JPH0696538B2 - 抗発癌剤 - Google Patents

抗発癌剤

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JPH0696538B2 JP60284329A JP28432985A JPH0696538B2 JP H0696538 B2 JPH0696538 B2 JP H0696538B2 JP 60284329 A JP60284329 A JP 60284329A JP 28432985 A JP28432985 A JP 28432985A JP H0696538 B2 JPH0696538 B2 JP H0696538B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、有効成分としてストレプトコッカス属に属す
る微生物、ビフィドバクテリウム属に属する微生物／又
はラクトバチルス属に属する微生物の死菌体を含有する
抗発癌剤に関する。
今日、日本人の死亡率の第１位は癌による死亡であり、
とくに消化器癌が多い。これら癌の治療・予防薬として
は、免疫賦活剤を初めとして幾つかが提案されている
が、死亡の減衰はなく増えつづけている現状である。こ
れらは薬理効果及び副作用等の点で必ずしも充分満足し
得るものとは言い難く、より効果的な薬剤の希求が一段
と高まっている。上記に鑑み、本発明者らは、鋭意研究
の結果、ストレプトコッカス属、ビフィドバクテリウム
属又はラクトバチルス属に属する微生物の死菌体が、消
化器癌の原因物質である強力発癌物質ジメチルニトロソ
アミンを効果的に低下せしめ得るものであり、且つ、そ
の起源が所謂腸内細菌であるこれら菌体は、経口では実
質的無毒性であることを知見し、本発明に到達したもの
である。
以下、本発明に係わる微生物の種類と菌学的性質、スク
リーニング方法、菌体調製法及び薬理作用等につき詳細
に分説する。
微生物 ストレプトコッカス属、ビフィドバクテリウム属又はラ
クトバチルス属に属する微生物であり、就中、ストレプ
トコッカス・フェシウム（Streptococcus faecium）、
同フェカーリス（faecalis）、同エビウム（avium）、
同ミティス（mitis）、同エクイナス（equinus）、同サ
リヴァリウス（salivarius）、同ボービス（bovis）、
同デュランス（durans）、ビフィドバクテリウム・アド
レセンティス（Bifidobacterium ado lescentis）、同
ブレベ（breve）、同ロンガム（longum）、同インファ
ンティス（infantis）、同ビフィダム（bifidum）、同
サーモフィラム（thermophilum）、同シュードロンガム
（pseudo-longum）、同コリネフォルム（coryneform
e）、同アステロイデス（asteroides）、同インディカ
ム（indicum）、同スイス（suis）、ラクトバチルス・
アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、同フ
ァーメンタム（fermentum）、同サリヴァリウス（saliv
arius）、同プランタルム（plantarum）、同カゼイ（ca
sei）、同ブレビス（brevis）、同ブルガリクス（bulga
ricus）、同ヘルベティクス（helveticus）等が使用さ
れ得る。
これらのうち特に有用な菌株を微工研受託番号と共に表
示すれば、下記の通りである。
菌学的性質 本発明微生物の一般的菌学的性質は、同一分類につき公
知各文献の示すものと同一の諸性質を有する。
すなわち、本発明微生物の一般的菌学的性質及び培養法
等に関しては、下記諸文献が参照される。
１）Bergey's Manual of Determinative Bacteriology,
8th ed,490-676（1974） ２）Int,J,Syst.Bact.16,114（1966） ３）Poupard,J.A.,Husain,I,and Norris,R.F.: Bacteriol.Rev.37,136-165（1973） ４）光岡知足、日本細菌誌24,261-280（1969） ここで前出菌株につきその主な菌学的性状を要約して第
２表乃至第４表に示す。
これらの微生物の培養は上記の通り常法によるものであ
るが、例えばストレプトコッカス属の微生物とラクトバ
チルス属の微生物はロゴサ（Rogosa）液体培地（注
１）、ビフィドバクテリウム属の微生物はGAM液体培地
（注２）にて、ストレプトコッカス属及び、ラクトバチ
ルス属は好気的又は嫌気的に、そしてビフィドバクテリ
ウム属は嫌気的に培養し、得られた培養液を遠心分離し
て、その菌体が採取される。
注１） ロゴサ液体培地の組成 蒸留水１中に トリプチケース 10g 酵母エキス 5g トリプトース 3g K2HPO4 3g KH2PO4 3g 酢酸ナトリウム＊ 1g クエン酸三アンモニウム 2g ツイーン80 1g グルコース 20g Ｌ−システイン塩酸塩 0.2g 塩類溶液** 5ml （pH7,121℃ 15分間加熱滅菌）* 酢酸ナトリウムはストレプトコッカスの場合は不要** 塩類溶液，蒸留水100mlに MgSO4・７H2O 11.5g FeSO4・７H2O 0.68g MnSO4・２H2O 2.4g 注２） GAM 液体培地の組成 GAMブイヨン 「日水製薬株式会社」コード05422 59.0g（11分） ペプトン 10.0g ダイズペプトン 3.0g プロテオースペプトン 10.0g 消化血清末 13.0g 酵母エキス 5.0g 肉エキス 2.2g 肝臓エキス末 1.2g ブドウ糖 3.0g リン酸二水素カリウム 2.5g 塩化ナトリウム 3.0g 溶性デンプン 5.0g Ｌーシステイン塩酸塩 0.3g チオグリコール酸ナトリウム 0.3g （pH7.3±0.1） 121℃ 15分間加熱滅菌 得られた菌体は生菌体または加熱処理等による死菌体と
していずれもそのまま薬剤として利用することができる
が超音波処理等により破壊菌体として利用に供されても
よい。したがって、本発明に於ける「死菌体」とはこれ
ら破壊菌体の全部又は一部分をも包含するものである。
スクリーニング方法 光岡（1971）：感染症学会雑誌，45,406に記載の方法に
準ずる。すなわち、上記文献に記載の通り、健康人の糞
便を下記の組成の希釈液で10倍に希釈し、ストレプトコ
ッカスはKMN agar（van der Wiel-Korstanje,J.A.A.,an
d K.C.Winkler;J.Med.Microbiol.8,491（1975）、ラク
トバチルスはLBS agar（BBL）、ビフィドバクテリウム
はMPN agar（Tanaka,R.et al.Appl.Environ.Microbiol.
40,866-869（1980）；これらの培地組成は下記の通り）
に塗沫、37℃ 48-120時間培養し、生成コロニーをカウ
ント、無作為にひろい、コロニー形、カタラーゼ活性、
グラム染色性、菌体の形状を観察し、生理的、生化学的
及び血清学的性状を検査して分類同定した。
希釈液 KH2PO4 4.5g Na2HPO4 6.0g L-システイン塩酸塩 0.5g ツィーン80 0.5g 寒天 1.0g 精製水 1,000ml KMN agarの組成 NaN3 0.2g トリプトース 15.0g 肉エキス 3.0g NaCl 5.0g スキムミルク 16.0g ニュートラルレッド 40mg カナマイシン 24mg 寒天 18g pH7.0、1000ml処方 LBS agarの組成 トリプトース 10g 肉エキス 5g KH2PO4 6g クエン酸三アンモニウム 2g グルコース 20g 無水酢酸ナトリウム 15g ツィーン80 1g MgSO4・７H2O 575mg MnSO4・２H2O 120mg FeSO4・７H2O 34mg 寒天 15g pH5.5、100ml処方 MPN agerの組成 ラクトース 2g (NH4)2SO4 0.5g K2HPO4 0.1g MgSO4・７H2O 10g FeSO4・７H2O 0.5g MnSO4・２H2O 0.4g 0.5ml NaCl 0.5g 蒸留水 250ml 0.1％ リサズリン 0.1ml ビオチン 0.01mg パントテン酸カルシウム 0.2mg リボフラビン 0.1mg アデニン 0.1mg グアニン 0.1mg キサンチン 0.1mg ウラシル 0.1mg ツィーン80 0.1g 10％ ピルビン酸 0.1ml ８％ Na2CO3 5.0ml ３％ L-システイン塩酸塩 1ml ナリジクス酸 10mg 1.6％ブロムクレゾールパープル 0.1ml 寒天 2g pH＝6.8、100ml処方 菌体調製 抗発癌乃至抗変異原剤等として使用の本発明微生物の死
菌体の各調製法の１例を示せば次の通りである。
1.死菌体（加熱処理菌体）調製例 前記各微生物等の菌株を前述のロゴサ液体培地（Lactob
acillusの場合）若しくはGAM液体培地（Bifidobacteriu
mの場合）51に接種し、37℃にて８時間前者は好気的又
は嫌気的に静置培養し、後者は嫌気培養して生菌数109/
mlの培養液をつくり、得られた培養液を12,000rpmの連
続遠心分離に付し菌体を集め、生理食塩水で洗浄した
後、生理食塩水に懸濁して菌液50ml（1011/ml）を得
る。これによって得られた菌体を生理食塩水で２回洗浄
した後、生理食塩水（0.85％NaCl水溶液）に懸濁して得
られる菌液50ml（1011/ml）を121℃で10分間加熱し、死
菌体懸濁液を得る。
薬理作用 1.薬理効果 後記実験例に示す通り、本発明の抗発癌剤は、ジメチル
ニトロソアミンの体内レベルを極めて効果的に低下せし
めるものであり、したがって、消化器癌（とくに胃癌、
肝臓癌）を初めとする癌の予防薬として有用なものと言
い得る。本発明剤は又、経口、静注等の手段で適用され
得、その用量は通常0.1mg〜10g/kg体重、より好ましく
は1mg〜1g/kg体重程度であり、その剤型としては、生理
食塩水等への懸濁液剤、凍結乾燥等による粉末剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤等々、通常の剤型を適当なキャリ
ヤ、増量剤、希釈剤等と共に適宜選択使用し得る。
2.急性毒性 後記実験例に示す通り、本発明剤のLD50値はいずれの菌
にあっても50mg/マウス（腹腔内投与）以上である。
又、経口投与の場合は実質的に無毒性である。
実験例１ S.faeciumAD1008、S.faecalisAD9005、S.aviumAD2007を
前記死菌体調製例に従って、加熱処理菌体懸濁液を得、
これを死菌体試料（菌体湿重量8mg/ml）とした。これら
の試料にジメチルニトロソアミン80μｇを添加し、37℃
にて１時間反応させた後、遠心分離し、その上清につ
き、紫外部吸収（225nm）を測定した。シメチルニトロ
ソアミン80μｇ添加のみの紫外部吸収を100として、死
菌体試料添加による減少量、及び減少率（％）を計算し
た。その結果を第５表に示す。
実験例２ B.ado lescentisAD0052、B.breveAD0055、B.longumAD00
56の前記死菌体調製例に従って得た死菌体懸濁液につい
て、前記実施例１と同様の方法でジメチルニトロソアミ
ン減少量及び減少率（％）を測定した。
その結果を第６表に示す。
実験例３ L.acidophilusAD0006、L.fermentumAD0007、L.salivari
usAD0009、L.brevisAD0011の前記死菌体調製例に従って
得た加熱処理菌体懸濁液について、前記実施例１と同様
な方法でジメチルニトロソアミン減少量及び減少率
（％）を測定した。
その結果を第７表に示す。
実験例４ ICR系マウス（雄６週令、平均体重31.0±0.5g）を使用
し、前記死菌体調製例に従って得られた死菌体をマウス
当り10mg、1mg、0.1mgの３段階の死菌体（各群10匹）を
含む生理食塩水懸濁液0.5mlを腹腔内投与し、14日間マ
ウスの生死を観察した。
Behrens-krber法に従って算出したLD50値は、いずれ
の菌にあっても50mg/マウス以上（腹腔内投与）であ
り、且つ経口投与ではいずれの場合でも実質的に無毒性
であった。
製剤例 1.前記死菌体調製例に従って得られたB.adolescentis A
D0052死菌体の凍結乾燥物50mg（菌体数５×1010個に相
当）を精製でんぷん末950mgと均一に混合、打錠して経
口投与用錠剤とした。この錠剤は体重50kgの成人におけ
る用量109個/kgに相当する。
2.上記凍結乾燥物500mgを精製でんぷん末500mgと混合、
打錠したものは、同様に用量1010個/kgに相当する。
このように、本発明剤は前記標準用量等に基づいて、菌
体と薬学的に許容され得る担体とを混合して所定の活性
を有する所望の剤型とすることができる。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ストレプトコッカス属、ビフィドバクテリ
    ウム属、及びラクトバチルス属のいずれかに属する微生
    物の死菌体を有効成分として含有することを特徴とする
    抗発癌剤。
  2. 【請求項２】前記微生物が、ストレプトコッカス・フェ
    シウム、同フェカーリス、同エビウム、同ミティス、同
    サリヴァリウス、同ボービス、同エクイナス、ビフィド
    バクテリウム・アドレセンティス、同ブレベ、同ロンガ
    ム、ラクトバチルス・アシドフィルス、同プランタル
    ム、同ブレビス、同カゼイ、同ファーメンタム、同サリ
    ヴァリウス、同ヘルベティクスより成る群から選択され
    る１種又は２種以上であることを更に特徴とする特許請
    求の範囲第（１）項に記載の抗発癌剤。
  3. 【請求項３】前記微生物がストレプトコッカス・フェシ
    ウムAD1008（FERM P-8569）、同フェカーリスAD9005（F
    ERM P-8572）、同エビウムAD2007（FERM P-8570）、ビ
    フィドバクテリウム・ブレベAD0055（FERM P-8573）、
    同アドレセンティスAD0052（FERM P-8574）及び／又は
    ラクトバチルス・アシドフィルスAD0006（FERM P-856
    3）、同サリヴァリウスAD0009（FERM P-8566）であるこ
    とを、更に特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載
    の抗発癌剤。
JP60284329A 1985-12-19 1985-12-19 抗発癌剤 Expired - Lifetime JPH0696538B2 (ja)

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