JPH0665287A - ペプチド - Google Patents
ペプチドInfo
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- JPH0665287A JPH0665287A JP4237578A JP23757892A JPH0665287A JP H0665287 A JPH0665287 A JP H0665287A JP 4237578 A JP4237578 A JP 4237578A JP 23757892 A JP23757892 A JP 23757892A JP H0665287 A JPH0665287 A JP H0665287A
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- Japan
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- peptide
- seq
- amino acid
- resin
- pro
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 Tyr-Pro-Ile-Xaa-NH2で表されるＮ末端から
第４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシル基がアミド化さ
れているテトラペプチド（式中XaaはGln、Pro、Valまた
はその他のアミノ酸を表す）およびその塩、並びに該テ
トラペプチドおよびその塩の１種または２種以上を有効
成分として含むオピオイド活性を有する剤。 【効果】 上記のテトラペプチドおよびその塩は、高い
オピオイド活性を有しているので、鎮痛、麻酔、情動、
呼吸、脈動、体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュ
リンやソマトスタチン等のホルモンの分泌調節、電解質
の吸収促進、心筋の収縮調節機能を示す可能性があり、
鎮痛麻酔剤、催眠剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解
質の吸収促進剤、胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤とし
ての利用が期待でき、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての
効果が大きい。
第４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシル基がアミド化さ
れているテトラペプチド（式中XaaはGln、Pro、Valまた
はその他のアミノ酸を表す）およびその塩、並びに該テ
トラペプチドおよびその塩の１種または２種以上を有効
成分として含むオピオイド活性を有する剤。 【効果】 上記のテトラペプチドおよびその塩は、高い
オピオイド活性を有しているので、鎮痛、麻酔、情動、
呼吸、脈動、体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュ
リンやソマトスタチン等のホルモンの分泌調節、電解質
の吸収促進、心筋の収縮調節機能を示す可能性があり、
鎮痛麻酔剤、催眠剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解
質の吸収促進剤、胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤とし
ての利用が期待でき、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての
効果が大きい。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オピオイド活性を有す
るペプチドおよびその塩、並びに当該ペプチドおよびそ
の塩を有効成分として含むオピオイド活性を有する剤に
関する。
るペプチドおよびその塩、並びに当該ペプチドおよびそ
の塩を有効成分として含むオピオイド活性を有する剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術】食品中には高次の生命活動に関与する多
数の生体調節因子が存在することが広く知られるように
なっており、それらの生体調節因子を健康の増進、病気
の予防や治療、老化の予防等に積極的に利用することが
近年色々試みられるようになっている。そのような生体
調節因子としては神経系、消化吸収系、循環系、生体防
御・免疫系、内分泌系、細胞分化・増殖系等に作用する
種々の因子が知られている。それらのうちで、ある種の
食品蛋白質中には神経系に作用してモルヒネ様の麻酔、
鎮痛作用等（いわゆるオピオイド活性）を有するペプチ
ド単位が存在していることが明らかになっており、その
ようなペプチドはオピオイドペプチドと一般に称されて
いる。
数の生体調節因子が存在することが広く知られるように
なっており、それらの生体調節因子を健康の増進、病気
の予防や治療、老化の予防等に積極的に利用することが
近年色々試みられるようになっている。そのような生体
調節因子としては神経系、消化吸収系、循環系、生体防
御・免疫系、内分泌系、細胞分化・増殖系等に作用する
種々の因子が知られている。それらのうちで、ある種の
食品蛋白質中には神経系に作用してモルヒネ様の麻酔、
鎮痛作用等（いわゆるオピオイド活性）を有するペプチ
ド単位が存在していることが明らかになっており、その
ようなペプチドはオピオイドペプチドと一般に称されて
いる。
【０００３】オピオイドペプチドが消化管や消化管ホル
モン分泌に対して影響を有することが知られており、小
麦グルテンの分解物を経口投与した場合に食物の腸内滞
留時間の延長、血中のインシュリンやソマトスタチン量
の上昇等のオピオイド活性を示すということが報告され
ている。このような知見をベースとして、本発明者らは
小麦グルテンを加水分解し、その生成物からオピオイド
活性を有する新規なペプチドを分取することができ、先
に出願した（特願平３−１７１８７９号）。
モン分泌に対して影響を有することが知られており、小
麦グルテンの分解物を経口投与した場合に食物の腸内滞
留時間の延長、血中のインシュリンやソマトスタチン量
の上昇等のオピオイド活性を示すということが報告され
ている。このような知見をベースとして、本発明者らは
小麦グルテンを加水分解し、その生成物からオピオイド
活性を有する新規なペプチドを分取することができ、先
に出願した（特願平３−１７１８７９号）。
【０００４】
【発明の内容】上記のような状況下に、本発明者らはオ
ピオイド活性を有するペプチドについて更に研究を進め
た。そして、上記の特願平３−１７１８７９号における
ペプチドとは異なるアミノ酸配列を有する、配列番号１
で表され且つその末端のカルボキシル基がアミド化され
ている新規なペプチド類を化学的に合成し、そのオピオ
イド活性を測定したところ、極めて高いオピオイド活性
を有することを見いだした。
ピオイド活性を有するペプチドについて更に研究を進め
た。そして、上記の特願平３−１７１８７９号における
ペプチドとは異なるアミノ酸配列を有する、配列番号１
で表され且つその末端のカルボキシル基がアミド化され
ている新規なペプチド類を化学的に合成し、そのオピオ
イド活性を測定したところ、極めて高いオピオイド活性
を有することを見いだした。
【０００５】したがって、本発明は、配列番号１で表さ
れるペプチド（ただし配列番号１においてXaaはアミノ
酸を表し且つそのＮ末端から第４番目のアミノ酸Xaaの
カルボキシル基がアミド化されている）およびその塩で
ある。
れるペプチド（ただし配列番号１においてXaaはアミノ
酸を表し且つそのＮ末端から第４番目のアミノ酸Xaaの
カルボキシル基がアミド化されている）およびその塩で
ある。
【０００６】そして、本発明は、配列番号１で表される
ペプチド（ただし配列番号１においてXaaはアミノ酸を
表し且つそのＮ末端から第４番目のアミノ酸Xaaのカル
ボキシル基がアミド化されている）およびその塩の１種
または２種以上を有効成分として含むオピオイド活性を
有する剤である。
ペプチド（ただし配列番号１においてXaaはアミノ酸を
表し且つそのＮ末端から第４番目のアミノ酸Xaaのカル
ボキシル基がアミド化されている）およびその塩の１種
または２種以上を有効成分として含むオピオイド活性を
有する剤である。
【０００７】配列番号１で表されるペプチドは、そのＮ
末端から順にチロシン(Tyr）、プロリン（Pro）および
イソロイシン(Ile）の３個のアミノ酸が結合し、第４番
目に所定のアミノ酸（Xaa)が結合し、且つ該第４番目の
アミノ酸（Xaa）のカルボキシル基がアミド化されてい
る、式：Try-Pro-Ile-Xaa-NH2で表されるテトラペプチ
ドである。
末端から順にチロシン(Tyr）、プロリン（Pro）および
イソロイシン(Ile）の３個のアミノ酸が結合し、第４番
目に所定のアミノ酸（Xaa)が結合し、且つ該第４番目の
アミノ酸（Xaa）のカルボキシル基がアミド化されてい
る、式：Try-Pro-Ile-Xaa-NH2で表されるテトラペプチ
ドである。
【０００８】配列番号１において、第４番目のアミノ酸
(Xaa)の例としては、グリシン(Gly)、プロリン（Pr
o）、バリン（Val）などを挙げることができる。
(Xaa)の例としては、グリシン(Gly)、プロリン（Pr
o）、バリン（Val）などを挙げることができる。
【０００９】アミノ酸（Xaa）のカルボキシル基がアミ
ド化された配列番号１で表される本発明のペプチドにお
いて、ペプチドを構成する４個のアミノ酸は、Ｌ−アミ
ノ酸およびＤ−アミノ酸のいずれでもよい。例えば、４
個のアミノ酸の全部がＬ−アミノ酸からなっていても、
またはＤ−アミノ酸のみからなっていてもよく、或は４
個のアミノ酸のうちのいずれかがＬ−アミノ酸で残りが
Ｄ−アミノ酸からなっていてもよい。いずれのペプチド
も化学合成によって容易に製造することができる。特
に、Xaaがプロリン（Pro）またはバリン（Val）である
本発明のペプチドにおいては、XaaとしてＤ−プロリン
またはＤ−バリンが結合したペプチドのオピオイド活性
が高い。
ド化された配列番号１で表される本発明のペプチドにお
いて、ペプチドを構成する４個のアミノ酸は、Ｌ−アミ
ノ酸およびＤ−アミノ酸のいずれでもよい。例えば、４
個のアミノ酸の全部がＬ−アミノ酸からなっていても、
またはＤ−アミノ酸のみからなっていてもよく、或は４
個のアミノ酸のうちのいずれかがＬ−アミノ酸で残りが
Ｄ−アミノ酸からなっていてもよい。いずれのペプチド
も化学合成によって容易に製造することができる。特
に、Xaaがプロリン（Pro）またはバリン（Val）である
本発明のペプチドにおいては、XaaとしてＤ−プロリン
またはＤ−バリンが結合したペプチドのオピオイド活性
が高い。
【００１０】また、本発明における「オピオイド活性を
有する剤」とは、鎮痛、麻酔、鎮静、情動、呼吸、脈
動、体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソ
マトスタチン等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促
進、心筋の収縮調節等に関与するいわゆるオピオイド活
性として認識されている活性を有する剤をいう。
有する剤」とは、鎮痛、麻酔、鎮静、情動、呼吸、脈
動、体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソ
マトスタチン等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促
進、心筋の収縮調節等に関与するいわゆるオピオイド活
性として認識されている活性を有する剤をいう。
【００１１】本発明のペプチドおよびその塩は、配列番
号１で表されるアミノ酸配列を有し且つその第４番目の
アミノ酸（Xaa）のカルボキシル基がアミド化されてい
る限りどのような方法で製造してもよい。本発明のペプ
チドの製造法の例を配列番号１で表されるペプチドにお
いて、第４番目のアミノ酸（Xaa）がグリシン（Gly）で
ある配列番号２で表され且つ該グリシンのカルボキシル
基がアミド化されているペプチドの場合を例に挙げて以
下に説明する。
号１で表されるアミノ酸配列を有し且つその第４番目の
アミノ酸（Xaa）のカルボキシル基がアミド化されてい
る限りどのような方法で製造してもよい。本発明のペプ
チドの製造法の例を配列番号１で表されるペプチドにお
いて、第４番目のアミノ酸（Xaa）がグリシン（Gly）で
ある配列番号２で表され且つ該グリシンのカルボキシル
基がアミド化されているペプチドの場合を例に挙げて以
下に説明する。
【００１２】アミド化された配列番号２の本発明のペプ
チドの製造法 米国バイオサーチ社のＳＡＭ ＴＷＯ 型自動ペプチド合
成装置を使用して同装置の標準プロトコールにしたがっ
て合成を行う。すなわち、市販のベンズヒドリルアミン
樹脂にBoc(ブトキシカルボニル)−Glyのジメチルホルム
アミド溶液とジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチ
レン溶液と加えて反応させて、Boc−Gly−ベンズヒドリ
ルアミン樹脂を得た。次に、Boc基の除去されたGly−NH
2−樹脂にBoc−Ileをジイソプロピルカルボジイミドの
存在下でカップリングさせ、以下上記と同様にして、Bo
c−Pro−OHおよびBoc−Tyr(Cl2−Bzl）を順次カップリ
ングさせて、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro−Ile−Gly−NH2
−樹脂を得る。このペプチド樹脂を１０％アニソールを
含むフッ化水素中に入れて０℃で２時間撹拌する。フッ
化水素を留去した後、エーテルで残渣を洗浄し、３０％
酢酸でペプチドを抽出する。抽出して得た粗ペプチドを
ＯＤＳカラムによる高速液体クロマトグラフィーを使用
して精製することにより、配列番号２で表されるペプチ
ドを得る。また、配列番号１に包括され且つその第４番
目のカルボキシル基がアミド化されている他のペプチド
も同様の操作により合成および精製することによって得
ることができる。
チドの製造法 米国バイオサーチ社のＳＡＭ ＴＷＯ 型自動ペプチド合
成装置を使用して同装置の標準プロトコールにしたがっ
て合成を行う。すなわち、市販のベンズヒドリルアミン
樹脂にBoc(ブトキシカルボニル)−Glyのジメチルホルム
アミド溶液とジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチ
レン溶液と加えて反応させて、Boc−Gly−ベンズヒドリ
ルアミン樹脂を得た。次に、Boc基の除去されたGly−NH
2−樹脂にBoc−Ileをジイソプロピルカルボジイミドの
存在下でカップリングさせ、以下上記と同様にして、Bo
c−Pro−OHおよびBoc−Tyr(Cl2−Bzl）を順次カップリ
ングさせて、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro−Ile−Gly−NH2
−樹脂を得る。このペプチド樹脂を１０％アニソールを
含むフッ化水素中に入れて０℃で２時間撹拌する。フッ
化水素を留去した後、エーテルで残渣を洗浄し、３０％
酢酸でペプチドを抽出する。抽出して得た粗ペプチドを
ＯＤＳカラムによる高速液体クロマトグラフィーを使用
して精製することにより、配列番号２で表されるペプチ
ドを得る。また、配列番号１に包括され且つその第４番
目のカルボキシル基がアミド化されている他のペプチド
も同様の操作により合成および精製することによって得
ることができる。
【００１３】そして、配列番号１で表されるアミノ酸配
列を有し且つその第４番目のアミノ酸（Xaa）のカルボ
キシル基がアミド化されている本発明のペプチドおよび
その塩は、オピオイド活性を有しているので、それらの
ペプチドおよびその塩を有効成分として含有する剤は、
例えば、鎮痛麻酔剤、催眠剤、消化管ホルモン促進剤、
電解質吸収促進剤、腸管ぜん動抑制による下痢改善剤等
として、人間および種々の動物に投与することができ、
特に鎮痛剤や鎮静麻酔剤として有効である。その際に、
本発明のペプチドおよびその塩は、１種類のみを使用し
てもまたは２種以上のペプチドを含む混合物の形態で使
用してもよい。本発明のオピオイド活性を有する剤の好
適な投与量は、投与される人間や動物の年令、体重、性
別、症状、動物の種類等の種々の条件によって異なり得
る。
列を有し且つその第４番目のアミノ酸（Xaa）のカルボ
キシル基がアミド化されている本発明のペプチドおよび
その塩は、オピオイド活性を有しているので、それらの
ペプチドおよびその塩を有効成分として含有する剤は、
例えば、鎮痛麻酔剤、催眠剤、消化管ホルモン促進剤、
電解質吸収促進剤、腸管ぜん動抑制による下痢改善剤等
として、人間および種々の動物に投与することができ、
特に鎮痛剤や鎮静麻酔剤として有効である。その際に、
本発明のペプチドおよびその塩は、１種類のみを使用し
てもまたは２種以上のペプチドを含む混合物の形態で使
用してもよい。本発明のオピオイド活性を有する剤の好
適な投与量は、投与される人間や動物の年令、体重、性
別、症状、動物の種類等の種々の条件によって異なり得
る。
【００１４】そして、本発明のオピオイド活性を有する
剤は経口および非経口のいずれによっても投与可能であ
り、更に単独で投与しても、また製薬工業において通常
使用されている固体担体や液状担体と一緒に投与しても
よく、或は他の薬剤と混合または組合わせて使用するこ
とができる。また投与形態は、錠剤、丸剤、顆粒剤、カ
プセル、散剤、水溶液、注射剤等の任意の形態が可能で
ある。以下に、本発明を例を挙げて具体的に説明するが
本発明はそれらによって限定されない。なお、以下の実
施例において、特に断らない限りは個々のアミノ酸はＬ
−アミノ酸を意味する。
剤は経口および非経口のいずれによっても投与可能であ
り、更に単独で投与しても、また製薬工業において通常
使用されている固体担体や液状担体と一緒に投与しても
よく、或は他の薬剤と混合または組合わせて使用するこ
とができる。また投与形態は、錠剤、丸剤、顆粒剤、カ
プセル、散剤、水溶液、注射剤等の任意の形態が可能で
ある。以下に、本発明を例を挙げて具体的に説明するが
本発明はそれらによって限定されない。なお、以下の実
施例において、特に断らない限りは個々のアミノ酸はＬ
−アミノ酸を意味する。
【００１５】
《実施例 １》配列番号２で表されるアミノ酸配列を有
し且つ第４番目のアミノ酸（Gly）のカルボキシル基が
アミド化されているペプチドの合成を以下の方法で行っ
た。市販のベンズヒドリルアミン樹脂（置換率０．３ｍ
ｅｑ／ｇ）０．４ｇに、濃度０．４ＭのBoc−Glyのジメ
チルホルムアミド溶液５ｍｌおよび０．４Ｍジイソプロ
ピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液５ｍｌを混合し
て反応槽中で２時間撹拌して反応させて、Boc−Gly−ベ
ンズヒドリルアミン樹脂を得た。この樹脂に４５％トリ
フルオロ酢酸および２.５％アニソールを含む塩化メチ
レン２０ｍｌをバイオサーチ社のペプチド合成装置 Ｓ
ＡＭ ＴＷＯの反応槽の中で室温で２５分間反応させてB
oc基を除去した。Boc基の除去されたGly−NH2−樹脂を
塩化メチレンで洗浄し、次いで１０％のジイソプロピル
エチルアミンを含む塩化メチレンにより中和した後、更
に塩化メチレンで洗浄した。この樹脂に０.４Ｍ Boc−I
leのジメチルホルムアミド溶液５ｍｌ、０．４Ｍジイソ
プロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液５ｍｌを混
合して反応槽に入れて室温で２時間撹拌下に反応させ
た。
し且つ第４番目のアミノ酸（Gly）のカルボキシル基が
アミド化されているペプチドの合成を以下の方法で行っ
た。市販のベンズヒドリルアミン樹脂（置換率０．３ｍ
ｅｑ／ｇ）０．４ｇに、濃度０．４ＭのBoc−Glyのジメ
チルホルムアミド溶液５ｍｌおよび０．４Ｍジイソプロ
ピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液５ｍｌを混合し
て反応槽中で２時間撹拌して反応させて、Boc−Gly−ベ
ンズヒドリルアミン樹脂を得た。この樹脂に４５％トリ
フルオロ酢酸および２.５％アニソールを含む塩化メチ
レン２０ｍｌをバイオサーチ社のペプチド合成装置 Ｓ
ＡＭ ＴＷＯの反応槽の中で室温で２５分間反応させてB
oc基を除去した。Boc基の除去されたGly−NH2−樹脂を
塩化メチレンで洗浄し、次いで１０％のジイソプロピル
エチルアミンを含む塩化メチレンにより中和した後、更
に塩化メチレンで洗浄した。この樹脂に０.４Ｍ Boc−I
leのジメチルホルムアミド溶液５ｍｌ、０．４Ｍジイソ
プロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液５ｍｌを混
合して反応槽に入れて室温で２時間撹拌下に反応させ
た。
【００１６】上記で得られた樹脂を、順にジメチルホル
ムアミド、塩化メチレン、ジイソプロピルエチルアミン
を１０％含有する塩化メチレン、塩化メチレンおよび塩
化メチレン／ジメチルホルムアミド混合液で洗浄して、
Boc−Ile−Gly−NH2−樹脂を得た。 引き続き上記と同様にしてBoc基の除去、Bocアミノ酸の
カップリングを繰り返して、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro
−Ile−Gly−NH2−樹脂からなる生成物を得た。
ムアミド、塩化メチレン、ジイソプロピルエチルアミン
を１０％含有する塩化メチレン、塩化メチレンおよび塩
化メチレン／ジメチルホルムアミド混合液で洗浄して、
Boc−Ile−Gly−NH2−樹脂を得た。 引き続き上記と同様にしてBoc基の除去、Bocアミノ酸の
カップリングを繰り返して、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro
−Ile−Gly−NH2−樹脂からなる生成物を得た。
【００１７】この樹脂を１０％のアニソールを含有する
フッ化水素２０ｍｌに入れて０℃で２時間撹拌してアミ
ド化されたペプチドを樹脂から遊離させた。その後、フ
ッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で抽出し、凍
結乾燥して粗ペプチドを得た。得られたアミド化ペプチ
ドをナカライテスク株式会社製のオクタデシルシラン
（ＯＤＳ）カラムである ＯＤＳ−Cosmosil ５Ｃ18−Ａ
Ｒを用いた逆相クロマトグラフィーにより精製して最終
生成物２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）
は、Tyr：Pro：Ile：Gly＝１：１：１：１であった。更
にアプライドシステム社製のプロテインシーケンサー４
７７−Ａ型により分析したところ、配列番号２で表され
るアミノ酸配列を有し且つ第４番目のアミノ酸であるグ
リシン（Gly）のカルボキシル基がアミド化されたペプ
チドであることが判明した。またシリカゲルプレートに
よる薄層クロマトグラフィーでＲｆ値を求めたところ、
ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：３：１０：１
２の展開溶媒を使用した場合の該生成物の薄層クロマト
グラフィーのＲｆ値は０．７４４であった。
フッ化水素２０ｍｌに入れて０℃で２時間撹拌してアミ
ド化されたペプチドを樹脂から遊離させた。その後、フ
ッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で抽出し、凍
結乾燥して粗ペプチドを得た。得られたアミド化ペプチ
ドをナカライテスク株式会社製のオクタデシルシラン
（ＯＤＳ）カラムである ＯＤＳ−Cosmosil ５Ｃ18−Ａ
Ｒを用いた逆相クロマトグラフィーにより精製して最終
生成物２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）
は、Tyr：Pro：Ile：Gly＝１：１：１：１であった。更
にアプライドシステム社製のプロテインシーケンサー４
７７−Ａ型により分析したところ、配列番号２で表され
るアミノ酸配列を有し且つ第４番目のアミノ酸であるグ
リシン（Gly）のカルボキシル基がアミド化されたペプ
チドであることが判明した。またシリカゲルプレートに
よる薄層クロマトグラフィーでＲｆ値を求めたところ、
ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：３：１０：１
２の展開溶媒を使用した場合の該生成物の薄層クロマト
グラフィーのＲｆ値は０．７４４であった。
【００１８】《実施例 ２》配列番号１で表されるペプ
チドにおいてXaaがＤ−プロリン（D-Pro）である配列番
号３で表されるペプチドの場合も、配列番号２で表され
るペプチドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリル
アミン樹脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用い
て、これに順次D-Pro、Ile、ProおよびTyrを結合させ
て、第４番目のアミノ酸であるD-Proのカルボキシル基
がアミド化されている配列番号３で表される最終生成物
２５ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Ile：D-Pro＝１：１：１：１であり、そして実
施例１で使用したプロテインシーケンサーにより分析し
たところ、配列番号３で表され且つ第４番目のアミノ酸
であるD-Proのカルボキシル基がアミド化されたアミノ
酸配列を有するペプチドであることが判明した。また実
施例１と同様にして求めたこの生成物の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値は０．７３４であった。
チドにおいてXaaがＤ−プロリン（D-Pro）である配列番
号３で表されるペプチドの場合も、配列番号２で表され
るペプチドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリル
アミン樹脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用い
て、これに順次D-Pro、Ile、ProおよびTyrを結合させ
て、第４番目のアミノ酸であるD-Proのカルボキシル基
がアミド化されている配列番号３で表される最終生成物
２５ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Ile：D-Pro＝１：１：１：１であり、そして実
施例１で使用したプロテインシーケンサーにより分析し
たところ、配列番号３で表され且つ第４番目のアミノ酸
であるD-Proのカルボキシル基がアミド化されたアミノ
酸配列を有するペプチドであることが判明した。また実
施例１と同様にして求めたこの生成物の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値は０．７３４であった。
【００１９】《実施例 ３》配列番号１で表されるペプ
チドにおいてXaaがＤ−バリン（D-Val）である配列番号
４で表されるペプチドの場合も、配列番号２で表される
ペプチドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリルア
ミン樹脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用い
て、これに順次D-Val、Ile、ProおよびTyrを結合させ
て、第４番目のアミノ酸であるD-Valのカルボキシル基
がアミド化されている配列番号４で表される最終生成物
２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Ile：D-Val＝１：１：１：１であり、そして実
施例１で使用したプロテインシーケンサーにより分析し
たところ、配列番号４で表され且つ第４番目のアミノ酸
であるD-Valのカルボキシル基がアミド化されたアミノ
酸配列を有するペプチドであることが判明した。また実
施例１と同様にして求めたこの生成物の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値は０．６５８であった。
チドにおいてXaaがＤ−バリン（D-Val）である配列番号
４で表されるペプチドの場合も、配列番号２で表される
ペプチドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリルア
ミン樹脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用い
て、これに順次D-Val、Ile、ProおよびTyrを結合させ
て、第４番目のアミノ酸であるD-Valのカルボキシル基
がアミド化されている配列番号４で表される最終生成物
２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Ile：D-Val＝１：１：１：１であり、そして実
施例１で使用したプロテインシーケンサーにより分析し
たところ、配列番号４で表され且つ第４番目のアミノ酸
であるD-Valのカルボキシル基がアミド化されたアミノ
酸配列を有するペプチドであることが判明した。また実
施例１と同様にして求めたこの生成物の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値は０．６５８であった。
【００２０】《実施例 ４》配列番号３で表されるペプ
チドにおいて第４番目のアミノ酸であるD-ProをL-Proに
置き換え且つ該L-Proのカルボキシル基がアミド化され
ているペプチドの場合も、配列番号２で表されるペプチ
ドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリルアミン樹
脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用いて、これ
に順次L-Pro、Ile、ProおよびTyrを結合させて、第４番
目のアミノ酸であるL-Proのカルボキシル基がアミド化
されている最終生成物２５ｍｇを得た。そのアミノ酸組
成（モル比）は、Tyr：Pro：Ile：Pro＝１：１：１：１
であり、そして実施例１で使用したプロテインシーケン
サーにより分析したところ、配列番号３で表され且つ第
４番目のアミノ酸であるL-Proのカルボキシル基がアミ
ド化されたアミノ酸配列を有するペプチドであることが
判明した。また実施例１と同様にして求めたこの生成物
の薄層クロマトグラフィーのＲｆ値は０．７７２であっ
た。
チドにおいて第４番目のアミノ酸であるD-ProをL-Proに
置き換え且つ該L-Proのカルボキシル基がアミド化され
ているペプチドの場合も、配列番号２で表されるペプチ
ドの場合と同様にして、市販のベンズヒドリルアミン樹
脂（置換率０．３ｍｅｑ／ｇ）０．４ｇを用いて、これ
に順次L-Pro、Ile、ProおよびTyrを結合させて、第４番
目のアミノ酸であるL-Proのカルボキシル基がアミド化
されている最終生成物２５ｍｇを得た。そのアミノ酸組
成（モル比）は、Tyr：Pro：Ile：Pro＝１：１：１：１
であり、そして実施例１で使用したプロテインシーケン
サーにより分析したところ、配列番号３で表され且つ第
４番目のアミノ酸であるL-Proのカルボキシル基がアミ
ド化されたアミノ酸配列を有するペプチドであることが
判明した。また実施例１と同様にして求めたこの生成物
の薄層クロマトグラフィーのＲｆ値は０．７７２であっ
た。
【００２１】上記の実施例１〜４で得られたペプチドの
オピオイド活性は、いずれも次のようにして測定した。
オピオイド活性は、いずれも次のようにして測定した。
【００２２】オピオイド活性の測定法 体重２５０〜３００ｇの雄モルモットより摘出した回腸
縦走筋をアイソトニックトランスデューサー（日本光電
工業株式会社製:ＴＢ ６１２−Ｔ）に接続して０.２ｇ
の張力をかける。３６℃に保温した２ｍｌ容量のマグヌ
ス管内にＫrebs等張液（NaCl １１８ｍＭ、KCl ４.７５
ｍＭ、CaCl2 ２.５４ｍＭ、MgSO4 １.２ｍＭ、NaHCO3
２５ｍＭ、KH2PO4 １.１９ｍＭ、グルコース１１ｍＭ)
を満たしたものの中に回腸縦走筋を浸して、ボンベから
通気（０2 ９５％：CO2 ５％）を行った。このようにし
て約２時間安定化させた後、３０Ｖで０．５ｍsec の電
気刺激を与え、モルモット回腸縦走筋を電気収縮させ
た。電気収縮が安定した後、アミノペプチダーゼ阻害剤
等を含むインヒビター５０μｌを加え、配列番号２〜配
列番号４で表されるペプチドを添加し、モルモット回腸
縦走筋の電気収縮の変化をレコーダーで記録した。オピ
オイド活性はペプチド添加後の電気収縮の抑制と１０
-４Ｍナロキソン２０μｌ添加による抑制の解除によっ
て判定した。そしてモルモット回腸縦走筋の電気収縮を
５０％抑制する濃度(ＩＣ50)を測定した。
縦走筋をアイソトニックトランスデューサー（日本光電
工業株式会社製:ＴＢ ６１２−Ｔ）に接続して０.２ｇ
の張力をかける。３６℃に保温した２ｍｌ容量のマグヌ
ス管内にＫrebs等張液（NaCl １１８ｍＭ、KCl ４.７５
ｍＭ、CaCl2 ２.５４ｍＭ、MgSO4 １.２ｍＭ、NaHCO3
２５ｍＭ、KH2PO4 １.１９ｍＭ、グルコース１１ｍＭ)
を満たしたものの中に回腸縦走筋を浸して、ボンベから
通気（０2 ９５％：CO2 ５％）を行った。このようにし
て約２時間安定化させた後、３０Ｖで０．５ｍsec の電
気刺激を与え、モルモット回腸縦走筋を電気収縮させ
た。電気収縮が安定した後、アミノペプチダーゼ阻害剤
等を含むインヒビター５０μｌを加え、配列番号２〜配
列番号４で表されるペプチドを添加し、モルモット回腸
縦走筋の電気収縮の変化をレコーダーで記録した。オピ
オイド活性はペプチド添加後の電気収縮の抑制と１０
-４Ｍナロキソン２０μｌ添加による抑制の解除によっ
て判定した。そしてモルモット回腸縦走筋の電気収縮を
５０％抑制する濃度(ＩＣ50)を測定した。
【００２３】その結果、上記実施例１〜４で得られた配
列番号２〜配列番号４で表される本発明のペプチドのＩ
Ｃ50は下記の表１に示すとおりであった。参考のため、
配列番号５で表される従来既知の牛β−カゼイン由来の
オピオイドペプチドのオピオイド活性を上記と同様にし
て測定したときのＩＣ50を表１に併記する。
列番号２〜配列番号４で表される本発明のペプチドのＩ
Ｃ50は下記の表１に示すとおりであった。参考のため、
配列番号５で表される従来既知の牛β−カゼイン由来の
オピオイドペプチドのオピオイド活性を上記と同様にし
て測定したときのＩＣ50を表１に併記する。
【００２４】
【表１】 ［ペプチドのオピオイド活性(ＩＣ50)］ ペ プ チ ド ＩＣ50(μＭ) 実施例１のペプチド(配列番号２) ２.１ 実施例２のペプチド(配列番号３;但し４位はD-Pro) １.２ 実施例３のペプチド(配列番号４;但し４位はD-Val) １.６ 実施例４のペプチド(配列番号３;但し４位はL-Pro) ３０ 配列番号５のペプチド（牛β−カゼイン由来） ２４０
【００２５】表１の結果から、第４番目アミノ酸のカル
ボキシル基がアミド化されている配列番号２〜配列番号
４で表される実施例１〜３の本発明のペプチドは、配列
番号５で表される牛β−カゼイン由来のオピオイドペプ
チドに比べて、極めて低濃度でＩＣ50を達成でき、オピ
オイド活性が極めて高いことがわかる。
ボキシル基がアミド化されている配列番号２〜配列番号
４で表される実施例１〜３の本発明のペプチドは、配列
番号５で表される牛β−カゼイン由来のオピオイドペプ
チドに比べて、極めて低濃度でＩＣ50を達成でき、オピ
オイド活性が極めて高いことがわかる。
【００２６】今回測定系として用いたモルモット回腸縦
走筋には、オピオイドレセプターとして特に鎮痛、麻
酔、鎮静に関与するμレセプターが多く存在する。した
がって、上記表１の結果から、配列番号２〜配列番号４
で表されるペプチドからなる本発明のオピオイド活性剤
は、鎮痛、麻酔、鎮静に有効であることがわかる。
走筋には、オピオイドレセプターとして特に鎮痛、麻
酔、鎮静に関与するμレセプターが多く存在する。した
がって、上記表１の結果から、配列番号２〜配列番号４
で表されるペプチドからなる本発明のオピオイド活性剤
は、鎮痛、麻酔、鎮静に有効であることがわかる。
【００２７】
【発明の効果】配列番号１で表されるペプチドであって
且つそのＮ末端から４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシ
ル基がアミド化されている本発明のペプチドおよびその
塩、そのうちでも特に第４番目のアミノ酸がグリシン
（Gly）、プロリン（Pro）またはバリン（Val）である
配列番号２〜配列番号４で表される本発明のペプチドお
よびその塩は、高いオピオイド活性を有しているので、
該ペプチドおよびその塩を有効成分とする剤は極めて少
量の投与で、鎮痛、麻酔、情動、呼吸、脈動、体温、消
化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソマトスタチン
等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促進、心筋の収
縮調節機能を示す可能性があるため、鎮痛麻酔剤、催眠
剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解質の吸収促進剤、
胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤としての利用が期待で
き、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての効果が大きい。そ
して、本発明のペプチドおよびその塩は４個のアミノ酸
が配列した極めて簡単な構造を有する低分子量化合物で
あるので、化学合成によって簡単に製造することができ
る。
且つそのＮ末端から４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシ
ル基がアミド化されている本発明のペプチドおよびその
塩、そのうちでも特に第４番目のアミノ酸がグリシン
（Gly）、プロリン（Pro）またはバリン（Val）である
配列番号２〜配列番号４で表される本発明のペプチドお
よびその塩は、高いオピオイド活性を有しているので、
該ペプチドおよびその塩を有効成分とする剤は極めて少
量の投与で、鎮痛、麻酔、情動、呼吸、脈動、体温、消
化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソマトスタチン
等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促進、心筋の収
縮調節機能を示す可能性があるため、鎮痛麻酔剤、催眠
剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解質の吸収促進剤、
胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤としての利用が期待で
き、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての効果が大きい。そ
して、本発明のペプチドおよびその塩は４個のアミノ酸
が配列した極めて簡単な構造を有する低分子量化合物で
あるので、化学合成によって簡単に製造することができ
る。
【００２８】
【００２９】配列番号：１ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：modified-site 存在位置：４ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報：第４位のXaaのカルボキシル基がアミド化
【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：modified-site 存在位置：４ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報：第４位のGlyのカルボキシル基がアミド化
【００３１】配列番号：３ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：modified-site 存在位置：４ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報：第４位のProのカルボキシル基がアミド化
【００３２】配列番号：４ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：modified-site 存在位置：４ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報：第４位のValのカルボキシル基がアミド化
【００３３】配列番号：５ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
Claims (2)
- 【請求項１】 配列番号１で表されるペプチド（ただし
配列番号１においてXaaはアミノ酸を表し且つそのＮ末
端から第４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシル基がアミ
ド化されている）およびその塩。 - 【請求項２】 配列番号１で表されるペプチド（ただし
配列番号１においてXaaはアミノ酸を表し且つそのＮ末
端から第４番目のアミノ酸Xaaのカルボキシル基がアミ
ド化されている）およびその塩の１種または２種以上を
有効成分として含むオピオイド活性を有する剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23757892A JP3349528B2 (ja) | 1992-08-14 | 1992-08-14 | ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23757892A JP3349528B2 (ja) | 1992-08-14 | 1992-08-14 | ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0665287A true JPH0665287A (ja) | 1994-03-08 |
| JP3349528B2 JP3349528B2 (ja) | 2002-11-25 |
Family
ID=17017397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23757892A Expired - Fee Related JP3349528B2 (ja) | 1992-08-14 | 1992-08-14 | ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3349528B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0759772A1 (en) * | 1994-05-04 | 1997-03-05 | Innapharma, Inc. | Tri-, tetra-, penta-, and polypeptides and their therapeutic use as an antidepressant agent |
-
1992
- 1992-08-14 JP JP23757892A patent/JP3349528B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0759772A1 (en) * | 1994-05-04 | 1997-03-05 | Innapharma, Inc. | Tri-, tetra-, penta-, and polypeptides and their therapeutic use as an antidepressant agent |
| EP0759772A4 (en) * | 1994-05-04 | 1999-04-21 | Innapharma Inc | TRI-, TETRA-, PENTA- AND POLYPEPTIDES AND THEIR THERAPEUTIC USE AS AN ANTIDEPRESSANT AGENT |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3349528B2 (ja) | 2002-11-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |