JPH06510539A - 放射性標識ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を防止する安定剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

放射性標識ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を防止する安定剤 本発明は放射性医薬組成物用安定剤に関する。さらに詳しくは、ゲンチシン酸お よびその誘導体のような安定剤は単独でまたは他の安定剤と共に、放射性標識ペ プチドおよびタンパク質の自己放射線分解（ａｕｔｏｒａｄｉｏｌｙｓｉｓ）を 抑制するのに使用される。 放射性標識組成物の治療および診断における用途の数は絶えず増加している。こ のような用途は一般に、適当な放射性標識組成物の生物的被験体への導入を含む 。異常、病気などの存在を診断し、突き止めるために、放射線の検出および映像 化を利用することができる。ある場合、放射性標識組成物は治療的放射線の放射 のため特定の組織または生物学的受容体を局在化する、または捜し出すよう設計 されうる。 一般に、放射性標識組成物は放射性核種；問題の特定器官を標的にするよう設計 された担体、放射性核種を担体に固定する各種の補助剤；患者への注入または患 者による吸引に適した水のような賦形剤：生理的緩衝剤および塩などを含有する 。 ある種の放射性医薬製剤は安定剤を要することが知られている。例えば、テクネ チウム−９９ｍおよびレニウム−１８６組成物は酸素があると不安定であり、テ クネチウムまたはレニウムを使用可能な酸化状態に維持するのに酸化防止剤また は還元剤のような安定剤を要する。テクネチウム−９９ｍおよびレニウム−１８ ６組成物に使用される典型的な還元剤は例えば第１スズ、第１鉄および第１クロ ムの塩である。アスコルビン酸、α−アスコルビン酸、ゲンチシン酸、還元酸、 エリトルビン酸、Ｐ−アミノ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、ニコチン酸、 ニコチンアミドおよび２．５−ジヒドロキシ−１，４−ベンゼンジスルホン酸の ような他の添加剤が放射性核種または還元剤の酸化を抑制するのに含まれること がある。 ”’Ｉ　ｎｘ　′６Ｙおよび”Ｇａのような他の放射性核種は安定な酸化状態で 存在するため、それらの有用な酸化状態を維持するのに安定剤は不要である。 何年もの間、炎症、深部静脈血栓症またはガンのような病気を診断し、治療する ためのホルモン、比較的大型の粒子のアルブミン（“ＭＡＡ”）、ヒト血清アル ブミン（“ＩＳＡ”　）　、単クローン性抗体または単クローン性抗体断片のよ うな放射性標識タンパク質の製造への関心が増えている。ある場合において、標 識タンパク質の自己放射線分解が観察されている。自己放射線分解を抑制または 防止するために、専門家はＨＳＡを組成物に加えること〔例えば、Ｒ，Ａ、Ｊ、 Ｋ１５ｈｏｒｅらのＩｎｔ。 Ｊ、Ｒａｄｉａｔ、Ａｐｐｌ、Ｉｎｓｔｒｕｍ、、パートＢ、第１３巻、第４号 、第４５７頁〜第４５９頁（１９８６年）の「沃素化単クローン性抗体製剤の自 己放射線分解」を参照〕、または製造および投与の間、放射性医薬組成物を冷凍 状態に維持すること〔例えば、Ｒ，Ｌ、　ＷａｈＩらのＪ、Ｎｕｃ、Ｍｅｄ、、 第３１巻、第１号、第８４頁〜第８９頁（１９９０年）の［放射性同位体クロー ン性抗体の自己放射線分解の低温貯蔵による抑制」を参照］を提案している。自 己放射線分解を防止するためのこれらの技術はしばしば、多くの放射性標識ペプ チドおよびタンパク質を使用した時に有効または実用的でない。 最近、診断および治療用の幾つかの新規ペプチドが単離され、合成的に開発され ている。このようなペプチドの１つはオクトレオチドとして知られており、米国 特許第４．３９５．４０３号に記載されているオクタペプチドソマトスクチン類 似体である。オクトレオチドは様々なヒトの腫瘍のソマトスタチン受容体に対し て非常に高い結合親和性を有する。放射性核種と錯体を形成することのできる適 当なキレート化剤とオクトレオチドを結合することにより、ソマトスタチン受容 体を有する腫瘍を効果的に映像化する放射性標識オクトレオチドを生成すること が可能になった。 キレート化基を含有するソマトスタチン類似体は英国特許公報第２．２２５゜５ ７９号に記載されている。 放射性標識ペプチドの潜在的な有用性にも関わらず、これらは非常に自己放射性 分解性であることがわかっている。本明細書において、「自己放射線分解」なる 用語はペプチドと結合した放射性同位体からの放射線の作用によるペプチドの化 学分解を包含する。自己放射線分解は放射性同位体から出た放射線による水また は賦形剤中のヒドロキシ基のような遊離基の生成によって起こると考える者もい る。 上記から当該技術分野においては安定な放射性標識ペプチドおよびタンパク質組 成物が必要であることが理解されよう。したがって、放射性標識ペプチドおよび タンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制する安定化剤を提供することは当該 技術分野において有意な進歩となるであろう。 ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制するためのこのよう な組成物は本明細書に開示されている。 本発明は安定な放射性標識ペプチドおよびタンパク質製剤を製造するための組成 物を提供する。本発明において使用される安定剤は放射性標識ペプチドおよびタ ンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制することができる。”’Ｔ　ｃのよう な放射性同位体の酸化を防止するのに有効な安定剤は必ずしもペプチドおよびタ ンパク質の自己放射線分解を防止するのに有効でないことがわかった。同様に、 ＨＳＡの添加または凍結のようなタンパク質の自己放射線分解を防止するのに使 用される安定剤および技術は多くの場合有効または実用的でないことがわかった 。したがって、本発明はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に 抑制する安定剤を含む組成物に関する。 ゲンチシン酸およびその誘導体はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を 抑制するのに非常に有効であることがわかった。ゲンチシン酸およびその誘導体 はまた、自己放射線分解を抑制するためにイノシトールおよびアスコルビン酸の ような他の安定剤と共に使用してもよい。 本発明はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制する安定剤 を含む組成物に関する。ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を抑制する のに非常に有効な安定剤の１群はゲンチシン酸およびその誘導体である。本発明 の安定剤を必要とする放射性標識ペプチドおよびタンパク質には診断および治療 用途を有するペプチドおよびタンパク質が含まれる。 ゲンチシン酸（すなわち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）は商業的に入手でき 、また当該技術分野において知られている幾つかの方法によって製造できる。ゲ ンチシン酸の誘導体にはゲンチシン酸の薬学的に許容しつる塩およびエステル、 並びにゲンチシルアルコールが含まれる。 適当なゲンチシン酸誘導体の例は米国特許第４．４９７．７４４号および第４， ２３２、０００号（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載されている。 放射性標識ペプチドの自己放射線分解を抑制するために、イノシトールおよびア スコルビン酸のような他の安定剤をゲンチシン酸またはその誘導体と組合せて使 用してもよい。 ゲンチシン酸の薬学的に許容しうる塩およびエステル、並びにゲンチシルアルコ ールは、米国特許第４．４９７．７４４号および第４．２３２．０００号に記載 されている技術のような当該技術分野において知られている標準的な中和および エステル化法によって製造することができる。実際に、本発明における使用に適 したゲンチシン酸の塩およびエステルはそれらの溶解度に従って選択することが できる。可溶性ゲンチシン酸塩には可溶性のアルカリ金属、アルカリ土類金属、 重金属およびアンモニウム塩が含まれる。ナトリウム、リチウムおよびカリウム のようなアルカリ金属塩は非常に可溶性であり、好ましい。カルシウムおよびマ グネシウムのようなアルカリ土類金属ゲンチシン酸塩はあまり可能性ではないが 本発明における使用に適している。 本発明においては、ペプチドの自己放射線分解をひき起こしうる広範囲の放射性 同位体を使用することができる。このような放射線同位体にはγ線、β線および α線放射体が含まれる。 適当なγ線放射体には診断技術に有用な放射性核種が含まれる。幾つかの典型的 なγ線を放射する放射性核種の例は＠７Ｇａ、　ｌ　ｌ　Ｉ　ｌ　ｎ　、ｅｌｍ ＴＣ，＋６９ｙｂ、＋２Ｊ、　′２３■および２Ｇ＋７１である。β線を放射す ることのできる放射性核種の例にはｌｌ０ｙ、６７ｆｌｕ、”’Ｒｅ、　””Ｒ ｅ、１ｇ’　Ｅｒ、　１２’Ｓ　ｎｓ　＋２”Ｔ　ｅ、　■”Ｐｒ、””Ａｕ、 ””Ｐｄ、”’Ｄ　Ｙ、　”Ｐ　−、＋４”Ｐ　ｒｓ　Ｉ７’Ｌ　ｕ、　”’Ｈ ａ、”３３ｍ、”Ｙ％　＋３’Ｉ、５ＩＩＳｒおよびＩ　ＯＳ　Ｒｈのような治 療用として有用なものが含まれる。典型的なα線放射体には２１２Ｂｉ、”’Ａ 　ｔ　、”’Ａｍおよび”’Ｆｍが含まれる。 ペプチドおよびタンパク質の放射性標識は当該技術分野において知られている種 々の方法を用いて行なうことができる。例えば、ペプチドは二官能性キレートの 使用、直線標識またはアミノ酸側鎖の特定の官能基との共有結合により標識でき る。二官能性キレートの使用は放射性核種の錯化するキレートのペプチドまたは タンパク質との共有結合を包含する。可能な二官能性キレートにはＤＴＰＡおよ びＮ、Ｓリガンドが含まれる。ＤＴＰＡは米国特許第４．４７９．９３０号（参 考文献として本明細書に組込まれる）に記載の二環式二無水物法によってペプチ ドまたはタンパク質に結合することができる。Ｎ、Ｓリガンドは米国特許第４． ９６５．３９２号および欧州特許公報Ｔｈ０２８４０７１（参考文献として本明 細書に組込まれる）に記載の方法によってペプチドまたはタンパク質に結合する ことができる。 直接標識においては、放射性核種はペプチドまたはタンパク質に存在するアミノ 酸側鎖の官能基と結合する。放射性核種はまた、還元ジスルフィド結合を含有す るペプチドまたはタンパク質のような還元形態のペプチドまたはタンパク質と結 合しうる。当該技術分野において知られている直接標識の１例は米国特許第４． ８７７、８６８号（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載されている。 ペプチドおよびタンパク質を標識するためのよく知られている他の技術は放射性 核種をアミノ酸側鎖のある特定の官能基と共有結合すること、例えばチロシン残 基のフェノール基への沃素の導入を包含する。 放射性医薬製剤を製造するための商品は一般に凍結乾燥（フリーズトライ）“キ ット”または液状配合物として提供される。凍結乾燥キットは当該技術分野にお いてよ（知られている。本発明において、凍結乾燥キットはクエン酸、酢酸また は酒石酸ナトリウムのようなトランスファーリガンド、使用する放射性同位体に 応じて還元剤；イノシトールまたはラクトースのような増量剤、標識対象ペプチ ドまたはタンパク質：および１種以上のゲンチシン酸安定剤を含有してもよい。 また、本明細書に記載の配合物に他の安定剤を加えてもよい。放射性同位体は患 者に投与する直前に凍結乾燥キットに加えられる。 液状配合物は通常、放射性同位体で標識されたペプチドまたはタンパク質を含有 する。本発明において、液状配合物はまた、配合物を安定化するための１種以上 のゲンチシン酸誘導体を含有する。安定性を改善するため、イノシトールおよび アスコルビン酸のような他の安定剤もまた配合物に加えることができる。溶液が オートクレーブ処理される場合、安定性を改善するためポリソルベート８０のよ うな海面活性剤および所望のイオン強度を与える塩溶液もまた加えることができ る。溶液は酸素を除去する必要がある場合もある。 本発明の放射性標識組成物は常法に従って非経口的に、好ましくは静脈内的に、 注射可能な製剤溶液または懸濁液の形態で投与することができる。 本発明の治療法を行なう際の投与量はもちろん治療対象の症状、例えば腫瘍の量 、使用する特定のキレート、放射性同位体の半減期および所望の治療に応じて変 化する。一般に、投与量は各臓器に対する放射能分布および観測標的吸収量に基 づいて計算される。 以下の実施例を用いて本発明をさらに詳しく説明する。これらの実施例は単なる 例示であり、本発明の態様を限定するものではない。

【実施例］ 【実施例Ｉ】クエン酸塩の添加によるＩｌｌ　Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オク トレオチドの製造 ＩＯμｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−［３，６，９，９−テトラキス（カ ルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル）−Ｄ−フェニルアラニル −し−へキシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル −Ｌ−トレオニルーし一ヘミシスチルーし一トレオニノール環状（２−７）ジス ルフィド（分子量−１３９４，６０ｇ１モル）、５．６■のクエン酸三ナトリウ ムニ水和物および０．４■のクエン酸−水和物を含有する凍結乾燥キットに４． ７０ｍＣ１のＩＩＩ　Ｉｎを含有する１、ｏ１ｎ！の０．０２Ｍ　ＨＣｌを加え た。溶液のｐＨは４．５であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベ ックマン１７０ラジオメーターを用いて”’Ｉｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの 量を観察した。 ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍＸ４．１ｍｍ、１０ミクロ ン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ　（Ａ＝ｌＯ：　９０／エタノー ル　水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から４３：５７／ Ａ：Ｂ（Ｂ＝５０：５０／１タノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモ ニウム、ｐＨ３）まで１０分間にわたって直線的に変化させ、１５分間４３：５ ７／Ａ、Ｂに保持し、次いで１０分間にわたって１００％Ｂまで直線的に変化さ せた。流速は１．５ｄ／分であった。”’ＴｎＤＴＰＡ−オクトレオチトの保持 時間は３０分であった。 ＩＩＩ　Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で８７％であり、再生１０ 時間後で５０％であった。

【実施例２】クエン酸塩およびイノシトールの添加によるＩＩＩ　ｌ　ｎで標識 されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造ＩＯμｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（ Ｎ−［３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリア ザノナノイル）−Ｄ−フェニルアラニル−し−ヘミシスチル−し−フェニルアラ ニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−）レオニル−Ｌ−ヘミシスチル− し−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ１ モル）、５．６■のクエン酸三ナトリウムニ水和物、０．４■のクエン酸−水和 物および１．０■のイノシトールを含有する凍結乾燥キットに６．０４ｍＣ１の １１１１０を含有する１、０ｒｎｌの０．０２Ｍ　ＨＣＩを加えた。 溶液のｐＨは４．５であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベック マン１７０ラジオメーターを用いて”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量 を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ａｏＸ４．１ｍｍ 、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は＋００％Ａ（Ａ＝ｌＯ：９０／ エタノール、水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１０ ０％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール、水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモ ニウム、ｐＨ３）まで６０分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５ｍ ／／分であった。Ｉｌｌ　ＩｎＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４ ５分であった。 ＩＩＩ　Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生２４ 時間後で７３．５％であった。

【実施例３】クエン酸塩、イノシトールおよびアスコルビン酸の添加によるＩｌ ｌ　Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造１０μｇのＤＴＰＡ−オ クトレオチド（Ｎ−Ｃ３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３， ６，９−トリアザノナノイル］−Ｄ−フェニルアラニル−し−ヘミシスチル−し −フェニルアラニル−Ｄ−トリブトフィルーＬ−リシル−Ｌ−１−レオニル−し −ヘミシスチル−し−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１ ３９４．６０ｇ１モル）、５．６■のクエン酸三ナトリウムニ水和物および０． ４■のクエン酸−水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０■のイノシトール、 ８．８■のアスコルビン酸、９．９■のアスコルビン酸ナトリウムおよび５．０ ５ｍＣ１のＩＩＪｎを含有する１、０艷の０．０２ＭＨＣｌを加えた。 溶液のｐＨは４．０であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベック マン１７０ラジオメーターを用いて”’Ｉｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を 観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍｘ４．１品、１ ０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配はｔｏ。 ％Ａ（Ａ＝ｌＯ：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニ ウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ　（Ｂ＝５０　：　５０／エタノール：水、１０ ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで３５分間にわたって直線的 に変化させた。流速は１．５　ｒｎｌ／分であった。ＩＩＩ　■ｎＤＴＰＡ−オ クトレオチドの保持時間は３０分であった。 目ｌ　Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生２２時 間後で８６％であった。

【実施例４】クエン酸塩、イノシトールおよびゲンチシン酸の添加によるＩｌｌ 　Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造１０μｇのＤＴＰＡ−オク トレオチド（Ｎ−Ｃ３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６ ，９−トリアザノナノイル］−Ｄ−フェニルアラニル−し−ヘミシスチル−し− フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニルーし一ヘ ミシスチルーし一トレオニノール環状（２−７）ジスルフィド（分子量＝１３９ ４．６０ｇ１モル）、５．６■のクエン酸三ナトリウムニ水和物および０．４■ のクエン酸−水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０■のイノシトール、１． ５ｍｇゲンチシン酸および５．４０ｍＣ１の１ｌｌｉｎを含有する１、ｏｒｎｌ の０．０２Ｍ　ＨＣＩを加えた。溶液のｐＨは４．０であった。溶液を室温で保 持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて”’Ｉｎ　 ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１ カラム（２５０Ｘ４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は！ ００％Ａ　（Ａ＝１０　：　９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチ ルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０　：　５０／エタノール、 水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで６０分間にわたっ て直線的に変化させた。流速は１．５ｍＡ’／分であった。”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰ Ａ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４５分であった。 目ｌ　Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生４８時 間後で９４％であった。

【実施例５】ゲンチシン酸の添加によるＩｌｌ　ｉ　ｎで標識されたＤＴＰＡ− オクトレオチトの製造 ■Ｏμｌの水中におけるＩＯμｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−（３，６， ９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル） −Ｄ−フェニルアラニル−し−ヘミシスチル−し−フェニルアラニル−Ｄ−トリ プトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニルーし一ヘミシスチルーし一トレオニノ ール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ１モル）を含有す るバイアルに２．３■のゲンチシン酸および４１，４■のゲンチシン酸ナトリウ ムニ水和物からなるｌ−の脱気ストック溶液、並びに４．６６ｍＣ１の１ｌｌｉ ｎを含有する２５μｌの０．０２ＭＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．２であっ た。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーター を用いて”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法は ハミルトンＰＲＰ−１カラム（１５ｃｍＸ４．１ｍ＋ｎＳｌ　０ミクロン）を使 用し、そして移動相Ａ　（Ａ＝２０　：　１０　：　７０／アセトニトリル　エ タノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）を用いて９ 分間溶離し、次いで移動相Ｂ（Ｂ＝５０：１０：４０／アセトニトリル：エタノ ール・水、ｌ０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）を用いて９〜１ ５分間溶離した。流速は１．２　ｍ／／分であった。 ”’Ｉｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は９〜ｌＯ分であった。 Ｉｌｌ　ｉ　ｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９７％であり、再生７ ２時間後で９７％であった。

【実施例６】酢酸塩およびニコチン酸の添加によるＩｌｌ　Ｉｎで標識されたＤ ＴＰＡ−オクトレオチトの製造 １０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−［３，６，９，９−テトラキス（カ ルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル）−Ｄ−フェニルアラニル −Ｌ−ヘミシスチル−し−フェニルアラニル−Ｄ−トリブトフィルーＬ−リシル −Ｌ−１−レオニル−し−ヘミシスチル−し−トレオニノール環状（２−７）ジ スルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ１モル）および酢酸塩緩衝剤（ｐＨ４） を含有する凍結乾燥キットに１２．３■のニコチン酸および２．４５ｍＣ１の目 １■ｎを含有する１、〇−の０．０２ＭＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは３．８で あった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメー ターを用いて”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ 法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍＸ４．　ＩＩＩ＋ｍ、ｌ　０ミクロ ン）および勾配系を使用し、勾配は！００％Ａ（Ａ＝ｌＯ：９０／エタノール・ 水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝ ５０　：　５０／エタノール・水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、 ｐＨ３）まで６０分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５　ｉ／分で あった。　”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４５分で あった。 ＩＩＩ　Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９０％であり、再生２４ 時間後で８０％であった。

【実施例７】クエン酸塩、イノシトールおよびレゾルシノールの添加によるＩｌ ｌ　Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造１０μｇのＤＴＰＡ−オ クトレオチド（Ｎ−（３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３， ６，９−１−リアザノナノイル）−Ｄ−フェニルアラニル−し−ヘキシスチル− し−フェニルアラニル−Ｄ−トリブトフィルーＬ−リシル−Ｌ−トレオニルーし −へミシスチルーＬ−トレオニノール環状（２−７）ジスルフィド（分子量＝１ ３９４．６０ｇ／（−ル）　、５．６■のクエン酸三ナトリウムニ水和物および ０．４■のクエン酸−水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０■のイノシトー ル、１１ｍｇのレゾルシノールおよび５．１７ｍＣ１のＩｌｌ　Ｉｎを含有する １、０−の０．０２Ｍ　ＨＣＩを加えた。溶液のｐＨは４．５であった。溶液を 室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて” ’Ｉｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチトの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰ ＰＰ−１カラム（２５ａｎＸ４．ｌ＋＋ｏ、１０ミクロン）および勾配系を使用 し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝ｌＱ：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テト ラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から４３・５７／Ａ：Ｂ　（Ｂ＝５０：５０／ エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで１０ 分間にわたって直線的に変化させ、１５分間４３：５７／Ａ：Ｂに保持し、次い で１０分間にわたって１００％Ｂまで直線的に変化させた。流速は１．５Ｊ／分 であった。 ”’Ｉｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は３０分であった。 １目Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で８１％（さらに、６％の１１ １１ｎトランスフア一リガンド錯体）であり、再生１２０時間後で８７％であっ た。 実施例１〜７の結果を表１に示す。これらの結果は単独の、または他の安定剤と 組合せたゲンチシン酸が放射性標識ペプチドの放射線分解を防止するのに非常に 有効であることを示している。 ■　クエン酸塩　８７％　５０％　１５時間５　ゲンチシン酸　９７％　９７％ 　７２時間＊　８１％の”’Ｉ　ｎ　ＤＴＰＡ−オクトレオチドおよび６％のト ランスファーリガンド錯体 【実施例８１　１２Ｊで標識されたＬＨ−ＲＨの製造この製造は揮発性の沃素を 吸着する木炭フィルターを備えた通風のよいヒユームフードを用いて行なわれる 。 １．５−のポリエチレン管に、７０μｌの緩衝剤Ａ　（Ａ＝１５０ｍＭのリン酸 ナトリウム、ｐＨ７，４）　、０．１Ｍ酢酸中におけル１０μｆ（７）０．１ｍ ＭＬＨ−ＲＨ溶液（デス−ｇ　ｌ　ｙ　ｌ　０１ＣＤ−ａ　Ｉ　ａ’　）　−Ｌ Ｈ−ＲＨ二チルアミド）および５μｌの０．０１Ｍ　ＮａＯＨ中における５ｍＣ １の１２３■を加える。ｌＯμｌのクロラミンＴ溶液（０，５■のクロラミンＴ ／１ｍｌの緩衝剤Ａ）をペプチド溶液に加えることにより反応を開始し、そして クロラミンＴを加えるために使用されるピペットで反応混合物を注意深く吸引し て排出することにより混合する。１分後、ｌｏｏμｌのメタ重亜硫酸ナトリウム 溶液（１■のメタ重亜硫酸ナトリウム／１ｍ／の緩衝剤Ａ）を加えて反応を終了 させ、そして反応混合物を上記のようにピペットで混合する。反応混合物をフー ドの中で数分間保持して揮発性の沃素を反応バイアルからフードの中に排出する 。 溶液をＰＤ−１０カラム（Ｇ−２５ＭセファデックスＰＤ−１０カラム；　Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）に付し、ＰＢＳ　 （ｐＨ７，４）で溶離し、そして０．５１ｎｌのフラクションを集める。１２３ Ｉで標識されたＬＨ−ＲＨはフラクション６および７に存在し、その後これらを 合一する。この溶液の半分は２■のゲンチシン酸を含有する別のバイアルに移す 。 ””Ｉ　ＬＨ−ＲＨ溶液を室温で保持し、そして逆相ＨＰＬＣおよびベックマン １７０ラジオメーターを使用して沃素化ペプチドの量および遊離の沃素の量を観 察する。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−３カラム（１５ａｎＸ４．１ｍｍ、１ ０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配を１００％Ａ　（Ａ＝１５　：　８５ ／アセトニトリル：水、６ｍＭ　ＨＣＩ）から１００％Ｂ　（Ｂ＝５０　：　５ ０／アセトニドニル：水、６ｍＭ　ＨＣＩ）まで３０分間にわたって変化させて 溶離する。この系の空隙率（ｖｏｉｄｖｏｌｕｍｅ）において遊離の沃化物が溶 離し、他方””Ｉ　ＬＨ−ＲＨは保持され、より長い保持時間を有する。ゲンチ シン酸安定剤の存在しない、放射性標識ペプチドを含む溶液はＨＰＬＣ分析測定 により溶液中の遊離沃化物の量が増加するため、明らかに自己放射線分解により 分解していることがわかる。 【実施例ｇ）＋＊ｓＲｅで標識されたＮｓ　Ｓ　ＮＲＬｕ　１０の製造ＮＲ−Ｌ ｕ−１ｏ単クローン性抗体りＮｅｏＲｘ社製）はＮｅｏＲｘ社で開発され、米国 特許第４．９６５．３９２号および欧州特許公報Ｎｎ０２８４０７１に記載の予 め生成したキレート体を使用して”’Ｒｅで標識される。 ｌ″’Ｒｅ’Ｒｅ錯体るために使用されるリガンドは［Ｎ−（Ｓ−二トキシエチ ルメルカプト）アセチルアミノ）アジポイルグリシルコグリシンのテトラフルオ ロフェニルエステルである。生成した”’Ｒｅ錯体は”’Ｒｅがリガンドの３個 の窒素と１個の硫黄原子と配位結合しているため、　ｌ・ＲｅＮ５Ｓ錯体と称せ られる。”’Ｒｅ錯体はｌ■の塩化第１スズ、１０■のゲンチシン酸および２５ ０■のクエン酸からなる０、５−の脱酸素ストック溶液と共にパージしたＩＯ− のバイアルに含まれる０、５−の”＠Ｒｅベルレネート（４００ｍＣｉ、４ｍＣ １／μｇＲｅ）を還元することにより生成される。溶液は室温で１５分間保持す る。 この溶液に１■のリガンド／ｌ−のイソプロパツールのストック溶液０．７を加 える。溶液を８０℃で１５分間加熱する。 ”’Ｒｅ−Ｎ５　Ｓ錯体を含有するバイアルに、１．０−のＰＢＳ中における２ ５■のタンパク質の溶液を加える。溶液のｐＨを０．２Ｍ炭酸ナトリウム緩衝剤 でｐＨ９〜９．５に調整する。溶液を室温で１５分間インキュベートする。典型 的な結合率は５０％であり、この反応は２００ｍＣ１の”’Ｒｅ／２５ｍｇのＮ Ｒ−Ｌｕ−１０の比放射能で”’Ｒｅ　ＮｓＳ　−ＮＲ−Ｌｕ　−１０を生成す る。 ”’Ｒｅ　Ｎ！　Ｓ　ＮＲＬｕ　１０はＰＤ−１０カラム（Ｇ−２５Ｍセファデ ックスＰＤ−１０カラム；　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙ社製）を使用し、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）で溶離し、そして０．５艷の フラクションを集めることにより精製する。”’Ｒｅ−Ｎ２５−ＮＲ−Ｌｕ−１ ０はフラクション６および７に溶出し、その後これらを合一する。この溶液の半 分を１０■のゲンチシン酸を含有するバイアルに移す。 標識タンパク質を室温で保持し、そしてゲル透過カラム（ゾルパックスＧＦ−２ ５０＋９．４ｍｍＸ２５．Ｏｃｍ＋ＤｕＰｏｎｔ社製）を用いたＨＰＬＣを使用 し、１ｒｎｌ／分の流速で０．１Ｍリン酸塩、０．１％硫酸ドデシルナトリウム （ｐＨ６，７）の移動相で溶離することにより…Ｒｅ　−Ｎ。 Ｓ　−ＮＲ−Ｌｕ　−１０の純度を観察する。標識された単クローン性抗体の自 己放射線分解による分解の存在は…Ｒｅ　Ｎｚ　Ｓ　ＮＲＬｕ−１０単クロ一ン 性抗体のピークに対応しないＨＰＬＣピークの出現により検出される。ゲンチシ ン酸を含まない溶液中では放射線分解が生じる。 本発明の精神または本質的な特徴がら逸脱することなく、本発明を他の特定の形 態で具体化できる。上記の態様はすべて単なる実例であり、本発明を制限するも のではない。したがって、本発明の範囲は上記の記載よりもむしろ請求の範囲に 記載の発明によって示される。請求の範囲に記載の発明の定義および等個物の範 囲内の変形はすべて本発明の範思内に包含される。 国際調査報告　。、Ｔ／ｌｌｅ　６つ１、。つ□ρＣＴ／ＵＳ　９２１０６４２ ９ フロントベージの続き （７２）発明者　ゴーデマンズ、ヴイルヘルムス・チオトーラス オランダ国、ケージエイ　バーゲン　１８６２３１　オーダ・バーガーヴエグ （７２）発明者　デ・ジョン、マーティナス・チオトーラス・マリア オランダ国、ピーエイチ　ホーグカースペル　１６１６　１７　ヴアンガーショ フ（７２）発明者　ミラー、キャスリーン・エムアメリカ合衆国、６３１４１　 ミズーリ州、セント・ルイス、モンマルトル・ドライブ（７２）発明者　プロダ ック、ジェイムス・ダブり二−アメリカ合衆国、６３０３４　ミズーリ州、フロ リッサント、ケンタラキー・ダービー・ドライブ　３８２７

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．放射性核種で標識することのできるペプチド；およびゲンチジン酸、ゲンチ シルアルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの混合 物からなる群より選択される第１の安定剤を含有する安定な放射性標識ペプチド を製造するための組成物。
2. ２．ペプチドは二官能性キレートの使用により放射性核種で標識できる請求の範 囲第１項記載の組成物。
3. ３．ペプチドはペプチドの直接標識により放射性核種で標識できる請求の範囲第 １項記載の組成物。
4. ４．ペプチドは放射性核種のペプチドとの共有結合により放射性核種で標識でき る請求の範囲第１項記載の組成物。
5. ５．さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第１項記載の組成物。
6. ６．第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第５項記載の組成物。
7. ７．第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第５項記載の組成物。
8. ８．さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第１項記載の組成物。
9. ９．組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第１項記載の組成物。
10. １０．ペプチドは放射性核種で標識される請求の範囲第１項記載の組成物。
11. １１．組成物は液状配合物である請求の範囲第１０項記載の組成物。
12. １２．放射性核種で標識することのできるタンパク質；およびゲンチジン酸、ゲ ンチシルアルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの 混合物からなる群より選択される第１の安定剤を含有する安定な放射性標識タン パク質を製造するための組成物。
13. １３．タンパク質は二官能性キレートの使用により放射性核種で標識できる請求 の範囲第１２項記載の組成物。
14. １４．タンパク質はペプチドの直接標識により放射性核種で標識できる請求の範 囲第１２項記載の組成物。
15. １５．タンパク質は放射性核種のペプチドとの共有結合により放射性核種で標識 できる請求の範囲第１２項記載の組成物。
16. １６．さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第１２項記載の組成物。
17. １７．第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第１６項記載の組成物。
18. １８．第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第１６項記載の組成物。
19. １９．さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第１２項記載の組成物。
20. ２０．組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第１２項記載の組成物。
21. ２１．タンパク質は放射性核種で標識される請求の範囲第１２項記載の組成物。
22. ２２．組成物は液状配合物である請求の範囲第２１項記載の組成物。
23. ２３．所定量のＤＴＰＡ−オクトレオチド；およびゲンチジン酸、ゲンチシルア ルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの混合物から なる群より選択される安定剤を含有する安定な放射性標識オクトレオチド製剤を 製造するための組成物。
24. ２４．さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第２３項記載の組成物。
25. ２５．第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第２４項記載の組成物。
26. ２６．第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第２４項記載の組成物。
27. ２７．さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第２４項記載の組成物。
28. ２８．組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第２７項記載の組成物。
29. ２９．ＤＴＰＡ−オクトレオチドは１１１Ｉｎで標識される請求の範囲第２７項 記載の組成物。
30. ３０．組成物は液状配合物である請求の範囲第２９項記載の組成物。