分間攪拌した。溶液を冷却
（氷浴）し、無水トリエチルアミン（１ｍＬ）をゆっく
り注入した。０℃で１０分間攪拌後、溶液を温めて室温
にし、アルゴン下２時間還流した。無水ＴＨＦ（５ｍ
Ｌ）中に溶解したエステル（２４）（０．８５ｇ、０．
００１９モル）及びアダマンタノン（０．４４ｇ、０．
００２９モル）の溶液を滴下し、反応混合物を４時間還
流した。溶液を室温に冷却し、ヘキサン（２０ｍＬ）を
添加した。黒色スラリーをＨ2 Ｏ（２０ｍＬ）に溶解
し、エーテル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を濾
過し、溶液を減圧下濃縮した。プレパラティブＴＬＣ
（エチルアセテート／ヘキサン、３０：７０）による精
製により２５を得た。（０．１４ｇ、０．０００２５mo
l 、１２％）。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．１２
（ｓ，９Ｈ）、１．５０−２．１（ｍ，１５Ｈ）、２．
３７（ｂｓ，１Ｈ）、３．１１（ｂｓ，１Ｈ）、３．３
２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、３．６４（ｔ，２Ｈ，Ｊ
＝６Ｈｚ）、６．６４−７．７３（ｍ，１４Ｈ）。13Ｃ
（ＣＤＣｌ3 ）δ１９．３４、２６．４３、２８．１
５、３０．１３、３０．９５、３２．０５、３２．２
２、３６．４５、３８．８３、３８．９１、６１．１
０、６７．５０、１１８．９８、１２０．９２、１２
２．０３、１２７．６４、１２８．８６、１２９．７
８、１３１．５９、１３２．８１、１３５．４９、１３
６．５８、１４１．７１、１５５．２２。ＭＳ ｅｘａ
ｃｔ ｍａｓｓ：理論値５５２．３０５９、実測値 ５
５２．３０６６。
【０１３６】ビオチンアミドアルケン（２６）
【０１３７】
【化８９】
【０１３８】ビオチンＮＨＳエステル（Ｃａｌビオチ
ン）（０．０２５ｇ、０．０７３ミリモル）を無水ＤＭ
Ｆ（４ｍＬ）中に溶解したアミノアルケン１０（０．０
１２ｇ、０．０４ミリモル）の溶液に添加した。反応混
合物をアルゴン下４８時間攪拌した。水（５ｍＬ）を添
加し、ジクロロメタン（２×１２ｍＬ）で抽出した。有
機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下濃縮し
た。淡黄色残渣をプレパラティブＴＬＣ（メタノール／
ジクロロメタン、１０：９０）で精製して白色固体とし
て２６を得た。（０．０１９ｇ、０．０３６ミリモル、
７３％）。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．２５−
２．１７（ｍ，２０Ｈ）、２．６５−２．９４（ｍ，３
Ｈ）、３．１２−３．５９（ｍ，６Ｈ）、４．３１−
４．３５（ｍ，１Ｈ）、４．５０−４．５４（ｍ，１
Ｈ）、５．２６（ｂｓ，１Ｈ）、６．１７（ｔ，１Ｈ，
Ｊ＝２．４Ｈｚ）、６．４０（ｂｓ，１Ｈ）、６．７５
−７．３２（ｍ，４Ｈ）。13Ｃ（ＣＤＣｌ3 ）δ２５．
４５、２７．９１、２８．１６、３０．４３、３２．２
５、３５．８４、３７．０２、３９．１１、３９．５
７、４０．５０、５５．６４、６０．３１、６１．９
５、６８．７３、１１５．０３、１１５．７９、１２
０．９１、１２９．０９、１３３．２８、１３６．９
０、１４１．７０、１５６．９０、１６４．４９、１７
３．８６。ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値５２
５．７１５８、実測値ＦＡＢ（Ｍ＋２３〔Ｎａ〕）５４
８．６。
【０１３９】フルオレセインアミドアルケン（２７）
【０１４０】
【化９０】
【０１４１】無水ジクロロメタン／ＤＭＦ（３：１，３
ｍＬ）中のアミノアルケン１０（０．０１２ｇ、０．０
０００４モル）の溶液に、５（及び−６）カルボキシ−
フルオレセインスクシンイミジルエステル（分子プロー
ブ）（０．０３０ｇ、０．００００６モル）を添加し、
反応混合物をアルゴン下、室温で２４時間攪拌した。溶
液を水（５ｍＬ）でクエンチし、エチルアセテート（２
×１２ｍＬ）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム
上で乾燥し、減圧下濃縮した。プレパラティブＴＬＣ
（メタノール／ジクロロメタン、１０：９０）による精
製により、アルケン２７（０．０１５ｇ、０．００００
２２モル、５８％）を得た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3 Ｏ
Ｄ）δ１．２７−１．９６（ｍ，１２Ｈ）、２．６０
（ｂｓ，１Ｈ）、３．０７（ｂｓ，１Ｈ）、３．５６−
３．６２（ｍ，４Ｈ）、６．５１−８．４６（ｍ，１３
Ｈ）。ＭＳ ｅｘａｃｔ ｍａｓｓ：理論値６５７．７
２６８、実測値ＦＡＢ（Ｍ＋１）６５８。
【０１４２】１，２−ジオキセタンの製造 このジオキセタンを、以下に示す光酸素化法により製造
した。上記に示した各アルケンは対応するジオキセタン
に変換することができる。
【０１４３】ジオキセタン１ａ
【０１４４】
【化９１】
【０１４５】無水ジクロロメタン（４ｍＬ）中に溶解し
たアルケン１５（０．０１２ｇ、０．０２７ミリモル）
を−７８℃で、連続的な酸素バブリングを備えたセンシ
トックス（Ｓｅｎｓｉｔｏｘ）の存在下、１０００ｗナ
トリウムランプで照射した。１時間の照射後、増感剤を
濾過により除去し、溶媒を蒸発させてジオキセタン１ａ
（０．０１２ｇ、０．０２７ミリモル、９９％）を得
た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ１．０５−２．１２
（ｍ，１４Ｈ）、２．１８（ｂｓ，１Ｈ）、２．８８
（ｂｓ，４Ｈ）、３．０３（ｂｓ，１Ｈ），３．３２−
３．３９（ｍ，２Ｈ）、３．４５−３．５７（ｍ，２
Ｈ）、６．８−７．３２（ｍ，４Ｈ）；13ＣＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ3 ）δ２５．５９、２５．８３、２５．９７、３
１．５６、３１．８１、３２．２０、３２．９１、３
３．０５、３４．６８、３６．３６、３８．９２、６
７．２３、９５．６０、１１１．４０、１１６．８１、
１２１．６１、１２９．６１、１３５．９４、１５６．
１２、１６８．３６。
【０１４６】ジオキセタン１ｂ
【０１４７】
【化９２】
【０１４８】無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に溶解
したアルケン１８（０．０３ｇ、０．０５４ミリモル）
を−７８℃で、連続酸素バブリングを備えたセンシトッ
クスの存在下、１０００ｗナトリウムランプで照射し
た。２時間照射後、増感剤を濾過により除去し、溶媒を
蒸発させて定量的収率のジオキセタン１ｂを得た。 （０．０２８ｇ、０．０４７mmol、８８％）： 1Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ０．１８（ｓ，６Ｈ）、０．９７
（ｓ，９Ｈ）、１．７０−２．１（ｍ，１４Ｈ）、２．
２８（ｂｓ，１Ｈ）、２．６８−２．７４（ｍ，２
Ｈ）、２．８３（ｂｓ，４Ｈ），３．０１（ｂｓ，１
Ｈ）、３．４４−３．５４（ｍ，２Ｈ）、６．７１−
７．４０（ｍ，４Ｈ）。
【０１４９】ジオキセタン１ｃ
【０１５０】
【化９３】
【０１５１】無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に溶解
したアルケン２１（０．０３ｇ、０．０４４ミリモル）
を−７８℃で、連続的酸素バブリングとともに、センシ
トックスの存在下、１０００ｗナトリウムランプで照射
した。２時間の照射後、増感剤を濾過により除去し、溶
媒を蒸発させて定量的収率のジオキセタン１ｃ（０．０
３１ｇ、０．０４４ミリモル、９９％）を得た。 1Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤ2 Ｃｌ2）δ １．０８（ｓ，９Ｈ）、
１．３６−２．０（ｍ，１５Ｈ）、２．８５（ｍ，７
Ｈ）、３．４７（ｍ，２Ｈ）、７．０−７．７８（ｍ，
１４Ｈ）。
【０１５２】ジオキセタン２ａ
【０１５３】
【化９４】
【０１５４】６−アミノヘキサノール（１．２mg、０．
０１０ミリモル）を無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中に
溶解したジオキセタン１ｂ（０．００４ｇ、０．００６
８ミリモル）の溶液にアルゴン下添加した。反応混合物
を室温で１０分間攪拌した。白色沈殿物を濾過により除
去し、溶液を減圧下濃縮した。プレパラティブＴＬＣ
（メタノール／ジクロロメタン、１０：９０）による精
製によって、２ａ（０．００４ｇ、０．００６８ミリモ
ル、１００％）を得た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ 3 ）δ
０．２１（ｓ，６Ｈ）、０．９８（ｓ，９Ｈ）、１．
２４−１．５７（ｍ，２２Ｈ）、２．１２（ｔ，２Ｈ，
Ｊ＝６．６Ｈｚ）、２．１６（ｂｓ，１Ｈ）、２．３０
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．２６（ｑ，２Ｈ，
Ｊ＝６．３Ｈｚ）、３．６０−３．６６（ｍ，３Ｈ）、
４．３５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）、５．５（ｂ
ｓ，１Ｈ）、７．０２−７．６３（ｍ，４Ｈ）。
【０１５５】ジオキセタン２ｂ
【０１５６】
【化９５】
【０１５７】６−アミノヘキサノール（１mg、０．００
８４ミリモル）を無水ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解
したジオキセタン１ｃ（２mg、０．００２８ミリモル）
の溶液アルゴン下添加した。反応混合物を室温で３０分
間攪拌した。白色沈殿物を濾過により除去し、溶液を減
圧下濃縮した。プレパラティブＴＬＣ（メタノール／ジ
クロロメタン、１０：９０）による精製によって、２ｂ
（１．９mg、０．００２６ミリモル、９５％）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ １．０８（ｓ，９
Ｈ）、１．２５−１．６６（ｍ，２２Ｈ）、３．１８−
３．２５（ｍ，５Ｈ）、３．６３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．
０Ｈｚ）、５．８１（ｔ，１Ｈ）、７．３２−７．６９
（ｍ，１４Ｈ）。
【０１５８】ジオキセタン３ａ−ｃ
【０１５９】
【化９６】
【０１６０】ジオキセタン３ａ，３ｂ及び３ｃは、各々
アルケン１４、１７及び２０から、標準増感シングレッ
ト酸化法により得ることができる。
【０１６１】ジオキセタン４
【０１６２】
【化９７】
【０１６３】無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解
したアルケン２５（０．１２ｇ、０．０００２モル）を
−７８℃で連続酸素バブリングとともにセンシトックス
の存在下、１０００ｗナトリウムランプにより照射し
た。２．５時間照射後、増感剤を濾過により除去し、溶
液を減圧下濃縮した。プレパラティブＴＬＣ（エチルア
セテート／ヘキサン、３０：７０）による精製によっ
て、ジオキセタン４（０．１１ｇ、０．０００１９モ
ル、９３％）を得た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ
１．０９（ｓ，９Ｈ）、１．３６−２．０９（ｍ，１６
Ｈ）２．８１−３．８６（ｍ，５Ｈ）、７．３１−７．
７４（ｍ，１４Ｈ）。13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ
１９．２５、２５．６８、２５．８９、２６．３２、２
７．４４、３０．９４、３１．４１、３１．６０、３
２．２０、３２．６７、３２．７８、３４．４０、３
６．２９、３６．４４、３７．５３、５９．９７、７
４．４４、７７．２０、９５．４１、１１１．５６、１
２７．７７、１２９．９２、１３２．４４、１３５．３
４、１３５．４８、１３５．９９、１５５．５８。
【０１６４】ジオキセタン５
【０１６５】
【化９８】
【０１６６】ビオチン化（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）
ジオキセタン５をアルケン２６から得た。無水Ｋ2 ＣＯ
3 （０．１５ｇ）を無水ＣＨ2 Ｃｌ2 （１０ml）中に溶
解したアルケン２６（０．０１２ｇ、０．０２２ミリモ
ル）に添加し、酸素を０℃で２分間バブルした。トリス
（４−ブロモフェニル）アミニウム ヘキサクロロアン
チモネート（ＢＡＨＡ）（０．００４ｇ、０．００４８
ミリモル）を上記溶液に添加し、Ｏ2 を０℃で３０分間
この反応混合物中にバブルした。溶液を濾過し、減圧下
濃縮した。プレパラティブＴＬＣ（メタノール／ＣＨ2
Ｃｌ2 、１５：８５）による精製によって、ジオキセタ
ン５（０．００９１ｇ、０．０１６３ミリモル、７２
％）を得た。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ／ＣＤＣｌ3 、
１０：９０）δ １．０２−１．９０（ｍ，１８Ｈ）、
２．２３−２．２８（ｍ，３Ｈ）、２．７２（ｄ，１
Ｈ、Ｊ＝１２．９ Ｈｚ）、３．１４−３．２０（ｍ，
１Ｈ）、３．３９−３．５６（ｍ，６Ｈ）、４．３０−
４．３４（ｍ，１Ｈ）、４．４８−４．５２（ｍ，１
Ｈ）、６．８７−７．２８（ｍ，４Ｈ）。
【０１６７】ジオキセタン６
【０１６８】
【化９９】
【０１６９】ジクロロメタン／メタノール（９：１，１
２ｍＬ）の混合物中に溶解したアルケン２７（０．０１
１ｇ、０．０１６７ミリモル）を−７８℃で連続酸素バ
ブリングとともにセンシトックスの存在下、１０００ｗ
ナトリウムランプで照射した。１時間の照射後、増感剤
を濾過により除去し、溶液を減圧下濃縮した。プレパラ
ティブＴＬＣ（メタノール／ジクロロメタン、２０：８
０）による精製によって、ジオキセタン６（０．００５
３ｇ、０．００７６ミリモル、４６％）を得た。分析Ｔ
ＬＣスポットは加熱により黄色の化学ルミネセンスを示
した。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ／ＣＤ3 ＯＤ、３：
１）δ：０．８８−１．９８（ｍ，１２Ｈ）２．３２
（ｂｓ，１Ｈ）、３．０６（ｂｓ，１Ｈ）、３．６５
（ｍ，４Ｈ）、６．５３−８．３４（ｍ，１３Ｈ）。
【０１７０】ジオキセタンで直接ラベルしたウシ血清ア
ルブミンの化学ルミネセント検出 １． ＢＳＡ−ジオキセタン共役体の調製 ジオキサン−ホウ酸バッファー（ジオキサン／Ｈ2 Ｏ、
１：９）溶液（pH７．５）（１０ｍＬ）中のＢＳＡ
（０．１５ｇ）の溶液に、ジオキセタン Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル１ａを攪拌しながら添加し
た。室温で０．５時間攪拌後、ＴＬＣ（メタノール／ジ
クロロメタン １０：９０）は、非結合ラベルの痕跡量
を示した。溶液をウルトラフィルトレーションにより高
圧下濃縮した。反応混合物を１０ｍＬ ウルトラフィル
トレーションセル（アミコン、ＹＭ３０、２５mm、＞３
０，０００MW カットオフ）中に移した。セルをキャッ
プし、Ｎ 2 インレットにつないだ。濾過を最初穏かに攪
拌しながらＮ2 （２０ psi）を通して行なった。約５分
後、Ｎ2 圧をゆっくり５０ psiに増加した。溶液（ジオ
キサン／水）をアウトレットからビーカーに集めた。濃
縮物を水性ジオキサン（ジオキサン／Ｈ2 Ｏ、５：９
５）（１０ｍＬ）で洗滌し、ひきつづき水（１０ｍＬ）
で洗滌した。濃縮物を凍結乾燥して共役体を白色の薄片
状の固体として得た。
【０１７１】ジオキサン−ホウ酸バッファー（ジオキサ
ン／Ｈ2 Ｏ、１：９）溶液（pH７．６）（２．７ｍＬ）
中のＢＳＡ（０．０５ｇ）の溶液に、ジオキサン（０．
３ｍＬ）中に溶解したジオキセタン Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドエステル１ｂを攪拌しながら添加した。室
温で１時間攪拌後、溶液を圧力下ウルトラフィルトレー
ションにより濃縮した。濃縮物をジオキサン水溶液（ジ
オキサン／Ｈ2 Ｏ、５：９５）（５ｍＬ）及び蒸留水
（５ｍＬ）で洗滌した。濃縮物を凍結乾燥して共役体を
白色の薄片状の固体として得た。
【０１７２】ジオキサン−ホウ酸バッファー（ジオキサ
ン／Ｈ2 Ｏ、１：９）溶液（pH７．６）（２．７ｍＬ）
中のＢＳＡ（０．０５ｇ）の溶液に、ジオキサン（０．
３ｍＬ）中に溶解したジオキセタン Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドエステル１ｃを攪拌しながら添加した。室
温で１時間攪拌後、溶液を圧力下ウルトラフィルトレー
ションにより濃縮した。濃縮物をジオキサン水溶液（ジ
オキサン／Ｈ2 Ｏ、５：９５）（５ｍＬ）及び蒸留水
（５ｍＬ）で洗滌した。濃縮物を凍結乾燥して共役体を
白色薄片状固体として得た。
【０１７３】２． ＢＳＡ−ジオキセタン共役体の化学
ルミネセント検出 化学ルミネセンス測定を光−密封のホルダー中に置いた
シングルダイナテックイムロンウェル（ｓｉｎｇｌｅ
Ｄｙｎａｔｅｃｈ Ｉｍｍｕｌｏｎ ｗｅｌｌｓ）中で
実施した。ルミネセンスをオルテックスフォトン−カウ
ンター（Ｏｒｔｅｘ ｐｈｏｔｏｎ−ｃｏｕｎｔｅｒ）
に連結したファィバーオプチック（ｆｉｂｅｒ ｏｐｔ
ｉｃ）を用いてウェルの底で検出した。光強度を−７８
℃に冷却したＲＣＡ Ａ−３１０３４Ａガリウム−ヒ素
ＰＭＴで測定した。上記したＢＳＡとジオキセタン１
ａとの共役体２．４mgをマイクロ−タイターウェル中に
置き、９０μＬ中性 ＣＴＡＢ（０．００１２５Ｍ）を
この白色薄片状固体を溶かすように添加した。１０Ｍ
ＮａＯＨ溶液（１０μＬ）を上記溶液に約２５°で注入
し、発生した化学ルミネセンスをルミノメーターにより
記録した。図１に示すようにルミネセンスの強度は、ラ
ベルした蛋白質の直接的測定となる。有機媒体中での誘
発として、ＢＳＡとジオキセタン１ａとの共役体１．２
mgをマイクロ−タイターウェルに置き、ＤＭＳＯ（９０
μＬ）をそれに添加した。ＤＭＳＯ（１０μＬ）中の
０．１Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡ
Ｆ）溶液を上記溶液に約２５℃で注入し、ルミネセンス
の強度を図２に示すように記録した。
【０１７４】ジオキセタンで直接ラベルされた抗体の化
学ルミネセント検出 １． ジオキセタン−結合抗体の調製 １２５μＬのＤＭＦ中のジオキセタン１ｃ（１００μ
ｇ）を、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（pH７．５）、
１．４ｍＭ ＣＴＡＢ、ヤギ 抗マウス（ｇｏａｔａｎ
ｔｉｍｏｕｓｅ）ＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ，Ｃａｔ．ｎ
ｏ．０６１１−０２３１、Ｌｏｔ３２６１４）１００μ
ｇを含む１．４ｍＭ ＣＴＡＢのはげしく渦まいた溶液
（２ml）にゆっくり（１０秒にわたって）添加した。溶
液を室温で２４時間インキュベートし、それから４℃で
貯蔵した。シリカプレート（メタノール／ＣＨ2 Ｃｌ
８：９２）上の生成物のＴＬＣ分析は、出発ジオキセタ
ンの大部分が抗体に共有結合的にリンクしたか又はＮＨ
Ｓ官能性が加水分解されたかどちらかを示した。図３に
は、得られたＴＬＣプレートのＸ−線フィルムへの暴
露、その後の無水ＤＭＳＯ（２０％ｗ／ｖ）中のテトラ
ブチルアンモニウムフルオリドの溶液での誘発を示す。
このＴＬＣ分析では、出発ジオキセタン１ｃはプレート
のトップに昇り、ジオキセタン−結合抗体は、はじめの
ままとどまっている。
【０１７５】２． ジオキセタン−結合抗体の精製 ラベルした抗体を３０cm Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｕｐ
ｅｒｏｓｅ １２カラムを用いてＦＰＬＣにより非結合
ジオキセタン化合物から分離した。粗反応物のアリコー
ト（８５０μＬ）を１０分間１０，０００rpm でＥｐｐ
ｉｎｄｏｒｆマイクロ遠心分離器中で遠心分離した。次
いで、これを、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ pH７．
５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＣＴＡＢの溶液で
平衡化したカラム上に注入した。ジオキセタン修飾抗体
をこの同じバッファーで流速０．１２ｍＬ／分で溶出し
た。フラクションをシリカプレート（メタノール／ＣＨ
2 ＣＨ2 ８：９２）上でＴＬＣによりチェックしてジオ
キサン−結合抗体を含んでいるものを決定した。ジオキ
セタン−結合抗体を含んだフラクションのＴＬＣ分析
（図３に示すＴＬＣで述べたと同じトリガー法を用い
た）は、はっきりとこれらのフラクションがこの生成物
だけを含んでおり、出発物質および加水分解生成物を含
んでいないことを示す（図４）。
【０１７６】３． ジオキセタン−結合抗体を用いたウ
ェスタンブロット マウスＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ）をＭＳＩナイロン膜（２
０cm×８０cm）上にスポットし、真空下３０分間乾燥し
た。膜をハイブリダイゼーションバッグ中に置き、０．
１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ pH７．５、０．１５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含む溶液１０ml
を添加し、バッグを封印し、その後２５℃１時間おだや
かに攪拌しながらインキュベートした。バッグを開き、
ブロッキング溶液を流し、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
pH７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅ
ｅｎ２０、１％スキムミルク、及び上記ジオキセタン−
ラベル抗体（約５μｇの修飾ＩｇＧ）のＦＰＬＣ精製か
らのプールしたフラクション２００μＬを含む溶液１０
mlで置き換えた。バッグを封印し、膜を一晩室温でイン
キュベートした。それから膜をバッグから取り除き、１
分間脱イオン水の流れの下でリンスし、０．１Ｍ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ pH７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．
０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、０．１％ＳＤＳを含む溶液２
０mlを含む浅い皿の中に置いた。皿を１５分間ゆっくり
ロックし、溶液をドレーンし、洗滌を２回繰り返した。
膜を脱イオン水の流水下で１分間リンスし、それから真
空下で乾燥した。膜をＫｏｄａｋ ＸＡＲ５ Ｘ−線フ
ィルム上の薄いガラスの上に置きそして無水ＤＭＳＯ中
の２０％（w/v)テトラブチルアンモニウムフルオリドを
添加して誘発することにより暴露した。修飾した抗体の
ハイブリダイゼーションを１００ngの蛋白質を含むスポ
ットされたサンプルについて観察した（図５）。これら
の結果は、化学ルミネセンスによるジオキセタン−ラベ
ルバイオモレキュールの検出が得られたことを説明して
いる。
【図面の簡単な説明】
【図１】水酸化ナトリウムで誘発したときのジオキセタ
ン１ａでラベルしたウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）につ
いての強度対時間のグラフ。
【図２】テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡ
Ｆ）で誘発したときのＤＭＳＯ中のジオキセタン１ａで
ラベルしたＢＳＡについての強度対時間のグラフ。
【図３】ＴＬＣシリカプレート上で、ジオキセタン１ｃ
でラベルしたヤギ抗マウスＩｇＧをクロマトグラフし
て、非ラベルの成分を分離し、その後誘発させたＴＬＣ
シリカプレートに暴露したＸ−線フィルム。
【図４】トリガーされた抗マウスＩｇＧを含む液体クロ
マトグラフィーにより分離された物質（フラクション２
０は、精製されラベルされた抗マウスＩｇＧを含む）に
さらされたＸ−線フィルム。
【図５】ナイロン膜上の異なる濃度のマウスＩｇＧをジ
オキセタンラベル抗マウスＩｇＧに接触させた化学ルミ
ネセント ウエスタン ドットブロツト。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年６月１５日
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正内容】
【図３】電気泳動の結果を表わす写真であり、ＴＬＣシ
リカプレート上で、ジオキセタン１ｃでラベルしたヤギ
抗マウスＩｇＧをクロマトグラフして、非ラベルの成分
を分離し、その後誘発させたＴＬＣシリカプレートに暴
露したＸ−線フィルム。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図４】電気泳動の結果を表わす写真であり、トリガー
された抗マウスＩｇＧを含む液体クロマトグラフィーに
より分離された物質（フラクション２０は、精製されラ
ベルされた抗マウスＩｇＧを含む）にさらされたＸ−線
フィルム。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正内容】
【図５】電気泳動の結果を表わす写真であり、ナイロン
膜上の異なる濃度のマウスＩｇＧをジオキセタンラベル
抗マウスＩｇＧに接触させた化学ルミネセント ウエス
タン ドットブロツト。
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正内容】
【図３】
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図４】
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正内容】
【図５】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０９Ｋ 11/07 9159−4Ｈ // Ｇ０１Ｎ 33/533 (Ｃ０７Ｄ 405/12 207:404 321:00） (Ｃ０７Ｄ 407/12 311:82） (72)発明者 ジャイデブ エス．ゴウダー アメリカ合衆国ミシガン州デトロイト，ア パートメント ナンバー 503，カス 5440

Claims (48)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】式： 【化１】 （式中、Ａｒはフェニル及びナフチルから成る群から選
    ばれる芳香族置換基であり、Ａは、有機又は生物学的分
    子と化学的にカップルする置換基及び有機又は生物学的
    分子と物理的にカップルして分子上にラベルとしてジオ
    キセタン化合物を与える置換基から成る群から選ばれ、
    Ｒ1 は任意であって存在するとき１から３０炭素原子を
    含むリンキング置換基であり且つ任意に、炭素原子のい
    くつかを置換した酸素、窒素、硫黄及びリンから成る群
    から選ばれたヘテロ原子であり、Ｘは活性化剤によって
    除去されて光をジオキセタンにより作る化学的に不安定
    な置換基であり、 【化２】 は６から３０炭素原子を含むポリサイクリックアルキレ
    ン置換基である）のジオキセタン化合物。
  2. 【請求項２】 【化３】 がアダマンチルである請求項１の化合物。
  3. 【請求項３】 ＯＸが、ヒドロキシ、アルキル又はアリ
    ールカルボキシルエステル、無機オキシ酸塩、アルキル
    又はアリールシリルオキシ及び酸素ピラノシドから成る
    群から選ばれ、かつここでアリールは単一リングである
    請求項１の化合物。
  4. 【請求項４】 式： 【化４】 （式中、Ａは有機又は生物学的分子と化学的にカップル
    する置換基及び有機又は生物学的分子と物理的にカップ
    ルしてその分子上にラベルとしてジオキセタン化合物を
    与える置換基から成る群から選ばれ、Ｒ1 は１から３０
    炭素原子及び任意に、炭素原子のいくつかを置換した酸
    素、窒素、硫黄、及びリンから成る群から選ばれるヘテ
    ロ原子を含むリンキング置換基であり、Ｘは活性化剤に
    より除去されてジオキセタンにより光を作る化学的に不
    安定な置換基であり、 【化５】 は６から３０炭素原子を含むポリサイクリックアルキレ
    ン置換基である）のジオキセタン化合物。
  5. 【請求項５】 【化６】 がアダマンチルである請求項４の化合物。
  6. 【請求項６】 ＯＸがヒドロキシ、アルキル又はアリー
    ルカルボキシルエステル、無機オキシ酸塩、アルキル又
    はアリールシリルオキシ及び酸素ピラノシドから成る群
    から選ばれ且つここでアリールは単一リングである請求
    項４の化合物。
  7. 【請求項７】 Ａは、アミン、チオール及びカルボン酸
    置換基から成る群から選ばれる有機又は生物学的分子中
    で、置換基とカップルする請求項６の化合物。
  8. 【請求項８】 式： 【化７】 （式中、Ｒ1 は 【化８】 ，ｎは１から３０の整数、Ａは有機又は生物学的分子と
    カップルしてラベルとしてジオキセタン化合物を与える
    置換基であり、ここで有機又は生物学的分子は、Ａとカ
    ップルするアミン、チオール、カルボン酸及びホスホラ
    ミジト置換基から成る群から選ばれた置換基を含み、Ｘ
    は除去されてジオキセタンにより光を作る化学的に不安
    定な基であり、そして 【化９】 は、６から３０炭素原子を含むポリサイクリックアルキ
    レン基である）のジオキセタン化合物。
  9. 【請求項９】 式： 【化１０】 （式中、Ｒ1 は 【化１１】 ，ｎは１から３０までの整数、Ａはスクシンイミド、ビ
    オチン及びフルオレセイン含有置換基から成る群から選
    ばれ、Ｘは活性化剤によって除去されて光をジオキセタ
    ンにより作る化学的に不安定な基である）のジオキセタ
    ン化合物。
  10. 【請求項１０】 Ａがスクシンイミド含有置換基であり
    且つ式： 【化１２】 を有する請求項９のジオキセタン化合物。
  11. 【請求項１１】 ｎが３であり、ＸがＨであり且つ式： 【化１３】 を有する請求項１０のジオキセタン化合物。
  12. 【請求項１２】 ｎが３であり、ＯＸがシリルオキシで
    あり且つ式： 【化１４】 （式中、シリルオキシはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
    ルオキシ及びｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ
    から成る群から選ばれる）を有する請求項１０のジオキ
    セタン化合物。
  13. 【請求項１３】 Ａが、−ＮＨ（ＣＨ2 ）m ＯＨ（ここ
    で、ｍは２から２０までの整数である）であり且つジオ
    キセタンは式： 【化１５】 を有する請求項９のジオキセタン化合物。
  14. 【請求項１４】 ｎが３であり、ｍが６である請求項１
    ３のジオキセタン化合物。
  15. 【請求項１５】 ＯＸがｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
    ルオキシ及びｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ
    から成る群から選ばれる請求項１４のジオキセタン化合
    物。
  16. 【請求項１６】 Ａが−ＣＯ2 Ｈ置換基であり、 【化１６】 がアダマンチル置換基であり、且つジオキセタンが式： 【化１７】 （式中、ｎは１から３０までの整数である）を有する請
    求項４の化合物。
  17. 【請求項１７】 ｎが３である請求項１６の化合物。
  18. 【請求項１８】 ＯＸがヒドロキシル、ｔｅｒｔ−ブチ
    ルジメチルシリルオキシ及びｔｅｒｔ−ブチルジフェニ
    ルシリルオキシ置換基から成る群から選ばれる請求項１
    ６の化合物。
  19. 【請求項１９】 ＡがＯＨであり且つ 【化１８】 が、アダマンチル置換基である請求項４の化合物。
  20. 【請求項２０】 ＯＸがｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロ
    キシから成る群から選ばれる請求項１９の化合物。
  21. 【請求項２１】 【化１９】 が、アダマンチルであり、且つ式： 【化２０】 （式中、ｎは２から３０までの整数であり、ｍは１から
    ３０までの整数である）を有する請求項４の化合物。
  22. 【請求項２２】 ｎが２であり、ｍが４でありそしてＯ
    Ｘがヒドロキシルである請求項２１の化合物。
  23. 【請求項２３】 １，２−ジオキセタン化合物を製造す
    るのに使用される次式： 【化２１】 （式中、Ａｒはフェニル及びナフチルから成る群から選
    ばれる芳香族置換基であり、Ａは有機又は生物学的分子
    と化学的にカップルする置換基及び有機又は生物学的分
    子を物理的にカップルしてジオキセタン化合物を分子上
    にラベルとして与える置換基から成る群から選ばれ、Ｒ
    1 は１から３０の炭素原子及び任意に、その炭素原子の
    いくつかを置換した酸素、窒素、硫黄、リンから成る群
    から選ばれるヘテロ原子を含むリンキング置換基であ
    り、Ｘは活性化剤により除去されて１，２−ジオキセタ
    ンによりアルケン化合物から光を作る化学的に不安定な
    基であり、そして 【化２２】 が６から３０の炭素原子を含むポリサイクリックアルケ
    ン基である）のアルケン化合物。
  24. 【請求項２４】 【化２３】 がアダマンチルである請求項２３の化合物。
  25. 【請求項２５】 Ｘがヒドロキシル、アルキル又はアリ
    ールカルボキシルエステル、無機オキシ酸塩、アルキル
    又はアリールシリルオキシ及び酸素ピラノシドから成る
    群から選ばれ、ここでアリールは単一のリングである請
    求項２３の化合物。
  26. 【請求項２６】 １，２−ジオキセタン化合物を製造す
    るのに使用される次式： 【化２４】 （式中、Ａは有機又は生物学的分子と化学的にカップル
    する置換基及び生物学的分子又は有機分子と物理的にカ
    ップルしてジオキセタン化合物を分子上にラベルとして
    与える置換基からなる群より選ばれた置換基であり、Ｒ
    1 は任意であり且つ存在する場合には１から３０の炭素
    原子及び任意にこの炭素原子のいくつかを置換した酸
    素、窒素、硫黄、リンから成る群から選ばれるヘテロ原
    子を含むリンキング置換基であり、Ｘは活性化剤によっ
    て除去されてアルケン化合物から作られた１，２−ジオ
    キセタンにより光を作る化学的に不安定な基であり、 【化２５】 が６から３０炭素原子を含むポリサイクリックアルケン
    基である）のアルケン化合物。
  27. 【請求項２７】 【化２６】 がアダマンチルである請求項２６の化合物。
  28. 【請求項２８】 Ｘがヒドロキシル、アルキル又はアリ
    ールカルボキシルエステル、無機オキシ酸塩、アルキル
    又はアリールシリルオキシ及び酸素ピラノシドから成る
    群から選ばれ、ここでアリールは単一のリングである請
    求項２６の化合物。
  29. 【請求項２９】 Ａが、アミン、チオール及びカルボン
    酸置換基から成る群から選ばれる有機又は生物学的分子
    中で置換基とカップルする請求項２６の化合物。
  30. 【請求項３０】 １，２−ジオキセタン化合物を製造す
    るのに使用される。次式： 【化２７】 （式中、Ｒ1 は、 【化２８】 であり、ｎは１から３０の整数であり、Ａは有機又は生
    物学的分子とカップルして分子上にラベルとしてジオキ
    セタン化合物を与える置換基であり、有機又は生物学的
    分子はアミン、チオール及びカルボン酸置換基から成る
    群から選ばれる置換基を含み、Ｘは除去されてアルケン
    化合物から作られた１，２−ジオキセタンにより光を作
    る化学的に不安定な基であり、そして 【化２９】 が、６から３０炭素原子を含むポリサイクリックアルキ
    レン基である）のアルケン化合物。
  31. 【請求項３１】 Ａがスクシンイミド、ビオチン及びフ
    ルオレセイン含有置換基である請求項３０のアルケン化
    合物。
  32. 【請求項３２】 Ａがスクシンイミドでありかつ 【化３０】 がアダマンチル含有置換基であり、かつ式： 【化３１】 を有する請求項３０のアルケン化合物。
  33. 【請求項３３】 ｎが３であり、ＸがＨであり、そして
    式： 【化３２】 を有する請求項３２のアルケン化合物。
  34. 【請求項３４】 ｎが３であり、ＯＸがシリルオキシで
    ある式： 【化３３】 （式中、シリルオキシはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
    ルオキシ及びｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ
    基である）の請求項３２のアルケン化合物。
  35. 【請求項３５】 ｎが２であり： 【化３４】 がアダマンチル置換基であり、Ａがビオチン含有置換基
    でありそして式： 【化３５】 を有する請求項３０のアルケン化合物。
  36. 【請求項３６】 【化３６】 がアダマンチル基でありそしてＡがＮＨ（ＣＨ2 ）m Ｏ
    Ｈである請求項３０のアルケン。
  37. 【請求項３７】 ｎが３であり、ｍが６であり、ＯＸが
    ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ及びｔｅｒｔ−
    ブチルジフェニルシリルオキシから成る群から選ばれる
    請求項３６のアルケン。
  38. 【請求項３８】 【化３７】 がアダマンチル基であり、Ｒ1 が（ＣＨ2 ）n であり
    （ここでｎは１から３０の整数）であり、ＯＸがヒドロ
    キシ、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ及びｔｅ
    ｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシから選ばれる請求
    項２６のアルケン。
  39. 【請求項３９】 Ａがカルボン酸、ヒドロキシル及び一
    級アミノ基から成る群から選ばれる請求項３８のアルケ
    ン。
  40. 【請求項４０】 ｎが２である請求項３９のアルケン。
  41. 【請求項４１】 ｎが３である請求項３９のアルケン。
  42. 【請求項４２】 有機分子にカップルしたＡを有するア
    ッセイに使用される請求項１のジオキセタン。
  43. 【請求項４３】 有機分子にカップルしたＡを有するア
    ッセイに使用される請求項４のジオキセタン。
  44. 【請求項４４】 Ａがスクシンイミド、ヒドロキシル、
    カルボン酸、マレイミド、ビオチン、プソラレン及びフ
    ルオレセインから成る群から選ばれる請求項１の化合
    物。
  45. 【請求項４５】 Ａがスクシンイミド、ヒドロキシル、
    カルボン酸、マレイミド、ビオチン、プソラレン及びフ
    ルオレセインから成る群から選ばれる請求項４の化合
    物。
  46. 【請求項４６】 Ａがスクシンイミド、ヒドロキシル、
    カルボン酸、マレイミド、ビオチン、プソラレン及びフ
    ルオレセインから成る群から選ばれる請求項２６の化合
    物。
  47. 【請求項４７】 【化３８】 がアダマンチル基であり、Ａがビオチン含有置換基であ
    りそして式： 【化３９】 （式中、ｎは２から３０の整数であり、ｍは１から３０
    の整数である）を有する請求項４の化合物。
  48. 【請求項４８】 【化４０】 がアダマンチル基であり、Ａがフルオレセイン含有置換
    基であり、そして式： 【化４１】 を有する請求項３０のアルケン。
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