JPH06507908A - 関節炎の処理のための放射性ラベルされた金属結合性タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 関節炎の処理のための放射性ラベルされた金属結合性タンパク質本発明は、放射 性高分子量金属結合性タンパクｔｍ成物及びそのような放射性高分子量金属結合 タンパク質を投与することによってリウマチ様関節炎を処理するための方法に関 する。

リウマチ様関節炎は、苦痛の関節の内層の滑液膜の慢性炎症により特徴づけられ る流行の疾患である０重度のりウマチ様関節炎のための現在の処理方法は、滑脱 の除去、たとえば滑層切除を包含する。

手術的な滑層切除は、手術方法自体の危険性、及び外科医がしばしば、すべての 膜を除去し得ない事実を包含する多くの制限を有する。

残る疾患組織が結果的に再生し、手術が緩和を意味する同じ症状を引き起こす。

放射線滑層切除は、疾患滑液中に放射性化合物を注入することによって達成され る疾患滑膜組織の放射線誘発された切除である。放物の漏れにより妨げられた。

不安定性放射性核種の不安定性が、コロイド複合体からの放射性核種の置換及び 柔軟＆１ｌＩｌにおける放射性核種の保持をもたらした。注入部位からの放射性 化合物の有意な漏れは、正常な＆１１織を危険なレヘルの放射線に照射した。そ れらの制限のために、最少の漏れを有する新しい放射性ラベルされた組成物が捜 しめられた。

アメリカ特許第４，７５２，４６４号は、放射性核種が水酸化鉄マトリックス内 に閉し込められている、放射性コロイドを含んで成る組成物を記載する。放射性 コロイドは、放射線切除方法、たとえばりウマチ様関節炎における滑液の除去に おいて有用であるが、しかしながら、それらの使用は囲りの正常な組織中への注 入の部位、たとえば滑液から放射能の有意な漏れをまだもたらし、所望しない量 の放射線に正常な組織が照射される。漏れを補うためには、短い半減期を有する 放射性金属、たとえば２．３時間の半減期を有するジスプロシウム（Ｄｙ−１６ ５）が、ラベル様核種としての使用のために提案されている。その短い半減期の ために、ｏｙ−１６ｓ放射能の大部分は、有意な漏れが生しる前に、崩壊し、そ れによって正常な組織に見出される放射線の量を最少にする。

短い半に期を有する放射性金属の使用は、２種のを意なａ欅で治療放射線方法の 利用法を厳密に制限する。まず第１に、短い半減期の周位体により調製された放 射性組成物は、遠隔位置への輸送の間、崩壊のために放射能の有意な量が失なわ れる。第２に、短い半減期を有する放射性金属を含んで成る組成物の治療用量を 達成するためには、多量の放射性材料が使用されるべきである。結果として、臨 床医は、多量の放射性材料を取り扱わざるを得ない。

従って、滑液中への注入に基づいて、注入の部位で、たとえば滑液内に長期間、 存続する治療用放射性組成物の必要性がある。注入の部位での長期の維持は、注 入の部位からの有意な漏れ及び正常な組織・＼の放射線照射の恐怖を伴わないで 、放射線滑層切除を包含する治療方法において、より長い半減期を有する放射性 核種の使用を可能にする。

放射性核種及び高分子量金属結合性タンパク質から調製された放射性組成物が滑 液中に注入される場合、それらは放射能の有意な漏れを伴わないで、長期間、注 入の部位で保持されることが見出された。高分子量金属結合性タンパク質から調 製された放射性組成物は、放射線切除方法においてこれまで使用されたよりも長 い半減期を有する放射性核種により調製され得、注入の部位からのを意な漏れ及 び正常な組織への放射線照射の恐怖をひじょうに最少にする。

本発明は、金属結合性タンパク質に結合される治療用放射性核種を含んで成る化 合物を包含し、ここで前記放射性核種は２時間〜７日間の半減期を有するβ−エ ミッターであり、そして前記タンパク質はｓｏ、ｏｏｏ以上の分子量を有する。

本発明はまた、活性成分として、１又は複数の医薬的に許容できるキャリヤーに 関連する金属結合性タンパク質に結合される治療用放射性核種を含んで成る医薬 配合物にも向けられており、ここで前記放射性核種は２時間〜７日間の半減期を 有するβ−エミッターであり、そして前記タンパク質はｓｏ、ｏｏｏ以上の分子 量を有する。

もう１つの観点において、本発明は、リウマチ様関節炎の処理において活性剤と して使用するための活性成分として、５０，０００以上の分子量を有するタンパ ク質、該タンパク質に共有結合される二官能価キレート化剤及び該キレート化剤 にキレート化される治療用放射線核種を含んで成る医薬配合物であり、ここで前 記活性成分が１又は複数の医薬的に許容できるキャリヤーに関連し、そして前記 放射性核種が２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである。

本発明の組成物は、治療用放射性核種と複合体化される高分子量金属結合性タン パク質を包含する。好ましい金属結合性タンパク質は、結合される金属の不在下 で決定される場合、高分子量を有するもの、好ましくは５０，０００以上の分子 量、より好ましくはｉｏｏ、ｏｏｏ以上の分子量及び最っとも好ましくは２５０ ．０００以上の分子量を有するものである。

用語“金属結合性タンパク質°°において、“金属”とは、金属の一部が放射性 である金属カチオンを意味する。用語“金属結合性タンパク質”とは、金属カチ オンを結合する能力を天然において有するタンパク質を意味し；用語“結合性” とは、タンパク質及び金属カチオンを水溶液中で混合した後、標準技法、たとえ ば金属カチオンを含むタンパク質を非金属結合性タンパク質から、ゲル透過クロ マＩ・グラフィー、透析、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、高性能液 体クロマトグラフィー又はｙｉ層クロマトグラフィーによる分離により測定され 得る、タンパク質と金属カチオンとの間の引力、たとえば共有又はイオン結合を 意味する。用語°°金属結合性タンパク質゛とはまた、前記タンパク質への金属 キレート化リガンドの結合により変性されたタンパク質を意味する。用語゛フン バク質″とは、ペプチド結合により連結されるアミノ酸のみを含むタンノイク買 及びアミノ酸及び核酸、炭水化物又は脂質を含む複合タンノ寸り質を包含する。

金属結合性タンパク質は好ましくは、インビボで使用される場合、タンパク質か らの金属分離物を有することに対して不活性である。タンパク質の生物分解は時 間と共に生しるが；しかじ金属は、所望する処理時間の間、タンパク質から容易 には浸出しなし）。

好ましい高分子量金属結合性タンパク質の例は、フェリチン、トランスフェリン １、ヘモグロビン、セルロプラスミン、ヘモシアニン及び金属カチオンを固有に 結合できる他のタンパク質、並びにタンパク質への金属結合能力を付与するよう に二官能価キレート化剤の添加により変性されたタンパク質を包含する。好まし い金属結合性タンパク質の例は、フェリチン、すなわち結合された金属の不在下 で約４６０．０００の分子量を有する鉄貯蔵タンパク質である。フェリチンは、 分子量たり４．５００の鉄原子を結合できる中心構造コアを含む。

本発明の好ましい高分子量金属結合性タンパク質はまた、二官能価キレート化剤 の添加により金属結合能力を付与するように変性された高分子量タンパク質、た とえば免疫グロブリンも包含する。二官能価キレート化剤の添加は、金属を安定 し結合できるタンＲり質を付与する。

二官能価キレート化剤は、金属をイオン封鎖又はキレート化できる金属キレート 化成分、及び化合物がタンパク質に共有結合される反応性基を有する化合物であ る。本発明に使用のための二官能価キレート化剤は、金属キレート化成分として ポリアミノカルボキシレート又はポリアミノホスホネートを含むものである。好 ましくは、環状ポリアミノカルボキシレート又は環状ポリアミノホスホネート、 たとえば環に１２〜１６個の原子を有するマクロ環式へテロ環を有す二官能価キ レート化剤である。

本発明の二官能価キレート化剤として活性化され、そして機能できる当業界にお いて知られている化合物の例は、次のものを包含する：公開されたヨーロッパ特 許出願第２９２６８９号に開示される置換１゜４．７−）リス−カルボキシメチ ル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン及びその類似体；Ｊ、　Ａｍ 、　Ｃｈｅ＋ｍ、　Ｓｏｃ、　１１．６２０６〜６２０７　（１９８８）に開示 される２−（ｐ−ニトロベンジル）−１，４゜７．１０−テトラアザシクロドデ カン−Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　、Ｎ”’　−テトラ酢酸；　１９８９年１２月２８日 に公開されたＰＣＴ出願−０８９／１２６３１に開示される、ＰＡ−ＤＯＴＩＩ 　（ｄ　−（２−（４−アミノフェニル）エチル〕−１．４，７．１０−テトラ アザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）　、ＰＡ−ＤＯＴ門Ａ（ α−（２−（４−アミノフェニル）エチル）−１，４，７，１０−テトラアザシ クロドデカン−１−酢酸−４゜７．１０−）リス（メチル酢酸）　、ＢＡ−ＤＯ ＴＡ　（α−（４−アミノフェニル’）−１，４，７，１０−テトラアザシクロ ドデカン−１−４，７゜１０−テトラ酢酸）、ＯＭｅ−ＢＡ−ＤＯＴＡ　（α− （５−アミノ−２−メトキシフェニル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロ ドデカン−１−４，７，１０−テトラ酢酸）及びＥＡ−ＤＯｔＡ　ｃｘ−（２− （４−アミノフェニル）エチル］−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカ ノー４．フ、１叶トリ酢酸）；アメリカ特許第４，６７８，６６７号に開示され る、１，４，７．１０−テトラアザシクロドデカン＝Ｎ、Ｎ’。

Ｎ’　、Ｎ”’　−テトラ酢酸ｉ　１．４，７．１０−テトラアザシクロデカン −Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’、Ｎ”゛−テトラ酢酸、１，４．８．１１−テトラアザシク ロテトラデカン−Ｎ、Ｎ’、Ｎ’、Ｎ”°′　−テトラ酢酸及び１，５．９．１ ３−テトラアザシクロヘキサデカン−Ｎ、Ｎ’。

Ｎ’　、Ｎ”’　−テトラ酢酸；及びアメリカ特許第４，８３１，１７５号に開 示されるジエチレントリアミンペンタ酢酸の誘導体。

二官能価キレート化剤として活性化され、そして機能することができる当業界に おいて知られているポリアミノホスホネートは次のものである：アメリカ特許第 ４，８８２．１４２号に開示される１、４，７゜１０−テトラアザシクロドデカ ン−１，４，７，１０−テトラメチレンホスホン酸及びその類似体；１，３−プ ロパンジアミン−Ｎ−（カルボキシプロピル）−Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−１−リメ チレンホスホン酸、エチレンジアミン−Ｎ−（４−アミノフェネチル）−Ｎ、Ｎ ’　、Ｎ’−トリメチレンホスホン酸、エチレンジアミンテトラメチレンホスホ ン酸、１−（カルボキシ）エチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸、１−（ ４−アミノベンジル）エチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸、Ｎ’−（４ −アミノフェニル）−ジプロピレントリアミン−Ｎ’　、Ｎ’　−Ｎ”“、Ｎ” ’　−テトラメチレンホスホン酸及びＮ”−（４−アミノフェネチル）−ジエチ レントリアミン−Ｎ’　−Ｎ’　、Ｎ””、　Ｎ”゛　−テトラメチレンホスホ ン酸。

アミノホスホン酸は、多くの既知の合成技法により調製され得る。

アメリカ特許第３，２８８，８４６号及びＭｏｅｒｉｔｚｅｒ　ａｎｄ　Ｉｒａ ｎｉ、　Ｊ、　Ｏｒｇ。

Ｃｈｅｗ、、３１．１６０３　（１９６６）に記載されるように、少なくとも１ 種の反応性アミン水素を含む化合物とカルボニル化合物（アｌレデヒド又はケト ン）及び亜リン酸又はその誘導体との反応が特に重要である。

二官能価キレート化剤を製造するための方法は、当業界において良く知られてい る。１つの方法においては、ポリアミン、ポリカルボン酸キレート化剤の１又は 複数のカルボン酸基が、内部又は混合された無水物、活性化されたエステル（た とえばバラ−ニトロフェニル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、等）、又は当業 者に知られている他の誘導体のような活性化基への転換により活性化される。

活性化された酸根は次に、タンパク質と反応せしめられる０次に、金属イオンが 、タンパク質−キレート他剤複合体に添加される。

二官能価キレート化剤を製造するためのもう１つの方法は、独得の反応性基、た とえばキレート化リガンドが金属イオンを結合する強さを実質的に滅じない位置 でキレート化成分に結合されるイソチオシアネートによりキレート化リガンドを 調製することである。ＨｌＩｌ、　Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌなど、、　Ｉｎｏｒｇ、 　Ｃｈｅｗ、　２５．２７７２〜２７８１　（１９８６）による文献は、この第 ２の方法を例示する。二官能価キレート化剤の他のタンパク質結合官能基の例は 請求電子性又は核性成分、たとえばブロモアセトアミド、マレイミド、イミドエ ステル、チオフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシニミルエステル、ピリジルジ スルフィド、フェニルアジド、Ｏ−アミルイソウレア、無水物、ジアゾニウム、 カルボキシル、アミノ、アシルヒドラジド、セミカルバジド及びチオセミカルバ ジド基を包含する。

二官能価キレート化剤の添加によるタンパク質の変性は、当業界において知られ ている方法により達成され得る。一般的に、それらの方法は、タンパク質のアミ ノ酸残基及びタンパク質を結合できる二官能価キレート化剤の官能基との共を結 合の形成を包含する。

高分子量タンパク質又はタンパク質−キレート他剤複合体への治療用放射性金属 の結合は、金属イオンの水溶液に金属結合性タンパク質を、約３〜約１２のｐＨ １好ましくは約４〜約９のｐＦｌで暴露することによって達成され得る。

二官能価キレート化剤は、治療用放射性金属と反応せしめられ、そして次にその 複合体がタンパク質に結合され得る。他方、タンパク質が、まず、二官能価キレ ート化剤の添加により変性され、そして次に、その変性されたタンパク質複合体 が治療用放射性金属と反応せしめられる。

本発明に使用するための放射性核種は、約２時間〜約７日間の範囲の半減期を有 するβ−エミンターである。好ましい放射性核種は、放射性核種ホルミウム（Ｈ ｏ−１６６）、サマリウム（Ｓｓ−１５３）、ロジウム（ｌｌｈ−１０５）、ｌ レテチウム（Ｌｕ　１７７）、イ二／ジウム（Ｉｎ−１１５ｍ）、ジスブロンラ ム（Ｄｙ　−１，６５）　、イツトリウム（Ｙ−９０）　、レニウム（Ｒｅ−１ ８６）、　（Ｒｅ−１８８）及びスカンジウム（Ｓｃ　−４７）である。より好 ましくは、放射性核種Ｈｏ−１，６６、３ｓ−１５３，Ｒｅ−１８６，Ｒｅ−１ ８８，Ｒｈ−１０５゜Ｌｕ−１７７、Ｉｎ−１１５ｍ及びＤｙ−１６５である。

それぞれの放射性核種は、当業界において知られている方法により生成され得る 。たとえば、核反応器において、核種が中性子により衝撃を与えられ、その核に 追加の中性子を有する核種が得られる。

たとえば： ）１ｏ−１６５＋中性子＝　Ｈｏ−１６６＋γ典型的には、所望する放射性核種 が、適切な標的、たとえば金属酸化物を照射することによって調製され得る。放 射性核種を得るためのもう１つの方法は、直線加速器又はサイクロトロンにおい て粒子により核種に衝撃を与えることによる。放射性核種を得るだめのさらにも う１つの手段は、分裂生成物の混合物からそれらを単離することである。

本発明の組成物の調製に使用される、放射性金属の量：高分子量金属結合性タン パク質の量の比は、放射性ラベルされる特定のタンパク質、その特異性及び金属 結合能力に従って変化するであろう。

たとえば、金属結合性タンパク質、すなわちフェリチンは、結合された金属の不 在下で約４６０．０００の分子量を有し、そして性質工、タンパク質１分子が４ ，５００はどの鉄原子を結合できる。そのような高い結合能力は、１：４，５０ ０のモル比までのフェリチン：金属を可能にする。対照的に、約７７．０００の 分子量を有する金属結合性タンパク質、すなわちトランスフェリンは、分子量た りたった２つの鉄原子を結合し、１：２のモル比のトランスフェリン二金属を可 能にする。

一般的に、本発明に使用される二官能価キレート化剤は、キレート他剤１分子当 たり金属カチオンの１つの原子を結合（キレート化）でき、そして一般的に、キ レート他剤１分子当たりタンパク質の１つの分子を結合するであろう。従って、 キレート化剤−タンパク譬複合体：金属（タンパク質複合体二金属）のモル比は 一般的に、少な（とも］：１で存在するであろう。１つのタンパク質分子が１つ 以上の二官能価キレート他剤分子を結合することが可能であり、そして従って、 金属：タンパク質の比を高めるが；しかしながら、少なくとも１：１の複合体比 が好ましい。

本発明の放射性組成物においては、金属結合性タンパク質は飽和される必要はな く、すなわち放射性金属により十分に占領される。

一定貫量のタンパク質が、１：金属結合性タンパク質の結合能力よりも低いか又 は等しいモル比のタンパク質二金属を有する放射性組成物を生成するために放射 性金属と複合体化され得る。

本発明の医薬組成物は、生理学的に許容できるキャリヤーにおいて高分子量金属 結合性タンパク質により複合体化された放射性金属を含む。適切な生理学的に許 容できるキャリヤーの例は、水性キャリヤー、たとえばリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ ）　、グリコール又は塩溶液を包含する。医薬組成物は、当業界において知られ ている方法、たとえば静脈内又は注射により治療処理のための患者に投与され得 る。

たとえば、フェリチン−Ｈｏ−１６６＆ｌ成物は、塩溶液において調製され、そ して放射線切除のために関節中に注入され得る。

本発明の配合物は、固体形又は液体形で存在する。それらの配合物は、種々の成 分が使用の適切な時点で混合されるようなキット形で存在できる。予備混合され ても、又はキットとして存在しても、配合物は通常、医薬的に許容できるキャリ ヤーを必要とする。

患者に投与される放射性組成物の量は、いくつかの因子、たとえば特定の放射性 核種、その特異的な活性及び放射、治療処理の特定のタイプ、たとえば注入部位 のタイプ、所望する治療の持続期間、及び処理される疾病のタイプ、及び注入の 部位で所望される放射能の量に依存するであろう。

放射能の治療用量は、患者に投与される場合、治療放射線切除結果を達成するの に十分である量、たとえば患者の滑液中に注入される場合、滑脱を切除するのに 十分な量である。一般的に、治療用量は、約５Ｇｙ〜１，５００Ｇｙを投与する 量であろう、より好ましい用量は、注入の部位に約２ｏｃｙ〜約５００Ｇｙを投 与する量である。　ｃｙは、Ｇｒｅｙｓであり、ここでＩＧｙは１００ラドに等 しい。

本発明は、本発明の純粋に例示を意図する次の例の考慮によりさらに明白にされ るであろう。

」↓　金属交換によるフェリチン−５ｓ−１５３の調製結合された鉄を含むフェ リチン５０μｆｆｉ　（１００請ｇ／ｄ、Ｍ四〇０．０００）を、０．１　Ｍの クエン酸ナトリウム１５０μｉ及び５ｓ−１５３溶液ｌＯｕ　１．　（０，ＩＮ のｔＩＣＩ　中、３Ｘ１０−’Ｍ）をｐＨ７で含むバイアルに添加した。この溶 液を８０°Ｃで５分間、加熱した。加熱の後、その溶液１００μ２を、１０１の 長さの５ＥＰ）！ＡＤＥＸ　（ＴＭ）　Ｇ−５０ゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｇｉ ａｃｉａにより市販されているポリサツカリドデキストラン）中に注入し、そし て水により溶出し、両分集収器に１０ｉｉ１ｉｉ！ｉ分を集めた０個々の画分中 の活性の量を、Ｎａ１−ウェルシンチレーシランカウンターを用いて決定した。

放射能の大部分は、タンパク質−結合５ｓ−１５３に対応する初期画分に溶出し た。低％の放射能はより遅く溶出し、そして小さな分子、たとえば５ａ−１５３ −シトレートに相当した。

放射性ラベルされたタンパク質（画分子ｈ７）１００μ２を、麻酔されたウサギ の左のヒザ関節の滑液中に注入した。ＮａＩ　γ検出器を注入されたピザ関節上 に配置し、そして滑液に残存するＳｓ＋−１５３７活性を、１．６時間にわたっ て１背当たりの計数で決定した。この方法を、同じウサギの右ヒザの滑液への注 入によりくり返した。

その結果は、滑液からの放射能の漏れがほとんど起こらなかったことを示した。

崩壊のための修正の後、時の関数として活性をプロットすることによって曲線を 得た。その曲線は、直線であることが推定され、そして最小自乗方法を用いて３ ０秒５たりの−０，０８及び−〇、２６計数の計算された傾斜を、左及び右ヒザ のためにそれぞれ得た。

ｌ　二官能価キレート化剤を通しての添加により調製された放射性ラベルされた フェリチン バイアル中に、５１１Ｃ１３溶液（０，ＩＮのＨＣｌ中、３ＸＬＯ−’Ｍの５１ １）　１ｄを充填した。これに、微量Ｓ藻−１５３（０，ＩＮのｌ１Ｃ１中、３ Ｘ１０−’ＭのＳｍ）溶液２μ！及びα−アミノフェニル−１，４，７，１０− テトラアザシクロ−ドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（１４，９ｍｇ／ ｄ）１０μｌを添加した。　ｐＨをＮａＯＨにより７．５に調節し、そしてその 混合物を１００°Ｃで３０分間、加熱した。遊離金属を、イオン交換樹脂に通す ことによって、溶液から除去した。精製された溶液中の複合体における％金属を 、イオン交換クロマトグラフィーにより決定し、９８％であることが見出された 。この得られた金属複合体溶液１５０μｇに、チオホスゲン２μＰ及び１５０μ ２のＣＨＣｌ３を添加した。その溶液を３０分間、振盪し、そして次に、エーテ ルにより抽出し、ＣＨＣｌ、を除去した。イオン交換クロマトグラフィーを用い て、得られるイソチオシアネーＩ−複合体における％Ｓ１１が９８％であること を決定した。

結合された鉄を含むフェリチン（１０００ｍｇ　／　Ｉｄ　、ン−９００，００ ０）　５０μ！をバイアルに充填し、そして１５０μｉのＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｎ −Ｃ２−ヒドロキシエチル〕ビペラジニ／−Ｎ’−Ｃ２−エタンスルホン酸〕） を添加した（ｐＨ＝７．４）。ｐＨをＮａ０）Ｉにより８に調節し、そして１０ ０μ２の二官能価イソチオシアネート−３ｓ−１５３複合体を添加した。その溶 液を一晩放置し７た。例１に記載されるようなゲル透過クロマトグラフィーを用 いて、放射性ラベルされたタンノマク質西分を単離した。

得られた放射性ラベルされたタンパク質組成吻のウサギのヒザの滑液中への注入 を、例１におけるようにして行なった。データを記録し、そして例２におけるよ うにして計算し、そして３０秒５たりの−０，０３計数の傾斜を得、ウサギの滑 液からのこの配合物の漏れＣよ番よとんど存在しなかったことを示す。

］Ａ　放射線滑脱切除に使用するための放射性ラベルされた組成物の比較 フェリチンを、Ｎａｌ−１３１及びＰｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｉ　Ｃｏｍｐ ａｎｙにより商標“ｌ０ＤＯＧＥＮ”として市販されているタンパク譬ヨウ素化 のための仲介体である１、３，４．６−テトラクロロ−３α、６α−ジフエニル グリコウリル（ＴＤＰＧ）を用いてヨウ素化した。　ＴＤＰＧ　１．４ｍｇをポ リプロピＬ・ン管に配置し、そして１．４ｍｇのクロロホＪレムを添加した。

う ５０μＮ　（２０μｇ）のアリコートを、１ｇのガ皐スバイアル中に配置し、そ して管が乾燥するまで、栓をしないまま放置した。調製されたＴＤＰＧを、使用 するまで、凍結貯蔵した。５０μｌのフェリチン（１００鱈／ｄ、　Ｎす９００ 　、０００）をバイアル中に配置し、そして０．２Ｍのリン酸緩衝液（７，２の ρＩ（）　１００ｉｄを添加した。次に、その混合物を、調製されたＴＤＰＧ管 に添加し、そして２００μｆのＮａｌ　１３１　（９５９ｕ　Ｃｉ）を添加した 。１０分放置した後、ヨウ素化された溶液をＰＤ−１０カラム（Ｇ−２５ゲル透 過）に通し、そして０．ＯＩＭのリン酸ナトリウム緩衝液により溶出した。タン パク質結合された両分（３，５〜４．５ｍ）を集めた。

集められたタンパク質結合組成物をウサギに注入し、そして例１に記載されるの と同じ態様でデータを得、そして計算した。計算された保持傾斜は、３０秒５た り−２０，７の計数であり、２４は滑液からのヨウ素化された放射能の有意な損 失を示す。

上記方法をくり返し、抗体タンパク質Ｂ−７２，３（約１５０，０００のＭＷ） をヨウ素化した（Ｄ、　Ｃｏ１ｃｈｅｒ　ｑｇ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒ ｃｈ、４８．４５９７〜５６０３．１９８８）　、そのヨウ素化されたタンパク 質を、ウサギの滑液中に注入し、そして例１におけるようにして活性を決定し、 そして計算した。３０秒５たり−４，２の計数の計算された傾斜が観察された。

Ｎａｌ−１３１のみが反対の足の滑液中に注入される場合、−１５５，１の計算 された傾斜が観察された。

それらのデータは、二官能価キレート化剤（例２）により又は天然の金属吸着（ 例１）により放射性ラベルされる場合、高分子量タンパク質フェリチンが、ヨウ 素化されたフェリチン又はヨウ素化された抗体タンパク質（Ｂ−７２，３）に比 較して、長期間、ウサギの滑液に存続することを示し、前記ヨウ素化されたタン パク質は注入の部位からの漏れの割合の少なくとも１６倍の高さを示した。

本発明の他の態様は、本明細書の考慮又は本明細書に開示される本発明の実施か ら当業者に明らかであろう０本発明の明細書の例は例示的に考慮されるが、本発 明の範囲を限定するものではない。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年１１月Ｉダ日

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．金属結合性タンパク質に結合される治療用放射性核種を含んで成る化合物で あって、ここで前記放射性核種が２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッタ ーであり、そして前記タンパク質が５０，０００以上の分子量を有することを特 徴とする化合物。
2. ２．前記タンパク質がフェリチン、トランスフェリン、ヘモグロビン、セルロプ ラスミン又はヘモシアニンである請求の範囲第１項記載の化合物。
3. ３．前記放射性核種がＨｏ−１６６，Ｓｍ−１５３，Ｒｅ−１８６，Ｙ−９０， Ｌａ−１４０，Ｇｄ−１５９，Ｙｂ−１７５，Ｒｈ−１０５，Ｌｕ−１７７，Ｉ ｎ−１１５ｍ，Ｄｙ−１６５，Ｒｅ−１８８又はＳｃ−４７である請求の範囲第 １項記載の化合物。
4. ４．医薬として使用するための請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載の化合物 。
5. ５．リウマチ様関節炎を処理するための剤として使用するための請求の範囲第４ 項記載の化合物。
6. ６．１又は複数の医薬的に許容できるキャリヤーと共に活性成分として請求の範 囲第１〜３のいづれか１項記載の化合物を含んで成る医薬製剤。
7. ７．医薬として使用するための請求の範囲第６項記載の製剤。
8. ８．リウマチ様関節炎剤として使用するための請求の範囲第７項記載の製剤。
9. ９．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載の化合物の有効量を動物に投与する ことを含んで成る、リウマチ様関節炎の処理の必要な動物におけるそのようなリ ウマチ様関節炎を処理するための方法。
10. １０．前記有効量が５Ｇｒｅｙｓ〜１，５００Ｇｒｅｙｓである請求の範囲第９ 項記載の方法。
11. １１．請求の範囲第６項記載の製剤の有効量を動物に投与することを含んで成る 、リウマチ様関節炎の処理の必要な動物におけるそのようなリウマチ様関節炎を 処理するための方法。
12. １２．およそ５０，０００以上の分子量を有するタンパク質、該タンパク質に共 有結合される二官能価キレート化剤及び該二官能価キレート化剤にキレート化さ れる、２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである治療用放射性核種 を含んで成る、リウマチ様関節炎の処理において剤として使用するための化合物 。
13. １３．リウマチ様関節炎の処理において剤として使用するための活性成分として 、およそ５０，０００以上の分子量を有するタンパク質、該タンパク質に共有結 合される二官能価キレート化剤及び該二官能価キレート化剤にキレート化される 、２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである治療用放射性核種を含 んで成る製剤であって、ここで前記活性成分が１又は複数の医薬的に許容できる キャリヤーに間達している製剤。
14. １４．５０，０００以上の分子量を有するタンパク質、該タンパク質に共有結合 される二官能価キレート化剤及び該二官能価キレート化剤にキレート化される、 ２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである治療用核種を含んで成る 化合物の有効量を動物に投与することを含んで成る、リウマチ様関節炎の処理の 必要な動物におけるそのようなリウマチ様関節炎を処理するための方法。
15. １５．５０，０００以上の分子量を有するタンパク質、該タンパク質に共有結合 される二官能価キレート化剤及び該二官能価キレート化剤にキレート化される、 ２時間〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである治療用核種を含んで成る 製剤の有効量を動物に投与することを含んで成る、リウマチ様関節炎の処理の必 要な動物におけるそのようなリウマチ様関節炎を処理するための方法。
16. １６．前記有効量が５Ｇｒｅｙｓ〜１，５００Ｇｒｅｙｓの用量である請求の範 囲第１４又は１５項記載の方法。
17. １７．前記二官能価キレート化剤がポリアミノカルボキシレート又はポリアミノ ホスホネートキレート化成分を含む請求の範囲第１２〜１６項記載のいづれかの もの。
18. １８．リウマチ様関節炎を処理するためのキットであって、第１区画室に２時間 〜７日間の半減期を有するβ−エミッターである放射性核種及び第２区画室に５ ０，０００以上の分子量を有する金属結合性タンパク質を含んで成るキット。