JPH07115976A - アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター - Google Patents
アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーターInfo
- Publication number
- JPH07115976A JPH07115976A JP5268653A JP26865393A JPH07115976A JP H07115976 A JPH07115976 A JP H07115976A JP 5268653 A JP5268653 A JP 5268653A JP 26865393 A JP26865393 A JP 26865393A JP H07115976 A JPH07115976 A JP H07115976A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- promoter
- aspergillus oryzae
- aspergillus
- sequence
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 アスペルギルス・オリゼ由来の新規強力プロ
モーターの提供および、該新規プロモーター配列を含む
アスペルギルス・オリゼの高発現形質転換株の提供。 【構成】 配列表に示すＤＮＡ配列からなるアスペルギ
ルス・オリゼ由来の新規強力プロモーター、該新規強力
プロモーターを挿入したベクターによるアスペルギルス
・オリゼの高発現形質転換株ならびにこれらの株を用い
る有用タンパク質の製造法。 【効果】 アスペルギルス・オリゼで高発現するプロモ
ーターが得られ、それにより高発現の形質転換株が得ら
れる。
モーターの提供および、該新規プロモーター配列を含む
アスペルギルス・オリゼの高発現形質転換株の提供。 【構成】 配列表に示すＤＮＡ配列からなるアスペルギ
ルス・オリゼ由来の新規強力プロモーター、該新規強力
プロモーターを挿入したベクターによるアスペルギルス
・オリゼの高発現形質転換株ならびにこれらの株を用い
る有用タンパク質の製造法。 【効果】 アスペルギルス・オリゼで高発現するプロモ
ーターが得られ、それにより高発現の形質転換株が得ら
れる。
Description
【０００１】本発明は、アスペルギルス属糸状菌の新規
プロモーターに関する。さらに詳しくは、本発明は、ア
スペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）を宿主と
して用いる遺伝子組換技術に関するものであり、アスペ
ルギルス・オリゼ由来の新規プロモーター配列をクロー
ニングし、アスペルギルス・オリゼで異種タンパク質を
高発現するプロモーターを発現系に使用するものであ
る。
プロモーターに関する。さらに詳しくは、本発明は、ア
スペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）を宿主と
して用いる遺伝子組換技術に関するものであり、アスペ
ルギルス・オリゼ由来の新規プロモーター配列をクロー
ニングし、アスペルギルス・オリゼで異種タンパク質を
高発現するプロモーターを発現系に使用するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】アスペルギルス・オリゼは古くから有用
酵素の生産源として用いられており、清酒醸造の麹とし
ても有用な微生物で、歴史的に安全であることが証明さ
れている。そこで近年、アスペルギルス属糸状菌が異種
タンパク質生産の宿主として注目され、形質転換系の開
発が活発に行われている。しかし、アスペルギルス属の
遺伝子の解析例は少ない。これまで、アスペルギルス・
オリゼのα−アミラーゼ遺伝子のプロモーターを利用し
たタンパク質生産法の報告(特開昭６２−２７２９８８
号)、そのプロモーターを人為的に変化させた報告(特開
平４−１２１１９４号)、アスペルギルス・オリゼおよ
びアスペルギルス・ニガーのグリセルアルデヒド−３−
ホスフェイトデヒドロゲナーゼ(ＧＡＰ−ＤＨ)のプロモ
ーターを利用しての異種タンパク質の製造方法の報告
(特開平３−１８７３９２号)などがあるに過ぎず、いず
れも、発現効率が低く、より強力なプロモーターの開発
が望まれている。
酵素の生産源として用いられており、清酒醸造の麹とし
ても有用な微生物で、歴史的に安全であることが証明さ
れている。そこで近年、アスペルギルス属糸状菌が異種
タンパク質生産の宿主として注目され、形質転換系の開
発が活発に行われている。しかし、アスペルギルス属の
遺伝子の解析例は少ない。これまで、アスペルギルス・
オリゼのα−アミラーゼ遺伝子のプロモーターを利用し
たタンパク質生産法の報告(特開昭６２−２７２９８８
号)、そのプロモーターを人為的に変化させた報告(特開
平４−１２１１９４号)、アスペルギルス・オリゼおよ
びアスペルギルス・ニガーのグリセルアルデヒド−３−
ホスフェイトデヒドロゲナーゼ(ＧＡＰ−ＤＨ)のプロモ
ーターを利用しての異種タンパク質の製造方法の報告
(特開平３−１８７３９２号)などがあるに過ぎず、いず
れも、発現効率が低く、より強力なプロモーターの開発
が望まれている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、アスペルギ
ルス・オリゼから、発現効率の良い、より強力なプロモ
ーター配列をクローニングし、これをアスペルギルス属
において異種タンパク質の生産に利用することを目的と
する。
ルス・オリゼから、発現効率の良い、より強力なプロモ
ーター配列をクローニングし、これをアスペルギルス属
において異種タンパク質の生産に利用することを目的と
する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明者らは鋭意研究を行い、アスペルギルス・オ
リゼから新規かつ強力なプロモーター配列をクローニン
グすることに成功し、本発明を完成するに至った。
に、本発明者らは鋭意研究を行い、アスペルギルス・オ
リゼから新規かつ強力なプロモーター配列をクローニン
グすることに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、(１)以下の配列表に
示した塩基配列で表わされるＤＮＡ、(２)該ＤＮＡから
なるプロモーター、(３)該プロモーターを挿入したベク
ターにより形質転換したアスペルギルス・オリゼ、(４)
上記(３)項のアスペルギルス・オリゼを培養し、生成、
蓄積された有用タンパク質を採取することを特徴とする
有用タンパク質の製造法、を提供するものである。以
下、本発明を詳細に説明する。
示した塩基配列で表わされるＤＮＡ、(２)該ＤＮＡから
なるプロモーター、(３)該プロモーターを挿入したベク
ターにより形質転換したアスペルギルス・オリゼ、(４)
上記(３)項のアスペルギルス・オリゼを培養し、生成、
蓄積された有用タンパク質を採取することを特徴とする
有用タンパク質の製造法、を提供するものである。以
下、本発明を詳細に説明する。
【０００６】本発明においては、まず、アスペルギルス
属糸状菌で自己複製可能な配列であるＡＭＡ１配列［ゲ
ムス(Ｇems)ら、ジーン(Ｇene)第９８巻、６１頁(１９
９１年)］を用い、レポーター遺伝子としてイー・コリ
(Ｅ．coli)のβ−グルクロニダーゼ(ＧＵＳ)遺伝子［ジ
ェファーソン(Ｊefferson)ら、エムボー・ジャーナル
(ＥＭＢＯ．Ｊ．)第６巻、３９０１頁(１９８７年)］を
連結し、高形質転換効率系のプロモーター検索用のプラ
スミドを構築する。このプラスミドは、ＡＭＡ１配列を
有し、インテグレート型のプラスミドに比べて数百倍の
形質転換効率が得られ、アスペルギルス属糸状菌の遺伝
子のショットガンクローニングを可能にする。
属糸状菌で自己複製可能な配列であるＡＭＡ１配列［ゲ
ムス(Ｇems)ら、ジーン(Ｇene)第９８巻、６１頁(１９
９１年)］を用い、レポーター遺伝子としてイー・コリ
(Ｅ．coli)のβ−グルクロニダーゼ(ＧＵＳ)遺伝子［ジ
ェファーソン(Ｊefferson)ら、エムボー・ジャーナル
(ＥＭＢＯ．Ｊ．)第６巻、３９０１頁(１９８７年)］を
連結し、高形質転換効率系のプロモーター検索用のプラ
スミドを構築する。このプラスミドは、ＡＭＡ１配列を
有し、インテグレート型のプラスミドに比べて数百倍の
形質転換効率が得られ、アスペルギルス属糸状菌の遺伝
子のショットガンクローニングを可能にする。
【０００７】該プラスミドを用い、アスペルギルス・オ
リゼ由来の種々のプロモーター配列を自体公知の方法に
よりクローニングし、最少培地で高発現する新規なプロ
モーターを得る。プロモーター配列を得るアスペルギル
ス属の菌株としては、特に限定するものではないが、例
えば、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニガ
ー、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・カワ
チ、アスペルギルス・ソーヤ、アスペルギルス・ニドラ
ンスなどが挙げられる。また、最少培地としては、例え
ば、０．２％ＮaＮＯ3、０．１％Ｋ2ＨＰＯ4、０．０５
％ＭgＳＯ4、０．０５％ＫＣl、０．００１％ＦeＳ
Ｏ4、３％グルコースまたは３％澱粉、pＨ５．５のツァ
ペック−ドックス(Ｃzapek−Ｄox)培地が用いられる。
リゼ由来の種々のプロモーター配列を自体公知の方法に
よりクローニングし、最少培地で高発現する新規なプロ
モーターを得る。プロモーター配列を得るアスペルギル
ス属の菌株としては、特に限定するものではないが、例
えば、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニガ
ー、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・カワ
チ、アスペルギルス・ソーヤ、アスペルギルス・ニドラ
ンスなどが挙げられる。また、最少培地としては、例え
ば、０．２％ＮaＮＯ3、０．１％Ｋ2ＨＰＯ4、０．０５
％ＭgＳＯ4、０．０５％ＫＣl、０．００１％ＦeＳ
Ｏ4、３％グルコースまたは３％澱粉、pＨ５．５のツァ
ペック−ドックス(Ｃzapek−Ｄox)培地が用いられる。
【０００８】本明細書における「高発現」とは、従来まで
に報告されている中では、タダ(Ｔada)ら、アグリカル
チュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー(Ａg
ric．Ｂiol．Ｃhem．)第５５巻、１９３９頁(１９９１
年)およびツチヤ(Ｔsuchiya)ら、バイオサイエンス・バ
イオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー(Ｂios
ci．Ｂiotech．Ｂiochem．)第５６巻、１８４９頁(１９
９２年))に記載されたアスペルギルス・オリゼのα−ア
ミラーゼ遺伝子のプロモーターにレポーター遺伝子とし
てＧＵＳ遺伝子を発現する誘導条件以上のＧＵＳ活性の
発現量を意味し、一方、これに及ばない発現は「低発
現」である。
に報告されている中では、タダ(Ｔada)ら、アグリカル
チュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー(Ａg
ric．Ｂiol．Ｃhem．)第５５巻、１９３９頁(１９９１
年)およびツチヤ(Ｔsuchiya)ら、バイオサイエンス・バ
イオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー(Ｂios
ci．Ｂiotech．Ｂiochem．)第５６巻、１８４９頁(１９
９２年))に記載されたアスペルギルス・オリゼのα−ア
ミラーゼ遺伝子のプロモーターにレポーター遺伝子とし
てＧＵＳ遺伝子を発現する誘導条件以上のＧＵＳ活性の
発現量を意味し、一方、これに及ばない発現は「低発
現」である。
【０００９】本発明のプロモーターは、その下流に、所
望の有用タンパク質遺伝子を連結してベクターを構築
し、該ベクターで宿主を形質転換し、それを培養するこ
とにより、有用タンパク質を著量生産させることができ
る。宿主としては、アスペルギルス・オリゼをはじめ、
その他のアスペルギルス属、ノイロスポラ属(Ｎeurospo
ra)、ペニシリウム属(Ｐenicillium)、トリコデルマ属
(Ｔrichoderma)などの微生物が使用できる。本発明のプ
ロモーターは、特に、アスペルギルス・オリゼに導入し
た場合に高発現するものであり、発現効率の点から、宿
主として、アスペルギルス・オリゼを用いることが好ま
しい。
望の有用タンパク質遺伝子を連結してベクターを構築
し、該ベクターで宿主を形質転換し、それを培養するこ
とにより、有用タンパク質を著量生産させることができ
る。宿主としては、アスペルギルス・オリゼをはじめ、
その他のアスペルギルス属、ノイロスポラ属(Ｎeurospo
ra)、ペニシリウム属(Ｐenicillium)、トリコデルマ属
(Ｔrichoderma)などの微生物が使用できる。本発明のプ
ロモーターは、特に、アスペルギルス・オリゼに導入し
た場合に高発現するものであり、発現効率の点から、宿
主として、アスペルギルス・オリゼを用いることが好ま
しい。
【００１０】得られたプロモーターへの有用タンパク質
遺伝子の連結、ベクターへの挿入は、自体公知の方法で
行うことができる。有用タンパク質遺伝子としては、特
に限定するものではないが、例えば、仔牛キモシン、ヒ
トＥＧＦ、各種成長ホルモン、各種インターフェロンな
どが挙げられる。また、ベクターとしては、アルギニン
要求性などの栄養要求性相補遺伝子、アセトアミド資化
などの炭素、窒素源資化遺伝子、オリゴマイシン耐性な
どの薬剤耐性遺伝子などが挙げられる。
遺伝子の連結、ベクターへの挿入は、自体公知の方法で
行うことができる。有用タンパク質遺伝子としては、特
に限定するものではないが、例えば、仔牛キモシン、ヒ
トＥＧＦ、各種成長ホルモン、各種インターフェロンな
どが挙げられる。また、ベクターとしては、アルギニン
要求性などの栄養要求性相補遺伝子、アセトアミド資化
などの炭素、窒素源資化遺伝子、オリゴマイシン耐性な
どの薬剤耐性遺伝子などが挙げられる。
【００１１】宿主の形質転換も自体公知の方法で行うこ
とができる。また、該形質転換体の培養も常法に従っ
て、所望のタンパク質に適した培地、培養条件を適宜選
択することにより行うことができ、得られたタンパク質
の採取、精製も公知の方法で行うことができる。
とができる。また、該形質転換体の培養も常法に従っ
て、所望のタンパク質に適した培地、培養条件を適宜選
択することにより行うことができ、得られたタンパク質
の採取、精製も公知の方法で行うことができる。
【００１２】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、これに限定されるものではない。 実施例１ アスペルギルス・オリゼ由来の新規プロモーター配列の
クローニング 選択マーカーとして、アスペルギルス・ニドランス由来
のオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子(a
rgＢ)［バクストン(Ｂuxton)ら、ジーン(Ｇene)第３７
巻、２０７頁(１９８５年)］およびＡＭＡ１配列を組み
込み、さらにレポーター遺伝子としてβ−グルクロニダ
ーゼ(ＧＵＳ)遺伝子を組み込んだ、ＢamＨＩサイトをユ
ニークサイトとするブルースクリプト(Ｂluescript)Ｉ
Ｉの誘導体のプロモーター検索用のプラスミドを２種類
構築した(pＢＸＧＡ１; １３．７ＫbpとpＢＧＡＲ; １
２．１Ｋbp)。それぞれのＢamＨＩサイトに、アスペル
ギルス・オリゼＩＦＯ ４２９０とアスペルギルス・ニ
ガーＩＦＯ ４６３４の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｓau３
ＡＩで部分分解したＤＮＡ断片(０．５−２Ｋbp)を挿入
したプラスミドライブラリーを４種類作成した。それぞ
れのプラスミドＤＮＡを調製後、argＢ-株のアスペルギ
ルス・オリゼ(ＩＦＯ ５２４０から変異処理により取
得)をヤタラーゼ［Ｙatalase(宝酒造製)］を用いてプロ
トプラスト化し、ＰＥＧ−ＣaＣl2存在下で上記プラス
ミドＤＮＡと混合した。スクリーニング用培地として
は、炭素源としてグルコース、マルトース、スターチと
変化させた最少培地(Ｃzapek−Ｄox)に、スタビライザ
ーとして０．８ＭのＮaＣlとβ−グルクロニダーゼが発
現するとき青色の色素を生産するＸ−グルクロナイドを
含むプレートに重層後、３０℃の恒温槽で数日間培養
後、青色に発色するコロニーを選択した。表１に示すよ
うに、 pＢＸＧＡ１（１３．７Ｋbp）によるアスペルギ
ルス・オリゼのライブラリー７０００株から４４株、 p
ＢＧＡＲ（１２．１Ｋbp）によるアスペルギルス・オリ
ゼのライブラリー６０００株から６１株、ｐＢＸＧＡ１
（１３．７Ｋbp） によるアスペルギルス・ニガーのラ
イブラリー２００００株から４１株、ｐＢＧＡＲ（１
２．１Ｋbp）によるアスペルギルス・ニガーのライブラ
リー９５００株から５５株の青色を示す形質転換株をス
クリーニングした。さらに、α−アミラーゼのプロモー
ターにＧＵＳ遺伝子を連結した形質転換株の誘導条件よ
りも青色を強く出している株を数株スクリーニングし
た。この内、炭素源をグルコースとスターチの２種類の
最少培地で培養後、菌体内のβ−グルクロニダーゼの酵
素活性を最も強く発現している形質転換株を選択し、Ｎ
o．株と命名した。
説明するが、これに限定されるものではない。 実施例１ アスペルギルス・オリゼ由来の新規プロモーター配列の
クローニング 選択マーカーとして、アスペルギルス・ニドランス由来
のオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子(a
rgＢ)［バクストン(Ｂuxton)ら、ジーン(Ｇene)第３７
巻、２０７頁(１９８５年)］およびＡＭＡ１配列を組み
込み、さらにレポーター遺伝子としてβ−グルクロニダ
ーゼ(ＧＵＳ)遺伝子を組み込んだ、ＢamＨＩサイトをユ
ニークサイトとするブルースクリプト(Ｂluescript)Ｉ
Ｉの誘導体のプロモーター検索用のプラスミドを２種類
構築した(pＢＸＧＡ１; １３．７ＫbpとpＢＧＡＲ; １
２．１Ｋbp)。それぞれのＢamＨＩサイトに、アスペル
ギルス・オリゼＩＦＯ ４２９０とアスペルギルス・ニ
ガーＩＦＯ ４６３４の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｓau３
ＡＩで部分分解したＤＮＡ断片(０．５−２Ｋbp)を挿入
したプラスミドライブラリーを４種類作成した。それぞ
れのプラスミドＤＮＡを調製後、argＢ-株のアスペルギ
ルス・オリゼ(ＩＦＯ ５２４０から変異処理により取
得)をヤタラーゼ［Ｙatalase(宝酒造製)］を用いてプロ
トプラスト化し、ＰＥＧ−ＣaＣl2存在下で上記プラス
ミドＤＮＡと混合した。スクリーニング用培地として
は、炭素源としてグルコース、マルトース、スターチと
変化させた最少培地(Ｃzapek−Ｄox)に、スタビライザ
ーとして０．８ＭのＮaＣlとβ−グルクロニダーゼが発
現するとき青色の色素を生産するＸ−グルクロナイドを
含むプレートに重層後、３０℃の恒温槽で数日間培養
後、青色に発色するコロニーを選択した。表１に示すよ
うに、 pＢＸＧＡ１（１３．７Ｋbp）によるアスペルギ
ルス・オリゼのライブラリー７０００株から４４株、 p
ＢＧＡＲ（１２．１Ｋbp）によるアスペルギルス・オリ
ゼのライブラリー６０００株から６１株、ｐＢＸＧＡ１
（１３．７Ｋbp） によるアスペルギルス・ニガーのラ
イブラリー２００００株から４１株、ｐＢＧＡＲ（１
２．１Ｋbp）によるアスペルギルス・ニガーのライブラ
リー９５００株から５５株の青色を示す形質転換株をス
クリーニングした。さらに、α−アミラーゼのプロモー
ターにＧＵＳ遺伝子を連結した形質転換株の誘導条件よ
りも青色を強く出している株を数株スクリーニングし
た。この内、炭素源をグルコースとスターチの２種類の
最少培地で培養後、菌体内のβ−グルクロニダーゼの酵
素活性を最も強く発現している形質転換株を選択し、Ｎ
o．株と命名した。
【００１３】
【表１】
【００１４】Ｎo．株は、アスペルギルス・オリゼ由
来のプロモーター領域を含む配列を上記pＢＸＧＡ１の
ＢamＨＩサイトに組み込んだベクターにより形質転換し
たアスペルギルス・オリゼであり、平成５年１０月６日
に、通産省工業技術院生命工学工業技術研究所の受託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１３８９５の下に寄託してある。
来のプロモーター領域を含む配列を上記pＢＸＧＡ１の
ＢamＨＩサイトに組み込んだベクターにより形質転換し
たアスペルギルス・オリゼであり、平成５年１０月６日
に、通産省工業技術院生命工学工業技術研究所の受託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１３８９５の下に寄託してある。
【００１５】Ｎo．株よりＤＮＡ画分を調製し、イー
・コリＨＢ１０１を形質転換して得られるプラスミドＤ
ＮＡよりＮo．株のプロモーター領域の入ったＸbaＩ
−ＳmaＩ断片をＢluescriptＩＩのＸbaＩ−ＳmaＩ領域
に挿入し、シークエンスを行った。その配列を配列表に
示す。この配列は、最新のデーターベースとのホモロジ
ー検索の結果、全く新規なＤＮＡ配列であることが判明
した。
・コリＨＢ１０１を形質転換して得られるプラスミドＤ
ＮＡよりＮo．株のプロモーター領域の入ったＸbaＩ
−ＳmaＩ断片をＢluescriptＩＩのＸbaＩ−ＳmaＩ領域
に挿入し、シークエンスを行った。その配列を配列表に
示す。この配列は、最新のデーターベースとのホモロジ
ー検索の結果、全く新規なＤＮＡ配列であることが判明
した。
【００１６】実施例２ Ｎo．株によるβ−グルクロニダーゼ活性発現に及ぼ
す培地の炭素源および窒素源の影響 上記方法により取得したアスペルギルス・オリゼＮo．
形質転換株を、炭素源として、 グルコース、マルト
ース、デキストリン、窒素源として、硝酸ソーダ、硫
安、ペプトンを用いて培養後、菌体内に生産するβ−グ
ルクロニダーゼの活性を比較した。その結果は、炭素源
による差はほとんどなく、β−グルクロニダーゼ活性の
発現誘導は、炭素源の違いによる誘導は見られず、今ま
でに報告されているα−アミラーゼ、グルコアミラーゼ
のアミラーゼ系のプロモーター［タダ(Ｔada)ら、アグ
リカルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリ
ー(Ａgric．Ｂiol．Ｃhem．)第５３巻、５９３頁(１９
８９年)およびハタ(Ｈata)ら、カレント・ジェネティク
ス(Ｃurr．Ｇenet．)第２２巻、８５頁(１９９２年)］
とは異なることは、配列表のシークエンス結果からも明
らかである。また、窒素源による違いでは、ペプトンで
活性がやや低下した。
す培地の炭素源および窒素源の影響 上記方法により取得したアスペルギルス・オリゼＮo．
形質転換株を、炭素源として、 グルコース、マルト
ース、デキストリン、窒素源として、硝酸ソーダ、硫
安、ペプトンを用いて培養後、菌体内に生産するβ−グ
ルクロニダーゼの活性を比較した。その結果は、炭素源
による差はほとんどなく、β−グルクロニダーゼ活性の
発現誘導は、炭素源の違いによる誘導は見られず、今ま
でに報告されているα−アミラーゼ、グルコアミラーゼ
のアミラーゼ系のプロモーター［タダ(Ｔada)ら、アグ
リカルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリ
ー(Ａgric．Ｂiol．Ｃhem．)第５３巻、５９３頁(１９
８９年)およびハタ(Ｈata)ら、カレント・ジェネティク
ス(Ｃurr．Ｇenet．)第２２巻、８５頁(１９９２年)］
とは異なることは、配列表のシークエンス結果からも明
らかである。また、窒素源による違いでは、ペプトンで
活性がやや低下した。
【００１７】実施例３ 既知のプロモーターとの比較 本発明のアスペルギルス・オリゼ由来の新規プロモータ
ー活性と、これまでに報告されている強力なプロモータ
ーであるアスペルギルス・オリゼのα−アミラーゼ遺伝
子とのプロモーター活性を、β−グルクロニダーゼ遺伝
子をレポーター遺伝子として比較した。双方とも同じイ
ンテグレート型のベクターで比較するために、Ｎo．
株のプロモーターが入ったプラスミド検索用ベクターか
ら自己複製配列であるＡＭＡ１を除き、インテグレート
型のベクターに変換してアスペルギルス・オリゼを再度
形質転換した。糸状菌の形質転換の特徴として、導入さ
れた遺伝子は、相同的な部位にインテグレートされるだ
けでなく、非相同的な部位にも何コピーもタンデムに連
なってインテグレートされる。したがって、コピー数の
制御は難しいので、何個かの形質転換株のβ−グルクロ
ニダーゼ活性の比活性の平均を比較した。その結果を表
２に示す。
ー活性と、これまでに報告されている強力なプロモータ
ーであるアスペルギルス・オリゼのα−アミラーゼ遺伝
子とのプロモーター活性を、β−グルクロニダーゼ遺伝
子をレポーター遺伝子として比較した。双方とも同じイ
ンテグレート型のベクターで比較するために、Ｎo．
株のプロモーターが入ったプラスミド検索用ベクターか
ら自己複製配列であるＡＭＡ１を除き、インテグレート
型のベクターに変換してアスペルギルス・オリゼを再度
形質転換した。糸状菌の形質転換の特徴として、導入さ
れた遺伝子は、相同的な部位にインテグレートされるだ
けでなく、非相同的な部位にも何コピーもタンデムに連
なってインテグレートされる。したがって、コピー数の
制御は難しいので、何個かの形質転換株のβ−グルクロ
ニダーゼ活性の比活性の平均を比較した。その結果を表
２に示す。
【００１８】
【表２】
【００１９】アスペルギルス・オリゼＮo．株の再形
質転換株におけるβ−グルクロニダーゼ活性の発現は、
α−アミラーゼのプロモーターとターミネーターの間
に、β−グルクロニダーゼ遺伝子の構造遺伝子をそれぞ
れＰＣＲ［サイキ(Ｓaiki)ら、サイエンス(Ｓcience)第
２３９巻、４８７頁(１９８８年)］により構築し、arg
Ｂ遺伝子のマーカーの入ったインテグレート型のベクタ
ーに挿入したＴaka−ＧＵＳの形質転換株により、デキ
ストリンを炭素源とする培地で誘導生産される活性より
も高く、８株の平均で１．７倍のβ−グルクロニダーゼ
活性を発現していた。このＴaka−ＧＵＳの形質転換株
における誘導、非誘導(炭素源がグルコースの場合)のβ
−グルクロニダーゼ活性は、従来報告されている値［タ
ダ(Ｔada)ら、アグリカルチュラル・アンド・バイオロ
ジカル・ケミストリー(Ａgric．Ｂiol.Chem．)第５５
巻、１９３９頁(１９９１年)およびツチヤ(Ｔsuchiya)
ら、バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・
バイオケミストリー(Ｂiosci．Ｂiotech．Ｂiochem．)
第５６巻、１８４９頁(１９９２年)］と同程度であっ
た。
質転換株におけるβ−グルクロニダーゼ活性の発現は、
α−アミラーゼのプロモーターとターミネーターの間
に、β−グルクロニダーゼ遺伝子の構造遺伝子をそれぞ
れＰＣＲ［サイキ(Ｓaiki)ら、サイエンス(Ｓcience)第
２３９巻、４８７頁(１９８８年)］により構築し、arg
Ｂ遺伝子のマーカーの入ったインテグレート型のベクタ
ーに挿入したＴaka−ＧＵＳの形質転換株により、デキ
ストリンを炭素源とする培地で誘導生産される活性より
も高く、８株の平均で１．７倍のβ−グルクロニダーゼ
活性を発現していた。このＴaka−ＧＵＳの形質転換株
における誘導、非誘導(炭素源がグルコースの場合)のβ
−グルクロニダーゼ活性は、従来報告されている値［タ
ダ(Ｔada)ら、アグリカルチュラル・アンド・バイオロ
ジカル・ケミストリー(Ａgric．Ｂiol.Chem．)第５５
巻、１９３９頁(１９９１年)およびツチヤ(Ｔsuchiya)
ら、バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・
バイオケミストリー(Ｂiosci．Ｂiotech．Ｂiochem．)
第５６巻、１８４９頁(１９９２年)］と同程度であっ
た。
【００２０】このことにより、アスペルギルスの既知の
プロモーターよりも強力なプロモーター配列あるいはＵ
ＡＳ(Ｕpstream Ａctivation Ｓequence)配列がアス
ペルギルス・オリゼにさらに存在することが明らかとな
った。上記の結果は、本発明のプロモーターが、炭素源
がグルコースでも強い発現量を示すプロモーターである
ことを示しており、ノーザンバイブリダイゼーションの
結果においても、アスペルギルス・オリゼ由来の該新規
プロモーターが挿入されたβ−グルクロニダーゼ遺伝子
の転写産物の量がアスペルギルス・オリゼのα−アミラ
ーゼのプロモーターの同転写産物の量よりも多いことか
らも結論付けられる。
プロモーターよりも強力なプロモーター配列あるいはＵ
ＡＳ(Ｕpstream Ａctivation Ｓequence)配列がアス
ペルギルス・オリゼにさらに存在することが明らかとな
った。上記の結果は、本発明のプロモーターが、炭素源
がグルコースでも強い発現量を示すプロモーターである
ことを示しており、ノーザンバイブリダイゼーションの
結果においても、アスペルギルス・オリゼ由来の該新規
プロモーターが挿入されたβ−グルクロニダーゼ遺伝子
の転写産物の量がアスペルギルス・オリゼのα−アミラ
ーゼのプロモーターの同転写産物の量よりも多いことか
らも結論付けられる。
【００２１】
【発明の効果】本発明により、アスペルギルス属糸状菌
由来の新規強力プロモーターが提供され、該プロモータ
ー配列を含むベクターにより形質転換されたアスペルギ
ルス・オリゼにおける外来性タンパク質の著量生産が可
能となる。
由来の新規強力プロモーターが提供され、該プロモータ
ー配列を含むベクターにより形質転換されたアスペルギ
ルス・オリゼにおける外来性タンパク質の著量生産が可
能となる。
【００２２】
配列の長さ：６４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 起源 生物名：アスペルギルス オリゼ 配列の特徴 特徴を表す記号：promotor 配列 １０ ２０ ３０
４０ ５０ ６０ ５’ＧＡＴＣＴＴＴＧＣＴ ＡＴＧＴＡＧＣＡＴＴ ＡＡＧＴＡＧＴＡＧＴ Ａ
ＡＣＴＡＣＴＴＧＧ ＴＴＴＧＡＴＡＣＣＡ ＴＴＴＴＴＡＧＴＣＣ ３’ＣＴＡＧＡＡＡＣＧＡ ＴＡＣＡＴＣＧＴＡＡ ＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡ Ｔ
ＴＧＡＴＧＡＡＣＣ ＡＡＡＣＴＡＴＧＧＴ ＡＡＡＡＡＴＣＡＧＧ ７０ ８０ ９０
１００ １１０ １２０ ＡＣＣＧＴＧＴＴＧＡ ＧＡＣＧＣＴＡＧＡＧ ＡＴＡＴＡＡＧＴＡＴ Ｔ
ＣＴＴＴＴＣＣＣＴ ＴＣＧＡＣＧＴＴＡＴ ＡＣＴＡＡＧＴＧＧＧ ＴＧＧＣＡＣＡＡＣＴ ＣＴＧＣＧＡＴＣＴＣ ＴＡＴＡＴＴＣＡＴＡ Ａ
ＧＡＡＡＡＧＧＧＡ ＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡ ＴＧＡＴＴＣＡＣＣＣ １３０ １４０ １５０
１６０ １７０ １８０ ＡＡＧＡＡＧＴＡＧＴ ＡＡＧＣＧＣＡＡＣＡ ＡＡＡＴＣＣＣＧＣＡ Ｔ
ＣＣＡＴＴＧＧＧＧ ＴＣＧＣＡＧＴＣＡＡ ＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣ ＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡ ＴＴＣＧＣＧＴＴＧＴ ＴＴＴＡＧＧＧＣＧＴ Ａ
ＧＧＴＡＡＣＣＣＣ ＡＧＣＧＴＣＡＧＴＴ ＧＧＴＡＣＣＴＣＣＧ １９０ ２００ ２１０
２２０ ２３０ ２４０ ＧＴＣＡＴＴＧＧＴＴ ＧＣＣＡＴＧＧＧＴＧ ＣＣＴＴＧＣＣＴＧＡ Ｇ
ＧＣＡＧＣＧＡＣＧ ＡＴＧＡＴＴＧＧＧＣ ＣＣＡＡＡＣＴＧＴＡ ＣＡＧＴＡＡＣＣＡＡ ＣＧＧＴＡＣＣＣＡＣ ＧＧＡＡＣＧＧＡＣＴ Ｃ
ＣＧＴＣＧＣＴＧＣ ＴＡＣＴＡＡＣＣＣＧ ＧＧＴＴＴＧＡＣＡＴ ２５０ ２６０ ２７０
２８０ ２９０ ３００ ＴＴＣＣＧＧＡＧＣＣ ＣＣＡＣＡＡＴＧＣＣ ＴＧＡＡＡＴＡＣＴＴ Ｔ
ＣＣＴＴＧＴＴＧＡ ＴＡＴＣＡＡＣＣＣＧ ＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣ ＡＡＧＧＣＣＴＣＧＧ ＧＧＴＧＴＴＡＣＧＧ ＡＣＴＴＴＡＴＧＡＡ Ａ
ＧＧＡＡＣＡＡＣＴ ＡＴＡＧＴＴＧＧＧＣ ＣＧＡＡＡＡＧＧＡＧ ３１０ ３２０ ３３０
３４０ ３５０ ３６０ ＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴ ＣＴＡＴＣＣＣＣＡＡ ＡＴＣＣＡＧＣＧＴＴ Ａ
ＴＡＣＣＣＴＴＴＧ ＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣ ＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴ ＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡ ＧＡＴＡＧＧＧＧＴＴ ＴＡＧＧＴＣＧＣＡＡ Ｔ
ＡＴＧＧＧＡＡＡＣ ＴＡＡＧＡＴＡＡＡＧ ＧＧＡＣＡＧＡＡＴＡ ３７０ ３８０ ３９０
４００ ４１０ ４２０ ＣＧＣＡＴＣＡＣＣＴ ＣＡＡＴＴＣＧＴＣＡ ＡＡＡＴＧＧＣＴＧＧ Ｔ
ＡＡＧＴＣＡＴＡＣ ＴＴＡＣＧＣＴＡＴＡ ＣＧＡＡＴＣＣＣＣＴ ＧＣＧＴＡＧＴＧＧＡ ＧＴＴＡＡＧＣＡＧＴ ＴＴＴＡＣＣＧＡＣＣ Ａ
ＴＴＣＡＧＴＡＴＧ ＡＡＴＧＣＧＡＴＡＴ ＧＣＴＴＡＧＧＧＧＡ ４３０ ４４０ ４５０
４６０ ４７０ ４８０ ＣＴＣＴＣＧＣＧＡＣ ＧＡＣＴＴＣＡＴＣＡ ＡＧＣＴＡＣＴＴＴＴ Ｇ
ＣＴＧＧＴＴＴＴＴ ＣＴＡＡＴＧＣＣＣＣ ＴＣＣＴＣＣＡＴＴＣ ＧＡＧＡＧＣＧＣＴＧ ＣＴＧＡＡＧＴＡＧＴ ＴＣＧＡＴＧＡＡＡＡ Ｃ
ＧＡＣＣＡＡＡＡＡ ＧＡＴＴＡＣＧＧＧＧ ＡＧＧＡＧＧＴＡＡＧ ４９０ ５００ ５１０
５２０ ５３０ ５４０ ＡＴＧＧＡＣＣＣＣＴ ＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧ ＧＡＧＣＧＣＡＡＧＣ Ａ
ＴＴＣＡＡＣＧＣＡ ＣＡＴＧＧＡＡＡＴＡ ＡＴＡＧＴＣＡＡＡＧ ＴＡＣＣＴＧＧＧＧＡ ＧＧＴＴＣＴＡＣＴＣ ＣＴＣＧＣＧＴＴＣＧ Ｔ
ＡＡＧＴＴＧＣＧＴ ＧＴＡＣＣＴＴＴＡＴ ＴＡＴＣＡＧＴＴＴＣ ５５０ ５６０ ５７０
５８０ ５９０ ６００ ＣＴＡＡＣＡＣＡＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＡＡＣ ＡＴＡＴＡＧＡＣＴＴ Ｃ
ＣＡＧＡＧＣＡＴＣ ＧＣＴＣＧＴＧＡＧＴ ＡＡＴＡＴＣＣＴＴＣ ＧＡＴＴＧＴＧＴＡＣ ＣＴＡＡＡＡＡＴＴＧ ＴＡＴＡＴＣＴＧＡＡ Ｇ
ＧＴＣＴＣＧＴＡＧ ＣＧＡＧＣＡＣＴＣＡ ＴＴＡＴＡＧＧＡＡＧ ６１０ ６２０ ６３０
６４０ ＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧ ＧＴＣＴＴＡＧＡＴＡ ＣＡＧＡＣＧＣＧＣＴ Ｔ
ＡＡＣＧＡＣＧＡＴ Ｃ ３’ ＡＡＡＡＧＡＡＣＡＣ ＣＡＧＡＡＴＣＴＡＴ ＧＴＣＴＧＣＧＣＧＡ Ａ
ＴＴＧＣＴＧＣＴＡ Ｇ ５’
４０ ５０ ６０ ５’ＧＡＴＣＴＴＴＧＣＴ ＡＴＧＴＡＧＣＡＴＴ ＡＡＧＴＡＧＴＡＧＴ Ａ
ＡＣＴＡＣＴＴＧＧ ＴＴＴＧＡＴＡＣＣＡ ＴＴＴＴＴＡＧＴＣＣ ３’ＣＴＡＧＡＡＡＣＧＡ ＴＡＣＡＴＣＧＴＡＡ ＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡ Ｔ
ＴＧＡＴＧＡＡＣＣ ＡＡＡＣＴＡＴＧＧＴ ＡＡＡＡＡＴＣＡＧＧ ７０ ８０ ９０
１００ １１０ １２０ ＡＣＣＧＴＧＴＴＧＡ ＧＡＣＧＣＴＡＧＡＧ ＡＴＡＴＡＡＧＴＡＴ Ｔ
ＣＴＴＴＴＣＣＣＴ ＴＣＧＡＣＧＴＴＡＴ ＡＣＴＡＡＧＴＧＧＧ ＴＧＧＣＡＣＡＡＣＴ ＣＴＧＣＧＡＴＣＴＣ ＴＡＴＡＴＴＣＡＴＡ Ａ
ＧＡＡＡＡＧＧＧＡ ＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡ ＴＧＡＴＴＣＡＣＣＣ １３０ １４０ １５０
１６０ １７０ １８０ ＡＡＧＡＡＧＴＡＧＴ ＡＡＧＣＧＣＡＡＣＡ ＡＡＡＴＣＣＣＧＣＡ Ｔ
ＣＣＡＴＴＧＧＧＧ ＴＣＧＣＡＧＴＣＡＡ ＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣ ＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡ ＴＴＣＧＣＧＴＴＧＴ ＴＴＴＡＧＧＧＣＧＴ Ａ
ＧＧＴＡＡＣＣＣＣ ＡＧＣＧＴＣＡＧＴＴ ＧＧＴＡＣＣＴＣＣＧ １９０ ２００ ２１０
２２０ ２３０ ２４０ ＧＴＣＡＴＴＧＧＴＴ ＧＣＣＡＴＧＧＧＴＧ ＣＣＴＴＧＣＣＴＧＡ Ｇ
ＧＣＡＧＣＧＡＣＧ ＡＴＧＡＴＴＧＧＧＣ ＣＣＡＡＡＣＴＧＴＡ ＣＡＧＴＡＡＣＣＡＡ ＣＧＧＴＡＣＣＣＡＣ ＧＧＡＡＣＧＧＡＣＴ Ｃ
ＣＧＴＣＧＣＴＧＣ ＴＡＣＴＡＡＣＣＣＧ ＧＧＴＴＴＧＡＣＡＴ ２５０ ２６０ ２７０
２８０ ２９０ ３００ ＴＴＣＣＧＧＡＧＣＣ ＣＣＡＣＡＡＴＧＣＣ ＴＧＡＡＡＴＡＣＴＴ Ｔ
ＣＣＴＴＧＴＴＧＡ ＴＡＴＣＡＡＣＣＣＧ ＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣ ＡＡＧＧＣＣＴＣＧＧ ＧＧＴＧＴＴＡＣＧＧ ＡＣＴＴＴＡＴＧＡＡ Ａ
ＧＧＡＡＣＡＡＣＴ ＡＴＡＧＴＴＧＧＧＣ ＣＧＡＡＡＡＧＧＡＧ ３１０ ３２０ ３３０
３４０ ３５０ ３６０ ＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴ ＣＴＡＴＣＣＣＣＡＡ ＡＴＣＣＡＧＣＧＴＴ Ａ
ＴＡＣＣＣＴＴＴＧ ＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣ ＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴ ＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡ ＧＡＴＡＧＧＧＧＴＴ ＴＡＧＧＴＣＧＣＡＡ Ｔ
ＡＴＧＧＧＡＡＡＣ ＴＡＡＧＡＴＡＡＡＧ ＧＧＡＣＡＧＡＡＴＡ ３７０ ３８０ ３９０
４００ ４１０ ４２０ ＣＧＣＡＴＣＡＣＣＴ ＣＡＡＴＴＣＧＴＣＡ ＡＡＡＴＧＧＣＴＧＧ Ｔ
ＡＡＧＴＣＡＴＡＣ ＴＴＡＣＧＣＴＡＴＡ ＣＧＡＡＴＣＣＣＣＴ ＧＣＧＴＡＧＴＧＧＡ ＧＴＴＡＡＧＣＡＧＴ ＴＴＴＡＣＣＧＡＣＣ Ａ
ＴＴＣＡＧＴＡＴＧ ＡＡＴＧＣＧＡＴＡＴ ＧＣＴＴＡＧＧＧＧＡ ４３０ ４４０ ４５０
４６０ ４７０ ４８０ ＣＴＣＴＣＧＣＧＡＣ ＧＡＣＴＴＣＡＴＣＡ ＡＧＣＴＡＣＴＴＴＴ Ｇ
ＣＴＧＧＴＴＴＴＴ ＣＴＡＡＴＧＣＣＣＣ ＴＣＣＴＣＣＡＴＴＣ ＧＡＧＡＧＣＧＣＴＧ ＣＴＧＡＡＧＴＡＧＴ ＴＣＧＡＴＧＡＡＡＡ Ｃ
ＧＡＣＣＡＡＡＡＡ ＧＡＴＴＡＣＧＧＧＧ ＡＧＧＡＧＧＴＡＡＧ ４９０ ５００ ５１０
５２０ ５３０ ５４０ ＡＴＧＧＡＣＣＣＣＴ ＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧ ＧＡＧＣＧＣＡＡＧＣ Ａ
ＴＴＣＡＡＣＧＣＡ ＣＡＴＧＧＡＡＡＴＡ ＡＴＡＧＴＣＡＡＡＧ ＴＡＣＣＴＧＧＧＧＡ ＧＧＴＴＣＴＡＣＴＣ ＣＴＣＧＣＧＴＴＣＧ Ｔ
ＡＡＧＴＴＧＣＧＴ ＧＴＡＣＣＴＴＴＡＴ ＴＡＴＣＡＧＴＴＴＣ ５５０ ５６０ ５７０
５８０ ５９０ ６００ ＣＴＡＡＣＡＣＡＴＧ ＧＡＴＴＴＴＴＡＡＣ ＡＴＡＴＡＧＡＣＴＴ Ｃ
ＣＡＧＡＧＣＡＴＣ ＧＣＴＣＧＴＧＡＧＴ ＡＡＴＡＴＣＣＴＴＣ ＧＡＴＴＧＴＧＴＡＣ ＣＴＡＡＡＡＡＴＴＧ ＴＡＴＡＴＣＴＧＡＡ Ｇ
ＧＴＣＴＣＧＴＡＧ ＣＧＡＧＣＡＣＴＣＡ ＴＴＡＴＡＧＧＡＡＧ ６１０ ６２０ ６３０
６４０ ＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧ ＧＴＣＴＴＡＧＡＴＡ ＣＡＧＡＣＧＣＧＣＴ Ｔ
ＡＡＣＧＡＣＧＡＴ Ｃ ３’ ＡＡＡＡＧＡＡＣＡＣ ＣＡＧＡＡＴＣＴＡＴ ＧＴＣＴＧＣＧＣＧＡ Ａ
ＴＴＧＣＴＧＣＴＡ Ｇ ５’
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:69） Ｃ１２Ｒ 1:69） (72)発明者 布川 彌太郎 兵庫県西宮市今津出在家町４番９号 大関 株式会社総合研究所内
Claims (7)
- 【請求項１】 配列表に示した塩基配列で表わされるＤ
ＮＡ。 - 【請求項２】 請求項１記載のＤＮＡからなるプロモー
ター。 - 【請求項３】 アスペルギルス・オリゼ(Ａspergillus
oryzae)由来である請求項２記載のプロモーター。 - 【請求項４】 アスペルギルス・オリゼにおいて高発現
する請求項２記載のプロモーター。 - 【請求項５】 請求項２記載のプロモーターを挿入した
ベクターにより形質転換したアスペルギルス・オリゼ。 - 【請求項６】 アスペルギルス・オリゼＦＥＲＭ Ｐ−
１３８９５である請求項５記載のアスペルギルス・オリ
ゼ。 - 【請求項７】 請求項５記載のアスペルギルス・オリゼ
を培養し、生成、蓄積された有用タンパク質を採取する
ことを特徴とする有用タンパク質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5268653A JPH07115976A (ja) | 1993-10-27 | 1993-10-27 | アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5268653A JPH07115976A (ja) | 1993-10-27 | 1993-10-27 | アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07115976A true JPH07115976A (ja) | 1995-05-09 |
Family
ID=17461542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5268653A Pending JPH07115976A (ja) | 1993-10-27 | 1993-10-27 | アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07115976A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002528076A (ja) * | 1998-10-26 | 2002-09-03 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 糸状面細胞内の問題のｄｎａライブラリーの作製及びスクリーニング |
-
1993
- 1993-10-27 JP JP5268653A patent/JPH07115976A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002528076A (ja) * | 1998-10-26 | 2002-09-03 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 糸状面細胞内の問題のｄｎａライブラリーの作製及びスクリーニング |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0635574B1 (en) | Selection marker gene free recombinant strains, a method for obtaining them and the use of these strains | |
| DE69332030T2 (de) | Herstellung von heterologen proteinen in filamentösen fungi | |
| EP0263311A2 (en) | Yeast production of human tumor necrosis factor | |
| NZ207000A (en) | Dna coding for fungal glucoamylase | |
| CA2504744A1 (en) | Bgl6 beta-glucosidase and nucleic acids encoding the same | |
| WO1990014423A1 (en) | Microorganism transformation | |
| JPS62244382A (ja) | 新規プロモーター及び該プロモーターを用いた遺伝子発現方法 | |
| AU625773B2 (en) | Novel expression system | |
| EP0866872A1 (en) | A FUNGUNS WHEREIN THE areA, pepC AND/OR pepE GENES HAVE BEEN INACTIVATED | |
| EP0286303A1 (en) | DNA and its use | |
| DE69324118T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Riboflavin | |
| JPH05268972A (ja) | Ｄｎａおよびその用途 | |
| US5281531A (en) | Host and vector for producing D-ribose | |
| JP4526638B2 (ja) | タンパク質の高発現システム | |
| JP3372087B2 (ja) | アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター | |
| JPH07115976A (ja) | アスペルギルス属糸状菌の新規プロモーター | |
| JPH099968A (ja) | 糸状菌のエンハンサーｄｎａ塩基配列およびその用途 | |
| JPH03164185A (ja) | 改変されたｄｎａおよびその用途 | |
| JP2551746B2 (ja) | 改良プラスミドベクタ−およびその利用 | |
| JPH06277067A (ja) | アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼをコードする遺伝子ｄｎａ | |
| JPH06277073A (ja) | 蛋白質のトランスロケーションマシナリーをコードする遺伝子ｄｎａ | |
| US4585739A (en) | Plasmid for foreign gene expression in B. subtilis | |
| JPH11313683A (ja) | 新規キシロシダーゼ遺伝子、ベクター、それを用いた形質転換体及びその利用 | |
| CN116254286B (zh) | 氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法 | |
| AU621277B2 (en) | Shortened phosphoglycerate kinase promoter |