JPH0672885A - トポイソメラーゼ阻害剤 - Google Patents
トポイソメラーゼ阻害剤Info
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- JPH0672885A JPH0672885A JP4247169A JP24716992A JPH0672885A JP H0672885 A JPH0672885 A JP H0672885A JP 4247169 A JP4247169 A JP 4247169A JP 24716992 A JP24716992 A JP 24716992A JP H0672885 A JPH0672885 A JP H0672885A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 例えば、癌細胞に投与することにより、癌細
胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイソメラーゼの
作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌剤として用い
ることができるトポイソメラーゼ阻害剤を得る。 【構成】 タンニン化合物、特に、次の化１の化学構造
式で表わされるペダンキュラギン(pedunculagin)が有効
成分として含有されたもの。 【化１】
胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイソメラーゼの
作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌剤として用い
ることができるトポイソメラーゼ阻害剤を得る。 【構成】 タンニン化合物、特に、次の化１の化学構造
式で表わされるペダンキュラギン(pedunculagin)が有効
成分として含有されたもの。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、超らせんＤＮＡ構造を
緩和する酵素であるトポイソメラーゼを阻害するトポイ
ソメラーゼ阻害剤に関するものである。
緩和する酵素であるトポイソメラーゼを阻害するトポイ
ソメラーゼ阻害剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】悪性腫瘍、即ち広義の癌の薬物療法は近
年著しい進歩を遂げ、将来に明るい見通しを与えてい
る。しかし、未だ画期的な制癌薬の出現は見られず、治
療法の主流とされている外科手術や放射線療法に対する
補助的又は姑息的手段としか考えられていないのが現状
である。
年著しい進歩を遂げ、将来に明るい見通しを与えてい
る。しかし、未だ画期的な制癌薬の出現は見られず、治
療法の主流とされている外科手術や放射線療法に対する
補助的又は姑息的手段としか考えられていないのが現状
である。
【０００３】この意味において、三大成人病の一つとし
て注目される癌に用いる薬物の理想は担癌生体に無害
で、癌細胞のみを特異的に攻撃又は抑制できることで、
癌の本態究明とあいまって、今後の大いなる発展が望ま
れている。
て注目される癌に用いる薬物の理想は担癌生体に無害
で、癌細胞のみを特異的に攻撃又は抑制できることで、
癌の本態究明とあいまって、今後の大いなる発展が望ま
れている。
【０００４】ところで、制癌剤とは、癌細胞の最も一般
的な特徴である正常細胞に比べて急速な増殖をすること
を利用して増殖性の細胞に対し毒性をもつ薬剤であって
癌細胞の発育・増殖を抑制するもの（所謂「細胞分裂阻
害剤」）、特定の癌の栄養要求性の特徴を利用するも
の、免疫賦活作用をもつもの等がある。この制癌剤は作
用機序から次のように分けられる。
的な特徴である正常細胞に比べて急速な増殖をすること
を利用して増殖性の細胞に対し毒性をもつ薬剤であって
癌細胞の発育・増殖を抑制するもの（所謂「細胞分裂阻
害剤」）、特定の癌の栄養要求性の特徴を利用するも
の、免疫賦活作用をもつもの等がある。この制癌剤は作
用機序から次のように分けられる。
【０００５】 １．細胞毒，核分裂毒（放射線様作用物質） アルキル化剤 ２．代謝拮抗剤 (1) 核酸代謝拮抗物質 (2) 葉酸代謝拮抗物質 (3) その他の代謝拮抗物質 ３．抗生物質 ４．ホルモン剤 ５．放射性同位元素 ６．その他 (1) 菌体成分 (2) インターフェロン類
【０００６】一方、二重鎖ＤＮＡに切断（ニックあるい
は両鎖切断）を導入することにより超らせん構造を緩和
する酵素としてトポイソメラーゼＩ（スウィベラーゼ）
がある。これはＤＮＡ複製において複製フォークの進行
に伴って生ずる正の超らせん構造を緩和することによ
り、複製フォークの進行を促進する酵素である。
は両鎖切断）を導入することにより超らせん構造を緩和
する酵素としてトポイソメラーゼＩ（スウィベラーゼ）
がある。これはＤＮＡ複製において複製フォークの進行
に伴って生ずる正の超らせん構造を緩和することによ
り、複製フォークの進行を促進する酵素である。
【０００７】この酵素の反応機構は、ＤＮＡにニックを
導入し、ホスホジエステル結合を切断し、そのエネルギ
ーをタンパク質とＤＮＡ末端の一方との共有結合に保存
し、再び他方の一重鎖ＤＮＡ末端とのホスホジエステル
結合の形成に用いることとされている。また、この反応
サイクルを繰返すことにより超らせんを一つづつ緩和す
るものである。
導入し、ホスホジエステル結合を切断し、そのエネルギ
ーをタンパク質とＤＮＡ末端の一方との共有結合に保存
し、再び他方の一重鎖ＤＮＡ末端とのホスホジエステル
結合の形成に用いることとされている。また、この反応
サイクルを繰返すことにより超らせんを一つづつ緩和す
るものである。
【０００８】同様な酵素として、トポイソメラーゼIIが
あるが、これはＡＴＰの存在下あるいは非存在下におい
て超らせん構造を緩和する活性をもつが、その反応機構
はトポイソメラーゼＩ型と異なり、二重鎖ＤＮＡの両端
を切断して再結合するもので超らせんを二つずつ緩和す
ることができる。
あるが、これはＡＴＰの存在下あるいは非存在下におい
て超らせん構造を緩和する活性をもつが、その反応機構
はトポイソメラーゼＩ型と異なり、二重鎖ＤＮＡの両端
を切断して再結合するもので超らせんを二つずつ緩和す
ることができる。
【０００９】大腸菌トポイソメラーゼＩの構造遺伝子ｔ
ｏｐＡはｓｕｐＸと同一である。これらスウィベラーゼ
の役割は複製フォークの進行を促進する他に、複製終了
後に生じた２本の娘ＤＮＡ分子の分離あるいは転写の際
にも機能を果たしている可能性がある。
ｏｐＡはｓｕｐＸと同一である。これらスウィベラーゼ
の役割は複製フォークの進行を促進する他に、複製終了
後に生じた２本の娘ＤＮＡ分子の分離あるいは転写の際
にも機能を果たしている可能性がある。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】前述のような特性を有
するトポイソメラーゼの活性を阻害することにより、癌
細胞の発育・増殖を抑制する有効な制癌剤が得られる。
するトポイソメラーゼの活性を阻害することにより、癌
細胞の発育・増殖を抑制する有効な制癌剤が得られる。
【００１１】本発明は、例えば、癌細胞に投与すること
により、癌細胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイ
ソメラーゼの作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌
剤として用いることができるトポイソメラーゼ阻害剤を
得ることを目的とする。
により、癌細胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイ
ソメラーゼの作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌
剤として用いることができるトポイソメラーゼ阻害剤を
得ることを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本請求項１に記載の発明
に係るトポイソメラーゼ阻害剤では、タンニン化合物が
有効成分として含有されたものである。
に係るトポイソメラーゼ阻害剤では、タンニン化合物が
有効成分として含有されたものである。
【００１３】本請求項２に記載の発明に係るトポイソメ
ラーゼ阻害剤では、タンニン含有植物から抽出されたタ
ンニン化合物が有効成分として含有されたものである。
ラーゼ阻害剤では、タンニン含有植物から抽出されたタ
ンニン化合物が有効成分として含有されたものである。
【００１４】本請求項３に記載の発明に係るトポイソメ
ラーゼ阻害活性では、ツバキ(Camellia japonica) から
抽出されたタンニン化合物が有効成分として含有された
ものである。
ラーゼ阻害活性では、ツバキ(Camellia japonica) から
抽出されたタンニン化合物が有効成分として含有された
ものである。
【００１５】本請求項４に記載の発明に係るトポイソメ
ラーゼ阻害活性では、次の化２の化学構造式で表わされ
るペダンキュラギン(pedunculagin)が有効成分として含
有されたものである。
ラーゼ阻害活性では、次の化２の化学構造式で表わされ
るペダンキュラギン(pedunculagin)が有効成分として含
有されたものである。
【００１６】
【化２】
【００１７】
【作用】本発明においては、タンニン化合物がトポイソ
メラーゼＩ阻害活性を有することから、このタンニン化
合物を有効成分として含有されたトポイソメラーゼ阻害
剤では、例えば、癌細胞に投与することにより、癌細胞
の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイソメラーゼを阻
害する作用を有し、全く新しい作用機序の制癌剤として
用いることができる。
メラーゼＩ阻害活性を有することから、このタンニン化
合物を有効成分として含有されたトポイソメラーゼ阻害
剤では、例えば、癌細胞に投与することにより、癌細胞
の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイソメラーゼを阻
害する作用を有し、全く新しい作用機序の制癌剤として
用いることができる。
【００１８】特に、タンニン含有植物から抽出されたタ
ンニン化合物が有効成分として含有されたトポイソメラ
ーゼ阻害剤では、例えば有機溶媒や熱水での抽出操作と
いう簡便な操作で目的とするタンニン化合物が容易に得
られる。
ンニン化合物が有効成分として含有されたトポイソメラ
ーゼ阻害剤では、例えば有機溶媒や熱水での抽出操作と
いう簡便な操作で目的とするタンニン化合物が容易に得
られる。
【００１９】具体的なタンニン含有植物としては、ツバ
キ(Camellia japonica) が上げられ、その他のハーブ・
スパイスとしては、ベイベリィ(Bayberry)，クローブ(C
love) ，シャクヤク(Peony) ，ローズ・レッド(Rose re
d)，ローズ・バドレット(Rose budlet) ，ベイリーフ，
コンフリー(Comfrey) ，ユーカリ(Eucalyptus)，メリー
ザ(Melissa) ，ペニーロイヤル(Pennyroyal)，ローズ・
ピンク(Rose pink) ，スター・アニス(Star anise)，タ
イムが上げられる。
キ(Camellia japonica) が上げられ、その他のハーブ・
スパイスとしては、ベイベリィ(Bayberry)，クローブ(C
love) ，シャクヤク(Peony) ，ローズ・レッド(Rose re
d)，ローズ・バドレット(Rose budlet) ，ベイリーフ，
コンフリー(Comfrey) ，ユーカリ(Eucalyptus)，メリー
ザ(Melissa) ，ペニーロイヤル(Pennyroyal)，ローズ・
ピンク(Rose pink) ，スター・アニス(Star anise)，タ
イムが上げられる。
【００２０】また、ツバキ(Camellia japonica) から抽
出されたタンニン化合物は、他のタンニン含有植物から
得られたものに比べて、高いトポイソメラーゼ阻害活性
を有しており、このツバキから抽出されたタンニン化合
物を有効成分として含有されたものは高いトポイソメラ
ーゼ阻害活性を有する。
出されたタンニン化合物は、他のタンニン含有植物から
得られたものに比べて、高いトポイソメラーゼ阻害活性
を有しており、このツバキから抽出されたタンニン化合
物を有効成分として含有されたものは高いトポイソメラ
ーゼ阻害活性を有する。
【００２１】更に、前述の化２の化学構造式で表わされ
るペダンキュラギン(pedunculagin)は、最も高いトポイ
ソメラーゼ阻害活性を有しており、このペダンキュラギ
ンが有効成分として含有されたものは、１μｇ／ｍｌ程
度の量でトポイソメラーゼＩの活性を有効に阻害するこ
とが確認され、トポイソメラーゼの作用を阻害する代謝
拮抗作用を有する制癌剤として有効である。
るペダンキュラギン(pedunculagin)は、最も高いトポイ
ソメラーゼ阻害活性を有しており、このペダンキュラギ
ンが有効成分として含有されたものは、１μｇ／ｍｌ程
度の量でトポイソメラーゼＩの活性を有効に阻害するこ
とが確認され、トポイソメラーゼの作用を阻害する代謝
拮抗作用を有する制癌剤として有効である。
【００２２】
【実施例】１）精製方法 図１はツバキ生葉からトポイソメラーゼ阻害剤の精製方
法を示す工程図である。ツバキ生葉中の有効成分は、ツ
バキの生葉（横浜市内より入手）をアセトンで抽出し、
抽出液を減圧濃縮乾固後メタノール・ヘキサンで３回抽
出し、このメタノール層をアビセルセルロースのカラム
クロマトグラフィー（アセトン／メタノール）の濃度勾
配法（アセトン：メタノール＝１：０→４：１）で精製
した後、セファデックスＬＨ−２０のカラムクロマトグ
ラフィー（エタノール／メタノール）で同じく濃度勾配
法（エタノール：メタノール＝１：０→１：１）を用い
て試料Ｃ−１を精製単離した。
法を示す工程図である。ツバキ生葉中の有効成分は、ツ
バキの生葉（横浜市内より入手）をアセトンで抽出し、
抽出液を減圧濃縮乾固後メタノール・ヘキサンで３回抽
出し、このメタノール層をアビセルセルロースのカラム
クロマトグラフィー（アセトン／メタノール）の濃度勾
配法（アセトン：メタノール＝１：０→４：１）で精製
した後、セファデックスＬＨ−２０のカラムクロマトグ
ラフィー（エタノール／メタノール）で同じく濃度勾配
法（エタノール：メタノール＝１：０→１：１）を用い
て試料Ｃ−１を精製単離した。
【００２３】更に試料Ｃ−１にタンナーゼを加えて、４
０℃１２時間酵素処理を行った。これをセファデックス
ＬＨ−２０のカラムクロマトグラフィー（エタノール：
メタノール）の濃度勾配法（エタノール：メタノール＝
１：０→４：１）を用いて試料Ｃ−２及び試料Ｃ−３を
精製単離した。
０℃１２時間酵素処理を行った。これをセファデックス
ＬＨ−２０のカラムクロマトグラフィー（エタノール：
メタノール）の濃度勾配法（エタノール：メタノール＝
１：０→４：１）を用いて試料Ｃ−２及び試料Ｃ−３を
精製単離した。
【００２４】２）各試料の理化学的性状 (1) 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値 セルロースプレート（Merck 5716）を使用し以下の溶媒
で展開した。 (a) ７％酢酸 Ｒｆ値＝０．５０ (b) ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：５（上層）
Ｒｆ値＝０．２４
で展開した。 (a) ７％酢酸 Ｒｆ値＝０．５０ (b) ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：５（上層）
Ｒｆ値＝０．２４
【００２５】(2) ペーパークロマトグラフィのＲｆ値 Toyo No.50クロマト用ペーパーを使用し以下の溶媒で展
開した。 (a) ７％酢酸 Ｒｆ値＝０．５０ (b) ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：５（上層）
Ｒｆ値＝０．２４
開した。 (a) ７％酢酸 Ｒｆ値＝０．５０ (b) ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：５（上層）
Ｒｆ値＝０．２４
【００２６】(3) 赤外線吸収スペクトル アナレクト社ＡＱ２０型赤外分光計を使用してＫＢｒ錠
法にて測定した。結果を図２に示す。
法にて測定した。結果を図２に示す。
【００２７】(4) Ｈ1 −ＮＭＲ 重アセトンに溶解し、ＪＥＯＬ ＧＳＸ−５００を用い
て測定した（５００ＭＨｚ）。結果を図３に示す。
て測定した（５００ＭＨｚ）。結果を図３に示す。
【００２８】(5) 13Ｃ−ＮＭＲ 重アセトンに溶解し、ＪＥＯＬ ＧＳＸ−５００を用い
て測定した（１２５ＭＨｚ）。結果を図４に示す。
て測定した（１２５ＭＨｚ）。結果を図４に示す。
【００２９】以上の(1) 〜(5) の結果よりツバキ生葉中
の試料Ｃ−１のトポイソメラーゼＩ阻害有効成分は、次
の化３に示す構造既知のエラジタンニンであるペダンキ
ュラギン(pedunculagin)であることが判った。但し、式
中の−Ｒ1,−Ｒ2 は−Ｈ又は−ＯＨ基である。
の試料Ｃ−１のトポイソメラーゼＩ阻害有効成分は、次
の化３に示す構造既知のエラジタンニンであるペダンキ
ュラギン(pedunculagin)であることが判った。但し、式
中の−Ｒ1,−Ｒ2 は−Ｈ又は−ＯＨ基である。
【００３０】
【化３】
【００３１】また、試料Ｃ−２及び試料Ｃ−３について
も同様の分析結果から試料Ｃ−２は次の化４に示すエラ
ジン酸、試料Ｃ−３は次の化５に示す4-6-HHDP-glucose
であることが確認された。但し、式中の−Ｒ1,−Ｒ2 は
−Ｈ又は−ＯＨ基である。
も同様の分析結果から試料Ｃ−２は次の化４に示すエラ
ジン酸、試料Ｃ−３は次の化５に示す4-6-HHDP-glucose
であることが確認された。但し、式中の−Ｒ1,−Ｒ2 は
−Ｈ又は−ＯＨ基である。
【００３２】
【化４】
【化５】
【００３３】３）ＤＮＡトポイソメラーゼＩ反応とその
阻害 エッペンドルフチューブに０．３５ＭＴｒｉｓ・ＨＣｌ
バッファー ｐＨ８．０ ２μｌ，０．７２Ｍ ＫＣｌ
２μｌ，０．０５Ｍ ＭｇＣｌ2 ２μｌ，０．０５
Ｍジチオスレイトール２μｌ，０．０５Ｍスペルミジン
２μｌ，０．１％ウシ血清アルブミン２μｌ，０．２５
μｇ／μｌ ｐＢＲ３２２ＤＮＡ ２μｌ，０．３Ｕ／
μｌ ＤＮＡトポイソメラーゼＩ ２μｌ，供試サンプ
ル２μｌ，これに水２μｌを加え２０μｌとした。
阻害 エッペンドルフチューブに０．３５ＭＴｒｉｓ・ＨＣｌ
バッファー ｐＨ８．０ ２μｌ，０．７２Ｍ ＫＣｌ
２μｌ，０．０５Ｍ ＭｇＣｌ2 ２μｌ，０．０５
Ｍジチオスレイトール２μｌ，０．０５Ｍスペルミジン
２μｌ，０．１％ウシ血清アルブミン２μｌ，０．２５
μｇ／μｌ ｐＢＲ３２２ＤＮＡ ２μｌ，０．３Ｕ／
μｌ ＤＮＡトポイソメラーゼＩ ２μｌ，供試サンプ
ル２μｌ，これに水２μｌを加え２０μｌとした。
【００３４】３７℃，３０分間保温した後、反応停止液
（４．２％ＳＤＳ，２１％Ｆｉｃｏｌｌ ４００，０．
２％ＢＰＢ，０．３３ｍｇ／ｍｌプロテアーゼＫ）を６
μｌ加えた。これを０．７％アガロースゲル電気泳動を
用いて電気泳動した後、エチジウムブロマイドで染色
し、ＵＶ２５４ｎｍでスーパーコイルＤＮＡの弛緩の有
無を観察し、阻害活性の判定を行った。
（４．２％ＳＤＳ，２１％Ｆｉｃｏｌｌ ４００，０．
２％ＢＰＢ，０．３３ｍｇ／ｍｌプロテアーゼＫ）を６
μｌ加えた。これを０．７％アガロースゲル電気泳動を
用いて電気泳動した後、エチジウムブロマイドで染色
し、ＵＶ２５４ｎｍでスーパーコイルＤＮＡの弛緩の有
無を観察し、阻害活性の判定を行った。
【００３５】図５は種々の濃度の試料Ｃ−１（ペダンキ
ュラギン）によるトポイソメラーゼＩの阻害活性を示す
アガロース電気泳動の結果を示す図面代用写真である。
ュラギン）によるトポイソメラーゼＩの阻害活性を示す
アガロース電気泳動の結果を示す図面代用写真である。
【００３６】図において、レーン１はｐＢＲ３２２のＤ
ＮＡに対してトポイソメラゼＩ及び試料Ｃ−１を添加し
ていないもの、レーン２はｐＢＲ３２２のＤＮＡに対し
て０．３Ｕ／μｌのトポイソメラーゼを添加して試料Ｃ
−１を添加していないもの、レーン３はｐＢＲ３２２の
ＤＮＡに対して０．３Ｕ／μｌのトポイソメラーゼと
０．０１μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、レ
ーン４は同じくトポイソメラーゼと０．０３μｇ／ｍｌ
の試料Ｃ−１とを添加したもの、レーン５は同じく同量
のトポイソメラーゼと０．０５μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１
とを添加したもの、レーン６は同じくトポイソメラーゼ
と０．１μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、レ
ーン７は同じくトポイソメラーゼと１μｇ／ｍｌの試料
Ｃ−１とを添加したもの、レーン８は同じくトポイソメ
ラーゼと５μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、
レーン９は同じくトポイソメラーゼと１０μｇ／ｍｌの
試料Ｃ−１とを添加したもの、レーン１０は同じくトポ
イソメラーゼと１００μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加
したものであり、Ｃのバンドは超らせんＤＮＡを、Ｒの
バンドは弛緩されたＤＮＡを示す。
ＮＡに対してトポイソメラゼＩ及び試料Ｃ−１を添加し
ていないもの、レーン２はｐＢＲ３２２のＤＮＡに対し
て０．３Ｕ／μｌのトポイソメラーゼを添加して試料Ｃ
−１を添加していないもの、レーン３はｐＢＲ３２２の
ＤＮＡに対して０．３Ｕ／μｌのトポイソメラーゼと
０．０１μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、レ
ーン４は同じくトポイソメラーゼと０．０３μｇ／ｍｌ
の試料Ｃ−１とを添加したもの、レーン５は同じく同量
のトポイソメラーゼと０．０５μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１
とを添加したもの、レーン６は同じくトポイソメラーゼ
と０．１μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、レ
ーン７は同じくトポイソメラーゼと１μｇ／ｍｌの試料
Ｃ−１とを添加したもの、レーン８は同じくトポイソメ
ラーゼと５μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加したもの、
レーン９は同じくトポイソメラーゼと１０μｇ／ｍｌの
試料Ｃ−１とを添加したもの、レーン１０は同じくトポ
イソメラーゼと１００μｇ／ｍｌの試料Ｃ−１とを添加
したものであり、Ｃのバンドは超らせんＤＮＡを、Ｒの
バンドは弛緩されたＤＮＡを示す。
【００３７】図に示す通り、Ｒのバンドは試料Ｃ−１の
添加量に応じて阻害されていることが判り、特に０．０
３μｇ／ｍｌ（レーン７）以上でトポイソメラーゼＩの
活性を有効に阻害することが確認された。
添加量に応じて阻害されていることが判り、特に０．０
３μｇ／ｍｌ（レーン７）以上でトポイソメラーゼＩの
活性を有効に阻害することが確認された。
【００３８】４）試料Ｃ−２及びＣ−３のトポイソメラーゼＩ阻害 実施例２）で得られた化４に示された試料Ｃ−２（エラ
ジン酸）及び化５に示された試料Ｃ−３（4-6-HHDP-glu
cose）についても前述と同様にトポイソメラーゼ阻害活
性の判定を行った。
ジン酸）及び化５に示された試料Ｃ−３（4-6-HHDP-glu
cose）についても前述と同様にトポイソメラーゼ阻害活
性の判定を行った。
【００３９】図６は種々の濃度の試料Ｃ−２（エラジン
酸）及び試料Ｃ−３（4-6-HHDP-glucose）によるトポイ
ソメラーゼＩの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結
果を示す模式図である。尚、各同一濃度の試料Ｃ−１
（ペダンキュラギン）と比較した。
酸）及び試料Ｃ−３（4-6-HHDP-glucose）によるトポイ
ソメラーゼＩの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結
果を示す模式図である。尚、各同一濃度の試料Ｃ−１
（ペダンキュラギン）と比較した。
【００４０】図に示す通り、試料Ｃ−３については、
０．０１〜１μｇ／ｍｌで全く阻害がないことが示され
た。また、試料Ｃ−２については、１μｇ／ｍｌで超ら
せんＤＮＡと弛緩されたＤＮＡとが検出され、試料Ｃ−
１（ペダンキュラギン）に比べて、非常に弱い阻害活性
が確認された。
０．０１〜１μｇ／ｍｌで全く阻害がないことが示され
た。また、試料Ｃ−２については、１μｇ／ｍｌで超ら
せんＤＮＡと弛緩されたＤＮＡとが検出され、試料Ｃ−
１（ペダンキュラギン）に比べて、非常に弱い阻害活性
が確認された。
【００４１】５）他の含有植物からのトポイソメラーゼ阻害剤 以上のようにツバキから抽出されたタンニン化合物のペ
ダンキュラギンには良好なトポイソメラーゼ阻害作用が
あることが確認された。そこで、他の植物から実施例
１）と同様な方法で抽出した熱水抽出物についてトポイ
ソメラーゼ阻害作用の存在の有無を確認した。
ダンキュラギンには良好なトポイソメラーゼ阻害作用が
あることが確認された。そこで、他の植物から実施例
１）と同様な方法で抽出した熱水抽出物についてトポイ
ソメラーゼ阻害作用の存在の有無を確認した。
【００４２】次の表１は食品店・売場でハーブ、スパイ
スとして売られている乾燥植物材料約１２０種を集め、
その熱水抽出液中のトポイソメラーゼ阻害活性を調べた
結果を示す。表１に示すように、ツバキ以外のもので
は、シャクヤクや、バラ、ユーカリ等の熱水抽出液に強
い活性が確認された。
スとして売られている乾燥植物材料約１２０種を集め、
その熱水抽出液中のトポイソメラーゼ阻害活性を調べた
結果を示す。表１に示すように、ツバキ以外のもので
は、シャクヤクや、バラ、ユーカリ等の熱水抽出液に強
い活性が確認された。
【００４３】
【表１】
【００４４】６）他のトポイソメラーゼ阻害剤 前述のように、ペダンキュラギンには良好なトポイソメ
ラーゼ阻害作用があることが確認されたが、ペダンキュ
ラギンと同じガロタンニン系の物質であるタンニン酸に
ついてトポイソメラーゼ阻害活性の有無を確認した。
ラーゼ阻害作用があることが確認されたが、ペダンキュ
ラギンと同じガロタンニン系の物質であるタンニン酸に
ついてトポイソメラーゼ阻害活性の有無を確認した。
【００４５】図７はタンニン酸によるトポイソメラーゼ
Ｉの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模
式図である。尚、図ａは各濃度のタンニン酸、図ｂは比
較とした各濃度の試料Ｃ−１（ペダンキュラギン）示
す。図ａに示すように、タンニン酸は０．１μｇ／ｍｌ
で、図ｂのペダンキュラギン０．０３μｇ／ｍｌとほぼ
同じ程度の阻害が確認された。
Ｉの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模
式図である。尚、図ａは各濃度のタンニン酸、図ｂは比
較とした各濃度の試料Ｃ−１（ペダンキュラギン）示
す。図ａに示すように、タンニン酸は０．１μｇ／ｍｌ
で、図ｂのペダンキュラギン０．０３μｇ／ｍｌとほぼ
同じ程度の阻害が確認された。
【００４６】
【発明の効果】本発明は以上説明したとおり、タンニン
化合物がトポイソメラーゼ阻害活性を有することから、
このタンニン化合物を有効成分として含有されたトポイ
ソメラーゼ阻害剤では、例えば、癌細胞に投与すること
により、癌細胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイ
ソメラーゼの作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌
剤として用いることができるという効果がある。特に、
阻害活性の高いタンニン化合物としてツバキ(Camellia
japonica) から抽出されたタンニン化合物、及びペダン
キュラギン(pedunculagin)が上げられる。
化合物がトポイソメラーゼ阻害活性を有することから、
このタンニン化合物を有効成分として含有されたトポイ
ソメラーゼ阻害剤では、例えば、癌細胞に投与すること
により、癌細胞の超らせんＤＮＡ構造を緩和するトポイ
ソメラーゼの作用を阻害する代謝拮抗作用を有する制癌
剤として用いることができるという効果がある。特に、
阻害活性の高いタンニン化合物としてツバキ(Camellia
japonica) から抽出されたタンニン化合物、及びペダン
キュラギン(pedunculagin)が上げられる。
【図１】ツバキ生葉からトポイソメラーゼ阻害剤の精製
方法を示す工程図である。
方法を示す工程図である。
【図２】試料Ｃ−１の赤外線吸収スペクトルの結果を示
す線図である。
す線図である。
【図３】試料Ｃ−１のＨ1 −ＮＭＲの結果を示す線図で
ある。
ある。
【図４】試料Ｃ−１の13Ｃ−ＮＭＲの結果を示す線図で
ある。
ある。
【図５】種々の濃度のペダンキュラギンによるトポイソ
メラーゼＩの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果
を示す図面代用写真である。
メラーゼＩの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果
を示す図面代用写真である。
【図６】種々の濃度の試料Ｃ−２（エラジン酸）及び試
料Ｃ−３（4-6-HHDP-glucose）によるトポイソメラーゼ
Ｉの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模
式図である。
料Ｃ−３（4-6-HHDP-glucose）によるトポイソメラーゼ
Ｉの阻害活性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模
式図である。
【図７】タンニン酸によるトポイソメラーゼＩの阻害活
性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模式図であ
る。尚、図ａは各濃度のタンニン酸、図ｂは比較とした
各濃度の試料Ｃ−１（ペダンキュラギン）示す。
性を示すアガロース電気泳動の結果を示す模式図であ
る。尚、図ａは各濃度のタンニン酸、図ｂは比較とした
各濃度の試料Ｃ−１（ペダンキュラギン）示す。
Claims (4)
- 【請求項１】 タンニン化合物が有効成分として含有さ
れたことを特徴とするトポイソメラーゼ阻害剤。 - 【請求項２】 タンニン含有植物から抽出されたタンニ
ン化合物が有効成分として含有されたことを特徴とする
トポイソメラーゼ阻害剤。 - 【請求項３】 ツバキ(Camellia japonica) から抽出さ
れたタンニン化合物が有効成分として含有されたことを
特徴とするトポイソメラーゼ阻害剤。 - 【請求項４】 次の化１の化学構造式で表わされるペダ
ンキュラギン(pedunculagin)が有効成分として含有され
たことを特徴とするトポイソメラーゼ阻害剤。（但し、
式中の−Ｒ1,−Ｒ2 は−Ｈ又は−ＯＨ基である。） 【化１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4247169A JPH0672885A (ja) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | トポイソメラーゼ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4247169A JPH0672885A (ja) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | トポイソメラーゼ阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0672885A true JPH0672885A (ja) | 1994-03-15 |
Family
ID=17159472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4247169A Pending JPH0672885A (ja) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | トポイソメラーゼ阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0672885A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0896792A1 (en) * | 1997-08-13 | 1999-02-17 | Julphar Pharma GmbH | Antiviral agent |
| US6936284B2 (en) * | 2001-11-16 | 2005-08-30 | Iijima Corporation | Composition having anticancer activity |
-
1992
- 1992-08-25 JP JP4247169A patent/JPH0672885A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0896792A1 (en) * | 1997-08-13 | 1999-02-17 | Julphar Pharma GmbH | Antiviral agent |
| WO1999008536A1 (en) * | 1997-08-13 | 1999-02-25 | Julphar Pharma Gmbh | Antiviral agent |
| US6936284B2 (en) * | 2001-11-16 | 2005-08-30 | Iijima Corporation | Composition having anticancer activity |
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