JPH0710735A - 化粧料 - Google Patents
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- JPH0710735A JPH0710735A JP5173789A JP17378993A JPH0710735A JP H0710735 A JPH0710735 A JP H0710735A JP 5173789 A JP5173789 A JP 5173789A JP 17378993 A JP17378993 A JP 17378993A JP H0710735 A JPH0710735 A JP H0710735A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 日焼けによる色黒、シミ、ソバカス等を有効
に防止し、さらに積極的に皮膚を改質して色白の美肌を
つくることのできる化粧料を提供すること。 【構成】 ロドトルラ属酵母の培養液またはピキア属酵
母の培養液から酵母菌体を除去して得た発酵液を配合し
て皮膚美白効果のある化粧料を得る。
に防止し、さらに積極的に皮膚を改質して色白の美肌を
つくることのできる化粧料を提供すること。 【構成】 ロドトルラ属酵母の培養液またはピキア属酵
母の培養液から酵母菌体を除去して得た発酵液を配合し
て皮膚美白効果のある化粧料を得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、優れた皮膚美白効果、
活性酸素消去効果および細胞賦活効果を有する化粧料に
関し、さらに詳しくは、ロドトルラ属酵母またはピキア
属酵母の培養液から得られた発酵液を有効成分として配
合した化粧料に関する。
活性酸素消去効果および細胞賦活効果を有する化粧料に
関し、さらに詳しくは、ロドトルラ属酵母またはピキア
属酵母の培養液から得られた発酵液を有効成分として配
合した化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】一般に、日焼けによる色黒、シミ、ソバ
カス等は、黒褐色の色素であるメラニンの生成により生
じるものと考えられており、このメラニンは、皮膚が紫
外線などの外的刺激を受けると、皮膚のメラニン細胞中
に存在するチロシナーゼ（チロシン酸化酵素）が活性化
し、たんぱく質構成アミノ酸の一種であるチロシンが酸
化されて生成する。このことから、メラニン生成に関与
するチロシナーゼの活性を抑制することにより肌を白く
する効果が期待されるため、チロシナーゼ活性抑制成分
の化粧料への配合が提唱されていた。
カス等は、黒褐色の色素であるメラニンの生成により生
じるものと考えられており、このメラニンは、皮膚が紫
外線などの外的刺激を受けると、皮膚のメラニン細胞中
に存在するチロシナーゼ（チロシン酸化酵素）が活性化
し、たんぱく質構成アミノ酸の一種であるチロシンが酸
化されて生成する。このことから、メラニン生成に関与
するチロシナーゼの活性を抑制することにより肌を白く
する効果が期待されるため、チロシナーゼ活性抑制成分
の化粧料への配合が提唱されていた。
【０００３】しかしながら、チロシナーゼ活性抑制効果
を示すものの、Ｂ１６メラノーマ培養細胞においてメラ
ニン生成抑制効果が弱かったり、実際に皮膚に適用した
場合、沈着した色素の淡色化の効果が充分でない化粧料
が多かった。
を示すものの、Ｂ１６メラノーマ培養細胞においてメラ
ニン生成抑制効果が弱かったり、実際に皮膚に適用した
場合、沈着した色素の淡色化の効果が充分でない化粧料
が多かった。
【０００４】実際に化粧料を皮膚に適用した場合に、美
白効果を発揮させるためには、上述のチロシナーゼ活性
抑制効果やメラニン生成抑制効果のみでは不充分であ
り、これらの効果の他、活性酸素を消去することによる
色素沈着の抑制や表皮細胞の賦活によるメラニン排泄の
促進などの要因も必要とされている。
白効果を発揮させるためには、上述のチロシナーゼ活性
抑制効果やメラニン生成抑制効果のみでは不充分であ
り、これらの効果の他、活性酸素を消去することによる
色素沈着の抑制や表皮細胞の賦活によるメラニン排泄の
促進などの要因も必要とされている。
【０００５】一方、酵母を利用する化粧料として特開昭
６１−５３２０８号公報「皮膚化粧料」、特開昭６１−
２６０００９号公報「酵母抽出液」、特開昭６２−２３
４００７号公報「酵母の生産する抗菌物質を含有する皮
膚化粧品」、特開昭６３−２７７６０５号公報「化粧
料」、特開昭６４−６３５０５公報「化粧料」や特開平
３−１６３１６８号公報「赤色色素とその製造方法なら
びに飯食品または化粧料」などによって公知であるが、
これら従来の酵母を利用した化粧料は、ビール酵母、パ
ン酵母の抽出物を利用したものが多く、美白効果を持た
ないものが多いのが現状である。
６１−５３２０８号公報「皮膚化粧料」、特開昭６１−
２６０００９号公報「酵母抽出液」、特開昭６２−２３
４００７号公報「酵母の生産する抗菌物質を含有する皮
膚化粧品」、特開昭６３−２７７６０５号公報「化粧
料」、特開昭６４−６３５０５公報「化粧料」や特開平
３−１６３１６８号公報「赤色色素とその製造方法なら
びに飯食品または化粧料」などによって公知であるが、
これら従来の酵母を利用した化粧料は、ビール酵母、パ
ン酵母の抽出物を利用したものが多く、美白効果を持た
ないものが多いのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述の従来
の問題点を解決し、チロシナーゼ活性抑制、メラニン生
成抑制、活性酸素消去や細胞賦活に基づく優れた皮膚美
白効果を有する化粧料を提供することを目的とするもの
である。
の問題点を解決し、チロシナーゼ活性抑制、メラニン生
成抑制、活性酸素消去や細胞賦活に基づく優れた皮膚美
白効果を有する化粧料を提供することを目的とするもの
である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は斯かる課題
を解決するために鋭意研究したところ、ロドトルラ（Rh
odotorula ）属酵母またはピキア（Pichia）属酵母培養
液から得られた発酵液が上述に示す諸効果を併せ有する
ことを見出し、本発明を提供することができた。
を解決するために鋭意研究したところ、ロドトルラ（Rh
odotorula ）属酵母またはピキア（Pichia）属酵母培養
液から得られた発酵液が上述に示す諸効果を併せ有する
ことを見出し、本発明を提供することができた。
【０００８】すなわち本発明は、ロドトルラ属酵母また
はピキア属酵母の培養液から酵母菌体を除去することに
よって調製された発酵液を配合したことを特徴とする化
粧料である。
はピキア属酵母の培養液から酵母菌体を除去することに
よって調製された発酵液を配合したことを特徴とする化
粧料である。
【０００９】
【作用】本発明で使用する酵母は、ロドトルラ属または
ピキア属に属する酵母であるが、これらの酵母を液体培
地に接種し、２０〜３０℃の温度で攪拌培養あるいは通
気攪拌培養を行なう。
ピキア属に属する酵母であるが、これらの酵母を液体培
地に接種し、２０〜３０℃の温度で攪拌培養あるいは通
気攪拌培養を行なう。
【００１０】この場合、これらの酵母の培養の際に用い
られる培地としては、例えばＹＭ液体培地（理化学研究
所発行、微生物株カタログ第５版１９９２年、３９６ペ
ージ記載の培地組成から寒天を除いたもの）や、トマト
ジュースを主成分とする培地などの使用菌が成育し得る
培地を用いることができる。
られる培地としては、例えばＹＭ液体培地（理化学研究
所発行、微生物株カタログ第５版１９９２年、３９６ペ
ージ記載の培地組成から寒天を除いたもの）や、トマト
ジュースを主成分とする培地などの使用菌が成育し得る
培地を用いることができる。
【００１１】培養後、得られた培養液をそのままただち
に遠心分離機や濾過などして酵母菌体等の不溶成分を除
き、目的の発酵液を得るが、この場合、得られた培養液
１容量部に対して０．５〜２容量部のメタノールやエタ
ノールを単独あるいは混合液とした溶剤を加え、２０〜
４０℃の温度で、２〜２４時間攪拌した後、遠心分離ま
たは濾過などして酵母菌体等の不溶成分を除き、目的の
発酵液を得てもよい。
に遠心分離機や濾過などして酵母菌体等の不溶成分を除
き、目的の発酵液を得るが、この場合、得られた培養液
１容量部に対して０．５〜２容量部のメタノールやエタ
ノールを単独あるいは混合液とした溶剤を加え、２０〜
４０℃の温度で、２〜２４時間攪拌した後、遠心分離ま
たは濾過などして酵母菌体等の不溶成分を除き、目的の
発酵液を得てもよい。
【００１２】このようにして得られた酵母発酵液は、チ
ロシナーゼ活性抑制効果、Ｂ１６メラノーマ細胞におけ
るメラニン生成抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活
効果および茶色モルモットの皮膚における沈着色素の淡
色化効果を有することが、本発明者の試験によって確認
されている。
ロシナーゼ活性抑制効果、Ｂ１６メラノーマ細胞におけ
るメラニン生成抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活
効果および茶色モルモットの皮膚における沈着色素の淡
色化効果を有することが、本発明者の試験によって確認
されている。
【００１３】これらロドトルラ属またはピキア属に属す
る酵母の発酵液を、化粧水、クリーム、乳液、パックな
どに０．０５〜１０％配合することによって、皮膚美白
効果、活性酸素消去効果および細胞賦活効果を有する化
粧料を得ることができる。
る酵母の発酵液を、化粧水、クリーム、乳液、パックな
どに０．０５〜１０％配合することによって、皮膚美白
効果、活性酸素消去効果および細胞賦活効果を有する化
粧料を得ることができる。
【００１４】この場合、本発明の化粧料に配合される酵
母発酵液は、上述のようにロドトルラ属およびピキア属
に属する酵母の培養液から調製されるものであり、充分
なチロシナーゼ活性抑制効果、メラニン生成抑制効果、
活性酸素消去効果、細胞賦活効果および沈着色素の淡色
化効果を有するものであれば、使用する菌株を特に制限
するものではないが、本発明においては、西瓜の果実か
ら分離されたロドトルラ属酵母Ｓ２株（工業技術院生命
工学工業研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３６２９号）や、桃
の果実から分離されたピキア属酵母Ｍ２株（同菌寄ＦＥ
ＲＭＰ−１３６３１号）を一例として用いることにし
た。
母発酵液は、上述のようにロドトルラ属およびピキア属
に属する酵母の培養液から調製されるものであり、充分
なチロシナーゼ活性抑制効果、メラニン生成抑制効果、
活性酸素消去効果、細胞賦活効果および沈着色素の淡色
化効果を有するものであれば、使用する菌株を特に制限
するものではないが、本発明においては、西瓜の果実か
ら分離されたロドトルラ属酵母Ｓ２株（工業技術院生命
工学工業研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３６２９号）や、桃
の果実から分離されたピキア属酵母Ｍ２株（同菌寄ＦＥ
ＲＭＰ−１３６３１号）を一例として用いることにし
た。
【００１５】以下、実施例により本発明を詳細に説明す
るが、本発明の範囲はこれらに制限されるものではな
い。
るが、本発明の範囲はこれらに制限されるものではな
い。
【００１６】
【実施例１】ロドトルラ属酵母またはピキア属の発酵液
の調製。
の調製。
【００１７】先ず、下記組成の培地を１１０℃で２０分
間高圧滅菌した。
間高圧滅菌した。
【００１８】 ・トマトジュース濾液 ８００ml ・蒸留水 １２００ml ・ブドウ糖 ８０ｇ ｐＨ ６．８ このトマトジュース濾液は、市販の缶入りトマトジュー
スを遠心分離または濾過するなどして、不溶分を除いた
ものを使用した。
スを遠心分離または濾過するなどして、不溶分を除いた
ものを使用した。
【００１９】この培地に、予め同様の割合の組成の培地
５０mlで前培養しておいたロドトルラ属酵母Ｓ２株（工
業技術院生命工学工業技術研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３
６２９号）の培養液を接種し、２５℃で５日間通気攪拌
培養を行なった（通気量２リットル／分、回転数２００
回転／分）後、培養液に３リットルのエタノールを加
え、２５℃で１８時間攪拌した。
５０mlで前培養しておいたロドトルラ属酵母Ｓ２株（工
業技術院生命工学工業技術研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３
６２９号）の培養液を接種し、２５℃で５日間通気攪拌
培養を行なった（通気量２リットル／分、回転数２００
回転／分）後、培養液に３リットルのエタノールを加
え、２５℃で１８時間攪拌した。
【００２０】次いで、この液を遠心分離（５，０００×
ｇ、１０分間）し、酵母菌体などの不溶成分を除き、約
４．６リットルの上清を得、この上清を−２０℃で１８
時間放置した後、濾過によって沈殿物を除き、黄色透明
なロドトルラ属酵母の発酵液４．４リットルを得た。
ｇ、１０分間）し、酵母菌体などの不溶成分を除き、約
４．６リットルの上清を得、この上清を−２０℃で１８
時間放置した後、濾過によって沈殿物を除き、黄色透明
なロドトルラ属酵母の発酵液４．４リットルを得た。
【００２１】また、ピキア属酵母Ｍ２株（工業技術院生
命工学工業技術研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３６３１号）
を用いて、上記に示したロドトルラ属酵母株と同様な方
法で黄色透明なピキア属酵母の発酵液４．４リットルを
得た。
命工学工業技術研究所菌寄ＦＥＲＭＰ−１３６３１号）
を用いて、上記に示したロドトルラ属酵母株と同様な方
法で黄色透明なピキア属酵母の発酵液４．４リットルを
得た。
【００２２】
【実施例２】チロシナーゼ活性抑制率の測定試験。
【００２３】先ず、実施例１で得られたロドトルラ属発
酵液ならびにピキア属酵母発酵液を個別に１ml、２ml、
３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、それ
ぞれを０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以下
の試験の試料溶液とした。
酵液ならびにピキア属酵母発酵液を個別に１ml、２ml、
３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、それ
ぞれを０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以下
の試験の試料溶液とした。
【００２４】試験管に１００ｍＭコハク酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ５．５）１．８mlと、２７０units ／mlマッ
シュルームチロシナーゼ（シグマ社製）溶液０．１mlを
入れたものに、上記の２種の発酵液からなる試料溶液を
それぞれ０．１ml入れて混合し、３０℃の恒温水槽で１
５分間インキュベートした。
衝液（ｐＨ５．５）１．８mlと、２７０units ／mlマッ
シュルームチロシナーゼ（シグマ社製）溶液０．１mlを
入れたものに、上記の２種の発酵液からなる試料溶液を
それぞれ０．１ml入れて混合し、３０℃の恒温水槽で１
５分間インキュベートした。
【００２５】次いで、この試験管に６ｍＭＬ−ＤＯＰＡ
（和光純薬工業製：上記１００ｍＭコハク酸ナトリウム
緩衝液に溶解したもの）溶液を１ml加えて攪拌した後、
この試験管を３０℃の恒温室中に設置した往復振とう機
に約４５°傾けてセットし、４０分間振とう（往復回数
１５０回／分）した。その後、分光光度計を用いて４７
５nmの吸光度を測定し、その測定値を（Ａ）とした。
（和光純薬工業製：上記１００ｍＭコハク酸ナトリウム
緩衝液に溶解したもの）溶液を１ml加えて攪拌した後、
この試験管を３０℃の恒温室中に設置した往復振とう機
に約４５°傾けてセットし、４０分間振とう（往復回数
１５０回／分）した。その後、分光光度計を用いて４７
５nmの吸光度を測定し、その測定値を（Ａ）とした。
【００２６】一方、対照として、試料溶液の代わりに蒸
留水を加えたこと以外は上記と同様にして４７５nmの吸
光度を測定し、その測定値を（Ｂ）とした。また、Ｌ−
ＤＯＰＡ溶液の代わりに上記コハク酸ナトリウムを加え
たこと以外は上記と同様にして４７５nmの吸光度を測定
し、その測定値を（Ｃ）とした。
留水を加えたこと以外は上記と同様にして４７５nmの吸
光度を測定し、その測定値を（Ｂ）とした。また、Ｌ−
ＤＯＰＡ溶液の代わりに上記コハク酸ナトリウムを加え
たこと以外は上記と同様にして４７５nmの吸光度を測定
し、その測定値を（Ｃ）とした。
【００２７】なお、各試料溶液のチロシナーゼ活性抑制
率の算出は、以下の計算式を用いて行ない、その結果を
表１に示した。
率の算出は、以下の計算式を用いて行ない、その結果を
表１に示した。
【００２８】チロシナーゼ活性抑制率（％）＝｛１−
（Ａ−Ｃ）／Ｂ｝×１００
（Ａ−Ｃ）／Ｂ｝×１００
【００２９】
【表１】
【００３０】
【実施例３】Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメラニン生
成抑制率の測定試験。
成抑制率の測定試験。
【００３１】先ず、実施例１で得られたロドトルラ属酵
母発酵液ならびにピキア属酵母発酵液を個別に１ml、２
ml、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、
それぞれを０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を
以下の試験の試料溶液とした。
母発酵液ならびにピキア属酵母発酵液を個別に１ml、２
ml、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、
それぞれを０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を
以下の試験の試料溶液とした。
【００３２】１０％ウシ胎児血清を含むイーグルＭＥＭ
培地に、メラニンを生成するマウス由来の悪性黒色腫細
胞であるＢ１６メラノーマ細胞（Ｂ１６−ＦＯ．ＡＴＣ
ＣＮｏ．ＣＲＬ−６３２２）を終濃度３×１０3 ／mlと
なるように接種した後、この培地を６ウェルプレート
（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに６ml入れ、ＣＯ2イ
ンキュベーター（５％ＣＯ2 、３７℃）内で５日間培養
した。
培地に、メラニンを生成するマウス由来の悪性黒色腫細
胞であるＢ１６メラノーマ細胞（Ｂ１６−ＦＯ．ＡＴＣ
ＣＮｏ．ＣＲＬ−６３２２）を終濃度３×１０3 ／mlと
なるように接種した後、この培地を６ウェルプレート
（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに６ml入れ、ＣＯ2イ
ンキュベーター（５％ＣＯ2 、３７℃）内で５日間培養
した。
【００３３】培養終了後、培地を捨てて、各ウェルに１
mlの生理食塩水を加え、スクレーパーを用いてウェルの
底に付着している細胞をかき取るように懸濁させ、次い
でピペットを用いて該細胞懸濁液をマイクロ遠心チュー
ブ（１．５ml容量、エッペンドルフ社製）に移し、遠心
分離（１，０００×ｇ、１５分間）した。
mlの生理食塩水を加え、スクレーパーを用いてウェルの
底に付着している細胞をかき取るように懸濁させ、次い
でピペットを用いて該細胞懸濁液をマイクロ遠心チュー
ブ（１．５ml容量、エッペンドルフ社製）に移し、遠心
分離（１，０００×ｇ、１５分間）した。
【００３４】次いで上清を除いた後、終容量１mlとなる
ように生理食塩水を加え、ペレットとなった細胞を懸濁
させて細胞懸濁液を得、次いで該細胞懸濁液に１０％Ｓ
ＤＳ溶液２０μｌを加え、激しく攪拌し細胞を溶解させ
た後、分光光度計を用いて該細胞溶解液の２６０nmの吸
光度（Ａ）と４７５nmの吸光度（Ｂ）とをそれぞれ測定
した。
ように生理食塩水を加え、ペレットとなった細胞を懸濁
させて細胞懸濁液を得、次いで該細胞懸濁液に１０％Ｓ
ＤＳ溶液２０μｌを加え、激しく攪拌し細胞を溶解させ
た後、分光光度計を用いて該細胞溶解液の２６０nmの吸
光度（Ａ）と４７５nmの吸光度（Ｂ）とをそれぞれ測定
した。
【００３５】一方、対照として試料溶液の代わりに滅菌
水を添加して上記同様の試験を行い、２６０nmの吸光度
（Ｃ）と４７５nmの吸光度（Ｄ）とを測定した。
水を添加して上記同様の試験を行い、２６０nmの吸光度
（Ｃ）と４７５nmの吸光度（Ｄ）とを測定した。
【００３６】なお、試料溶液のメラニン生成抑制率の算
出は、以下の計算式を用いて行い、その結果を表２に示
した。
出は、以下の計算式を用いて行い、その結果を表２に示
した。
【００３７】メラニン生成抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／
Ａ）／（Ｄ／Ｃ）｝×１００
Ａ）／（Ｄ／Ｃ）｝×１００
【００３８】
【表２】
【００３９】
【実施例４】茶色モルモットにおける沈着色素の淡色化
効果の測定試験。
効果の測定試験。
【００４０】Ａ−１系茶色モルモット（雄、実験開始時
体重４００ｇ）の背部を剃毛して皮膚を露出させ、紫外
線（波長３１２nm、強度４２０mJ）を１日１回照射し、
これを５日間繰り返した。その後、無処置で飼育を続
け、７日後に皮膚の色素沈着を得た。
体重４００ｇ）の背部を剃毛して皮膚を露出させ、紫外
線（波長３１２nm、強度４２０mJ）を１日１回照射し、
これを５日間繰り返した。その後、無処置で飼育を続
け、７日後に皮膚の色素沈着を得た。
【００４１】次いで、色素沈着部位を２cm×２cmの正方
形に区画し、１区画に対して、実施例１で得られたロド
トルラ属酵母発酵液またはピキア属酵母発酵液を１日１
回５０μｌ塗布し、これを２０日間繰り返した。また対
照として、６０％エタノール溶液、蒸留水も同様に塗布
して色素沈着の淡色化効果を求めた。
形に区画し、１区画に対して、実施例１で得られたロド
トルラ属酵母発酵液またはピキア属酵母発酵液を１日１
回５０μｌ塗布し、これを２０日間繰り返した。また対
照として、６０％エタノール溶液、蒸留水も同様に塗布
して色素沈着の淡色化効果を求めた。
【００４２】この場合、沈着色素の淡色化効果は、上記
塗布試料を２０日間塗布し、以下に示す判定基準に従っ
て肉眼判定をすることによって求め、その結果を表３に
示した。
塗布試料を２０日間塗布し、以下に示す判定基準に従っ
て肉眼判定をすることによって求め、その結果を表３に
示した。
【００４３】判定基準 ０ ： 無塗布部位と比べ、色素沈着の差が認められな
い。 １ ： 無塗布部位と比べ、わずかに沈着色素の淡色化
が認められる。 ２ ： 無塗布部位と比べ、中程度の沈着色素の淡色化
が認められる。 ３ ： 無塗布部位と比べ、顕著な沈着色素の淡色化が
認められる。
い。 １ ： 無塗布部位と比べ、わずかに沈着色素の淡色化
が認められる。 ２ ： 無塗布部位と比べ、中程度の沈着色素の淡色化
が認められる。 ３ ： 無塗布部位と比べ、顕著な沈着色素の淡色化が
認められる。
【００４４】
【表３】
【００４５】
【実施例５】活性酸素消去効果の測定試験。
【００４６】先ず、実施例１で得られたロドトルラ属酵
母発酵液ならびにピキア属酵母発酵液をそれぞれ１ml、
２ml、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した
後、それぞれ０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液
を以下の試験の試料溶液とした。
母発酵液ならびにピキア属酵母発酵液をそれぞれ１ml、
２ml、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した
後、それぞれ０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液
を以下の試験の試料溶液とした。
【００４７】活性酸素消去効果の測定法は、スーパーオ
キサイド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）の活性測定法のう
ち、チトクロームＣを用いる方法に準じて、以下のよう
に行なった。
キサイド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）の活性測定法のう
ち、チトクロームＣを用いる方法に準じて、以下のよう
に行なった。
【００４８】分光光度計キュベット（４ml容量、光路１
cm）に、１００mMトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）を
２．６ml、１ｍＭチトクロームＣ溶液（上記トリス塩酸
緩衝液に溶解したもの）を０．１ml、キサンチンオキシ
ダーゼ溶液（ベーリンガーマンハイム社製、製品番号１
１０４３４を上記トリス塩酸緩衝液で８０倍に希釈した
もの）を０．１ml、上記試料を各０．１ml、および１５
mMキサンチン溶液（０．０２５規定ＮａＯＨ溶液に溶解
したもの）を０．１ml加え、攪拌した後、３０℃の恒温
キュベットホルダーをセットした分光光度計を用いて、
５５０nmの吸光度の変化（増加）を測定し、その増加速
度の初速を（Ｖ）とした。
cm）に、１００mMトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）を
２．６ml、１ｍＭチトクロームＣ溶液（上記トリス塩酸
緩衝液に溶解したもの）を０．１ml、キサンチンオキシ
ダーゼ溶液（ベーリンガーマンハイム社製、製品番号１
１０４３４を上記トリス塩酸緩衝液で８０倍に希釈した
もの）を０．１ml、上記試料を各０．１ml、および１５
mMキサンチン溶液（０．０２５規定ＮａＯＨ溶液に溶解
したもの）を０．１ml加え、攪拌した後、３０℃の恒温
キュベットホルダーをセットした分光光度計を用いて、
５５０nmの吸光度の変化（増加）を測定し、その増加速
度の初速を（Ｖ）とした。
【００４９】一方、対照として、試料溶液の代わりに蒸
留水０．１mlを加えた場合についても同様に吸光度の変
化を測定し、そのときの吸光度の増加速度の初速を（Ｖ
0 ）として、以下の計算式を用いて活性酸素消去率の算
出を行い、その結果を表４に示した。
留水０．１mlを加えた場合についても同様に吸光度の変
化を測定し、そのときの吸光度の増加速度の初速を（Ｖ
0 ）として、以下の計算式を用いて活性酸素消去率の算
出を行い、その結果を表４に示した。
【００５０】 活性酸素消去率（％）＝（１−Ｖ／Ｖ0 ）×１００
【００５１】
【００５２】
【実施例６】細胞賦活効果の測定試験。
【００５３】先ず、実施例１で得たロドトルラ属酵母発
酵液ならびにピキア属酵母発酵液をそれぞれ１ml、２m
l、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、
それぞれ０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以
下の試験の試料溶液とした。
酵液ならびにピキア属酵母発酵液をそれぞれ１ml、２m
l、３ml、４ml、５ml採取したものを減圧乾燥した後、
それぞれ０．１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以
下の試験の試料溶液とした。
【００５４】１０％ウシ胎児血清を含むイーグルＭＥＭ
培地に、ヒト由来正常繊維芽細胞（ＣＣＤ−４５ＳＫ．
ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１５０６）を終濃度１×１０
4 ／mlとなるように接種した後、この培地を６ウェルプ
レート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに５ml入れ、Ｃ
Ｏ2 インキュベーター（５％ＣＯ2 、３７℃）内で２４
時間培養し、次いで、この培地を１％ウシ胎児血清を含
むイーグルＭＥＭ培地に交換し、各ウェルに上記試料溶
液（０．１ml）、あるいは対照として蒸留水０．１mlを
添加し、さらに５日間培養した。
培地に、ヒト由来正常繊維芽細胞（ＣＣＤ−４５ＳＫ．
ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１５０６）を終濃度１×１０
4 ／mlとなるように接種した後、この培地を６ウェルプ
レート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに５ml入れ、Ｃ
Ｏ2 インキュベーター（５％ＣＯ2 、３７℃）内で２４
時間培養し、次いで、この培地を１％ウシ胎児血清を含
むイーグルＭＥＭ培地に交換し、各ウェルに上記試料溶
液（０．１ml）、あるいは対照として蒸留水０．１mlを
添加し、さらに５日間培養した。
【００５５】培養後、培地を捨て、各ウェルに０．２５
％トリプシン液（コージンバイオ社製）１mlを入れ細胞
表面を洗った。次いで、トリプシン液を捨て、もう一度
新しいトリプシン液を１ml入れ、同様の操作をした後、
トリプシン液を捨て、プレートをＣＯ2 インキュベータ
ーに入れ、、２０分間保温し、次いで、各ウェルに生理
食塩水５mlを入れ、ゆるやかにピペッティングし、細胞
を懸濁した後、細胞濃度を測定した。
％トリプシン液（コージンバイオ社製）１mlを入れ細胞
表面を洗った。次いで、トリプシン液を捨て、もう一度
新しいトリプシン液を１ml入れ、同様の操作をした後、
トリプシン液を捨て、プレートをＣＯ2 インキュベータ
ーに入れ、、２０分間保温し、次いで、各ウェルに生理
食塩水５mlを入れ、ゆるやかにピペッティングし、細胞
を懸濁した後、細胞濃度を測定した。
【００５６】細胞賦活効果は、対照実験区の細胞濃度を
１００とした場合の試料溶液添加実験区の細胞濃度で表
わし、その結果を表５に示した。
１００とした場合の試料溶液添加実験区の細胞濃度で表
わし、その結果を表５に示した。
【００５７】
【表５】
【００５８】
【実施例７】化粧水の組成。
【００５９】実施例１で得られたロドトルラ属酵母発酵
液を用い、以下に示すような配合の化粧水を製造するこ
とができた。
液を用い、以下に示すような配合の化粧水を製造するこ
とができた。
【００６０】 （重量％） ・ロドトルラ属酵母の発酵液 １０ ・グリセリン ５ ・ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート １．５ ・香料 適量 ・防腐剤 適量 ・色素 適量 ・精製水 残部 また同様に、実施例１で得られたピキア属酵母の発酵液
を用いて、以下に示すような配合の化粧料を製造するこ
とができる。
を用いて、以下に示すような配合の化粧料を製造するこ
とができる。
【００６１】 （重量％） ・ピキア属酵母の発酵液 ５ ・グリセリン ５ ・ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート １．５ ・香料 適量 ・防腐剤 適量 ・色素 適量 ・精製水 残部
【００６２】
【発明の効果】上述のように本発明におけるロドトルラ
属に属する酵母の発酵液、ならびにピキア属に属する酵
母の発酵液は、チロシナーゼ活性抑制効果、メラニン生
成抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活効果および茶
色モルモットにおける沈着色素の淡色化効果を有してお
り、この酵母発酵液を配合した化粧料は優れた皮膚美白
効果を発揮する。
属に属する酵母の発酵液、ならびにピキア属に属する酵
母の発酵液は、チロシナーゼ活性抑制効果、メラニン生
成抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活効果および茶
色モルモットにおける沈着色素の淡色化効果を有してお
り、この酵母発酵液を配合した化粧料は優れた皮膚美白
効果を発揮する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:84） (Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (2)
- 【請求項１】 ロドトルラ（Rhodotorula ）属酵母の培
養液から酵母菌体を除去することによって得られる発酵
液を配合したことを特徴とする化粧料。 - 【請求項２】 ピキア（Pichia）属酵母の培養液から酵
母菌体を除去することによって得られる発酵液を配合し
たことを特徴とする化粧料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5173789A JPH0710735A (ja) | 1993-06-21 | 1993-06-21 | 化粧料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5173789A JPH0710735A (ja) | 1993-06-21 | 1993-06-21 | 化粧料 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0710735A true JPH0710735A (ja) | 1995-01-13 |
Family
ID=15967186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5173789A Pending JPH0710735A (ja) | 1993-06-21 | 1993-06-21 | 化粧料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0710735A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200024941A (ko) * | 2017-07-28 | 2020-03-09 | 로커스 아이피 컴퍼니 엘엘씨 | 피부, 모발 및 두피 건강을 개선하기 위한 효모 기반 마스크 |
| CN112057413A (zh) * | 2020-09-12 | 2020-12-11 | 梁其文 | 用于修复敏感肌肤的精华液及其制备方法 |
-
1993
- 1993-06-21 JP JP5173789A patent/JPH0710735A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200024941A (ko) * | 2017-07-28 | 2020-03-09 | 로커스 아이피 컴퍼니 엘엘씨 | 피부, 모발 및 두피 건강을 개선하기 위한 효모 기반 마스크 |
| JP2020528441A (ja) * | 2017-07-28 | 2020-09-24 | ローカス アイピー カンパニー、エルエルシー | 皮膚、毛髪及び頭皮の健康を改善する酵母ベースのマスク |
| JP2022191378A (ja) * | 2017-07-28 | 2022-12-27 | ローカス アイピー カンパニー、エルエルシー | 皮膚、毛髪及び頭皮の健康を改善する酵母ベースのマスク |
| US11759414B2 (en) | 2017-07-28 | 2023-09-19 | Locus Solutions Ipco, Llc | Yeast-based masks for improved skin, hair and scalp health |
| CN112057413A (zh) * | 2020-09-12 | 2020-12-11 | 梁其文 | 用于修复敏感肌肤的精华液及其制备方法 |
| CN112057413B (zh) * | 2020-09-12 | 2021-07-30 | 科丽思化妆品（上海）有限公司 | 用于修复敏感肌肤的精华液及其制备方法 |
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| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
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|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20040318 |
|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040413 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040817 |