JPH0694721A - ジゴキシゲニン試薬を用いた核酸の光化学的標識 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ジゴキシゲニン誘導体及びスペーサーを介し
て結合したフロクマリン誘導体を含む光化学的標識試
薬。 【効果】 標識試薬は遺伝子診断学において有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】遺伝子プローブ診断法は、ＤＮＡ／ＲＮＡ
配列の配列特異的検出方法である。これは、検出するべ
きＤＮＡ／ＲＮＡの相補的配列領域を有する遺伝子プロ
ーブ配列のハイブリッド形成に基づいている（Ｊ．Ａ．
Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｌ．Ｊ．Ｋｒｉｃｋａ，Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６９，１−
２５(１９８８)；Ｕ．Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ，Ｒ．Ｋａｉ
ｓｅｒ，Ｃ．Ｔ．Ｃａｓｋｅｙ，Ｌ．Ｈｏｏｄ，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４２，２２９(１９８８)）。

【０００２】遺伝子プローブ診断学により、感染症及び
遺伝的欠陥の検出が可能になる。遺伝子プローブ診断学
を広く適用するための前提条件は、検出の適した感度、
実行の単純さ及び放射性の回避である。

【０００３】遺伝子プローブ診断法の１つの変法は、検
出するべきＤＮＡ／ＲＮＡの直接光化学的標識を用いて
行われ、その後相補的核酸配列を有する遺伝子プローブ
へのハイブリッド形成が起こる（Ｎ．Ｄａｔｔａｇｕｐ
ｔａ，Ｐ．Ｍ．Ｍ．Ｒａｅ，Ｅ．Ｄ．Ｈｕｇｕｅｎｅ
ｌ，Ｅ．Ｃａｒｌｓｏｎ，Ａ．Ｌｙｇａ，Ｊ．Ｓ．Ｓｈ
ａｐｉｒｏ，Ｊ．Ｐ．Ａｌｂａｒｅｌｌａ，Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １７７，８５
（１９８９）；Ｊ．Ｐ．Ａｌｂａｒｅｌｌａ，Ｒ．Ｌ．
Ｍｉｎｅｇａｒ，Ｗ．Ｌ．Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｄ
ａｔｔａｇｐｔａ，Ｅ．Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７，４２９３
（１９８９））。

【０００４】適したスペーサー分子を用いてビオチンに
結合するフロクマリンは、核酸の光化学的ビオチニル化
に非常に適していることが示された。相補的核酸配列を
有する遺伝子プローブへのハイブリッド形成及び分離段
階の後、例えば抗ビオチン抗体又はアビジンあるいはス
トレプタビジンとアルカリホスファターゼの複合体の添
加により検出を行う。検出のために、追加の段階でアル
カリホスファターゼにより誘導される発色反応を行う
（Ｊ．Ｊ．Ｌｅａｒｙ，Ｄ．Ｊ．Ｂｒｉｇａｔｉ，Ｄ．
Ｃ．Ｗａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８０，４０４５−４０４９（１９８
３））。

【０００５】ビオチンを用いた検出系の１つの欠点は、
生物系にビオチンが広く分布していることである。この
欠点は、例えばビオチンの代わりにジゴキシゲニンを用
いることにより避けられる。この場合検出反応はジゴキ
シゲニン抗体を用いて行う。

【０００６】ジゴキシゲニンを用いた核酸の標識のため
の現在の方法は酵素的又は光化学的に行われる（Ｇ．
Ｇ．Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｔ．Ｗａｌｔｅｒ，Ｒ．Ｓｅｉｂ
ｌ，Ｃ．Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９２，２２２−２３１（１９
９１）；Ｃ．Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ｈ．−Ｊ．Ｈｏｅｌｔｋ
ｅ，Ｒ．Ｓｅｉｂｌ，Ｊ．Ｂｕｒｇ，Ｋ．Ｍｕｅｈｌｅ
ｇｇｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌ
ｅｒ ３７１，９１７−９２７（１９９０））。Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ（ＥＰ−３２４ ４７４−Ａ）による光
化学的ジゴキシゲニン試薬を用いた光化学的標識の場
合、検出するべき核酸の不可逆的変性が観察された。

【０００７】驚くべきことに、適したスペーサーを用い
てフロクマリンに結合したジゴキシゲニン試薬を用いた
光化学的反応では、核酸の変性が観察されなかった。

【０００８】本発明において、適当なスペーサーを用い
てフロクマリンに結合したジゴキシゲニン誘導体の合成
を開示し、核酸の標識のためのその利用を研究する。

【０００９】本発明に従い、一般式：

【００１０】

【化２】Ｄｉｇ−Ｓ−Ｆｕ 式中、Ｄｉｇはハプテンとしてのジゴキシゲニン誘導体
であり、Ｓはスペーサー分子であり、Ｆｕは光化学的結
合可能な構造としてのフロクマリン誘導体である、の標
識試薬を合成する。

【００１１】ジゴキシゲニン誘導体（Ｄｉｇ）は化学的
に修飾されたステロイドの誘導体であり、Ｃ−３ヒドロ
キシル基が化学的結合可能置換基により修飾されてい
る。これはカルボキシル、チオ、アミノ又はヒドロキシ
ル基、あるいはそれらの活性化形態であることができ
る。

【００１２】適したフロクマリン及びスペーサーはＥＰ
１８７ ３３２に記載されている。

【００１３】スペーサーはポリアルキルアミン、ポリエ
チレングリコール又はそれらの組み合わせである。

【００１４】ポリアルキルアミンは下記一般式：

【００１５】

【化３】

【００１６】を有する。上記式中、ＲはＨ、Ｃ₁−Ｃ₇−
アルキル、アリール（例えばフェニル、ナフチル又はア
ントラニル）、ヒドロキシル又はＣ₁−Ｃ₇−アルコキシ
であり、ｘは２−７の数であり、ｙは３−１０の数であ
り、Ｒは上記で可能な変数において異なっていることが
でき、すなわちＲはスペーサー中の−（ＣＨ₂）_x−Ｎ−
Ｒ単位の各繰り返しに関して同一である必要はない。ｘ
の場合も同様であり、すなわちｘはスペーサー中の−
（ＣＨ₂）_x−単位の各繰り返しに関して同一である必要
はない。

【００１７】Ｒは互いに独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキ
ル（例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピ
ル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル）であ
り、ｘは２、３、４又は５であり、ｙは３、４、５又は
６であることが好ましい。

【００１８】特に好ましいのは、式

【００１９】

【化４】 のＮ⁴，Ｎ⁹−ジメチルスペルミン誘導体である。

【００２０】ポリエチレングリコールは下記一般式、

【００２１】

【化５】

【００２２】を有する。上記式中ｘは２−７の数であ
り、ｙは３−１０の数である。

【００２３】好ましいのはｘが２、３、４又は５であ
り、ｙが３、４、５又は６のポリエチレングリコールで
ある。特に好ましいのはｘが２であり、ｙが４、５又は
６のポリエチレングリコールである。

【００２４】アミン／グリコール構造が組み合わされた
スペーサー分子下記一般式

【００２５】

【化６】

【００２６】を有する。上記式中Ｚ¹、Ｚ²及びＺ³は互
いに独立してＯ又はＮＲであり、ＲはＨ、Ｃ₁−Ｃ₇−ア
ルキル、アリール（例えばフェニル、ナフチル又はアン
トラニル）、ヒドロキシル又はＣ₁−Ｃ₇−アルコキシで
あり、ｘは２−７の数であり、ｙは３−１０の数であ
る。

【００２７】好ましいのはＺ²がＯであり、Ｚ¹及びＺ³
がＮＲであり、ＲがＨ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル（例えばメ
チル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチ
ル、ｉ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル）であり、ｘが２、
３、４又は５であり、ｙが３、４、５又は６であるスペ
ーサー構造である。

【００２８】特に好ましいのは、Ｚ²がＯであり、Ｚ¹及
びＺ³がＮＲであり、ＲがＨ、メチル、エチルであり、
ｘが２であり、ｙが４の構造である。

【００２９】光化学的結合可能な適した構造は特にフロ
クマリン、例えばアンゲリシン（イソプソラレン）又は
プソラレン及びそれらの誘導体であり、これらは核酸と
光化学的に反応する。

【００３０】アンゲリシン誘導体は下記一般式

【００３１】

【化７】

【００３２】を有する。上記式中Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は互
いに独立してＨ又はＣ₁−Ｃ₇−アルキルであり、Ｒ₄は
Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₇−アルキル又はヒドロキシルを有する低級
アルキル、Ｃ₁−Ｃ₇−アルコキシ、アミノ、ハロあるい
はＮ−フタルイミド置換基である。

【００３３】特に好ましいのは以下のＲ₁−Ｒ₄の群を含
むアンゲリシン誘導体である。

【００３４】

【表１】

【００３５】異なるＲを有する他の化合物も文献から既
知の方法により合成することができる。

【００３６】適したプソラレンは下記一般式：

【００３７】

【化８】

【００３８】を有する。上記式中Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₆は互
いに独立してＨ又はＣ₁−Ｃ₇−アルキルであり、Ｒ₄は
Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₇−アルキル又はヒドロキシルを有するＣ₁
−Ｃ₇−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₇−アルコキシ、アミノ、ハ
ロあるいはＮ−フタルイミド置換基であり、Ｒ₂及びＲ₅
は互いに独立してＨ、ヒドロキシル、カルボキシル、カ
ルボ−Ｃ₁−Ｃ₇−アルコキシ又はＣ₁−Ｃ₇−アルコキシ
である。

【００３９】アンゲリシン誘導体の方がプソラレンと比
較して一付加生成の故に有利である。

【００４０】ジゴキシゲニン、スペーサー及びフロクマ
リンの結合の順序は任意である。従って中でも最初にジ
ゴキシゲニンＤｉｇをスペーサーＳと結合し、続いて生
成物をフロクマリンＦｕと反応させることができる。逆
にＦｕ−Ｓを最初に構築し、その後Ｄｉｇと反応させる
ことができる。

【００４１】部分の結合はそれ自体既知の方法で行う。

【００４２】

【実施例】実施例１ アミノ（ヘキサエチレングリコール）アンゲリシン（ア
ミノ−ＰＥＧ−アンゲリシン ３）の製造

【００４３】

【化９】

【００４４】４．８７ｇ（２０ミリモル）の４−アミノ
メチル−４，５’−ジメチルアンゲリシンを２５ｍｌの
ＤＭＦに溶解し、室温で３．２４ｇ（２０ミリモル）の
カルボニルジイミダゾールと反応させる。窒素下で６時
間撹拌した後、完全な反応（ＴＬＣにより）が観察され
た。溶液を、４０ｍｌのＤＭＦ中の１６．８５ｇ（６０
ミリモル）の１，１７−ジアミノ−３，６，９，１２，
１５−ペンタオキサヘプタデカンの溶液に８０℃にてゆ
っくり滴下し、混合物を７０℃でさらに１２時間撹拌す
る。冷却後、溶液を真空中で濃縮し、シリカゲル上のク
ロマトグラフィーにかける（溶離剤：クロロホルム／メ
タノール／アンモニア ９０：１０：１、Ｒ_f＝０．２
８）。７．１ｇ（理論値の６５％）の微黄色油が得られ
る。

【００４５】実施例２ Ｎ¹−（アンゲリシンアミノ）−Ｎ⁴，Ｎ⁹−ジメチルス
ペルミン（２）の製造

【００４６】

【化１０】

【００４７】４．８７ｇ（２０ミリモル）の４−アミノ
メチル−４，５’−ジメチルアンゲリシンを実施例１と
類似の方法でカルボニルジイミダゾールを用いて活性化
する。得られた溶液を、実施例１と同様にして４０ｍｌ
のＤＭＦ中の１３．８ｇ（６０ミリモル）のＮ⁴，Ｎ⁹−
ジメチルスペルミンの溶液に滴下する。冷却後、溶液を
真空中で濃縮し、残留物をシリカゲル上のクロマトグラ
フィーにかける（溶離剤：クロロホルム／メタノール／
アンモニア ３０：５：１１、Ｒ_f＝０．１１）。７．
１ｇ（理論値の７１％）の黄色油が得られる。

【００４８】実施例３ ジゴキシゲニン−ＰＥＧ−アンゲリシン（Ｄｉｇ−Ｐ
Ａ、３）の製造

【００４９】

【化１１】

【００５０】１３．７ｍｇ（０．０３ミリモル）のアミ
ノ−ＰＥＧ−アンゲリシン １ を２ｍｌのクロロホル
ムに溶解する（分光分析のため）。

【００５１】２ｍｌのクロロホルム中の１８．９ｍｇ
（０．０３ミリモル）のＮ−ヒドロキシコハク酸イミド
ジゴキシゲニン−３−Ｏ−メチルカルボニル−ε−ア
ミノカプロエート（Ｄｉｇ−ＮＨＳ）の溶液を滴下す
る。室温で２４時間撹拌した後、反応が完了する（ＴＬ
Ｃにより）。溶液を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲ
ル上のクロマトグラフィーにかける（溶離剤：クロロホ
ルム／メタノール／アンモニア ９０：１０：１、Ｒ_f
＝０．４５）。２１ｍｇ（理論値の７７％）の、融点が
６３−６５℃の微黄色固体が得られる。

【００５２】実施例４ ジゴキシゲニン−スペルミン−アンゲリシン（Ｄｉｇ−
ＳｐＡ、４）の製造

【００５３】

【化１２】

【００５４】１５ｍｇ（０．０３ミリモル）の実施例２
に記載の化合物２を、実施例３と同様にして１９．８ｍ
ｇ（０．０３ミリモル）のＮ−ヒドロキシ−コハク酸イ
ミドジゴキシゲニン−３−Ｏ−メチルカルボニル−ε−
アミノカプロエート（Ｄｉｇ−ＮＨＳ）と反応させる。

【００５５】仕上げ、シリカゲル上のクロマトグラフィ
ー（溶離剤：クロロホルム／メタノール／アンモニア
３０：５：１１、Ｒ_f＝０．２５）にかけた後、２４ｍ
ｇ（理論値の７７％）の、融点が１０６−１０９℃の弱
黄色の固体が得られる。

【００５６】実施例５ ＤｉｇＰＡを用いたヘアピンオリゴヌクレオチドの光反
応 ５０μｇのヘアピンオリゴヌクレオチドを１００μｌの
トリス−ＨＣｌ緩衝液に取り上げる。溶液を５０℃の水
浴中に１５分間放置する。ゆっくり室温に冷却するため
に試料を水浴から取り出す。続いてさらに４００μｌの
水を加える。

【００５７】光反応のために、１５μｇのハイブリッド
形成したヘアピンオリゴヌクレオチドに２０倍モル過剰
のＤｉｇＰＡを加える。続いて氷浴中のＥｐｐｅｎｄｏ
ｒｆ管にて３６６ｎｍ−３１２ｎｍのＵＶランプ下で溶
液を照明する。光反応の後にＨＰＬＣを行う。１５分以
内に反応が完了した。

【００５８】実施例６ ＤｉｇＰＡを用いた光化学的標識 ＤｉｇＰＡを用いた光化学的標識のために、５０μｌの
１Ｍナトリウムテトラボレート緩衝液ｐＨ８．３及び５
０μｌのＤｉｇＰＡ（２μｇ／μｌ）を、２０μｌのＴ
Ｅ緩衝液中の２−５μｇのＤＮＡに加え、２回蒸留Ｈ₂
Ｏで５００μｌとした。その後混合物を３１２ｎｍにて
ＵＶトランスイルミネーター（ｔｒａｎｓ−ｉｌｌｕｍ
ｉｎａｔｏｒ）で１０分間照射し、この過程の間試料を
氷上に保った。

【００５９】続いて光化学的標識ＤＮＡを、１／１０体
積の３Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５．８及び１体積のイソプ
ロパノールを用いて室温にて沈澱させ、５分間放置し
た。その後ＤＮＡをＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心機中で１
０，０００ｒｐｍにて遠心し、上澄み液をデカンテーシ
ョンし、ＤＮＡ沈澱を７０％のエタノールで洗浄した。
試料が乾燥した後、光化学的標識ＤＮＡをＴＥ中に取り
上げた。その後ジゴキシゲニンを用いたＤＮＡの光化学
的標識を、アガロースゲル電気泳動及びジゴキシゲニン
抗体複合体を用いた点染検定により調べた。

【００６０】ゲル電気泳動では、光化学的標識ＤＮＡは
非標識ＤＮＡよりゆっくり泳動し、それは光化学的標識
ＤＮＡバンドの場合に原点に向かって少しシフトするこ
とにより明らかである。この方法では、ゲルのウェル中
で変性ＤＮＡは観察されない。

【００６１】ジゴキシゲニンを用いた標識を、Ｂｏｅｈ
ｒｉｎｇｅｒ，Ｍａｎｎｈｅｉｍからのキットを用いて
免疫学的にも調べた。この目的の場合、光化学的標識Ｄ
ＮＡを種々の濃度でニトロセルロース膜に適用し、真空
中８０℃にて固定した。続いて膜を緩衝液１（１００ｍ
Ｍのトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ ｐＨ７．
５）中で１分間洗浄した。その後フィルターを１００ｍ
ｌの緩衝液２（緩衝液１中０．５％の阻害剤）と共に３
０分間培養した。次にそれを緩衝液１で再度洗浄した。
抗体複合体（アルカリホスファターゼにカップリングし
た抗−ジゴキシゲニン抗体）を緩衝液１中で１：５，０
００に希釈して１５０ｍＵ／ｍｌとし、フィルターを２
０ｍｌの希釈抗体溶液と共に３０分間培養した。その後
１００ｍｌの緩衝液１で２ｘ１５分間洗浄することによ
り非−結合抗体を除去した。続いて２０ｍｌの緩衝液３
（１００ｍＭのトリス／ＨＣｌ、１００ｍＭのＮａＣ
ｌ、５０ｍＭのＭｇＣｌ₂ ｐＨ９．５）を用いて室温
で２分間膜を平衡化した。フィルターを１０ｍｌの染料
溶液（１０ｍｌの緩衝液３中の４５μｌのニトロブルー
テトラゾリウム溶液及び３５μｌのブロモクロロインド
イルホスフェート）と共にブラスチックの袋中で暗所に
て培養した。色点が発色した後、緩衝液４（１０ｍＭの
トリス／ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ８）を用いて
膜を５分間洗浄し、発色反応を止めた。

【００６２】実施例７ 光化学的ジゴキシゲニンを用いた光化学的標識 光化学的ジゴキシゲニンの場合、親水性スペーサーを用
いてジコキシゲニンにカップリングしたアジドフェニル
基が、水銀蒸気照明(３５０−７００nm)を与えると例え
ばタンパク質及び核酸などの多くの化合物と非特異的に
反応する。

【００６３】Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒの方法に従って核酸
を光化学的ジゴキシゲニンで標識した。１０μｇの光化
学的ジゴキシゲニン溶液（ジメチルホルムアミド中１０
ｍｇ／ｍｌ）を１０μｇのＤＮＡに加え、溶液を２回蒸
留Ｈ₂Ｏを用いて４０μｌとした。開けた管を氷−水中
でＰｈｉｌｉｐｓ ＨＰＬＲ ４００Ｗランプの下に１
０ｃｍ離して置き、１５分間照射した。６０μｌのトリ
ス／ＨＣｌ、１００ミリモル／ｌ、ｐＨ９、ＥＤＴＡ、
１ミリモル／ｌを加え、その後１５μｌのＮａＣｌ、５
モル／ｌを加えた。その後溶液を１００μｌの２−ブタ
ノールで２回抽出し、１０μｌのＬｉＣｌ、４モル／
ｌ、及び１００μｌの予備冷却エタノールを用いてＤＮ
Ａを沈澱させた。−７０℃にて４０分後、混合物を１
２，０００ｇで遠心し、７０％の冷エタノールでペレッ
トを洗浄し、真空中で乾燥し、４０μｌのトリス／ＨＣ
ｌ、１０ミリモル／ｌ、ＥＤＴＡ、１ミリモル／ｌ ｐ
Ｈ８中に溶解した。

【００６４】光化学的標識を、ゲル電気泳動及びシゴキ
シゲニン抗体複合体を用いた免疫学的方法の両方により
調べた。

【００６５】アガロースゲル電気泳動の場合、光化学的
ジゴキシゲニン化ＤＮＡの大部分がゲルウェル中で変性
した形態で存在することが観察された。対照的に実施例
６に記載のＤｉｇＰＡ法では、光化学的標識ＤＮＡのバ
ンドが１つだけ見られ、ゲルウェル中に変性ＤＮＡは観
察されなかった。

【００６６】光化学的ジゴキシゲニン化の免疫学的実験
を実施例６と同様にして行った。

【００６７】固定された光化学的ジゴキシゲニン化ＤＮ
Ａを用いた点染検定では、標識効率が実施例６に記載の
非常に穏やかなＤｉｇＰＡ法の場合より明らかに低いこ
とがさらに観察された。

【００６８】本発明の主たる特徴及び態様は以下の通り
である。

【００６９】１．一般式

【００７０】

【化１３】Ｄｉｇ−Ｓ−Ｆｕ ［式中、Ｄｉｇはジゴキシゲニン誘導体であり、Ｓはス
ペーサー分子であり、Ｆｕはフロクマリン誘導体であ
る］の標識試薬。

【００７１】２．ジゴキシゲニン誘導体（Ｄｉｇ）が、
Ｃ−３ヒドロキシル基が化学的結合可能置換基を用いて
修飾されたステロイドの化学的修飾誘導体である上記１
項記載の標識試薬。

【００７２】３．スペーサーがポリアルキルアミン、ポ
リエチレングリコール又はそれらの組み合わせである上
記１項記載の標識試薬。

【００７３】４．Ｆｕが下記一般式

【００７４】

【化１４】

【００７５】［式中Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は互いに独立して
Ｈ又はＣ₁−Ｃ₇−アルキルであり、Ｒ₄はＨ、Ｃ₁−Ｃ₇
−アルキル又はヒドロキシルを有する低級アルキル、Ｃ
₁−Ｃ₇−アルコキシ、アミノ、ハロ又はＮ−フタルイミ
ド置換基である］のアンゲリシン誘導体である上記１項
記載の標識試薬。

【００７６】５．Ｆｕが下記一般式

【００７７】

【化１５】

【００７８】［式中Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₅は互いに独立して
Ｈ又はＣ₁−Ｃ₇−アルキルであり、Ｒ₄はＨ、Ｃ₁−Ｃ₇
−アルキル又はヒドロキシルを有するＣ₁−Ｃ₇−アルキ
ル、Ｃ₁−Ｃ₇−アルコキシ、アミノ、ハロ又はＮ−フタ
ルイミド置換基であり、Ｒ₂及びＲ₅は互いに独立して
Ｈ、ヒドロキシル、カルボニル、カルボ−Ｃ₁−Ｃ₇−ア
ルコキシ又はＣ₁−Ｃ₇−アルコキシである］のスポラレ
ンである上記１項記載の標識試薬。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ボルフガング・シユプリンガー ドイツ連邦共和国デー5600ブツペルタール １・カテルンベルガーシユルベーク31

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】Ｄｉｇ−Ｓ−Ｆｕ ［式中、Ｄｉｇはジゴキシゲニン誘導体であり、Ｓはス
   ペーサー分子であり、Ｆｕはフロクマリン誘導体であ
   る］の標識試薬。