JPH06510989A - 組織形成因子誘導による炎症反応の調節 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ６５、哺乳動物炎症反応に伴って発生する組織ダメージを緩和するための処置方 法において存用な組成物であって、モルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤の治 療上有効な濃度からなる組成物。

６６、上記組織ダ、メージが虚血性再循環傷害または高酸素症傷害に伴って発生 するものである請求項６５の組成物。

６７、上記組織ダメージが肺、心臓、腎臓、肝臓組織である請求項６５の組成物 。

６日、上記組織ダメージが移植臓器または組織である請求項６５の組成物。

明　細　書 組織形成因子誘導による炎症反応の調節光凱■五団 本発明は、一般的には、哺乳動物の組織傷害に続いて誘導される炎症反応を調節 するための方法に関する。特に、本発明は、その炎症反応に伴い、免疫細胞によ り引き起こされる組織破壊を緩和するための方法に関する。

光朋皇肯１ 組織傷害に対する生体の炎症反応は、組織機能の喪失に至るような顕著な組織破 壊を引き起こすことがある。炎症反応、例えば、組織の破壊を引き起こす免疫細 胞の作用の結果、組繊細胞へのダメージは、組織機能の低下や、関節部の疾患（ 例えばリューマチや関節炎）および腎臓、膵臓、皮膚、肺および心臓などを含む 多数の臓器の組織機能の喪失の原因となる。例えば糸球体腎炎、糖尿病、炎症性 大腸疾患、アテローム性動脈硬化症や動脈炎のような血管疾患、乾固症や皮膚炎 のような皮膚疾患等は、望ましくない急性の炎症反応と繊維化から、主に発生す ると考えられている。関節炎、乾固症、および炎症性大腸疾患を含むこれらの疾 患の多くは、慢性的な炎症性の疾患であると考えられる。損傷をうけた組織はし ばしば繊維化組織、例えば組織機能の低下した傷痕のようなｍｍに置き変わる。

皮膚移植や臓器移植の拒絶反応もまた、生体の免疫／炎症反応システムの作用に よって一時的に起こるものであると考えられる。

組織破壊をもたらす免疫細胞は、しばしば最初の組織傷害７、あるいは損傷に引 き続いて発生する。炎症反応によっておこる第二のダメージは、顕著な組織傷害 の原因となる。これらのダメージの作用をもたらす因子は、組織傷害に引き続い て起こる生体の炎症反応を結びつける。例えば、インターロイキン−１（ＩＬ− １）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなサイトカインや、スーパーオキサイドア ニオンのような酸化誘導されたフリーラジカルをあげることができる。これらの 液性因子は、接着性の好中球や内皮細胞により生産され、再循環の虚血部位に特 定される。さらに、ＴＮＦの濃度は心筋梗塞後のヒトで増加する。

種々の肺疾色は、慢性気管支炎、気腫、特発性肺繊維症、喘息を含む気道の炎症 によって特徴づけられている。肺に関係する炎症性の障害のいくつかのタイプは 、一般的には成人の呼吸困難症候群のような拡散性急性炎症反応によって特徴的 である。

炎症反応によってもたらされる別の機能障害は、例えば致死的な高濃度酸素（９ ５−１００％）に持続的に曝されることによって発生する高酸素症によって引き 起こされる反応が蓄積されて起こる。同様に、組織に流入する血液の減少（そし て組織の酸素濃度の減少または欠乏）が、炎症反応を促進する最初の組織傷害を 引き起こす。

ダメージは、酸素を必要とする哺乳動物の細胞に対して発生することが良く知ら れている。実際に、一時的（酸素欠乏症）または完全（虚血性）な血流の停止と 、引き続いた炎症反応は、ヒトの疾患において、凝集性の壊死か、または細胞死 のもつとも重大な原因となる０例えば、通常アテローム性動脈硬化の合併症は、 脳、心臓、小腸、腎臓および末梢組織での虚血性細胞傷害の結果である。腎臓の 近位毛管細胞、心筋細胞、中枢神経系の神経細胞などのように高度に分化した細 胞は、全て、これらの特殊化した機能を働かせるために必要なエネルギーである ＡＴＰを生産するために、酸素呼吸に依存している。虚血が酸素の供給を制限し て、ＡＴＰが不足した場合、影響を受ける細胞は、不可逆的傷害を受ける可能性 がある。この最初の傷害に続く炎症反応は、影響を受けた組織に対して付加的な 害を引き起こす。このような酸素欠乏症と虚血症の例は、心筋梗塞、肺栓塞、腎 臓血管閉塞、冠動脈閉塞あるいは閉塞性心不全などにおいて起こるような臓器の 一部や、生体の臓器全体のように生体に対する血液供給の部分的あるいは全体的 な停止にあたる。

虚血再４Ｕによる傷害に伴って発生する組織のダメージは、細胞に対する酸素供 給不足によって引き起こされる最初の細胞傷害と、この最初の傷害に対する生体 の反応によって引き起こされｆこダメージと同様の引き続いて発生する繰り返す 細胞傷害の両方から発生すると考えられている。再循環傷害は、周辺組織に対す る傷害と同様の、Ｗ１環器の内皮細胞に対する機能傷害をもたらすと推測される 。例えば、突発性肺繊維症では、損傷組織は肺組織の結合を蓄積して、組織の柔 軟性を抑制する。高酸素症傷害を促進する組織のダメージは、最初の傷害に対す る免疫反応によって引き起こされた毒性のある酸素代謝物の存在によって、−次 的に最初のダメージが発生するという、同様のメカニズムが続いて起こると推定 されている。

同様に、移植のための組織と臓器もまた、移植に引き続いて起こる受容体側宿主 の炎症反応をもたらした結果、組織の破壊を引き起こす作用の対象となる。最初 の破壊反応は、臓器を受容体側に移植した後に移植Ｒ器に対する循環傷害が起こ ることが、主要な原因であると最近では考えられている。

従って、組織または臓器移植の成功は、臓器の取り出しと、取り出し臓器の保存 期間と移植時の組織の活性〔即ち組織または臓器の生存性〕保持に依存している 。今日まで、肺、＠臓、心臓、肝臓のような臓器の移植を成功させるために必要 な、臓器の保持には、明らかに問題が残っている。米国特許第４．９５２．４０ ９号には、再循環の傷害を抑制するためスーパーオキサイドデスムターゼを含む リポゾームが記載されている。米国特許第３．００２．９６５号には、再循環傷 害を抑制するために公知の皿小坂活性化因子アンタゴニストであるギンコリデス の使用が記載されている。これらの因子の両方とも、酸素フリーラジカルの放出 の抑制及び／又は酸素フリーラジカルの傷害作用の抑制によって、最初に作用す ることが述べられている。

多数の特許に、移植拒否反応の抑制に免疫抑制剤を使用することが述べられてい る。米国特許！５．１０４．８５８号、５゜００８．２４６号、５，０６８．３ ２３号などを示すことができる。多くの免疫抑制剤に関する問題として、顕著な 毒性を示す副作用の出現する高投与量を与えても低い治療係数しか得られないこ とが上げられる。

リューマチおよび関節炎は、苦痛のある間接をつなぐ滑液膜の慢性的な炎症によ って特定される、一般的な疾患である。慢性的な炎症性関節症（即ちリューマチ 性関節炎）と退行性関節症（即ち関節炎）の主要な症状は、これらの影響のある 関節機能の喪失である。この機能喪失は、まず関節、軟骨、骨など主要な構造の 構成単位の最初の破壊と、そしてそれに引き続く、これら構造固有の解剖学的な 形態の喪失である。慢性疾患の症状として、関節の破壊が続き、不可逆的で且つ 永続的な関節の障害と機能の喪失が起こる。関節リューマチの治療症例の代表的 な治療法は、滑層除去、即ち滑層除去術（ジノペクトミー）の実施である。外科 的なジノペクトミーは、外科的手法それ自身のリスクと、外科医がしばしば疾患 膜の全てを取り去ることができないという事実を含めて、多くの限界がある。残 った疾色紺織は、典型的な場合再生し、手術を行って軽減させる前と同し症状を 繰り返す。

乾固は、皮膚の慢性的な炎症によって特徴付けられる未知の原因による慢性的な 、再発性の、ウロコ状の皮膚疾患である。

丘疹またはプラーク中にしばしば紅斑性の発疹と白銀色のウロコがすべての皮膚 に出現するが、通常はカカト、ヒジ、ヒザ、そして背中の下部に大部分出現する 。通常この疾患は、成人に発症するが、小児にも発症する。乾留症の愚者は、多 くは関節炎も起こしており（乾留性関節炎）、外出をさけ、死ぬほど苦しんでい る。

最近の治療方法は、コル升コステロイドの局所で病巣内への投与、局所的表皮剥 離剤投与、そして疾患部位−・のタールと紫外線の使用である。−回の治療が理 想的であるが、−回では終了しない。曇者は、数回の処置によっても、ふり返し たり、疾壺、の状態がちとに戻ることもまれではない、全身的な治療が、乾廚障 害の速やかな回復をもたらすため、抑制剤は、副作用を引き起こすようなかって 増加させた高投与量を必要としており、そして剥脱に対して、可能な限り、治療 の減衰が、障害の拡大を伴った反作用現象として起こってくる。

炎症性大腸疾患〔ＩＢＤ）は、消化管粘膜の臨床的な病態の程度を、慢性的な炎 症と粘膜の甚だしい潰瘍によって説明されている。この分類による２種類の大き な疾患は、潰瘍性大腸炎と局所性腸炎（クローン病）である。口腔粘膜炎のよう にＩＢＤとして分類されている疾患は、甚だしい粘膜の潰瘍を促進させ（しばし ば、大腸壁に浸入し、狭窄と屡孔を形成する）、激しい粘膜および亜粘膜の炎症 と浮腫を生し、繊維化を起こす（例えば、消化管の表面の酸抵抗機能を妨げるよ うな傷の組織形成）、ＩＢＤの別の形態は、局所的な回腸炎と直腸炎を含んでい る。臨床的には、連発性のＩ　Ｂ　Ｄ　５．者には激しい下痢、出血、脱水、体 重残少、発熱などの症状が現れる。疾病の予後は、良好ではなく、しばしば病理 組織の切除が必要となる。

従って、本発明の目的は、哺乳動物の、特にヒトＭ組織の、組織傷害に引き続い て起こる免疫反応に伴うダメージから保護するための方法を提供することである 。炎症反応は、組織の最初の傷害や）員傷に対する反応である。原発性の傷害は 、化学的、機械的、生物学的、免疫学的に関係している。本発明の別の目的は、 次にあげる組織破壊を起こす疾患からｍ礒を保護するだめの方法および組成物を 提供することである。組織破壊を起こす疾をとは、関節炎（リューマチ性あるい は骨関節炎）、乾留性関節炎、乾留症、皮膚炎、炎症性大腸疾患を含む慢性の炎 症性疾患チよびその他の自己免疫疾患である。さらに、本発明の別の目的は、移 植を行うための哺乳動物の＆ＩＩｗｉと臓器の生存性を促進させる方法およびそ のための組成物を提供することである。臓器移植の場合には、虚血再循環傷害に より引き起こされる組織のダメージのような免疫細胞の介在する組織破壊から移 植臓器を保護することもふくんでいる。この組織のダメージは、移植された体内 での、臓器あるいはｍ織移植後のイニシェーションと同様にして、ドナーの１１ １１Ｍまたは、その臓器の取り出して輸送する間に生しる。

本発明の別の目的は、哺乳動物の組織に対する酸素の奪取に引き続いて起こる、 哺乳動物中での虚血性再循環傷害を起こす組織傷害を緩和する方法を提供するこ とである０本発明の他の目的は、酸素欠乏症あるいは心筋梗塞、肺栓塞、腎臓血 管閉塞、冠動脈閉塞または閉塞性心不全のような疾患に引き続いて起こる虚血か ら発症する、ヒトの虚血性再循環傷害によって起こる組織のダメージを緩和する 方法を提供することである。さらにまた、本発明の目的は、例えば毒性のある高 酸素濃度における、高酸素誘発性組織傷害より引き起こされる組織のダメージを 緩和するための方法に関する。

さらに、本発明の目的は、ヒトにおいて組織傷害に引き続いて起こる、一般的、 特徴的に誘導された免疫反応を調節するための方法を提供することである。

本発明のこれらのそしてその池の目的および方法は、以下の説明、図、クレーム によって明白乙こ示される。

発那夕ＪＬ！’７一 本発明は組織傷害に続く炎症反応活性化に伴って起こる組織破壊作用を緩和する ための方法を提供する。本発明は、組織傷害の場所にあるいは組織傷害の予測さ れる場所に、炎症反応の徂ｖ５破壊作用を実實的に阻害または減少させるために 必要な組織形成性蛋白質（モルフオゲンとして以下定義する）の治療有効量を損 傷を受けた組織に供給するステップからなる。

一つの実例として、本発明は、組成と治療の処置の方法に特徴がある。この方法 は、Ｍｉ組織害のある部位、あるいは傷害の予測される部位に、以下に定義する 組織形成蛋白質（モルフオゲン）の治療有効量を、ダメージを受けた＆ｌＩ織を 修復し、そして／または、発生するダメージを阻害して、生体の炎症反応で引き 起こされたｍｍ破壊作用を阻害するに充分な濃度で、−回に、哺乳動物に投与す るステップからなる。

さらに別の実例において、本発明は、炎症反応の組織破壊作用からＶ＆器とｍｍ を保護するための治療方法と組成物に特徴カベある。治療方法と組成物には、哺 乳動物への投与を含む。さらにこの投与は、ｍｍの傷害部位あるいはこのような 傷害力く予セ、される部位に、炎症反応により引き起こされる組織破壊作用から 組織を保護するために、呻乳類への、充分な量の物質を生体内において、生体内 因性モルフォゲンの治療上有効な濃度をインビボで上昇させる化合物を投与する ことを含んでいる。またこの投与は、損傷組織の修復および／または損傷組織の 発生を防止することも含む。これらの化合物は、モルフォゲン促進削としてここ に引用しており、哺乳動物に投与した場合に、正常な反応性を有している組織や 臓器の細胞に作用し、モルフォゲンの生産及び／ま１こはモルフォゲンの分泌を 起こすことができ、モルフォゲンの内因性のレベルを高めることができるもので あることが理解される。例えば、この物質は内因性のモルフォゲンの発現および ／又は分泌を促進することにより作用するものである。

ここに実例を示すように、「虚血再循環傷害」の用語は、細胞の酸素欠乏によっ て引き起こされる傷害と細胞が再度酸素にさらされて起こる炎症反応によって続 いて発生するダメージを意味する。またここに実例を示すように、「低酸素誘発 性傷害」の用語は、毒性を示す高濃度酸素に対して炎症性反応を起こして誘発さ れたＭｉ組織害を含み、９５％以上の酸素濃度の致死的な状態に曝されて組織が ダメージを受けた状態を意味する。さらに、ここで用いるように、「毒性酸素濃 度」は、酸素の致死性低酸素濃度（完全な酸素欠乏も含む）と致死性高酸素濃度 の両方によって誘導される組織ダメージを起こすことを意味する。

「緩和」という表現は、特に免疫細胞介在性の組織破壊のような、望ましくない 組織破壊からの防御や破壊の減少及び／または消去を意味する。＆［ｌ織破壊は 最初の組織傷害に対する反応である。この組織傷害のきっかけは機械的、化学的 、免疫的なものである。生きている組織や臓器の「生存性の増強」は、ここでは 、特に免疫細胞介在性の組織死のような組織の死の結果として臓器機能や＆１１ 織喪失などによる機能の低下や減少を抑制することを意味する。「移植された」 生育している組織は、移植組織（骨髄移植の例のような場合）そして組織移植の 両方を示している。最後に、「酸素フリーラジカル」阻害剤は、酸素フリーラジ カルの組織に与えるダメージ作用を阻害することおよび／またはその放出を抑制 できる物質を示している。

本発明の一つの実施例では、組織に対する酸素欠乏とそれに引き続く再循環から 起こる哺乳動物組織の虚血性再Ｗ１環傷害を緩和するための方法と組成物が提供 される。別の実施例では、高酸素症によっておこる組織破壊作用の緩和のための 方法が提供される。さらに他の実施例では、本発明は、虚血−再循環傷害からの 防御を含み、特に生存する移植ｍｍと臓器の生存性を保持するｆこめの方法と組 成物を提供する。さらにまた、他の実施例においては、本発明は、慢性の炎症疾 患の組織破壊作用から組織や臓器を保護するための方法を提供する。この慢性の 炎症性疾患としては、関節炎、乾唐症、直接性皮膚炎を含む皮膚炎、ＩＢＤ、消 化管の慢性炎症疾、色、糖尿病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ） 、その他の自己免疫性神経系疾吃等の公知の自己免疫疾患をあげることができる 。

本発明の一つの実例として、モルフオゲンが、組織に対する最初の傷害に引き続 いて起こり、傷害を受けた組織に対して供給される。モルフォゲンは、ダメージ を受けた組織に対して注射や、特徴的な投与方法で直接的に投与される。また経 口や経静脈的な経路で全身的に投与される。さらにまた、上記したように、内因 性のモルフォゲンの発現及び／または分泌を促進することのできる薬剤もまた、 哺乳動物に対して投与できる。好ましくは、薬剤は傷害を受けた組織に作用して 細胞中の内因性モルフォゲンを促進することができる。さらにモルフオゲンの発 現および／または分泌は離れた組織にも影響し、循環系を介してダメージを受け た組織に対してモルフォゲンが到達する。

本発明の別の実例では、モルフォゲンは免疫細胞介在性組織破壊の危険性のある 組繊に供給される。このような組織の例として、組織の移植および組織または臓 器移植が含まれる。この場合、組織に対する血流を阻害するかまたは炎症反応を 誘導するようなその他の方法である外科的な方法か、または臨床的な方法により 、いずれかのＭｉ織あるいは臓器の移植が行われる。

ここでは、モルフォゲンまたはモルフォゲン誘導物質は傷害の誘導に対して先行 して愚者に投与される。この場合には、危険性に対する細胞保護作用を起こす予 防物質として使用される。

移植に際しては、移植する組繊または臓器はあらかじめ予防的にモルフォゲンに 曝しておくことが好ましい。特に好ましくは、モルフォゲンまたはモルフォゲン 促進物質からなる組成物を組織または臓器の供給者に投与することにより、その 供給者から取り出すまでに、組織または臓器はあらかじめモルフォゲンに曝して おき、さらにまた、ドナーからひとたび取り出したときは、臓器またはｍ織はモ ルフォゲンまたはモルフォゲン促進物質を含む予備処理液に入れて置く、さらに 、好ましくは臓器の移植を受けるものは、移植前か移植と平行してモルフォゲン またはモルフォゲン促進剤の投与を受けておく。いずれの場合も、モルフォゲン またはモルフォゲン促進剤は、危険のある組織に直接的に投与する。注射や、組 織に対して特徴的な投与法を用いて行うが、経口や経静脈投与による全身的な投 与であっても良い。

ここで記載するモルフォゲンは、移植するための、生きているどのような組織、 臓器の生存性を促進するにも有用であると推測される０モルフォゲンは、肺、心 臓、肝臓、腎臓、膵臓などの移植物に特に利点があって使用される。この場合、 移植物および／または骨髄、皮膚、消化管粘膜およびその他の生きている組織の 移植も同様である。

、愚者が、糖尿病、関節炎、乾量症、ＩＢＤ、、ｉよび類似の疾患のような慢性 炎症性疾患である場合、モルフォゲンまたモルフオゲン促進剤は、発熱の持続す る疾患に伴う組織のダメージの発生を予防及び／または抑制するために予防剤と して、好ましくは、一定間隔で投与を行う。上記のように、モルフォゲンま１こ モルフォケン促進則は、危険の発生する組織に直接投与される。注射や、組繊に 対して特徴的な投与法を用いて行うが、経口や経静脈投与による全身的な投与で あっても良い。

本発明における有用なモルフォゲンは骨形成蛋白質として本来は特定される蛋白 質である。０Ｐ−１，０Ｐ−２、およびＣＢ〜ＩＰ蛋白質、同様なアミノ酸配列 を持つ蛋白質として、ＤＰＰ（ノヨウジョウハエ由来）、Ｖｇｌ（ツメガエル由 来）、■ｇｒ−１（マウス由来、米国特許５．０１１＋６９１　、Ｏｐｐｅｒｍ ａｎ　他）、ＧＤＦ−１（７ウス由来、Ｌｅｅ　（１９９１）　ＰＮＡＳ　８８ ：　４２５０−４２５４）、これらの蛋白質の配列は配列表配列番号５−１４と 表２に示した）。そして最近６０Ａの蛋白質が特定された（ショウジヨウバエ由 来、配列表配列番号２４、Ｗｈａｒｔｏｎ他、１９９１、ＰＮＡＳ　８８：９２ １４−９２１８）。ＴＧＦβスーパーファミリーに属する蛍白質のメンバーは、 Ｃ末端領域のアミノ酸配列に高いホモロジーを有する。蛋白質は、典型的な３０ 残基Ｎ末端シグナルペプチド配列の結合した、前駆体として翻訳され、Ｐｒｏ　 ドメインによって切断されて成熟蛋白質として得られる。シグナルペプチドは、 翻訳俊速やかに切断され、Ｖａｎ　Ｈｉｊｎｅの方法（１９８６，Ｎｕｃｌｅｉ ｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ　１４：４６８３−４６９１）で予想されるア ミノ酸配列のものを得ることができる。以下の表Ｉは、今日特定されている種々 のモルフォゲンを示す。その由来の分類名と配列番号、全長アミノ酸を記載した 出典を示しているが、配列表はここには示さない。

これらの文献の開示内容は、引用によって本発明と一体化されている。

表１ ＯＰ−１０Ｐ−１蛋白質をコートするＤＮＡ配列の全てまたは一部から発現され たＭｉ繊構築性活性蛋白質のグループであることが一般的にいわれている。相同 性および種の変化を含む。ヒ）ＯＰ−１（ｈＯＰ−１，配列表配列番号５、成熟 蛋白質アミノ酸配列）マウス０Ｐ−１（彌０Ｐ−１゜配列表配列番号６、成熟蛋 白質アミノ酸配列）保存された７つのシスティン骨格が配列表配列番号５．６の ３８と１３９番目の残基によって特定されている。

蛋白質の全長をコードするｃＤＮＡ配列と全アミノ酸配列が配列表配列番号１６ と１７（ｈＯＰ−１）および配列表配列番号１８と１９（ｍＯＰ−１）に示され ている。成熟蛋白質は残基２９３−４３１（ｈＯＰ−１）と２９２−４３０（ｍ ＯＰ−１）に示されている。蛍白質のプロ領域は切断され、成熟蛋白質が得られ る。組織構築性蛋白質は残基３Ｏ−２９２（ｈＯＰ−１）と残基３０−２９１３ ０−２９１（によって必然的に特定される。

ＯＰ　−２０Ｐ−２蛋白質をコードするＤＮＡ配列の全てまたは一部から発現さ れた組織構築性活性蛋白質のグループであることが一般的にいわれている。相同 性および種の変化を含む、ヒト０Ｐ−２（ｈＯＰ−２，配列表配列番号７、成熟 蛋白質アミノ酸配列）マウス０Ｐ−２（ｍＯＰ−２゜配列表配列番号８、成熟蛍 白質アミノ酸配列）保存された７つのシスティン骨格が配列表配列番号７．８の ３８と１３９番目の残基によって特定されている。

蛋白質の全長をコードするｃＤＮＡ配列と全アミノ酸配列が配列表配列番号２ｏ と２１（ｈＯＰ−２）および配列表配列番号２２と２３（ｍＯＰ−２）に示され ている。成熟蛋白質は残基２６４−４０２（ｈＯＰ−２）と２６１−３９９（ｍ ＯＰ−２）ニ示すレテいる。蛋白質のプロ領域は切断され、成熟蛍白質が得られ る。ｍ織横築性蛋白譬は残基１８−２６３　（ｈＯＰ−２）と残基１８−２６０ １８−２６０（によって必然的に特定される。

（両方の０Ｐ−２蛋白質とも上流２１残基に別の切断部位を有する。） ＣＢ〜Ｉ　Ｐ　２　ＣＢＭＰ２蛋白質をコードするＤＮＡ配列の全てまたは一部 から発現された組１ｔｌ築性活性蛋白質のグループであることが一般的にいわれ ている。相同性および種の変化を含む。ヒトＣＢＭＰ２Ａ（ＣＢＭＰ２Ａ（ｆｘ ）配列表配列番号９、ヒトＢＭＰ２Ｂ（ＣＢＭＰ２Ｂ（ｆｘ）配列表配列番号１ ０゜蛋白質の全アミノ酸配列はＢＭＰ２ＡおよびＢＭＰ２ＢあるいはＢＭＰＡお よびＢ？ＩＰ２の文献、ＷｏｚｅｎＬ　ｅＬ　ａｌ。

（１９８８）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４２：１５２８−１５３４を参照のこと。Ｂ ？ＩＰ２（ＢＭＰ２Ａ）蛋白質のプロ領域は残基２５−２４８または残基２５− ２８２で切断される。成熟蛋白質の領域は２４９−３９６または２８３−３９６ である。Ｂ門Ｐ４　（Ｂ門Ｐ２Ｂ）蛋白質のプロ領域は残基２５−２５６または 残基２５−２９２で切断される。

成熟蛍白質の領域は２５７−４０８または２９３−４０８である。

ＤＰＰ（ｆｘ）　ショウジョウバよりＰＰ遺伝子によってコードされている蛋白 質を参照し、保存された７つのシスティン骨格（配列表配列番号１１）を特定し た。全長の蛋白質アミノ酸配列はＰａｄｇｅｔｔ、ｅｔ　ａｌ、（１９８７）　 Ｎａｔｕｒｅ３２５：８１−８４に示されている。蛋白質のプロ領域は残基４５ ６のシグナルペプチドから延長されている。成熟蛋白質の領域は残基４５７−５ ８８で特定されている。

Ｖｇｌ（ｆｘ）　ツメガエルＶｇｌ遺伝子によってコードされている蛋白質を参 照し、保存された７つのシスティン骨格（配列表配列番号１２）を特定した。全 長の蛋白質アミノ酸配列は−ｅｅｋｓ（１９８７）　Ｃｅ１ｌ　５１：８６１− ８６７　ニ示すれている。蛋白質のプロ領域は残基２４６のシグナルペプチド切 断部位から延長されている。成熟蛋白質の領域は残基２４７−３６０で特定され ている。

Ｖｇｒ−１（ｆｘ）　マウスＶｇｒ−１遺伝子によってコードされている蛋白質 を参照し、保存された７つのシスティン骨格（配列表配列番号１３）を特定した 。全長の蛋白質アミノ酸配列はＬｙｏｎｓ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）　Ｐ ＮＡＳ　８６：４５５４−４５５８に示されている。蛋白質のプロ領域は残基２ ９９のシグナルペプチド切断部位がら延長されている。

成熟蛋白質の領域は残基３０３〜４３８で特定されている。

ＧＤＦ−１（ｆｘ）　ヒトＧＤＦ−１遺伝子によってコードされている蛋白質を 参照し、保存された７つのシスティン骨格（配列表配列番号３２）を特定した。

蛋白質のプロ領域は残基２１４のシグナルペプチド切断部位から延長されている 。成熟蛋白質の領域は残基２１５−３７２で特定されている。

６０Ａ　６０Ａ蛋白質（配列表配列番号２４、全アミノ酸配列をコードするＤＮ Ａ配列が示されている。）をコードしているＤＮＡ配列（ショウジヨウバエ６０ Ａ遺伝子）の一部または全部より発現Ａｌｌ織構築性活性蛋白質を参照した。６ ０＾（ｆｘ）は保存された７つのシスティン骨格（配列表配列番号２４の残基３ ５４から４５５）を特定する蛍白配列を参照した。蛋白質のプロ領域は、残基３ ２４のシグナルペプチド切断部位から延長されている。成功蛋白質は残基３２５ −４５５で特定される。

ＢＭＰ３（ｆｘ）　ヒトＢＭＰ３遺伝子によってコードされている蛋白質配列を 参照し、保存されている７つのシスティン骨格を特定した（配列表配列番号２６ ）、全長の蛋白質アミノ酸配列は−ｏｚｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、（１９８Ｂ）　５ ｃｉｅｎｃｅ　２４２：１５２８−１５３４に示されている。蓋白質のプロ領域 は残！２９０のシグナルペプチド切断部位から延長されている。成熟蛋白質の領 域は残基２９１−４７２で特定されている。

ＢＭＰ５（ｆｘ）　ヒトＢ！ＩＰ５遺伝子によってコードされている蛋白質配列 を参照し、保存されている７つのシスティン骨格を特定した（配列表配列番号２ ７）、全長の蛋白質アミノ酸配列はＣｅ１ｅｓｔｅ、ｅｔ　ａｌ、＜１９９１） 　ＰＮＡＳ　８７：９８４３−９８４７に示されている。蛋白質のプロ領域は残 基３１６のシグナルペプチド切断部位から延長されている。

成熟蛋白質の領域は残基３１７−４５４で特定されている。

ＢＭＰ６（ｆｘ）　ヒトＢ？ＩＰ６遺伝子によってコードされている蛋白質配列 を参照し、保存されている７つのシスティン骨格を特定した（配列表配列番号２ ８）、全長の蛋白質アミノ酸配列はＣｅ１ｅｓｔｅ、ｅｔ　ａｌ、（１９９０） 　ＰＮＡＳ　８７：９８４３−９８４７に示されている。蛋白質のプロ領域は残 基３７４のシグナルペプチド切断部位から延長されている。

成熟蛋白質のＳ■域は残基３７５−５１３で特定されている。

０Ｐ−２蛋白質はこの領域に付加的なシスティン残基を持ち（残基４１　配列表 配列番号７および８）、このファミリーのその他の蛋白質とおなし保存されたシ スティン骨格を持っている。ＧＤＦ−１は保存された骨格（配列表配列番号１４ の残基４４−４７）に４個のアミノ酸が挿入されている。しかしこの挿入は、折 れ曲がり構造においてはンスティンの相互関係を阻害しない、さらにＣＢＭＰ２ 蛋白質は蛋白質ィン骨格からアミノ酸−個が欠失している。

モルフォゲンは還元すると失活する。しかし、ホモダイマーとして酸化するか、 本発明のその他のモルフォゲンと組ミ合ゎ　゛せて酸化すると活性化される（ヘ テロダイマーとして）。ここに示したように、モルフォゲンは一組のポリペプチ ド鎖からなる２１体蛋白質であり、それぞれのポリペプチド鎖は、配列表配列番 号５の残基４３−１３９によって特定されるＣ末端側６個のシスティン骨格から なり、これらのシスティンは配列上は等価であり（ＨＪち、配列中システィンの 直列的な位１を変更して、アミノ酸の挿入や欠失を行っても折れ曲がり構造は変 わらない）、このように、ポリペプチド鎖がおれまがり、ポリペプチド鎖の１対 からなっている２量体蛋白質の特性は、目的とする３次元構造をとることができ る。この場合、ここに定義するようにモルフォゲンとして蛋白質が活性であるよ うに、蛋白質が鎖間または鎖内のジスルヒド結合を形成することも含んでいる。

特徴的な、二とには、モルフォゲンは通常、組織構築的に許容される環境では、 続いて生物学的機能の全てを可能にする。未分化細胞の増殖促進。未分化細胞の 分化促進。分化細胞の増殖促進。

形質転換細胞の再分化を含む分化細胞の成長と維持の補助。

さらに、これらのモルフォゲンは、好ましい環境条件で関係した細胞の再分化を 誘導できることが望ましい。

好ましい一つの実例において、本発明のモルフオゲンは一般的なアミノ酸配列の ２種の内の１つからなる。一般配列１（配列表配列番号ｌ）または一般配列２（ 配列表配列番号２）である、　Ｘａａは２０の天然型り一部αアミノ酸またはそ の誘導体の一つを示している。一般配列１は保存された６つのシスティン骨格か らなり、そして一般配列２は０Ｐ−２で特定される付加的なシスティンを付けた 保存された６つのシスティン骨格からなる（配列表配列番号２、残基３６）、別 の好ましい実例では、この配列はＮ末端に次の付加配列を結合させたものからな る。

Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　（配列表配列番号１５）一般配列に 先行している好ましいアミノ酸配列は次のものを含む。一般配列３（配列表配列 番号３）、一般配列４（配列表配列番号４）、一般配列５（配列表配列番号３０ ）、一般配列６（配列表配列番号３１）、配列リストは以下に示す。これらの一 般配列は、これらのアミノ酸配列と同様にして、表１１に示したこのモルフォゲ ンの種々の選択されるメンバーの中のホモロジーに適応させている。特徴的なこ とに、−Ｓ配列３と４は表ＩＩと配列表配列番号５−１４で特定される中に存在 している次の蛍白質のアミノ酸配列で合成される。ヒ）ＯＰ−１（ｈＯＰ−１， 配列表配列番号５および１６−１７）、マウスＯＰ−１（ｍＯＰ−１，配列表配 列番号６および１Ｂ−１９）、ヒトおよびマウス０Ｐ−２（配列表配列番号７． ８および２Ｏ−２２）、ＣＢＭＰ２Ａ　（配列表配列番号９）、ＣＢＭＰ２Ｂ　 （配列表配列番号１０）　、ＤＰＰ（ショウジゴウバエ由来、配列表配列番号１ １）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表配列番号１２）　、　Ｖｇｒ−Ｈマウ ス由来、配列表配列番号１３）　、ＧＤＦ−１（マウス由来、配列表配列番号１ ４）、一般配列は、配列中の可変位置の可変性残基と同様に、表ＩＩの配列によ って明示されたアミノ酸配列を含んでいる０分子間、分子内ジスルヒド結合を形 成させることができ、そして蛍白質の３次構造に影響を及ぼす確実なりリテイ力 ルアミノ酸を含有させ、好ましいシスティンを与えるように、これらの一般配列 は、一般配列３または４の４１または４６位の付加的システィンを変えることが できる。

一般配列３ Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔ ｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　ＸａａＸａａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｇｌ ｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｌａ】５２０ Ｘａａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐ ｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ 　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ 　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　ＸａａＸａａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃ ｙｓ　ＸａａここでＸａａは以下に示すアミノ酸の１またはそれ以上の群から特 定的に、選択されたものである。　Ｒｅｓ、は残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味してお り、ｒｅｓ、４でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ＋　ＡｓｐまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、６ でのＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｇｉｎ、ＳｅｒまたはＬｙｓ）。ｒｅｓ、７でのＸａａ ＝　（ＡｓｐまたはＧｌｕ）。

ｒｅｓ、８でのＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｔ）。ｒｅｓ　、　Ｌ　ＬでのＸ ａａ＝（Ｇｌｎ、Ｌｅｕ＋Ａｓｐ、）ｌｉｓ、またはへｓｎ）。ｒｅｓ、　１２ でのＸａａ＝　（Ａｓｐ、　Ａｒｇ、またはＡｓｎ）。ｒｅｓ、１４でのＸａａ ＝　（Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、１５でのＸａａ＝　（Ｉ　ｌｅまたは Ｖａｌ）。

ｒｅｓ、　１８でのＸａａ＝（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏまたは Ａｒｇ）、　ｒｅｓ、２０でのＸａａ＝　（ＴｙｒまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、２ １でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、ＬｅｕまたはＧｉ ｎ）。ｒｅｓ、２３でのＸａａ＝　（Ｔｙｒ、　ＡｓｎまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ 、２６でのＸａａ＝（Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、ＡｓｐまたはＧｌｎ）。ｒｅｓ 、２８でのＸａａ−（Ｇｌｙ、　Ｌｙｓ。

Ａｓｐ　またはＧｌｎ）。ｒｅｓ、３０でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｔ、Ｐｒｏ またはＧｌｎ）。ｒｅｓ、３１でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　ＬｅｕまたはＴｙｒ ）。ｒｅｓ、３３でのＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、３４でのＸ ａａ＝　（＾Ｓｎｌ＾ｓｐ、ＡｌａまたはＴｈｒ）。ｒｅｓ、３５でのＸａａ＝ （Ｓｅｒ、Ａｓｐ＋ＧＩｕ、ＬｅｕまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、３６でのＸａａ ＝（Ｔｙｒ、Ｃｙｓ＋Ｈｉｓ、　Ｓｅｒまたはｌ１ｅ）、　ｒｅｓ、３７でのＸ ａａ−（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＧｌｙまたはＬｅｕ）。

ｒｅｓ、３８でのＸａａ＝　（Ａｓｎまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、３９でのＸａ ａ＝（Ａｌａ、ＳｅｔまたはＧｌｙ）、　ｒｅｓ、４０でのＸａａ＝　（Ｔｈｅ 、　Ｌｅｕまたは５ｅｔ）、　ｒｅｓ、４４でのＸａａ−（ＩｌｅまたはＶａｌ ）、　ｒｅｓ、４５でのＸａａ−（ＶａｌまたはＬｅｕ、）、　ｒｅｓ、４６で のＸａａ＝　（ＧｌｎまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、４７でのＸａａｇ（Ｔｈｒ、Ａ ｌａまたは５ｅｒ）　ａｒｅｓ、４９でのＸａａ＝（Ｖａｔまたは門６ｔ）、　 ｒｅｓ、５０でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、５１でのＸａａ＝ （Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ＋Ａ１ａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５２で のＸａａ＝　（Ｉ　ｌｅ、　Ｍｅｔ、　Ａｓｎ＋　ＡｌａまたはＶａｌ）、ｒｅ ｓ、５３でのＸａａ−（＾ｓｎ＋Ｌｙｓ、ＡｌａまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、５ ４でのＸａａ＝　（Ｐｒｏまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、５５でのＸａａ＝　（Ｇ ｌｕ、　Ａｓｐ、　Ａｓｎ＋　またはＧｌｙ）、　ｒｅｓ、５６でのＸａａ−（ Ｔｈｒ、　Ａｌａ、　Ｖａｔ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、ＳｅｒまたはＡｌａ） 、　ｒｅｓ、５７でのＸａａｇ（Ｖａｌ＋Ａｌａ＋　またはＬｙｓ）。ｒｅｓ、 ５ＢでのＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、５９でのＸａａ＝　（Ｌ ｙｓまたはＬｅｕ）、ｒｅｓ、６０でのＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｌａ）。ｒ ｅｓ、６３でのＸａａ＝（Ａｌａまた５まＶａｌ）。ｒｅｓ、６５でのＸａａ＝ 　（ＴｈｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６６でのＸａａ＝（Ｇｉｎ、Ｌｙｓ、Ａ ｒｇまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、６７でのＸａａ＝（Ｌｅｕ、Ｍｅｔ＋　または Ｖａｌ）。ｒｅｓ　、　６ＢでのＸａａ＝　（Ａｓｎ、　ＳｅｒまたはＡｓｐ） 。ｒｅｓ、６９でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｐｒｏまたは５ｅｔ）。ｒｅｓ　、　７ ０でのＸａａ＝　（Ｉ　Ｉｅ、　ＴｈｒまたはＶａｌ）。

ｒｅｓ、７１でのＸａａ＝　（ＳｅｔまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、７２でのＸａａ ＝（ＶａｌまたはＭｅｔ）。ｒｅｓ、７４でのＸａａ＝　（ＴｙｒまたはＰｈｅ ）、　ｒｅｓ、７５でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　ＴｙｒまたはＬｅｕ）。ｒｅｓ 、７６でのＸａａ＝　（ＡｓｐまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、７７でのＸａａｇ（＾ ｓｐ、Ｇｌｕ＋Ａｓｎまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ　、　７８でのＸａａ＝（Ｓｅｔ 、Ｇｌｎ、ＡｓｎまたはＴｙｒ）。ｒｅｓ、７９でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、　Ａ ｓｎ＋　ＡｓｐまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、８０でのＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｔｈｒま たはＬｙｓ）。ｒｅｓ、８２でのＸａａ＝（ｌｉｅまたはＶａｌ）、ｒｅｓ。

８４でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、８５でのＸａａ＝（Ｌｙ ｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎまたは旧Ｓ）。ｒｅｓ、８６でのＸａａ＝　（Ｔｙｒまたは 旧ｓ）、　ｒｅｓ、８７でのＸａａ−（＾ｒＬＧｉｎまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ 、８８でのＸａａ−（Ａｓｎ、ＧｌｕまたはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、９０でのＸａ ａ＝（Ｖａｔ、ＴｈｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａｇ　（＾ｒｇ ＋ＬｙＳ＋ＶａＬ＾ｓｐまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、９３でのＸａａ−（Ａｌａ、 ＧｌｙまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、９７でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｒｇ）。

一般配列４ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　 ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘ ａａＸａａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ 　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐｒｏ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　へ ｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　ＸａａＸａａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　 ＸａａここでＸａａは以下に示すアミノ酸の１またはそれ以上の群から特定的に 、選択されたものである。　Ｒｅｓ、は残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味しており、ｒ ｅｓ　、　２でのＸａａ−（ＬｙｓまたはＡｒｇ）　、　ｒｅｓ、３でのＸａａ −（ＬｙｓまたはＡｒｇ）　、　ｒｅｓ、４でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｒｇ ）、　ｒｅｓ、６でのＸａａ＝　（Ｇｌｕ、　Ｓｅｒ、　Ｈｉｓ、　Ｇｌｙ、　 ＡｒｇまたはＰｒｏ）、　ｒｅｓ、９でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧ ｌｕ）、　ｒｅｓ、１１でのＸａａ＝　（＾ｒｇ、Ｇｉｎ、ＳｅｒまたはＬｙｓ ）　ｅｒｅｓ、１２でのＸａａ＝　（ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、１３で のＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、　１６でのＸａａ＝（Ｇｌｎ、 Ｌｅｕ、Ａｓｐ］ｉｓまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、１７でのＸａａ＝　（Ａｓｐ 、　ＡｒｇまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、１９でのＸａａ＝（ｌｌｅまたはＶａｌ） 、　ｒｅＳ、２０でのＸａａ＝（ｌｉｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、２３でのＸ ａａ＝（Ｇｌｕ＋ＧＩｎ＋Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ）、ｒｅｓ、２ ５でのＸａａ＝　（ＴｙｒまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、２６でのＸａａ＝（Ａｌ ａ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ＋旧ｓ、ＬｅｕまたはＧｌｎ）。ｒｅｓ、２８での Ｘａａ＝（Ｔｙｒ、ＡｓｎまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、３１でのＸａａ＝（Ｇｌｕ 、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ＋ＡｓｐまたはＧｌｎ）。ｒｅｓ、３３でのＸａａ＝　（Ｇｌ ｕ、　Ｌｙｓ、＾ｓｐまたはＧｉｎ）。ｒｅｓ　、　３５でのＸａａ＝（Ａｌａ 、ＳｅｒまたはＰｒｏ）、　ｒｅｓ、３６でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　Ｌｅｕま たはＰｒｏ）　＊ｒｅｓ、３８でのＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｌ）。ｒｅｓ 、３９でのＸａａ＝（＾ｓｎ、Ａｓｐ、ＡｌａまたはＴｈｒ）。ｒｅｓ、４０で のＸａａ＝（Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＬｅｕまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、３９で のＸａａ＝（Ａｌａ、ＳｅｒまたはＧｌｙ）。ｒｅｓ、４０でのＸａａ＝　（Ｔ ｈｅ、　Ｌｅｕまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、４４でのＸａａ＝　（Ｉ　ｌｅまたは Ｖａｔ）、　ｒｅｓ、４５でのＸａａ＝　（ＶａｌまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、 ４６でのＸａａ＝　（ＧｉｎまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、４７でのＸａａ＝（Ｔｈ ｒ、Ａｌａまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、４９でのＸａａ＝　（Ｖａ　ｌまたは−ｅ ｔ）＊　ｒｅｓ。

５０でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、５１でのＸａａ＝　（Ｐｈ ｅ、　Ｌｅｕ、　Ａｓｎ、　Ｓｅｒ、八１ａまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、５２での Ｘａａ＝＜Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、ＡｌａまたはＶａｌ）。

ｒｅｓ、５３でのＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｌｙｓ、ＡｌａまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、 ５４でのＸａａ＊　（Ｐｒ。

または５ｅｔ）、　ｒｅｓ、５５でのＸａａ＝　（Ｇｌｕ、　Ａｓｐ、　Ａｓｎ 、またはＧｌｙ）。ｒｅｓ。

５ＧでのＸａａ＝（Ｔｈｒ＋Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ＋Ｔｙｒ、Ｓｅｒ またはＡｌａ）。ｒｅｓ、５７でのＸａａ＝（Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＬｙｓ） 。ｒｅｓ、５８でのＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、５９での×ａ ａ−（ＬｙｓまたはＬｅｕ）。ｒｅｓ、６０でのＸａａ−（ＰｒｏまたはＡｌａ ）。ｒｅｓ、６３でのＸａａ＝（ＡｌａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、６５でのＸ ａａ＝＝（ＴｈｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６６でのＸａａ＝　（Ｇｌｎ、　 Ｌｙｓ、　ＡｒｇまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、６７でのＸａａ−（Ｌｅｕ、Ｍｅｔ 、またはＶａｔ）、　ｒｅｓ、６８でのＸａａ＝（Ａｓｎ、ＳｅｒまたはＡｓｐ ）。ｒｅｓ、６９でのＸａａ＝　（Ａｌａ、　Ｐｒｏまたは５ｅｔ）、　ｒｅｓ 、７０でのＸａａ−（１１ｅ、ＴｈｒまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、７１でのにａ ａ−（ＳｅｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、７２でのＸａａＪＶａｌまたはＭｅｔ ）、　ｒｅｓ、７４でのＸａａ−（ＴｙｒまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、７５での Ｘａａ−（Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、７６でのＸａａ−（Ａｓ ｐまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、７７でのＸａａＪＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎまたは ５ｅｒ）、　ｒｅｓ、７８でのＸａａ−（Ｓｅｒ、Ｇｉｎ、ＡｓｎまたはＴｙｒ ）、　ｒｅｓ、７９でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、　Ａｓｎ＋　ＡｓｐまたはＧｌｕ ）。ｒｅｓ、８０でのＸａａ＝　（＾ｓｎ、ＴｈｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、 ８２でのＸａａ。

（ｌ　ｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、８４でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＡｒ ｇ）。ｒｅｓ、８５でのＸａａ＝（Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｉｎまたは旧Ｓ）。ｒｅ ｓ、８６でのＸａａ＝　（丁ｙｒまたは）Ｉｉｓ）。

ｒｅｓ、８７でのＸａａ＝　（Ａｒｇ、　ＧｉｎまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、８８ でのＸａａ＝（Ａｓｎ、ＧｌｕまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、９０でのＸａａ＝（Ｖ ａｌ、ＴｈｒまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、９２テ（７）Ｋａａ＝　（Ａｒｇ、　Ｌ ｙｓ　、　Ｖａ　Ｉ　、　ＡｓｐまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、９３でのχａａ＝（ Ａｌａ、ＧｌｙまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、９７でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｒ ｇ）　。

同様の一般配列５（配列表配列番号３０）と−設配列６（配列表配列番号３１） は、表ＩＩに示したモルフオゲン蛋白質のファミリーメンバーとホモロジーが近 似している。−設配列５および６は次のアミノ酸配列の複合である。ヒ）　０Ｐ −１（ｈＯＰ−１、配列表配列番号５および１６−１７）、マウスＯＰ−１（ｍ ＯＰ−１，配列表配列番号６および１８−１９）、ヒトおよびマウス０Ｐ−２（ 配列表配列番号７．８および２Ｏ−２２）　、ＣＢ−Ｐ２Ａ　（配列表配列番号 ９）、ＣＢ−Ｐ２Ｂ　（配列表配列番号１０）　、ＤＰＰ（ショウジヨウバエ由 来、配列表配列番号１１）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表配列番号１２） 　、Ｖｇｒ−Ｈマウス由来、配列表配列番号１３）　、ＧＤＦ−１（マウス由来 、配列表配列番号１４）ヒトＢＭＰ５　（配列表配列番号２７）、ヒトＢＭＰ６ 　（配列表配列番号２Ｂ）　、６０（Ａ）（シタウジヨウバエ由来、配列表配列 番号２４−２５）、−設配列は、配列中の可変位置の可変性残基と同様に、６お よび７個のシスティン骨格（−設配列５と６に対応する）によって特定され、そ してＣ末端領域中のこれらの配列と同一のアミノ酸配列を含んでいる。−設配列 ３と４、−設配列５と６において、４１位の付加的システィン（−設配列５）あ るいは４６位（−設配列６）で、好ましいシスティ骨格を提供する場合、分子間 、分子ないＳＳ架橋を形成させることができる。蛋白質の３次構造に影響を与え る明らかにクリテカルアミノ酸である。

−設配列５ Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔ ｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　ＸａａＸａａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｇｌ ｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ 　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡＳｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａ ａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ 　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘ ａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌｅ ｕ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａここでＸａａは以下に示すアミノ酸の １またはそれ以上の群から独立的に、選択されたものである。Ｒｅｓ、は残１ｒ ｅｓｉｄｕｅを意味しており、ｒｅｓ、２でのＸａａｍ　（ＴｙｒまたはＬｙｓ ）、　ｒｅｓ、３でのＸａａｍ（Ｖａｌまたはｌ１ｅ）。ｒｅｓ　、　４でのＸ ａａｍ　（Ｓｅｒ、　ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、６でのＸａａｍ　（Ａ ｒｇ、　Ｇｉｎ、　ＳｅｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、７でのＸａａｍ　（＾ｓ ｐ、　ＬｙｓまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、８でのＸａａｍ　（Ｌｅｕ、　ｌｉｅま たはＶａ　ｌ）。ｒｅｓ、１１でのＸａａｍ（Ｇｉｎ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ 、ＳｅｒまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ　、　１２でのＸａａｍ（Ａｓｐ、Ａｒｇ＋Ｇ ｌｕまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、１４でのＸａａｍ　（Ｉ　ＩｅまたはＶａｌ）。

ｒｅｓ、１５でのＸａａｍ　（［ｌｅまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、１６でのＸａａ ｍ（Ａｌａまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、１８てのＸａａｍ（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ＋Ｌｅ ｕ、１．ｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、１９でのＸａａｍ　（Ｇｌｙま １こは５ｅｔ）、ｒｅｓ、２０でのＸａａｍ　ＣＴＶｒまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ 、２１でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、ＧＩ ｎｉｅｕ、またはＧｌｙ）。ｒｅｓ、２３でのＸａａｍ　（Ｔｙｒ、八ｓｎまた はＰｈｅ）。ｒｅｓ、２６でのＸａａｍ（Ｇｌｕ、旧ｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ＋Ｓｅ ｒまたはＧｉｎ）。ｒｅｓ、２８でのＸａａｍ（Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ＋Ａ１ ａまたはＧｌｎ）。

ｒｅｓ、３０でのＸａａ寞（Ａｌａ、Ｓｅｔ、Ｐｒｏ、ＡｓｎまたはＧｉｎ）。

ｒｅｓ、３１でのＸａａｍ（Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＴｙｒ）。ｒｅｓ、３３での Ｘａａ＝＋（Ｌｅｕ、ＭｅｔまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、３４でのＸａａｍ（Ａ ｓｒ＋＋＾Ｓｐ＋　Ａｌａ、　ＰｒｏまたはＴｈｒ）。ｒｅｓ、３５でのＸａａ ｍ　（Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、ＬｙｓまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、３ ６でのＸａａｍ　（Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、旧Ｓ。

Ｓｅｒまたはｌ１ｅ）。ｒｅｓ、３７でのＸａａｍ（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙま たはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、３８でのＸａａｍ（Ａｓｎ、Ｌｙｓまたは５ｅｒ）、 　ｒｅｓ、３９でのＸａａ−（Ａｌａ、Ｓｅｔ、ＰｒｏまたはＧｌｙ）、　ｒｅ ｓ、４０でのＸａａ−（Ｔｈｅ、Ｌｅｕまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、４４でのＸ ａａｍ（Ｉｌｅ、ＶａｌまたはＴｈｒ）、　ｒｅｓ、４５でのＸａａ−（Ｖａｌ 、ｌ１ｅｕまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、４６でのＸａａｍ（ＧｌｎまたはＡｒｇ ）、　ｒｅｓ、４７でのＸａａ−（Ｔｈｒ、Ａｌａまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、 ４８でのＸａａｍ　（Ｌｅｕまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ、４９でのＸａａｍ（Ｖ ａｔまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、５０でのＸａａ−（Ｈｉｓ、ＡｒｇまたはＡｓ ｎ）、　ｒｅｌｌ。

５１でのＸａａｍ　（Ｐｈｅ、　Ｌｅｕ、　Ａｓｎ、　Ｓｅｒ＋　Ａｌａまたは Ｖａｔ）、　ｒｅｓ、５２でのＸａａｍ（Ｈｅ、門ｅｔ＋Ａｓｎ＋Ａ１ａ＋　１ ｉｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５３でのＸａａ−（＾ｓｎ、Ｌｙｓ。

Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＰｈｅまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、５４でのＸａａ−（Ｐｒｏ 、Ｖａｌまたは５ｅｒ）　。

ｒｅｓ、５５でのＸａａｍ（Ｇ１ｕ＋Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、ＬｙｓまたはＧ ｌｙ）＊　ｒｅｓ、５６でのＸａａｍ（Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ａｓ ｐ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、）ｌｉｓまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ。

５７でのＸａａｍ　（Ｖａ　ｌ　、　Ａ　ｌａ　、　またはｌ１ｅ）、ｒｅｓ、 ５ＢでのＸａａ−（ＰｒｏまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、５９でのＸａａｍ（Ｌｙｓ 、ＧｌｕまたはＬｅｕ）。ｒｅｓ、６０でのＸａａ−（ＰｒｏまたはＡｌａ）。

ｒｅｓ、６３でのＸａａｍ（ＡｌａまたはＶａｌ）、ｒｅｓ、６５でのＸ。

ａ＝（Ｔｈｒ、ＧｌｕまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、６６でのＸａａ−ＣＧｉｎ、Ｌ ｙｓ、ＡｒｇまたはＧＩＵ）。ｒｅｓ、６７でのＸａａｍ　（Ｌｅｕ　、　Ｍｅ 　Ｌ＋　またはＶａｌ）、　ｒｅｓ、６８でのＸａａｍ　（Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｇ ｌｙまたはへｓｐ）。ｒｅｓ、６９でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｐｒｏまたは５ｅｒ ）。

ｒｅｓ、７０でのＸａａ；（ｌ　ｌｅ＋　Ｔｈｒ、　ＬｅｕまたはＶａｌ）。ｒ ｅｓ、７１でのＸａａｍ　（Ｓｅｒ、　ＰｒｏまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、７２で のＸａａｍ（Ｖａｌ、　ＩｌｅまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、７４でのＸａａｍ　 （ＴｙｒまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、７５でのＸａａｍ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ またはＬｅｕ）。ｒｅｓ、７６でのＸａａｍ　（Ａｓｐ、　ＬｅｕまたはＡｓｎ ）。ｒｅｓ、７７でのＸａａｍ　（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎまたは５ｅｒ）。ｒ ｅｓ、７８でのＸａａｍ（Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、＾ｓｎ、　ＡｓｐまたはＴｙｒ）。

ｒｅｓ、７９でのＸａａｍ　（Ｓｅｒ、　Ａｓｎ＋　Ａｓｐ＋　ＬｙｓまたはＧ ｌｕ）。ｒｅｓ　、　８０でのＸａａｍ　（＾ｓｎ、ＴｈｒまたはＬｙｓ）。ｒ ｅｓ、８２でのＸａａｍ　（Ｉ　１ｅＡｓｎまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、８４で のＸａａｍ　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、８５でのＸａａｍ（ＬｙＳ＋＾ ｓｎ、Ｇｌｎ、Ｖａｌまたは旧Ｓ）。ｒｅｓ、８６でのＸａａｍ　（Ｔｙｒまた は）Ｉｔｓ）、ｒｅｓ。

８７でのＸａａｍ（Ａｒｇ、Ｇｌｎ、ＰｒｏまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、８８での Ｘａａ−（＾ｓｎ、ＧｌｕまたはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、９０でのＸａａｍ　（Ｖ ａｔ、　Ｔｈｒ、　ＩｌｅまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａ−（Ａｒ ｇ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、＾ｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、９３でのＸａａ−（Ｇ ｌｙまたはＡｌａ）、ｒｅｓ、９７でのＸａａｍ　（ＨｉｓまたはＡｒｇ）　ａ −設配列６ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　 ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘ ａａＸａａ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ 　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐｒｏ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｈ ｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸ ａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　ＸａａＸａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａこ こでＸａａは以下に示すアミノ酸の１またはそれ以上の群から特定的に、選択さ れたものである。　Ｒｅｓ、は残基ｒｅｓ　１ｄｕｅを意味しており、ｒｅｓ、 ２でのＸａａ−（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＡｌａまたはＰｒｏ）、　ｒｅｓ、３でのＸ ａａｍ　（Ｌｙｓ、　ＡｒｇまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、４でのＸＢＢ＝ｃＨ１ ｓ、＾ｒｇまたはＧｉｎ）＊　ｒｅｓ、５でのＸａａｍ（Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｈｉ ｓ＋Ｇｌｙ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ）　。

ｒｅｓ　、　７でのＸａａｍ　（ＴｙｒまたはＬｙｓ）＊　ｒｅｓ、８でのＸａ ａ−（ＬｅｕまたはＶａＩ）。ｒｅｓ、９でのＸａａｍ（Ｓｅｒ、Ａｓｐ＋ＧＩ ｕ）　、　ｒｅｓ、１１でのＸａａ−（Ａｒｇ、Ｇｌｕ。

またはＬｙｓ）、ｒｅｓ、１２でのＸａａ−（Ａｓｐ、　Ｇｌｕ＋　またはＬｙ ｓ）。ｒｅｓ、１４でのＸａａｍ（ｌｌｅ、　［ｌｅまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、 １６でのＸａａｍ　（Ｇｌｎ、　Ｌｅｕ、　Ａｓｐ＋　Ｈｉｓ。

Ａｓｎ、５ｅｒ）　、　ｒｅｓ、１７でのＸａａｍ（Ａｓｐ＋Ａｒｇ、Ａｓｎ、 Ｇｌｕ）　１１　ｒｅｓ、１９でのＸａａｍ　（Ｉ　ｌｅまたはＶａ　ｌ）。ｒ ｅｓ、２０でのＸａａｍ　（Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、２１でのＸａａ ｍ（Ａｌａ、５ｅｒ）　、　ｒｅｓ、２３でのＸａａｍ　（Ｇｌｕ、　Ｇｉｎ、 　Ｌｅｕ＋　Ｌｙｓ、　Ｐｒｏ、　Ａｒｇ）　。ｒｅｓ、２４でのＸａａｍ（Ｇ ｌｙ、５ｅｒ）　、　ｒｅｓ、２５でのＸａａ−（Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）　＊ｒｅｓ 　、　２６でのＸａａｍ　（＾ｌａ、ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、Ｈ４ｓ、Ｇｌｎ 、Ｌｅｕ、またはＧｌｙ）。

ｒｅＳ、２８でのＸａａｍ　（Ｔｙｒ、　ＡｓｎまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、３１ でのＸａａｍ　（Ｇｌｕ、　Ｈ４ｓ＋Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、５ｅｒ）。ｒｅ ｓ、３３でのＸａａｍ（Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｉｎ、５ｅｒ）　。

ｒｅｓ、３５でのＸａａｍ（八ｌａ、　Ｓｅｒ、　ｐｒｏ、　ＧｉｎまたはＡｓ ｎ）。ｒｅｓ、３６でのＸａａ−（Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ）　、　ｒｅｓ、３ ８でのＸａａｍ（Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）　、　ｒｅｓ、３９でのＸａａｍ（ Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ）　、　ｒｅｓ、４０でのＸａａｍ（ Ｓｅｒ、ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｉｙｓ）　、　ｒｅｓ、４１でのＸ ａａ−（Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｔ、ｌｌ５）　＋１　ｒｅｓ。

４２でのＸａａｍ（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＧＩｙ、Ｌｅｕ）　、　ｒｅｓ、４３での Ｘａａｍ　（＾ｓｎ＋Ｓｅｒ、Ｌｙｓ）＊ｒｅｓ、４４でのＸａａｍ（Ａｌａ、 Ｓｅｒ、ＧｌｙまたはＰｒｏ）。ｒｅｓ、４５でのＸａａ−（Ｔｈｒ、　Ｌｅｕ または５ｅｒ）、　ｒｅｓ、４９でのＸａａｍ（ｌｉｅ、ＶａｌまたはＶａｌ） 、ｒｅｓ、５０でのＸａａ−（Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌ１ｅ）　、　ｒｅｓ、５１で のＸａａｍ（Ｇｌｎ＋　またはＡｒｇ）＊ｒｅｓ、５２でのＸａａ−（Ｔｈｒ、 Ａｌａまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、５３でのＸａａ−（Ｌｅｕ、またはＩＩｅＬ 　ｒｅｓ、５４でのＸａａ−（ＶａｌまたはＭｅｔ）、ｒｅｓ、５５でのＸａａ −（Ｈｉｓ、Ａｓｎ＋　またはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、５６でのＸａａ−（Ｐｈｅ 、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＶａｌ）、ｒｅｓ、５７でのＸａａ− （１１ｅ＋Ｍｅｔ、Ａｌａ、ＶａｔまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ。

５８でのＸａａ−（＾ｓｎ、Ｌｙｓ＋Ａ１ａ＋Ｇ１ｕ＋Ｇ１ｙ　またはｐｈｅ） 、　ｒｅｓ、５９でのＸａａｍ　（Ｐｒｏ、　Ｓｅｔまたはｖａｔ）、　ｒｅｓ 、６０でのＸａａ−（Ｇｌｕ、Ａｓｐ＋Ｇ１ｙ、ＶａｌまたはＬｙｓ）、　ｒｅ ｓ、６１でのＸａａｍ　（Ｔｈｒ、　Ａ１ａ＋　Ｖａｌ、　Ｌｙｓ＋　Ａｓｐ＋ 　Ｔｙｒ、　Ｓｅｒ、＾１ａ、Ｐｒｏまたは旧ｓ）、　ｒｅｓ、６２でのＸａａ −（Ａｌａ、Ｖａｔまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ、６３でのＸａａｍ　（Ｐｒｏま たはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、６４でのＸａａＪＬｙｓ、ＬｅｕまたはＧｌｕ）６ｒ ｅｓ、６５でのＸａａ−（ＰｒｏまたはＡｌａ）、ｒｅｓ、６６でのＸａａｍ（ ＡｌａまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、６８でのＸａａ−（Ａｓｎ、　ＳｅｒまたはＡ ｓｐ）、　ｒｅｓ、６９でのＸａａ−（ＡｌａまたはＶａｔ）、ｒｅｓ、７０で のＸａａ−（Ａ　Ｉａ　、　ＴｈｒまたはＧｌｕ）＋＋　ｒｅｓ−７１でのＸａ ａ−（Ｇｌｎ、Ｌｙｓ＋ＡｒｇまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、７２でのＸａａ＝（Ｌ ｅｕ、ＶａｌまたはＭｅ　ｔ）。ｒｅｓ　、　７３でのＸａａ＝　（Ａｓｎ、　 Ｓｅｒ、　ＡｓｐまたはＧｌｙ）、　ｒｅｓ、７４でのＸａａ＝（＾ｌａ、Ｐｒ ｏまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、７５でのＸａａ＝（Ｉｌｅ、Ｔｈｒ＋Ｖａｌまたは ＬｅＵ）。ｒｅｓ、７６でのＸａａ＝　（Ｓｅｔ、　ＡｌａまたはＰｒｏ）、　 ｒｅｓ、７７でのＸａａ＝（Ｖａｌ。

Ｍｅｔまたは１ｉｅ）。ｒｅｓ、７９でのＸａａ−（ＴｙｒまたはＰｈｅ）。ｒ ｅｓ、８０でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｌｅｕまたは旧Ｓ）。ｒｅｓ 、８１でのＸａａ＝（Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ）。

ｒｅｓ、８２でのＸａａ＝（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、 ８３でのＸａａ＝（Ｓｅｒ。

Ｇｌｎ、　Ａｓｎ、ＴｙｒまたはＡｓｐ）、ｒｅｓ、８４でのＸａａ＝（Ｓｅｒ 、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ。

Ｌｙｓ）。ｒｅｓ、８５でのＸａａ＝（Ａｓｎ、ＴｈｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅ ｓ、８７でのＸａａ＝　（１１ｅ、ＶａｌまたはＡｓｎ）。ｒｅｓ、８９でのＸ ａａ＝（ＬｙｓまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、９０でのＸａａ＝（Ｌｙｓ、Ａｓｎ、 ＧｌｎＪＩｉｓまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、９１でのＸａａ＊　（ＴｙｒまたはＨ ｉｓ）。ｒｅｓ、９２でのＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｇｌｎ、ＧｌｕまたはＰｒｏ）、 　ｒｅｓ、９３でのＸａａ＝　（Ａｓｎ、　ＧｌｕまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、９ ７でのＸａａ＝（＾ｒｇ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、 ９８でのＸａａ＝　（八ｌａ＋Ｇｌｙ＋Ｇｌｕまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、１０ ０でのＸａａ＝　（ＧｌｙまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、１０２でのＸａａ−（Ｈｉ ｓまたはＡｒｇ）　ａ本発明においてモルフォゲンとして使用するために特に有 用な配列は、Ｃ末端領域を含むものである。この配列は次のものをさす、少なく とも保存された６または７個のシスティン骨格を含むもの全てで、６０Ａ、Ｂ門 Ｐ３．　ＢＭＰ５およびＢＭＰ６　（配列表配列番号２４−２８）　（７）Ｃ末 端領域からなる蛋白質と同様（７）Ｖｇｌ、　Ｖｇｒ−１，ＤＰＰ、０Ｐ−１， ０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢ門Ｐ２Ｂ、ＧＤＦＩＣ配列表配列番号５−１４お よび表ＩＩ）のＣ末端９６−１０２アミノ酸残基を持つものである。さらに、米 国特許５，０１１，６９１号に開示されているＣ０Ｐ−１゜３−５．７．１６の ように一般配列からデザインされた生物的合成物は有用性がある。その他の配列 としては、インヒビン／アクチビン蛋白質（米国特許４，９６８，５９０．５， ０１１，６９１号を参照）が含まれる。さらにまた、その他の有用性のある蛍白 質は少な（とも７０％のアミノ酸シーケンスホモロジーを持つか「相似性Ｊを持 ち、好ましくは８０％ホモロジーをもつが上記のいずれかの物質と相似性である 。これらの物質は、このモルフォゲン蛋白譬ファミリーの新規メンバーと同様に 対立形質型、種特異型、変異体および生物合成変異体をもっことが予想される。

特に、保存型の変異を含む選択された配列からアミノ酸配列を変更した場合、関 連するファミリーの予想される蛋白質はモルフォゲン活性が公表されているこれ らの蛋白質である。この手法はＤａｙｈｏｆｆ　らにより、Ａｔ１ａｓ　ｏｆ　 Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ：ｖｏｌ、５ ，５ｕｐｐ１．３．ｐｌｌ、３４５−３６２（Ｍ、Ｏ，Ｄｙｏｆｆ、ｅｄ、、Ｎ ａｔｌ　ＢｉｏＭｅｄ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆｄｎ、、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ＋ Ｄ、Ｃ，１９７９）　に示されている。ここで使用したように、有用性の高い配 列は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ　らの方法（１９７０，Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、４８ ：４４３−４５３）を使用して、公知のモルフォゲンとならべ、アリジンプログ ラム（ＤＮＡｓ　ｔａｒ、　Ｉｎｃ）で同一性を計算した。ここで使用している 「ホモロジー」または「相似性」とは、Ｄａｙｏｆｆらによって示されたように 、許容される保存的変異を含んでいる。

一般に、最も好ましい本発明のモルフオゲンとして有用な蛋白質の配列は、６０ ％以上の同一性を持ち、好ましくは６５％以上の同一性であって、０Ｐ−１の保 存された６個のシスティン骨格で特定できるアミノ酸配列を有するものである（ 例えば配列表配列番号５の残基４３−１３９）　、この最も好ましい配列は、シ ョウジヨウバエ６０Ａ蛋白質を含む０Ｐ−１と０Ｐ−２蛋白質の対立形質型と種 変異型の両方を有している。さらにまた、本発明の別の好ましい実例において、 有用なモルフオゲンは、ｒＯＰＸ　Ｊとしてここに示した一般アミノ酸配列を有 するポリペプチド鎖の種類から構成される、活性な蛋白質を含んでいる。このＯ ＰＸは、ＯＰＩおよび０Ｐ２（配列表配列番号２９）の異なった種類とホモロジ ーを適合させている。

本発明の装置、方法、組成物に有用なモルフォゲンは、上記のポリペプチド鎖の いずれかから構成される蛋白質であり、天然の原料から単離されるか、あるいは 遺伝子組換えまたはその他の合成方法で調製され、これらの天然に得られる蛋白 質の対立形質型と種変異型を含み、種々の縮小かまたは融合形成物と同はのそれ らの生物学的な変異体である。欠失または付加変異体も活性を有すると予想され 、これらは保存性Ｃ末端システィン骨格を変更しており、折れ曲がり構造のこれ らのシスティンの相互関係を変更しないような変異体が提供される。さらにまた 、このような活性型は、ここに開示し特徴的に述べられている構成物と等質であ ると考えられる。蛋白質は、次のような変異形暫を含む。異なるグリコシレージ ョンパターン、異なるＮ末端、アミノ酸配列ホモロジーの一部分を存する関連蛋 白質のファミリー、活性化縮小または、天然あるいは宿主細胞で遺伝子組換えＤ ＮＡの発現によって調製した生物合成蛋白質の変異型などである。

形態形成性蛋白質は、原核細胞または真核細胞により、完全長または縮小ｃＤＮ Ａあるいは合成りＮＡから発現させることができる。そして形態形成的活性組成 物を構成するために精製、切断、再構成、二量体化することができる。特に好ま しい宿主細胞としては、大腸菌、ＣＨＯ、ＣＯＳ　、　ＢＳＣ細胞のような哺乳 動物細胞がある０本発明の方法、組成物および装置に有用なモルフオゲンの詳細 な説明は、１９９１年３月１１日出＠６６７、２７４および１９９１年８月３０ 日出［１７５２，７６４の米国特許出願に開示されており、ここに引用すること によって一体化して開示される。

本開示を考慮すると、熱線した遺伝子操作は、種々の異なる種のｃＤＮＡまたは ゲノムライブラリーから遺伝子を単離することができ、遺伝子は適切なアミノ酸 配列をコードしている。またオリゴヌクレオチドからＤＮＡを構築し、原核細胞 または真核細胞を含む種々のタイプの宿主で発現させ、免疫細胞介在性＆ｌ１ｍ 破壊から組繊や臓器を保護する活性な蛋白質を大量に生産することができる。こ の組織破壊の保護には、ヒトを含む種々の哺乳動物において、このようなダメー ジを持続的に阻害すること及び／または、ダメージを受けた組織を再生させるこ とをふくんでいる。

本発明に先立つその他の目的と特性および利点は、以下に示す詳細な説明からよ り一層適切なものとなるであろう。

凹Ｉ皇翌■ 図１はう、ト心筋の虚血性−再潅流モデルにおけるモルフオゲン（ｈＯＰｌ）の 心筋保護作用を示す。ｈＯＰ１処置ラントの心筋クレアチンキナーゼ活性の消失 を最小にする結果を得た。

回２は、誘導した虚血性再潅流傷害に続いて、アセチルコリンに対する内皮依存 性血管緊張性低下に対して、２０μｇのモルフォゲン（ｈＯＰｌ）を２４時間前 に投与した効果を示す。

図３は、好中球活性化ラントのＬＴＢ４促進腸間膜動脈内皮への好中球付着に対 するモルフオゲン（ｈＯＰｌ）の効果を示す。

図４（ＡおよびＢ）は、初期単核食細胞の多槙細胞化の阻害に対するモルフオゲ ンの作用の模式図を示す。

図５は粘膜傷害状態へのモルフオゲン（ＯＰＩ）とプラセボの作用を示すグラフ である。

図６　（Ａ−Ｄ）は初代繊維細胞培養での、コラーゲン（６＾、６Ｂ）とヒアル ロン酸（６Ｇ、６Ｄ）の生産におよぼすモルフオゲン（ＯＰＩ、図６へ、６Ｃ） 、ＴＧＦ−β（図６Ｂ、６Ｄ）の効果を示すグラフである。

溌」ム１１知工’Ｊｔ咀 ここに特定するモルフォゲンは、組織傷害に対する生体の炎症反応により引き起 こされた組織破壊作用を緩和するためにを効な物質であることをここに開示する 。特に、ここに開示するように、モルフォゲンは、最初の組織傷害に続いて起こ る次の炎症反応によって引き起こされる壊死的な組織への作用を緩和することが できる。

細菌、傷、化学物質、熱、その他の事象が原因となって組織傷害が起こると、生 体の免疫反応は促進される。傷害を受けた細胞から分泌されたシグナル物質（サ イトカインなど）に対する反応では、免疫作用細胞の血管外侵出が誘発される。

通常の状態では、この侵出免疫作用細胞は感染性物質および／または感染または 傷害細胞を殺しく顆粒球に蓄積されたスーパーオキサイド、バーフォリン、およ びその他の抗菌性物質を、キリングサブスタンスとして放出して）、死組織と生 体を除去しくファゴサイトーシスにより）、傷のすみやかな保護と修復を促進さ せる種々の生物反応修飾物を分泌する（しばしば繊維性傷組織の形成が起きる） 、そしてその後、その部位は完全に治癒し、はじめの傷害部位は消える。一方、 その部位は正常に復し、炎症性サイトカインの放出は止まり、血管内皮上の接着 性物質の展開は元のレベルに復する。しかしある場合には、これら相互作用シグ ナル物質の放出と、非常に迅速に増加する感染物質を補足し、含有するためにデ ザインされている細胞系が、生体の損傷に作用し、周辺の組織の健康な部分を殺 すことになる。この付加的な不要組織の死は、臓器機能と低下を引き起こし、あ る時には固体の死となることもある。さらに、結果的に正常組織の機能を傷害し て、組織を傷つけることになる０例えば突発性肺繊維症やＩＢＤおよび臓器の硬 変化などである。

血管内皮は循環する免疫作用細胞と血管外組繊の間の最初のバリアーとして構築 されている。これらの循環細胞は、血管内皮細胞に結合して、基底膜を通過して 、傷ついた組織へ浸入することが必要である。たとえばファゴサイトーシスやプ ロテアーゼ介在性細胞外マトリックス分解などである。特定の原理によって制限 されることなしに、本発明のモルフォゲンは、組織のダメージを受けた部位及び ／または炎症部位やその周辺の血管の内皮の内腔側に対して、免疫作用細胞の付 着を調節することによって、免疫反応を調節できると考えられている。この方法 が、これらの部位への免疫作用細胞の付着を減少または予防すれば、組織のダメ ージ及び／または炎症部位に、これらの同し免疫作用細胞によってＩＪ１ｍ破壊 物質の引き続いた放出を予防することとなる。内皮に対する免疫作用細胞の付着 は、その血管外侵出に先行しているため、この方法は血管外浸出組織破壊部位や 炎症進行部位への、これらの細胞の最初の、あるいは持続的な侵入を防止するこ とになる。そのため、本発明は、近い組織の破壊の血管外の部位への、免疫細胞 介在性細胞破壊を減少させ、予防する方法に関するのみならず、進行する炎症反 応カスケードの血管外での免疫作用細胞の持続的な浸入を予防し、減少させる方 法にも関するゆこの分野の先行技術によれば、本発明のモルフォゲンは、接着性 分子の組織傷害に対する反応と、その他の作用によって誘導される、内皮に対す る免疫エフェクター細胞の機能的相互作用を中断させるためのメカニズムを考え させるものである。

組織傷害の原因の一つは、虚血性再循環組織傷害（酸素欠乏）および続く高酸素 症傷害（致死性高酸素濃度）のような毒性酸素濃度に対する細胞露出によって引 き起こされる。さらにまた、本発明のプロセスは、モルフオゲンの治療量をあら かじめ、あるいは持続的に、あるいは影響を受ける＆１１ｗ１がダメージを受け た後、治療の必要な個人に投与するステップからなる、虚血性再循環傷害あるい は高酸素症に由来する傷害によって引き起こされた組織ダメージを緩和する方法 を提供するものである。毒性酸素４度が発生する場合は、外科的あるいは臨床的 方法で、慎重に行われているが、あらかしめモルフォゲンを投与しておくことが 好ましい。

さらに、ＴＧＦ−βのような繊維形成誘導性の成長因子と対照的に、ここに記載 したモルフォゲンは、＆ｉ１ｍの形態形成性を促進し、繊維化や傷組織形成を促 進しない（以下の実施例９参照）。

したがって、さらに炎症反応によって引き起こされる組織破壊作用を阻害するた めに、モルフォゲンは、ダメージ組織の再形成を促進し、繊維化の予防を行うこ とによって、ダメージ組織および／または臓器の生存性を増強する。

ここに述べたモルフォゲンは上皮細胞の増殖を阻害する（以下の実施例１０）　 、モルフォゲンのこの活性は、上皮細胞のポピユレーションを含む乾量およびそ の他の炎症性疾患の治療に特に有用である。

投与および使用方法、複数の限定されない実施例と同様の本発明の方法と組成物 において適切なモルフオゲンの詳細な説明が以下に開示される。ｌ）生体の炎症 反応によって引き起こされる＆ｌＩ織破壊から組織を保護するために治療剤とし て、ここに説明したモルフオゲンおよびモルフオゲン促進剤の適合性を説明する 。２）モルフォゲンとモルフオゲン促進荊の有効性を試験するための分析法を提 供する。

■、　モルフォ　ンの 臓器特異的＆ｇ織の新しい形態を誘導して、そして保存されたＣ末端の６個のシ スティン骨格から少なくとも構成されており、その機能が等価であり、細胞の発 達性カスケードを誘導できるものであるならば、ここに定義するように、その蛋 白質は形態形成性である（上記参照）。特に、モルフオゲンは一般的には、形態 形成可能環境においては、次の生物学的機能全てを示すことができる。原細胞増 殖促進、原細胞分化促進、分化細胞増殖促進、形質転換細胞の「再分化」を含む 分化細胞の成長と保持を手助けする。本発明方法でのモルフォゲンの有用性の詳 細は、最初にモルフォゲン活性をいかにして作成し、使用し、試験するかである 。これは１９９１年３月１１日出願のＵＳＳＮ　６６７．２７４と１９９１年８ 月３０日出願のＵＳＳＮ　７５２，７６４に開示されており、引用により本発明 と一体化する。ここに開示するように、モルフォゲンは天然の原料や、ここに開 示した遺伝子配列を用いた遺伝子操作による原核細胞や真核細胞の生産物から精 製できる。さらにまた、新規モルフォゲン性配列がここに開示した方法に従って 特定できる。

特に有用な蛋白質は、表ＩＩに開示した天然由来の配列からなるものである。そ の他を用な配列は、米国特許５，０１１，６９１に開示されているような生物合 成物である。この開示は引用により本発明と一体化される（ＣＯＰ−１，Ｃ０Ｐ −３，Ｃ０Ｐ−４，ＣＯＰ’−５，Ｃ０Ｐ−７Ｃ０Ｐ−１６等） さらに、本発明の方法と組成物として有用なモルフオゲンは、上に述べたどのよ うな配列も、アミノ酸配列のホモロジーが７０％、好ましくは８０χ（相似性） である、ここで「ホモロジー」は上記に示したものである。

本発明の方法と組成物として有用なモルフオゲンは、ここで説明した６個の一般 配列（一般配列１，２，３，４，５．６）で説明できるものである。一般配列１ と２は次のＮ末端配列を含む。

Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　（配列表配列番号１５）以下に示し た表ＩＩは天然蛋白質の活性？１域のアミノ酸配列を比較したもので、それはモ ルフォゲンとして特定され、次のものを含む。ヒト０Ｐ−１（ｈＯＰ−１，配列 表配列番号５および１６−１７）、マウスＯＰ−１（ｍＯＰ−１，配列表配列番 号６および１８−１９）　、ヒトおよび？　ウス０Ｐ−２（配列表配列番号７． ８および２Ｏ−２３）　、ＣＢＭＰ２Ａ（配列表配列番号９）、ＣＢＭＰ２Ｂ　 （配列表配列番号１０）　、ＢＭＰ３（配列表配列番号２６）　、ＤＰＰ（ショ ウジヨウバエ由来、配列表配列番号１１）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表 配列番号１２）　、Ｖｇｒ−１（７ウス由来、配列表配列番号１３）　、ＧＤＦ −１（マウス由来、配列表配列番号１４．３２および３３）　、６０（Ａ）（シ ョウジヨウバエ由来、配列表配列番号２４−２５）　、ヒトＢ門Ｐ５（配列表配 列番号２７）、ヒトＢＭＰ６（配列表配列番号２８）。配列はＮｅｅｄｌｅｍａ ｎ　らの方法（１９７０，Ｊ。

Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、４８：４４３−４５３）を使用して、直列に並ベアリジンプ ログラム（ＤＮＡｓｔａｒ、　Ｉｎｃ）で同一性を計算した。表中の３つのドツ ト（、、、）はｈＯＰ−１のアミノ酸と同じであることを示している。３つのダ ンシュ（”’）は、その位置にはアミノ酸がないことを示し、ホモロジーも表に よって説明している０例えば、ＣＢＭＰ−２ＡとＣＢＭＰ−２Ｂの残基６ｏは欠 失している。もちろんこの領域の両方のアミノ酸はＡｓｎ−５ｅｔ（残基５８． ５９）からなり、ＣＢＭＰ−２ＡがＬｙｓとｌｉｅである場合、ＣＢＭＰ−２８ はＳｅｔとｌｉｅである。

ｈＯＰ−Ｉ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｕｙ　Ｔｙ ｒ　ＡｌａｊＬ ｈＯＰ−Ｉ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａ １ｏｒ−Ｌ ｈＯＰ−２、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、。

Ｉ！Ｉｏｒ−２、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、−、、、、、、、・・、　・・。

ＤＰＰ　、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、・Ｓｅｔ　、、、・・・・・。

Ｖｇｌ　＋、、、、、Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　、、、、、、＋、。

Ｖｇｒ−１、、、、、−−０，−０，”ｌ　、−０，−０−０゜ＣＢＭＰ−２Ａ 　、、、　＋＋＋　Ａｒｇ　、、、Ｐｒｏ　、、、　、・、　、、。

ＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、、Ｓｉｒ　、、、、、、・、。

ＢＭＰ３０．、ｕａ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　、、、Ｌｙｓ　、、。

ＧＤＦ−１、、、Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、、、、・・・。

６０Ａ　、、、　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　、、、　、、、　・、。

ＭＰ５ ＢＭＰ６　、、、　Ａｒｇ　・・・　・・・　・・・　・・・　・・・　・・・ ｈＯＰ−Ｉ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｃ１ｙ　Ｔｒｐ　Ｇｉ ｎ　Ａｓｐｏｒ−１ ｈＯＰ−２、、、、、、Ｇｉｎ　、、、、、、、、、、、、Ｌｅｕ　＋＋＋ｆｆ １ｏ？−２Ｓｅｔ　、、、・・・　・・・　・・・　・・・　・・・　Ｌｅｕ　 ・・・ＤＰＰ　Ａｓｐ　、、、Ｓｅｔ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ａｓｐ　、 ＋。

Ｖｇｌ　Ｇｌｕ　＋＋＋　Ｌｙｓ　、、、Ｖａｌ　、・、・・・＋＋＋　Ａｉｎ Ｖｇｒ−１、、、、、、Ｇｉｎ　、、、Ｖａｌ　＋＋＋　、、、、、、＋＋＋Ｃ ＢＭＰ−２Ａ　Ａｓｐ　、、、Ｓｅｔ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ｊｕｎ　、 、。

ＧＤＴ−１、、、、、、＋＋＋　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　、、、、、、Ｈｌｓ　Ａｒｇ ６０Ａ　Ａｓｐ　＋＋＋　Ｌｙｓ　、、、、、、、、、、、、Ｈｌｓ　＋＋＋Ｍ Ｆ５ ＢＭＰ６　、、、　、、、Ｇｉｎ　、、、、、、　−、、、、、＋＋＋　＋＋＋ ｈＯＰ−２、、、＋＋＋　、、、　Ａ５Ｐ　１０．ＣＹＳ　−、、、、、、。

０Ｆ−１ ｈｏｒ’−２、、、’／ａｌ　、、、　、、、　、、、　Ｇｉｎ　、−、、、、 Ｓｅｒｍｏ？−２、、、Ｖａｌ　、、、　、、、　、、、　Ｇｉｎ　、、、　、 、、　５ｅｒＤＰＥ’　、、、　、、、　Ｖａｌ　、、、　、、、　Ｌｅｕ　、 ・、　・・・　人５Ｐ？ｇｌ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、Ｇｉｎ　、、 、、、、Ｍｅｅ’／ｇ＝−１、、、、、、、、、・・・　・・・　Ｌｙｓ　・・ ・　・・・　・・−Ｄｐｐ　、、９００．　６．、Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｈｉｓ　Ｐ ｈｅ　、、、　ＳｅｒＶｇｌ　Ｔｙｒ　、・・、、、Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　 Ｌｓｕ　、、、ＧｌｙＶｇｒ−１，１，、、、、、、、、、Ａｌａ　Ｈｉｓ　、 −、、、、、、。

ＣＰＭＰ−２Ａ　０１０．、、　、、、Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｈｌｓ　Ｌｅｕ　、、 、ＳｅｔＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、　、、、　、、、Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｈｌｓ　Ｌ ｅｕ　、、、　Ｓｅｔｏｐｐ　、、、Ａｓｎ　Ａｓｎ　ＡＳｎ−・・・−・にｌ ｙ　Ｌｙｓ　、・。

Ｖｇｌ　０．０．９．Ｓｅｒ　＝、Ｇｌｕ　、−６−０，Ａ５Ｐ　ＩｌｅＶｇｒ −１、、、、、、Ｖａｌ　Ｍｅｔ−１，，０，０１，Ｔｙｒ　、、。

ＣＢＭＰ−２Ａ　、、、Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　、、、Ｓｅｒ　−−−Ｌｙｓ 　ＸｌｅＣＢＭ？−２Ｂ　、、、　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｎ　、、、　Ｓｅｒ　 −−−Ｓｅｒ　ＩｌｅＢＭ？３　、、、　Ａｒｇ　ｋｌａ會會　Ｇ１７　Ｖａｌ 　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ｌ１ｅ（：ＤＦ−Ｌ　Ｍｅ＋：　、、、Ａｌａ　ｕ ａ　Ａｌａ　、、、Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ６０Ａ　、、、、、、Ｌｅｕ　Ｌｅ ｕ　Ｇｌｕ　、、、Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　、、。

ＢＭ？５　、、、　、、、　Ｌｅｕ　Ｍｅｃ　Ｐｈｅ　、、、Ａｓｐ　Ｈｉｓ　 、、。

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ｈＯＰ−Ｉ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈ ｒ　Ｇｉｎ０Ｐ−１ ｈＯＰ−２、、、、、、Ａｌａ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　Ｌ ｙｓｍＯＰ−２、、、、、、Ａｌａ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、 　ＬｙｓＤＰＰ　、、９．、、　Ａｌａ　、、、　、、、　Ｖａｌ　、、、　、 、、　、、。

Ｖｇｌ　、、、Ｌｅｕ　、、、　、、、　、、、　Ｖａｌ　＋、、　、、、Ｌｙ ｓＶｇｒ−１、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、ＬｙｓＣＢＭ Ｐ−２Ａ　、、、　、、、　Ａｌａ　、、、　、、、　Ｖａｌ　、、、　、、、 　ＧｌｕＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、　、、、　ｕａ　、、、　、、、　Ｖａｌ　、 、、　−、、ＧｌｕＢＭＦ３　、、、　Ｇｌｕ、、、　、、、　、、、　Ｖａｌ 　、、、　Ｇｌｕ　ＬｙｓＧＤＦ４　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　、、、、、、、、、Ｖａ ｌ　、、、Ａｌａ　Ａｒｇ６０Ａ　、、、、　、、、　、、、　、、、　、、、 　、、、　、、、　、、、　ＡｒｇＢｌｉＰ５　、．０９０．　、、、　、、、 　、、、　、、、　、、、　、、、　ＬｙｓＢＭＰ６　、、、　＋、、　、、、 　、、、　、、、　、、、　、、、　＋＋＋　ＬｙｓｈＯＰ−Ｉ　Ｌｅｕ　Ａｓ ｎ　Ａｌａ　ＩＩｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｎ　Ｌｓｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅｏ　Ｐ−１ ｈＯＰ−２、、、Ｓｅｔ　、、−Ｔｈｒ　、、、　、、−−−０−−−Ｔ）ｒｒ ！ｌｌ０Ｆ−２、、、Ｓｅｔ　、、、Ｔｈｒ　、、、　＋＋＋　＋＋＋　＋＋＋ 　Ｔｙｒｖｇｌ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　、、、、、、Ｍｅｃ　、−、Ｐｈｅ 　Ｔ７ｒＶｇｒ−Ｉ　Ｖａｌ　、−０−０−”、”、”−”　””　””　”” Ｏｒ？　、０．ＡＬＰ　Ｓｅｒ　’／ａｌ　Ａｌａ　Ｍｅｅ　、、、、、、Ｌｅ ｕＣ北？−２人　、、、Ｓａｒ　、、、　、、、、、、Ｍｅｃ　、−、、、Ｌｅ ｕＣ腑？−２Ｂ　、、、Ｓｅｔ　、、、　、−−−０−Ｍｌ！ｔ：　、、、　、 、、　ＬｅｕＢＭ？］　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　、、、ＩＩｓ　、、 、Ｐｈｅ　′ｒ／ｒＧＤＰ−１、、、Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　、−−−−−−−・−、 Ｐｈｅ、、。

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ｈＯＰ−１人１ａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃ７ｓ　ＨｉｓＤＰＰ　Ｇｌｙ　、−０− ０−−−ＡｒｇＶｇｌ　Ｃ１ｕ　、、、　、、、　、、、Ａｒｇｇｒ−１ Ｃ聞Ｐ−２Ａ　Ｇｌ）Ｉ　、、、　、、１１．−　ＡｒｇＣＢＭＰ−２Ｂ　にｌ ｙ　、、、　−−−−・−ＡｒｇＢＫＰ３　Ｓｅｔ　、、、　Ａｌａ　、、、　 ＡｒｇＧＤＦ−Ｉ　Ｇｌｕ　、、−、、、００，Ａｒｇ６０Ａ　Ｓｅｔ　、、− 、−−１，−−０−ＢＭＰ５　Ｓｅｒ　、、、　、、、　−、−６，。

愈傘ＢＭＰ３の残基５６と５７の間はＶａｌ　残基ＧＤＦ−１の残基４３と４４ の間は、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒ。

先のアミノ酸配列の比較から明白になったように、顕著なアミノ酸の変更は、モ ルフォゲン活性に関係している一般配列の範囲で作成することが可能である。例 えば、表ＩＩに示したＧＤＦ−１蛋白質の配列は、ここに説明したｈＯＰｌと５ ０％アミノ酸が同一なっているにもかかわらず、一方で、ＧＤＦ４配列は、ｈＯ Ｐ−１配列とアミノ酸配列のホモロジ−（或いは相似性）７０％以上の値となる 。ここで言う「ホモロジー」、「相（易性」は、Ｄａｙｈｏｆｆらにより、八ｔ ｌａｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒ ｅ：ｖｏｌ、５゜ＳＬ＋１）ｌ）１．３．１）ｐ、３４５−３６２（Ｍ、Ｏ，Ｄ ｙｏｆｆ、ｅｄ、、Ｎａｔｌ　ＢｉｏＭｅｄ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆｄｎ、、Ｗ ａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ、Ｃ，１９７９）　に示されている方法によって特定さ れる、配列中の許容された保存性アミノ酸の変化である。

本発明のモルフォゲンとして有用な特に好ましい配列は、ｈ。

Ｐ−１（配列表配列番号５の残基４３−１３９）の保存された６個のシスティン 骨格で特定するアミノ酸配列に６０％以上、さらに好ましくは６５％以上同一な ものである。これらの好ましい配列は、ショウジヨウバエ６０Ａ蛋白質を含む０ Ｐ−１，０Ｐ−２の対立形質および種変異体の両方ともふくまれる。さらに、他 の好ましい実例において、本発明は、７個のシスティン骨格を特定し、種々の特 定されたマウスおよびヒトの０Ｐ−１，０Ｐ−２の間の違いを適合させたｒＯＰ Ｘ　Ｊとしてここに示した一般アミノ酸配列を有するポリペプチドの種からなる モルフオゲンを含む、　ＯＰＸは配列表配列番号２９に示している。ここに記載 するように、特定していないＸａａはマウスまたはヒ）　ＯＰＬまたはＯＦ２の Ｃ末端配列（配列表配列番号５−８及び／または配列表配列番号１６−２３）に 一致した位置で得られる残基から選択される。

、°ム　１　るｔ・　の几 モルフオゲンは好ましい方法で個体に投与される。投与は好ましくは直接的（局 所注射または組織局部への直接投与）または全身的（＃％脈投与または経口投与 ）である０モルホゲンは非経口的に投与でき、静脈内、皮下、筋肉、眼窩、目、 頭蓋、関節嚢、心室、脳槽、腹膜、頬、直腸、膣、鼻腔内投与をあげることがで き、水溶性モルフォゲンはエアロゾールによっても投与できる。７８液は告１者 に対して必要なモルフォゲンを投与するために、生理的に受容可能である。溶液 は、患者の電解質と溶質バランスに負の影響を与えない。モルフォゲンの水溶液 は通常生理食塩水（９，８５χ食塩、０．１５Ｍ）ｐＨ７−７，４である。モル フォゲンを含有する水性？８液は、−例を上げると、０．１χトリフロロ酢酸（ ＴＦＡ）ま１こは０．１χ塩酸含有アセトニトリルの５０χエタノール？８液、 あるいは等張溶液によって溶解させて調製することができる。得られた溶液１容 量に１０容量のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を加え、さらに０．１−０．２χヒ ト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）を加える。

得られた溶液は、好ましくは持続的に攪拌する。必要であれば、与えられたモル フォゲンは溶解促進のため、その他の適切な物質とともに溶解させても良い０例 えば、モルフォゲンのプロダイマーを成熟ダイマーと連携させて、生理学的緩衝 液にモルホゲンを溶解させることもできる。実際、内因性蛋白質はこの形態で移 送されると考えられる。溶解性を促進するものとして、特に経口投与に有用なそ の他の物質は、カゼインをあげることができる０例えば、０．２χカゼインの添 加は０Ｐ−１の成熟活性型の熔解性を８０χ増加させる。牛乳及び／または血清 中の蛋白質に見出されるその他の物質も有用である。

非経口的投与に有用な溶液は、製薬技術として公知の方法で、例えばＲｅｓｎｇ ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ（Ｇｅｎｎａｒｏ ＋Ａ＋ｅｄ、）に記載されている方法で調製できる。裂開化材料としては、ポリ エチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物油、分解性ナフタ レンおよび類似物があげられる。特に、直接投与製剤は、必要な局所にモルフォ ゲンの供給を補助するために、高い粘度をもつものとグリセロールを処方する０ 例えばヒアルロン酸、コラーゲン、トリカルシウムリン酸塩、ポリブチレート、 乳酸および塘ポリマー、乳酸／塘共重合ポリマーなどを含む生物分解可能、好ま しくは生物再溶解可能ポリマーがモルフォゲンのインビボ放出を制御する賦型剤 として有用である。

このモルフォゲンを非経口的に投与するシステムとして特に有用なものは、エチ レンビニル酢酸共重合体粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み式注入システム、リボゾ ームなどである。ラクトースを賦型剤として含有する吸入式投与のための処方は 、例えば、ポリエチレンラウリルエーテル、グリコレート、デオキシコレートを 含有する水性溶液であるか、あるいは油状液体を含有して、鼻腔内にゲルとして 投与するかあるいは、鼻腔に滴下する形態のものである。非経口的処方はバッカ ル投与のためにグリコレートを含有するか、直腸内投与のためメトキシシアリレ ートを含有するか、膣内投与のためカットリック酸を含有するものである。

直腸内投与のための原剤は、モルフォゲンまたモルフオゲン促進剤をカカオバタ ーあるいはその他の組成物のように非刺激性の賦型剤を混合して調製する。この 賦型剤は室温で固化し、体温で液状化するものでる。

皮膚表面の局所投与のための処方は、モルフオゲンまたモルフォゲン促進剤をロ ーションやクリーム、軟膏あるいは石鹸のような皮膚に受容されるようなキャリ アーに分散させて調製する。特に、局所投与のためフィルムや膜の形態でそして 剥がれにくいものがキャリアーとして有用である０体内組織表面への局所投与の ため、モルフォゲンは組織接着性あるいは組織表面の吸着を促進することが知ら れているその他の物質に分散させる。例えば、ヒドロキシプロピルセルロースあ るいはフィブリノ−ジエン／　トロンビン？８ｅ、は有用である。更にまた処方 中にペクチンを含有させたような組織コーティング性？８？＆も使用できる。

さらにまた、ここに説明したモルフォゲン経口的に投与できる。一般的に、治療 として蛋白質を経口投与することは、殆ど行われていない。大部分の蛋白質は、 哺乳動物の消化器系で消化酵素と酸によってすくに分解されて、血液中に吸収さ れない。

しかし、ここに述べたモルフォゲンは、典型的に酸に安定でプロテアーゼ抵抗性 がある（米国特許４，９６８，５９０を例示する）。

さらに、少なくとも一つのモルフォゲン、０Ｐ−１は補乳動物腺分泌物で、初乳 および５７日めの乳から単離されている。さらに哺乳動物腺分泌吻から精製した ０Ｐ−１はモルフオゲンの活性を有している。特に、米国特許４，９６８．５９ ０に開示されている、標準的に採用されているインビボ骨アッセイ法を使用して 、適切なマトリックス素材と共に皮下に移植した場合、この蛋白質は哺乳動物の 軟臂形成を誘導する。さらに、モルフオゲンは血液から検出される。最終的に、 プロドメインを用いた溶解型成熟モルフオゲンはモルフォゲン活性を有している 。この知見は、経口および非経Ｉ」投与物は、個体に対して投与したモルフオゲ ンの生物活性であることを意味している。さらに、ここに特徴的に示した本来の モルフォゲンの成熟型は、非常に低い溶解性であり、乳（および補乳動物腺分泌 物と初乳）に見出されるモルフオゲンの形態は、明らかに溶解し、ており、恐ら （成熟型をとっており、１またはそれ以上の乳成分と天然型配列のプロドメイン の一部または全部が共同してモルフオゲン的活性の形態をとっているのであろう 、したがって、ここで提供される化合物はインビトロ、インビボでその溶解性を 促進できる分子と共同して働くものである。

ここで、モルフォゲンまたモルフォゲン促進物は組織または臓器の保存溶液の一 部となり、購入可能な保存＋８液を使用できる。例えば有用な？８液として、コ リン液、ライスコンシン液１、ルツアー液、オイロコリンズ液、乳酸化リンゲル 液を含む先行技術が公知である。一般的には、臓器保存？８液には次の機能の１ またはそれ以上が必要とされる。（ａ）浸透圧は哺乳動物細胞の内部圧と等張で ある（典型的には、高張であり、哺乳動物細胞の内圧より高い浸透圧とするため にに°及び／またはＭｇ　”が含まれている）　、（ｂ）　ｉＳ液は細胞の正常 なＡＴＰ　レベルを持続的に維持できる（ｃ）　？ｇｆｉ、は通常細胞内のグル コース代謝の最適状態の保持を行わせることができる。臓器保存液は抗凝集物、 グルコース、フラクトースその他の糖のようなエネルギー源、代謝物、重金属を キレート化する物、低温度下で生存性を増強するだめのグリセロールおよびその 他の物質、酸素フリーラジカル阻害剤、ｐＨ指標などを含んでいる。保存液と有 用な成分の詳細な説明は、例えば、米国特許５，００２，９６５に見出すことが でき、引用によって本発明と一体化している。

ここで提供される化合物は、モルフオゲンまたモルフオゲン促進物質を必要とす る組織にターゲツティングすることもできる０例えば、必要とする組織の細胞上 の表面分子に特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、結合蛋白質は使用可能 である。

有用なターゲツティング分子は米国特許５，０９１，５１３に開示された一本頓 結合部位を用いてデザインすることができる。

上記したように、ここで提供されるモルフオゲンはＣ末端活性領域の配列にホモ ロジーが高い、比較すると、典型的な配列はプロドメインとして特定される配列 との同一性は異なっている、したがって、プロドメインはモルフォゲン特異的と いえる。

上記したように、異なる組織で発現している種々のモルフォゲンが特定されてい ることは公知である。さらに、どのような与えられた定理に制限されることな（ 、自然の条件で、与えられた組畷上に、選択されたモルフォゲンが作用すること は、好ましいことである。さらに、特定されたプロドメインの一部まは全部が溶 液中のモルフォゲンの活性型を誘導することは、ここに記載したモルフォゲンを ターゲット化物質にすることを可能にする。例えば、プロドメインは、その組織 に対してプロドメインを結合するように作用するため、ターゲット組織の１又は それ以上の物質にプロドメインは特異的に影響する。さらにまた、目的の組織に 対してターゲンティングしたモルフォゲンを有用なターゲンティング物質とする ことは、モルフォゲンプロドメインの１部または全部の作用である０例えば、Ｇ ＤＦ−１プロドメインの一部または全部は、神経組織に対するモルフォゲンのタ ーゲフトとして使用されるかもしれない、さらに、０Ｐ−１またはＣＢＭＰ２の プロドメインの一部または全部は、骨組織に対するモルフォゲンのターゲフトと して使用されるかもしれない。

どちらの蛋白質も天然に、骨組織に作用していることが認められている。

ここに示すモルフォゲンは神経組織に対する最初の傷害に対する生体の免疫／炎 症反応によって引き起こされる神経経路のダメージを中和して緩和させるために 神経保護効果作用物として有用である。ここで使用した「神経経路」は発生源か ら目的細胞への電気信号の通過のための神経の回路を説明している。

そして中枢神経系（ＣＮＳ）と末梢神経系（ＰＮＳ）の両方を含む、この経路は 電気的信号を伝達するニューロンをふくんでいる。これは、相互連絡ニューロン 群、東神経軸索により形成されてい°る神経繊維、ニューロンを包み込み、保持 しているダリア細胞を含む、神経組織傷害に対する炎症反応は、例えば、自己免 疫（自己抗体を含む）機能不全、悪性新生物発生、感染、化学的あるいは機械的 外傷、その他の疾患によって引き起こされる神経組織の傷に続いて起こる。神経 経路のダメージは栓塞発作（虚血あるいは低酸素誘導傷害）、神経や周辺組織に 対するその他の外傷によって、神経血流の減少や中断、即ち閉塞から発生する。

さらに初期の脳腫瘍によって引き起こされるダメージのすくなくとも一部は、免 疫学的な関係があることは明らかである。治療のため細胞に直接的にモルフォゲ ンを投与すること、あるいは哺乳動物に全身的にモルフォゲンを供給すること、 例えば静脈投与や経口投与による間接的な投与は、神経傷害に対する免疫学的応 答を緩和及び／または予防するために行われる。

さらにインビボで、好ましくは傷害の部位に、モルフォゲンの発現及び／または 分泌を促進することのできる物質の投与もまた行われる。外科手術や積極的な臨 床療法として傷害が発生する場合には、モルフォゲンまたモルフォゲン促進物質 は、危険に対して神経組織に神経保護効果を与えるために、傷の発生に先立って 投与しても良い。

モルフォゲンがＣＮＳの免疫／炎症状態によって引き起こされる組織のダメージ を緩和する治療法として使用される場合には、投与の問題を解決する必要がある 。「脳血液関門」と呼ばれる脳の細管構造があり、血液中に存在する物質のカテ ゴリーを選別し、脳内へのそれらの通過を抑制している。脳血液関門は脳内ヘモ ルフォゲンまたモルフオゲン促進剤を直接注入することによって回避できる。さ らに、モルフオゲンまたモルフオゲン促進剤は脳血液関門の通過を促進するよう に修飾することができる０例えばモルフオゲンまたモルフオゲン促進剤の縮小型 は殆ど成功する。さらにモルフォゲンまたモルフォゲン促進剤はより脂肪親和性 に変えるように修飾できる。また脳血液関門を１ｉ１遇するべつの物質と結合体 を作ることもできる。これハ従来の技術で公知であり、例えば、Ｐａｒｄｒｉｄ ｇｅらが述べているＥｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　７：３１４−３３０ （１９８０）と米国特許４，８０１，５７５に開示されている。

結局、ここで提供されるモルフォゲンまたモルフォゲン促進剤は単独で投与でき るし、あるいはここに記載された方法や組成物の処置する場合に、有用であるこ とがわかっている他の物質と祖み合わせて投与できる。抗擬集剤、酸素フリーラ ジカル抑制剤、ンアル酸、ビタミンＤ、その他消炎剤などであるが、これらにｉ ｌｄ＋限されるものではない。乾量の治療は紫外線照射、酸化亜鉛、レチノイド を含む。

ここで提供される化合物は製剤学的に受容される非毒性の賦型剤やキャリアーを 処方することができる。上に示したように、この組成物は非経口投与のために調 製され、溶液剤あるいは懸濁剤の形態で通常用いられる。経口投与では、特に錠 剤、カプセル剤とする。鼻腔適用では特に、粉剤、鼻滴下剤、エアロゾール荊と する。

組成物はヒトまたは哺乳動物治療に有効な量を非経口的あるいは経口的に投与で きるように処方する。即ち、組織のダメージの予想に応じて組織保護を含め、炎 症反応によって引き起こされる組織破壊作用を緩和するに充分な量を、−回あた り好ましい濃度で供給できるようにしておく。

先行技術によって示されているように、治療組成物の濃度を説明した化合物の濃 度は、因子の数に依存し、投与薬剤の投与量、採用した化合物の化学的特性（疎 水性度）、投与ルートなどが上げられる。投与する場合の薬剤の好ましい投与量 は、組織ダメージの程度とタイプ、個々のを者の全身的な健康状態、選択した化 合物の相対的な生物学的効果、化合物の賦型剤の処方、投与ルートなどに依存す る。一般的に言って、本発明の化合物は、非経口的投与のために０．００１−１ ０Ｘｗ／ｖを含有する水溶性生理学的緩衝液溶液として供給される。一般的な投 与量は一日１０ｎｇ／ｋｇ−１ｇ／ｋｇ体重である。好ましくは一日０．１　ｕ 　ｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇ体重である。最適には、愚者の体重ｋｇ当たりモ ルフォゲン蛋白質として０．１４００　μｇである。成熟型モルフォゲン（ＯＰ −１，２０μｇ）を毎日正常ラットに２１日間投与しても、生理学的傷害を引き 起こさなかった。さらに正常新生マウスに１０日間連続的に１０μｇ注射しても いかなる異常も認められなかった。

本発明の方法での全身的なモルフォゲンの投与のためには、大容量投与が治療の 最初に採用される。治療はその後維持量にして継続する。さらに投与量は、その 後血中のモルフオゲンのレベルを一定間隔でモニタリングして決定する。

組織の傷害が慎重に引き起こされる場合、例えば外科的方法では、モルフォゲン は、好ましくはあらかじめ投与するか、傷の発生にともなって投与する。好まし くは、外科手術の準備において予防的に投与しておく。

さらに、内因性モルフォゲンレベルを促進する物質の有効量は、上記のどの投与 ルートによるかで適用される０例えば、影響を受けた組織及び／または移植組織 の細胞のモルフオゲン生産及び／または分泌促進剤は、哺乳動物に提供される。

この場合、処置を行うため、組織に直接投与する。与えられた＆ｌｌ織で内因性 のモルフォゲンのレベルを変えることのできる物質の特定と試験を行う方法は、 実施例１５に説明しており、詳細は米国特許用１１１１９９１年８月３０日ＵＳ ＳＮ７５２，８５９に記載されており、引用によって本発明と一体化する。端的 に言えば、候補化合物は試験組織あるいは細胞とともインビトロでインキュベー ションして特定し、試験する。その組繊細胞によって生産されるモルフォゲンの 発現及び／または分泌が化合物によって影響されるがどうか確認するため充分な 時間をかける。

本発明の目的では、虚血性再循環傷害に伴っておこる＆１１織ダメージを緩和す る際の有効な上記のモルフォゲン（「治療剤」として正しく引用するそれらの作 用を促進する物質）は、あらかしめ、あるいは酸素の回復の間に投与される（即 ち血流の回復と再循環）。治療が現存する傷害に続くため、治療剤は好ましくは 、酸素欠乏症または虚血状態となった後、速やかに静脈注射により投与する。例 えば、脳梗塞、心筋梗塞、窒息あるいは心肺停止後直ちに、治療剤は静脈連射に よって投与する。虚血性あるいは低酸素症傷害が慎重に、及び／またはやむおえ ずに発生する場合、例えば外科手術など、臓器あるいは臓器系への循環は、慎重 に、および／または一時的に、停止する。頚動脈一部切除、冠状動脈バイパス、 移植、臓器移植、繊維化溶解術療法等の場合である。治療剤は好ましくは組織へ の酸素減少と同時かそれ以前に投与しておく。好ましくは、モルフォゲンは外科 手術の準備として予防的に投与しておく。

同様に、すでに高酸素誘発傷害があった場合には、モルフォゲンは診断上投与す る。高酸素傷害が誘発された場合、例えば未熟新生児の治療において、あるいは 肺気腫のような肺疾患により苦しんでいる患者には、治療剤は酸素供給前に予防 的に投与しておく。

ｌ−尖施■ 実施例１０モルフオゲン発現ｍｍの同定モルフォゲンの組織分配を決定すること は、得られた組織で発現した異なるモルフォゲンを、関連するモルフォゲンと同 様に、同定するために使用される。組織分布は、モルフォゲン類似物質のスクリ ーニングと同定に用いて、有用なモルフォゲン生産組織を同定するために使用さ れる０モルフォゲン（あるいはｍＲＮＡの転写）は、発現が低い組織で、標準的 な手法と一部変法を用いて異なった。組織で同定される。例えば、蛋白質の分布 は標準的なウェスタンプロットや免疫蛍光操作とモルフォゲン特異的抗体と目的 のモルフォゲンで同定できる。同様にモルフォゲン転写物の分布は、標準的なノ ーザンハイブリダイゼーション法と転写物特異的プローブを用いて特定される。

転写物に特異的にハイブリダイズし、転写物に関連したその他の物から目的の転 写物を区別するプローブを使用できる。なぜならば、ここでいうモルフォゲンは その活性Ｃ末端ドメインと高いホモロジーを持っているため、特異的なモルフォ ゲン転写物の組織識別が未成熟蛋白質のプロ領域、および／または成熟蛋白質の Ｎ末端領域をプローブを用いて識別できる。その他の有用な配列は３′非コード 領域のフランキングとそれに続く明らかなストップコドンである。配列のこの部 分は、本発明のモルフォゲンの間でも、実質的に異なっている。そしてそれゆえ に蛋白質特異的である０例えば特にを用なＶｇｒ−１特異的プロ一ブ配列は、Ｐ ｖｕｌｌ−５ａｃｌ断片であり、非翻訳プロ領域と成ＰＮ末’ｔａ　６５域の両 方をコードする２６５ｂｐのフラグメントからなる（Ｌｙｏｎｓｅｔ　ａｌ、（ １９８９）ＰＮＡＳ　８６：４５５４−４５５８にｃＤＮＡ配列が記載されてい る。

同様に、特に有用なｍ０Ｐ−１特異的プロ一ブ配列がＢｓｔＸＩ−Ｂｇｌｒ断片 であり、ｍ０Ｐ−１のプロ領域の殆ど２−３番目をカバーしている０、６８ｋｂ の配列である。　５ｔｕＩ−５ｔｕＩ断片、７システインドメインの直前の上流 配列０．２ｋｂ　、　Ｅａｒｌ−Ｐｓｔｌ　フラグメント、３゛非翻訳配列の部 分を含む０．３ｋｂフラグメント（配列表配列番号１８、プロ領域は残５３０− ２９１で必須として特定されている）。同様のアプローチが使用され、例えばｈ ＯＰ−１（配列表配列番号１６）、ヒトまたはマウス０Ｐ−２（配列表配列番号 ２０及び２２）　に使用。

合成操作あるいはクローン化した配列から得たこのモルフォゲン特異的プローブ を使い、従来技術として良く知られている手法により、モルフォゲン転写を哺乳 動物組織から同定した。

要約すると、全ＲＮＡは種々の成熱マウス組″ｍ（肝臓、腎臓、未丸、心臓、悩 、胸腺、胃）から、Ｃｈｏ＋ｍｅｚｙａｓｋｉ　らの方法（１９８７、Ａｎａｌ 、　Ｂｉｏｃｈｅｍ　１６２：１５６−１５９）及び以下に示した方法のような 標準的な方法で調製した。ポリ（Ａ）＋ＲＮＡはオリゴ（ｄｔ）−セルロースク ワマドグラフィー（ファルマンアＬＫＢバイオテクノロジーｌｎｃ、）を用いて 調製した。各組織からのポリ（Ａ）　＋ＲＮＡ　（ｉ！常１５μｇ）を１χアガ ロース／ホルムアルデヒドゲルで分離し、Ｎｙｔｒａｎ膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅ ｒ　＆　５ｃｈｕｅｌｌ）に移した。転移に続いて、メンプランは８０°Ｃに加 温し、ＲＮＡはＵＶ光で交差結合させた（通常１ｍｗ／ｃｕｌで３０秒間）。ハ イブリダイゼーションに先立ち、加熱により適当ナプローブと結合させた。ハイ ブリダ・イゼーシヲンはローラーボトル中で回転しているルーサイト製シリンダ ー中で行。た。

１ｒｅｖ／分、３７’　Ｃ１５時間、４０χフオルムアミド、５　ＸＤｅｎｈａ ｒｄｔｓ。

５　Ｘ５ＳＰＥ、０．１χＳＤＳの条件とした。ハイブリダイゼーションに引き 続いて、５０’　Ｃテ０．ＩＺＳＤＳ　、０．ｌＸ５ＳＰＥテア　イル９−を洗 浄し、非特異的にカウントした・ 挿りのモルフォケ゛ンの組織分布を実施例に示している＊　ｖｇｒ−１、０Ｐ− １，ＢＭＰ２．　ＢＭＰ３．　Ｂ阿Ｐ４．Ｒ門Ｐ５．ＧＤＦ−１，０Ｐ−２につ いて行い、成人ｍｍ！、：ついて米国出願υＳＳＮ　７５２．７２６４に開示し ７、また０ｚｋａｙｎａｋｅｔ　ａｌ、　１９９１．　Ｉｌｉ○ｃｈｅｍ、　Ｂ ｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｎ、　１７９：１１６−１２３゜および０ ｚｋａｙｎａｋ　ｅｔ　ａｌ、　１９９２．ＪＢＣ（印刷中）に開示し７ており 、引用により本発明と一体化する。ここに記載した通常のプローブ技術を用いて 、脳、ｔｉｌ！臓、肺、心臓、肝臓及び腎臓組織に対するこれらのモルフォゲン に特異的なプローブを使ったノーザンブロ７）ハイブリダイゼーションは、腎臓 関連組織が０Ｐ−１の第一次発現ソースであることを示しており、脳、心臓、肺 組織が第二次ソースであることを示している。　０Ｐ−１ｍＲＮＡ　もまた、こ のプローブ法によって唾液腺、特にラット耳下腺中に特定されている。肺組織は 、Ｖｇｒ−１，ＢＭＰ５．Ｂ門Ｐ４およびＢ門Ｐ３の第一次組織発現ソースであ るとおもわれる。Ｖｇｒ−１の低レベルは腎臓と心臓組織に認められ、一方肝臓 はＢＭＰ５の第二発現ソースであり、肺臓はＢｌＩＰ４の第二の発現ソースであ ることが示された。ＧＤＦ−１は脳中で第一に発現されている。今日ではＯＦ２ は、初期の栓塞組織において第一に発現していることが確認されている。特異的 にマウス胚と出生後６日めの動物のノーザンブロントでは、８日めの胚にＯＦ２ の発現が認められた。発現は８日目の胚で顕著に減少し、出生後の動物では検出 されなかった。

実施例２．　の゛　モルフォ　゛ン ０Ｐ−１の発現は唾液中に確認され（特にラット顎下腺、実施例１参照）、さら にヒト血清、種々の乳、乳腺分泌物、初乳、５７日めの牛乳なども検出されてい る。さらに、米国特許出願ＵＳＳＮ９２３，７８０に記載され、引用により本発 明と一体化しているが、生体の体液分泌蛋白質は、モルフオゲン的な活性を示す 。

モルフォゲンが天然には乳及び唾液中に存在しているというこの発見は、成熟活 性ＯＰｌは酸安定性でプロテアーゼ抵抗性であるという公知の観察とあわせて、 経口投与は哺乳動物へのモルフォゲンの治療目的のルートとして有用である０代 表的な経口投与は、分配を広げ、また予防的治療をするために好ましい方式であ る。さらに、初乳を含む全ての乳の形態中のモルフオゲンの単離は、蛍白質が骨 格発達を含む、幼体の組織発達に顕著な役割を果たすことを推定させる。

２．１　乳中のモルフォゲンの検出 ０Ｐ−１はラット乳腺分泌物、牛初乳、５７日めの牛乳から部分精製された。精 製は一連のクロマトグラフィーカラム（カチオン交換、アフィニティー、逆相） にこれらの液体を通しておこなった。各ステップにおいて溶出フラクションを集 め、標準的なイムノプロットによりＯＰ〜１の存在を試験した。免疫反応性フラ クションは、あわせてそしてさらに精製した。最後に部分精製物は０Ｐ−１特異 的抗血清を使用してウェスタンプロット分析によって、０Ｐ−１の存在を試験し た。そしてインビボ、インビトロで活性を試験した。異なった乳腺から精製した ０Ｐ−１は、０Ｐ−１とＢＭＰ２に対する抗体を用いてウェスタンプロットで特 定した。抗体は、実施例に記載したような、先行技術で公知の標準的な免疫学的 プロトコールを用いて［した。免疫原として大腸菌で生産したフルレングスの０ Ｐ−１とＢＭＰ２を用いた。全てのケースで、精製０Ｐ−１は抗０Ｐ−１抗体に 反応し、抗ＢＭＰ２抗体に反応しなかった、孔線分泌物から精製した０Ｐ−１の モルフォゲン活性は、ここに引用で合体させる米国特許４，９６８，５９０に記 載したラットモデルに従ってインビボで本質的に評価した。要約すれば、サンプ ルは、各０Ｐ−１免疫反応性フラクションから調製した。フラクションの一部（ ３３χ）を凍結乾燥させて、乳腺分泌物由来０Ｐ−１の最終産物を調製し、これ を５０χアセトニトリル１０．１χＴＦＡの２２０　μｌに蛋白質を懸濁させた 。撹拌後２５ｍｇのコラーゲンマトリックスを添加した。サンプルを一夜凍結乾 燥し、ロングエバンス系ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔ ｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、２８−３０日齢）に埋め込んだ、各 フラクションは２重に埋め込んだ、コラーゲンマトリックス移植操作の詳細は、 引用によって本発明と合体している米国特許４，９６８，５９０を参照のこと、 １２日後、移植体は取り出し、米国特許４，９６８，５９０に記載されているよ うに、病理学的観察によって骨の形成を評価した。全ての例で、免疫反応性フラ クションは骨形成的に作用していた。

２．２　血清中のモルフォゲンの検出 モルフォゲンは、モルフォゲン特異的抗体を用いて血清から検出する。分析はウ ェスタンプロット（イムノプロット）および輝似方法のように、標準的な免疫反 応を使用して行う。好ましくは、分析はアフィニティーカラムを用いて行い、カ ラムはモルフォゲン特異的抗体を結合させたものであり、サンプル血清を通し、 選択的に目的のモルフォゲンを抽出する。その後モルフォゲンは溶出させる。適 切な溶出緩衝液は、対照（精製遺伝子組換えモルフォゲン）を最初に溶出する条 件によって経験的に決定する。フラクションは標準的なイムノプロットでモルフ ォゲンの存在を試験し、Ｎ末端配列で結果を確認した。血清およびその他体液サ ンプルのモルフォゲン濃度は、吸光度あるいは抗体結合量測定など標準的な蛋白 質定量方法で測定した。

以下に示したサンプルブロールは血清中の０Ｐ−１を特定するためのものである 。この一般的方法に従って、その他モルフォゲンは血清を含む体液中で検出され る。さらに血清中のモルフォゲンの定量は、個人に対してモルフォゲンの治療容 量を与えるために全身的な投与が適切であることを示している。そしてモルフオ ゲンは内分泌樺の因子として、全身的に作用することを示した。１終的にこのプ ロトコールにより、内因性モルフオゲンレベルの変動が検出でき、そしてこの変 動レベルは組織の機能不全の指標として使用できる。さらにまたモルフオゲンレ ベルの変動は、モルフォゲン転写しベルによって確認でき、実施例１に述べた標 準ノーザンブロノト分析かあるいはモルフォゲンｍＲＮＡ特異的ハイブリダイズ 可能なラベル化プローブを用いる自然のハイブリダイゼーションによって行う。

ハイブリダイゼーションは、モルフォゲンｍＲＮＡに対して特異的にハイブリダ イゼーションするラベル化プローブを用いて、標準的なＲＮ＾ハイブリダイゼー ソヨン法によって行う。

０Ｐ−１は次の分析によりヒト血清で検出される。先行技術および実施例１５に 記載した一般的な免疫技術を用いて、遺伝子組換え生産０Ｐ−１に対するモノク ロナール抗体がアガロースゲル（ｌｆｆｉ−Ｇｅｌ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ、製造メーカーの指定使用法に従っ て調製した）に固定化され、血清から０Ｐ−１を精製するために用いられた。血 清をカラムに通し、３Ｍのに一チオンアネートで７容出した。に−チオシアネー トフラクションは、６門尿素、２０１リン酸、ｐｌ（７，０で透析し、ＣＢＨＰ ＬＣカラムで、２５−５０χアセトニトリル１０．１χＴＦＡグラジエントで２ ０分で溶出させた。遺伝子組換え生産された成熟型０Ｐ−１ホモダイマーは２２ −２３分の間に溶出される。フラクションを集め、実施例２．Ａに示したように ０Ｐ−１抗体を用い、標準的なイムノプロットで試験を行った。　投与したある いは内因性モルフオゲンレベルは、たとえば、治療プロトコールの有効性の評価 やその他の目的のためにあらかじめ定めた指標値と生体サンプル中に存在するモ ルフオゲンの量を比較することによって、ここに記載した治療のモニターとする ことができる。さらに、内因性モルフオゲン抗体のレベルの変動は、抗体や内因 性モルフオゲン抗体に特異的にインタラクトすることのできるその他の結合性蛍 白質を用し）て、好ましくは血清中で、この方法によって検出できる０モルフオ ゲンや内因性抗体のレベルの検出された変動は、ｍ織状態の変化の指標として使 用できる。例えば組織ダメージが回復し、組織や臓器の機能が「正常」に復し、 付加的組繊ダメージが消失した場合、モルフォゲンの必要性が低下し、循環する モルフォゲン抗体しベルの上昇が測定される。

実施例３．能への１　″のモルフォケ」哺乳動物の虚血性再循環傷害に引き続（ モルフォゲンの心筋保護作用はラントモデルで速やかに評価できる。本実施例で はモルフォゲン（ＯＰ−１）は、実験的誘発心筋梗塞ラントの虚血過程に先行し て投与された。モデルは次のＬｅｆｅｒ　らの方法に従ってで作成され、引用に よって本発明と一体化している。　Ｌｅｆｅｒ　ｅｔａｌ、（１９９０）　５ｃ ｉｅｎｃｅ　２４９：６１−６４　および（１９９２）　Ｊ、　Ｍｏｌ。

Ｃｅ１１．Ｃａｒｄｉｏｌ、　２４：３８５−３９３　、要約すると、虚血と再 循環に続く心筋組繊機能の喪失は、心筋タレアチンキナーゼ活性（ＧＫ）の喪失 と内皮細胞依存性血管弛緩の喪失を測定して評価する。

エーテル麻酔ラットの第一の群で、心筋梗塞（ＭＩ）を誘発させるために、紐製 結紮糸で左冠状動脈の第一主分岐の近位を閉塞させた。結紮糸は、冠状動脈再潅 流させるため、閉塞１０分後に除去した。この第一群は、ここでは「心筋梗塞Ｊ 　（ＭＩ）群と呼ぶ。

第二の群は同じ操作を受けるが冠状動脈の閉塞は起こさせない。

したがって心筋梗塞はおこさない、第二の群はここでは「疑似心筋梗塞群Ｊ　（ ＳＲＡＭ門Ｉ）と呼ぶ。

第一群の１群ラットはさらに３つの群に分ける。２Ｍｇのモルフォゲン（ＯＰ− １）を、結紮１０分後、再潅流の直前に旧ラットの第一のサブグループに経静脈 的に注射する。旧ラットの第二のサブグループに、２０μｇの０Ｐ−１を、結紮 １０分後、再潅流の直前に経静脈的に注射する。旧ランドの第三のサブグループ （対照）に、溶媒即ち０．９重食塩を０Ｐ−１処理ラツトと同様に投与する。

２４時間後全ラットから心臓を摘出し、左心室（梗塞部）のクレアチンキナーゼ （Ｃに）レベル、そして心室中隔（対照　非虚血部）のクレアチンキナーゼ（Ｃ Ｋ）レベルを標準法で測定した０両方の部位のＣＫ活性の違いを比較し、梗塞部 で減少したＣＫ活性量を梗塞部に対する心筋性細胞傷害指数として用いた。

図１に示すように、モルフォゲン（ＯＰＩ）は虚血性組織に投与した場合に有意 な心筋保護作用を与えることができた。図中Ｃにの１員失は、心室中隔と左心室 の間の特異的ＣＫ活性の差としてグラフ化した。

再ｉｌｌ直前に０Ｐ−１２μｇを投与されたＭｌラットのサブグループによるＩ Ｊ活性の消失は、溶媒のみを注射されたコントロールと比較していくらかの保護 作用を示していた。どちらのサブグループのレベルも５ＨＡｌＩ　Ｍｌ対照群の レベルと比較して測定した結果である。再潅流直前に０Ｐ−１２０ｎｇを投与さ れた旧ラットのサブグループは、溶媒のみを注射されたコントロールと比較して 明白な保護作用を示していた。どちらのサブグループのレベルも５ＨＡｌ’ｌ旧 対照群のレベルと比較して測定した結果である。

虚血後、再潅流前に投与した場合、０Ｐ−１は明白な心筋保護作用をもたらすこ とをこのデータは示している。

この実施例の変法は、虚血誘発前に動物にモルフオゲン投与することである。実 験は正常ラットと免疫寛容ラットにおいて虚血に対して先に投与したモルフォゲ ンの心筋保護作用を評価した。

実施例４．Ｉ゛・　したＩ゛・　のモルフオ　゛ン几アセチルコリン（ＡＣｈ） およびアデノシンニリンＭ（ＡＤＰ　免疫メディエータ）のような明らかな血管 拡張物質は、インタクトの内皮の存在下でのみその血管拡張作用を発揮する。内 皮は、内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）と命名された物質の放出を促進する。

内皮が傷害を受けた場合、ＥＲＤＦが放出されなくなり、内皮依存性物質に対す る反応がなくなり血管拡張されなくなる。一方ニトログリセリン（ＮＴＧ）やニ トロプルシドなどのいくつかのその他血管拡張剤は、内皮非依存性の拡張剤であ り、血管を直接拡張させる。

本実施例では、虚血心筋層の再循環に続いて起こる、冠状微小血管系での心血管 内皮依存性弛緩（ＥＤＲ）活性の喪失を予防する０Ｐ−１の機能を説明する。そ してモルフォゲン処置後２４時間目の心筋傷害を抑制する作用を説明する。要約 すれば、モルフォゲン処置２−２４時間後の虚血性循環傷害が摘出ランド心臓に 誘発され、再循環した心臓はＡＣｈまたはＮＴＧのいずれでも血管を拡張される 。モルフォゲン処置をしない場合、傷害組織はＡＣｈ誘導性血管拡張を阻害され 、ＮＴＧ誘導性血管拡張を阻害されない。

モルフォゲン処置は、再循環心臓でのＡＣｈ誘導性血管拡張を増強させると期待 させる。

さらに、４８匹の成熟雄スプラグドーリューラット（２５０−３３０ｇ）を６匹 ずつ８群にわけた。１２匹のラットには、実施例３に示した疑似心筋梗塞（ＳＨ ＡＭ　ＭＩ）処置を施した。残り３６匹のラット心臓を以下のようにして摘出し た。　１２匹のラットに心臓摘出２４時間前に０Ｐ−１を静脈注射した。もう− 組のラットには心臓摘出２時間前に０Ｐ−１を２０ｎｇ静脈注射した。最後の組 には溶媒（０，９ｌ食塩）を注射した。ついでベントパルビタールナトリウム（ ３５＋＊ｇ／ｋｇｌｌｌ腔内投与）麻酔した。心臓は摘出後、酸素化クレプスー ヘンセレフト液（Ａｏｋｉ　ｅｔ　ａｌ、、１９８８．Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ 、９５：３５）を使用して、定量流量（１５ｍｌ／分）でラングドルフ法で潅流 を行った。　各群のラットは、６匹ずつ２つのサブグループにわけた、再潅流前 ２０分に、冠状血管拡張剤の反応を０．０５ｎモルのＵ−４４６９（９，１１− メタノエボキシプロスクグランジンＨｚ）を用いて狭窄を誘導させて、３分後に 血管拡張剤を投与して測定した。

サブグループ１５ｎＩｗｏｌ　ＡＣｈ　、サブグループ２−１２−１５ｎ　ＮＴ Ｇ投与群である。血管拡張の指標として冠状血管循環圧（ＣＰＰ）レベルの増加 を測定した。ＣＰＰレベルが正常に復帰すると、心臓は３０分間対照の１５％に 冠状注入を減少させ、虚血状態にした。ついで再度正常の流量で流し、さらに２ ０分間続けた。

その時の血管拡張剤の反応は、先に述べた血管拡張物質の投与と狭窄によって再 度測定した。

この実験の結果は図２に示した。虚血性となる前に、＾ｃｈとＮＴＧを投与する と全群正常の血管弛緩する結果を得た。虚血性に対して０Ｐ−１を２４時間前に 投与した心臓は、ＡＣｈに対して７０％の反応性を示し、一方０Ｐ−１を虚血の ２時間前に投与した場合はＡＣｈの５５％の反応を示した。溶媒のみを投与した 群はＡＣｈの５５％の反応を示した。最終的に、虚血にしなかった対照群はおよ そ９５％のＡＣｈ反応を示した。このことは、内皮依存性血管拡張剤は、ランド 心臓の虚血性および再循環の血管拡張剤の作用を減少させるように働くことを示 している。さらに、０Ｐ−１は心筋梗塞性虚血発生の２４時間前に投与すれば、 内皮依存性拡張を保ことができる。また直接性血管拡張剤（ＮＴＧ）の持つ欠点 がない。

ＮＴＧ誘導血管拡張作用は、最初の非虚血性心屍を１００χとして９５％である 。

実施例５．　“へのモルフオゲンの 内皮の機能傷害での好中球接着の役割と、この活性を１ｉｌＪするモルフォゲン 心筋保護効果はＬｅｆｅｒらの述べていル一般的す多形核好中球（Ｐｉ’ＩＮ） 接着性分析法（引用によって開示する、１、ｅｆｅｒ　ｅｔ　ａ！、、１９９２ ．Ｊ、Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｃａｒｄｉｏｌ、　２４：３８５−３９３）で評 価できる。要約すれば、動脈摘出２４時間前にモルフオゲン（ＯＰ−１２０ｇｇ ）あるいは０．９ｌ食塩投与をしたランドから、上腸間膜動脈の断片を摘出する 。断片は洗浄し、１−２ｍｍの横断リング状に切断し、ついで切り開き、に−Ｈ 溶液中で３７°Ｃ、ｐＨ７，４でインキュベートした。好中球は標準的な方法で 調製し、蛍光ラベルした。白血球はＰｅｒｔｒｏｆｔらの方法でラットから単離 しくＰｅｒｔｒｏｆｉｔ　ｅｔ　ａｌ、、１９６８．Ｅｘｐ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ 　５０：　３５５−３６８）、リン酸緩衝食塩（ＰＢＳ）で洗浄し、濃度勾配遠 心で精製し、Ｙｕａｎの方法でラヘル化した（Ｙｕａｎ　ｅｔ　ａｌ、＋１９９ ０７Ｍ１ｃｒｏｖａｓｃ　Ｒｅｓ、、４０：２Ｌ８−２２９）。

ラベル化好中球はオーブンリングの浴中に加え、１００ｎＨのロイコトリエンＢ 、（ＬＴＢＪ）で活性化した。リングは２０分間インキエヘートし、内皮表面に 接着した好中球の数を蛍光顕微鏡で視覚的に確認した。

図３に示したように、未促進ＰＭＮ　（ＰＭＮ単独）を浴中に加えた場合、血管 内皮に明確に接着しなかった。０．９ｌ食塩を注射したラットから得たリングで 、ＬＴＢａ　（１００ｎＭ）による好中球の活性化は、内皮に対して接着したＰ ＭＮの数を大幅に増加させた（Ｐ＜０．００１）　、　０Ｐ−１＜２０ｎｇを２ ４時間前に投与）は明らかにＬＴＢＪによる活性化ＰＭＮの接着を阻害した。

神経、腎臓、肺組織をふくむその他の組織も虚血性再循環傷害によって明らかに 影響される。これらの組織の虚血性再循環傷害の回復におよぼすモルフオゲンの 効果は、先行技術と以下　。

に開示した方法とモデルにより評価できる。同様に、酸素欠乏症傷害に続くダメ ージを受けた肺組織でのモｌレフオゲンの組織保護作用を評価するための方法も 提供される。

ウサギ栓塞発作モデルは、脳の虚血性再循環に続く組織傷害へのモルフォゲンの 効果を評価するために有用な方法である。

以下に開示するプロトコールは、実際的にはＰｈ１ｌｌｉｐｓ　らの方法で（Ｐ ｈｉｌｌｉｐｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｌ ｏｇｙ　２５：　２８１２８５、引用によって本発明と一体化される）。ホワイ トニューイングランドラビット（２−３ｋｇ）を麻酔し、人工呼吸器を取りつけ た。セルディング法によって頭蓋内循環に選択的にカテーテルを挿入した。ベー スライン脳造影をデジタル化表示装置を使って行った。遠位内部頚動脈またはそ の分岐に、１８時間経過の自己由来の血栓０．０３５Ｉｌｌで選択的に閉塞させ た。動脈の閉塞は、閉塞後直ちに繰り返し造影で記録した。脳梗塞を誘発するに 充分な時間（１５分または９０分）経過後、ＴＰＡのアナログであるＦｂ−ＦＢ −ＣＦ（０，８ｍｇ／ｋｇ　２分間以上）のような再循環薬剤を投与して、再循 環を行わせた。

脳梗塞でのモルフォゲン効果は、栓塞及び／または再循環に先行または引き続い て、０Ｐ−１のようなモルフオゲンを種々の濃度で投与することによって評価し た。ウサギは栓塞後３−１４日で層殺し、その脳は神経生理学的試験のため、１ ０χの中性化緩衝ホルマリン中で液浸により、少なくとも２週間かけて固定化し て調製した。脳は冠状面にそって２−３ｍｍ間隔で切断し・番号をつけ、通常の 組織学的手法でパラフィン処理し、神経組織の壊死の程度を視覚的に確認した。

腎臓の虚血性再循環傷害へのモルフオゲンの腎臓保護作用は、０ｕｅｌｉｅｔｔ ｅらによって開示されたマウスモデルを用いて評価できる（Ｏｕｅｌｅｔｔｅ　 ｅｔ　ａｌ、＋１９９０．Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、８５ニア６ロー７ ７１．引用によって本発明と一体化される）、要約すれば、腎臓虚血は、３５− ４５日齢の異系交配スイス雄マウスに、右腎臓切除、左腎臓動脈に微小動脈瘤ク ランプを用いて１０−３０分間の間閉塞させて誘導することができる９モルフォ ゲンは閉塞及び／または再循環の前、あるいは後に、種々の時間で投与する。モ ルフォゲンの効果は、先行技術として公知の方法を用いて、生物学酷評価と病理 組織学的評価を行うことができる。

致死的高酸素濃度に組織が露出する場合のモルフォゲンの組繊保護効果は、次の 方法で評価できる。成熟ラン）　（２７５−３００ｇ）に最初にモルフォゲン（ ｈｏｐ−ｏ　、溶媒のみをそれぞれ投与し、９６−９８χ酸素にＲｉｎａｌｄｏ 　らの方法（Ｒｉｎａｌｄｏ　ｅｔ　ａｌ、、１９８３．Ａｍ。

Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、１３０：１０６５）によって露出させ、高 酸素症を誘発させた。動物はプラスチ、クケージ（３８ｃｍ　Ｘ　４８ｃｍ　Ｘ 　２１ｃｎ＋）で飼育した。４−５匹をいれたケージを７５１の密閉パイレック スガラスチャンバーにおいた。９６−９８％酸素雰囲気で０□（液体０□）を供 給して維持した。チャンバー・を通過して流れるガスは、少なくとも１０回交換 ／時間を保持するように調節した。ケージの最小条件として、室温度２２±１° Ｃ、マススペクトロメトリック医療用ガス分析器で測定した二酸化炭素濃度０． ５％以下の条件を上げる。

７２時間経過後に、全ての生存体を室温度で１．５時間観察し、最初の傷害と引 き続いた免疫細胞介在性ダメージによって誘導された呼吸困難とチアノーゼの程 度を評価した。試験終了後の生存体を記録し、処理群と未処理群の状態をカイ二 乗検定で比較した。各群の生存動物のそれぞれを、肺組織の病理学的観察のため に選別した。

病理学的操作のための肺組織は、２０ｃｍ水の定常圧力で気管カニユーレを通し て１０％緩衝ホルマリンを注入して固定化した。

２４−４８時間で固定化後、各肺葉ごとに切断し、ヘマトキシリン−エオシン染 色を行った。コード化したスライドを好ましくはダブルブラインド法で、浮腫、 間質性細胞の充実性、炎症反応のような病理学的変化の事実を試験した。

実施例７．　および　・　外灯　応のモルフォゲンモルフォゲンは、組織傷害や 外来物質の存在に対する反応において、多形核細胞などが活性化している等の条 件で単核ファゴサイト細胞の多形核化を抑制する。例えばモルフォゲンが存在し ない場合、埋め込み対象素材（皮下的に移植した）は鉱物化骨、チタンやセラミ 、り、その他物質からなっており、これらは多形核化細胞の巨大細胞化を刺激し 、多形核化巨大細胞、即ち応答に対して促進された活性な食胞作用を有する細胞 に取り囲まれ、外来性異物として破壊される。しかしモルフオゲンが存在すると 、単核球前駆体中の動員された細胞の残りの細胞とマトリックス素材が妨げられ ない。図４は、皮下に移植した酸化チタン製物質の組織学的結果の模式図による モルフオゲンの作用を示したものである。図中で”ｍｇ”は単核巨球を意味し、 ”Ｏｂ”は骨芽細胞を意味する。図４Ｂに示した物質はモルフオゲン（ＯＰ−１ ）といっしょに移植し、新しく骨芽細胞が物質の周囲に形成されている。対照的 に、図４Ａに示した物質はモルフオゲンなしで移植したもので、広範囲な多形化 巨大細胞形が物質の周辺を取り巻いている。さらに、哺乳動物の極端な骨喪失を モルフォゲンが阻止することは、この細胞の活性を阻害することでもある。

更に、ここで述べたモルフオゲンは、哺乳動物の外来性抗原に対する反応の際に 促進される抗体生産を抑制する。特に、牛骨コラーゲンマトリックスのみで、ラ ットの骨部位に移植すると、コラーゲンに対する通常の抗体反応はラント中では 促進される。これは標準的な抗骨コラーゲンＥＬＩＳＡ実験で、移植後４遇間間 隔で（すなわち１２週と２０週の間）に採取した血液を測定して確認された。血 清抗コラーゲン抗体価はＥＬＩＳＡで測定した。

これはＮａｇｌｅｒ−Ａｎｄｅｒｓｏｎの方法（Ｎａｇｌｅｒ−Ａｎｄｅｒｓｏ ｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８６゜ＰＮＡＳ　８３ニア４４３−７４４６．引用によ ってここに一体化して開示される）によるもので、この抗体価は実験期間中宮に 増加していた。しかし、モルフォゲンといっしょに移植する（米国特許４，９６ ８，５９０に記載したようにｏｐ−ｔをマトリックスに散布し、吸着させる）と 、抗ウシコラーゲン抗体の生産は顕著に抑制された。体液性の反応を抑制するた めのこのモルフオゲンの活性は、リューマチ性関節炎のような自己抗体疾患を含 む自己免疫疾患に伴う組織ダメージを緩和するモルフォゲンの有用性を証明して いる。

実施例８．　ｆｉヒ管粘　のモルフオゲンによる゛　と外灯に・五課１作里 口腔結膜炎は、放射線療法や化学療法などの結果生じる口内粘膜の潰瘍を含む消 化管炎症疾患である。慢性的な疾患として典型的でない一方、口腔結膜炎の結果 生じる組織破壊はＩＢＤのような慢性的な炎症疾患を反映する。炎症性潰瘍の阻 害と潰瘍１ｍの再生いずれについても、ハムスターモデルでの口腔結膜炎から口 腔粘膜を保護するモルフオゲンの効果を以下の実施例で示す。プロトコールの詳 細は５ｏｎｉｓ　らによって明らかにされており（Ｓｏｎｉｓ、　ｅｔ　ａｌ、 、１９９０，０ｒａｌ　Ｓｕｒｇ、　０ｒａｌ　Ｍｅｄ、　Ｐａｔｈｏｌ。

、６９：４３７−４４３）　、引用によってここに一体化され開示される。

このデータに基づいて、ここに示したモルフオゲンは、ＩＢＤ、関節炎、乾量お よび乾量性関節炎、多発性硬化症およびその他１（以疾患を含む慢性炎症の治療 に有効である。

ゴールデンシリアンハムスター（６−８週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒ４ｖｅｒＬａ ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を３つの試験群に分け た。グループ１、プラセボコントロール（生理食塩）、モルフォゲン低投与群（ ｌｏｏｎｇ）及びモルフォゲン高投与群（１μｇ）。グループ２と３は３０χエ タノール中に対応するモルフォゲン含むものを投与。各群１２匹からなる。

０日から５日までの間継続しいグループ２．３は毎日２回モルフォゲンの投与を 受けた。３日めに全群結膜炎誘導処置を行った。５−フロロウラシル（６０ｍｇ 　／’　ｋ　ｇ　）を３．５日めに腹腔内投与し１こ。７日月に、右頬袋粘膜を 測定用１８ゲージ針で特異的に刺激じた。未処置動物では、刺激潰瘍性結膜炎が 、１０日めの動物の８０χに誘発された。

ベヒクルコントロール（プラセボ）またはモルフォゲンの各投与のため、頬袋粘 膜を緩やかに乾燥させた。ついで粘膜にベヒクルまたはモルフォゲンを投与した 。粘膜にモルフォゲンを付着させておくために、ヒトロキンプロビルセルロース ヘースをコートした。このコーティングはすくなくとも４時間接着させておく。

１２日日目各群２匹を層殺し、病理＆１１織観察を行った。右頬袋粘膜と下部接 続Ｍ織を通常の切り出し法と組織学方法で切り出し、１０χホルマリンで固定化 した。標本はパラフィンに埋め込み、病理組織検査のために調製を行った。切片 はへマトキシリエオジン染色を行い、３人の口腔病理学者でハムスター組織学の 専門家によりブラインドで試験をした。この試験は、標準的な結膜炎標本に対し てブラインドで点数を付けた。萎縮範囲、細胞浸潤、接続組織の降下、潰瘍の程 度、上皮化によって評価した。

各群の平均結膜炎スコアーは、右頬袋の写真と観察で各群毎日測定した。各群間 の差は標準的なｔ検定部ちスチューデント化され１こＬ検定を行った。さらに、 データはカイ二乗検定を用いて刺激性結膜炎の動物との数を比較した。毎日の平 均数は明らかに差があった。

実験結果は図５に示した。平均結膜炎スコアーについて、モルフォゲン（高投与 口　、低投与◇）プラセポ（０）で効果をグラフ化した。高投与、低投与のモル フォゲンはいずれも投与量依存性に傷害形成を抑制した。さらに継続的な病理観 察結果では、＆１１織萎縮、細胞壊死、マクロファージと活性化好中球を含む免 疫作用細胞などの数が、モルフォゲン処！動物において未処置対照動物に比べて 明らかに減少していた。

実施例９．繊維化と施痕Ｕ織形成へのモルフォゲンの作用ここで述べたモルフォ ゲンは損傷組織またはダメージ組織の形態形成を誘導する。組織再生のためのこ の蛋白質の機能は、この蛋白質の抗炎症作用の増強である。以下に示した一連の インビトロ実験では、間葉細胞の遊走と蓄積を誘導するモルフォゲンの機能を示 している。さらに実験では、ＴＧＦ−βと違いモルフォケンは繊維化とＮ痕組織 形成しないことを示している。特にモルフォゲンは初代の繊維細胞においてコラ ーゲン、ヒアルロン酸（ＨＡ）、金属プロテアーゼの生産を促進しない、これら は繊維化と廠痕組織形成に必要である。　ＴＧＦ−βと比較すると、ＴＧＦ−β は、公知の繊維形成誘導因子で、組織形態形成性がな（、これらの繊維化マーカ ーの生産を促進する。

間葉性原細胞の化学走化と遊走は、ＦａｖａＪ、Ａ、　らによって説明されてい るＢｏｙｄｅｎ　ｃｈａｍｂｅｒ変法で測定できる（Ｆａｖａ、Ｒ，Ａ、　ｅｔ ａｌ、、１９９１．　Ｊ、　ＥＸＴ＋、　Ｍｅｄ、、１７３：１１２１−１１３ ２　引用により一体化し開示される）、この測定は、原好中球、単球、繊維芽球 の遊走測定にポリカルボネートフィルターを用いる方法である。化学走化はモル フォゲン４度ｉｏ””−から１０−　’　”の０Ｐ−１の範囲で測定した。原好 中球と単球の場合、１Ｏ−１ｓ−１０−”Ｈの０Ｐ−１が、持続的に最大の遊走 を誘導し、１０−１“−１０−１３Ｍの０Ｐ−１が原繊維芽細胞の超走を誘導し た。全ての場合において、化学走化活性は抗０Ｐ−１抗体で阻害できた。同様な 遊走活性はＴＧＦ−βを用いても観察測定できる。

繊維化におよぼすモルフォゲンの効果は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、コラーゲン、 コラゲナーゼおよび組織金属プロテアーゼの阻害物の繊維芽細胞の生産を評価す ることで確認できる。

ヒトｔｉ維芽細胞は、ヒト新生児包皮の移植片から樹立した。

そして標準的な単層培養で保持した（例えば１９７６、Ｊ、Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ。

１４４：　１１８８−１２０３を参照）。要約すると、繊維芽細胞は、Ｅａｇｌ ｅの？ＩＥＭからなる維持培地で増殖する。この培地は次の成分を含む。非必須 アミノ酸、アスコルビン酸（５０μｇ／ｍｌ）　、ＮａＨＣＯ３オよびＨＥＰＥ Ｓ緩衝７夜（ｐＨ７，２）　、ペニシリン（１００μｇ／ｍｌ）　、アンホテリ ンンＢ（１μｇ／ｍｌ　）、および９χ加熱不活性化ＦＣ５である。化学走化測 定のための標的細胞として用いた繊維芽細胞は、１５０ｍｍ＋の直径のガラスペ トリ皿で維持した。繊維芽細胞は、コーゲン、ヒアルロン酸、コラゲナーゼ、＆ ｌｌ織金属プロテアーゼの阻害物（ＴＩＭＰ）の測定のための繊維芽細胞は１０ ０ｍｍの直径のガラスペトリ皿で増殖させた。

繊維芽細胞の生産する、コラーゲン、ヒアルロン酸、コラゲナーゼ、組織金属プ ロテアーゼの阻害物（ＴＩＭＰ）へのモルフォゲンの作用は、−Ｓ的な分析方法 によって測定した（次の文献を参照、Ｐｏｓｔｔｅｔｈｗａｉｔｅ　ｅｔ　ａｌ 、＋１９８９．Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、８３：　６２９−６３６、Ｐ ｏｓＬｔｅｔｈｗａｉｔｅ　ｅｔ　ａｌ、、１９８８．Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉ ｏｌ、、１０６：３１１−３１８゜Ｃ１ａｒｋ　ｅｔ　ａｌ、、１９８５．＾ｒ ｃｈ、　Ｂｉｏ−ＣｈｅＩＩＢｉｏｐｈｙｓ、、２４１：３６−４４．引用によ ってここに一体化されて開示される）、この分析では、繊維芽細胞はウェル当た り、ｓ　ｘｔｏ’の細胞密度で２４ウ工ルＭｉ礒培養プレートに植えた。繊維芽 細胞は７２時間９χＦＣ５を含む保持培地でコンフルエントに培養し、無血清培 地で２４時間保持した。各ウェルとも培地を捨て、５０μｍのＰＢＳに溶解した 種々の濃度の０Ｐ−１（遺伝子組換え、成熟型または溶解型）　、ＴＧＦ−β（ Ｒ＆　Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、門１ｎｅａｐｏｌ　ｉｓ）をコンフルエントな繊維 芽細胞単層を含むウェルにトリプレットで添加した。コラゲナーゼとＴＩＭＰの 生産をｉｊｊ＋ｌ定する実験では、５χＦＣ３を含む維持培地（４５０μｌ）を 各ウェルに加え、４８時間後に培養上清を回収し、分析までは一７０°Ｃで保存 した。ＨＡ生産を評価する実験では、２．５ＸＦＣ５を含む維持培地（４５０μ ｍ）を各ウェルに加え、４８時間培養した。

コラゲナーゼの繊維芽細胞生産を測定する実験では、非必須アミノ酸を含まない 無血清培地（４５０μｌ）を各ウェルに加え、７２時間焙養した。繊維芽細胞の 生産するＩ（Ａは、ラベル化した新規に合成したグリコサミノグリカン（ＧＡＧ ）を用いて、［’Ｈ］酢酸と２４時間培養し、特異的にヒアルロン酸を分解する Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙａｌｕｒｏｌｙｔｉｃｕｓ　（ＩＣＮ　Ｂｉｏｃ ｈｅ＋ｙｉｃａｌ＋Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ＋　ＯＨ）由来のヒアルロニダーゼとイ ンキュベーションした後、放出した放射能活性の量を測定した。繊維芽細胞の全 コラーゲン生産は、コラゲナーゼ怒受性蛋白質分析法を使用して行った。これは 、新規に合成されたコラーゲンに培養の最終２４時間に取り込まれた（３月プロ リンが反映することによる。！１１維芽細胞培養上清のコラゲナーゼとＴｒＭＰ Ｉ白レベルは、特異的なＥＬＩＳ＾で測定した。

回６に示すように、ＴＧＦ−βと比較するとコラーゲンまたはＨＡの生産を有意 には促進させしなかった０図において、パネルＡは０Ｐ−１のコラーゲン生産に およぼす効果、パネルＢはＴＧＦ−βのコラーゲン生産におよぼす効果を示す、 そしてパネルＣ，ＤはＨＡ生産への効果０Ｐ−１（パネルＣ）、ＴＧＦ−β（パ ネルＤ）を示す、モルフォゲンは、成熟型０Ｐ−１または溶解型０Ｐ−１のいず れも同じ結果となった。対照的に、ＴＧＦ−βの潜在型（プロドメイン促進型丁 ＧＦ−β）は活性がなかった。

実施例１０．上　細胞増殖のモルフォゲン阻害本実施例ではインビトロの上皮性 細胞増殖抑制するモルフォゲンの活性を示す。これはミンク肺上皮細胞株（ＡＴ ＣＣＮｏ、ＣＣＬ６４）由来細胞の培養でのトリチウムチミジンの取り込みによ って確認するもので、一般的な哺乳類細胞培養方法を用いる。要約すると、細胞 はイーグルの最小必要培地（ＥＭＥＭ）に１０２胎児ウシ血清（ＦＢＳ）　、２ ００単位／ｍｌ　ペニシリン、２００　μｇ／ｍｌストレプトマイシンを加えた 培地中でコンフルエントに培養し、４８ウエルの細胞培養用プレートに１ウエル 当たり２００．０００細胞の密度で植えつけた。この培養がコンフルエントにな ったとき、培地を１χ胎児ウソ血清（ＦＢＳ）　、ペニノリン／ストレプトマイ シンを含むＥＭＥＭ　Ｏ，５ｍｌと交換した。そして培養は３７°Ｃで２４時間 行った。

インキュベーション後１．０　μＣｉのトリチウムチミジンを添加し、そして３ １°Ｃで４時間インキュベートした。培地を除去後、細胞を再度氷冷し、リン酸 緩衝食塩で洗浄し、そして各ウェルに工０χＴＣＡ　Ｏ，５ｍ１ｗｏ加えて沈澱 させた。さらに室温で１５分間インキヱベートした。細胞は氷で冷やした１留水 で３回洗浄し、０．４門ＮａＯＨＯ，５１ｗ１で溶解し、各ウェルからの分解物 をシンチレーション試験管に移し、シンチレーションカウンター（Ｓｍｉｔｈ　 Ｋ１１ｎｅＢｅｃｋｏ＋ａｎ　）放射活性を記録した。

結果は以下の表１に示した。テストした種々のモルフオゲンの抗増殖効果はＤＮ Ａに取り込まれたトリチウムチミジンのカウント数（Ｘ１００Ｏ）で表現した。

さらに未処理細胞（ネガティブコントロール）、上皮細胞増殖阻害が知られてい る局所作用因子であるＴＧＦ−β（ｌｎｇ）と比較を行った。ｃｏｐ−ｓおよび ｃｏｐ−７は生物的に合成したもので、骨形成活性をハツキリ示している。ラン トの骨を用いた分析（米国特許５，０１１，６９１参照）では、軟骨内の骨形成 に完全なカスケードを誘導することができる。

モルフォゲンは明らかに上皮細胞の増殖を阻害する。同様の実験では、モルフォ ゲンＣ０Ｐ−１６、ｂＯＰ（骨精製骨形成蛋白質、ＣＭＢＰ２とＯＰ、１からな る二量体蛍白質）と共に作用し、組換え０Ｐ−１は細胞増殖を抑制する。ｂＯＰ 　、　Ｃ０Ｐ−１６はまた軟骨の骨形成を誘導する（米国特許４，９６８，５９ ０　ｉよび５，０１１，６９１参照）。

表■ チミジン取り込み（Ｘ１００Ｏ） 対照　５０．０４８．５３．６９２ ＣＯＰ−７−１（Ｌｏｎｇ）　１１．８７４ＣＯＰ−７−２（３ｎｇ）　１１． １３６ＣＯＰ−５−１（６６０ｇ）　１６．０９４ＣＯＰ−５−２（１６４ｎｇ ）　１４．４３ＴＧＦ−β　（ｌｎｇ）　１．８６．　１．４７８次の実施例は 、関節炎およびその他全身性炎症性疾患治療において、モルフォゲンの有効性を 示すためのラットアジュバント誘発関節炎モデルを示す。ラットアジュバント誘 発関節炎は・リューマチ性関節炎に見られるような骨や軟骨の変化をもつ全身性 の炎症状態を誘導せしめる。しかし期間は加速されている。

（Ｐｅａｒｓｏｎ、１９６４．　Ａｒｔｈ、　Ｒｈｅｕｍ、　７：８０参照）、 実験の詳細なプロ１、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈｅｒ、１７８：２２ ３−２３１）引用によってここに一体化され開示される。

要約すると、スプラグ−トーリュー雌ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒｌ、 ａｂｏｒａ　ｔｏｒｉｅｓ、　Ｗｉ　ｌｎ＋ｉｎｇ　ｔｏｎ、　ＭＡ）を３群ラ ンダム化した。コントロール　。モルフォゲン、低投与（１−１０μｇ／ｋｇ体 重）、　及びモルフォゲン、高ドーズ（１０−２０μｇ／ｋｇ体重）。グループ １．２．３はこれに対応している。

アジュバント関節炎は３群全てに誘発させた。即ち右前足側庶部内に鉱物油中に ミコバクテリウム　ブチリカムの死菌体を１５χ懸濁させた液を０．０５ｍ１旺 射することで行った。アジュバント注射１８日月に、両方の後脚の脚容量を♂す 定した。モルフオゲン処置をしない群では、全身的な関節炎状態がアジュバント 注射ラットに誘発された。注射をしない後脚の有意な腫れが観察された（２．３ ｍｌ、　水銀置換法によって容量を測定した）。脚の腫れの測定とＸ線スコアを 注射をしなかった後脚について行った。グループ”２と３のう、トは、毎日、１ 日めからモルフオゲンを経口投与した。アジュバント注射２９日めと５０日目に 脚の容量を測定した。そして１８日めの浮腫の状態の容量の違いを測定した。５ ０日めにχ線観察をして、１−１０のスケール（トダメージ無し、１０・最大ダ メージ）で関節部のダメージを評価した。コントトールと処置群の間で取った差 のデータ（２９日目の浮腫、５０日めの浮腫、５０日めのＸ線スコアー）をｔ検 定を使って解析した。モルフオゲン処置ラントは、未処置ラットに比較して、関 節のダメージが顕著に減少していた（浮腫の減少とＸｌスコア）。

さらに別の例としてグループ２と３に１８日目から開始して５０日目までモルフ ォゲンを毎日投与し、関節炎動物へのモルフオゲン投与効果を確認した。

実施例１２．　１畳　重へのモルフォゲン以下の実施例では、一般的なラット浮 腫モデルでの局所炎症反応阻止に対するモルフォゲンの有効性を示す。実験う、 ト（ｏ７グエハンス系、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　ＬａｂｏｒａＬ。

ｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を３群に分けた。グループ１、ネガテ ブコントロール、溶媒投与のみ。グループ２、ポジティブコントロール、公知の 抗炎症剤（インドメタシン）投与。グループ３、モルフォゲン投与。

グループ２と３は、さらに低ドーズ、中間ドーズと高ドーズにわけた（グループ ２、インドメタシン１．０ｍｇ／ｋｇ、３．ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ　、 グループ３、モルフォゲン０．１−５μｇ、５−２０μｇ、２０−５０８ｇ）　 。インドメタシンまたはモルフォゲンをグループ２８よび３に投与した（尾静脈 注射または強制経口投与によって）後６０分後に、全ラントの右後脚において側 足庶部に１χカラギナンを注射して炎症を誘発させた。カラゲニン投与３時間後 、足の厚みを浮［１（腫張）とカラギナン投与に対する炎症反応誘導の指標とし て測定した。

顕著な腫張がカラゲニン投与３時間後に未処置ラットに観察された。炎症は、安 楽死させたラットの病理組織検査で測定した。各動物の右後足を踵部分から切断 し、そして足組織をｌＯχφ性緩衝ホルマリンで固定化し、スライドをヘマトキ シエオシン染色を行い、顕微鏡標本を作成し観察した。

モルフォゲン処置ラットでは、未処置ラットに比較してカラギナン投与による浮 腫が顕著に抑制されていることが認められた。

実施例１３．　’ｙｕ／ｌ、ｌ　−”を−二′のモルフオ　ンによる汁、以下の 実施例ではラットの実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＩＡ）のモルフォゲン治療 を示す、　ＥＡＥは自己免疫疾患である多発硬化症の実験モデルとして良（特徴 がしられている。プロトコールの詳細な説明はＫｕｒｕｖｉｌｌａ、ｅｔ、ａｌ 、、（１９９１）、ＰＮＡＳ　８８：２９１Ｂ−２９２１に記載されており、引 用によって開示する。

要約すると、ＥＡＥは、ラント（ロングエバンス系、ＣｈａｒｌｅｓＲ４ｖｅｒ 　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）にＣＮＳ組織（を りのホモシュ名−トを完全ソロインドアジュバント（ＣＰＡ）とともに４４日前 、３０日前、０日（最終の免疫日）に、背中の皮下３箇所に投与して誘発させる ０モルフォゲンは腹腔内に３１日前から毎日投与した。好ましくは、モルフォゲ ンの一連の投与範囲を上記実施例１２のように評価する（低投与、中投与、高投 与）、コントロールのラットにはモルフォゲンの溶媒（０，９μ食塩または緩衝 生理食塩）のみを投与する。ラットは毎日疾患の症状を観察し活動指数０−４の スケールで段階付ける。

モルフォゲン処置をしない場合１．明らかな神経学的機能不全（後、前脚脱力、 全後脚麻痺の進行）が７日目、１０日めに観察された。血液学的、血清の化学的 プロファイルと病理学観察は標準的な方法を用いて組織解剖の程度をＷｉ認した ０モルフォゲン処百ば、ＥＡＥ明らかに動物の神経学的機能不全を抑制し７た。

さらにＥＡＥに伴う典型的な病理＆ＩＩ織学マーカーはモルフォゲン投与で消失 していた。

実施例１４．互ニー乞Ｚ−誘Ｊ１町即」ξ（Ｄ’ｅ）と７」−、ゲー４（表１血 ！以下の実施例ではラットのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）における炎症反応 をモルフォゲンが阻止することを示す、ＣＩＡは自己免疫疾患であるリューマチ 性関節炎のモデルとして良く特性が知られている。プロトコールはＫｕｒｕｖｉ ｌｌａ　らによって（１９９１）ＰＮＡＳ　８８：２９１Ｂ−２９２１に開示さ れ、ここに引用することで一体化される。要約すると、Ｃ１＾は、実験ラット（ ロングエバンス系、Ｃｈａｒｌｅｓ　１ｔｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 、Ｗｉｌｓｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）にウシタイプＩＩコラーゲン（１００μｇ）を １日目に、ＣＦＡ（０，２Ｉｌｌ）と皮肉複数箇所へ注射して誘発する。動物は ２群に分けた。グループ１、対照動物、溶媒のみ。グループ２、モルフォゲン処 置動物、実施例１３に述べたようにさらに低投与、中投与、高投与に分ける。コ ラーゲン注射の復興なった時点から、７．１４．２８．３５．４２２日目ら、モ ルフォゲンを毎日投与した（尾静脈注射）、動物は肉眼で観察評価し、足の厚み 、体重は実験的に測定した。動物は６００日目層殺し、近位と遠位の関節、耳、 尾、を髄は実施例１２．１３に示したように病理＆ｌｌｌｌ的評価のために調製 した。実験の変動では、モルフォゲンはコラーゲン注射に続く異なる期間の５日 目前に投与開始した（０−４．７−１１．１４４８．２８−３２）。モルフォゲ ン処置を行わなかった場合、典型的には関節炎はコラーゲン投与３０日めに発生 した０モルフォゲン処置動物では、Ｃ１＾は抑制され、ＣＩＡ誘発動物に見られ た典型的な病理学的変化、例えば活性化単球など炎症細胞の蓄積と組織下部の繊 維化は観察されなかった。さらに、実施例７の結果に基づく血清抗コラーゲン抗 体価はモルフォゲン処置動物では顕著に抑制されていた。

実施例Ｉｓ、　％／Ｌ、７オゲンレベルを・ヒさせる　進）隻のスクリーニング ＼ 与えられたモルフォゲンのレベルに影響を候補化合物は、次のスクリーニング分 析により見出される０モルフオゲンの測定可能レベルを生産する細胞タイプによ って生産されるモルフオゲンのレベルは、化合物とともに細胞を培養して測定さ れる。

細胞に対する化合物の評価ができる。これは蛋白質またはＲＮ＾レベルでのモル フォゲンの検出によって可能となることである。

これは引用によってここに一体化した米国出１１７５２，８６１に記載された内 容に詳細に開示されている。

１５．１　培養中の細胞の増殖 腎臓、副腎、膀胱、脳およびその他の臓器の培養細胞を広範な文献に従って調製 した。例えば腎臓は出生直後、新生児、若、成熟搦歯類（マウスまたはランド） から摘出し、全体あるいは切片（Ｌ４ｍｍ）組織として臓器培養に使用した。腎 臓、副腎、膀胱、脳、乳房およびその他の臓器の組織由来の初代組織培養、樹立 細胞株は従来の細胞培養技術に従ってマルチウェルプレート（６または２４ウエ ルプレート）で樹立した。そして一定期間（１−７日間）血清存在下または無血 清で培養した。細胞は、例えば、必要に応して、血清（ウシ胎児血清１４０ｚＧ ｉｂｃｏ）を含むダルベンコ変法イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｌｏｎｇ　ｌ５ｌ ａｎｄ、ＮＹ）、あるいは無血清培地、あるいは特定の培地（インスリン、トラ ンスフェリン、グルコース、アルブミンあるいはその他の成長因子を含む培地） で培養する。

モルフォゲン生産のレベルを試験するためのサンプルは細胞培養上清または細胞 ライゼートであり、周期的に集めそしてＯＰ１生産をイムノプロット分析で評価 した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ、１ｅｄｓ、＋１９８９、Ｍｏ１ｅｃｕｌ ａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ 、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）　ａまた周期的に集めた細胞 の一部を培養し、ＲＮＡ分析のためにｐｏｌｙ　Ａ”の調製に使用した。新たに ０Ｐ−１合成をモニターするために培養物を従来方法に従って、３ＮＳ−メチオ ニン／　ｆｆ５ｓ−システィン混合物を使用して、６−２４時間ラベル化した。

そして従来の免疫沈澱法によって０Ｐ−１の合成を評価した。

１５．２　モルフォゲン性蛋白質レベルの測定細胞タイプによるモルフォゲン性 蛋白質の生産を測定するために、モルフォゲンを検出するために、イムノアッセ イをこの藁白賞特異的ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いて行った 。例えば０Ｐ−１は以下のような０Ｐ−１特異的ポリクロ一ナル抗体を使用して 検出した。

アフィニティー精製したポリクローナルウサギ０Ｐ−１特異的ｒｇＧの１μｇ／ １００　μｌを９６ウエルプレートの各ウェルに加え、３７°Ｃで１時間インキ ュベートした。ウェルは０．ＩＸＴｗｅｅｎ　２０を含み、０．１５Ｍの食塩を 含む０．１６７Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ＢＳＢ）ｐＨ８，２で４回洗浄した 。非特異的結合を最小化するため、ウェルはＢＳＢに溶解した１ｚウシ血清アル ブミン（ＢＳＡ）を用いて完全に満たし、３７’Ｃで１時間インキュベートし、 ブロックした。ウェルはその後０．１′１Ｔｗｅｅｎ２０を含むＢＳＢで４回洗 浄した。細胞培養上清の試験サンプルを適度に希釈してものを１００　μｌのア リコートへトリプレットに加え、３７＠Ｃで３０分間インキュベートした。イン キュベート後、１００　μのビオチン化つサギ抗０Ｐ−１血清（保存液はｌ＋＊ ｇ／ｍｌで、先に使用した１χＢＳＡを含むＢＳＢで１　：　４００に希釈する ）を各ウェルに加え、そして３７°Ｃで３０分間インキュベートした。ウェルは その後０．１χＴｗｅｅｎ２０を含むＢＳＢで４回洗浄した。１００　μｌのス トレパビジンーアルカリ（Ｓｏｕｔｈｅｒ　Ｂｉ。

ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ＋Ｉｎｃ、Ｂｒｉｍｉｎｇｈａｗ 、Ａｌａｂａｍａ、０．１χＴｗｅｅｎ２０を含むＢＳＢで１　：　２０００に 希釈する）を各ウェルに加え、３７°Ｃで３０分間インキュベートした。プレー トは０．５＋１　）リス緩衝生理食塩（ＴＢＳ）　ｐＨ７，２で４回洗浄した。

５０μｌの基質（ＥＬＩＳＡ＾−ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｋｉ ｔ、　Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ、＋Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍ Ｄ）を各ウェルに加え室温で１５分間インキュベートした。５０μｌのアンブリ ファイア−（同じＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｋｉｔ）を加え 、そして室温で１５分間インキュベートした０反応は５０μｌの０．３ＭｒｒＡ 酸を加えて停止させた。各ウェルの溶液の４９ｏｎ−のｏｏを測定した。培養液 中の０Ｐ−１の定量のため、０Ｐ−１の標準曲線を試験サンプルと平行して測定 した。

ポリクロナール抗体は以下のようにして調製する。各ウサギに、０．ｌχＳＯ３ を混合した５００ＪＪｌの完全フロインドアジュバントと大腸菌で生産した。ｐ −ｔモノマー（配列表配列番号５のアミノ酸３２Ｂ−４３１）　１００８ｇ１５ ００　μｌを一次免疫した。抗原は背中と脇腹の複数箇所に皮下投与した。ウサ ギには１ケ月後に、同じ方法で不完全フロインドアジュバントをブースター投与 した。

試験血液を７日目に耳静脈から採血した。２回の追加ブースター投与と試験採血 は０Ｐ−１に対する抗体がＥＬＩＳＡ分析を用いて血清中で検出できるまで一ケ 月間隔で繰り返した０次いで、ウサギに１００μｇの抗原と共に１ケ月ごとにブ スターを投与し、ブースター投与後７日月に採血した（１採血１５ｍ１）　。

モルフォゲンに対するモノクロナール抗体は以下のようにして調製した。マウス に大腸菌で生産した０Ｐ−１を２回注射した。

第一回目は、１００　μｇの０Ｐ−１を完全フロインドアジュバントと共に皮下 投与した。第２回目は５０μｇの０Ｐ−１を不完全フロインドアジュバントとと もに腹腔内に投与した０次いでマウスに０Ｐ−１（配列表配列番号５のアミノ酸 ３０７−４３１）を全量で２３０μｇ、８ケ月以上にわたって複数回の間に、４ 回に分けて腹腔内に投与した。融合を行う１週間前に、マウスに１００μｇの０ Ｐ−１（３０７−４３１）　、およびＳＭＣＣ架橋剤を用いてウシ血清アルブミ ンに付加したシスティンに結合させたＮ末端ペプチド（Ｓｅｒ２９３−Ａｓｎ３ ０９−Ｃｙｓ）　３０　μｇを両方ともブースターと腹腔内投与した。このブー スターは、融合前５日（ＩＰ）、４日（ＩＰ）　、３日（ＩＰ）、１日（ＴＶ） と操り返しで投与した。マウス肺臓細胞はミエローマ（６５３）細胞とＰＥＧ１ ５００（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｈｅｉｓ）を使って融合させた。融合細胞 はプレートに植え、抗原として０Ｐ−１（３０７−４３１）を使ってＯＰ−１特 異的抗体を選択した。細胞融合とモノクローナル抗体のスクリーニングは先行技 術として一般的になっている標準テキストに記載されている標準方法に従った。

本発明は、その精神と必須の特性から離れることなくその他の異なった形態で実 施可能である。それゆえに、本発明の詳細な説明したこと全てに関係しており、 先の説明よりむしろ添付のクレームによって明示される発明の全体、および意味 するところからくる全ての変更、そしてそれらを包含するところのクレームの均 等性の範囲を限定するものではない。

配列表 （１）一般情報 （ｉ）　出願人：クベラサンパス、タンガベルコーエン、チャールスｉ。

オズカイナク、エンジン スマート、ジョン （ｉ　ｉ）　発明の名称二組織形成因子誘導による炎症反応の調節（ｉｉｉ）配 列の数：３３ （ｌν）　連絡先： （へ）受信人：クリエイティブ　バイオテクノロジー（８）通り＝３５　サウス 　ストリート（Ｃ）市：ホブキントン （Ｄ）州；マサチューモノマ （Ｅ）国・アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号二〇 （ν）　コンピュータ読み取り形式： （Ａ）媒体：フロノビ−ディスク （Ｂ）コンピュータ：　ＩＢＭ　ＰＣコンパチブル（Ｃ）オペレーティングシス テム：ＰＣ−００５／ＭＳ−ＤＯ５（ＤＪ　ソフトウェア：ＰａＬｅｎｔＥｎ　 Ｒｅ１ｅａｓｅ　１１．０．Ｖｅｒｓｉｏｎ　１１．２５（ｖｉ）カレント　ア プリケーション　データ：（Ａ）出願番号：ＵＳ　６６７．２７４（Ｂ）出願日 ：　１９９１年３月１１日（ｖｉｉ）優先権情報 （Ａ）出願番号：ＵＳ　７５３，０５９ＣＢ）出願日：１９９Ｌ年８月３０日 （ｖｉｉｉ）優先権情報 （Ａ）出願番号：ＵＳ　７５２，７６４（Ｂ）　出願日：１９９１年８月３０日 （２）配列番号１に間する情報 （ｉ）　配列の特徴 （Ａ）長さ：９７アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蓋白賀 （ｉｖ）　特徴： （Ａ）名称ニ一般配列１ （ｘｉ）配列：配列番号１ （２）配列番号２に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：９７アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）分子種：蛋白質 （Ｄ）その他情報：それぞれのＸａａは２０の天然に得られるし一異性体、αア ミノ酸、または誘導体の一つを示す。

（ｘｉ）　配列：配列番号２ （２）配列番号３に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長ざ：９７アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎮状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴： （Ａ）名称ニー瓜配列３ （０）その他情報：それぞれのＸａａは詳細な説明に特定した１またはそれ以上 のアミノ酸からなる群から独立的に選択される　。

（×１）　配列：配列番号３ （２）配列番号４に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長ざ：１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 １またはそれ以上のアミノ酸からなる群から独立的に選択される　。

（ｘｌ）配列：配列番号４ （２）配列番号５に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）長さ：１３９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛍白質 （×１）配列　配列番号５ （２）配列番号６に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１３９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛍白質 （ｊｘ）特徴： （Ａ）名称：　５ＯＰ−１（成熟型） （ｘｉ）配列：配列番号６ （２）配列番号７に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）　長さ＝１３９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴： （Ａ）名称：　ｈＯＰ−１（成熟型） （ｘｉ）配列：配列番号７ （２）配列番号８に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）　長さ＝１３９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （１１）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴： （Ａ）名称：　ｍ０Ｐ−１（成熱型） （×１）配列・配列番号８ （ｉ）配列の枠数 （Ｃ）トポロノー二直鎖状 （Ａ）名称、ＣＢ旧−２４（ｆに） （ｘｌ）配列：配列番号９ （２）配列番号１１に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）　長さ＝１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロノー：直鎖状 （１１）分子種：蛋白質 （１ｘ）特徴・ （４）名称：　ＤＰＰ（ｆｘ） （ｘｌ）配列：配列番号１１ （２）配列番号１２に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）　長さ：１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｌ×）特徴。

（Ａ）名称：　’ＪｇｌＣｆｘ） （ｘｌ）配列：配列番号１２ （２）配列番号１３に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ＝１０２アミノ酸 （ｊ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴： （Ａ）名称：　Ｖｇｒ−１（ｆｘ） （ｘｉ）配列：配列番号１３ （２）配列番号１４に関する清報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１０６アミノ酸 （８）型・盃臼質 （Ｃ）　１貞：　一本Ｓ貞 （０）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛍臼賀 （ｖｉ）由来源 （Ａ）生物：ヒト （Ｆ）組遷タイプ：脳 （ｉｘ）特徴： （０）その他情報： 物ｆ＝ＧＤＦ−１（ｆｘ） （×１）配列：配列番号１４ Ｔｒｐ　Ｈｌｓ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｖｄ　Ｋｌ＠＾１ｘ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｇｌ ｙ　Ｐｈａ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ＋５　２０　２５ Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｘｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｉ ＪＬＬ！　Ｌｓｕ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ３０　コ５　４０ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　ＨｌＳＡｌｎ　Ｖａｎ　Ｌ ｅｕＡｒｇ　ＡＩＡ　Ｌｅｕ　Ｗｅｔ　Ｈ１ｓＡｌａ　Ａ１１　ｕａ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｙ　ｕｔ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｐ ｒｏ　ＡｌａＡｒｇ　Ｌｓｕ　５＠ｒ　Ｐｅａ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　ＶａＬ　Ｌｓ ｕ　Ｐｈｅ　Ｐｈａ　Ａｓｐ　ｍｒｓ　ｓｅｘ　ａＳｐ　人５ｎＶａｌ　Ｖｉｌ 　ｔＪｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｔｙｔ　に１＋！　Ｊｕｐ　Ｍａｃ　Ｖａｌ　Ｖａ ｌ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　ＧｌｙＣＧＧ　ｃＡＧ　ＡＴＣ；　ＣＭＪ　ＣＣ ＣＣＡＧ　ＡτＣＣτＣτＣＣ人ｒτ　τＴＯ（ＡＣτＴＧ　ｃｃＣＣＡＣＣＧ Ｃ２４９（２）配列番号１５に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）　長さ：５アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）　ｉ貞：　−零１貞 （Ｄ）トポロジー二直鎖状 （ｉｉ）分子種：ペプチド （ｘｉ）配列：配列番号１５ （２）配列番号１６に関する情報 （ｉ）配列の枠機 （Ａ）長さ：１８２２塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）　ｉ貞：　一本１貞 （Ｄ）トポロジー二直鎖状 （１１）分子種：　ｃＤＮＡ （ｖｉ）由来源 （Ａ）生物：ヒト （Ｆ）組織タイプ：海馬 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ　：　Ｃ０５ （Ｂ）位置：４９．、、、、Ｌ４４１ （Ｄ）その他情報：標準的名称・ｈＯＰ−１（ｘｉ）配列：配列番号１６ ＣＣＡＴ、ｃＡＡ　エＴｌｌ；ＧＣＣＣＧ　ＧＣＣＡＧＣτＣＡτ　丁ＣＧ、” ＴＣ！λ人　ＧフＣτｃｘｃｃｃ人　τｃｃ人ｃｃｃａｃτ@１６５１ （２）配列番号１７に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）長さ：４３１アミノ酸 （Ｂｊ型二アミノ酸 （Ｃ）鎖・−／を幀 （Ｄ）トポロジー：直鎮状 （１１）分子種、蛋白譬 （１ｘ）特徴・ （１３）その他情報： 物質・０Ｐ−Ｉ　Ｐρ （ｘｌ）配列：配列番号１７ Ｍｅｔ　ＨＬ５　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｓｅｔ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　人１１　人１１　 人Ｌａ　Ｆｒｏ　ｉ’、ｉｓ　Ｓｅｒ　Ｐｈａ　Ｖａｌ　＾P１ Ｌ　５　１０　１５ Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　 Ｓｅｒ＾ｌｚ　Ｌｅｕ　Ａｌａ＾ｓｐ　Ｐｈｅ　５ｅｒ２０２５コ０ Ｌａｕ　Ａｌｐ　Ａｓｎ　にｌｕ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　 Ｚｌｅ　Ｈｌｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　人ｒｇ　５ｅｒ３５　４０　ｋ５ Ｇｉｎ　Ｃ＋ｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ｇｌｒ＋　Ａｒｇ　Ｇｌ ｕ　ｘｉｅ　Ｌａｕ　Ｓｅｒ　ＩＩｓ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｌ■■ ＰｒｏＨヱｓＡｒｇＰｒｏＡｒｇＰｒｏＨｉｓＬｅｕＧｌｎＬｉｌｙＬｙｓＨ１ ｓＡｓｎＳｅｒＡｌａＰｒ。

Ｍｅｔ　Ｐｂｅ　Ｍｅｔ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　人１ａ　 １ｉｃｅ　ｄａ　Ｖａｌ　（、ｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌ■ ｓ５　９０　９５ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇ１７　Ｇｌｙ　にｉｎ　Ｇｌｙ　Ｐｈ＠　Ｓｅｔ　Ｔｙｒ　 Ｐｒａ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　人１ａ　Ｖａｌ　Ｐｂｅ　５ｅｒｉｏ０　１０５　１ １Ｇ Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｇｕｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌｉｕ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　 Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　ｔｈｉｓ　Ｐｈｓ　Ｌａｕ　Ｔｈ■ Ｌ　Ｓｅ：　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇ１７　Ｇｌｕ　人１ａ　Ｖａ ｌ　Ｔｈｒ　人１ａ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　ｌPｅ １６５　Ｌ７Ｑ　１７５ η＝　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　ＩＩｓ　Ａｒｇ　ＧｌｕＡｒｇ　Ｐｂｅ　Ａｓ ｐλｓｎ　ＧＬｕ　Ｔｈｒ　ＰＩｕ＋　Ａｒｇ　工１ｅ１Ｂ０　１ａ５　１９０ Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ａ５Ｐ　ＩＩｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　人ｓ＊　 Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　ｉ’ｒｏ　Ａｒ■ ２２５　２コｏ　２コ５　２４゜ Ｈｉｓ　ｋｓｒ＋　Ｌａｕ　Ｇａｙ　Ｌｅｕ　Ｃ１，ｎ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　５■■ ’／ａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｉ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｇｉｎ 　Ａｓｐ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌ■ コ４０　３４５　コ５゜ Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ｕ！　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇ ｌｕ　Ｃ７Ｓ　Ａｌａ　Ｐｈｉ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　ＡｊｎＳｅｒ　Ｔ７？　Ｍａ ｔ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｈｌｓ　Ａｌａ　Ｉｌｓ　Ｖａｎ　Ｇｌ ｘτｈｒ　Ｌｓｕ　Ｖａｎ　）ＩｉｓＰｈｅ　ＩＩ＠　ＡＳｎ　Ｆｒｏ　Ｇｌｕ 　Ｔｈｒ　’Ｊａｌ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒ ｏ　Ｔｈｒ　Ｇ１■ Ｌａｕ　Ａ３ｎ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌａｕ取ｒ　Ｉ’ｈａ　Ａ ｓｐ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｓｒムｓｎ　Ｖａｌ　ｒｕｅ（２）配列番号１ａに関 するｔｆ！報 （１）配列の枠は （Ａ）長ｅ：１８７３塩基対 （Ｂ）型：）亥酸 （Ｃ）　ｉ貞：　−木１貞 （０）トポロジー二直鎮状 （ｉｉ）分子４：　ｃＤＮＡ （ｖｉ）由来源 （Ａ）生物：　ＭＩｉＲＩＤ４Ｅ （Ｆ）組織タイプ・胚 （ＩＸ）特徴 （４）名称／キイ　：　Ｃ０５ ＣＢ）１立！：１０４．、、．１３９３（Ｄ）その他情報：記録、ＭＯＰ−１（ ｃＤＮＪ）（ｘｉ）配列・配列番号１日 ＧＡＡπＭ人話晶晶晶晶晶鳳紘紘紘晶晶晶叫貫（１８７３（２）配列番号１９に 関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ＝４３０　アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （ＤＪその他情報：物質・ｍ０Ｐ１−ＰＰ（ｘｌ）配列：配列番号１９ Ｌｅｕ＾ｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　）Ｉｉｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　 Ｉｌｅ　Ｆｌｉｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｅｔ＋　Ａｒｇ　５■■ Ｇｉｎ　Ｃ１ｕ　人ｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｈｒｅ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　ｌ：＋ｌ ｕ　Ｚｌｅ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｚｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌ唐■ Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　ＡＳｐ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　 Ｓｅｒ　にｌｕ　Ｇｌｕ　ＧＬｙ　Ｔｒｐ　Ｌａｕ　’／ａP ＾ｓｎ　Ｌｅｕ　Ｇ１７　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｓａｒ　ＶａＬ　Ｇｌｕ　 Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｓｓｒ　ｌ１ｅＡｓｎ　？＝＊　Ｌ ｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ａｒｚ　Ｈｉｓ　Ｇ ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　ＬｙｓＳｅｒ　Ｚｌｅ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｔｈ ｒ　（：ｌｙ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ａ ｒｇ　Ｓｅｒ　Ｌｙ■ τｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌ７Ｓ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｃ１ｕ　人１ａ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　 Ｍｅ：　Ａｌａ　Ｓｅｒ　ＶａＬ　入１ａ　Ｇｉｕ　ＡｓｎＳｅｒ　Ｓａｒ　Ｓ ｅｒ　Ａｓｐ　ＧＬｎ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　人１ａ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｈ Ｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａ１３２５　コ３０　１３５ Ｓｅｒ　Ｐｈａ　ｈ＝ｚ　Ａｓｐ　ＬｅｕＧｌｙτｒｐ　にｉｎ　Ａｓｐ　Ｔｒ ｐ　ＩＩｓ　ＩＩｓ＾１直Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＧＬｙコ４０　３４５　３５０ Ｔｙｒ　Ａｌｘ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　 Ｃｙｓ　人１ａ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　５ｅｒＴ）ｒｒ　Ｍｅｔ　 Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ＨＬｓ　Ａｌｎ　Ｚｌｅ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　 Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｐｈ■ ｆｌｓ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　ＡＳＰ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　 Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　人１ａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　ＬｅｕＡ５ｎ　Ａｌａ　ｒ ｌｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈａ　ｈｓｐ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓ ｓｒ　ＡＳｎ　Ｖａｌ　工Ｉ＠Ｌａｕ（２）配列番号２０に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：　１７２３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）　１貞：　一本１貫 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：　ｃＤＮＡ （ｖｉ）由来源 （Ａ）生物・ヒト （Ｆ）組織タイプ：海馬 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ　：　ＣＤ５ （Ｂ）位置：４９０．、、．１６９６ （０）その他情報：記録−ｈＯＰ２　（ｃＤＮＡ）（ｘｉ）配列：配列番号２０ （２）配列番号２１に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：４０２　アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２１ Ｌｓｕ　Ａｌａ　！／ａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ 　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａ：ｇ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　ＰｒB Ａｌａ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ＾ｌａ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｐ ｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　ＬｅｕＰｒｏ　Ａｒｇ　Ｓｅ ｒ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｆｈｓ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈ ｅムｒｇ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｐｒ。

！’ｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ａｊｎ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ 　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ｌ１■ Ｐｂ＊　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｇｌｙ　Ｓｓｒ　）Ｉｉｓ　Ｇｌｙ 　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｈ１■ ２９０　２９５　コ００ Ａｌａ？＝ｏＧｉｎＧｌｙ？／ＴＳｅｒＡｌａ？７ｒ１’１ｒＣ７ｓＧｌｕＧ１ ７に１ｕＣｙｓＳｅｒＰｈｅ３２５　Ｄｏ　３コ５ （２）配列番号２２に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１９２６塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）　１貞；　一本ｉ貞 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）分子ＴＭ：　ｃＤＮＡ （νｉ）由来源 （Ａ）生物：　−ＵＲＩＤＡＥ （Ｆ）組織タイプ：胚 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ　：　ＣＤ５ （Ｂ）位置：９３．、、．１２８９ （Ｄ）その他情報：記録−■ＯＰ２　ｃＤＮＡ（ｘｊ）配列：配列番号２２ ＣＴＣＡＧＣＣＣＡＣ人ＡＴＩＪＣＡＡＡＴ　ＴＣＴＧＧＡＴｃｌｌ；Ｔ　ＣＴ ＡＡにＡＡＧｆｌ；ＣＣＣτＧＧＡＡＴＴＣＴＡＡＡＣＴＡbＡＴ　１６６９ Ｇ人τｚＣＴ　Ｉ：ＴＣＴＧＣＡＣＣＡ　ｒｒＣＡｒｒｃｒｃｃ　ｃ人ＧτＴＧ ＧＧ人ＣＡτττττ人ＧＣτ　ＡＴＡＡＣＡＧＡＣＡ　１V２９ （２）配列番号２３に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ・３９９　アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （１ｘ）特徴 （Ｄ）その他情報：物質＝ｍＯＰ２−ＰＰ（×１）配列：配列番号２３ Ｍｅｅ　Ａｌａ　ｑｅｃ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌａｕτｒｐ　Ｌ ｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｌｓｕ　ＣｙｓＬ　５　１０　１５ 人１ａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　 Ｐｒｏ　！’ｒｏ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇ１■ ２０　２５　コＯ Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　ｄａ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａ ｓｐ　Ｍｅｔ　Ｇｌｒｉ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　ｆｌｅ　Ｌａｕ@Ａム コ５　４０　４５ Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ｌ：ｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　ＧＬｙ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ 　Ｐｒｏ　＊ｒｇ　Ａｌａ　ＣａＬｒＩＰｒａ　Ａｌａ　Ａ撃■ Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　 Ｐｈｅ　Ｎｅｔ　Ｌｅｕ　ｈｓｐ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　ＦｉＬ刀@Ａｌａ ７０　７５　８Ｏ Ｎｅｔ　Ｔｈｒ　ＡＳｐ　ＡＳｐ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　 Ｐｅａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｈｌｓ　ｆ、ｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｒ■ Ａｌｎ　Ａａｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｔ　Ｆｉｓｔ　Ｓｅｒ　Ｐｈｓ　Ｖａｌ　Ａｘｎ 翻セＶａｌ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａ５Ｐ　Ａｒｇ　Ｔｈｒｌｏｏ　１０５　１１０ Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｔ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｈ１ｓτｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇ ｌｕ　Ｐｈｅ　ＨＬｓ　Ｐｈｓ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　ＴｈｒＬｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｒ ｏ　Ｓｅｒ　Ｔｂｒ　Ｉ（ｉｓ　Ｆ’ｒａ　Ｌａｕ　人ｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　 Ｌｅｕ　Ｈｌｓ　ＩＩｓ　Ｓｅｒ　Ｍ■■ Ａｓｐ　ｆｌｅ　Ｔｂｒ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇτｒｐ　Ｌ ｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　）Ｉｉｓ　Ｈｌｓ　Ｌｙｓ　ＡｓｐＬｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌ ａｕ　Ａｒｚ　Ｌｅｕ　Ｔ−７ｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　 Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　ＭｅＣＡｓｐＰｒｏ　Ｇ１７　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌ ｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　人１ａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｓｅ ｒ　Ａｒｇ　Ｇ１ｎ（２）配列番号２４に間する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）長ざ：１３６８塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）　ｉ貞：　−木業貞 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）分子種：　ｃＤＮＡ （１×）特位 （４）名称／キイ　：　ＣＤ５ ＣＢ）位置：１．、、．１３６８ （Ｄ）その他情報：標準名・６０Ａ （ｘ）公開情報 ＜４）著者：　ウオルトン、クリストＡ、；トムセン。

ジエラルドＨ１；ゲルバート、ウィリアム−３（８）８名・ンヨウノヨウハエ６ ０＾遺伝子１０９．。

（Ｆ）ベージ：９２１４−９２１８ （Ｇ）　日付：１９９１年８月 （ｘｉ）配列：配列番号２４ （２）配列番号２５に関する情報 （ｉ）配列のｖＦ＠ （Ａ）長さ：４５５　アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー；直鎮状 （ｉｉ）分子Ｎ：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２Ｓ Ｍｅｔ　Ｓｓｒ　Ｇ１７　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　ＡＳｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　 Ａｌａ　Ｖａｌ＾ｌａ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　５ｓｒｔ　ｓ　ｔｏ　ｔｓ Ｌｅｕ　ＧＬ７　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ　’／ａＬ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ｍｅｔ 　Ｐｈｅ　Ｖａｌ＾１ａτｈｒτｈｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒ。

２０　２５　コ０ ５ｅｒ　Ｔ７ｒ　ＧＬｕ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　 ＩＬｅ　Ａｉａ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　）ｌｉ■ ６５　７０　７５　ａＱ Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｈｉｓ　Ａｒｚ　工１ｅ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　 Ｇｌｕ　ＧＬｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｇｉｎｔｏｏ　ｔａｓ　ｔ ｔ。

ＡＳｐ　Ｇｌｕ　ＡＳＰ　ＡＳＰ　Ａｓｐ　Ｔ／ｒ　Ｇ４ｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　 ＨＬｓ　Ａｕｇ　Ｓｅｒ　Ａｒ３　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ＡｌａＬｅｕ　Ａｓｐ　Ｌ ｙｓ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ａ５ｐＧｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　ｒｌｅ　Ｉｌ ｅ　）ｌｅｔτｈｒ　Ｐｈｅ　ｆ、ａｕ人ｓｎ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　Ｈｉ ｓ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌｓｕ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　１ｌ ｉｓ　Ｇｌｙ　Ａｒ■ Ａｒｇ　Ｌａｕ　Ｔｒｐ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ、　Ｖａｌ　Ｓｅｔ　ＡＳｎ　Ｖａｌ 　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｖａ■ ｌＢｏ　１８５　１９０ Ｍｅｔ　Ａｌａ　にｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　ｌｌｅ　Ｔｙｔ　Ｃ，ｉｎ　Ｊｕｎ 　Ａｌａ　Ａｘｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＬｙｓτｒｐムＵＴｈｒ　Ａｌａ　Ｊｕｎ 　ＡｒｇＧｌｕ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　ＩＩｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　 Ｉｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＧｌｙＴｈｒ　Ｌｚｕ　Ｃ１ｙ　Ｇｉｎ　Ｈｉｓ　Ｔ ｈｒ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ｔ ｈｒ　ＴｈｒＧｌｙ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｌｓｕ　Ｇｌ ｕ　Ｌｅｕ　Ａｊｎ　ＶａＩＴｈｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｈ１ｓＨｌｓｕ ａ　Ｖａｌ　Ａｘｎ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｉｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　ＬＩ ｓ　Ｌｔｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　ＧＬｙ２７５　２［１０２１５ Ｌｓｕ　Ｉｌｅ　Ｍｉｘ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　ＶａＬムｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｐ ｈｅ　ＧＬｎ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｍｅｔ　Ｉｌｅ　ＧｌｙＨ１ｓ　Ａｒｇ　Ｓｅ ｒ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｈｌｓ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｌｙ ｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　５ｅｒ３２５　コ１０　Ｄ５ Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　 Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｍｅｅ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ３４０　３４５　コ ５０ （２）配列番号２６に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ二アミノ酸 （８）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｉｉｉ）由来源 （Ａ）生物：ホモサピエンス （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ：蛋白質 （Ｂ）位置：１．、、．１０２ （［１）その他情報：記録・８ＭＰ３ （Ｘｌ）配列：配列番号２６ （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１０４　アミノ酸 （８）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖二一本膜 （Ｉ］）トポロジー・直鎖状 （１１）分子種、蛋白質 （１ｘ）特徴 （４）名称／キイ、蛍白質 （Ｂ）位置：１．、、、ｔ○４ （Ｄ）その他ＩＩＦ報：記録・８門Ｐ３（Ｘｌ）配列：配列番号２６ （２）配列番号２７に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖ニ一本饋 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｖｉ）由来源 （Ａ）生物：ホモサピエンス （ｉｘ）　ｎ敞 （Ａ）名４／キイ：蛋白譬 （８）位ｆ：１．．．．１０２ （Ｄ）その他情報：記録・Ｂｌ’ｌＰ５＜ｘｉ）配列・配列番号２７ ｈｓｐ　Ｔｒｐ　工ｌｅ　ｒｌｅ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｕｙ　Ｔｙｒλ １１＾１ａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　ｈｓｐ　ＧｌｙＡ５＋＋　Ａｓｐ　Ｓｅ ｔ　Ｓｅｔ　Ａｓｎ　Ｖａｎ　ｒｌｅ　Ｌｓｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｉ　Ｔｙｒ　Ａｒ ｇ　Ａｓｒ＋　Ｍｅｔ　ＶａＬ　Ｖ≠■ Ｂ５　９０　９５ （２）配列番号２日に間する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎮ニ一本鎖 （１３）　）ボロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｉ　ｉ　ｉ）由来源 （Ａ）生物：ホモサピエンス （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ：蛋白質 （８）位置：１．、、．１０２ （０）その他情報：記録・８ＭＰ６ （ｘｉ）配列：配列番号２日 Ｃｙｓ　Ａｒｃ　ＬｙＳ　ＨＬｓ　Ｇｌｑ　Ｌｅｕ　？’７ｒ　ＶａＬ　Ｓｅｒ 　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　人ｓｐ　Ｌｓｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　ＧＬ秩{ Ｌ　５　１０　１５ ｈｓｐ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　ムｌ！　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔ’７τ 　Ａｌａ　人１ａ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　ＣｙＳ　Ａｓｐ　Ｇ１V ２Ｑ　２５　３０ Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　＋ｕａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　ＬｙＳ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　 Ａｌａ　１１！　Ｓｅｒ　’１ｍ　Ｌｅｕ　Ｉ’７ｒ　Ｐｈ■ ６５　７０　’７５　８０ （２）配列番号２９に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ：１０２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ：蛋白質 （Ｂ）位置：１．、、．１０２ （Ｄ）その他情報ニラベル・ｏｐｘ ここでＸａａは、それぞれの位置においてマウスまたはヒトＯＰＩまたはＯＦ２ のＣ末端配（ｘｉ）配列：配列番号２９ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　？’７ｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ 　Ｐｈｅ　Ｘａａ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙτｒｐ　Ｘａａｌ　５　１０　１５ （２）配列番号３ｏに関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）長さ：９７　アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称　ニ一般配列５ （Ｄ）その他情報：ここで各Ｘａａは、詳細な説明に示したような１またはそれ 以上の特定されたアミノ酸の群から独立して選択される。

（ｘｉ）配列：配列番号３０ Ｘａａ工ａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａｘ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ（２）配列番 号３１に関する情報 （１）配列の特徴 （へ）長さ：１０２アミノ酸 ＣＢ）型・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称ニ一般配列６ （Ｄ）その他情報ニラベル・ＯＰＸ ここで各Ｘａａは、詳細な説明に示したような１またはそれ以上の特定されたア ミノ酸の群から独立して選択される。

（ｘｉ）配列：配列番号３１ （２）配列番号３２に間する情報 （］）配列の枠機 （Ａ）長さ：　１２３８塩基対、３７２アミノ酸ＣＢ）型；核酸、アミノ酸 （Ｃ）鎮ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）分子種：　ｃＤＮＡ （ｉｉｉ）由来源 （Ａ）生物：ヒト （Ｆ）組織型：脳 （宜ν）　特ｍ （４）名称／キイ・ＣＤ５ （Ｂ）位置： （Ｄ）その他情報：物質・ＧＤＦ−１ 記録＝　ＧＤＦ−１ｃＤＮＡ （ｘ）公開情報 （Ａ）著者：　リイ、セージン （Ｂ）　１１１名：成長／分化因子Ｉの発現（Ｃ）雑に：ＰＲＯＣ，ＮＡＴ’Ｌ 　ＡＣＡＤ、ＳＣ１，ＵＳＡ（Ｄ）巻：８８ （Ｅ）関連遺残基：１−１２３８ （Ｆ）ページ：４２５０−４２５４ （Ｇ）日付：１９９１年５月 （ｘｉ）配列：配列番号３２ ＥＣＣＣＣＴ人ＡＣＣＣ（、ＧＧＧ　ＣＧＧＧＣＡＧＧＧＡ　ＣＣＣＣＧＧＣＣ ＣＡ　ＡＣλＡτλＡＡＴＧＣＣＧＣＧＴＧＧ　１０ｇ（２）配列番号３３に関 する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ・３７２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）　ｉ貞：　一本１貞 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子種：　ｃＤＮＡ （ｉｉｉ）ハイポセティカル：無し くｉｖ）アンチセンス：無し くｖｊ）由来源 （Ａ）生物：ヒト （Ｆ）組ｗ＆：脳 （ｉｘ）特徴 （Ａ）名称／キイ：ＣＤ５ （Ｂ）位置 （Ｄ）その他情報：機能・ 物質・ＧＤＦ〜■ （ｘｉ）配列：配列番号３３ Ｇｉｎ　ムｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１７　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　 Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　ムｌａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　ＬｅｕＡｒｚ　ｌｒｏ　Ｖａｌ　Ｐ ｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｍｅｅ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ａ ｒｇ　Ａｒｇ　ＡＬＰ？ｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌ ｙ　Ｓｅｃ　Ａｒｃ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｖａ１７５　 ８０　Ｂ５ Ａｊｎ　ムｌａ　Ｓｓｒ　Ｔｒｐ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ｔａｕ　Ａｒｇ　 ｔ、ｅｕ　Ａｌａ　Ｌａｕ　ム工！　ＩａｕムｒｇＰｒｏ　ムｒｇ　Ａｌａ　Ｐ ｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ａｒｃ　Ｌｅｕ　ムＩＪＬ　Ｇｌｕ　 Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ２２５２３０２コ５ Ｔｒｐ　Ｉ！１ｓ　Ａｒｇ　ｒｒｐ　Ｖａｌ　ＩＩｓ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ 　Ｇｌｙ　Ｐｎｅ　Ｌａｕ　人１ａ　Ａｓｎ　Ｔ７ｒ２８５　２９０　２ｇ５ Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　Ｌｉｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇ１７３００　コ０５　３１０ 口Ａｃｈ　ＺＮＴａ ニー−３０ＭＩＮ　Ｉ　＋　２０　ＭＩＮ　Ｒ−ニー一口ＰＭＮｓＡＬＯＮＥ　 ＺＰＭＮｓ＋ＬＴＢ４ヨ３０つＳ　５ｌｉｌＳＯフｎｗＮ￥３ＷＴＧＦ　−ＢＥ ＴＡ　１　［ＭＩ ＯＰ−１［品１ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成６年２月２ ８日

Claims (68)

【特許請求の範囲】
1. １．炎症反応から生じる組織ダメージを実質的に抑制または減少させるに充分な モルフォゲンの治療上有効な濃度を組織に供給するステップからなる方法であっ て、哺乳動物の組織傷害に対する炎症反応に伴う組織破壊作用を緩和するための 方法。
2. ２．上記傷害組織に対し治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステップ が、上記哺乳動物の治療上有効な濃度を投与するステップである請求項１の方法 。
3. ３．上記傷害組織に対し治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステンブ が、内因性モルフォゲンの治療上有効な濃度をインビボで促進させる物質を上記 哺乳動物に対して投与するステップからなる請求項１の方法。
4. ４．治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステップが、組織に対する血 流の減少または中断に対して先に誘導することである請求項１の方法。
5. ５．治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステップが、組織に対する血 流の減少または中断後、再循環の前に誘導することである請求項１の方法。
6. ６．治療上有効なモルフォゲン量を供給する上記ステップが、虚血性再循環傷害 に続いて誘導することである請求項１の方法。
7. ７．治療上有効なモルフォゲン量を供給する上記ステップが、高酸素症傷害に続 いて誘導することである請求項１の方法。
8. ８．上記モルフォゲンが上記組織傷害の発生前に上記組織に供給されている請求 項１の方法。
9. ９．治療上有効なモルフォゲン量を供給する上記ステップが、虚血性再循環傷害 の発生に先立って誘導することである請求項１の方法。
10. １０．上記組織ダメージが、上記哺乳動物の異常な免疫反応からもたらされたも のである請求項１の方法。
11. １１．上記組織ダメージが、炎症性疾患に伴うものである請求項１の方法。
12. １２．上記炎症性疾患が自己免疫疾患である請求項１１の方法。
13. １３．上記炎症性疾患が関節炎、乾癬症、皮膚炎または糖尿病である請求項１１ の方法。
14. １４．上記関節炎がリュウマチ性、変質性または乾癬性関節炎である請求項１１ の方法。
15. １５．上記炎症性疾患が哺乳類の気道の炎症からなるものである請求項１１の方 法。
16. １６．上記気道の炎症が慢性気管支炎、気腫、突発性肺繊維症または喘息からな るものである請求項１５の方法。
17. １７．上記炎症性疾患が全身性急性炎症反応からなるものである請求項１１の方 法。
18. １８．上記炎症性疾患が成人性呼吸困難症からなるものである請求項１７の方法 。
19. １９．上記組織ダメージが移植された臓器または組織に対するものである請求項 １の方法。
20. ２０．ヒトの虚血性再循環傷害にともなって生じる組織ダメージを減少するため の方法であって、その方法が上記傷害にともなって生じたダメージを緩和するた めに充分なモルフォゲンの治療濃度を傷害のあった組織に供給するステップから なる方法。
21. ２１．ヒトの高酸素症傷害にともなって生じる組織ダメージを減少するための方 法であって、その方法が上記傷害にともなって生じたダメージを緩和するために 充分なモルフォゲンの治療濃度を傷害のあった組織に供給するステップからなる 方法。
22. ２２．上記傷害組織に対して治療上有効なモルフォゲン濃度を供給するステンブ が、上記哺乳動物の治療上有効な濃度を投与するステップからなることである請 求項２０または２１記載の方法。
23. ２３．上記傷害組織に対して治療上有効なモルフォゲン濃度を供給するステノブ が、上記哺乳動物に対して内因性モルフォゲンの治療上有効な濃度をインビボで 促進させる物質を投与するステップからなることである請求項２０または２１記 載の方法。
24. ２４．上記傷害組織に対して治療上有効なモルフォゲン濃度を供給するステンプ が、上記哺乳動物に対して内因性モルフォゲンの治療上有効な濃度をインビボで 促進させる物質を投与するステップからなることである請求項２１または２２記 載の方法。
25. ２５．上記虚血性再循環傷害が心臓停止、予備的閉塞、動脈性閉塞、冠状動脈閉 塞または閉塞性発作からもたらされものである請求項６、９、または２０の方法 。
26. ２６．上記モルフオゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＨＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも７０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項１、２０または２１の方法。
27. ２７．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも８０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項２６の方法。
28. ２８．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項１、２０または２１の方法。
29. ２９．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項２８の方法。
30. ３０．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むものか らなるものである請求項２９の方法。
31. ３１．上記モルフォゲンが一般配列１、２、３、４、５または６（配列表配列番 号１、２、３、４、３０、３１）で定義されたアミノ酸配列からなるものである 請求項１、２０または２１の方法。
32. ３２．上記モルフォゲンがＯＰＸ（配列表配列番号２９）で定義されたアミノ酸 配列からなるものである請求項１、２０または２１の方法。
33. ３３．臨床的な方法において臓器への血流の中断に伴って発生する虚血性再循環 傷害を軽減するための方法であって、血流の中断に先立って上記臓器にモルフォ ゲンの治療濃度を供給するステップからなる方法。
34. ３４．臨床的な方法において臓器または組織への血流の減少あるいは中断に伴っ て発生する組織傷害を軽減するための方法であって、血流の減少または中断の後 に上記臓器または組織にモルフォゲンの治療濃度を供給するステップからなる方 法。
35. ３５．上記臨床的方法が頸動脈管切除、冠状動脈バイパス、組織移植法、臓器移 植、あるいは血栓溶解療法である請求項３３、４の方法。
36. ３６．上記モルフォゲンが非経口的に投与される請求項１、３３、３４の方法。
37. ３７．上記モルフォゲンが予防的に投与される請求項１、３３、３４の方法。
38. ３８．酵素フリーラジカル阻害剤または抗凝固剤とモルフォゲンの混合物の治療 上有効量からなる、毒性酸素濃度に露出した組織に発生する傷害緩和のための薬 剤組成物。
39. ３９．皮膚科学的に受容可能なキャリアーとモルフォゲン混合物の治療上有効量 からなる、局所投与のための薬剤組成物。
40. ４０．生体親和性で非刺激性な組織表面接着剤に散布したモルフォゲンの治療上 有効量からなる、組織への局所投与のための薬剤組成物。
41. ４１．上記接着剤がヒドロキプロピルセルロースからなるものである請求項４０ の組成物。
42. ４２．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣｂｍＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも７０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項３８、３９、４０の組成物。
43. ４３．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも８０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項４２の組成物。
44. ４４．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項３８、３９、４０の組成物。
45. ４５．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項４４の組成物。
46. ４６．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むものか らなるものである請求項４５の方法。
47. ４７．上記モルフォゲンが一般配列１、２、３、４、５または６（配列表配列番 号１、２、３、４、３０、３１）で定義されたアミノ酸配列からなるものである 請求項３８、３９、４０の組成物。
48. ４８．上記モルフォゲンがＯＰＸ（配列表配列番号２９）で定義されたアミノ酸 配列からなるものである請求項３８、３９、４０の組成物。
49. ４９．哺乳動物の移植される臓器または組織の生存性を増強する方法であって、 移植される上記組織または臓器へのモルフォゲンの治療上有効な濃度を供給する ことからなる方法。
50. ５０．上記治療上有効な濃度が上記組織または臓器に対する再循環傷害を実質的 に抑制するために充分なものである請求項４９の方法。
51. ５１．上記モルフォゲンが上記組織または臓器に再循環傷害に先立って供給され るものである請求項４９の方法。
52. ５２．上記モルフォゲンが上記組織または臓器にドナーから上記組織または臓器 を摘出するに先立って供給されるものである請求項４９の方法。
53. ５３．上記臓器が、ドナーから上記臓器を摘出後そしてレシピエントへ移植され る前に、モルフォゲンまたモルフォゲン促進剤を含有する臓器保存溶液で置換さ れているものである請求項４９の方法。
54. ５４．上記臓器が、肺、心臓、腎臓、肝臓、膵臓からなる群がら選択されるもの である請求項４９の方法。
55. ５５．上記生きた組織が皮膚、骨髄、消化管粘膜組織からなるものである請求項 ４９の方法。
56. ５６．哺乳動物の炎症性反応に伴って発生する組織破壊作用から生組織または臓 器を保護するための方法であって、モルフォゲンの治療上有効な濃度を上記組織 または臓器に供給するステップからなる方法。
57. ５７．哺乳動物の虚血性再循環傷害から生組織または移植された臓器を保護する ための方法であって、モルフォゲンの治療上有効な濃度であって、虚血性再循環 傷害にともなって発生する組織ダメージを実質的に抑制または減少させるために 充分な濃度を上記組織または臓器に供給するステップからなる方法。
58. ５８．上記傷害組織に治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステップが 、上記哺乳動物へのモルフォゲンの治療上有効な濃度を投与するステップからな る請求項４９、５６、５７からなる方法。
59. ５９．上記傷害組織に治療上有効なモルフォゲン濃度を供給する上記ステップが 、上記哺乳動物への内因性モルフォゲンの治療上有効な濃度をインビボで促進す る物質を投与するステップからなる請求項４９、５６、５７からなる方法。
60. ６０．モルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤の治療上有効な濃度であって、上 記濃度は、上記細胞や組織を露出させた場合に、哺乳動物の炎症反応にともなっ て発生する組織破壊作用から生細胞または組織を保護するために充分な濃度をも った混合物中に、哺乳動物生細胞の浸透圧に対して浸透圧が実質的に等張を維持 するような液体の処方からなる、生細胞または生組織の保存液として有用な組成 物。
61. ６１．上記治療上有効な濃度が虚血性再循環傷害にともなって発生する組織ダメ ージの実質的な阻害または減少させるために充分なものである請求項６０の保存 溶液。
62. ６２．上記処方がさらに糖を含むものである請求項６０の保存溶液。
63. ６３．上記処方がさらに抗凝固剤または酸素フリーラジカル抑制剤を含むもので ある請求項６０の保存溶液。
64. ６４．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈｏｐ−ｌ）の残基４３−１３９ で定義されたアミノ酸配列に６０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる ものである請求項４９、５６、５７、６０の発明。
65. ６５．哺乳動物炎症反応に伴って発生する組織ダメージを緩和するための処置方 法において有用な組成物であって、モルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤の治 療上有効な濃度からなる組成物。
66. ６６．上記組織ダメージが虚血性再循環傷害または高酸素症傷害に伴って発生す るものである請求項６５の組成物。
67. ６７．上記組織ダメージが肺、心臓、腎臓、肝臓組織である請求項６５の組成物 。
68. ６８．上記組織ダメージが移植臓器または組織である請求項６５の組成物。