JP3193763B2 - ペプチド - Google Patents
ペプチドInfo
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- JP3193763B2 JP3193763B2 JP08035392A JP8035392A JP3193763B2 JP 3193763 B2 JP3193763 B2 JP 3193763B2 JP 08035392 A JP08035392 A JP 08035392A JP 8035392 A JP8035392 A JP 8035392A JP 3193763 B2 JP3193763 B2 JP 3193763B2
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オピオイド活性を有す
るペプチドおよびその塩、並びに当該ペプチドおよびそ
の塩を有効成分として含むオピオイド活性を有する剤に
関する。
るペプチドおよびその塩、並びに当該ペプチドおよびそ
の塩を有効成分として含むオピオイド活性を有する剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術】食品中には高次の生命活動に関与する多
数の生体調節因子が存在することが広く知られるように
なっており、それらの生体調節因子を健康の増進、病気
の予防や治療、老化の予防等に積極的に利用することが
近年色々試みられるようになっている。そのような生体
調節因子としては神経系、消化吸収系、循環系、生体防
御・免疫系、内分泌系、細胞分化・増殖系等に作用する
種々の因子が知られている。それらのうちで、ある種の
食品蛋白質中には神経系に作用してモルヒネ様の麻酔、
鎮痛作用等（いわゆるオピオイド活性）を有するペプチ
ド単位が存在していることが明らかになっており、その
ようなペプチドはオピオイドペプチドと一般に称されて
いる。
数の生体調節因子が存在することが広く知られるように
なっており、それらの生体調節因子を健康の増進、病気
の予防や治療、老化の予防等に積極的に利用することが
近年色々試みられるようになっている。そのような生体
調節因子としては神経系、消化吸収系、循環系、生体防
御・免疫系、内分泌系、細胞分化・増殖系等に作用する
種々の因子が知られている。それらのうちで、ある種の
食品蛋白質中には神経系に作用してモルヒネ様の麻酔、
鎮痛作用等（いわゆるオピオイド活性）を有するペプチ
ド単位が存在していることが明らかになっており、その
ようなペプチドはオピオイドペプチドと一般に称されて
いる。
【０００３】オピオイドペプチドが消化管や消化管ホル
モン分泌に対して影響を有することが知られており、小
麦グルテンの分解物を経口投与した場合に食物の腸内滞
留時間の延長、血中のインシュリンやソマトスタチン量
の上昇等のオピオイド活性を示すということが報告され
ている。このような知見をベースとして、本発明者らは
小麦グルテンを加水分解し、その生成物からオピオイド
活性を有する配列番号２で表される新規なペプチドを分
取することができ、先に出願した（特願平３−１７１８
７９号）。
モン分泌に対して影響を有することが知られており、小
麦グルテンの分解物を経口投与した場合に食物の腸内滞
留時間の延長、血中のインシュリンやソマトスタチン量
の上昇等のオピオイド活性を示すということが報告され
ている。このような知見をベースとして、本発明者らは
小麦グルテンを加水分解し、その生成物からオピオイド
活性を有する配列番号２で表される新規なペプチドを分
取することができ、先に出願した（特願平３−１７１８
７９号）。
【０００４】
【発明の内容】 上記のような状況下に、本発明者らは
オピオイド活性を有するペプチドについて更に研究を進
めた。そして、上記した配列番号２で表されるペプチド
において、Ｎ末端から３つ目のアミノ酸であるイソロイ
シン（Ile）を、直鎖疎水性アミノ酸であるノルバリン
（Nva）またはノルロイシン（Nle）、或いは芳香族アミ
ノ酸であるトリプトファン(Trp)またはフェニルアラニ
ン(Phe)で置換したところ、その結果得られた新規なペ
プチドが、より高いオピオイド活性を有すること、しか
もその新規なペプチドが鎮痛、麻酔、鎮静に関与するこ
とが知られているμ（ミュー）レセプターの活性増強に
特に有効であることを見いだした。
オピオイド活性を有するペプチドについて更に研究を進
めた。そして、上記した配列番号２で表されるペプチド
において、Ｎ末端から３つ目のアミノ酸であるイソロイ
シン（Ile）を、直鎖疎水性アミノ酸であるノルバリン
（Nva）またはノルロイシン（Nle）、或いは芳香族アミ
ノ酸であるトリプトファン(Trp)またはフェニルアラニ
ン(Phe)で置換したところ、その結果得られた新規なペ
プチドが、より高いオピオイド活性を有すること、しか
もその新規なペプチドが鎮痛、麻酔、鎮静に関与するこ
とが知られているμ（ミュー）レセプターの活性増強に
特に有効であることを見いだした。
【０００５】 したがって、本発明は、配列番号１で表
されるペプチドまたはその塩（ただし、配列番号１で表
されるペプチドにおいて、XaaはNva、Nle、TrpおよびPh
eから選ばれる一つのアミノ酸を表す）である。
されるペプチドまたはその塩（ただし、配列番号１で表
されるペプチドにおいて、XaaはNva、Nle、TrpおよびPh
eから選ばれる一つのアミノ酸を表す）である。
【０００６】 配列番号１で表されるペプチドにおい
て、Xaaは、直鎖疎水性アミノ酸であるノルバリン（Nv
a）またはノルロイシン（Nle）、或いは芳香族アミノ酸
であるトリプトファン(Trp)またはフェニルアラニン(Ph
e)である。
て、Xaaは、直鎖疎水性アミノ酸であるノルバリン（Nv
a）またはノルロイシン（Nle）、或いは芳香族アミノ酸
であるトリプトファン(Trp)またはフェニルアラニン(Ph
e)である。
【０００７】配列番号１で表されるペプチドにおいて、
Xaaがノルバリンである本発明のペプチドは配列番号３
で表され、またXaaがノルロイシンである本発明のペプ
チドは配列番号４で表される。配列番号３で表されるペ
プチドを構成するアミノ酸の１つであるノルバリンは、
下記の化学式で示すように、バリンの側鎖メチル基が直
鎖状に結合したものであり、化学合成により製造するこ
とができる。
Xaaがノルバリンである本発明のペプチドは配列番号３
で表され、またXaaがノルロイシンである本発明のペプ
チドは配列番号４で表される。配列番号３で表されるペ
プチドを構成するアミノ酸の１つであるノルバリンは、
下記の化学式で示すように、バリンの側鎖メチル基が直
鎖状に結合したものであり、化学合成により製造するこ
とができる。
【０００８】
【化１】
【０００９】また、配列番号４で表されるペプチドの構
成アミノ酸の一つであるノルロイシンは、下記の化学式
で示すように、ロイシンまたはイソロイシンの側鎖メチ
ル基が直鎖状に結合したものであり、化学合成により製
造することができる。
成アミノ酸の一つであるノルロイシンは、下記の化学式
で示すように、ロイシンまたはイソロイシンの側鎖メチ
ル基が直鎖状に結合したものであり、化学合成により製
造することができる。
【００１０】
【化２】
【００１１】 更に、配列番号１で表されるペプチドに
おいて、Xaaがトリプトファンである本発明のペプチド
は配列番号５で表され、Xaaがフェニルアラニンである
本発明のペプチドは配列番号６で表される。そして配列
番号１において、Xaaがチロシンであるペプチドは配列
番号７で表される。
おいて、Xaaがトリプトファンである本発明のペプチド
は配列番号５で表され、Xaaがフェニルアラニンである
本発明のペプチドは配列番号６で表される。そして配列
番号１において、Xaaがチロシンであるペプチドは配列
番号７で表される。
【００１２】配列番号１に包括される本発明のペプチド
において、ペプチドを構成する５個のアミノ酸は、Ｌ−
アミノ酸およびＤ−アミノ酸のいずれでもよい。例え
ば、５個のアミノ酸の全部がＬ−アミノ酸からなってい
ても、またはＤ−アミノ酸のみからなっていてもよく、
或は５個のアミノ酸のうちのいずれかがＬ−アミノ酸で
残りがＤ−アミノ酸からなっていてもよい。いずれのペ
プチドも化学合成によって容易に製造することができ
る。
において、ペプチドを構成する５個のアミノ酸は、Ｌ−
アミノ酸およびＤ−アミノ酸のいずれでもよい。例え
ば、５個のアミノ酸の全部がＬ−アミノ酸からなってい
ても、またはＤ−アミノ酸のみからなっていてもよく、
或は５個のアミノ酸のうちのいずれかがＬ−アミノ酸で
残りがＤ−アミノ酸からなっていてもよい。いずれのペ
プチドも化学合成によって容易に製造することができ
る。
【００１３】 本発明のペプチドは、鎮痛、麻酔、鎮
静、情動、呼吸、脈動、体温、消化管機能、摂食、免
疫、インシュリンやソマトスタチン等のホルモンの分泌
調節、電解質の吸収促進、心筋の収縮調節等に関与する
いわゆるオピオイド活性を有しており、特に本発明のオ
ピオイド活性を有するペプチドは、上記したように鎮
痛、麻酔、鎮静に関与することが一般に知られているμ
レセプターの活性増強作用を有する。
静、情動、呼吸、脈動、体温、消化管機能、摂食、免
疫、インシュリンやソマトスタチン等のホルモンの分泌
調節、電解質の吸収促進、心筋の収縮調節等に関与する
いわゆるオピオイド活性を有しており、特に本発明のオ
ピオイド活性を有するペプチドは、上記したように鎮
痛、麻酔、鎮静に関与することが一般に知られているμ
レセプターの活性増強作用を有する。
【００１４】本発明のペプチドおよびその塩は、配列番
号１で包括されるアミノ酸配列を有する限りどのような
方法で製造してもよい。本発明のペプチドの製造法の例
を、Xaaがノルバリンである配列番号３のペプチドを例
に挙げて以下に説明する。
号１で包括されるアミノ酸配列を有する限りどのような
方法で製造してもよい。本発明のペプチドの製造法の例
を、Xaaがノルバリンである配列番号３のペプチドを例
に挙げて以下に説明する。
【００１５】配列番号３で表される本発明のペプチドの
製造法 米国バイオサーチ社のＳＡＭ ＴＷＯ 型自動ペプチド合
成装置を使用して同装置の標準プロトコールにしたがっ
て合成を行う。すなわち、Boc（ブトキシカルボニル)−
Leu−樹脂を４５％トリフルオロ酢酸を含むデブロック
液で処理した後に、Boc−Ser(Bzl)をジイソプロピルカ
ルボジイミドの存在下でカップリングさせる。以下、上
記と同様にデブロッキングした後に、Boc−Nva−OH、Bo
c−Pro−OHおよびBoc−Tyr（Cl2−Bzl）を順次カップリ
ングさせて、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro−Nva−Ser(Bzl)
−Leu−樹脂を得る。このペプチド樹脂を１０％アニソ
ールを含むフッ化水素中に入れて０℃で２時間撹拌す
る。フッ化水素を留去した後、エーテルで残渣を洗浄
し、３０％酢酸でペプチドを抽出する。そしてNaOHで抽
出液のｐＨを７〜８に調整して室温で１時間撹拌した
後、抽出して得た粗ペプチドをＯＤＳカラムによる高速
液体クロマトグラフィーを使用して精製することによ
り、配列番号３で表されるペプチドを得る。また、配列
番号４〜配列番号７で表されるペプチドも同様の操作に
より合成および精製することにより得られる。
製造法 米国バイオサーチ社のＳＡＭ ＴＷＯ 型自動ペプチド合
成装置を使用して同装置の標準プロトコールにしたがっ
て合成を行う。すなわち、Boc（ブトキシカルボニル)−
Leu−樹脂を４５％トリフルオロ酢酸を含むデブロック
液で処理した後に、Boc−Ser(Bzl)をジイソプロピルカ
ルボジイミドの存在下でカップリングさせる。以下、上
記と同様にデブロッキングした後に、Boc−Nva−OH、Bo
c−Pro−OHおよびBoc−Tyr（Cl2−Bzl）を順次カップリ
ングさせて、Boc−Tyr(Cl2−Bzl)−Pro−Nva−Ser(Bzl)
−Leu−樹脂を得る。このペプチド樹脂を１０％アニソ
ールを含むフッ化水素中に入れて０℃で２時間撹拌す
る。フッ化水素を留去した後、エーテルで残渣を洗浄
し、３０％酢酸でペプチドを抽出する。そしてNaOHで抽
出液のｐＨを７〜８に調整して室温で１時間撹拌した
後、抽出して得た粗ペプチドをＯＤＳカラムによる高速
液体クロマトグラフィーを使用して精製することによ
り、配列番号３で表されるペプチドを得る。また、配列
番号４〜配列番号７で表されるペプチドも同様の操作に
より合成および精製することにより得られる。
【００１６】 そして、配列番号１に包括される本発明
のペプチド、すなわち配列番号３〜配列番号６で表され
る本発明のペプチドおよびその塩は、オピオイド活性を
有しているので、それらのペプチドおよびその塩を有効
成分として含有する剤は、例えば、鎮痛麻酔剤、催眠
剤、消化管ホルモン促進剤、電解質吸収促進剤、腸管ぜ
ん動抑制による下痢改善剤等として、人間および種々の
動物に投与することができ、特に鎮痛剤や鎮静麻酔剤と
して有効である。その際に、配列番号１で包括される本
発明のペプチドおよびその塩は、１種類のみを使用して
もまたは２種以上のペプチドを含む混合物の形態で使用
してもよい。本発明のオピオイド活性を有する剤の好適
な投与量は、投与される人間や動物の年令、体重、性
別、症状、動物の種類等の種々の条件によって異なる。
のペプチド、すなわち配列番号３〜配列番号６で表され
る本発明のペプチドおよびその塩は、オピオイド活性を
有しているので、それらのペプチドおよびその塩を有効
成分として含有する剤は、例えば、鎮痛麻酔剤、催眠
剤、消化管ホルモン促進剤、電解質吸収促進剤、腸管ぜ
ん動抑制による下痢改善剤等として、人間および種々の
動物に投与することができ、特に鎮痛剤や鎮静麻酔剤と
して有効である。その際に、配列番号１で包括される本
発明のペプチドおよびその塩は、１種類のみを使用して
もまたは２種以上のペプチドを含む混合物の形態で使用
してもよい。本発明のオピオイド活性を有する剤の好適
な投与量は、投与される人間や動物の年令、体重、性
別、症状、動物の種類等の種々の条件によって異なる。
【００１７】 そして、本発明のオピオイド活性を有す
るペプチドおよびそれを含有する剤は、経口および非経
口のいずれによっても投与可能であり、更に単独で投与
しても、また製薬工業において通常使用されている固体
担体や液状担体と一緒に投与してもよく、或は他の薬剤
と混合または組合わせて使用することができる。また投
与形態は、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル、散剤、水溶
液、注射剤等の任意の形態が可能である。以下に、本発
明を例を挙げて具体的に説明するが本発明はそれらによ
って限定されない。
るペプチドおよびそれを含有する剤は、経口および非経
口のいずれによっても投与可能であり、更に単独で投与
しても、また製薬工業において通常使用されている固体
担体や液状担体と一緒に投与してもよく、或は他の薬剤
と混合または組合わせて使用することができる。また投
与形態は、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル、散剤、水溶
液、注射剤等の任意の形態が可能である。以下に、本発
明を例を挙げて具体的に説明するが本発明はそれらによ
って限定されない。
【００１８】
《実施例 １》配列番号３で表されるペプチドの合成は
以下の方法で行った。市販のBoc(ブトキシカルボニル)
−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ／ｇ)０.１６ｇと４
５％トリフルオロ酢酸および２.５％アニソールを含む
塩化メチレン２０ｍｌをバイオサーチ社のペプチド合成
装置 ＳＡＭ ＴＷＯの反応槽の中で室温で２５分間反応
させてBoc基を除去した。次にBoc基の除去されたLeu−
樹脂を塩化メチレンで洗浄し、次いで１０％のジイソプ
ロピルエチルアミンを含む塩化メチレンにより中和した
後、更に塩化メチレンで洗浄した。この樹脂に０.４Ｍ
Boc−Ser（Bzl)のジメチルホルムアミド溶液５ｍｌ、
０.４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン
溶液５ｍｌを混合して反応槽に入れて室温で２時間撹拌
下に反応させた。
以下の方法で行った。市販のBoc(ブトキシカルボニル)
−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ／ｇ)０.１６ｇと４
５％トリフルオロ酢酸および２.５％アニソールを含む
塩化メチレン２０ｍｌをバイオサーチ社のペプチド合成
装置 ＳＡＭ ＴＷＯの反応槽の中で室温で２５分間反応
させてBoc基を除去した。次にBoc基の除去されたLeu−
樹脂を塩化メチレンで洗浄し、次いで１０％のジイソプ
ロピルエチルアミンを含む塩化メチレンにより中和した
後、更に塩化メチレンで洗浄した。この樹脂に０.４Ｍ
Boc−Ser（Bzl)のジメチルホルムアミド溶液５ｍｌ、
０.４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン
溶液５ｍｌを混合して反応槽に入れて室温で２時間撹拌
下に反応させた。
【００１９】上記で得られた樹脂を、順にジメチルホル
ムアミド、塩化メチレン、ジイソプロピルエチルアミン
を１０％含有する塩化メチレン、塩化メチレンおよび塩
化メチレン／ジメチルホルムアミド混合液で洗浄して、
Boc−Ser（Bzl)−Leu−樹脂を得た。引き続き上記と同
様にしてBoc基の除去、Bocアミノ酸のカップリングを繰
り返してBoc−Tyr（Cl2−Bzl)−Nva−Ser(Bzl)−Leu−
樹脂からなる生成物を得た。
ムアミド、塩化メチレン、ジイソプロピルエチルアミン
を１０％含有する塩化メチレン、塩化メチレンおよび塩
化メチレン／ジメチルホルムアミド混合液で洗浄して、
Boc−Ser（Bzl)−Leu−樹脂を得た。引き続き上記と同
様にしてBoc基の除去、Bocアミノ酸のカップリングを繰
り返してBoc−Tyr（Cl2−Bzl)−Nva−Ser(Bzl)−Leu−
樹脂からなる生成物を得た。
【００２０】この樹脂を１０％のアニソールを含有する
フッ化水素２０ｍｌに入れて０℃で２時間撹拌してペプ
チドを樹脂から遊離させた。その後、フッ化水素を減圧
留去し、残渣を３０％酢酸で抽出し、抽出液をNaOHでｐ
Ｈを７〜８に調整した後、１時間撹拌し、この抽出液を
ナカライテスク株式会社製のオクタデシルシラン（ＯＤ
Ｓ）カラムである ＯＤＳ−Cosmosil ５Ｃ18−ＡＲを用
いた逆相クロマトグラフィーにより精製して最終生成物
２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Nva：Ser：Leu＝１：１：１：１：１であっ
た。更にアプライドシステム社製のプロテインシーケン
サー４７７−Ａ型により分析したところ、配列番号３で
表されるアミノ酸配列を有するペプチドであることが判
明した。また該生成物の薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値は、０．７２であった。
フッ化水素２０ｍｌに入れて０℃で２時間撹拌してペプ
チドを樹脂から遊離させた。その後、フッ化水素を減圧
留去し、残渣を３０％酢酸で抽出し、抽出液をNaOHでｐ
Ｈを７〜８に調整した後、１時間撹拌し、この抽出液を
ナカライテスク株式会社製のオクタデシルシラン（ＯＤ
Ｓ）カラムである ＯＤＳ−Cosmosil ５Ｃ18−ＡＲを用
いた逆相クロマトグラフィーにより精製して最終生成物
２０ｍｇを得た。そのアミノ酸組成（モル比）は、Ty
r：Pro：Nva：Ser：Leu＝１：１：１：１：１であっ
た。更にアプライドシステム社製のプロテインシーケン
サー４７７−Ａ型により分析したところ、配列番号３で
表されるアミノ酸配列を有するペプチドであることが判
明した。また該生成物の薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値は、０．７２であった。
【００２１】《実施例 ２》配列番号４で表されるペプ
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物１５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Nle：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
４で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７４であった。
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物１５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Nle：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
４で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７４であった。
【００２２】《実施例 ３》配列番号５で表されるペプ
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物２５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Trp：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
５で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７３であった。
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物２５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Trp：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
５で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７３であった。
【００２３】《実施例 ４》配列番号６で表されるペプ
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物２５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Phe：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
６で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７７であった。
チドの場合も、配列番号３で表されるペプチドの場合と
同様にして市販のBoc−Leu−樹脂(置換率０.６４ｍｅｑ
／ｇ)０．１６ｇから最終生成物２５ｍｇを得た。その
アミノ酸組成（モル比）は、Tyr：Pro：Phe：Ser：Leu
＝１：１：１：１：１であり、そして上記で使用したプ
ロテインシーケンサーにより分析したところ、配列番号
６で表されるアミノ酸配列を有するペプチドであること
が判明した。またこの生成物の薄層クロマトグラフィー
のRf値は０．７７であった。
【００２４】上記の実施例１〜４で得られた配列番号３
〜配列番号６で表されるペプチド、ならびに配列番号２
で表されるペプチドのオピオイド活性は、いずれも次の
ようにして測定した。
〜配列番号６で表されるペプチド、ならびに配列番号２
で表されるペプチドのオピオイド活性は、いずれも次の
ようにして測定した。
【００２５】オピオイド活性の測定法 体重２５０〜３００ｇの雄モルモットより摘出した回腸
縦走筋をアイソトニックトランスデューサー（日本光電
工業株式会社製：ＴＢ ６１２−Ｔ）に接続して０.２ｇ
の張力をかける。３６℃に保温した２ｍｌ容量のマグヌ
ス管内に、Ｋrebs等張液（ＮaＣl １１８ｍＭ、ＫＣｌ
４.７５ｍＭ、ＣａＣｌ2 ２.５４ｍＭ、ＭｇＳＯ4 １．
２ｍＭ、ＮａＨＣＯ3 ２５ｍＭ、ＫＨ2ＰＯ4 １.１９ｍ
Ｍ、グルコース１１ｍＭ）を満たしたものの中に回腸縦
走筋を浸して、ボンベから通気（０2 ９５％：ＣＯ2 ５
％）を行った。このようにして約２時間安定化させた
後、３０Ｖで０．５ｍsec の電気刺激を与え、モルモッ
ト回腸縦走筋を電気収縮させた。電気収縮が安定した
後、アミノペプチダーゼ阻害剤等を含むインヒビター５
０μｌを加え、配列番号２〜配列番号６で表されるペプ
チドを添加し、モルモット回腸縦走筋の電気収縮の変化
をレコーダーで記録した。オピオイド活性はペプチド添
加後の電気収縮の抑制と１０-４Ｍナロキソン２０μｌ
添加による抑制の解除によって判定した。そしてモルモ
ット回腸縦走筋の電気収縮を５０％抑制する濃度(ＩＣ
50)を測定した。
縦走筋をアイソトニックトランスデューサー（日本光電
工業株式会社製：ＴＢ ６１２−Ｔ）に接続して０.２ｇ
の張力をかける。３６℃に保温した２ｍｌ容量のマグヌ
ス管内に、Ｋrebs等張液（ＮaＣl １１８ｍＭ、ＫＣｌ
４.７５ｍＭ、ＣａＣｌ2 ２.５４ｍＭ、ＭｇＳＯ4 １．
２ｍＭ、ＮａＨＣＯ3 ２５ｍＭ、ＫＨ2ＰＯ4 １.１９ｍ
Ｍ、グルコース１１ｍＭ）を満たしたものの中に回腸縦
走筋を浸して、ボンベから通気（０2 ９５％：ＣＯ2 ５
％）を行った。このようにして約２時間安定化させた
後、３０Ｖで０．５ｍsec の電気刺激を与え、モルモッ
ト回腸縦走筋を電気収縮させた。電気収縮が安定した
後、アミノペプチダーゼ阻害剤等を含むインヒビター５
０μｌを加え、配列番号２〜配列番号６で表されるペプ
チドを添加し、モルモット回腸縦走筋の電気収縮の変化
をレコーダーで記録した。オピオイド活性はペプチド添
加後の電気収縮の抑制と１０-４Ｍナロキソン２０μｌ
添加による抑制の解除によって判定した。そしてモルモ
ット回腸縦走筋の電気収縮を５０％抑制する濃度(ＩＣ
50)を測定した。
【００２６】その結果、上記実施例で得られた配列番号
３〜配列番号６で表される本発明のペプチドのＩＣ50は
下記の表１に示すとおりであった。参考のため、配列番
号２で表されるペプチドのオピオイド活性を上記と同様
にして測定したときのＩＣ50を表１に併記する。
３〜配列番号６で表される本発明のペプチドのＩＣ50は
下記の表１に示すとおりであった。参考のため、配列番
号２で表されるペプチドのオピオイド活性を上記と同様
にして測定したときのＩＣ50を表１に併記する。
【００２７】
【表１】 ［ペプチドのオピオイド活性(ＩＣ50)］ ペ プ チ ド ＩＣ50(μＭ) 配列番号３のペプチド(本発明) ３２ 配列番号４のペプチド(本発明) ２５ 配列番号５のペプチド(本発明) １５ 配列番号６のペプチド(本発明) ３２ 配列番号２のペプチド ４０
【００２８】表１の結果から、配列番号３〜配列番号６
の本発明のペプチドは、配列番号２で表される小麦グル
テンから得られるペプチドに比べて、低濃度でＩＣ50を
達成できることがわかる。
の本発明のペプチドは、配列番号２で表される小麦グル
テンから得られるペプチドに比べて、低濃度でＩＣ50を
達成できることがわかる。
【００２９】今回測定系として用いたモルモット回腸縦
走筋には、オピオイドレセプターとして特に鎮痛、麻
酔、鎮静に関与するμレセプターが多く存在する。した
がって、上記表１の結果から、配列番号３〜配列番号６
で表されるペプチドからなる本発明のオピオイド活性剤
は、鎮痛、麻酔、鎮静に関与するμレセプターの活性増
強に特に有効であることがわかる。
走筋には、オピオイドレセプターとして特に鎮痛、麻
酔、鎮静に関与するμレセプターが多く存在する。した
がって、上記表１の結果から、配列番号３〜配列番号６
で表されるペプチドからなる本発明のオピオイド活性剤
は、鎮痛、麻酔、鎮静に関与するμレセプターの活性増
強に特に有効であることがわかる。
【００３０】一方、従来測定系として汎用されているマ
ウス輸精管では、δ（デルタ）レセプターが多く存在
し、このδレセプターは特に情動に関与することが知ら
れている。そして、マウス輸精管を使用して上記と同様
にしてＩＣ50を測定したところ、配列番号２で表される
ペプチドでは１４μＭであったのに対して、配列番号３
および配列番号４で表されるペプチドでは共に１５〜２
０μＭ、また配列番号５および配列番号６で表されるペ
プチドでは共に４０μＭであり、この点からも配列番号
３〜配列番号６で表される本発明のペプチドは、上記し
たμレセプターの活性増強作用が大きいことがわかる。
ちなみに、従来既知のオピオイドペプチドであるα−カ
ゼインエクソルフィンではマウス輸精管を使用した場合
のＩＣ50は７０μＭであり、配列番号２〜配列番号６の
ペプチドのいずれよりもオピオイド活性が低い。
ウス輸精管では、δ（デルタ）レセプターが多く存在
し、このδレセプターは特に情動に関与することが知ら
れている。そして、マウス輸精管を使用して上記と同様
にしてＩＣ50を測定したところ、配列番号２で表される
ペプチドでは１４μＭであったのに対して、配列番号３
および配列番号４で表されるペプチドでは共に１５〜２
０μＭ、また配列番号５および配列番号６で表されるペ
プチドでは共に４０μＭであり、この点からも配列番号
３〜配列番号６で表される本発明のペプチドは、上記し
たμレセプターの活性増強作用が大きいことがわかる。
ちなみに、従来既知のオピオイドペプチドであるα−カ
ゼインエクソルフィンではマウス輸精管を使用した場合
のＩＣ50は７０μＭであり、配列番号２〜配列番号６の
ペプチドのいずれよりもオピオイド活性が低い。
【００３１】
【発明の効果】配列番号１で包括される本発明のペプチ
ド、すなわち配列番号３〜配列番号６で表される本発明
のペプチドおよびその塩は、オピオイド活性を有してい
るので、該ペプチドおよびその塩を有効成分とする剤は
極めて少量の投与で、鎮痛、麻酔、情動、呼吸、脈動、
体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソマト
スタチン等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促進、
心筋の収縮調節機能を示す可能性があるため、鎮痛麻酔
剤、催眠剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解質の吸収
促進剤、胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤としての利用
が期待でき、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての効果が大
きい。そして、本発明のペプチドおよびその塩は５個の
アミノ酸が配列しただけの極めて簡単な構造を有する低
分子量化合物であるので、化学合成によって簡単に製造
することができる。
ド、すなわち配列番号３〜配列番号６で表される本発明
のペプチドおよびその塩は、オピオイド活性を有してい
るので、該ペプチドおよびその塩を有効成分とする剤は
極めて少量の投与で、鎮痛、麻酔、情動、呼吸、脈動、
体温、消化管機能、摂食、免疫、インシュリンやソマト
スタチン等のホルモンの分泌調節、電解質の吸収促進、
心筋の収縮調節機能を示す可能性があるため、鎮痛麻酔
剤、催眠剤、消化管ホルモン分泌促進剤、電解質の吸収
促進剤、胃腸輸送筋収縮による下痢改善剤としての利用
が期待でき、特に鎮痛麻酔剤、鎮静剤としての効果が大
きい。そして、本発明のペプチドおよびその塩は５個の
アミノ酸が配列しただけの極めて簡単な構造を有する低
分子量化合物であるので、化学合成によって簡単に製造
することができる。
【００３２】
【００３３】配列番号：１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３４】配列番号：２ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３５】配列番号：３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３６】配列番号：４ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３７】配列番号：５ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３８】配列番号：６ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３９】配列番号：７ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (1)
- 【請求項１】 配列番号１で表されるペプチドまたはそ
の塩（ただし、配列番号１で表されるペプチドにおい
て、XaaはNva、Nle、TrpおよびPheから選ばれる一つの
アミノ酸を表す）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08035392A JP3193763B2 (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08035392A JP3193763B2 (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05247089A JPH05247089A (ja) | 1993-09-24 |
| JP3193763B2 true JP3193763B2 (ja) | 2001-07-30 |
Family
ID=13715893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP08035392A Expired - Fee Related JP3193763B2 (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3193763B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201039839A (en) | 2009-03-27 | 2010-11-16 | Calpis Co Ltd | Composition for regulating antonomic nervous activity and method for regulating autonomic nervous |
-
1992
- 1992-03-03 JP JP08035392A patent/JP3193763B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05247089A (ja) | 1993-09-24 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |