JPH0656862A

JPH0656862A - ピンナ属由来新規化合物

Info

Publication number: JPH0656862A
Application number: JP5158052A
Authority: JP
Inventors: Daisuke Kamimura; 大輔上村; Akito Nagatsu; 明人永津; Takeharu Haino; 岳晴灰野; Tou Shiyuu; ▲とう▼ 周
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1992-06-11
Filing date: 1993-06-04
Publication date: 1994-03-01

Abstract

(57)【要約】【目的】Ｃａ²⁺チャンネル活性化作用を示し、生化学
用試薬や強心剤としての利用が期待される新規物質、ピ
ンナ属由来化合物（ピンナ属由来化合物Ａ及びピンナ属
由来化合物Ｂを提供する。【構成】ピンナ属の貝を抽出、精製して得た、ドラー
ゲンドルフ試薬に対して陽性を示し、分子量が７１１の
ピンナ属由来化合物Ａ（下式に示す部分構造を有する）
及びマウスに対する腹腔内投与で致死活性を発現するピ
ンナ属由来化合物Ｂ。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はピンナ属由来新規化合物
に関するものである。

【０００２】本化合物はテトロドトキシンと同様の性質
（試験例参照）を示し、従ってＣａ²⁺チャンネル活性化
作用及び平滑筋に対する強い収縮作用を利用して、生化
学用試薬や強心剤として期待されるものである。

【０００３】

【従来の技術】近年、海洋動物の成分検索が広く行わ
れ、特異な生物活性を有する化合物が単離された［例え
ば、オカダ酸（プロテインフォスファターゼ阻害、実験
医学Vol.8, 1211, 1214, 1220, 1227, 1232, 1238, 124
3, 1248, 1253,(1990) ）等］。一方、近年の生化学分
野の発展はめざましいが、今後も未知の生化学的作用の
機構解明分野においても、特異的かつ強力な生物活性を
有する物質は研究用試薬として重要な役割を果たすこと
が期待される。このような背景の基、本発明者は新たな
化合物を天然に求めた結果、本発明化合物を見出したも
のである。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は、沖縄産の
Pinna sp.を研究した結果、ピンナ属由来化合物Ａ及び
ピンナ属由来化合物Ｂを分離し、かつその性状を解明し
て、本発明を完成した。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は下記の性質、

【０００６】分子量：７１１組成式：Ｃ₄₁Ｈ₆₁ＮＯ₉

【０００７】¹H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ6.50(1H,s),4.
94(1H,s),4.86(1H,s),4.60(1H,d),4.30(1H,dd),4.11(1
H,m),4.06(1H,m),3.95(1H,dd),3.87(1H,d),3.72(1H,m),
3.65(1H),2.58(2H,m),2.38(1H,dd),2.22(2H,m),2.15-1.
25(30H,m),1.25(3H,s),1.25(3H,d),1.09(3H,d),1.05(3
H,d).¹³ C-NMR(CD₃OD, 125MHz)：δ16.86(q),19.91(q),20.99
(q),21.42(t),21.81(t),22.88(q),22.97(t),29.77(t),3
0.73(t),30.85(d),31.51(d),32.50(t),33.67(t),34.15
(t),35.26(d),35.54(t),35.58(t),36.00(t),39.00(t),3
9.61(d),41.71(t),44.68(d),45.11(t),46.47(t),51.83
(s),52.08(t),67.03(d),69.57(d),70.76(d),71.24(s),7
9.09(d),81.62(d),109.83(s),110.39(s),112.63(t),11
3.38(s),134.00(s),135.75(d),145.40(s),170.19(s),20
3.52(s).

【０００７】FAB-MS(m/z) ：712(M⁺+1) HRFAB-MS(m/z) ：712.4444(M⁺+1) ドラーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す、を有するピ
ンナ属由来化合物Ａ、及び下記の性質、

【０００８】¹H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ5.44-5.50(1H,
m),4.52-4.62(1H,m),4.24-4.34(m),4.14(d),4.02-4.13
(m),3.84-3.98(m),2.60-3.00(m),2.39(1H,d),2.20(m),
1.98-2.10(m),1.86-1.96(m),1.82(d),1.60-1.80(m),1.5
2-1.60(m),1.30-1.50(m),1.24(3H,s),1.23(3H,d),1.09
(3H,d),1.04(3H,m)

【００１１】マウスに対する腹腔内投与で致死活性を発
現する、ドラーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す、

【００１２】を有するピンナ属由来化合物Ｂである。本
発明化合物は、ピンナ属の貝類である例えばスエヒロガ
イ（Pinna 属）等の貝を有機溶媒中で粉砕、抽出し、更
にクロマトグラフィにより分離することにより、通常の
方法で得られる。

【０００９】粉砕、抽出に用いられる溶媒としてはエタ
ノール、メタノール、アセトン等が挙げられ、クロマト
グラフィはカラム、高速液体及び薄層クロマトグラフィ
が用いられ、カラムクロマトグラフィとしてはＴＳＫ−
Ｇ３０００Ｓの他、セファデックスＬＨ−２０、ＤＥＡ
Ｅセファデックス、逆相系のＲＰ−１８が用いられ、高
速液体クロマトグラフィとしては逆相系ＲＰ−１８等が
用いられ、薄層クロマトグラフィとしては、シリカゲル
の他、ＲＰ−１８が用いられる。

【００１０】分離にあたり、活性の追跡は、マウスに対
する腹腔内投与致死試験によった。

【００１１】以下、実施例及び試験例により更に詳細に
説明する。

【００１２】

【実施例】

実施例１スエヒロガイ（沖縄県で採集、４５ｋｇ）の剥き身
（６．５ｋｇ）を、約１０ｌのエタノールと混合して、
ブレンダで粉砕した。得られた浸漬液は１０日間冷浸し
た後、内径３０ｃｍのブフナロートで吸引濾過した。茶
褐色の濾液を減圧下ロータリエバポレータ（約４０℃）
で濃縮乾固し、この濃縮物を８０％メタノールとｎ−ヘ
キサンで分配した。８０％メタノール層を濃縮し、水と
酢酸エチルで分配し、水層を濃縮した。

【００１３】ガラスカラムにエタノールで懸濁させたＴ
ＳＫ−Ｇ３０００Ｓを充填し、溶媒を水に置換した後、
上記の濃縮した水層を通過させた。このカラムに順次、
２５％エタノール−水、５０％エタノール−水、７５％
エタノール−水、９９％エタノールを流し、５０％エタ
ノールで溶出される画分を集めて濃縮後、少量のメタノ
ール溶液とした。これをメタノールで膨潤させたセファ
デックスＬＨ−２０カラムに乗せ、メタノールで溶出
し、活性画分を集め濃縮後少量の水溶液とした。このも
のをＤＥＡＥセファデックスカラムに乗せ、０．０２Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６．９）で溶出、活性画分をそのま
まＴＳＫ−Ｇ３００Ｓ（水）に乗せ、エタノールの割合
を２５、５０、７５、９９％と順次変化させたエタノー
ル−水混合溶媒で溶出し、５０％エタノール溶出部を集
め濃縮した。逆相カラムに乗せ、６０％メタノール−水
で溶出した所、活性は２カ所に分かれて溶出された。活
性の弱い方を集め、濃縮して再度逆相カラムに乗せ、５
０％メタノール−水で溶出し活性画分を集め濃縮した。
これを逆相ＨＰＬＣ（メタノール：水：トリフルオロ酢
酸＝５０：５０：０．１）で分離、活性画分を濃縮して
再度逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水：トリフルオロ
酢酸＝３０：７０：０．１）で精製し、単一活性画分を
濃縮乾固してガラス状物質（ピンナ属由来化合物Ａ）４
ｍｇを得た。このものの物性は以下の通りであった。

【００１８】分子量：７１１組成式：Ｃ₄₁Ｈ₆₁ＮＯ₉ ¹ H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ6.50(1H,s),4.94(1H,s),4.8
6(1H,s),4.60(1H,d),4.30(1H,dd),4.11(1H,m),4.06(1H,
m),3.95(1H,dd),3.87(1H,d),3.72(1H,m),3.65(1H),2.58
(2H,m),2.38(1H,dd),2.22(2H,m),2.15-1.25(30H,m),1.2
5(3H,s),1.25(3H,d),1.09(3H,d),1.05(3H,d).¹³ C-NMR(CD₃OD, 125MHz)：δ16.86(q),19.91(q),20.99
(q),21.42(t),21.81(t),22.88(q),22.97(t),29.77(t),3
0.73(t),30.85(d),31.51(d),32.50(t),33.67(t),34.15
(t),35.26(d),35.54(t),35.58(t),36.00(t),39.00(t),3
9.61(d),41.71(t),44.68(d),45.11(t),46.47(t),51.83
(s),52.08(t),67.03(d),69.57(d),70.76(d),71.24(s),7
9.09(d),81.62(d),109.83(s),110.39(s),112.63(t),11
3.38(s),134.00(s),135.75(d),145.40(s),170.19(s),20
3.52(s).

【００１４】FAB-MS(m/z) ：712(M⁺+1) HRFAB-MS(m/z) ：712.4444(M⁺+1)。ドラーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す。

【００１５】上記のピンナ属由来化合物Ａは、そのスペ
クトル等の解析から、下式

【００１６】

【化１１】

【００１７】で表される部分構造、下式

【００１８】

【化１２】

【００１９】で表される部分構造、下式

【００２０】

【化１３】

【００２１】で表される部分構造、及び２個の下式

【００２２】

【化１４】

【００２３】で表される部分構造を有すると考えられ
る。

【００２４】また、下式

【００２５】

【化１５】

【００２６】で表される部分構造をも有すると考えられ
る。

【００２７】従って、本発明のピンナ属由来化合物Ａ
は、下式

【００２８】

【化１６】

【００２９】で表される部分構造、下式

【００３０】

【化１７】

【００３１】で表される部分構造、下式

【００３２】

【化１８】

【００３３】で表される部分構造、２個の下式

【００３４】

【化１９】

【００３５】で表される部分構造、及び下式

【００３６】

【化２０】

【００３７】で表される部分構造からなると考えられ
る。

【００３８】一方、活性の強い方の画分を集め、濃縮し
て再度逆相カラムに乗せ、６０％メタノール−水で溶出
し活性画分を集め濃縮した。これを逆相ＨＰＬＣ（メタ
ノール：水：トリフルオロ酢酸＝４５：５５：０．１）
で分離、活性画分を濃縮して再度逆相ＨＰＬＣ（アセト
ニトリル：水：トリフルオロ酢酸＝３０：７０：０．
１）で精製し、活性画分を濃縮乾固してガラス状物質
（ピンナ属由来化合物Ｂ）０．４ｍｇを得た。このも
のの物性は以下の通りであった。

【００３９】¹H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ5.44-5.50(1H,
m),4.52-4.62(1H,m),4.24-4.34(m),4.14(d),4.02-4.13
(m),3.84-3.98(m),2.60-3.00(m),2.39(1H,d),2.20(m),
1.98-2.10(m),1.86-1.96(m),1.82(d),1.60-1.80(m),1.5
2-1.60(m),1.30-1.50(m),1.24(3H,s),1.23(3H,d),1.09
(3H,d),1.04(3H,m)

【００２３】マウスに対する腹腔内投与で致死活性を発
現する、ドラーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す。

【００４０】参考例１ピンナ属由来化合物Ａ４．０ｍｇをメタノール１ｍＬに
溶解し、この溶液にジアゾメタンのエーテル溶液を１ｍ
Ｌ加えた。この混合物を室温密閉下４時間放置し、濃縮
することにより反応混合物を得た。この反応混合物をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すること
によりメチルエステル３．３ｍｇを得た。この物の物性
は以下の通りである。

【００４１】分子量：７２５組成式：Ｃ₄₂Ｈ₆₃ＮＯ₉ ¹ H-NMR(C₆D₆, 500MHz)：δ6.46(1H,s),5.00(1H,s),4.94
(1H,s), 4.30(1H,m),4.26(1H,m), 4.13(1H,dd),3.77(1
H,dd),3.68(1H,d),3.64(1H,m),3.52(1H,dd),3.42(3H,
s),3.08(1H,d),2.86(1H,dd),2.71(1H,dd),2.60-2.70(2
H,m),2.42(1H,dd),1.60-2.38(mH,m),1.40(3H,s),1.10-
1.60(mH,m),1.28(3H,d),0.86(3H,d),0.85(3H,d)¹³ C-NMR(C₆D₆, 125MHz)：δ16.70(q),20.64(q),20.87
(q),21.08(q),21.54(t),21.92(t),21.92(q),29.43(t),2
9.74(d),30.16(t),31.43(t),31.96(t),33.64(t),33.93
(t),33.97(d),36.27(t),37.44(t),38.72(t),41.03(d),4
1.38(t),43.93(d),43.93(t),47.00(t),48.74(s),51.42
(s),52.94(t),66.83(d),68.88(d),69.69(d),70.08(s),7
8.53(d),80.46(d),108.41(s),108.63(s),109.74(t),11
3.13(s),133.13(s),136.57(d),147.24(s),147.24(s),16
6.28(s),172.65(s) EI-MS(m/z) ：725(M⁺+1) HREI-MS(m/z) ：725.4525(M⁺+1)。

【００４２】試験例１マウスに対する腹腔内投与致死試験：ピンナ属由来化合
物Ａ及びＢ各々を、０．１％塩化ナトリウム及び１％ト
ゥイーン２０の水溶液に希釈し、その一部を体重１０ｇ
前後の雄のクリーンマウスの腹腔に投与する。致死まで
の経過時間が１０分間になる投与量を求め、これを１マ
ウスユニット（ＭＵ）とする。

【００４３】

【表１】

【００４４】試験例２ドラーゲンドルフ試薬発色試験：薄相クロマトグラフィ
プレートまたは濾紙上にピンナ属由来化合物ＡまたはＢ
を少量乗せ、これにドラーゲンドルフ試薬を噴霧し、発
色の様子を観察する。ピンナ属由来化合物Ａ及びＢはい
ずれも橙色に発色する。

【００２７】ドラーゲンドルフ試薬は次の（ａ）２０ｍ
ｌ、（ｂ）５ｍｌ、水７０ｍｌを混ぜて調製する。（ａ）塩基性硝酸ビスマス１．７ｇを２０％酢酸１００
ｍｌに溶解する。（ｂ）ヨウ化カリウム４０ｇを水１００ｍｌに溶解す
る。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の性質を有するピンナ属由来化合物
Ａ。分子量：７１１組成式：Ｃ₄₁Ｈ₆₁ＮＯ₉ ¹ H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ6.50(1H,s),4.94(1H,s),4.8
6(1H,s),4.60(1H,d),4.30(1H,dd),4.11(1H,m),4.06(1H,
m),3.95(1H,dd),3.87(1H,d),3.72(1H,m),3.65(1H),2.58
(2H,m),2.38(1H,dd),2.22(2H,m),2.15-1.25(30H,m),1.2
5(3H,s),1.25(3H,d),1.09(3H,d),1.05(3H,d).¹³ C-NMR(CD₃OD, 125MHz)：δ16.86(q),19.91(q),20.99
(q),21.42(t),21.81(t),22.88(q),22.97(t),29.77(t),3
0.73(t),30.85(d),31.51(d),32.50(t),33.67(t),34.15
(t),35.26(d),35.54(t),35.58(t),36.00(t),39.00(t),3
9.61(d),41.71(t),44.68(d),45.11(t),46.47(t),51.83
(s),52.08(t),67.03(d),69.57(d),70.76(d),71.24(s),7
9.09(d),81.62(d),109.83(s),110.39(s),112.63(t),11
3.38(s),134.00(s),135.75(d),145.40(s),170.19(s),20
3.52(s). FAB-MS(m/z) ：712(M⁺+1) HRFAB-MS(m/z) ：712.4444(M⁺+1)、ドラーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す。
【請求項２】下式【化１】で表される部分構造、下式【化２】で表される部分構造、下式【化３】で表される部分構造、及び２個の下式【化４】で表される部分構造を有することを特徴とする、請求項
１記載のピンナ属由来化合物Ａ。
【請求項３】下式【化５】で表される部分構造を有することを特徴とする、請求項
１記載のピンナ属由来化合物Ａ。
【請求項４】下式【化６】で表される部分構造、下式【化７】で表される部分構造、下式【化８】で表される部分構造、２個の下式【化９】で表される部分構造、及び下式【化１０】で表される部分構造からなることを特徴とする、請求項
１記載のピンナ属由来化合物Ａ。
【請求項５】下記の性質を有するピンナ属由来化合物
Ｂ。¹ H-NMR(CD₃OD, 500MHz)：δ5.44-5.50(1H,m),4.52-4.62
(1H,m),4.24-4.34(m),4.14(d),4.02-4.13(m),3.84-3.98
(m),2.60-3.00(m),2.39(1H,d),2.20(m),1.98-2.10(m),
1.86-1.96(m),1.82(d),1.60-1.80(m),1.52-1.60(m),1.3
0-1.50(m),1.24(3H,s),1.23(3H,d),1.09(3H,d),1.04(3
H,m) マウスに対する腹腔内投与で致死活性を発現する、ドラ
ーゲンドルフ試薬に対して陽性を示す。