JPH06507177A - ダニを抑制するための新規なバシルスチューリンゲンシス単離体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ダニを抑制するための新規なバシルスチューリンゲンシス単離体 関連出願に対するクロスリファレンス 本発明は１９９１年４月３０日に出願された継続中の出願ｏ７／６９３，２１０ の一部継続出願である。これはまた１９９１年９月１３日に出願された出願番号 ０７／７５９．２４８の一部継続出願でア％　１９９１年９月３０日ニ出願され た０７／７６８，１４１＋７）一部継続出願てもある。

発明の背景 胞子形成性の微生物バシルスチューリンゲンシス（８゜１、）は最も良く知られ た対昆虫毒素を生産する。この毒素はδ−エンドトキシンと命名される蛋白質で ある。この蛋白質はハシルスチューリンゲンシス胞子形成細胞によって合成され る。この毒素はその結晶形で感受性の昆虫の幼虫により摂取されると昆虫の腸液 蛋白質分解酵素によって生物活性部分に変換される。主要な標的は腸の表皮の昆 虫細胞であり、それらの細胞は急速に破壊される。経験によってｅ、　ｔ、毒素 の活性は非常に高いので感受性の昆虫を殺すのにナノグラム量しか必要とされな いことが示されている。

’　Ｂ、ｔ、の報告されている活性スペクトラムは、ａｍ及び林業に於ける昆虫 の被害を主として生じる鱗翅目内の毘虫種をカバーしている。その活性スベクロ ラムはまた双翅目の昆虫を含み、ここには蚊やブヨ（ブラックフライ）が含まれ る。コウチ、　Ｔ、Ｌ、、（１９８０）　ｒバシルスチューリンゲンシスｖａｒ 、イスラエレンシスの蚊に対する病源性」Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｉ ｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（ディベロップメンツ　イン　 インダストリアル　マイクロバイオロジー）、２２：６１−６７　；ビーグル、 Ｃ−Ｃ，、（１９７８）　ｒ職業生態系に於ける出生細菌の用途Ｊ　Ｄｅｖｅｌ ｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（デ イベロツブメンツ　イン　インダストリアル　マイクロバイオロジー）、２０： ９７−１０４を参照。

米国特許４，７７１．１３１はバシルスチューリンゲンシスの菌株から単離され た毒素遺伝子を開示している。この遺伝子は鞘翅目の甲虫に対し活性である毒素 をコードしている。

ダニを抑制するためのバシルスチューリンゲンシス製剤の用途に関する出版され た報告がある。これらの出版物は以下の通りである。

ロイヤリティー、シＮ１、ホール、　Ｆ、Ｒ，及びティラー。

Ｒ，Ａ、、１．１９９０テトラニチヤス　ウルティカエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｌｌ ｕｓ　ｕｒｔｉｃａｅ）（ダニ類：テトラニチダエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａ ｅ））の致死率、性殖力及びフィーディングについてのチューリンゲンシンの効 果　Ｊ、　Ｅｃｏｎ、　Ｅｎｔｏｓｏｌ、　８３ニア９２−７９８゜ニール、Ｊ 、讐０、　リントクイスト、　Ｒ，に、、ゴツト、に１Ｍ。

及びケージ−、Ｍ、１．１９８７テトラニチヤス　ウルティカ工及びテトラニチ ャス　シンアバリナス（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ） に対するバシルスチューリンゲンシス（Ｂ。

１、）へルリナー（Ｂｅｒｌ　１ｎｅｒ）の熱安定β−エキソトキシンの活性Ｊ 、　Ａｇｒｉｃ、　Ｅｎｔｏ＋ｇｏ１．４：３３−４０ｍブライン、Ｐｌ、イン ベ、Ｇ、及びパン　セマイレ、Ｒ，１９７８テトラニチャス　ウルティ力エ　コ ツホ（にｏｃｈ、）　（ダニｎ：テトラニチダエ）という蜘蛛ダニ（スパイダー マイト）に対する市販のバシルスチゴーリンゲンシス製剤の効果、　Ｍｅｄｅｄ ｅｌｉｎｇｅｎ　４３：４７１−４７Ｌ１−記の出版された研究に於て８．１． Ｉｌ剤の活性成分はβ−エキソトキシン（チュウリンゲンシンとも呼ばれる）で あった。

米国特許４．６９５．４５５は非増殖質性の細胞に包まれている生＊Ｍ虫剤を製 造及び使用する方法と組成物に間している。

米国特許４，８４９．２１７はアルファルファライ−ビル（ムラサキウマゴヤシ に繁殖するソウムシ科の昆虫）に対し活性の８．ｔ、単離体に間している。

発明の簡単なまとめ 本発明は殺ダニ性を有しているバシルスチューリンゲンシス単離体及び毒素に関 する。ダニを制御するＢ、ｔ、β−エキソトキシンの使用について出版された報 告とは違って、本発明の単離体は、ダニを抑制するδ−エンドトキシンを発現す る。δ−エンドトキシンの使用は人及び動物に対するβ−エキソトキシンの知ら れている全般的な毒性に鐵みて非常に有利である。

より詳しくは本発明はＢ、ｔ、ＰＳ５０Ｃ，Ｂ、ｔ、ＰＳ８６Ａ１．　Ｂ、ｔ、 Ｐ５６９０１、Ｂ、ｔ、ＰＳ７２Ｌｌ、Ｂ、ｔ、ＰＳ７５Ｊ１．　Ｂ、ｔ、ＰＳ ８３Ｅ５、Ｂ、ｔ、ＰＳ４５Ｂ＋、Ｂ、ｔ、ＰＳ２４．ｌ、　Ｂ、ｔ、ＰＳ９４ Ｒ３、Ｂ、ｔ、ＰＳＩ７、Ｂ、ｔ、ＰＳ６２［１１及びＢ、　ｔ、Ｐｓ７４Ｇ＋ と命名されるバシルスチューリンゲンシス単離体に間するものである。

本発明の８．↑、単離体はツースポツテッドスパイダーマイト（２点クモダニ） のテトラニチャス　ウルティカエに毒性である。従ってこれらの単離体はこのダ ニを抑制するのに使用できる。さらにこららのＢ、ｔ、単離体からのδ−エンＦ ’　）キシンは標準の手順、例えばイオン交換によって単離でき、そしてツース ボテラドスパイダーマイトを抑制するために標準の手順で処方できる。これらの ｅ、ｔ、単離体は家畜、家禽及び貯蔵された製品の有害ダニなとの非草食性のダ ニに対しても使用できる。更に殺ダニ毒素をコートしている本発明のＢ、ｔ、単 離体からの遺伝子又は遺伝子群は、この単離体からクローニングでき、そして次 に他の宿主例えば原核生物、真核生物又は植物を形質転換するのに使用でき、そ して形質転換された宿主はダニを抑制するのに使用出来るか又はトランスジェニ ックなく外来遺伝子を導入した）植物の場合にはダニに対し抵抗性とするために 使用できる。

図１．２Ａ及び２Ｂは本発明の単離体のアルカリ可溶性蛋白質を示してる１２％ ＳＯＳポリアクリルアミドゲルの写真である。

配列の簡単な記載 ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、１は＋７ａのＤＮＡを開示している。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２は＋７ａでコードされる毒素のアミノ酸配列を開示して いる。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、３は＋７ｂのＤＮＡを開示している。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、４は＋７ｂてコートされる毒素のアミノ酸配列を開示して いる。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、５は遺伝子３３Ｆ２のヌクレオチド配列である。

ＳＥＱ　！Ｄ　Ｎｏ、６は５２Ａｌからの遺伝子のヌクレオチド配列である。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、７は５２Ａ１からの遺伝子によって発現された蛋白質のア ミノ酸配列である。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、８は６９０１ｂ）らの遺伝子のヌクレオチド配列である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、９は６９０１ｂ）らの遺伝子によって発現された蛋白質の アミノ酸配列である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、ＩＯはＳＥＱ　１０　Ｎｏ、１３のアミノ酸配列に対しコ ードするＤＮＡである。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、ＩＩは本発明に従って使用できるプローブのアミノ酸配列 である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１２は１７ａのＮ−末端アミノ酸配列である。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、＋３は＋７ｂのＮ−末端アミノ酸配列である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１４は５２Ａ１のＮ−末端アミノ酸配列である。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、１５は６９Ｄ１のＮ−末端アミノ酸配列である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、＋６は１７に由来する合成オリゴヌクレオチドである。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、１７は５２Ａ１のＮ−末端アミノ酸配列から設計されるオ リゴヌクレオチドプローブである。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、１Ｂは６９ＤｉＤと命名される合成オリゴヌクレオチドプ ローブである。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、＋９は６３　Ｂ　ｂ）らの前進オリゴヌクレオチドブライ マーである。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、２０は本発明に従って使用されるＳＥｏ　１０　Ｎｏ。

２９に対する逆相補的プライマーである。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２１はＳＥＱ　１０　Ｎｏ、３１のプライマーに対しコー トするＤＮＡである。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、２２は本発明に従う前進プライマーである。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、２３は本発明に従うプローブである。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２４は本発明に従うプローブである。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２５は本発明に従うプローブである。

ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２６は本発明に従う前進プライマーである。

５Ｅ（１１０Ｎｏ。２７はＰＳ５０Ｃからの遺伝子のヌクレオチド配列である。

ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、２８はＰＳ５０（ｔ））らの遺伝子によって発現される蛋 白質のアミノ酸配列である。

ＳＥＱ　！Ｄ　Ｎｏ、２９はＰＳ８６Ａｌからの遺伝子のヌクレオチド配列であ る。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、３０はＰＳ８６Ａｌからの遺伝子によって発現される蛋白 質のアミノ酸配列である。

発明の詳細な記載 本発明は殺ダニ活性を有する８、ｔ、δ−エンドトキシンに間する。殺ダニ活性 を有するほか、本発明の毒素は次の特徴の１又はそれ以上を有し得る。

１、本明細書に開示された特定の毒素と高い程度のアミノ酸相同性。

２、本明細書に開示されたプローブ又は遺伝子とハイブリット形成する毒素をコ ートするＤＮＡ配列。

３、本明細書に開示されたプレイマーを使用して増幅出来るヌクレオチド配列。

４、本明細書に開示された特定毒素に対し造られる抗体に対する免疫反応性。

本発明に従うダニ活性毒素は特定して１７ａ、　１７ｂ及び６９Ｄ１と命名され る遺伝子によってコートされる毒素によって本明細書では例示される。これらの 毒素は本明細書に与えられる毒素の単なる例示であるので、本発明は更にここで 開示又は特許請求された特定の毒素と同し又は同様な生物活性を有している他の 開示された単離体並びに均等な毒素（及び均等な毒素に対しコードしているヌク レオチド配列）を更に含んでいることが明白であるにれらの均等な毒素はここに 開示され特許請求された毒素とアミノ酸相同性を有するであろう。このアミノ酸 相同性は典型的には５０％より大きく、好ましくは７５％より大きく、最も好ま しくは９０％よりも大きい、アミノ酸相同性は生物活性の原因となっている毒素 のある種の臨界領域、又は生物活性に対し究極的に責任のある３次元立体配置の 決定に関与するある種の毒素の臨界領域に於て最も高いであろう。この点に間し である種のアミノ酸置換は、これらの置換が活性に対し臨界でない領域に於ける もの、又は分子の３次元立体配置に影響を与えないコンザーバティブなアミノ酸 置換であるならば、受は入れられ、そして朋待される０例えばアミノ酸は次のク ラスに分類される。非極性、電荷のない極性、塩基性及び酸性アミノ酸、ｉｔ換 が化合物の生物活性を実質的に変更しない限り、一つの類のアミノ酸が同しタイ プの別のアミノ酸と置き換えられるコンザーバテイプな置換は本発明の範囲内に 入る。表１は各クラスに属するアミノ酸の例を挙げている。

表　１ ある場合には、非コンザーバテイブ置換もなされ得る。

臨界的な要因はこれらの置換が毒素の生物活性を有意義に減少してはならないと いうことである０本発明の一般式に提供される情報は、種々のアミノ酸置換を行 なうことに於いて当業者に明白な指針を提供する。

本発明のＢ、ｔ、単離体は次の特性を有している。

Ｂ、チ】−リンケージシス　ＰＳ５０Ｃ球　＋３５ダブ　し　ッ　ト８．９１− リンケ゛ンノス　ＰＳ８６ＡＩ　複　（マルチフ’ＩＩ）　４５、５８Ｂ、ｆコ −’Ｉン’７−ンシ２　ＰＳ６９Ｄｌ　ｍ　長　３４、４８、１４５Ｂ、チ】− リンサ”シソス　ＰＳ７２ＬＩ　長い　長方形　４２、５０Ｂ、ｆ】−リンリ〜 ノノス　ＰＳ７５，１１　無定形　６３、７４、７８、８４Ｂ、５】−リンク゛ ンノス　ＰＳ８３Ｅ５　＄１　（マｌ１ｆ）１％）　３７、４２Ｂ、チ】−リシ タ”シノス　Ｐ　Ｓ　２４．１　長　い　５１、４８、４３Ｂ、ブ】−リンケ゛ ツノＺ　ＰＳ９４Ｒ３長　い　５０、４３、４２Ｂ、ｆユーリシ暫”シソス　Ｐ ５４５Ｂ＋　複（７１１チフ０ル）　＋５０、　＋３５、３５Ｂ、デ】−リンケ ージシス　ＰＳ１７　長　い　１５５、１４５、１２８Ｂ、ｆ】−リンタ゛ンソ ス　ＰＳ７４Ｇ１　無定形　＋４８、　＋１２、１０４、６１更に単離体は次の 共通した特性を有している。

コロニーの形態−ｍ−巨大コロニー、つやのない表面、典型的なり、ｔ。

成長細胞の形態−−−典型的なり、ｔ。

本発明の毒素は結晶毒素封入物の形状と場所の点で正確に特徴付けることができ る。特にダニ活性封入体は典型的には細胞溶菌の後、胞子に付いたままで残る。

これらの封入体は、くっついている封入体の以前の記載のように外膜（ｅｘｏｓ ｐｏｒｉｕ＋１）内にあるのではなく、別の機構によって胞子内に保たれている 。ダニ活性単離体の封入物は典型的には無定形で一般的に長いか及び／又はマル チプルである。これらの封入物は胞子に付いたままである大きな丸い７ｍ定形の 封入体と区別される。この記載に適合するＢ、ｔ、菌株で慣用の標的鱗翅目、双 翅目又は鞘翅目のボテドビートル（７鴨鈴薯の甲虫）に対し活性であることが発 見されているものはない、我々はこの結晶構造とダニ活性の間に非常に高い相間 があることを見出した。

本発明に従う遺伝子と毒素は本明細書に開示される全長の配列のみならず、これ らの配列の断片又は融合蛋白質であって、特定してここに例示して配列の特徴的 な殺ダニ活性を保有しているものも含んでいる。

当業者にはダニ活性毒素をコードする遺伝子は幾つかの手段を通して同定でき得 ることが明らかである。特定の遺伝子は以下に記載される培養基寄託所から得る ことができる。これらの遺伝子又はその一部分は例えば遺伝子マシンの使用によ って合成的に造ることができる。こらの遺伝子の変異体は、点突然変異体を造る ことによって標準の技術を使用して容易に構築できる。又これらの遺伝子の断片 は標準の手順に従って市販されたエクソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼを 使用して造ることができる０例えばＢａ１３１等の酵素又は部位特異的突然変異 誘発を、これらの遺伝子の末端からヌクレオチドを票読的に切り取る為に使用す ることが出来る。また活性断片をコートする遺伝子は種々の他の制限酵素を使用 して得ることができる。これらの毒素の活性断片を直接得る為に蛋白分解酵素を 使用できる。

均等な毒素及び／又はこれらの均等な毒素をコードする遺伝子も本明細書に提供 される技術を使用してＢ、ｔ、単離体及び／又はＤＮ＾ライブラリーから見つけ ることができる。天然に存在する本発明のダニ活性毒素を得る為の幾つかの方法 がある０例えば本明細書に開示され、特許請求されるダニ活性毒素の抗体は蛋白 質の混合物から他の毒素を同定及び単離するために使用できる。特定していえば 、この分野で良く知られた手順を使用してダニ活性毒素に対し抗体を生しさせ得 る。これらの抗体を次にイムノブレシビテーション、エンザイムリンクトイムノ アッセイ（エリザ：　ＥＬＩＳＡ）又はウェスタンブロッティングによって特徴 的なダニ殺ダニ活性を有する均等な毒素を特定的に同定するために使用できる０ 本明細書に開示される毒素又は均等な毒素、又はこれらの毒素の断片に対する抗 体はこの分野の標準手順を使用して容易に製造できる。これらの毒素をコートす る遺伝子は次に微生物から得ることができる。

本発明の毒素及び遺伝子を同定する別の方法は、オリゴヌクレオチドプローブを 使用することを通じて行なう事である。これらのプローブは検出できる標識を有 するヌクレオチド配列である。この分野で良く知られるようにもしプローブ分子 及び核酸試料が２つの分子の閏で強い結合を形成することによってハイブリッド 形成するならば、プローブと試料は本質的に同じであると推定する十分な理由が 有り得る。プローブの検出可能なラベルはハイブリッド形成が生じたかどうかを 既知の方法で決めるための手段を提供する。そのようなプローブ分析は本発明の 殺（線）虫エンドトキシン遺伝子を同定するための迅速な方法を提供する。

本発明に従ってプローブとして使用されるヌクレオチドセグメントは、標準手順 を使用してＯＮ＾シンセサイザーの使用により合成できる。プローブとしてのヌ クレオチドセグメントを使用するにあたって、特定のプローブは放射性及び非放 射性標識を含めた当業者に知られた適当な任意の標識で標識でされる。典型的な 放射性標識は３２ｐ、＋２１＞１．３６５等を含む、放射性同位元素で標識され たプローブは、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）及びＤＮＡポリメラー ゼを使用して慣用のニックトランスレーション反応によってＤＮＡ試料に対し相 補的なヌクレオチド配列から構築できる。そのプローブと試料は次にハイブリダ イゼーション緩衝溶液中で一緒にされ、適当な温度にアニーリングが起きるまで 保たれる。その後、膜が外部的物質がないように洗浄され、試料と結合したプロ ーブ分子を残し、典型的にはオートラジオグラフィ及び／又は液体シンチレーシ ョン（螢光）計数によフて検出され定置される。

非放射性標識には例えばビオチン又はチロキシン等のリガント（配位子）並びに ヒドロラーゼ又はパーアイオダーゼ等の酵素又は種々の化学螢光剤、例えばルシ フェリン、又は螢光化合物、例えばフルオレスセイン及びその誘導体類が含まれ る。プローブはまた上に述べた末端に於いて同位体標識を使用することにより、 そして他の末端でビオチン標識によって行なう等、分離の容易さの為に異なる［ １の標識で両端を標識することもてきる。

デュプレックス形成及び安定性はハイブリッドの２つのストランドの閏の実質的 な相補性に依存し、そして上に述べたようにある程度のミスマツチが許され得る 。従って本発明のプローブは突然変異（単数及び複数の両方）、欠失、記載され た配列の挿入、及びこれらの組合せを含み、ここでその突然変異、挿入及び欠失 は問題の標的ポリヌクレオチドと安定なハイブリッドを形成することを許すもの である。突然変異、挿入及び欠失は多くの方法で与えられたポリヌクレオチド配 列中に生じることができ、そしてこれらの方法は当業者に知られている。他の方 法も将来知られるかも知れない。

知られた方法には限定されるものではないが、（＋）既知の配列の突然変異、挿 入又は欠失である人工的な配列を化学的に合成、又はその他の方法で合成する。

（２）本発明のプローブを使用してハイブリダイゼーションを経て新規な配列、 又はそのプローブ配列の突然変異、挿入又は欠失を得ること。及び （３）インビトロ又は生体内で試験配列を突然変異させ、挿入し又は欠失させる こと。

与えられたプローブから生しる突然変異、挿入及び欠失による変異体はもとのプ ローブよりも多かれ少なかれ効率的であり得ることに注意することが重要である 。効率におけるそのような差にもかかわらず、これらの変異体は本発明の範囲内 にある。

従って開示された試験配列の突然変異、挿入及び欠失変異体は当業者に良く知ら れた方法で容易に製造できる。

これらの変異体は、プローブと実質的な配列相同性をその変異体が有する限り、 この本発明のプローブと同じ方法で使用できる０本明細書て使用される実質的な 配列相同性とはもとのプローブと同じ能力で変異体が機能できるようにするに十 分な相同性を指している。好ましくはこの相同性は５０％よりも大きく、より好 ましくは相同性は７５％よりも大きく、最も好ましくはこの相同性は９０％を越 える。その意図された能力に於いて変異体が機能するのに必要とされる相同性の 程度は、配列の意図される用途に依存する。配列の機能を改良する為、又はその 他の方法で方法論的な利点を提供するために設計される突然変異的、挿入的、及 び欠失的な変異を造ることは当業者の行ない得ることである。

ダニ活性遺伝子の迅速な同定に、有用な本発明に従う特定のヌクレオチドプロー ブは、ここに提供される配列情報を利用して製造できる。

リストされるプローブに於ける変異の可能性は、一部は遺伝コートの縮重による 。遺伝コードの縮重のため、即ち１よりも多いコード化ヌクレオチドトリブレッ ト（コドン）が蛋白質を造るのに使用されるアミノ酸の多くに使用され得る。従 って特定のアミノ酸に対し異なるヌクレオチド配列がコートできる。従ってＢ、 ｔ、毒素及びペプチドのアミノ酸配列は、蛋白質又はペプチドの同じアミノ酸配 列にコートした均等な複数のヌクレオチド配列によって製造できる。従って本発 明はそのような均等なヌクレオチド配列を含んでいる。また逆、又は相補的な配 列も本発明の一面であり、当業者により容易に使用できる。さらに同一の構造の 蛋白質及び同一の機能の蛋白質を、変更が蛋白質の２次構造を変化させないなら ば、アミノ酸配列を変更することによって造ることができることが示されている （カイザー、　Ｅ、Ｔ、及びケズディー。

Ｆ、Ｊ−［＋９８４］サイエンス　２２３：２４９−２５５）　、従って本発明 は蛋白質の２次構造を変更しないか、又は構造が変更されたとしても生物活性が 実質的に保持される本明細書に描かれるアミノ酸配列の変異体を含んでいる。更 に本発明は本発明の遺伝子をコードする毒素の全部又は一部を宿している生物の 突然変異体を含む。そのような微生物突然変異は当業者に良く知られた技術でな し得る０例えば紫外線照射は宿主生物の突然変異体を造るのに使用される。同様 にそのような突然変異体はこの分野で良く知られた手順で製造出来る宿主非胞子 発生性の宿主細胞を含み得る。

本発明のＢ、ｔ、単離体及びその突然変異体は標準の知られた培地及び醗酵技術 を使用して培養できる。醗酵サイクルが完了したら線菌はまずこの分野で良く知 られた手段によって発酵ブロスからＢ、ｔ、胞子と結晶をまず分離することによ って収穫できる０回収されたＢ、ｔ、胞子及び結晶は表面活性剤、分散剤、不活 性担体及び特定の標的害虫に対する取り扱い及び適用を容易にされるための他の 成分を添加することによって水和剤、液体濃縮物、顆粒、又は他の処方に処方で きる。処方及び適用手順はこの分野で良く知られ、市販菌株で使用されているも のである。

新規なり、　ｔ、単離体及びその突然変異体は標的害虫を抑制するのに使用でき る。

本発明の培養基はアメリカ合衆国６１６０４イリノイ州ペオリア　ノースユニバ ーシティ−ストリート１８１５のノーザン　リージョナル　リサーチセンターの アグリカルテャル　リサーチ　サービス　パテント　カルチャー　コレクション （ＮＲＲＬ）に寄託されている。

培地　寄託番号　寄託日 Ｂ、ｔ、　ＰＳ５０ＣＮＲＲＬ　Ｂ−１８７４６１９９１年１月９日Ｂ、ｔ、Ｐ Ｓ８６ＡＩ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８４００１９９８年８月！り日Ｂ、ｔ、ＰＳ６９ ＤＩ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８２４７１９８７年７月２８日Ｂ、ｔ、　ＰＳ７２ＬＩ 　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８７８０１９９１年３月７日Ｂ、ｔ、　ＰＳ７５ＪＩ　ＮＲ ＲＬ　Ｂ−１８７８１１９９１年３月７日Ｂ、ｔ、　ＰＳ８３Ｅ５　ＮＲＲＬ　 Ｂ−１８７８２１９９１年３月７日Ｂ、ｔ、ＰＳ４５ＢＩ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８ ３９６１９９８年８月１６日Ｂ、ｔ、　ＰＳ２４．Ｉ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８８８ １１９９１年８月３０日Ｂ、ｔ、　ＰＳ９４Ｒ３ＮＲＲＬ　Ｂ−１８８８２１９ ９１年８月３０日Ｂ、ｔ、ＰＳ１７　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８２４３１９８７年７月 ２８日Ｂ、ｔ、ＰＳ６２ＢＩ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８３９８１９８８年８月１６日 Ｂ、ｔ、ＰＳ７４ＧＩ　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８３９７１９８８年８月１６日大％＠ Ｍ　ＮＭ５２２（ｐＭＹｃ２３２１）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８７７０１９９１年２ 月２４日大膳菌ＮＭ５２２（ｐＭＶｃ２３＋７）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８８１８１ ９９１年４月２４日大騙菌ＮＭ５２２（＋）ＭＶＣ１６２７）　ＮＲＲＬ　Ｂ− １８６５１１９９０年５月１１日大ＩＩＩ　Ｍ　ＮＭ５２２（ｐＭＶｃＩ６２８ ）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８６５２１９９０年５月１１日大騙菌　ＮＭ５２２（ｐＭ ＶｃＩ６３８）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８７５１１９９１年１月１１日大腿菌ＮＭ５ ２２（ｐＭＹｃＩ６３８）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８７６９１９９１年２月１４日コ レラノ培ランハ３７　ＣＦＲ（７）　１．１４及び３５　Ｕ、Ｓ、ＣＩ２２（７ ）もとて特許商標庁長官に権限ありと決定されたものは、その特許の継続中に培 養基を人手できることが保証されるという条件下で寄託されている。これらの寄 託物は本出頓又はその子孫の出願の対応が出願されている国々の外国法令で要求 されるならば入手できる。しかし寄託物の入手可能性は行政行為によって付与さ れた特許権を侵害して実施権を公正するものではないことが理解されるべきであ る。

さらにこれらの培養基は微生物寄託に対するブタベスト条約の規定に従って、− ｍに入手可能とされる。即ちこれらは寄託物の寄託試料の提供の最も最近の要求 後少なくとも５年間の期間、そしていかなる場合にも寄託日後少なくとも３０年 の期間、又は培養基を開示して発行され得るあらゆる特許の権利行使可能な期間 、寄託物を生きたまま、そして汚染されないように保つために全ての必要な注會 をもって保存される。寄託者は寄託物の状態の為に要求された時に試料を提供す ることが、寄託所が提供することが出来ないならば、寄託物を置き換える義務を 有することを認める。この培養基寄託物の一般への入手可能性についての全ての 制限は、開示する特許の付与によって永久に取除かれる。

段ダニ有効量の本明細書で開示される微生物、又は毒素を適当なのダニ処方中で 標的害虫の環境に適用すると、それらの害虫の有効な抑制が得られる。殺ダニ有 効量は抑制されるべき害虫の性質と量、年の時朋、温度、湿度、及び生物殺虫剤 に影響し得る他の知られた要因に依存してヘクタール当り約ｌ〜約１２リットル で変化し得る。標的害虫の有効な抑制を得る為に適用されるべき生物殺虫剤の量 を決めることは当業者がなし得ることである。

細胞内δ−エンドトキシン蛋白質は他の殺虫蛋白質と組合せて（バシルスチュー リンゲンシス以外の源から得られるものを含む）活性スペクトラムを増加し、そ して標的害虫の完全な抑制を与えることができる。

Ｂ、　ｔ、　ｍ体は種々の方法で処方できる。これらは無機鉱物（フィロシリケ ート類、炭酸塩類、硫酸塩類、燐酸塩類等）又は植物材料（粉末化とうもろこし の穂軸、米の籾殻、胡桃の殻など）と混合することによって水和粉末、顆粒、又 は散布剤として用いることができる。処方剤はスブレッダー−スティッ力−助剤 、安定化剤、他の殺虫添加剤又は表面活性剤を含み得る。液体配合物は水性基盤 又は非水性であり得、フオーム、ゲル、懸濁液、乳化可能な濃縮物などとして用 いることができる。成分はレオロジー剤、表面活性剤、乳化剤、分散剤、又は重 合体を含み得る。

殺虫濃度は特定の処方の性質、特にこれが濃縮物か直接使用されるかに依存して 広く変り得る。殺虫剤は少なくとも１重量％で存在し、そして１００重量％で有 り得る。

乾燥処方剤は殺虫剤の約１〜９５重量％を有するが、一方液体処方剤は一般に液 相中の約１〜６０重量％の固体である。処方剤は一般にＩｌｇ当り約１０２〜１ ０４細胞を有する。これらの処方剤はへクタール当り約５０−ｇ（液体又は乾燥 ）〜ｌ　Ｊ又はそれ以上投与される。

処方剤は標的害虫の環境、例えば植物、家畜、家禽、土壌、又は水に対しスプレ ー、噴霧、散布（スブリンクル）などによって適用できる。

本発明の新規な単離体が宿す毒素遺伝子は広範囲な微生物宿主中に導入できる。

毒素遺伝子の発現は、直接又は１接に、吟虫剤の細胞内生産及び維持を生じる。

適当な宿主、例えばシュードモナスでは微生物はダニが増殖し、そしてダニによ って摂取される場所に適用できる。

その結果ダニが抑制される。別の方法として、毒素遺伝子を宿している微生物は 細胞内で造られる毒素の活性を長引かせる条件下で処理できる。処理された細胞 は次に標的害虫の環境に適用できる。生じる生成物はＢ、ｔ、毒素の毒性を維持 する。

Ｂ、ｔ、毒素遺伝子が適当なベクターを経由して微生物宿主に導入され、そして その宿主が生きている状態で環境に適用される場合には、ある種の宿主微生物が 使用されることが必須である。微生物宿主は問題のｌ又はそれ以１の作物の「植 物界（ｐｈｙｔｏｓｐｈｅｒｅ）　Ｊ　（フィロプレイン、フィロスフェア−、 リゾスフェア及び／又はリゾプレイン）を占めると知られているものが選択され る。これらの微生物は野性型の微生物と特定の環境（作物及び他の昆虫の生息地 ）中で巧く競争できるように選ばれ、ポリペプチド殺虫剤を発現する遺伝子の安 定な維持と発現を提供し、そして望ましくは環境的な劣化及び不活性化から殺虫 剤の保護の改良を提供する。

数多くの微生物がフィロプレイン（植物の葉の表面）及び／又はりシスフェア（ 植物の根の周りの土壌）に生息することが知られている。これらの微生物には細 菌、藻類、菌類が含まれる。これらの内で特に興味があるのは纏ｉｉ！ｉ例えば 次の族のもの等の微生物である。バシラス（Ｂａｃ　ｉ　Ｉ　Ｉｕｓ）、シュー ドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、セラ チア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、クリブシエラ（に１ｅｂｓｉｅｌ　ｌａ）、キサン トモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、ロドシュードモナス（Ｒｈｏ ｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、メチロブイ１ノウス（Ｍｅｔｈｙｌｏｐｈｉｌ ｉｕｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｔｕ＋＋）、アセトバク ター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ラクトバシラス（１゜ａｃｔｏｂａｃｉ　ｌ 　Ｉｕｓ）、アセトバクター（Ａｒｉｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、アゾトバクタ−（ Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ア ルカリゲネス（Ａｌｃａｌ　ｉｇｅｎｅｓ）、及びクロストリジウム（ＣＩｏｓ ｔ、ｒｉｄｉｕｗ）　；及び１１１１特に酵母、例えば次の族のものである。サ ツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコツカス（Ｃｒｙｐｔ ｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロマイセス（Ｋ　１ｕｙｖｅｒｏ＋１ｙｃｅｓ）、 スポロボロマイセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｗｙｅｅｓ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄ ｏｔｏｒｕｌａ）、及びオーレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）　 ：及び微生物藻類、例えば次の科のものである。シアノフィセアエ（Ｃｙａｎｏ ｐｈｙｃｅａｅ）、プロクロロフィセアエ（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｅｅａｅ ）、ロドフィセアエ（Ｒｈ。

ｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、ジノフイセアエ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリソフ ィセアエ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｃｅａｅ）、プリムネシオフィセアエ（Ｐｒｙ＊ ｎｅｓｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、キサントフイセアエ（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｅｅａ ｅ）＋ラフィトフィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、バシラリオフイ セアエ（Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、エウステイグマトフイセアｘ 　（Ｅｕｓｔｉｇｗａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリブトフィセアエ（Ｃｒｙｐｔ 。

ｐｈｙｃｅａｅ）、エウグレノフィセアエ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、 ブラシノフィセアエ（Ｐｒａｓｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、及びクロロフイセアエ （Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、特に興味が持たれるのは次の様なフィトスフ ェア細菌種である。シュードモナスシリンガニ（Ｐｓｅｕ’ｄｏｍｏｎａｓ　ｓ ｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナスフルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、セラチアマルケスセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍ ａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、アセトバクタークシリニウム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ 　ｘｙｌｉｎｕｍ）、アグロバクテリウムゝンメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃ ｔｅｒｉｕｍ　ｆ、ｕ＊ｅｆａｃｉｅｎｓ）、ロドシュードモナススフェロイデ ス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｐｈｅｒｏｉｄｅｓ）、キサントモ ナスカムペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、リゾビ ウムメリオチ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ　＋ｇｅｌ　１ｏｔｉ）、アルカリゲネスエ ントロバス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｅｎｔｒｏｐｈｕｓ）及びアゾトバクタ ービンランディイ（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｎｌａｎｄｉｉ）；及び次の 様な植物界酵母種、例えばロドトルラルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂ ｒａ）、ロドトルラグルティニス（Ｒ，ｇｌｕｔｉｎｉｓ）、ロドトルラルブラ （Ｒ，ｍａｒｉｎａ）、ロドトルラアラランティア力（Ｒ，ａｕｒａｎｔｉａｃ ａ）・クリプトコツカスアルビダス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｌｂｉｄｕ ｓ）、クリプトコツカスディフルエンス（Ｃ，ｄｉｆｆｌｕｅｎｓ）、クリブト コツ力スラウレンティイ（Ｃ，１ａｕｒｅｎｔｉｉ）、サツカロミセスロゼイ（ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｉ）、サツ力ロミセスプレトリエンンス （Ｓ、　ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ）、サツ力ロミセスセレビシアエ（Ｓ、　ｃ ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、スポロボロマイセスロゼウス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｗｙ ｃｅｓ　ｒｏｓｅｕｓ）、スポロボロマイセスオドラス（ｓ、　ｏｄ。ｒ　ｕ　 ｓ　）、クルイベロマイセスベロナエ（にＩｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｖｅｒｏ ｎａｅ）、及びアウレオバシジウムボルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｓ　 ｐｏｌｌｕｌａｎｓ）。特に興味があるのは色素微生物である。

遺伝子の安定な維持と発現を可能とする条件下で、微生物宿主中に毒素を発現す るＢ、ｔ、遺伝子を導入するために種々の方法が利用できる。毒素遺伝子を発現 するための転写及び翻訳調節シグナル、それらの調節制御下の毒素遺伝子、及び 統合化を生じる、宿主生物の配列と相同のＯＮ＾配列、及び／又は統合化と安定 な維持を生じる、宿主中で機能する複製系を含むＤＮＡ構築物を提供することが できる。

転写開始シグナルはプロモーターと転写開始出発位置を含む。ある場合には環境 に放出した後にのみしか毒素の発現が生しないような毒素の調節的な発現を提供 することが望まれるかもしれない。これはオペレーターで、又は微生物の物理的 又は化学的な環境の変化で導入できるアクチヘーター又はエンハンサ−に対する 領域結合で達成できる。例えば温度感応性の調節領域を使用でき、この場合はこ の生物は毒素の発現なしに実験室で成育できるが、環境に放出すると発現が開始 する。他の技術では毒素の発現を阻害する実験室内の特定の栄養培地を用いるこ とができ、この場合環境中の栄養培地は毒素の発現を可能とする。翻訳開始のた めにはリポソーム結合位置及び開始コドンが存在するであろう。

メツセンジャーＲＮＡの発現を強化するために種々の操作を用いることが出来、 特に活性プロモーターを使用することにより、並びにメツセンジャーＲＮＡの安 定性を強化する配列を用いることによって行なうことができる。

転写及び翻訳停止領域はストップコドン、ターミネータ−領域、及び任意付加的 に存在できるポリアデニル化信号を含む。疎水「リーダー」配列は内側膜を横切 る蛋白質の分泌を促進するために翻訳されたポリペプチド配列のアミノ末端に於 いて用いることができる。

転写の方向、即ちコード化配列又はセンス配列の５′ｈ）ら３′への方向に於い て、構築物はもしあるならば転写調節領域及びプロモーター（ここで調節領域は プロモーターの５“又は３°の何れかであり得る）、リポソーム結合位置、開始 コドン、開始コドンと相が一致するオーブンリーディングフレームを有している 構造遺伝子、ストップコドン（単数又は［１、もしある場合にはポリアデニル化 信号配列、及びターミネータ−領域を含むであろう。

二本鎖としてのこの配列は微生物宿主の形質転換のためにはそれ自体で使用され うるが、通常はマーカーを伴うＤＮＡ配列が含められており、その場合には第二 のＤＮＡ配列はＤＮＡを宿主中へ導入する閏に毒素発現構築物と結合され得る。

マーカーとは変更又は形質転換されている宿主の選択を提供するための構造遺伝 子を意図している。マーカーは通常は選択的な利点、例えば殺生物剤抵抗性、例 えば抗生物質抵抗性又は重金属抵抗性、独立栄養宿主に対し原栄養性を提供する ためのコンプレメンテ−ジョン（相補性）などを通常与える。好ましくは変更さ れた宿主が選択されるのみならず、フィールド中で競争的でありうる様に相補性 が用いられる。構築物の開発に於いて、並びに宿主を変更するのにｌ又はそれ以 上のマーカーが用いられ得る。生物はさらにフィールド中の他の野性型の微生物 に対し競争的利点を提供することによってさらに変更され得る０例えば金属キレ ート化剤、例えばシデロフォア（５ｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅｓ）を発現する遺伝子 は、毒素を発現する構造遺伝子と共に宿主中に導入できる。この方法でジデロフ ォアの強化された発現が毒素生産宿主に対する競争的な利点を提供し、従ってこ れは野性型の微生物と効率的に競争し環境に於ける生態的地位を安定に占めるこ とができる。

機能しうるｖ１１Ｉ系が存在しない場合には、構築物は少なくとも５０塩基対（ ｂｐ）、好ましくは少なくとも約１００ｂｐ、そして通常は約５００’０ｂｐｌ ｔ越えない宿主の配列と相同の配列を含むであろう、この方法で正当な組替えの 確率が強化されるので遺伝子は宿主中に統合化され、そして安定に宿主によって 維持される。望ましくは毒素遺伝子は相補性を提供する遺伝子並びに競争的な利 点を提供する遺伝子の近くにある。従って毒素遺伝子が失われた場合には、生じ る生物は相補性の遺伝子及び／又は競争的利点を提供する遺伝子も失い、従って 無傷の構築物を維持する遺伝子と環境中で競争することができない。

纏Ｌバクテリオファージ、シアノバクテリア、藻類、真菌類等の種々の広い範囲 の微生物宿主から数多くの転写調節領域が人手できる０種々の転写調節領域は、 ｔｒｐ遺伝子、ｌａｃ遺伝子、ｇａｌ遺伝子、ラムダ左及び右プロモーター、ｔ ａｃプロモーター、宿主中で機能する場合の、毒素遺伝子と関連する天然のプロ モーター、関連領域を含む０例えば米国特許４，３３２，８９８．４，３４２， ８３２及び４，３５６゜２７０を参照、停止領域は２つの領域が適合性で宿主中 で機能できる限りに於て、転写調節領域又は異なる転写開始ＷＩ域と通常関連す る停止領域であり得る。

安定なエピゾーム維持又は統合化が望まれる場合には、プラスミドは宿主中で機 能し得る複製系を有するものが用いられる。複製系はクロモソーム、宿主又は異 なる宿主中に通常存在するエピゾームエレメント、又は宿主中で安定なウィルス からの複製系に由来できる。数多くのプラスミドが利用でき、例えばｐＢＲ３２ ２、ｐＡｃＹｃ１８４、ＲＳＦＩｏｌｏ、ｐＲＯＩ６１４及びその他が利用でき る０例えばオルソン等、（１９８２）　Ｊ、　８ａｃｔｅｒｉｏ１．　＋５０： ６０６９及びパブダサリアン等、（＋９８１）　Ｇｅｎｅ　１６：２３７及び米 国特許第４．３５６，２７０．４゜３６２．８１７．４．３７１．６２５を参照 。

Ｂ、ｔ、遺伝子は開始領域の調節制御下にあるように転写及び藺訳閏始領域と、 転写及び翻訳停止領域の間に導入できる。この構築物はプラスミド中に導入され 、プラスミドは少なくとも１つの複製系を含むが、１つの複製系がプラスミドの 開発の閏のクローニングのために使用され、第２の複製系が究極の宿主中で機能 するために必要であるときは、１以上の複製系を含むことができる。さらに前に 記載したｌ又はそれ以上のマーカーが存在できる。統合化が望まれる場合にはプ ラスミドは望ましくは宿主ゲノムと相同の配列を含むであろう。

形質転換体は、変更されていない生物又は存在する場合に移し変える生物から、 望まれる生物を選択することを可能とする選択技術を通常用いて、慣用の方法に 従って単離できる。形質転換体は次に殺虫活性について試験できる。

適当な殺虫剤含有細胞が細胞中の毒素の活性を長期化させるために処理され、処 理されたＩＩ胞が標的害虫に適用される場合には、適当な宿主細胞は、哺乳類等 の高等生物に対し毒性である物質を造り出さない細胞に通常限定されるが、原核 細胞、真核細胞のいずれかを含み得る。

しかし高等生物に対し毒性の物質を造る生物も、哺乳類宿主に対する毒性の可能 性をさけ得るほど毒素が不安定であるか十分低い適用水準であるならば使用でき る。特に興味ある宿主は前に記載した、原核細胞及び低級真核細胞、例えば真菌 類である。

製造の目的の宿主細胞を選択するのに特に興味ある特徴は、宿主へのＢ、ｔ、遺 伝子の導入の容易さ、発現系の入手可能性、発現の効率、宿主中の殺虫剤の安定 性、及び補助的な遺伝子的能力の存在が含まれる。殺虫剤ミクロカプセルどして 使用するために興味ある特徴には、殺虫剤の保護性質、例えば厚い績胞壁、色素 及び細胞内のパッケージング又は封入体の形成；水性環境中での生存；哺乳類へ の毒性がないこと：害虫が摂取するのに魅力的かどうか；殺すことの容易さと毒 素の損傷なしに固定できること等である。他の考慮点には処方の容易さ、取扱の 容易さ、経済性、貯蔵安定性等である。

細胞は通常は無傷であり、胞子形であるよりも処理された時に実質的に増殖型で あるが、ある場合には胞子も使用できる。

微生物細胞、例えばＢ、ｔ、毒素遺伝子を含有する微生物の処理は、技術が毒素 の性質に悪影響をしない限り、また毒素を保護する細胞の能力を減少させない限 り化学的又は物理的手段、又は化学的及び／又は物理的手段の組合せによるもの であり得る。化学剤の例はハロゲン化剤、特に原子番号１７〜８０のハロゲンに よるものである。より詳しくは温和な条件下でヨウ素が使用でき、そして所望の 結果を達成するために十分な時閏行なわれる。他の適当な技術にはアルデヒド、 例えばホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドでの処理、抗感染剤例えばゼフ イランクロライド及びセチルピリジニウムクロライドでの処理、アルコール類例 えばイソプロピルアルコール及びエタノール；種々の組織学的固定剤例えばルゴ ールヨウ素、ボウイン（Ｂｏｕｉｎ）固定剤及びヘリ−（Ｈｅｌｌｙ）固定剤（ ヒューマソン、グレッチェン　Ｌ９、アニマルＭｉｌｌ技術、ν、■。

フリーマン　アンド　カンパニー　１９６７参照）又は細胞が宿主動物に投与さ れた時に細胞中に造られる毒素の活性を保存し、長引かせる物理く熱）及び化学 剤の組合せが含まれる。物理的手段の例はガンマ−線照射及びｘ＆ＩＮ射などの 短波長照射、凍結、紫外線照射、凍結乾燥等である。

細胞は一般に環境条件に対する抵抗性を強めるであろう強化された構造安定性を 有する。殺虫剤がプロ型である場合には不活性化の方法は、標的害虫病原体によ りプロ型を成熟した形態に処理することを阻止しないように不活性化の方法は選 択されるべきである０例えばホルムアルデヒドは蛋白質を架橋させ、そしてポリ ペプチド殺虫剤のプロ型の処理を阻止しうる。不活性化又は殺す方法は、毒素の 生物利用性又は生物活性の実質的な部分を少なくとも保持するものである。

Ｂ、ｔ、ｌ虫遺伝子を含有している細胞宿主は、任意の都合のよい栄養培地中で 成育することができ、ここではＤＮＡ構築物は選択的な利点を提供し、細胞の実 質的な全て又は全てがＢ、ｔ、遺伝子を保持するように選択培地を提供する。こ れらの細胞は次に慣用方法に従って収穫される。

別の方法として細胞は収穫前に処理することができる。

本発明のＢ、ｔ、細胞は標準の技術の培地及び発酵技術を使用して培養できる０ 発酵サイクルが完了すると細菌はまずＢ、ｔ、ｆｆｌ子及び結晶を、この分野で 良く知られた手段によって発酵ブロスから分離することによって収穫できる０回 収されたＢ、ｔ、ｌｌ＠子及び結晶は特定の標的害虫に対し取扱いと適用を容易 にするために表面活性剤、分散剤、不活性担体及びその他の成分を添加すること により水和粉末、液体濃縮物、顆粒、又は他の処方に処方できる。

これらの処方剤及び適用手順は全てこの分野で知られている。

誘引剤とＢ、　ｔ、単離体の又はここに開示されるＢ、ｔ、単離体から得ること ができる遺伝子を含んだｍｙえ微生物の胞子及び結晶を含有している処方された 餌顆粒は、土壌又は貯蔵された製品の近辺に適用できる。処方された製品はまた 、収穫のサイクルの後の段階で、種子被覆又は根の処理、又は全植物の処理とし て適用することもできる。

本発明の新規な単離体の突然変異体はこの分野で良く知られた手順て造られる０ 例えば無胞子性突然変異体は新規な単離体のエチルメタンスルホネート（ＥＭＳ ）突然変異誘発を通して得ることができる。これらの突然変異体はこの分野で良 く知られた紫外線とニトロソグアニジンを使用して造れ得る。

Ｖ胞子性突然変異体の小割合は彎傷のままであり、延長された発酵朋閏の間溶解 されない、これらの菌株は溶菌マイナス（−）と命名される。溶菌マイナス菌株 は振盪フラスコ培地中で無胞子性突然変異体をスクリーニングし、そして無傷の ままで、かつ発酵の終りに毒素結晶を含有している突然変異体を選択することに よフて同定できる。溶菌マイナス菌株は、保護されたカプセル化された毒素蛋白 質を生じる細胞固定方法に適している。

該無胞子性突然変異体のファージ抵抗性の変異菌を造る為にファージ溶菌物のア リコートを栄養寒天上に広げ乾燥させる。ファージ感受性の細菌菌株のアリコー トを次に乾燥溶菌物上に直接プレートし、そして乾燥させる。

プレートを３０℃で培養する。プレートを２日閏培養し、そしてその時点で数多 くのコロニーが寒天上で成育しているのが観測できる。これらのコロニーの幾つ かを拾い上げて栄養寒天プレート上でサブカルチャーにする。これらの明らかに 抵抗性の培養基をファージ溶菌物でクロスストリーキングすることによって抵抗 性を試験する。

ファージ溶菌物の線をプレート上にストリークし乾燥させる。抵抗性と推測され る培養基を次にファージラインと交差させてストリークする。抵抗性の細菌培養 基は（資）℃で一夜培養後、ファージの線を横切るストリークのどこにも溶菌を 示さない、ファージに対する抵抗性を次に栄養寒天プレート上に抵抗性の培養基 のローン（ｌａｗｎ）をプレート（片手培養）することによって確認する。感受 性の菌株も同じ樟にプレートして陽性対照として役立てる、乾燥後、ファージ溶 菌物の一滴をプレートの中心に置き、そして乾燥させる。抵抗性の培養基は３０ ℃で２４時間培！Ｉ？！、ファージ溶菌物が置かれた区域に於て溶菌を示さない 。

以下は最良のＵ様を含めた本発明を実施する手順を説明する実施例である。これ らの実施例は制限するものと解釈されるべきではない、別途記載されない限り全 ての％は重量により、全ての溶媒混合物割合は容量による。

実施例Ｉ　Ｂ、ｔ、単離体の培養 ｅ、ｔ、単離体又はその突然変異菌のサブカルチャーは次の培地、ペプトン、グ ルコース、塩培地に接種するために使用できる。

バクトペブトン　７．５ｇ／ｌ グルコース　１．Ｏｇ／Ｉ Ｋ　Ｈ□Ｐ　Ｏａ　３．４ｇ／　Ｉ Ｋ　２ＨＰ　Ｏａ　４．３５ｇ／ｌ 塩溶液　５．０■１／ｌ ＣａＣｌ２１　液　５．０ｍｌ／１ ｐＨ７，２ 塩　溶液　（ｌｏｏｍｌ） ＭｇＳＯａ、７）１２０　２．６４ｇ Ｍｎ５Ｏ，、Ｈ２Ｏ０，０４ｇ Ｚｎ５Ｏ，，７Ｈ２００，２８ｇ ＦｅＳＯ４，７Ｈ２００，４０ｇ （ａｃＩ２　ｆ’ｌ液（１００ｍ１） ＣａＣ１２，２Ｈ２０３，６６ｇ 塩溶液及びＣａＣｌ２溶液を濾過滅菌し、接種の時にオートクレーブされた熱を かけられたブロスに加えた。フラスコを３０℃でローターリ−シェーカー上で２ ００ｒｐ−で６４時間培養した。

上の手順をこの分野で良く知られた手順によって大規模発酵に容易にスケールア ップできる。

上の発酵で得られたｅ、ｔ、１子及び／又は結晶はこの分野で良く知られた手順 で単離できる。よく使用される手順は収穫した発酵ブロスを分離技術例えば遠心 分離にかけることである。

実施例２　蛋白質の精製とアミノ酸配列決定８、ｔ、単離体ＰＳ１７．５Ｐ５２ ＡＩ、及びＰＳ６９Ｄｌを実施例１に記載したように培養した。パラ胞子性封入 体は臭化ナトリウム（２８〜３８％）密度勾配平行遠心（ファンネンスティール 、　Ｍ、Ａ、、Ｅ、Ｊ、ロス、Ｖ、Ｃ，クラマー及びに、讐、ニッカーソン　［ １９８４］　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｌｅｔｔ、　２１：３９）によ って部分的に精製した。蛋白質はウェスタンブロッティング技術（トウビン、Ｈ ｏ、Ｔ、シタニレリン、及びに、ゴートン　［１９７９］　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｉｃ、　ＵＳＡ　７６：４３５０）によってＰＶＤＦ膜（ マサチューセッツ、ベッドフォードのミリボアＩＩ）に結合させられ、モしてＮ −末端アミノ酸配列は標準のエドマン反応によって自動化気相セクエンサー（フ ン力ビラー１Ｍ、讐１、Ｒ，Ｍ、ヘライック、　Ｗ、Ｌ、ドライヤー及びり、Ｅ 、フッド　［１９８３］　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　９１：３９９）で測 定した。得られた配列は以下の通りである。

ＰＳＩ７ａ：　Ａ！ＬＮＥＬＶＰＳＶＰＹＮＶ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、＋２） ＰＳ１７ｂ：　ＡＩＬＮＥＬＹＰＳＶＰＹＮＶ　（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、１３） ＰＳ５２Ａｌ　：旧ＩＤ５ＫＴＴＬＰＲ）ＩｓＬＩＮＴ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ 、＋４）ＰＳ６９Ｄｌ　：　ＭＩＬＧＮＧＫＴＬＰにＨＩＲＬＡＨＩＦＡＴＱＮ Ｓ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１５）全細胞ＤＮＡは細胞Ｂ、ｔ、ＰＳ１７を低光 学密度（０Ｄｅｏｏ”１．Ｏ）に成育させ、そして遠心分離で細胞を回収させる ことによって準備した。細胞を２０％蔗糖と５０讃ｇ／＋ｇ　ｌリリチウムを含 有しているＴＥＳ緩衝液（３０ｗＭ）リス−Ｃ１，１０冒ＭＥＤＴＡ、５０ｍＭ 　ＮａＣｌ、ｐＨ＝８．０）中でプロトプラスト化した。　ＳＯＳを最終濃度４ ％に添加することによフてプロトプラストを溶解した。細胞性物質を１００ｍＭ 　（最終濃度）の中性塩化カリウム中で４℃で一夜沈殿させた。上澄みをフェノ ール／クロロホルム（１：ｌ）で２回抽出した。　ＤＮＡをエタノールで沈殿さ せ、塩化セシウム−臭化エチジウム勾配物上で密度平衡バンテングによって精製 した。

ＰＳ１７からの全綱１１ｉ！　ＤＮＡをＥｃｏＲｌで消化し、そして０．８％（ ｗ／ｖ）アガロースＴＡＥ　（５０１１Ｍ　）リス−〇ＣＩ、２０ｍＭ　Ｎａ０ Ａｃ、　２゜５■Ｍ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ＝８．０）緩衝化ゲル上で電気泳動する ことによって分離した。ゲルのサザンブロッドをＰＳＩ７からの精ＩＩ　＋３０ ｋＤａ蛋白賀のＮ−末端アミノ酸配列に由来する［３２Ｐ］放射能標識化オリゴ ヌクレオチドプローブとハイブリッド化させた０合成されたオリゴヌクレオチド の配列は（ＧＣＡＡＴＴＴＴＡＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＡＴＣＣ）　（ＳＥｏ　１ ０　Ｎｏ、１６）　テある。

結果はＰＳＩ７のハイブリッド化ＥｃｏＲｌ断片が、大きさが５．Ｏｋｂ、　４ ．５ｋｂ、　２．７ｋｂ及び１．８ｋｂであって、おそらくそれぞれ少なくとも ４つの新しいダニ活性毒素遺伝子ＰＳＩ７ｄ、　ＰＳ１７ｂ、　ＰＳＩ７ａ及び ＰＳＩ７ｅを同定していることが示された。

部分的に５ａｕ３Ａで消化され、そして電気泳動で大きさが分画されているＰＳ １７全細Ｉｌｌ！　ＤＮＡからライブラリーを造った。ゲルの９〜２３ｋｂ領域 は切り取り、そしてＤＮＡを電気溶離し、そして次にエルティップ（Ｅｌｕｔｉ ｐ）　”イオン交換カラムを使用して濃縮したくニューハンプシャー州キーネの シュライヒャー　アンド　シュニル製）、単離した５ａｕ３Ａ断片をラムダ（Ｌ ａｍｂｄａ）ＧＥＭ−１１”　（プロメガ１ｍ）中に連結した。パッケージ化し たファージをより高い力価でにｖ２５１大腸菌纏胞（プロメガ１１）上にプレー トにし、そして核酸ハイブリット化プローブとして上記の放射性標識化合成オリ ゴヌクレオチドを使用してスクリーニングした。ハイブリッド化したプラークは 精製し、そしてより低いプラーク密度に再スクリーニングした。そのプローブと ハイブリッド化する単一の単離され精製されたプラークを、ＤＮ＾単離のための ファージを調製する液体培養基中のにＷ２５１大躇菌細胞を感染させるのに使用 した。

ＤＮＡは標準の手順で単離した。

回収（）た組み替えファージＤＮＡをＥｃｏＲｔで消化し、０．８％アガロース −ＴＡＥゲル上で電気泳動することによって分離した。ゲルをサザンブロツドに かけ、そしてオリゴヌクレオチドプローブとハイブリッド化し、ラムダライブラ リーから単離された毒素遺伝子の特性を決定した。２つのパターンが存在し、即 ち４．５ｋｂ　（ＰＳ１７ｂ）又は２．７ｋｂ（ＰＳＩ？ａ）　ＥｃｏＲＩ断片 を含有するクローンが存在する。ファージＤＮＡのｗａｙ量を５ａｌｌで消化し くラムダアームから挿入ＤＮＡを解放するため）そして０．６％アガロースＴＡ Ｅゲル上で電気泳動にかけることによって分離した。上記のように電気溶離し濃 縮した大きな断片を５ａｌｌ消化、脱ホスホリル化したｐＢｃＩａｃ、即ちｐＢ ｃＩ６とｐＵｃＩ９からの複製起源からなっている大腸菌／Ｂ、ｔ、シャトルベ クターに連結した。連結混合物を形質転換によりＮＭ５２２コンピテント大腸菌 細胞に導入し、そしてアンピシリン、イソプロピル−（β）−〇−チオガラクト シド（ｌ　ＰＴＧ）及び５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−（β）−Ｄ −ガラクトシド（ＸＧＡＬ）を含有しているＬＢ寒天上でプレートにした。　ｐ ＢｃＩａｃの（β）−ガラクトシド遺伝子中に推定上の挿入物を有する白色のコ ロニーを、所望のプラスミドを単離するために、標準の急速プラスミドを精製手 順にかけた。２．７ｋｂのＥｃｏＲＩ断片を含有している選択されたプラスミド はｐＭＹｃＩ６２７と命名され、そして４．５ｋｂ　ＥｃｏＲＩ断片を含有して いるプラスミドはｐＭＹｃ＋６２８と呼ばれた。

毒素遺伝子を上に開示した合成オリゴヌクレオチドプローブを使用し、新しい毒 素遺伝子の配列に対し造られたプライマーでウオーキングすることによる、標準 のジデオキシチェインターミネーション法（チェインターミネータ−法）によっ て配列決定した。

ＰＳＩ７毒素遺伝子はＢ、ｔ、中の発現のため標準方法を使用して、シャトルベ クターｐＨ７３１０１（レレクラス、Ｄ１等　［１９８９］　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃ ｒｏｂｉｏｌ、　Ｌｅｔｔ、　６０：２１１２１８）にサブクローン化された。

手短に言うと１７ａ及び１７ｂ毒素遺伝子を含有する５ａｉｌ断片が、上記のよ うに分離用アガロースゲル電気泳動、電気溶出によってそれぞれｐＭＹｃ１６２ ９及びｐＭＶｃ１６２７から単離され、そして濃縮された。これらの濃縮された 断片は、５ａｉｌ間裂、脱ホスホリル化ｐＨＴ３１０１中（こ連結された。連結 混合物を、凍結されたコンピテント大腸菌ＮＭ５２２を形質転換するために別々 に使用した。それぞれの絹替え大腸菌菌株からのプラスミドをアルカリ性溶菌て 造り、そしてアガロースゲル電気泳動で分析した。

生しるサブクローンのｐＭＹｃ２３１１とｐＭＶｃ２３０９はそれぞれ１７３及 び＋７ｂｌ素遺伝子を有してした。これらのプラスミドは、標準のエレクトロポ レーション技術（カリフォルニア州すッチモンドのバイオラッドのインストラク ションマニュアル）によって、非結晶Ｂ、ｔ、菌株ＨＤ−１ｃｒｙＢ　（インジ アナ州ウェストラフアイエツトのバーデューユニノ（−シティのアンダーソン、 Ａ、）中に形質転換された。

鞘替えＢ、ｔ、菌株ＨＤ−１ｃｒｙＢ　［ｐＭＹＣ２３１１１及び［ｐＭＹＣ２ ３０９］は胞子形成に成育され、そして蛋白質は野性型Ｂ、ｔ、蛋白質について 上に記載したようにＮａＢｒ勾配遠心によって精製された。

にｍ」」−／さ−２ｔＩ＝２−ｔ−ユニュエンーゲンシス菌株ＰＳ５２＾ｌか成 立１−１−クー多ユ翠−七−コードよる遺伝上のヱ±Ｊ乙クローニング全細胞Ｄ ＮＡは実施例３に記載したようにバシルスチューリンゲンシスＰＳ５２Ａｌ　（ Ｂ、ｔ、ＰＳ５２Ａｌ）から造られた。

ＰＳ５２ＡＩ　ＤＮＡのサザンプロットを実施例２に開示されるＮ−末端アミノ 酸配列から設計された３２ｐ標識化オリゴヌクレオチドクローブと標準のハイブ リッド化をさせることによってＲＦＬＰ分析を実施した。このプローブの配列は 以下の通りである。

５’ＡＴＧ　ＡＴｒ　ＡＴｒ　ＧＡＴ　Ｔ（７ＡＡＡ　ＡＣＡ　ＡＣＡ　ＴｒＡ 　ＣＣＡ　ＡＣ，Ａ　ＣＡＴ　ＴＣＡ／ＴＴＴＡ　ＡＴＡ／Ｔ　ＡＡＴ　ＡＣＡ ／Ｔ　ＡＴＡ／Ｔ　ＡＡ３’　（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、Ｉ７）このプローブは５ ２ＡｉＣと命名された。ハイブリッド化バンドはおよそ３．６ｋｂｐのＨｉｎｄ 　ＩＩＩ断片とおよそ８．６ｋｂｐのＥｃｏＲＶ断片を含んでいた。遺伝子ライ ブラリーは部分的に５ａｕ３Ａて消化したＰＳ５２ＡＩ　ＤＮＡから造った０部 分的な制限消化物をアガロースゲル電気泳動で分画した。大きさが６．６〜２３ ｋｂｐのＤＮＡ断片をゲルから切り取り、ゲルスライスから電気溶出し、そして エルチップ−Ｄ　（Ｅｌｕｔｉｐ−Ｄ）イオン交換カラム上で精製した後にエタ ノール沈殿によって回収した。５ａｕ３Ａ挿入物をＢａ＊Ｈ１消化ラムダＧｅ■ −１１（プロメガ）に連結した。朝替えファージをパッケージ化し、そして大腸 菌にＷ２５１纏ＩＩ！！（プロメガ）上にプレートにした。上記の放射能標識化 ５２ＡＩＣオリゴヌクレオチドプローブとハイブリッド化させることによってプ ラークを選別した。ハイブリッド化ファージをプラーク精製し、そして標準手Ｉ ＩＩ（マニアテイス等）でファージＤＮＡを単離するために大＠　＠　ＫＷ２５ １細胞の液体培養基を感染させるために使用した。サブクローニングのためには 調！！量のＤＮＡｆｅＥｃｏＲｌ及び５ａｉｌで消化し、そ１７でアガロースゲ ル上で電気泳動した。毒素遺伝子を含有しているおよそ３．１ｋｂｐバントをゲ ルから切り取り、ゲルスライスから電気溶出し、上記のようにイオン交換クロマ トグラフィーで精製した。精製したＤＮＡ挿入物をＥｃｏＲｌ　＋　５ａｌｌ消 化ｐＨＴＢｌｕｅｌｌ中に連結し・たく大ｉｉ菌／Ｂ、チューリンゲンシスシャ トルヘクターであって、ｐブルースクリプト（ＩｌｌＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）　 Ｓ／に［ストラタジーン］及びレジデントＢ、ｔ、プラスミドからの複製オリジ ン［Ｄ、レレクラス等　＋９８９　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　１． ｅｔｔｅｒｓ　６０：２ｕ＋−２１８１からなる）、連結混合物を凍結したコン ピテントな大ｉｌｌ　８Ｍ５２２ＪＩ胞（ＡＴＣＣ４７０００）を形質転換する のに使用した。形質転換物をアンピシリン、イソプロピル−（β）−〇−チオガ ラクトシド（ｌ　ＰＴＧ）及び５・ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−（β ）−トガラクトシト（ＸＧＡＬ）を含有しているＬＢ寒天上でプレートにした、 プラスミドをアルカリ性溶菌くマニアテス等）により推定上の絹替え物から精製 し、モしてＥｃｏＲｌ及び５ａｔＩ消化物のアガロースゲル上での電気泳動によ って分析した。所望のプラスミド構築物ｐＭＶｃ２３２１は殺ダニ蛋白質をコー ドする他の毒素遺伝子のマツプと比較して新規である毒素遺伝子を含有している 。

プラスミドｐＭＹｃ２３２１をエレクトロポレーションによフて非結晶（Ｃｒｙ −）　ｅ、ｔ、宿主に導入した。およそ５５〜６０ｋＤａの結晶蛋白質の発現が ５ｔ）Ｓ−ＰＡＧＥ分析によって確認された。

実施例５　バシルスチューリンゲンシス菌株ＰＳ６９Ｄｌｂ）らの新規な毒′Ｉ Ｌｔコートしている遺伝子の分子クローニ、≧１ 全繍胞ＤＮＡは実施例３に開示されるようにＰＳ６９Ｄ１　（Ｂ、ｔ。

ＰＳ６９ＤＩ）から造った。　ＲＦＬＰ分析を、ＰＳ６９ＤＩ　ＤＮＡのサザン プロットと、６９１）Ｉ−Ｄと命名される３２ｐＨｌｌ化オリゴヌクレオチドプ ローブとの標準のハイブリッド化によって実施した。６９０ｉＤプローブの配列 は次の通りである。

５’ＡＡＡ　ＣＡＴ　ＡＴＴ　ＡＧＡ　ＴＴＡ　ＧＣＡ　ＣＡＴ　ＡＴＴ　ＴＴ Ｔ　ＧＣＡ　ＡＣＡ　ＣＡＡＡＡ３″（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１８）ハイブリッ ド化バンドはおよそ２．０ｋｂｐの）ｌｉｎｄｌｌｌ断片を含んでいた。

遺伝子ライブラリーは部分的に５ａｕ３Ａで消化したＰ　Ｓ　６９ＤＩ　ＤＮＡ から造られた０部分的な制限消化物をアガロースゲル電気泳動で分画した。大き さが６．６〜２３ｋｂｐのＤＮ＾断片をゲルから切り取り、ゲルスライスから電 気溶出させ、エルチップ−Ｄ　（Ｅｌｕｔｉｐ−Ｄ）イオン交換カラム上で精製 した後にエタノール沈殿によって回収した＊　５ａｕ３＾挿入物をＢａ＠旧−消 化ラムダＧｅ■−１１（ウィスコンシン州マジソンのプロメガＩＩ）中に連結さ せた。絹替えファージをパッケージし、そして大ＩＩＩ　ＫＶ２５１細胞（ウィ スコンシン州マジソンのプロメガ製）上でプレートにした。放射標識化６９０Ｌ Ｄオリゴヌクレオチドプローブとハイブリッド化させることによフてプラークを スクリーニングした。ハイブリッド化ファージをプラークで精製し、そして大腸 菌にＷ２５１細胞の液体培養基を感染させて標準手順（マニアティス等、［＋９ ８２］、モレキュラークローニング；ラボラトリ−マニュアル、ニューヨーク州 コールドスプリングハーバ−）によフてファージＤＮＡを単離するのに使用した 。サブクローニングのためには調製量のＤＮＡをＨｉｎｄｌｌｌで消化しそして アガロースゲル上で電気泳動にかけた。

毒素遺伝子を含有しているおよそ２．０ｋｂｐバンドをゲルから切り取り、ゲル スライスから電気溶離し、上記のようにイオン交換クロマトグラフィーで精製し た。精製したＤＮＡ挿入物をＨｉｎｄｌｌｌ消化ｐＨＴＢＩｕｅｌ　ｌに連結し た（ｐブルースクリプト（ｐＢＩｕｅｓｃｒｉｐｔ）　Ｓ／に（カリフォルニア 州すンディエゴのストラタジーンａ）及びレジデントＢ、ｔ、プラスミドからの 複製起Ｒ（０，レレクラス等［１９８９１ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｌｅ ｔｔ、　６０：２］１２＋８）を含む大腸菌／Ｂ、ｔ、スシャトルベクター）、 連結混合物を凍結したコンピテントな大ＩＩ　Ｍ　ＮＭ５２２細Ｉｌｌ　（ＡＴ ＣＣ４７０００）を形質転換するのに使用した。形質転換物を５−ブロモ−４効 ロロ−３−インドリル−（β）−〇−ガラクトシド（ＸＧＡＬ）を含有している ＬＢ寒天上でプレートにした。プラスミドをアルカリ性溶菌（上記マニアテス等 ）によって推定上の朝替え物から精製し、そしてアガロースゲル上でのＨｉｎｄ ｌｌｌ消化物の電気泳動によって分析した。所望のプラスミド構築物ｐＭＶｃ２ ３１７は殺虫蛋白質をコード化している他の専業遺伝子のマツプと比較して新規 である専業遺伝子を含有している。

ロー例６　Ｂ」、単離体のダニに対する活性本発明の８．チューリンゲンシス単 離体を遠心分離によって濃縮された発酵ブロスの噴霧乾燥粉末として試験した。

水及びバイオマス（胞子、結晶デルタエンドトキシン、細胞破片及び成育培地） からなるペレットを標準のキャリヤー（担体）、防腐剤及び表面活性剤と混合し た。

２５％のバイオマスからなっている粉末をヤマトスプレートライヤーを使用して 造った（日本、東京のヤマトサイエンティフィックカンパニーリミテッドにより 販売されている）。

全てのブロスを幼虫のイエバエ生物検定によってベーター−エンドトキシンの存 在について試験した（キャンベル、Ｄ、Ｐ、、デイエボール、Ｄ、Ｅ、、及びブ ラケット、Ｊ、Ｍ、、１９８７、バシルスチューリンゲンシスのβ−エンドトキ シンに対する急速ＨＰＬＣ検定Ｊ、　Ａｇｒｉｃ、　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｗ、　３ ５：１５６−＋５８）　、β−エンドトキシンがないことが試験された単離体の みがダニに対する検定で使用された。

人工フィーディングアッセイを使用してＢ、チューリンゲンシス単離体を試験し た。噴霧乾燥粉末を５１の１０％蔗糖溶液中に２５ｍ８の粉末を混合することに よって試験用に＊ａｂた。この混合物は懸濁液を生じる為に８公園超音波処理し た。

２１の懸濁液をバラフィルム１ＭＭフィルムボトムを有する金属リングからなる ため（レザボア）中に置いた。

約３０匹のメスのツースポツテッドスパイダーマイト（テトラニチャスウルティ カエ：　Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｕｌｔｉｃａｅ）を含有しているペトリ皿を フィルムムの下側に置いた。ダニを蔗糖溶液上で２４時間食べさせ、そして次に ２０■のフレンチビーンリーフディスク（ディスクあたり２０匹のダニ）に移し た。死亡率を７日後に測定した（表２）、各検定彊３回行なった。

表２　ツースポツテッドスパイダーマイト（テトラニチャスウルティカエ）に対 するバシルスチューリンゲンシス単離体の毒性、死亡率を処置７日後に測定した 。

新規な殺ダニＢ、ｔ、単離体の殺ダニ遺伝子を逆プライマーとしてＳＥＱ　ＩＤ 　Ｎｏ、２１又はＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２０のオリゴヌクレオチドを、そして前 進（ｆｏｒｗａｒｄ）プライマーとして５ＥＱＩＱ　Ｎｏ、ｌ０１ＳＥＱ　１０ 　Ｎｏ、Ｉｌ、ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、１６、そしてＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５のプ ローブＢ　（ＡＡＴ　ＧＡＡ　ＧＴＡ／Ｔ　ＴＡＴ　ＣＣＡ／Ｔ　ＧＴＡ／Ｔ＾ ＡＴ）又はＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１９を使用して、標準のポリメラーゼ鎖反応を 実施することによって菌株のＤＮＡから得ることができる０期待されるＰＣＢ断 片はおよそ３３０〜６００ｂｐ　（いずれかの逆プライマー及びＳＥｏ　１０　 Ｎｏ、ＩＯ）　、１０００〜１４００ｂｐ（いずれかの逆プライマーとＳＥＱ　 １０　Ｎｏ、＋１）及び１８００〜２ｆＯＯｂｐ　（いずれかの逆プライマーと ３つのＮ−末端プライマーＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５　（プローブＢ　）　、ＳＥ Ｑ　１０　Ｎｏ、１６及びＳＥＱ　１０　Ｎｏ、＋９のいずれか）であろう、別 の方法として５ＥＱＩｎ　Ｎｏ、ＩＯによって記載されるブライマーファミリー からのコンブレメントを、ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、１１、ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、１ ６、ＳＥｏ　１０　Ｎｏ、５　（プローブＢ）又はＳＥＱ　１０　Ｎｏ、＋９を 前進（フォーワード）プライマーとする場合の逆プライマーとして使用できる０ 期待されるＰＣＲ断片はＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１の時におよそ６５０〜１ｏｏ ｏｂｐであり、そして（３つのＨ−末端プライマーＳＥ０１０　Ｎｏ、５　（プ ローブＢ　）　、ＳＥＱ　１０　Ｎｏ。

１６及びＳＥＱ　１０　Ｎｏ、＋９については）　１４００〜１８００ｂｐであ ろう。

示された寸法の増幅されたＤＮＡ断片は放射標識され、そして全遺伝子のクロー ニングのためのプローブとして使用できる。

実施例８　ゼネリッタなオリゴヌクレオチドブライマーを使用する新規なダニ活 性遺伝子の　に別のクローニ殺ダニＢ、ｔ、単離体の殺ダニ毒素をコードする遺 伝子の以下の通りのＰＳ５２＾１及びＰＳ６９ＤｌＳ６９Ｄｌ遺伝未配るオリゴ ヌクレオチドを使用して標準のポリメラーゼ鎖反応を実施することによって菌株 のＤ　Ｎ　Ａ　ｂ）ら得ることができる。

１、前進プライマーｒ　ＴＧＡＴＴＴＴ（Ｔ又はＡ）（Ｃ又はＡ）ＴＣＡＡＴＴ ＡＴＡＴ（Ａ又はＧ）Ａ（Ｇ又はＴ）ＧＴＴＴＡＴＪ（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２ ２）はプローブｒ　ＡＡＧＡＧＴＴＡ（Ｃ又はＴ）ＴＡ（Ａ又はＧ）Ａ（Ｇ又は Ａ）ＡＡＡＧＴＡＪ（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２３）　、プローブｒ　ＴＴＡＧＧ ＡＣＣＡＴＴ（Ａ又はＧ）（Ｃ又はＴ）Ｔ（Ｔ又はＡ　）ＧＧＡＴＴＴＧＴＴＧ Ｔ（Ａ又はＴ）ＴＡＴＧＡＡＡＴＪ　（ＳＥＱ　ＩＤＮｏ、２４）、及びプロー ブｒ　ＧＡ（Ｃ又はＴ）ＡＧＡＧＡＴＧＴ（Ａ又はＴ）ＡＡＡＡＴ（Ｃ又はＴ） （Ｔ又はＡ）ＴＡＧＧＡＡＴＧＪ　（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２５）に対し相補的 なプライマーと共に使用することができ、それぞれおよそ４４０．５４０、及び ｅｓｏｂｐの増幅された断片を生しる。

２、前進Ｃ）ｔ−”）−Ｆ＞プライマー　ｒＴＴ（Ａ又はＣ）ＴＴ＾ＡＡ（＾又 はＴ）Ｃ（Ａ又はＴ）ＧＣＴＡＡＴＧＡＴＡＴＴＪ　（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ、２ ６）はＳＥｏ　１０　Ｎｏ、２３、ＳＥＱ　１口Ｎｏ、２４及びＳＥＱ　１０　 Ｎｏ、２５に対し相補的なプライマーと共に使用することができ、それぞれおよ そ３６０．４６０及び５７０ｂｐの増幅された断片を生じる。

３、前進（フォーワード）プライマーＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２３はＳＥＱ　１０ 　Ｎｏ、２４及びＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２５に対し相補的なプライマーと共に使 用してそれぞれおよそ１００及び２１５ｂｐの増幅された断片を生しることがで きる。

示された大きさの増幅されたＤＮＡ断片は放射能標識され、そして全遺伝子をク ローニングするためにプローブとして使用できる。

実施例９　毒素遺伝子の植物への挿入 本発明の１つの面は殺ダニ毒素をコードする遺伝子で植物を形質転換することで ある。形質転換された植物はダニによる攻撃に対し抵抗性である。

殺ダニ毒素に対しコードする本明細書に開示される遺伝子は、この分野で良く知 られた種々の技術を使用して植物細胞中に挿入できる０例えば多数の形質転換さ れた細胞の選択を可能とするマーカー及び大腸菌中の複製系を含んでいるクロー ニングベクターが外来遺伝子をより高等な植物中への挿入の＊ａに人手できる。

そのベクターは例えばｐＢＲ３２２、ｐＵｃ系、旧３ｍｐ系、ｐＡｃＹｃ１Ｂ４ などを含んでいる。従ってＢ、ｔ、毒素をコードする配列は適当な制限位置にお いてベクター中に挿入できる。生じるプラスミドは大腸菌中への形質転換のため に使用される。大腿菌細胞は適当な栄養培地中で培養され、次に収穫されて溶菌 される。プラスミドは回収される。配列分析、制限分析、電気泳動及び他の生化 学−分子生物学的方法は一般に分析の為の方法として実施される。各操作の後、 使用されたＤＮＡ配列は１裂され、そして次のＤＮＡ配列に結合される。各プラ スミド配列は同じか又は他のプラスミドにクローニングできる。植物中に所望の 遺伝子を挿入する方法に依存して他のＤＮＡ配列が必要かもしれない０例えばも しＴ１又はＲｉプラスミドが植物細胞の形質転換に使用される時は、Ｔｉ又はＲ １プラスミドＴ−ＤＮＡの少なくとも右のボーダー、しかししばしば右及び左の ボーダーが、挿入されるべき遺伝子のフランキング領域として結合されなければ ならない。

植物細胞の形質転換のためのＴ−ＤＮＡの使用は広く研究されており、モしてＥ Ｐ１２０５１６　；ホエケマ（１９８５）においてザバイナリー　プラント　ベ クター　システム、オフセットトゥルクケルジ　カンタース（Ｏｆｆｓｅｔ−ｄ ｕｒｋｋｅｒｉｊ　Ｋａｎｔｅｒｓ）　Ｂ、Ｖ、、アルブラッサーダム、チャプ ター５；フラーレー’＠　Ｃｒ１ｔ、　Ｒｅｖ、　Ｐｌａｔ　Ｓｃｉ、　４：ｌ −４６：及びアン等（１９８５）　ＥＭＢＯＪ、　４：２７７−２８７に十分に 記載されている。

挿入されたＤＮＡがゲノムに一旦統合化されれば挿入されたＤＮＡは比較的そこ で安定であり、通常ふたたび出てほこない、これは普通なかでもカナマイシン、 Ｇ４１８、プレオマイシン、ハイグロマイシン又はクロラムフェニコール等の殺 生物剤又は抗生物質に対し抵抗性を形質転換された植物細胞に与える選択マーカ ーを含有している。

独立に使用されたマーカーは従って挿入されたＤＮＡを含有しない細胞ではなく て、形質転換された細胞の選択を可能とする。

ＤＮＡを植物宿主細胞に挿入するために数多くの技術が利用できる。これらの技 術には、形質転換剤としてアグロバクテリウムツメファシェンス又はアグロバク テリウムリゾゲネスを使用するＴ−ＤＮＡでの形質転換、融合、注入又はエレク トロポレーションならびに他の可能な方法が含まれる。形質転換のためにアゲロ バクチリアが使用される時は、挿入されるべきＩ）ＮＡは特別なプラスミド、即 ち中閏体ベクター又はバイナリ−ベクターのいずれかにクローン化されなければ ならない、この中間体ベクターはＴ−ＤＮＡの配列に対し相同性である配列のた めに、相同組替えによってＴｉ又はＲ１プラスミドに統合化できる。

Ｔｉ又はＲ１プラスミドはまたＴ−ＤＮＡを移すのに必要なりｉｒ領領域含んで いる。中間体ベクターはそれら自体でアゲロバクチリア中で複製できない、中閏 体ベクターはヘルパープラスミドによってアグロバクテリウムツメファシェンス 中に移されることができる（コンジュゲーション）。

バイナリ−ベクターは大腸菌中でもアゲロバクチリア中でもそれら自体で複製で きる。これらは選択マーカー遺伝子とリンカ−又はポリリンカーを含んでおり、 これらは右及び左Ｔ−ＤＮＡボーダー領域によりフレームされる。

これらはアゲロバクチリア中に直接形質転換できる（ホルスタ−等［＋９７８］ 　Ｍｏ１．　Ｇｅｎ、　Ｇｅｎｅｔ、　１６３：１８１−１８７）　。

宿主ＩＩ胞として使用するアグロバクテリウムはＶげ領域を持つプラスミドを含 むべきである＊　Ｖｌｒ領域はＴ−ＤＮＡを植物細胞に移すのに必要である。追 加のＴ−ＤＮＡが含まれ得る。そのように形質転換された細菌は植物細胞の形質 転換に使用される。そのＤＮＡを植物細胞に移す為にアグロバクテリウムツメフ ァシェンス又はアグロバクテリウムリゾゲネスと植物外植体（ｅｘｐｌａｎｔ） が培養されるのが有利であり得る。次に、選択のために抗生物質又は殺生物剤を 含み得る適当な培地中で感染した植物物質（例えば葉の切れ端、茎のセグメント 、根のみならず原形質又は整層培養細胞も）から、全体の植物が再生できる。そ のようにして得られたこの植物は次に挿入されたＤＮＡの存在について試験され る。注入及びエレクトロポレーションの場合にはプラスミドに特別な要求がなさ れない。

例えばｐＵｃ誘導体なとの通常のプラスミドの使用が可能である。

形質転換された細胞は通常の方法で植物内で成長する。

これらは性殖繍胞を形成でき、そして子孫植物に対し形質転換された性質（群） を伝達する。そのような植物は通常の方法で成育てき、そして同じ形質転換され た遺伝因子又は他の遺伝因子を有する植物と交配できる。生じる雑種個体は対応 する表現型性貢を有する。

実施例１Ｏバシルスチューリンゲンシス遺伝子のバクロウィルスへのクローニン グ 本明細嘗て開示する殺虫毒素をコートする遺伝子はオートグラファカリフォルニ カ核多角体病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）などのバクロウィルス中にクローン化でき る。　ｐＵｃ８等の市販のクローニングベクター中にクローン化されたＡｃＮＰ Ｖゲノムを含有するプラスミドを造ることができる。

ＡｃＮＰνゲノムは、ポリヘトリン遺伝子のコード化領域が除去され、パラセン ジャー（乗客）遺伝子のための独特のクローニング位置がポリヘトリンプロモー ターのすぐ後に置かれるように変更される。そのようなベクターの例はペノック 等（ベノック、　Ｇ、Ｄ、、シューメーカー、ｃ。

及びミラー、　Ｌ、に、　［１９８４］　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　 ４：３９９−４０６）により記載されたｐＧＰ−８６８７４及びスミス等（スミ ス。

Ｇ、Ｅ、、サマース、　Ｍ、Ｄ、及びフレーザー、　Ｍ、Ｊ、　［＋９８３］　 Ｍｏｆ、　Ｃｅ１１．　Ｒｉｏｔ、　３：２１５６−２１６５）により記載され たｐＡＣ３８０である。本発明の蛋白毒素をコートする遺伝子はそのコート化領 域の上流及び下流の両方の適当な領域においてＢｉｏｌ　ｌリンカ−で修飾でき 、モしてＡｃＮＰＶベクターの１つのパラセンジャー位置に挿入できる。

本明纏嘗に記載された実施例と具体例は説明目的のみの為であり、それに照して 種々の変更又は修飾が当業者に示唆でき、そして添付の特許請求の範囲及び本願 の精神と範囲の中に含まれるものである。

配列表 （＋）一般的情報 （ｉ）出願人：ベイン、ジェウェル　エム。

キャノン、レイモンド　ジェー、シー。

バグレイ、アンシェラ　エル。

（目）発明の名称：ダニを抑制する新規なバシルスチューリンゲンシス単離体 （目１）配列数：３０ （１ν）連絡先 （Ａ）　宛先：デビソド・アール・サリワンチック（Ｂ）　街路：　２４２Ｉ　 Ｎ、Ｗ、４１ストリート、　Ａ−１号（Ｃ）　市：ゲインズビル （Ｄ）　川：フロツク （Ｅ）　国：アメリカ合衆国 （Ｆ）　郵匣番号：　３２６０６ （〜）コンピューター読取り形式 （Ａ）　媒体タイプ：フロッピーディスク（８）　コンピューター：　ＩＢＮ　 ＰＣ互換型（Ｃ）Ｏ５：ＰＣ−００５／ＦＩＳ−００５（Ｄ）　ソフトウＩ７’ ：Ｐａｔｅｎｌｒ＋　Ｒｅ１ｅａｓｅ　Ｉｌ、Ｏ，Ｖｅｒ、１１．２５（νｉ） 　ＦＪ［在の出願データ （Ａ）　出願番号：ＵＳ （Ｂ）　出願口： （Ｃ）　分類： （ν山）弁理士／代理人情報 （Ａ）　名前：サリワンチック、デビット　アール。

（Ｂ）　登録番号：　３１．７９４ （Ｃ）　参照／ドケット番号：Ｍ／Ｓ　１０４（１＼）テレ通信情報 （Ａ）　電話：　（９０４）　３７５−８１００（Ｂ）　ＦＡχ　：　（９０４ ）　３７２−５８００（２）　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：Ｉに間する情報（ｉ）配列 特性 （Ａ）　長さ：４１５５塩基対 （Ｂ）　タイプ：１＊酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （０）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（ゲノミツク）（ｉｉｉ）ＶＸ定的か？：否 （ｔｖ）アシチセンス？：百 （〜１）オリジナル給源 （Ａ）　生ｔｙＪ：バシルス　チューリンゲンシス（Ｂ）　菌株：ＰＳ１７ ＜ｃ＞　ｉｔｉ別的単社体：ＰＳ１７ａ（ｖｉｉ）直近給源 （Ｂ）　クローン：大１１Ｍ（Ｅ、ｃｏｌｉ）　８Ｍ５２２（ｐＭＹｃ　１６２ ７）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８６５１ （買１）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１：イコ７ｉ〜ＭＫＩＧ　ＧＡａ ：１ＡＴＣＦｋ　ＴＡＣＧＡ（？Ａ費ＴＡ’ｌ’ａＴＧＧＡＡ　ＡＡＣＴＴＧＡ ＦＩＡＣＴＧＧＧＡｆｆｌ”ｒ@２４６０ ＡＴＧＡＡＣＡＡ（Ｊ　ＡＴＣＪＩＡ　４１５５（２）　ＳＥＱ　１０１ｉｏ： ２に関する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：１３Ｂ５１１のアミノ酸（Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （０）トポロジー：線形 （西）分子タイプ：蛋白質 （ｉ口）Ｖｉ定的か？　：　Ｙ　ｅ　５（ｉｖ）アンチセンス？二Ｎ０ （Ｖｌ）オリジナル給源 （＾）生＊：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　Ｍ別的単離体：ＰＳ１７ （シロ）直近給源 （Ｂ）　クローン：大腸菌（Ｅ、ｃｏｌ　ｉ）　ＮＭ５２２（ｐＭＹｃ　１６２ ７）　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８６５１ （覧１）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＱ：２　：Ｍｅ　ＪＬｌａ　ＸＬ＠Ｌ ｅａ＾−Ｑ　Ｇｌ■薊Ｔ’ｙｒ　ｐｒｏ　ｓｓｒ　Ｖａｔ　１？Ｉ：Ｇ３　Ｔｉ ｔ　Ｍｎ　Ｖａ■薊１　、　５　ｉｏ　１ｓ ＾１ａ　Ｔｙｒτｈｒ　Ｐｒｏ　ｉ’ｒｏ　Ｂａｔ　Ｐｈｓ　Ｉａｕ　Ｐｒｏ　 ｊｌｕｉｐ　Ａｌａ　Ｇｌｒｉｈｒ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｔｈ■ Ｐｒｏ　Ｊｕｇ　Ａｓｐ　ＴＪｕＴｈｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　ＧＡｕ　Ｇｉｎ　論 Ｌｅｕ　ＬＹ＠　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ（、ｌｙ　４Ｐ　Ａａｎ　Ａ ｌａ　ｃｒｙ　丁ｈｒ　Ｔｉｒ　Ｓｗ　Ｌｙｅ　Ｕａ　Ｘｉｓ　Ａ占ａ＾ｓｐ　 Ｖａｔ　Ｌａｕ　ＬｙｓＧｌｙ　Ｈｌｓ　Ｐｈｓ工ｌｅ　Ａｓｐ　Ａｇｐ　Ｔｌ ｕ−工１・λ＠１１　？Ｙ！”　（４五ｎτｈｒ　Ｔｙｘ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　ｊ ＰＧｌｙ　Ｌａｕ　Ｂａｒ　Ｌａｕ　ＢＬｓ　Ｔｋｓｒ　Ｌａｕ　Ａｌｍ　Ｖｍ ｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＩＩｓ　Ｇｌｙ　Ｘｉｓ　Ｐｈ・翫２′。Ｉｌｈ＠Ｘｉ＠ ？ＡＭ　ＩＪｕ　Ｐｈ＠Ｐｈｅ　Ａｌａ　ＡＡＨＬ＠ＬＩ　Ｆｉｎｎ　Ｌｙｓ　 Ｈｌｓ　ｆｆ１１ｇ　Ａｌａ　Ｐｒ。

Ｐｒｏ　Ｐｆｏ￥ｒｅ　Ａｓｎ　Ｊｕａ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｘ’＃ｍ　Ｐｈｅ　 ａｌｕ　Ａｌａ　）Ｅａｔ　ＬＮ＊　Ｐｒｏ　ＡＬａ　ＢＬ■ Ｇｉｎ　（ｌｕ　Ｍｅｔ　Ｘｉｓ　Ａｇｐ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌ４Ｉｕ　丁ｈｒ 　Ｊｕａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　ｏｚｎ　Ｔｂｒ　ｔｈｅ　ｔａ■ ｘｓｎ　ＧＬ７　Ｇｌｕ　１１＠　Ｓｅｘ：　（ｉｇ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　ｘｓｎ 　Ｌｓｕ↑４ａ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　ＳａｇＴｈｒ　Ｂａｔ　Ａ ｊｐ　Ａｍｐ　Ｍ社Ｇｉｎ　５＠ｒ　ＢＬｓ　Ｇｌｙ　淋Ｐｈｓ　Ａｓｎ　Ｌｙ ｓ　Ｖａｌ　ＡｓＷ　５ｇ５ｒ：Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｘｉ＠ＬＸｇ　Ｌｙｓ　Ｐｈ ＠Ｔｈｒ　ＪＬｓ＋ｐ　宙Ｖａｌ　Ｌｅ＋ａ　ｇｅｒ　Ｌｅｕ　Ａ８　Ｓｍ　Ｐ ｈａ？ｙｒ　Ｔｈｒ　ＡＳＷ　Ａｒｇ　Ｌａｕ　ｐｒｏ　ＶＪＬｌ　Ｐ８＠　Ｉ ｌｅ　丁ｈｒ　ｕｐ　ｕｎ　ＴＰ　Ａｌｅ　Ａｓｐ　Ａｒｇ！ｈｒ　Ｌｅｇ　Ｔ ｍｕ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　■Ｔ’ｙｒ　Ａｌａ　ＢＬｓ　Ｌａｕ　Ａｉｇ 　Ｂｙ　Ｍａｔ　ｒｕｍ　ＬｍＭｅｔ　ＩＪｕＬｅｕ　Ａｒｇ　ＪＬｓｐ　ｊｊ ｅ　ＢＬｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＴＭτｒｐ　Ａｍｐ　５ｓｒ　 Ｔ、ｙ。

Ｘ１＊　Ａｓｎ　Ｐｈｓ丁’ｈｒ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｊｕａ　Ｉｌｅ　ＪＬｓｐ 　Ｓｓｒ　Ｐｂｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｘ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｌｙ■ Ａｊｎ　Ａｓｎ工ｌ＠　”ｘｇ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｉ ｌｅ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｐｈ会Ｇｉｎ　ＬｙｅＧｌｙシｍ　Ａｌａ　５ ＠ｔ″ｒＹｒＧｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　５ｔａｙ：　ＪＬｓｐ　ＩＪｕ　Ｇｌｕ 　Ｓｉｒ　Ｐｂｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ２７５　２８０　２Ｅ＋５ Ｌｙｓ　Ｇ１８Ｌｙｅ　ＴＹｒ　Ｘｌ、＊　Ｇｌｕ　ｘｉ”　Ｍｔ　Ｔｈｒ　Ｔ ｈｒ　ｌ１ｌｓ　Ｃｇｇ　Ｌａｕ　Ａｍｐ　Ｐｈｓ　ＡｌａＭ　Ｌａｕ　Ｐｈ＠ Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ａｊｐ　Ｐｒｏ　Ａｍｐ　１Ｔ￥　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　 Ｇｌｙ　欺”ｇＪｖｓｐ　ＢＬｓ　Ｓ＠ｒシｙ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓτｈｒ　Ａｒｇ 　Ａｒｇ　ＩＩｓシ＋ｕ　８ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｐｂｓ　ＢＬｓ　Ｐｒ。

１１＠　ＩＩＬｇ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ＪＬｓｐ　Ｇｌｙ　Ｌｓｕ　Ｔｈｒ　Ｌａ ｕ　ｕｎ　ＪＬｇｎτｈｒ　Ｂａｒ　Ｅｌｓ　Ａｓｐ　Ｔｂ■ Ｓ＠ｒ　Ａｊｎ　Ｎｒ￥　Ｐｒｏ　Ａｊｎ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ａｍｎ　Ｇｌｙ　 ｕｎ　Ｇｌｙ　Ｊｕａ　Ｎｈｓ　ｉ’ｒｏ　ｕｎ　Ｐｒ。

Ｌｙｓ　ＧＬｕ　Ａｒｇ工ｌ＠　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｌ ａｕ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｓ＠ｅτｒｐ　Ａｒｇ　ＪｕａＯＡＮ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ 　Ｇｌｙ、Ｇｌｙ　ＩＪｕ　ｒ、＠ｕ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｑｒ　Ｌａｕ　Ｔｔｐ 　Ａｌａ　ＩＩｓ　ＧＬｕ　ＶＩＡＧｉｎ　Ａｓｐ　Ｓｉｒ　Ｖａｌ　ＧＡｕτ ｈｒ　Ａｒｇ　Ｉａｕ　Ｔｙｒ　Ｇｉｇ　Ｇｉｎ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｖ ａｌ　ＡｓｐＰｒｏ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｊｇ　Ｐｒｏ　Ａｊｎ　Ｔｙｒ　Ｖａ ｌ　Ｆ　Ｉｌａ　Ａｓｐ　Ｐｌｅａｔ　ｓａｒ　七８　Ｐｒｏ　ＸＬ＠ｘ１ｍ　 Ｇｉｎ　Ｈｅ　Ａ−ｓｎ　Ｍａｔ　Ａｍｐ　Ｔｈｒ　′ｉ４ｒｇ　Ｌｙｓ　Ｔｈ ｘ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｂ■ Ｇｌｙ　Ｔｒｇ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ｕｕ　Ｍｅｔ　Ａｒｇｏｌｙ　Ｓａ ｙ：　Ｖａｌ　：ｅｇ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｂａｔ　ｔｈｅＬｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｒ ｇ　Ａｓｐ　Ｇａｙ　Ｔ９ｊＳ　Ａｒｇ　Ｌａｕ　Ｂａｒ　Ａｌａ　”ｒ　Ｍｅ ｔ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　溜Ａｌａ　Ａｊｐ　Ｔｋｓｒ　Ｅｌｓ　ｍ　！； ＠ｘ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｘ８Ｋ　ｌ１ｉｓ　Ｔｙｒ　−ｕ　５＊ｍ　Ｌ ｅｕ？ｙ−ｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｔｈｘ　Ｓｅｘ：　 ％Ｊ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｓｉｒ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　ＶａＬ　Ｇｌ■ Ｊｕａ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　ｕｎ　ｌ１ａ５工５　５２０　５２ ５ ｘ１ｍ　ＧＬＫ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　ＩＬｓｐ　Ｇｌｕ　Ｇｊｎ　Ｇｌｙ　Ａｇｎ 　Ｖａｌ　１９ｅｒτｈｒ　Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｐｈｓ　石Ｐｈａ　Ｇｌｕ　Ｌｙ ｓ　Ａｌａ　Ｂａｔ　鏡Ｇｌｙ　ＧＬｙ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　田”　Ｌｙｓ　Ｇｌ ｕ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ａｍ８Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｊｎ　Ａｌａ　Ｍａｔ　Ｌｙｓ 　Ｌａｕ　Ｂａｒ　Ｐｒｏ　ＧＪ　Ｇｉｎ　Ｓｅｘ　Ｅｌｓ　Ｇｌｙ　基Ｐｒ。

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Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　入１ａ　Ａｒｇ　Ａｍｎ　τｒｐｗ　丁ｈｒ 　ＧＬｕ　Ｔｙｔ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ｌｒｇ１０４！＄　−１０５０１ ｏｓｓ Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　５ａｒ　−ｕ　Ｘ】、＊　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　 Ｖａｌ　ＸＬｏ　Ｊｌａｎ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　ｌｓｎ　Ｇｌ■ ′１π箇、′。Ｇｌｙ　ｕｎ　Ｔｒｐ　ＡｇＨ，Ｇｌｙ　ｆｌａｘ　Ｘｌｓ　ｈ ｘｑ　Ｅｊｍｘ５ｋｔｐ　Ｘｌｓ　ｊａｒ？ｙｒ　ｃｌｎ　ｋｊｎ　Ｉｌｅ　Ａ ｊＰ　Ｊｕａ　Ｈｌｓ　ＶａｌＡｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　−ｕ　Ｐｒｏ　ＬＦ　 Ｉａｕ　Ａｒｇ１０９０　１０９５　１ｌ１０ ０ＢＬ　Ｔｒｐ　Ｐｈｅ　Ｍｔ　Ｓａｇ　Ｍ￥、ｈｘｑ　Ｐｈｓ　８ｓｒ　ＧＬ ｕ　Ｇｉｎ、Ｇｌｙ　Ａｓｐ　ＸＬｏ）Ｌｅｔ　Ｉｇｇ。

Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　ＧＬｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａ、Ｉａｕ　Ａｊｎ　Ａｒｇ　Ａｉｍ　 ￥、Ａｌａ　Ｇｌｓ　Ｘａｕ　ＧＬｕ　雷、ｂａτｈｒ　Ｌａｕ　Ｌｓｕ　１ｉ ｄｓ　ｋｌｎ　Ｇｌｙ　ＨＬｓ　Ｐｈｅ　丁ｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　為 １ａ　ｈａｔｓ　τｒｐτｈ■ １工４０　１１４５　１１５０ Ｖａｌ　ＧＬｕ　Ｇ１１５Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｈｌｓ　Ｇｉｎ￥ａｉ、Ｖａｌ　Ｌ ａｕ　Ｇｌｕ　Ｊｎｐ　ＧｉｂＬｙｓ　Ａｒｇ　ＶａｌＩａｕ　ｉｇ。ｔａｕ　 ｐｒ。Ａｓｐ　Ｔｒｐ　轡、ｆｌａｘ　ｊａｒ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　？”ｏ伽！ｉ ｓ　ａｌｕ　ＸＬ・Ｇ１１５Ａｓｐ　Ｐｈ＠ｊｎｐ　Ｐｒｏ　Ｍ０ＬＹ＊　Ｇｌ ｕ　箪Ｇｉｎ　賀ｕ５Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｈｌｓ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ。

Ｇｌｙ　ＧＬｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＶｆｆＡ、Ｔｈｒ　Ｌｍ　Ｇｌｕ　Ｈｌｓ　 Ｇｊ（。ｃｌｕ　（ｉｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　’ｑｒ、！１■ Ｇｌｕτｈｒ　Ｉｒ１ｓ　Ｔｈｒ　Ｈｌｓ　！ｉｉｍ　Ｐｈｅ　Ｊｕａ　Ａｓｎ 　ｔｈｅ　Ｔｈｅ　Ｔｈｅ　Ｓｗ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇ１ｎＧｌｙ　′ｕＴＭ、 Ｐｈ＠Ｇｌｕ　１ｉａｒ　Ａｊｎ　Ｌ５２゜Ｖａｌ　Ｔｈｒ　ＶａＬ　Ｔｈｒ　 ！ｉ２．ｌ＊ｒ　８°１１８椰Ｇ胤Ｇｌｕ　Ｐｈ＠Ｗｕ　Ｖａｌ　Ａｓｇ、Ｉｎ ｎ　Ｚｌｅ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　￥髭。Ｇｌｕ　Ｊｕａ　Ｐｒｏ　ＬｅｕＰｒｏ　 Ｔ−Ａｍｐ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　ｇｓｒ　（：ｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｍｎτｈ ｒ　ｊｕａ　１ｉａｒ　Ｓ＠Ｊ？　艷Ａｓｎ１２６５　工２７０　１２］５　１ ２８０Ｓ＠ｒ　ＪＬｓｐ　Ｔｈｒ　Ｓａｇ　Ｍｅｔ　ｊＬｓｎ　Ａｓｎ　Ａｓｎ 　Ｇｉｎ（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５に間する情報（１）配列特性 （Ｕ　長さ：　３７７１塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 ＜Ｃ＞　鎮：２本鎖 （Ｄ）トボロノー二線形 （１１）分子タイプ：　Ｄ　Ｎ　Ａ　（ケノミソク）（ｉｉｉ）仮定的か？：否 （１ν）アンチセンス？二百 （νＩ）オリジナル給源 （Ａ）　生物：ハシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：３３ｆ２ （ν１１）直近給源 （Ｂ）　クローン：大腸菌（Ｅ、ｃｏｌｉ）　ＮＭ５２２（ｐＭＹｃ　２＋６） 　Ｂ−１８７８５ （ＩＸ）特徴 （Ａ）　名前／キー：　１ｓｃ　特徴 （Ｂ）　位置：　４．．２４ （Ｄ）　Ｉｔ！！の情報： ／機能：゛オリゴヌクしオチトハイプリダイ七−ションブローブ°゛ ／生成物＝″ＧＣＡ／Ｔ　ＡＣＡ／Ｔ　ＴＴＡ　ＡＡＴ　ＧＡＡ　ＧＴＡ／Ｔ　 ＴＡＴ”／標準名＝“プローブ　ａ” ／ノートコ”プローブ　Ａ゛ （１＼）特徴 （Ａ）　名前／キー：　＋ａｉｓｃ　特徴（８）　泣ｆｆｉ　：　１３．．３３ （［１）　池の情報： ／＠能：″オリプヌクレオチドノ１イブＩＪダイゼーションブローブ°゛ ／生成物＝″ＡＡＴ　Ｇ４Ａ　ＧＴＡ／Ｔ　ＴＪＴ　ＣＣＡ／Ｔ　ＧＴＡ／Ｔ　 ＡＡＴ’／標準名＝”プローブ　Ｂ″ ／ラベル二″ブローブーｂ” ／ノートコ１プローブ　ｂ″′ （Ｘ審）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＱ　ＮＯ：５　：’Ｉ’ＣＡＴＩＣ？Ａｒａ ＷＡＡＣＩＷＩＣＡＣＴＯＡＴＡＴＡＧＣＣＦｋＴＡＴＡＣＪｋｍＡ　１９８０ ？（ＪＴＡ？ＡＣＡＡ　ＧＴＣＡＧＧＧＡＡＧ　テＴＪｌｉ？ＣＣＡｅ＾ｅ　ｋ ｋＴＴ〒入ＴＴＡＡ　ＴτＡＡＴ？ＴＡＴＴ　ＴＣＡＴＣＣIＴＡＣＡ　２０４ ０ （２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：１４２５塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２零値 （Ｄ）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（ゲノミック）（ｉｉｉ）Ｖｉ定的か？：否 （１ｖ）アンチセンスフ：否 （ｖｉ）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　Ｍ別的単離体：ＰＳ５２ Ａ１ （νｉｉ）直近給源 （Ｂ）　クローン二人［１ｉ（Ｅ、ｃｏ日）　８Ｍ５２２（ｐＭＹＣ２３２１） 　Ｂ−１８７７０ （１ｘ）特徴 （Ａ）　名前／キー：　ｍａｔペプチド（Ｂ）　直置：　１．、！４２５ （０）　他の情報： ／生成物二″−人前の蛋白質のオーブンリーディングフレーム” （ｘｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：６　：ＡＴＱＡＴ’ＴＡＴ！’Ｇ 　ＡＴＡＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣ？Ｔ’Ｔ入ｃｃｒ　λＧλＣ＾ＴＴＣＡＣτＴ入 ＴＴｃ＾τ＾ＣＡＡＴτ八入入へ戟HＡ　６０ （２）　ＳＥＱ　ＩＩ）　ＮＯニア　（ＰＳ５２ＡＩ）に間する情報（ｉ）配列 特性 （Ａ）　長さ：４７５個のアミノ酸 （Ｄ）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （１０）仮定的か？：Ｙｅｓ （ｉｖ）アンチセンス？：Ｎ０ （ｖｌ）オリジナル給源 （Ａ）　生ＰＩ：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：ＰＳ５ ２Ａ！ （ｖｉｉ）直近給源 （Ｂ）　クローン：大Ｉ＆Ｉ菌（ε、ｃｏｌｉ）　８Ｍ５２２（ｐＭＹｃ　２３ ２１）　Ｂ−１８７７０ （ｉｘ）特徴 （Ａ）　名前／キー：蛋白質 （８）泣ｉｔ　：　１．．４７５ （買ｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　）ｌｏニア：ｕａセ　Ｏｌａ　ＸＬｍ　 Ａｊｙ　Ｓａｔ　Ｌｙｅ　Ｔｈｅ　Ｔｂｒ　Ｌａｕ　Ｐｒｃ＋　ｋｇ　１１１ｍ 　ｌｈａｗ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　１浮■ １　５　１０　ｉｓ ？ｈｒ　Ｏｌａ　ＬｙｌＩ　Ｌｅｕ　ｋｓｎ　ｌｉ＠ｒ　Ａａｎ　Ｌｙｓ　Ｌｉ −Ｔｙｔ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　）、ｊｐ　Ｉｋｔ　τ■■ ｋｊｎ　ＧＬｙ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｐｈｓ　Ｘ１ｍ工Ｌ＠しＢａＫ　Ｌｙｓ　Ｇ ｉｎ　Ｇｌｕτｒｐ　Ａｌａτｈｒ　Ｏｌａ　ＧｌｙＪｕ＆昂τ工ｚ＊　Ｇｉｎ 　ＴｂＪ″Ｇｌｙ　ｒｕ　１ｆｆｌｙ　Ｌａｕ　ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ａｇｎ　Ｇｌ ｕ　ｃｌａ　Ｇｉｎ　ＬｅｕＡｒｇ　Ｔｈｒ　Ｈｌｍ　Ｖａｌ　Ａａｎ　Ｌｒ　 Ｓａｔ　Ｇｉｎ　ｈｓｐ　Ｏｌａ　平Ｘ）ｅ　Ｐｒｏ　Ｓａｇ　Ａｓｐ　Ｐｇ＠ ５＠ｒ　Ｇｉｎ　ｋｕ　Ｔｙｔ　Ａｓｐ　Ｍａｌ　Ｔｙｘ　Ｃｙｓ　Ｓｅｘ　Ａ Ｑ　ＬＹＩＩ　Ｔｂｒ　Ｂａｒ　Ａｌａ　Ｇ４ｕ　”ｔｒｇ{ Ｔｒｐ　Ａｊ！Ｉ　ＬＹ＠　）Ａａｎ　１芋Ｐｒｏ　諏工ｉｓエエ・Ｌｙｓ　Ｉ Ｅ＊ｔ　Ｊｕａ　Ａａｎ　ＭＷ　ＸＬ・Ｚｏｏ　１０５　１１０ ｈｌ＆　Ｓａｔ　ＴＴｇ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｌｙｅ　Ｖａｌ　准Ｇｌｙ　Ａｍｐ 　Ｐｒｏ　Ｓ＠ｊ？　”ｊｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｅ　ＡｓｇＧｌｙ　刊ｔｈ＠Ｌｙｓ 　ＬｙＩＩＬ＊ｕ　Ｇｉｎ　Ａｔｐ　Ｇｌｕ　ｕｕ　Ａｓｐ　ｍ３１１ｇａ　Ｍ ａｌ　Ａｓｐ　）ｕｎｘｓｎ　ｇｓｒ　Ａｓｐ　Ａｊｐ　御Ｊｋｌａ　’Ｘ’Ｌ ＠　Ａｌａ　Ｌｙｅ　ＪＬｌａ　ＸＬ・Ｌｙｓ　柳ｐｈ・Ｌｙｓ　Ａｌ５ＬＡｒ ｇ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｏｌａ　ＸｊＨＸ１ｍ　Ｉ、ｙｓ　Ｇｌｕ　ｕａ　ＬＴ８ 　Ｇｌｓ　Ｔｙｔ　ＧＬｕ　Ｇｌｕ　Ｆ、ＨＡｌｍＬｙｅ　Ａｓｎ　！ｉ＠Ｖｊ ｔＡ　Ｔｈｒ　Ｓａｔ　Ｘａｎｘ　Ａｓｐ　ＧＡｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　ＨＬｍ　 ＧＬｙ　ｌａｇ°’Ｊｘ　Ｌｙ■ Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｑ４ｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　！Ｉ＠Ａｓｎ　Ｔ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ 　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　”乱Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ＧＬｎＴｈｒ　ＪＬｌａ　Ｌａｕ　Ａ ｊｎ　Ｇｉｎ　Ｊｕａ　Ｂ工＃　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　ＢａＫ　１１＠ｒ　ｐｒｏ　 尼ａ　ｉｉ廖Ａｙｓ　ＧｌｕＦ　ｒ、＠ｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｅ　ｖａｌ　ＬＮｇ　 Ａｇｏ　Ｔ、ａｓ　Ｌｙｓ　’ｎｕ：　ＴＦ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ 　ＡｌｍＬｙｅ　ＡＩＪ′Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　１ｆｌＮ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ 　Ｌｙｓ　ＶＩＡ　Ｏｌｕ　Ｔｙｔ　ｇ−）ｈａ　ｍ　ＬｔｕＧ１７　ｐｒｏ　 ′ｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅｖａｘ　Ｖａｌ　ｑｒ　ａｚｕ　ｘｌ＊　ｋｕ　 Ｏｌａ　Ｍ　Ｔｂｒ　Ａ１ｍｖａｌ　Ｇｉｎ　！！ｉｓ　）Ｌｍ　Ｌｙｓ　Ａｍ 　ＧＬｎ　Ｉ）ａ　ＪＬｇｐ　Ｇｌｕ　Ｘ１ｅａ　Ｌｙｓ　Ｌ’ｓ　Ｇｉｎ　Ｉ ａｕ　ｋ狽■ ｇ＠ｒ　ＡＭｇ　Ｇｉｎ　Ｉｔｓ　Ａｓｐ　Ｌｓｉｕ　Ｍｙ　Ａｒｇ　３１＠Ｐ 　Ｖｓｉｌ　Ｌｙｅ　＋Ａ３ＡＬａ　Ｇａｙ　Ｈａｔ　Ｌｓ■ Ａｓｒｘ　Ｂａｒ　ＡＬａｋｓｎ　Ｔｈｒ　Ｍ　ＩＩ、＊　Ａｍｐ　ｕｎ　Ｉａ ｕ　￥　！Ｉｓｒ　Ｇｉｎ　ＧＬｙ　Ｇｉｎ　ＧｉｇＡｌａ　Ｘｌ、＊　ＬＹｍ 　ＶａＬ　宙　Ｇｉｎ　ＬＹｍ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　ＯｊＸ　ＡＬａ　丁ｒｐ　Ａ ｌａ　Ｔｈｒ　Ｓ１ｍ　ＧｌｙＡｌａ　Ｇｉｎ工工＠　Ｇｌｕ　ｈｓｒｓ　Ｌａ ｕＡｒｇ　Ｔｈｒ　’ｎｗ　５＊ｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ ＾１ｐＢａｒ術髭ｇ１１１“ｐ　Ｇｌｕ　Ｘｌ＋＋＋　（５ゑｇ　Ｅｌｓ　Ｇｌ ｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ｉｌｌ　Ａｌａ　ｌｉ“ｒ　ＪＩＪｐＡｌａ　Ｔｒｇ　Ｌ ″ｕＶａｌ　Ｖａｌ　Ｊｕａ　針ｎ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ 　Ｔｈｚ　Ｉａｕ　Ｊｕｎ　Ａ１ｍπＫ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ“１６１ル８°１７１ ０１２１１鍔“ｎ　Ｖａｌ　Ｘ１＊　Ｓｗ嚢詔Ｓｉｒ　Ｃｙｓ　ｈｓｎ　ｃｙｓ 　ｇｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　＾ｊｌｌ　Ｍｔ　テｈｒ　Ｂａｒ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ 　丁ｙｒ　Ｓａｗ　ＡｓｎＰｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　３４＠Ｐ　ＴＭ　 Ｓａｔ　Ｍｃ＋　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｍｅｔ工ｌ＠　Ｂａｒ　１ｒｉｓ　Ｇｌｕ　 ＴｙｒＴｈｒ　Ｓ＠Ｉｒ　ＬＭｕ　Ｐｒｏ　Ａｊｎ　Ｍｎ　Ｐｈａ　ＭＩＮ：　 Ｌａｕ　５ｅｒ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　８ｅｒ　Ｊｖｓｎ　Ｔａａｕ　fｌｕ ？ｙ！−龍ｇ　ＣＹＩＩ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　七ｇ　Ｐｈｅ　）Ｍａｔ　 Ｘ１＊　ｆｆπＴ詔？ｙｒ　Ａｓｒｘ　Ａｍｎ　Ｉ！ａｒＡｓ（Ｔｒｐ　、Ｔ’ ｙｒ　Ａｓｎ　ＪＬｓｎ　：Ｓｅｒ　Ａｍｐ　Ｔｒｐ　乍ｈ＃Ｑ　Ａｓｎ（２） 　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：１１８５塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （Ｄ）トポロジー二線形 （ＩＩ）分子タイプ：　Ｄ　Ｎ　Ａ　（ゲノミ・ンク）（ｉｉｉ）仮定的か？： 否 （１ｖ）アンチセンス？：否 （ｖｌ）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チュー１ノンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：ＰＳ１ ３９Ｄ１（ｖｉｉ）直近給源 （Ａ）　名前／キー：　ｍａｔペプチド（Ｂ）　位置：　１．、＋１８５ （ｘｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８　：（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：９に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：３９５ｇのアミ７°＝ （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （０）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （ｉｉｉ）Ｖｉ定的か？　：　”１’　ｅ　５（１ｖ）アンチセンス？：Ｎ０ （ｖｌ）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：ＰＳ６９ Ｄ１ （〜１１）直近給源 （Ｂ）　クローン二人ｉｉｇぐＥ、ｃｏｌｉ）　ＮＭ５２２（ｐＭＹｃ　２３（ Ａ）名前／キー：蛋白質 （Ｂ）　位置：　１．．３９５ （ｘｉ）　ｉｉ！列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：９　：Ｍａｔ　Ｚｌｅ　Ｌ ａｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｌｙｅ　Ｔｈｒ　−ａｒｏ　Ｌｙｓ　１ｌｉｓ 工１＠　Ａｒｇ　Ｗｕ　Ｊｌｌｍｌ　５　１０ ！！ｉｓ工ｉｓ　Ｐｈｅ　Ａｌａτｈｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｓｅｘ　ｇｓｒ　Ａ ｌａ　Ｌｙｓ　Ｌｙｅ　Ａｍｐ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　ＬＭｕＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｕ　Ｇａｙ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｌｇｓ　Ａｊｐ　Ｇｌｙ　Ｐｈ＠Ｉｌｅ 　ｉｉｅ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　ＧｌｕＧｌｕτＰ　Ａｌａ　Ｐｈ＠Ｖａｌ　Ｇｉｎ 　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＧＡｙ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｓａ 　Ｐｒ。

Ｉｊｅ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ａｊｐ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　ｌ１１ｍ 　ＶａＬ　Ｇｌｙ　ｕｕ　Ｐｒｏ　Ｓ・ｘ　Ａｒｇ　ＡＡ・Ｇｉｎｉｉｅ　Ｐｒ ｏ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｐｈ＠Ａｆｉｎ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　ｌｘ　Ｌｙｓ　Ｍａｌ 　Ｔｙｒ　Ａｊｎ　Ｇｌｕ　ＪｌｕｐＬｙｓ　ｌ１ｌｓ　Ｌｅｕ　Ｃ’１．８　 Ｂａｒ　Ｔｒｐ　Ｔｒｐ　Ａｓｎ　？ＡＭ　Ｐｈａ　−ｕ　Ｐｈｓ　Ｐｒｏ　Ｉ ａｕ　Ｖａｎ　Ｌ■■ Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ＪＬｓｎ　Ａｓｐ　ｌｅ　ｓａｒ　Ｍ８　Ｔｙｒ　Ｇ ｌｙ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　溌Ａｌａ　Ｇｌｙ　ＬｙｓＱＬｙ　１１８τｈｒ　Ｌｙ ｓ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　ＴＨｒ　ＧＬｕ　Ｖａｌ　Ｍａｔ　Ｇｉｎ　Ｍ　Ａｓｐ　 Ｖａｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ１ｉＨｇｅｒ　Ａｓｐ　Ａｊｎ　Ｇｌｙ　Ｒｇ　Ｊｖｓ ｐ　ＬＹＩＩ　Ｖａｌ　Ａｌａ　１ｌｊｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｊｕａ　ＨＬｍ　 ＬＫW Ａｓｐ　ｆ＋＠ｕ　Ｇｌｎ　Ｊｕａ　ｘｒｇ　Ｃｙｓ　Ｌｙ＠工Ｌｓｅ　ＬＭｕ 　Ｑｅ　Ｔ、ｙｍ　ＧＬｕ　Ｊｕａ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｔｙ■ Ｌｙｓ　ＡｌＪＬ　Ａｌａ　ＡＡ８Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅ１：　ＬＹｍ 　ＨＬｍ　Ｔ、ｍ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　Ｌｙ■ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　 Ｖａｌ　ＸＬ・Ｇｌｙ　ＶａＩＧｌｕ　Ａｌａ　Ｖａ１Ｇｉｎ￥７１０ｉｎ　Ｌ ａｕ　Ａｌａ　Ｇｉｎ￥ａｌ　ＬＹｍ　Ａｓｐ　ｕｎ　Ｌｅａ　対Ｂ　ＧＬｙ　 Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　ＧｌｙＭＷ　Ｌｙｓ　Ｓ＠ｒＰｒｏ　Ａｒｇ　ｉｌｊｇｏｌｕ 　Ｇｌｕ　ｕｕ　Ｌａｕ　ＬＥＥ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｌ詔Ｌｙ ｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ＬＭｕ　ＧＬｕ　Ａｌａ　Ｊｕａ工１ｅ　Ｌｙｅ　Ａｌａ 　Ｇｌｕ　Ａｊｎ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ＬｙｓＬｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　 Ｍａｔ　ｌｉ＠ｒ　Ｐｈａ　Ａｌａ　Ｌｗｓ　Ｇｊｌ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　ＬＭ　 ＧＩＹ　ｆｆｈａ　Ｖａｎ　Ｖａ■ Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｘ１＊　Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　 Ｌｙｓ　Ｓｅｘ工１＠　Ｈｌｓ　Ｔａｙｍ　Ｌｙｅ　Ｖａ１（Ｊｕ　Ｊｕｇ　Ｌ ｍ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　井ｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ｕｎ　ＡＳＨｏ ｌｕ　Ｌｓｕ　Ａｓｐ　ＡｒｇＡｇＷ　ＶａｌＬＹｌｌ　ＡＬａ　ｒＪｕ　”ｇ 　１ｔ　Ｍｅｔ　Ａｊｎ　Ｂａｒ：　ｉｉｅ　Ａｍｐ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｚｌｅ 　タルＪＬｓｎ　Ｍａｔ　ＬＭｕ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　 ＡＬａ　層ｕ　Ｖａｌ　Ｖａ１１１ｈ＊　Ａｒｇ　”ｘｇ　ＡＬａＡｌａ　Ｇｌ ｙ　１１ｍ　Ｔｒｇ　５ｓｒ　Ｖａｌ　１１ｍ　Ｂａｒ　Ｌｗｓ　ｕｎ工１＠　 Ｇｌｙ　Ａｊｎ　Ｌａｕ　ｋｔｑ　Ｇｌｕ丁ｈｒ　Ｓｉｒ　ＬＭｕ　Ｌｙｓ　Ｇ ｌｕ　１１＊　Ｇｌｕ　（５１８°ｌｕ　Ａｓｎ　ＪＬｓｐ　Ａｓｐ　Ａｓｇ　 ＪＬＬａ　Ｌａｕ　Ｔ凾■ １１＠　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ａｊｐ　Ｊｕａ　Ａｉａ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　 Ｔｒｙ　Ｌｙｅ　ＧＬｕ　Ｚｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ＧＬｕ３７０　３〕５　３ ８０ Ａｌａ　Ｇｉｎ　８ｅｒ　Ｐｈ＠Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ｋｓａ　ｌａ　Ｔｙｘ　Ｔｈ ｒ　Ｐｒ。

（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＱ：ＩＯに間する情報（り配列特性 （Ａ）　長さ：２２塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖＝２本鎖 （Ｏ）トポロジー：＆Ｉ形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：１０　：Ａ　Ｇ　Ａ　ＲＴ　ＲＫ　’ｖ￥　Ｔ　ＷＡ　Ａ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　 ＷＧ　ＣＩＣ？−Ｉ　Ａ　Ｗ（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１に間する情報（ １）配列特性 （Ａ）　長さ１８回のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （０）トポロジー二線形 （ｉ　ｉ）分子タイプ：蛋白質 （χＩ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：Ｉｌ　：（２）　ＳＥｕ　１０１ １０：１２に間する情報（１）１２列特性 （Ａ）　長さ２１４個のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （（ニ）鎖ニ一本 （０）トポロジー二線形 （ｉｉ）分子タイプ：蛋白質 （ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１２　：（２）　ＳＥＱ　１０　 Ｈ：１３に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ冒４個のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 ＜Ｃ＞ｔａミニ− （Ｄ）トポロジー二線形 （目）分子タイプ：蛋白質 （ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：Ｉ３　：Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ 　Ｖａｌ （２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ４に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：１７＠のアミノ酸 （８）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （０）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （＼１）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４　：（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：Ｉ５に関する情報（ｉ）　Ｅ列特性 （Ａ）　長さ＝２．！囮のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （Ｄ）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （ｘｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　Ｉｆ）　ＮＯ：１５　：Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ａｓ ｎ　５ｅｒ （２）　ＳＥＱ　Ｉｎ　ＮＯ：Ｉ６に間する情報（ｉ）配列特性 （Ａ）　長さ＝２３塩基対 （８）　タイプ：核酸 （Ｃ）＠：２本鎖 （Ｄ）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（＼Ｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：１６　：ＧＣＡＡＴＴＴＴＡＡ　ＡＴＧＡＡＴＴＡＴＡ　ＴＣＣ（２）　 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ７に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：５６塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （Ｄ）トポロジー二線形 （ｉｉ）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　 ＮＯ：Ｉ７　：ＡＴＧＡＴＴＡＴＴＧ　ＡＴＴＣＴＡＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＡＣ ＣＡ　ＡＧＡ（ＡＴＴＣ讐丁ＴＡＡＴＷＡＡＴＡＣＷＡＴＷＡＡ （２）　ＳＥＱ　Ｉｆ）　ＮＯ：１８に関する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ＝３８塩基対 （８）タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖＝２本鎖 （Ｄ）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｉ）配列の記述：　ＳＥＱ　ｌ［ｌ 　ＮＯ：１８　：（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ９に関する情報（１）配列特 性 （Ａ）　長さ：１７塩基対 （８）タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （０）トポロジー：線形 （ｉｉ）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：１９　：ＣＡＡＹＴＡＣＡＡＧ　ＣＷＣＡＡＣＣ（２）　ＳＥｏ　１０　 ＮＯ＋２０に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：２３塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （Ｄ）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　 ＮＯ：２０　：Ａ　Ｇ　Ｇ　Ａ　Ａ　ＣＡ　Ａ　Ａ　Ｙ　Ｔ　ＣＡ　Ａ　Ｋ〜Ｖ ＣＧＲＴ　ＣＴＡ（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１に間する情報（１）配列特 性 （Ａ）　長さ＝２３塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎖：２本鎖 （Ｄ）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（合成的）（ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　 ＮＯ：２１　：ＴＧＧＡＡＴＡＡＡＴ　ＴＣＡＡＴＴＹＫＲＴ　ＣＷＡ（２）　 ＳＥＱ　１０　ＮＯ：２Ｇに間する情報（１）配列特性 （Ａ）！％さ；２３塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）　鎮：２本鎖 （０）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：　ＤＮ　Ａ　（合成的）（＼１）！２列の記述：　ＳＥＱ 　ＩＤ　ＮＯ：２［３：ＴＴＭＴＴＡＡＡＷＣ讐ＧＣＴＡＡＴＧＡＴ　ＡＴＴ（ ２）　５Ｅ（ｌ　ＩＤ　ＮＯ：２７　ニ間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ：　［２５塩基対 （Ｂ）　タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：２本鎖 （０）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：ＤＮＡ（ゲノミ・ツク）に１ｉ）Ｖｉ定的か？：否 （１ｖ）アンチセンスフ：否 （〜１）オリジナル給ン原 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：ＰＳ８６ Ａ１ （ｖｉｉ）直近給源 （Ｂ）　’）　ｒ：ｔ　−ン：　大１ｆｉＷ（Ｅ、ｃｏｌｉ）　８Ｍ５２２（ｐ ＭＹｃ　１６３８）　ＮＲＩＩＬ　Ｂ−１８７５１ （１り特徴 （、Ａ　）　名前／キー：請ａｔペプチド（８）　Ｉｎａ　：　１．、Ｉ４２５ （Ｘ　ｉ　）配列の記述：　ＳＥｏ　１０　ＮＩＣ２７：τ入ひλτ入＾ＴＴ　 α４Ａτｒａａｚλτ入＾ｔ）Ｊｒτ■すＧ＾ｍτ＾τＡＡτ＾ＡＴ　１４２５ （２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２８に間する情報（１）配列特性 （Ａ）　長さ＝４７５個のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （Ｄ）トポロジー：線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （ｉｉｉ）仮定的か？：Ｙｅｓ り１ｖ）アンチセンス？：Ｎ。

（ν１）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス（Ｃ）　個別的単離体：ＰＳ８６ Ａ１ （〜１１）直近給源 （ｉｖ）特徴 （Ａ）　名前／キー：蛋白質 （Ｂ）　位置：　１．．４７５ （×１）配列の記述：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２８　：Ｍａｔ　Ｘ１ａ工１＠　 Ａｇｐ　５ｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒτｈｒ　−ｕ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　ｓｓ ｒ　１１１ｓ　Ｈｌｓｌ　５　１０　１５ Ｔｈｒ　ＩＩｓ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　ｇｅｒ　Ｒｕｎ　Ｌｙｓ　ＬＮｓ　 Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｊ、ｊｐ　Ｍ・七τ駄ｌｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｓ ｎ　Ｇｉｎ　Ｐｈａ　工１ａ　工１ｅ　５ｅｒ　Ｌｙｍ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｔｒ ｐ　Ａｉｍ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ３５　、　４０　４５ Ａｌａ　７１１ｍ　Ｇ１１１１　ＴＭ　Ｇａｙ　￥　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　 Ｖａｌ　Ｐｎ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ｕｕＰｇ　Ｔｈｒ　Ｈｌｓ　Ｖａｌ　 Ａｊｎ　Ｌｓｕ　Ｓｉｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　ＸＬｍ　Ｓａｒ　ＩＩｓ　Ｐｒｏ　 Ｓａｇ　Ａｓｐ　Ｋ’５Ｓｓｒ　Ｇｉｎ　Ｌ＠ｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｔ ｙｒ　Ｃｙｓ　Ｂａｒ　Ｊ、ｊＰ　Ｌｙｅ　Ｔｂｔ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　 Ｔｒ■ τｒｐ　Ａｇｎ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｔａａｕ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｌｓｕ工１＠　 Ｘ１ｍ　Ｌｙｓ　Ｓｅｘ　Ａ１１ｌ　Ａｓｎ　Ａｓｐ工１ｅｌｏｏ　１０５　１ １０ 人１ａ　Ｂａｒ　ＴＹ互Ｇｌｙ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　ＭＡ　Ｇｌｙ入ｓｐ 　Ｐｒｏ　Ｂａｒ　ｉｉｅ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　ＡｓｐＧｌｙ　簡Ｐｈ＊　Ｌｙｅ 　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ａｊｐ　Ｇｌｕ　’Ｌａｘ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　ＸＬ ｍ　Ｖａｎ　Ａｓｐ　ＡｓｎＡｇｎ　Ｓａｌ：Ａｓｐ　Ａｊｐ　Ａｓｐ　Ａｌａ 工１ｅ　ＡＬａ　Ｌｙｓ　ＡＬａ　ＸＬｍ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　 ＡｌａＡｒｇ　Ｃｙｔａ　Ｇｌｙ　Ｘ１＠Ｌｅｕ　Ｘ１＠Ｌｙ＠Ｇｌｕ　Ａｌｍ 　許８°ｉｎ　？ｙ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ｕａ　ＡｌａＬｙｓ　Ａｌｎ　Ｘ１＊　 ＶＨＡ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　？＾ＲＰｈ＠　Ｌａｕ　１ｌｉｓ　 Ｇｌｙ　Ｈ８Ｇｉｎ　ＬｙｅＬｙｓ　Ｌａｕ　ＧＡｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ 　Ａｓｎ　ｉｔｓ　Ｇｉｎ　Ｌｙｅ　Ａｒｇ　’Ｌｍ　協Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｉ ｎτｈｒ　Ｊｕａ　Ｌｍ　ｗ＊　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｈｌｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　ｓ ａｔ　ｔｈａｔ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　！Ｉｉｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ２１０　２工５　 ２２０ Ｆｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　ＶａＬ　”Ｎｇ　Ａｊｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｔｓ　 Ｔｈｒ　Ｘｎ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　３詔Ｌｙｓ　Ｊｕａ　Ｇｌｕ 　Ｇｉｎ　Ａ話し＠ｕ　ＧＬｕ　Ｌｙ″ＬＹ１￥貼０１１π５ｓｒ　Ｐ−竹讐Ｌ ａｕＱｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌ″″Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｍａｌ　Ｖａｌ　￥　Ｇ ｌｕ　Ｉｌｅ　′ｕ　（ｉＬｕ　Ａｓｎ　１ｉ１ｍＶｍｌ　Ｇ１１ｌ　！！ｉｓ 　ｌ１４１　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙ ｌｌ　ＬＫｆｓ　Ｇｉｎ　１Ａ唐■ Ｓｅｒ　ＡＬａ　Ｇｉｎ　Ｉ！Ａｓ　ＭＰ　Ｌａｕ　ｋＷ：　Ａｒｇ　ｕｐ　Ｖ ａＬ　Ｌｙｓ　珈！ｌａ　Ｇｌｙ　Ｍａｔ　Ｘａｕ党ｎ　Ｓｇａｒ　Ｉｌｅ　Ａ ｓ＋ｓ　Ｔｈｒ　ｉｓｇｏｌｍ　ｕｐ　Ａｍｐ　Ｗｕ　’ＥＫＥ　Ｂａｒ　Ｇｉ ｎ　Ｇｌｙ　Ｑｌｓ　＝Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　ｔｈａ　Ｇｉｎ　Ｌ ｙｓ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　ｆｆ３？：工１・Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　３ｊｅ　Ｇ ｌｙＡｌａ　Ｇｉｎ　ＩＩｓ　Ｇｌｕ　ＪＬｓｎシ＊ｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒτ旨Ｓ ａｇ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　（Ｊｕ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ５＠ｒ　Ａｓｐ　Ａｊ ＨＡＬＪＬ　Ａｇｐ　Ｇｌｕ　Ａｉｍ　Ｇｉ８　ＩＩｓ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｇｌ ｕ　”ａ　Ａｌａ　Ｓａｔ　ＮＩＰＡｌａ　’ｉ５ｇ　ｋｕ　Ｖａｌ　Ｖａｎ　 Ａｌｍ　＝　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓ ｎ　Ａｌｍｇ　Ｓ＠″Ｔｈｒ　ＪＬｓｎ　Ｓｍｇ　％ｇ°ｉｎ　Ａｊｎ　ｒｊｕ 　Ｐｒｏ　卿“ｎ　Ｖａｌ　Ｘｉｓ　Ｍａｔ　２ｇ８ｓ＠ｒ　Ｃｙｌｌ　ＪＬｓ ｎ　ａｙｓ　Ｓａｌ：　Ｔｋｕ−Ｔｈｒ　入−ｎ　Ｍｔ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ａｓ ｎ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　５ｓｒ　Ａ唐■ Ｐｒｏ　Ｔｈｒτｈｒ　Ａｓｎ　Ｍｔ　Ｔｈｒ　Ｓｅｘ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｔｙ ｒ　Ｍａｔ　Ｉｌ働ｊａｒ　ｌ１ｌｓ　ＧＬｕ　Ｔｙｒ？ｈｒ　ｆＪ＠ｔ　Ｌ＠ ｕ　Ｐｒｏ　Ａｊｎ　Ａｓｎ　Ｐｈｓ　Ｍｅｔシｖａ　Ｓｓｒ　Ａｒｇ　Ａｓｎ 　ｓｉｒ　ＡｊｎＪｎｎ　ＧｌｕＴｙｒ　’ｉｇ　ＣＹｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａ ｓｎ　”：　Ｐｈｓ　Ｍｔ　１１°Ｔｙｒ　ＴｒＥ　Ｔｙｒ　Ｊｌｕｎ　Ａｓｎ 　ＳｅｘＪｕｇ　Ｔｒｐ　Ｔｙｒ　ＪＬｓｎ　Ａｓｎ　２ｍｇ　Ａｓｐ　Ｔｒｐ 　Ｔｙｒ　Ｊｎｎ　Ａｓｒｓ（２）　ＳＥＱ　ＩＤ＼＋：＋　：　２０に関する ↑５子口（ｉ）ｉｌｉ２ヲリ持性 （Ａ）　長さ：　３４７＋塩基対 （８）　り　イ　ブ　：　核　酸 （（：）鎖二２本鎖 （０）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：ＤＮ、入（ゲノミック）（ｉｉｉ）Ｖｉ定的か？：？！； ’ （ｉｖ）アシチ七ンス？：Ｔｉ （日）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス＜Ｃ＞　Ｕ別的単寵体：　ＰＳ５ ０Ｃ （〜ｉｉ）直近給源 （Ｂ）　クローン：大腸菌（Ｅ、ｃ＊ｌｉ）　８Ｍ３２２（ｐＭ臼：２３２０） 　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８７００ （＼１）配列の８こ述：Ｓ［θＩＤ　Ｍｌ）：２り　：ＡＣＡＧＡＡＧＧＴＡ　 ＣＧＴＴＣＴＡＴＡＴ　ＡＧＡＡＡＧＴＧＴＡ　ＧＡＡＴＴＧＡＴＴＧτＡＧＡ ＣＧＴＡＧＡ　Ｇ　３４７１（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　’１０：３０に関する情報 （ｉ）配列特性 （Ａ）　長さ：１１５７個のアミノ酸 （Ｂ）　タイプ：アミノ酸 （Ｃ）　鎖ニ一本 （Ｄ）トポロジー二線形 （１１）分子タイプ：蛋白質 （ｉｉｉ）ｖｉ定的か？　：　’ｌ”　ｅ　５（１ｖ）アンチセンス？二Ｎ０ （ｖｌ）オリジナル給源 （Ａ）　生物：バシルス　チューリンゲンシス（Ｂ）　Ｍ株：クマモトエンシス （Ｃ）　個別的単Ｍ体：ＰＳ５０Ｃ （ｖｉｉ）直近給源 （Ｘｌ）配列の記述：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：３０　：Ｍａｔ　ｓｅ＝　Ｐｒｏ 　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｇｎ　ａｌｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｘｉｓ　工１＊ 　Ｍｐ　Ａ↓ａ丁ｈｒ　１ｇ６１　５　１０　工５ Ｓ＠ｒ　Ｔｈｒ　Ｂａｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ　Ａｊｌｐ　５＠ｒ　Ａｓｎ 　Ａｒｇ　Ｔｙｔ”　ｐｒｏ　Ｐｈａ　Ａｌａ　Ａｊｎ　Ｇ撃■ Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｌ＠ｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｍａｔ　Ａｓｎ　 ？πｆ、ｙｓ　Ａｓｐ　ｒ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　ＭｅｔＳｅｒ　ｇ占ｙ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｕ　Ａｇｎ　Ｐｒｏ　Ｇｊｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈ＠Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｐｇｏ　Ｇ ｌｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈ・工１ｅＳｅｅ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ：　Ｔｈｒ工１ｅ　Ｇｉｎ 　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｚｌ＠Ｇｌｙ　Ｉｌｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ工ｉｓ　Ｌ ｅｕＧｌｙ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｇｕｙ　ＶａＩＰｒｏ　Ｐｈｓ　Ａｌａ　Ｂａｒ 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Ａｇｎ、Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｐｈ＠Ａｒｇ　Ａｇｎ、Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｓａｒ　Ａ ｓｎ　ＴＯ５Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　ＯＡＫ。

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フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｐ　２１１０２　 Ｃ８２１４−４Ｂ／／（Ｃ１２Ｎ　１／２１ Ｃ１２Ｒ１：０７） （Ｃ１２Ｎ　１５／３２ ＣＩ２Ｒ１：０７） （Ｃ１２Ｐ　２１１０２ Ｃ１２Ｒ１：０７） （３１）優先権主張番号　７６８，１４１（３２）優先臼　１９９１年９月３０ 日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ 、ＪＰ、ＫＲ，ＲＵＩ （７２）発明者　キャノン、レイモンド、　ジエイ、、シイギリス国　エムイー ９８ジエイダプリユ　ケント　シラティングポーン　ボーデン　バーン　クロー ズ　６ （７２）発明者　バグレイ、　アンシェラ、　エル。

イギリス国エムイー９０アールテイー センター　ケント　シラティングボーンミルステッド　ライオン　ファーム　コ テージ（番地なし）

Claims (36)

【特許請求の範囲】
1. １．ダニ（ａｃａｒｉｄ）抑制有効量のＢ．ｔ．エンドトキシンにダニ（ａｃａ ｒｉｄ）有害生物を接触させることを含むダニ（ａｃａｒｉｄ）有害生物を抑制 する方法。
2. ２．該毒素が８．ｔ．ＰＳ５０Ｃ、Ｂ．ｔ．ＰＳ８６Ａ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ６９Ｄ １、Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ８３Ｅ５、Ｂ ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ３、Ｂ．ｔ．Ｐ Ｓ１７、Ｂ．ｔ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１及びこれらの突然変 異菌からなる群から選ばれるＢ．ｔ．単離体から得られる請求項１に記載の方法 。
3. ３．単離体がＰＳ５０Ｃである請求項２に記載の方法。
4. ４．単離体がＰＳ８６Ａ１である請求項２に記載の方法。
5. ５．単離体がＰＳ６９０１である請求項２に記載の方法。
6. ６．単離体がＰＳ７２Ｌ２である請求項２に記載の方法。
7. ７．単離体がＰＳ７５Ｊ２である請求項２に記載の方法。
8. ８．単離体がＰＳ８３Ｅ５である請求項２に記載の方法。
9. ９．単離体がＰＳ４５Ｂ１である請求項２に記載の方法。
10. １０．単離体がＰＳ２４Ｊである請求項２に記載の方法。
11. １１．単離体がＰＳ９４Ｒ３である請求項２に記載の方法。
12. １２．単離体がＰＳ１７である請求項２に記載の方法。
13. １３．単離体がＰＳ６２Ｂ１である請求項２に記載の方法。
14. １４．単離体がＰＳ７４Ｇ１である請求項２に記載の方法。
15. １５．該毒素がＳＥＱＩＤＮｏ．２８のアミノ酸配列を有している請求項３に記 載の方法。
16. １６．該毒素がＳＥＱＩＤＮｏ．３０のアミノ酸配列を有している請求項４に記 載の方法。
17. １７．該毒素がＳＥＱＩＤＮｏ．１０のアミノ酸配列を有している請求項５に記 載の方法。
18. １８．該毒素がＳＥＱＩＤＮｏ．２のアミノ酸配列を有している請求項１２に記 載の方法。
19. １９．該毒素がＳＥＱＩＤＮｏ．４のアミノ酸配列を有している請求項１２に記 載の方法。
20. ２０．ダニ（ａｃａｒｉｄ）有害生物がダニ（ｍｉｔｅ）である請求項１に記載 の方法。
21. ２１．ダニ（ｍｉｔｅ）がツースポテッドスバイダーマイトである請求項２０に 記載の方法。
22. ２２．Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ８３Ｅ５、 Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４．１、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ３、Ｂ．ｔ ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．Ｐ．Ｓ７４Ｇ１及びそれらの突然変異体からなる 群から選ばれるバシルスチューリンゲンシス単離体、又は該単離体の蛋白質、毒 素結晶、又は胞子を、不活性担体と組合せて含んでいる組成物。
23. ２３．バシルスチューリンゲンシスＰＳ２４Ｊを含んでいる請求項２２に記載の 組成物。
24. ２４．バシルスチューリンゲンシスＰＳ９４Ｒ３を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
25. ２５．バシルスチューリンゲンシスＰＳ４５Ｂ１を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
26. ２６．バシルスチューリンゲンシスＰＳ６２Ｂ１を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
27. ２７．バシルスチューリンゲンシスＰＳ７４Ｇ１を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
28. ２８．バシルスチューリンゲンシスＰＳ７２Ｌ１を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
29. ２９．バシルスチューリンゲンシスＰＳ７５Ｊ１を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
30. ３０．バシルスチューリンゲンシスＰＳ８３Ｅ５を含んでいる請求項２２に記載 の組成物。
31. ３１．環境に適用されたときにその害虫がえさを食べる帯域中で長い持続性を有 している、殺虫活性を有している実質的に無傷の処理された細胞を含む、ダニ有 害生物を抑制する組成物であって、その殺虫剤がダニ有害生物に対し有毒なポリ ペプチドであり、細胞内にあってＢ．か．ＰＳ５０Ｃ、Ｂ．ｔ．ＰＳ８６Ａ１、 Ｂ．ｔ．ＰＳ６９Ｄ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ ．ＰＳ８３Ｅ５、Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ、Ｂ．ｔ．ＰＳ９ ４Ｒ３、Ｂ．ｔ．ＰＳ１７、Ｂ．ｔ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１ 、及びそれらの突然変異菌からなる群から選ばれるバシルスチコーリンゲンシス 単離体によって造られるものであるダニ有害生物を抑制する組成物。
32. ３２．該処理された細胞が環境中での殺虫活性を長引かせるために、化学的又は 物理的手段によって処理されている請求項１８に記載の殺虫組成物。
33. ３３．該遺伝子がＢ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ ８３Ｅ５、Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ ３、Ｂ．ｔ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１、及びそれらの突然変異 体からなる群から選ばれるバシルスチューリンゲンシス単離体から得られる遺伝 子であるか、又はその遺伝子の一つと均等である、ダニに対して活性である毒素 をコードしている遺伝子。
34. ３４．Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ，ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ８３Ｅ５、 Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ３、Ｂ．ｔ ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１、及びそれらの突然変異菌からなる 群から選ばれるバシルスチューリンゲンシス単離体から得ることができる遺伝子 によってコードされる毒素であって、ダニ有害生物に対し活性である毒素。
35. ３５．Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ８３Ｅ５、 Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ３、Ｂ．ｔ ．ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１、及びそれらの突然変異菌からなる 群から選ばれるバシルスチューリンゲンシス単離体から得ることができる遺伝子 によって形質転換された、植物、微生物、及びバクロウイルスからなる群から選 ばれる形質転換された宿主。
36. ３６．Ｂ．ｔ．ＰＳ７２Ｌ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ７５Ｊ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ８３Ｅ５、 Ｂ．ｔ．ＰＳ４５Ｂ１、Ｂ．ｔ．ＰＳ２４Ｊ、Ｂ．ｔ．ＰＳ９４Ｒ３、Ｂ．ｔ． ＰＳ６２Ｂ１、及びＢ．ｔ．ＰＳ７４Ｇ１、及びそれらの突然変異菌からなる群 から選ばれるバシルスチューリンゲンシスの生物学的に純粋な培養基。