JPH06504187A

JPH06504187A - 遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン

Info

Publication number: JPH06504187A
Application number: JP3516046A
Authority: JP
Inventors: ヤコブソン，ジェームス・ダブリュー; ストラスバーグ，ロバート・エル; ウィルソン，スーザン・ディー; ポープ，シャロン・エイチ; ストラスバーグ，スーザン・リー; レートヘル，ヴォルフガング
Original assignee: ジェネックス・コーポレーション; ヘキスト・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1990-09-12
Filing date: 1991-09-05
Publication date: 1994-05-19
Also published as: EP0548252A1; WO1992004461A1; EP0548252A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン関連出願の相互参照本出願は、１９９０年９月１２日に出願された米国特許出願第０７１５８１゜６９４号の一部継続出願である。

発明の分野本発明は、鳥類のコクシジウム症の分野に属し、鳥類コクシジウムの組換え抗原タンパク質及びそのタンパク質をコードしている遺伝子を目的とするものである。この抗原タンパク質は鳥類コクシジウム症に対するワクチンとして使用できる。

発明の背景コクシジウム症は、消化管を裏打ちする上皮細胞及びその関連の腺細胞に一般に侵入する細胞内寄生虫プロトシーマによりて引き起こされる、ヒトなどのを推動物及び無を推動物両者の疾患である。家畜の多（に見られるぎゅうぎゅう詰めの状態が、この疾患の頻度を増大させている。実質的にすべての家畜は感染に罹患し易く、寄生虫の分布が全世界に及ぶ。従って、コクシジウム症は世界経済の有意な損害の元凶である。

家禽産業は特に甚大な損害を被るので、コクシジウム症は経済的に最も重要なニワトリの寄生虫疾患である。１９４９年以来、予防的な抗コクシジウム症物質が使用されているが、それらは全般的に有効ではない。体重増加及び産卵の減少、前のままである。ブロイラー生産におけるコクシジム症の費用は１ポンド当たり１／２から１セントと計算されている。合衆国の１年生産高が年３．　０００゜ｏｏｏ、ｏｏｏブロイラーであることに基づけば、その損害は総額６０から１２０百万ドルに及ぶものと考えられる。３５百万ドルと算定される抗コクシジウム症の費用もこれらの数字に加算しなければならない。この衝撃的な数字は、ニワトリのコクシジウム症傾向を減少させることの重要性を物語っている。

鳥類を感染することで知られているコクシジウムの９つの属の中のエイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）属は、経済的に最も重要な種を含んでいる。エイメリアの種々の種は哺乳動物などの宿主を広範に感染するが、ニワトリを様々な程度で冒す病原体としては９つの種が認知されている：　エイメリア・アセルブリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）、Ｅ、ミバチ（Ｅ、　ｍ１ｖａｔｉ）、Ｅ、ミチス（Ｅ、ｍ１ｔｉｓ）、Ｅ、ブラエコックス（Ｅ　、　ｐｒａｅｃｏｘ）、Ｅ　ハガ＝（Ｅ、ｈａｇａｎｉ）、Ｅ、ネカトリックス（Ｅ、　ｎｅｃａｔｒｉｘ）、Ｅマキシフ　（Ｅ、　ｍａｘｉａ＋ａ）、Ｅ　ブルネ・ソチ（Ｅ　、　ｂｒｕｎｅｔｔｉ）、及びＥ、テネラ（Ｅ　、　ｔｅｎｅｌｌａ）。

エイメリアは高度に宿主特異的であるが、それらの生活環は類似している。鳥類コクシジウムの発育段階はＥｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ種によって説明することができ、これはニワトリの盲腸において増殖する。

Ｅｉｍｅｒｉａ種の生活環は宿主が土壌の食餌時に、又はほこりを吸入することによって、既にスポロゾイト形成したオーシストを摂取したときに始まる。ニワトリの砂嚢及び消化管での機械的及び化学的作用はスポロゾイト形成したオーシストを破裂させ、８つの橿虫（スポロゾイト）を遊離させる。スポロゾイトは消化内容物中に運ばれ、上皮細胞に透過することにより消化管の種々の部位を感染する。次の生活環では、無性生殖による多重分裂、他の上皮細胞への感染、生殖体の発育、及び糞によって宿主から運ばれるオーシストになるザイゴート（接合子）を産生ずるための受精が起こる。オーシストは核及び細胞分裂を受けてスポロゾイトを形成するが、スポロゾイト形成は環境条件によって影響を受ける。新たな宿主がスポロゾイト形成したオー７ストを摂取すると、その疾患が伝播されることになる。

Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａはＥｉｍｅｒｉａのすべての種の中で最も注目を集めている。Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａは極めて病原性の強い種であり、感染後５日目又は６日目に死亡することが多い。

化学療法剤を使用する以前は、家禽の生産業者が試みるコクシジウム症の制御は種々の管理プログラムに限定されていた。これらのプログラムの目的は、消毒法による、又は厩肥の機械的除去による衛生管理であった。これらの努力にも拘わらず、疾患を伝播するに充分なオーシストが残存するのが常であった。

コクシジウム症の危険性に対抗する１つの手段は免疫である。この方法は、生活環の第１週にコクシジウム種それぞれのオーシストを少量だけ家禽に与えるものである。しかし、重篤なコクシジウム症が発現している鳥類もいれば、感受性のままの鳥類もいるため、鳥類飼料の娘オーシストとしてのその用量の制御は困難であることが示された。さらに、この手法は混合感染を引き起こすので、与えた種のすべてに対して適度な免疫が現れないことが時にある。さらに、免疫の発現はブロイラー生産で使用するには遅すぎる。

コクシジウム症に対抗するもう１つの手段は、家禽が感染された後の薬物処置である。使用されている１つの薬物は、コクシジウムの６つの種に対する抗コクシジウム症活性を示すスルファニルアミドである。しかし、疾患の診断後に細菌叢の薬物処置を迅速に開始しなかったなら、薬物療法の開始は遅すぎて有効でない場合がある。

実際、コクシジウム症に対抗する最良の方法は予防的な薬物療法である。スルホンアミド薬物が使用され始めて以来、４０以上の化合物がコクシジウム症に対する予防的薬物療法として市場に供されてきた。このような薬物を使用することは、層線菌叢の抗コクシジウム症剤の夾雑、鳥類に毒性を表す過剰の抗コクシジウム症薬物の飼料中への含有、及びコクシジウム症の大発生を引き起こす飼料からの抗コクシジウム症剤の遺漏など、多くの問題を抱えている。特に憂慮すべき問題は、コクシジウムの薬物耐性株の発現である。さらに、残存薬物が食肉中に沈着する可能性もある。

コクシジウム症を制御するための利用可能な方法の成功例は限定されているのは明らかであり、鳥類コクシジウム症に対抗するための安全、有効かつ廉価な方法は依然要求されている。

有効な抗コクシジウム症ワクチンが開発されることは、疾患を予防するために望ましい問題解決手段である。伝統的な方法によって生産されたワクチンは大幅な開発を要する。胚又は細胞培養物の継代により弱毒株を生産するという報告がある。この手法は結果としてワクチン成功を収める場合がある一方で、Ｅｉｍｅｒｉａの重要な種のすべてが培養又は胚における発育に適しているわけでなく、それらは自身の生活環を全うすることができる。

遺伝子操作の手法はワクチン開発のための代替手法として利用される。病原細菌の抗原タンパク質をコードする遺伝子は微生物にクローンできることが知られている。そして、この抗原タンパク質は高いレベルで発現させることができ、また精製すれば、病原生物に対するワクチンとして使用することができる。この抗原タンパク質は非感染性であるという利点を有し、またその生産は本質的に廉価であり得る。このような「サブユニットワクチン」は、肝炎、単純ヘルペス及び手足０病ウィルスなどの多くのウィルスの抗原遺伝子から調製される。別の方法は、化学的に合成される小さなペプチドである「合成ワクチン」を調製することであり、その配列はウィルス抗原ＤＮＡのアミノ酸配列翻訳に基づいて選択される。このような「合成ワクチン」か弱毒又は死滅病原生物を用いる従来のワクチン法よりも都合の良い点は、ＬｅｒｎａｒのＮａｔｕｒｅ　２９９：５９２−５９６（１９ｇ２）に要約されている。

真核生物タンパク質などの外来タンパク質をグラム陽性又はグラム陰性細菌などの原核生物において生産させることは、現在では可能である。この方法には、ＤＮＡ（細胞ＤＮＡを酵素的に消化するか、又はｍＲＮＡを逆転写させることによって誘導）を発現ベクターに挿入することが包含される。このような発現ベクターはプラスミド又はバクテリオファージのいずれかから誘導され、これは（１）微生物宿主細胞において機能する複製起点、（２）選択マーカーをコードする遺伝子、及び（３）プロモーター、オペレーター及びリポゾーム結合部位などの調節配列であって、その調節配列の下流に位置する挿入される外来ＤＮＡを転写及び翻訳させる調節配列、を含有している。タンパク質の生産及び安定性を増大させるため、真核生物タンパク質は、原核生物タンパク質のアミノ末端由来の配列と融合させた融合物として原核生物細胞にて産生させることが多い。この方法では、β−ガラクトース又は大腸菌（Ｅ、ｃｏｌｉ）　トリプトファンオペロン遺伝子の１つの産物が使用され、成功を収めている。真核生物宿主細胞、例えば酵母及びチャイニーズハムスター卵巣組織培養細胞にて外来タンパク質を発現させるために発現ベクターも開発されている。

外来遺伝子を担持する発現ベクターによって形質転換された宿主細胞は、外来タンパク質の生産を個々のベクターにて刺激することが知られている条件下、培養物中にて発育させる。このような宿主細胞／発現ベクター系には操作を加えて外来タンパク質の発現が化学的又は温度誘発によって調節できるようにすることが多い。分泌されるタンパク質は培養培地から単離することができ、他方、細胞内タンパク質は細胞の収穫と細胞溶解、細胞内成分の分離によって単離することができる。この方法では、天然起源からの精製では困難であるタンパク質を、比較的大量に生産することができる。

このような微生物により生産されたタンパク質は、単一の抗原決定基と特異的に反応し、かつその決定基とは一定の親和性を表す均質な抗体である、以下ではｒＭＡｂＪと記載するモノクローナル抗体を使用すること、又はＥｉｍｅｒｉａの生活形態又はＥｉｍｅｒｉａタンパク賀で免疫した感染鳥類又は他の動物から誘導できる、種々の異なる抗原及び多（は単一抗原の多重決定基と反応する多価抗体を使用すること、などの多くの周知の方法によって特性化できる。

「サブユニット」又は「合成」ワクチンを生産するための別の手法は、家禽ポックスウィルスベクターの使用である。このポックスウィルスのワクチンはワクチンとして長く使用されており、実質的にヒトの痘癒を根絶するために使用されてきた。ワクチンウィルスは外来抗原を発現するように効果的に遺伝子操作できる、、　トカ現在証明されており［Ｓｍ１ｔｈらのＮａｔｕｒｅ　３０２：４９０ −４９５（１９８３）　；　Ｐａｎ１ｃａｌｉらのＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｊ、、　Ｕ、　Ｓ、＾、　８０：５３６４−５３６８（１９８３）　：　１ｉａｃｋｅｔｔらのＪAｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　４９：８５７−８６４（１９８４）１、操作されたウィルスは他のウィルス及び痘癒以外の感染症に対する生ワクチンとして使用することができる。家禽ポックスウィルスはワクチンウィルスと非常に類似しており、外来抗原を発現する組換え体を作製するためのワクチンを目的に開発された多くの方法が家禽ボックスに適用することができる。従って、鳥類コクシジウム抗原を産生ずるよう操作された弱毒家禽ポックスウィルスは、抗コクシジウム症ワクチンを生産するための別の方法である。生ワクチンはその生産が廉価であるという利点を有し、迅速な免疫発現の産生が特徴である。

生ワクチンの第２の型は、コクシジウムが通常侵入する消化管に抗原を提示させるものである。この方法は、飼料中に添加されて腸内微生物の集団に導入される無害の細菌による抗原の分泌又は外部表面発現を利用するものである。分泌は、必要な分泌シグナル配列は無傷のままで残しつつ、正常に分泌されるタンパク質をコードする遺伝子に抗原遺伝子を融合させることにより得られる。外部表面発現は、抗原遺伝子を、外部表面に位置するのが普通であるタンパク質をコードする遺伝子と融合させて行われる［Ｔ、　５ｉｈａｖｙ、米国特許第４．３３６，３３６号コ。

このタイプの生ワクチンは、製造費用が最小であり、刺激される免疫応答は消化管のコクシジウム侵入に対して特に効果的なタイプであるので、殊に好都合である。

第３の型の生ワクチンは、Ｅｉｍｅｒｉａ抗原を発現する生組換え細菌を使用するものであり、この細菌は皮下又は別の許容される経路によって注射され、発現される抗原に対して免疫を誘発する［ＭｉｌｌｅｒらのＩｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　５７　：２０１４−２０２０（１９８９）コ。

精製抗原又は不活化細菌ワクチン（バクテリン）と比較すると、生細菌ワクチンのほうがより保護的な免疫応答であった。

例えば、Ｈｅｂｒａｎｋの米国特許第４．６８１．０６３号、ＨｅｂｒａｎｋのＥＰＣ特許出願番号第８７３０６７４６．７号、及びＳｍ１ｔｈらのＥＰＣ特許出願番号第８８３０３３４９．０号に記載されているように、サブユニットワクチンを使用しても、ｉｎ　ｏｖｏにおいてコクシジウム症に対する免疫応答を引き起こすことが可能である。

発明の要約本発明は鳥類コクシジウム症の新規な組換え抗原タンパク質、及びその抗原決定基を含有する断片、ならびにその抗原ペプチドをコードする遺伝子に関する。

コクシジウム症に感染された鳥類細胞に存在する特定のポリペプチドは、精製し単離すれば、抗体応答を誘発できる抗原決定基又は決定基群を含有することが見いだされた。本発明はさらに、鳥類コクシジウム症の新規な抗原タンパク質を使用して作製されるワクチン、及び鳥類コクシジウムに対してニワトリを免疫するための方法に関する。

図面の簡単な説明第１図は、Ｅ、　ｍａｘｉｍａ抗原ｍｃ−４ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５ ′−３°鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）を示している。

第２図は、Ｅ、ｍａｘｉｍａ抗原ｍｃ−４ｃのアミノ酸配列（配列番号２）を示している。

第３図は、Ｅ、　ｍａｘｉｍａ抗原ｍｃ−５ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５ ’−３’鏑のヌクレオチド配列（配列番号３）を示している。

第４図は、Ｅ、■ａｘｉｍａ抗原ｒｒ＋ｃ−５ｃのアミノ酸配列（配列番号４）を示している。

第５図は、Ｅ、　ｍａｘｉ＋ａａ抗原ｍｃ−３０Ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５°−３°饋のヌクレオチド配列（配列番号５）を示している。

第６図は、Ｅ、　Ｕｘｉｍａ抗原ｔａｃ−３０Ｃのアミノ酸配列（配列番号６）を示している。

第７図は、Ｅ、　ｍａｘｉｍａクローンｒｒｒｃ−３５ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５°−３゜鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）を示している。

第８図は、Ｅ、　ｍａｘｉａ＋ａクローンｍｃ−３５ｃのアミノ酸配列（配列番号８）を示している。

第９図は、）：、ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｇ−３ｅ遺伝子をコードするＤＮＡの５ ’−３’鎖のヌクレオチド配列（配列番号９）を示している。

第１０図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｇ−３ｅのアミノ酸配列（配列番号１０）を示している。

第１１図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−１ｉｅ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５”−３’鎖のヌクレオチド配列（配列番号１１）を示している。

第１２図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−１ｌｅのアミノ酸配列（配列番号１２）を示している。

第１３図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２３ｇ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５−３゜鎖のヌクレオチド配列（配列番号１３）を示している。

第１４図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２３ｇのアミノ酸配列（配列番号１４）を示している。

第１５図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２５ｈ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５′−３゜鎖のヌクレオチド配列（配列番号１５）を示している。

第１６図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２６ｈのアミノ酸配列（配列番号１６）を示している。

第１７図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３０ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５’−３’鎖のヌクレオチド配列（配列番号１７）を示している。

第１８図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３Ｑｃのアミノ酸配列（配列番号１８）を示している。

第１９図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａクローンｔｃ−３２ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５′−３°鎖のヌクレオチド配列（配列番号１９）を示している。

第２０図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａクローンｔｃ−３２Ｃのアミノ酸配列（配列番号２０）を示している。

第２１図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３３ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５’−３’鎖のヌクレオチド配列（配列番号２１）を示している。

第２２図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３３ｃのアミノ酸配列（配列番号２２）を示している。

第２３図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３５ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５’　−３’鎖のヌクレオチド配列（配列番号２３）を示している。

第２４図は、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−３５ｃのアミノ酸配列（配列番号２４）を示している。

３１！２５図は、Ｅ、　ｍａｘｉｍａ抗原ｍｃ−３７ｃ遺伝子をコードするｃＤＮＡの５゛−３°鎖のヌクレオチド配列（配列番号２５）を示している。

第２６図は、Ｅ、　ｍａｘｉｍａ抗原ｍｅ−３７ｃのアミノ酸配列（配列番号２６）を示している。

当業界にて周知であるように、遺伝子コードの縮重により、本発明の遺伝子及び抗原ペプチドの図面に記載したＤＮＡ配列は表示したものとは異なるＤＮＡによってコードされる場合がある。従って、アミノ酸配列の教示がそれをコードしている正確な遺伝子配列を導くことは、必ずしも必要とされない。ＤＮＡ及びアミノ酸配列を表示した図面はすべて、５゛から３°の鎖として記載している。略語は以下の標準的な意義を有している：Ａはデオキシアデニル、Ｔはチミジル、Ｇはデオキシグアニル、Ｃはデオキシシトシル、ＧＬＹはグリシン、ＡＬＡはアラニン、ｖＡＬはバリン、ＬＥＵはロイシン、ＩＬＥはイソロイシン、ＳＥＲはセリン、ＴＨＲはスレオニン、ＰＨＥはフェニルアラニン、ＴＹＲはチロシン、ＴＲＰはトリプトファン、ＣＹＳはシスティン、ＭＥＴはメチオニン、ＡＳＰはアスパラギン酸、ＧＬＵはグルタミン酸、ＬＹＳはリジン、ＡＲＧはアルギニン、ＨＩＳはヒスチジン、ＰＲＯはプロリン、ＧＬＮはグルタミン、ＡＳＮはアスパラギン。

好ましい態様の詳細な説明本発明は組換え抗原タンパク質、及びその抗原決定基を含有する断片に関し、それらは鳥類コクシジウム症に対する抗体応答を引き起こすことができ、さらに本発明はその抗原タンパク質及び断片をコードするコード化遺伝子に関する。これらの抗原タンパク質及び抗原決定基を含有するその断片は、Ｅｉｍｅｒｉａの生活型又はＥｉｍｅｒｉａタンパク質によって感染されたニワトリ若しくはそれによって免疫された他の動物由来の、鳥類コクシジウムの抗原タンパク質に特異的である多価抗体又は特異的モノクローナル抗体と結合する。

本発明の抗原タンパク質は幾つかの適用例に使用できる＝（１）このタンパク質（群）はコクシジウムに対する抗体を検出するための鳥類コクシジウム検定に使用できる。（２）抗体は、この抗原タンパク質（群）から製造できる。（３）　このタンパクＩ（群）は鳥類コクシジウム症に対するワクチンを調製するのに使用できる。

コクシジウム抗原に特異的な抗体は、コクシジウム抗原をコードするＤＮＡを含有している形質転換細胞を免疫学的方法によって同定するために使用される。

ＭＡｂは、９つすべての種に特異的又はそれらすべてに共通するコクシジウム抗原をコードしているＤ　Ｎ　、Ａ　Ｆ列を念宵する細胞、を同定するための道具として使用される。多価ニワトリ抗血清又はニワトリ胆汁を用いて形質転換体をスクリーニングすれば、感染の際にニワトリにおいて抗原性である広範なスペクトラムのコクシジウムタンパク質をコードしているＤＮＡ配列が同定される。多価ラット抗血清を用いて形質転換体をスクリーニングすれば、ラットに皮下注射した場合に抗原性を示しかつニワトリにおいても抗原性であり得るコクシジウムタンパク質をコードするＤＮＡ配列が同定される。次に、同定された形質転換体由来のＤＮＡ配列を微生物中に組込み、大規模にタンパク質を生産することができる。抗原タンパク質を天然タンパク質として、又は他のタンパク質とのハイブリッドとしてワクチンに使用して鳥類を免疫すれば、それらを以後の感染から保護することができる。

さらに、抗原タンパク質及びその断片をコードする遺伝子を含有しているＤＮＡ配列は、ＤＮＡプローブとして使用できる。このプローブは、抗原決定基をコードできるさらなる遺伝子のＤＮＡライブラリーをスクリーニングするなど、種々の用途を有している。

ＤＮＡプローブは検出基によって標識できる。この検出基は、検出可能な物理的又は化学的性質を有しているあらゆる物質でよい。このような物質はイムノアッセイの分野で十分に開発されており、一般にはこのような方法に有用である殆どの標識物が本発明に応用することができる。特に有用なものは、酵素学的に活性な基、例えば酵素［Ｃ１１ｎ、　ＣｈｅＩｌｌ、　２２：１２４３（１９７６）を参照］、酵素基質［英国特許明細書１、５４８．７４１を参照コ、補酵素［米国特許第４．２３０．７９７号及び第４．２３８．５６５号を参照］及び酵素インヒビター［米国特許第４．１３４．７９２号を参照コ、蛍光剤［Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｅｗ、　２５　：３５３（１９７９）を参照］；発色団：化学ルミネッセンス及び生物ルミネッセンスなどの発光物質［Ｃ１１ｎ、Ｃｈｅｍ、２５：５１２（１９７９）］　；特異的に結合するリガンド；隣接する相互作用対、及び３Ｈ，３５Ｓ、３２ｐ、＋１６１及び＋４（などの放射性同位体である。このような標識物及び標識性対は、それら自身の物理的性質に基づいて検出されるか（例えば、蛍光剤、発色団及び放射性同位体）、又はそれらの反応性又は結合性（例えば、酵素、基質、補酵素及びインヒビター）によって検出される。例えば、共同因子で標識されたプローブは、その標識物が共同因子となっている酵素及びそのための基質を加えることによって検出することができる。例えば、基質に対して作用する酵素を使用すれば、測定可能な物理的性質を有する生成物が得られる。

この例にはβ−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びオペオキシダーゼなどがあるが、これらに限定されない。

本明細書にて使用している「抗原」又は「抗原決定基」は、特定の抗体と反応する免疫学的に交叉反応性の抗原決定基を意味する。従って、本発明の抗原ペプチドには、化学的に合成されたペプチド、組換えＤＮＡ法により作製されたペプチド、及び本発明のペプチドの決定基に対する抗−イディオタイプであるそれらの抗体又はその断片などが包含される。

鳥類コクシジウム症の抗原タンパク質に特異的なモノクローナル又は多価抗体と結合する抗原タンパク質を生産する微生物を構築するには、種々の方法を使用できる。１つの手法は、次に詳細に説明する主要な各段階に分割することができる　（１）　Ｅｉｍｅｒｉａ属の生物に見いだされるメツセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の回収及び単離；（２）コクシジウム症ｍＲＮＡを鋳型として使用する相補的Ｄ　Ｎ　Ａ　（ｃＤＮＡ）のインビトロ合成：（３）適当な発現ベクターへのｃＤＮＡの挿入及びそのベクターによる細菌細胞の形質転換；及び（４）コード化遺伝子又は遺伝子断片の回収及び単離。この経路はｌｌｌＲＮＡルートと呼ばれる。このルートの利点は、「発現」遺伝子のみがクローンされるので、遺伝子の全集合体を代表させる必要のある個々の形質転換体の数が少なくなる点である。

この手法に替わる手法は、これも次に詳細に説明する各段階に分割できる：（１）　Ｅｉｍｅｒｉａｌｌの生物中に見いだされる核ＤＮＡの回収及び単離：（２）そのＤＮＡの断片化、及び適当なベクターへの挿入：（３）適当な微生物宿主への形質転換；（４）目的の抗原を規定する遺伝子を含有している形質転換体の選択：（５）　コード化遺伝子又は遺伝子断片の回収及び単離。この経路は核ＤＮＡルートと呼ばれる。このルートの利点は、すべての遺伝子がクローンされるので、ｍＲＮＡを単離する際には発現されない遺伝子を同定できる点である。この遺伝子としては、単離するのが容易でない生活環の段階で発現される遺伝子を挙げることができる。

上記の手法によって誘導されるクローン化遺伝子を回収単離した後は、クローン化ＤＮＡ配列を適当な発現ベクター／宿主細胞系に導入し、抗原タンパク質を大規模に生産するのが便利である。

単離しようとするＤＮＡ配列は、ニワトリに投与した場合に免疫応答を誘起する、以後の感染から保護する抗原タンパク質をコードしている。抗原決定基と呼ばれるこのようなタンパク質の一部でも、保護免疫応答を誘発するのに充分であるので、このタンパク質をコードするコクシジウム遺伝子を完全に単離する必要は必ずしもない（Ｌ　ｅｒｎｅｒ、前掲）。このような抗原決定基は、応答を誘発するために折りたたまれた微生物産生タンパク質の表面に存在すべきである（　Ｌ　ｅｒｎｅｒ。

前掲）。

ｍＲＮＡルートでは、寄生虫のスポロゾイト生活段階から配列を単離すればよい。ニワトリの保護免疫応答の部分はこのスポロゾイトを目的とすることが証明された。他の生活段階から単離した抗原タンパク質もワクチンとして有用であり得る。

種々のスポロゾイトタンパク質と結合するＭＡｂ又は多価抗体は、このタンパク質をコードするクローン化ＤＮＡ配列を同定するために使用できる。このようなタンパク質を単離し、使用すれば、保護免疫応答をニット１月：４Ｉき起こすこと５（１９６７）の方法を使用する脱装によってオーシストから単離でき、Ｂｏｎｔｅｍｐｓ及びＹｖｏｒｅのＡｎｎ、　Ｒｅｃｈ、　Ｖｅｔ、旦：１０９−１１３（１９７４）のレウコバック・フィルター法（ｌｅｕｃｏｐａｋｆｉｌｔｅｒ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）によって精製した。Ｄｏｒａｎａ及びＶｅｔｔｅｒｌｉｎｇはオーシストからスポロゾイトを入手するのが適当であることを見いだしたが、スポロゾイト内の核酸が無傷のままになるのであれば、いずれの方法も適切である。また、スポロゾイトｍＲＮＡは、スポロゾイトを含有する無傷のスポロゾイト形成オーシストからも単離できる。

ｍＲＮＡルート目的とする抗原タンパク質をコードしているｍＲＮＡを単離するには、ヌクアレーゼ活性を最小限にする条件下、スポロゾイト形成したオーシストを細胞溶解することにより好都合に行われる。これは、Ｐａ５ｔｅｒｎａｋらのＭｏ１ｅｃ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐａｒｉｓｉｔｏｌ、　３・１３３−１４２（１９８２）に記載されている操作の改変法を使用して行う。全ＲＮＡは、グアナジン・チオシアネート、サルコシル、及びトリス緩衝液ｐＨｇ、Ｏを含有する溶液中、ガラスピーズによってオーシストを粉砕することによって単離できる。オーシストのタンパク質はフェノール・クロロホルム抽出によって除去される。全細胞ＲＮＡは、リチウム・クロライドによる沈殿によってＤＮＡから分離される。次いで、オリゴ（ｄＴ）−セルロースクロマトグラフィーを使用すれば、全ＲＮＡ集合体からｍＲＮＡを単離することができる。

ｃＤＮＡの合成は、１類の骨髄芽球症ウィルス逆転写酵素及びＲＮアーセＨを使用するベーリンガー・マンハイムから供されているキット、又はマウスのモロニー白血病ウィルス逆転写酵素及びＲＮアーゼＨを使用するファルマシアから供されているキットのいずれかを使用することにより行うことができる。これらのキットはその製造元の教示に従って使用する。ｍＲＮＡのポリｒ　（Ａ）テールによって、オリゴ（ｄＴ）［約１２−１８ヌクレオチド長］がｃＤＮＡ合成のプライマーとして使用できるのであるが、あるいはランダム配列のＤＮＡオリゴヌクレオチドがｃＤＮＡ合成のプライマーとして使用できる。

増幅及び選択を目的として、上述のようにして製造したｄｓ−ｃＤＮＡを適当なりローコングベクターに挿入し、それを適当な宿主細胞の形質転換に使用する。

適当なりローコングベクターにはプラスミド及びファージがあるが、バクテリオファージλが好ましい。

抗体を用いて検出しようとする外来タンパク質の発現に有用であるクローニングベクターは、幾つかの有用な特性を有する必要がある。最も重要なものは、使用する宿主細胞において発現される遺伝子の内部にクローニング部位を有すべき点である。また、遺伝子の発現を制御する手段も備えるべきである。ベクターは当然に、所望のタンパク質産物の合成に必要なサイズのＤＮＡを受け入れることができ、かつまた正常に複製できる必要がある。挿入体を担持するベクターの同定を可能にする選択特性を有することも有用である。このような特性を有するりｏ −コン’ｊへ’）９−ハバクテリオファージλｇｔｌ　１（ＡＴＣＣ３７１９４）［Ｙｏｕｎｇ及びＤａｖｉｓのＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、＾、８Ｃ１＋１１９ｌｌ９４−１１９８（１９コであ驕Bこのベクターは、β−ガラクトシダーゼをコードする細菌遺伝子の末端付近に唯一のＥｃｏＲＩ部位を有している。この部位は、β−ガラクトシダーゼと外来遺伝子産物とで形成される雑種タンパク質を作製するため、外来ＤＮＡの挿入のために使用することができる。β−ガラクトシダーゼの発現はｌａｃプロモーターに制御され、これはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）の添加によって誘発させることができる。λｇｔｌｌファーンは野生型λよりも相当に小さな４３．７ｋｂ　ＤＮＡを含有している。これにより、ＤＮＡが大きくなり過ぎてファージ頭の内部に適合できなくなる前に８．　３ｋｂ長までのＤＮＡ片を挿入できる。

ＤＮＡはβ−ガラクトシダーゼの遺伝子内に挿入されるので、β−ガラクトシダーゼ活性を観察することにより、挿入体を有する形質転換体はそれを有さないものと容易に区別することができる。指示染料の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（Ｘガル）を寒天平板に加えることができる。

β−ガラクトシダーゼはこの分子を切断し、青色の産物を生じさせるので、活性なβ−ガラクトシダーゼの存在について培養物を調査することができる。挿入体を有するプラークは、外来ＤＮＡがβ−ガラクトシダーゼ遺伝子に挿入されてその活性を消失しているので、Ｘ−ガル平板上では無色になる。

ｄｓ−ｃＤＮＡは、ＥｃｏＲＩ制限部位及び別の便利な制限酵素認識部位を含有するリンカ−をそのＤＮＡに付加し、ＥｃｏＲＩ切断λｇｔｌｌＤＮＡ内に連結することにより、ファージに簡便に挿入することができる。ｃＤＮＡをファージＤＮＡに連結した後、得られたＤＮＡをλファージ頭にインビトロパッケージングし［Ｅｎｑｕｉｓｔ及びＳｔｅｒｎｂｅｒｇのＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　６８：２８１−２９８（１９７９）］、得られ■ ファージを使用して適当なλ感受性宿主を感染させる。適切に宿主を選ぶと、ファージはプラーク又は溶原菌（コロニー）としてスクリーニングすることができる。

Ｅ、ｃｏｌｉにおける外来遺伝子のクローニングを成功させるためには、上記のＥ。

ｃｏｌｉ／バクテリオファージλｇｔｌｌ系の他に、多くの他の宿主／ベクターの組合わせが使用されている［Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒ　Ｍａｎｕｉｐｕｌａｔｉｏｎ、　２版、０１ｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、　カリホルニア大学出版、　３２−３５．４６−４７（１９８１）コ。

上述の議論はＥ、ｃｏｌｉなどのグラム陰性細菌におけるクローニング操作を目的とするものである。これとは別に、バシラス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）などのゲノム陽性菌［０１ｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、前掲、　５１−５３頁］、又は酵母［０１ｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、前掲、　６２− ６８頁］、糸状菌、昆虫細胞［米国特許第４，７４５．０５１号及び第４，８７９，２３６号］、及び哺乳動物細胞などの真核生物宿主細胞において形質転換し、複製するプラスミドベクターに、外来遺伝子をクローンすることもできる。

本明細書に記載しているＤＮＡは、ホモポリマー・テーリング法、平滑末端連結法などの種々の手法によって、又はリンカ−分子を使用［０１ｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、前掲、９２頁コすることによって前記のベクターに挿入できる。

所望のタンパク質を発現するクローンのクローン銀行をスクリーニングするための多（の免疫学的方法が知られており、それにはＥｎｇｖａｌｌ及びＰｅａｒｌｍａｎのＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　８：８７１−８７４（１９７１）　＋　ＫｏｅｎｅｎらのＴｈｅ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏ撃盾■凵@Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ、　１巻、４号、　５０９−５１２頁（１９８２）　＋　ＢｒｏｏｍｅらのＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　`ｃａｄ、　Ｓ −４５２４（１９８１）によって記載されている手法などがある。

上記概略したクローニング手法によって、コクシジウム抗原の生産によってスクリーニングできる数千の組換えバクテリオファージが創製される。スクリーニング法はコクシジウム抗原タンパク質を単独で発現させるか、細菌遺伝子との融合タンパク質として発現させるかによって変動する。本明細書における例示としては、コクシジウム抗原をＥ、ｃｏｌｉβ−ガラクトシダーゼとの融合物として産生させている。従って、スクリーニング法は、融合産物の発現及び、その抗原を目的とするモノクローナル又は多価抗体いずれかの抗体との反応性によるその産物の検出性によって左右される。

組換えバクテリオファージは、寒天（又はアガロース）平板上にファージプラークを生成できる適切なＥ、ｃｏｌｉ宿主を感染するのに使用することができる。

このプラークはニトロセルロース膜に移動させることができ、同時にＩＰＴＧによる誘発も可能である。次いで、適切な抗体をそのフィルターと反応させる。その−次抗体をフィルターと反応させた後、［＋２５Ｉコストレプトコツカス・アウレウスのプロティンＡ又は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ若しくはビタミンＢ１２とコンツユケートさせた第２抗体のいずれかと反応させることにより、陽性反応を検出する。交叉反応性の抗原を含有しているプラークは、オートラジオグラフィーによって、コンジュゲート化酵素の検出によって、又はビタミンＢ１２コンジュゲート体の場合は１つのレポーター酵素とのストレブ！・アビジンコンジュゲート体との結合によって検出することができる。

抗体−スクリーニング法にて陽性シグナルを与えるファージについて、ファージＤＮＡに元来挿入されているＤＮＡを切除し、そのＤＮＡがコクシジウムｒｎＲＮＡ又はコクシジウムゲノムＤＮＡとハイブリダイズするその能力を調査することにより、コクシジウムタンパク質をコードしている配列を含有することを示すことができる。ｃＤＮＡ挿人体のヌクレオチド配列は、Ｓａｎｇｅｒ（サンガー）らのＰｒ。

コクシジウム抗原をクローニングするための別の方法は、核ＤＮＡをオーシストから単離することから始める。次いで、このＤＮＡをクローニングベクターに挿入するに適切なサイズの断片にまで分解する。このような断片を得るためには、音波処理又はブレングー中での高速撹拌などの機械的切断法を使用すれば、ＤＮＡの無作為な分解物が得られる。超音波を使用する強力な音波処理は、断片の長さを約３００ヌクレオチド対にまで減することができる［０１ｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、前掲。

２０頁コ。あるいは、核ＤＮＡは、無作為断片を与えるＤＮアーゼ１１特異的部位にて切断する制限エンドヌクレアーゼ、又は幾つかの関連生物に認められるホルムアミドの存在下のヤエナリ（ｆｆｉｕｎｇ　ｂｅａｎ）ヌクレアーゼ［ＮｃＣｕｔｃｈａｎ、　Ｔ、　Ｆ、らの５ｃｉｅｎｃｅ　２２５＋６２５−６２に１９８４）］によって部分的に消化すれば、無傷の遺伝子を含有するＤＮＡ断片を調製することができる。

これらの核ＤＮＡ断片は、ｍＲＮＡ実験法にて挙げたｃＤＮＡクローニング用のクローニングベクターのいずれにも挿入することができる。核ＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼで消化した場合、クローニングベクターにその酵素に対する認識部位が】つじか存在しないならば、その同じ酵素で消化したクローニングベクターに挿入するのが好都合であり得る。あるいは、ＤＮＡ断片は、ホモポリマー・テーリング又はリンカ−分子を使用することによって適当なりローコングベクターに挿入できる［Ｏｌｄ及びＰｒｉｍｒｏｓｅ、前掲、９２頁］。

核ＤＮＡを多くの制限酵素の中の平滑末端を与えるいずれかの酵素で消化した後、ゲノムＤＮＡ発現ライブラリーを構築するのが好適である。ＤＮＡ断片のサイズは、制限酵素との消化時間を減することで制御できる。ＥＣ０ＲＩ及びＮｏｔ　１に対する制限部位をコードしているオリゴヌクレオチドなどのリンカ−を平滑末。

端ＤＮＡ断片と連結し、その断片をバクテリオファージλｇｔｌｌのＥｃｏＲＩ内に連結する。得られたゲノム発現ライブラリーは、ｍＲＮＡルートに記載している抗体スクリーニングに供することができる。

上記のスクリーニング法によって「陽性」であると判定された形質転換体から、プラスミドＤＮＡを単離する。次いで、これらのプラスミドの核ＤＮＡ挿入体をＤＮＡの配列決定法に付する。クローンされたＤＮＡ配列を、抗原タンパク質を高いレベルで産生ずるよう操作した発現ベクターに移入すればよい。得られた発現ベクターを抗原タンパク質の生産にとって適切な宿主細胞に導入する。これらの宿主細胞は原核生物及び真核生物いずれも包含することができる。原核生物宿主細胞にはＥ、ｃｏｌｉ及びＢ、ズブチリスなどがある。真核生物宿主細胞には酵母、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などがある。

コクシジウム抗原はその抗原とウィルスＭＳ−２ポリメラーゼのアミノ末端部分とを含有する融合タンパク質としてＥ、ｃｏｌｉにおいて高レベルで産生させることができる。この融合は、コクシジウム抗原をコードするＤＮＡ配列を、ポリメラーゼ遺伝子を担持するプラスミドベクターｐＥＸ３２ｂに挿入することによって行われる。

使用する発現ベクターでは、この融合抗原タンパク質の発現は温度によって高度に調節される。外来タンパク質の発現が調節可能である殆どの発現ベクター系は、細胞密度が高（なるに連れて蓄積する外来タンパク質の悪影響を回避できるという利点を有している。研究者の中には、抗原決定基をコードしている断片などの遺伝子断片の発現により、全抗原タンパク質の発現の場合にもたらすＥ、ｃｏｌｌ宿主細胞に対する悪影響を回避できると提示しているものもある［ＨｅｌｆｍａｎらのＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、８０：３ｌ −３５（１９８３）コ。

コクシジウム抗原は、）：、ｃｏｌｉβ−ガラクトシダーゼのカルボキシ末端での融合物としても高いレベルで産生させることができる。アンピシリン耐性の遺伝子を担持しかつその遺伝子の３゛末端付近のＥｃｏＲＩ挿入部位にβ−ガラクトンダーゼ遺伝子を含有しているｐＧＸ３２１７などの小さなプラスミドに、コクシジウム抗原遺伝子を移入する。融合遺伝子産物の合成は、ｌａｃオペロンの誘発物質であるＩＰＴＧの添加により誘導されるｌａｃプロモーターによって調節される。

鳥類コクシジウム症に対する効果的なサブユニットワクチンは、幾つかの種のＥ１鳳ｅｒｉａ由来の抗原タンパク質の混合物を含有することができる。また、１つの融合タンパク質として２つ又はそれ以上の抗原タンパク質を生産すると、発酵及び精製に要する数が減少するので、生産費用を下げることができる。このような融合タンパク質は、各抗原タンパク質（又はそれらの配列の繰り返し）の抗原エピトープを含有するアミノ酸配列を、種々の量の周囲の非抗原配列と共に含有していよう。このようなタンパク質をＥ、ｃｏｌｉにおいてコードするように設計した雑種遺伝子は、効果的な翻訳開始を可能にする細菌調節配列（プロモーター／オペレーター）及びＥ、ｃｏｌｉ遺伝子の５°末端（リポゾーム結合部位及び幾つかのアミノ酸をコードするコドン）、及び同じ解読枠内に融合されたすべての抗原エピトープをコードする以後のコード化配列を含有している。

コード化コクシジウム抗原配列を担持する発現ベクターによって形質転換されたＥ、ｃｏｌｉ細胞は、抗原ポリペプチドの発現を促進（プロモート）する条件下で増殖させる。次いで、以後のＥｉａ＋ｅｒｉａ感染からニワトリを守るニワトリの免疫応答を誘発する能力について、その抗原タンパク質を試験する。抗原タンパク質はタンパク質を発現する生Ｅ、ｃｏｌｉとして、又はそのタンパク質を発現する死滅Ｅ、ｃ０１１として、又は精製タンパク質として鳥類に提示させればよい。その抗原は適当な担体及びアジュバントと混合して、飼料中に又は注射によって鳥類に投与することができる。

上記のワクチンに使用されるクローンされた抗原タンパク質を、Ｅ、ｔｅｎｅｌｌａＳＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、　Ｅ、　ｂｒｕｎｅｔｔｉ、Ｅ、　ｍ１ｖａｔｉ、　Ｅ、　ｍａｘｉｍａ、　Ｅ、　ｐｒａｅｃｏｘA　Ｅ、　ｍ１ｔｉｓ。

及びＥ、　ｎｅｃａｔｒｉｘなどの重要なＥｉｉｅｒｉａ種による以後の感染から鳥類を守るニワトリにおける免疫応答の誘発能に関して試験する。上記のクローニング法を繰り返し、その結果コクシジウム症からニワトリを集合的に保護するコクシジウム抗原をコードしているＤＮＡ配列を単離しそれを上記の方法によってワクチンとして使用することができる。

コクシジウム症から保護するワクチンとして有用であり得るクローン化抗原タンパク質に加え、クローニングした抗原遺伝子から誘導することのできる別の有用な代替法として、ワクチン中に小さな合成ペプチドを使用することが挙げられる［Ｌｅｒｎｅｒ、前掲を参照コ。抗原タンパク質の配列を決定した後、その配列に基づく合成ペプチドを作成することができる。このペプチドをヘモシアニン又は血清アルブミンなどの担体タンパク質とコンジュゲートし、次いで得られたコンジュゲート体を使用してコクシジウムに対し免疫することができる。

説明してきた操作法は、他の家畜動物をコクシジウム症から保護するためにワクチン中に使用できる抗原タンパク質を、他のコクシジウム種から単離するためにも使用できると考えられる。

本発明をさらに説明するため、以下に実施例を記載するが、これらは本発明の限定を意図するものでない。

実施例ＩＥｉｉｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａ由来の抗原を同定するため、Ｅ、　ｍａｘｉｍａオーシストから単離したポリＡ■ＲＮＡから調製したｃＤＮＡを使用し、λベクター、λｇｔｌｌにおける発現ライブラリーを調製した。このライブラリーの構築は、ジェネックス特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８９１０２９１８に記載されており、これは引用によって本明細書に包含される。ｃＤＮＡ発現ライブラリーを、Ｅ、　ｍａｘｉｍａスポロゾイトに対して惹起させたラット抗血清を用いてスクリーニングした。ラットの免疫血清は、以下のプロトコールを用いて調製した。

日　注射したスポロゾイト試料°ゝの量　注射部位１　０．１０　皮下３　０．１５　皮下８　０．２０　皮下１５　０．２５　筋肉内１７　０．１０　皮下２１　０、　５０　腹腔内ａ）スポロゾイト試料は８．０ＸＩＯ’スポロゾイト／諺！である。上記の容量は、フロイントの完全アジュバントと１＝１に混合したものである。

スクリーニングするライブラリーを、細胞溶解しプラーク形成する宿主上にプレートした。ファージによってコードされている抗原を誘発させた後、そのプラークをニトロセルロース・フィルターに移動させた。ラットの抗−Ｅ、　ｍａｘｉｍａスポロゾイト抗血清を用いてスクリーニングした後に陽性ファージを同定した。この陽性クローン由来のｃＤＮＡ挿入体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、配列決定分析にかけた。これにより、Ｅ、　ｍａｘｉｍａ抗原醜ｃ−４ｃが同定された。

ｍｃ−４ｃ抗原はＥ、　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ抗原ａｃ−６ｂ、及びＥ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ＧＸ３２６２　［ＭｉｌｌｅｒらのＩｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　５７：２０１４−２０２０（１９８９）　：　ＤａｎｆｏｒｔｈらのＰｏｕｌｔｒ凵@Ｓｃｉ、　６８：　１６４３−１６５２（１９８９）］の同族体である。ｍｃ−４ｃのカルボキン末端配列のみが回収されたので、ｃＤＮＡ発現ライブラリーを最初の■ｃ− ４ｃクローンの５゛配列と相補的な１ｓｂｐオリゴヌクレオチドを用いてスクリーニングした。その抗原の６つのアミノ末端アミノ酸以外のすべてをコードしている第２のクローン、λｍｃ　−３６ｃを同定した。■ｃ−４ｃ及び、それによってコードされている２１．７Ｋｄ翻訳産物の配列を第１図及び第２図に示す（配列番号１及び２）。

実施例２Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイトに対して惹起させた抗血清を用いる、ｍｃ−５ｃ抗原をコードしているＥ、　ｍａｘｉｍａ　ｃＤＮＡクローンの同定実施例１に記載しているようにして、Ｅ１ｍａｘｉａ＋ａライブラリーを、ラット抗−Ｅ、　ｍａｘｉｍａスポロゾイト免疫血清を用いてスクリーニングした。この免疫血清と交叉反応する抗原を産生じているファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿入体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、配列決定分析にかけた。

配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｎｃ−５ｃが同定された。

■ｃ−５ｃ抗原のカルボキシ末端配列は開放型解読枠の１６１１ｂｐによってコードされている。この配列及びその５９．２Ｋｄ翻訳産物を第３図及び第４図に示す（配列番号３及び４）。

ｔｉｃ−５ｃ抗原の部分配列をｐＥＸ３２ｂにて発現させた。９２８塩基から開始する内部制限部位から翻訳終止の部位にまで及ぶＥｃｏＲＩ断片によってコードされている末端２２７アミノ酸（第３図）をｐＥＸ３２ｂに挿入し、発現させる。−〇−５ｃ抗原は発現ベクターｐＧＸ５３７６中にコードされている。

実施例３Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイトに対して惹起させた抗血清を用いる、ｍｃ−３０ｃ抗原をコードしているＥ、　ｍａｘｉｍａ　ｃＤＮＡクローンの同定実施例１に記載しているようにして、Ｅ、　ｍａｘｉ＋ｍａライブラリーを、ラット抗−Ｅ、　ｍａｘｉｍａスポロゾイト免疫血清を用いてスクリーニングした。この免疫血清と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿入体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、配列決定分析にかけた。配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ＩＣ〜３０Ｃが同定された。

ｍｃ−３０ｃ抗原は、解読枠内にてλｇｔｌｌのβ−ガラクトシダーゼ遺伝子と融合された５１０ｂｐ開放型解読枠を有していた。開放型解読枠内には２つのメチオニンコドン（二重線）があり、その後に終止コドンを有する３２１ｂｐの開放型解読枠が後続する（第５図、配列番号５）。推定のメチオニン開始コドンに先行して、下線を施した２つのＴＡＴＡボックスがある。従って、その挿入体は分子量１２．２Ｋｄを有する１０９個のアミノ酸から構成されるＥｉｍｅｒｉａ抗原をコードしている完全な遺伝子を含有することができる。■ｃ−３０ｃの開放型解読枠金体によってコードされている■ｃ−３０ｃ抗原のアミノ酸配列を、下線を引いた推定開始部位のメチオニンと共に第６図に示す（配列番号６）。

ｍｃ−３０ｃ抗原をプラスミド発現ベクター１）ＥＸ−３２ｂに挿入した後、それをＥ、ｃｏｌｉにおいて発現させた。ｌ１ｃ−３００抗原は発現ベクターｐＧＸ５３７０内にコードされており、これは、１１ＫｄのＭＳ−２ポリメラーゼとの融合タンパク質としてＰＬプロモーターの制御下に発現される。宿主株ｐｏｐ２１３６は温度感受性リプレッサーＰＬを含有し、この融合タンパク質の発現は４２℃にて完全に誘発される。

実施例４Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイトに対して惹起させた抗血清を用いる、ｍｃ−３５０抗原をコードしているＥ、　ｍａｘｉｍａ　ｃＤＮＡクローンの同定実施例１に記載しているようにして、ｌ：、　ｍａｘｉｍａライブラリーを、ラット抗−Ｅ、　ｍａｘｉ■ａスポロゾイト免疫血清を用いてスクリーニングした。この免疫血清と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿入体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、配列決定分析にかけた。配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｍｃ−３抗原ｍ間定された。

ｍｃ−３５ｃ抗原は、解読枠内にてβ−ガラクトシダーゼ遺伝子に融合された１４６１ｂｐ開放型解読枠によってコードされている。その５゛配列は、完全に現物どおりに全体で２４回反復している、８つのアミノ酸をコードする２４ｂｐがら構成されている。この反復配列は、１つのグルタミン酸残基を介し、１６回反復している第２の異なる２４ｂｐ配列と結合している。この反復配列には５０１ｂｐの開放型解読枠が後続し、次いで終止コドンが続く。ｍｃ−３５ｃのヌクレオチド配列を第７図（配列番号７）に示し、また二重線のグルタミン酸残基が結合しているｍｃ−３５Ｃのアミノ酸配列を、下線を引いた８つのアミノ酸反復配列の最初のものと共に、第８図（配列番号８）に示している。

ｍｃ−３５ｃ抗原をプラスミド発現ベクターｐＥＸ−３２ｂに挿入した後、それをＥ、ｃｏＬｉにおいて発現させた。ｍｃ−３５ｃ抗原は発現ベクターｐＧＸ５３６７内にコードされており、これは、１１ＫｄのＭＳ−２ポリメラーゼとの融合タンパク質としてＰＬプロモーターの制御下に発現される。宿主株ｐｏｐ２１３６は温度感受性リプレッサーＰＬを含有し、この融合タンパク質の発現は４２ ℃にて完全に誘発される。

ニワトリの寄生虫感染時に粘膜免疫応答を引き起こすＥ、ｔｅｎｅｌｌａの抗原を同定するため、λフアージ内のＥ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡ及びゲノム発現ライブラリーをニワトリ免疫胆汁を用いてスクリーニングした。Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａオーシストによって感染させたニワトリから、その感染の７日後に免疫胆汁を回収した。ライブラリーをスクリーニングに使用する前に、免疫胆汁をＥ、ｃｏｌｉタンパク質と共にインキュベートシ、Ｅ、ｃｏｌｉタンパク質と交叉反応する抗体を不活化させた。λプラークを発育平板から引き離すのに使用したフィルターを免疫胆汁と共にインキュベートした後、そのフィルターをヤギ抗− ニワトリＩｇＡ抗体で発色させた。アルカリホスファターゼとコンジュゲートさせたロバ抗−ヤギ抗体を用いて、陽性プラークを視覚化した。免疫胆汁と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のＤＮＡ挿入体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、配列分析した。

Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａゲノム発現ライブラリーをスクリーニングすることにより、１２２アミノ酸をコードしている３６６ｂｐの開放型解読枠から構成されるｔｇ−３ｅ抗原を同定した。ｔｇ−３ｅ及びそれがコードする１２．７Ｋｄ翻訳産物の配列を第９図及び第１０図（配列番号９及び１０）に示す。

ｔｇ−３ｅ抗原をプラスミド発現ベクターｐＥＸ−３２ｂに挿入した後、それをＥ、ｃｏｌｉにおいて発現させた。ｔｇ−３ｅ抗原は発現ベクターｐＧＸ５３９０内にコードされており、これは、１１ＫｄのＭＳ−２ポリメラーゼとの融合タンパク質としてＰ、プロモーターの制御下に発現される。宿主株ｐｏｐ２１３６は温度感受性リプレッサーＰ、を含有し、この融合タンパク質の発現は４２℃にて完全に誘発される。

実施例６Ｅｉａ＋ｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａで感染させたニワトリから回収される免疫胆汁を用いる、ｔｃ−１１ｅ抗原をコードしているＥ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡクローンの同定実施例５に記載されているようにして、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡライブラリーをニワトリ抗−Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ免疫胆汁を用いてスクリーニングした。免疫胆汁と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿入物をバクテリオファージＭ１３に挿入し、配列分析した。配列分析の結果、Ｅ。

ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−１１６が同定された。

ｔｃ−１ｉｅ抗原は１３９アミノ酸をコードする４１７ｂｐの開放型解読枠から構成される。ｔｃ−１１ｅ及びそれがコードする１３．９Ｋｄ翻訳産物の配列を第１１図及び第１２図（配列番号１１及び１２）に示す。

ｔｃ−１１ｅ抗原をプラスミド発現ベクター１）ＥＸ−３２ｂに挿入した後、それをＥ、ｃｏｌｉにおいて発現させた。ｔｃ−１１ｅ抗原は発現ベクターｐＧＸ５３９４内にコードされており、これは、１１ＫｄのＭＳ−２ポリメラーゼとの融合タンパク質としてＰ、プロモーターの制御下に発現される。宿主株ｐｏｐ２１３６は温度感受性リプレッサーＰ、を含有し、この融合タンパク質の発現は４２℃にて完全に誘発される。

実施例７Ｅｉ＋＊ｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａのスポロゾイトに対して惹起させた抗血清を用いる、ｔｃ−２３ｇ抗原をコードしているＥ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡクローンの同定Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ由来の抗原を同定するため、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａオーシストがら単離したポリＡ■ＲＮＡがら調製したｃＤＮＡを使用し、λベクター、λｇｔｌｌにおける発現ライブラリーを調製した。このライブラリーの構築は既に開示されている［米国特許第０７／２１５．１６２号：　ＢｅｒｇｅｒらのＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１５２巻、アカデミツク・プレス、ニューヨーク、ＮＹ（１９８７）］。ｃＤＮＡ発現ライブラリーを、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａスポロゾイトに対して惹起させたニワトリ抗血清を用いてスクリーニングした。ニワトリの免疫血清は、以下のプロトコールを用いて調製した。

１５　０．２５　筋肉内１７　０．１０”　皮下２１　０．５０”　ａ腔内２８　断頭により血清を採取ａ）スポロゾイト試料は８．０ＸＩＯ’生スポロゾイト／　ｍ　ｌである。上記の容量は、フロイントの完全アジュバントと混合したものである。

ｂ）フロイントのアジュバント無しのスポロゾイト。

スクリーニングするライブラリーを、細胞溶解しプラーク形成する宿主上にプラークした。ファージによってコードされている抗原を誘発させた後、標準的なプロトコール［ＢｅｒｇｅｒらのＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙａ＋ｏｌｏｇｙ、　１５２巻、アカデミツク・プレス、ニューヨーク、　ＮＹ（１９８７）］に従ってそのプラークをニトロセルロース・フィルターに移動させた。ニワトリの抗−Ｅ、ｔｅｎｅｌｌａスポロゾイト抗血清を用いてそのフィルターをスクリーニングした。ニワトリ血清１ｇＡ抗体によって認識されるプラークを、ヤギ抗− ニワトリＩｇＡ抗体、次いでビオチニル化ロバ抗−ヤギＩｇＧ抗体を用いて同定した。陽性プラークを、アルカリホスファターゼ−ストレプトアビジンコンジュゲート体を用いて標準的なプロトコール［Ｂｅｒｇｅｒらの誠ｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１５２巻、アカデミツク・プレス、ニューヨーク、　ＮＹ（１９８７）］によって視覚化した。この陽性クローン由来のｃＤＮＡ挿人体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）らの方法［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ。

Ａ、　７４：５４５３−５４６７（１９７７）コを用いて配列決定分析した。Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２３ｇのカルボキシ末端配列が同定された。ｔｃ −２３ｇのヌクレオチド配列及び、それがコードしている２０Ｋｄ翻訳産物を第１３図及び第１４図に示す（配列番号１３及び１４）。

標準的な方法［ＢｅｒｇｅｒらのＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１５２巻、アカデミツク・プレス、ニューヨーク、　ＮＹ（１９８７）］に従って、ｔｃ−２３ｇ抗原をプラスミド発現ベクターｐＥＸ−３２ｂに挿入した後、それをＥ、ｃｏｌｉにおいて発現させた。この抗原は発現ベクターｐＧＸ５３９４内にコードされており、これは１１ＫｄのＭＳ−２ポリメラーゼとの融合タンパク質としてＰ、プロモーターの制御下に発現される。宿主株ｐｏｐ２１３６は温度感受性リプレッサーＰＬを含有し、この融合タンパク質の発現は４２℃ にて完全に誘発される。

実施例７に記載している手法を使用し、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡライブラリーを、実施例７に記載している同じ注射計画に従って調製したニワトリ抗− Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａメロゾイト免疫血清を用いてスクリーニングした。この免疫血清中にてＩｇＧと抗体と交叉反応する抗原を産生ずるファージをビオチニル化ヤギ抗−ニワトリ■ｇＧ抗体を用いて同定し、次いでアルカリホスファターゼ −ストレプトアビノンコンジュゲート体によって視覚化した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿人体をバクテリオファージＭ］、３にクローンし、Ｓａｎｇｅｒらの標準的な方法［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　７４　：５４６３−５４６７（１９７７）コによって配列決定分析した。配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ−２６ｈが同定された。この抗原は、アラニン及びセリンの長い−続きから構成されるペプチド断片を含有する。ｔｃ−２６ｈのヌクレオチド配列及び、それがコードしている１０Ｋｄ翻訳産物をｊ！！１５図及び第１６図に示す（配列番号１５及び１６）。

実施例７に記載している手法を使用し、ラットの抗−Ｅ、ｔａａｘｉαａスポロゾイト免疫血清を用いてＥ、　ｔｅｎｅｌｌａ　ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングした。この免疫血清と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿人体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、Ｓａｎｇｅｒらの標準的な方法［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　７４　：５４６３−５４６７（１９７７）コによって配■■阨■ 析した。配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｔｃ　−３Ｑｃ、　ｔｃ　−３２Ｃ，ｔｃ　−３３ｃｓ及びｔｃ−３５（が同定された。

ｔｃ−３０Ｃ抗原は、λｇｔｌｌのβ−ガラクトシダーゼ遺伝子と解読枠内で融合している抗原断片をコードする２８４ｂｐ開放型解読枠を含有する。ｔｃ−３０ｃのヌクレオチド配列及び、それがコードしている９、５Ｋｄ翻訳産物を第１７図及び第１８図に示す（配列番号１７及び１８）。

ｔｃ−３２ｃ抗原は、抗原断片をコードする２６１ｂｐ開放型解読枠を含有する。

ｔｃ−３２ｃのヌクレオチド配列及び、それがコードしている８、８Ｋｄ翻訳産物を第１９図及び第２０図に示す（配列番号１９及び２０）。

ｔｃ−３３（抗原は、抗原のカルボキシ末端配列をコードする４０８ｂｐ開放型解読枠を含有する。ｔｃ−３３ｃのヌクレオチド配列及び、それがコードしている１２．５Ｋｄ翻訳産物を第２１図及び第２２図に示す（配列番号２１及び２２）。

ｔｃ−３５ｃ抗原は、抗原のカルボキシ末端配列をコードする１２０ｂｐ開放型解読枠を含有する。ｔｃ−３５ｃのヌクレオチド配列及び、それがコードしている５゜ＯＫｄ翻訳産物を第２３図及び第２４図に示す（配列番号２３及び２４）。

実施例１０Ｅ、　ｍａｘｉｍａのスポロゾイトで惹起させた抗血清を用いる、ｍｃ−３７ｃ抗原をコードするＥ、　ａ＋ａｘｉｍａ　ｃＤＮＡクローンの同定実施例７に記載している手法を使用し、ラットの抗−Ｅ、　ｍａｘｉｍａスポロゾイト免疫血清を用いてＥ、　ｍａｘｉｍａ　ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングした。

この免疫血清と交叉反応する抗原を産生ずるファージを同定した。陽性ファージ由来のｃＤＮＡ挿人体をバクテリオファージＭ１３にクローンし、Ｓａｎｇｅｒらの標準的な方ｆ！：［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、Ａ、　７４　：５４６３−５４６７（１９７７）］によって配列■阨■■ した。配列決定分析の結果、Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａ抗原ｍｃ−３７ｃが同定された。

！Ｉｃ−３７０抗原は、λｇｔｌｌのβ−ガラクトシダーゼ遺伝子と解読枠内で融合している抗原断片をコードする４４２ｂｐ開放型解読枠を含有する。ｍｃ− ３７ｃのヌクレオチド配列及び、それがコードしている１６．２Ｋｄ翻訳産物を第２５図及び第２６図に示す（配列番号２５及び２６）。

本発明を説明するために、特定の代表的な態様とその詳細を記載してきたが、本発明には、本発明の範囲を逸脱しない種々の改変及び修飾を加えられることは、当業者に明らかであろう。

配列表（１）一般的情報（ｉ）　特許出願人：　ヤコブソン、ジェームス・ダブリューストラスバーグ、ロバート・エルストラスバーグ、スーザン・り一レートヘル、ヴオルフガング（ｉｆ）　発明の名称：　遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン（ｆｆｌ）　配列の数＝２６（汁）連絡先：（Ａ）　名宛人：　スターン、ケスチー。ゴールドスティン・アンド・フォックス（Ｂ）　通り：　エヌ・ダブリュー・スィート３００゜コネクチカット・アベニュー１２２５番（Ｃ）　市：　ワシントン（Ｅ）　国：　アメリカ合衆国（Ｆ）　ＺＩＰ：　２００３６（Ｖ）　コンピューター解読書式（Ａ）　媒体型・　フロッピーディスク（Ｂ）　コンピューター：　ＩＢＭ　ＰＣ適合（Ｃ）　オペレーティング・システム：　ＰＣ−ＤＯ５／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）　ソフトウェア：　パテントイン・リリース＃１０．バージョン＃１．２５（％−ｉ）本出願のデータ・（Ａ）　出願番号・（Ｂ）　出願臼：（Ｃ）　分類：（ｖ）　優先権主張出願のデータ：（Ａ）　出願番号：　ＵＳ　０７１５８１，６９４（Ｂ）　出願臼：　１９９０年９月１２日（ｖｉ）　弁理士／代理人情報（Ａ）　氏名：　ゴールドスティン、ジョージ・エイ（Ｂ）　登録番号：２９，０２１（Ｃ）　参照／整理番号：０９７７．１５９００００（江）電話連絡先情報（Ａ）　電話番号：　（２０２）４６６−０８００（Ｂ）　ファックス番号：　（２０２）８３３−８７１６（２）配列番号１の情報（ｉ）　配列の特徴：（Ａ）　長さ＝　６３３塩基対（Ｂ）　型：　核酸（Ｃ）　鎖の数：　両形態（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（１１）配列の種類：　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉり特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置＋　１．．６３３（ｘＩ）配列：　配列番号１：（２）配列番号２の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ　２１０アミノ酸（Ｂ）型：　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー、Ｉ！鎖状（１１）配列の種類：　タンパク質（ｔＦ）　配列：　配列番号２・ｓｏ　ｓｓ　４１１（２）配列番号３の情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ：　１６１１塩基対（Ｂ）　型・　核酸（Ｃ）　鎖の数　両形態（Ｄ）　トポロジー・　直鎖状（１１）配列の種類・　ＤＮＡ（ゲノム）（Ｌｘ）　特徴：（Ａ）　名称／鍵・　ＣＤ５（Ｂ）　位置・　１．．１６１１（ｘｉ）　配列−配列番号３゜Ｔｈｒ　＾−ｔｈｒ　引ｕ　＾ｒ＠　Ｌａ＋　ｖａｌ　Ｇｔｙ　ＡＡＩＩ　＾（・　＾（ａ　Ｌｙｓ　幻■＠ｌｒ＋　Ｖａｔ　＾１・＾ｒｇＡ＃′ＩＰｒ＠＊ｌｖ＾−ｎＹｈｒＶａｔＰｈｅ＾−ｐ＾１ａＬｙ−＾Ｐ＠Ｌ＠−嘗電ｅＵｙ＾ｒ嘗）Ｓ　ＬＯ４５＋１帝Ｖａｌ　Ｌｙｓ＠ｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｅ　引ｙ　Ｇｌｙ　ＬＷ　Ｐｒｓ　Ｌｍ　ＩＩ＠　Ｇｌｕ　Ｖｓｌ　ン哨　！−Ｂ　９０　９５Ｌｙｓ　１ｉｌｕ　＾Ｉｓ　Ｖａｌ　ＩＩｓ　マｈｒ　Ｖｓｌ　Ｐｒｏ　Ａｌｅ　Ｔｙｒ　Ｎｖ　＾聞　Ａｓｓ　Ｓｉｒ　Ｇｌｎ　＾ｒ−ｌｉｅ　ＩＩ・　＾関　引υ　計ＯＴｈｅ　＾＋Ｓ　＾儀・　＾１・　Ｉ・　＾１・　マｒ　組ＶＬ報　＾−Ｌ−ＡＣｅ　ＴＴＴ　ＣＡＴ　ＧＴＣＴｅｔ　ＴＴＧ　ＣＴＴ　ＡＣＴ　ＡＴＡ　ＧＡＧ　ＧＡＴ　３ｔＡＴＣママＣＷ　ＣＴＣ５２８Ｔｈｒ　師瞳　＾Ｑ　Ｖｓｌ　ＳＩＰ　Ｌ＠ＩＬａ＋　Ｔｈｒ　Ｉ書ａｌｕ　＾−Ｇｌｙ　ＩＩｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ繊　ぽτ　ＭＡ　α講　３−　儲Ｔ　Ｍ−ＣＡＴ　ｅＴＡ　−α−Ｇｌｍ　ＧＡｔ　Ｔｖｔ　鼠τ　緑τ　５７６ＬｙｌＡＩＭＴｈｒ＾１ｓＧｌｙ＾ａ−τｈｒｗｌａＬｊｌＪＧｌｙＳｌｙＧｌｕＡ暴−Ｐｈｅ＾ｉｐ＾関＾Ｇ＾マＴＡＧ丁＾Ｇ＾ｔＴＴＴＴＧＴＡＴＡＣＭＧ＾ｒＴＴＴ＾＾Ｃ編＾＾Ｇ＾＾ｉ＾Ｇ＾ＴｅＴ６２４＾ｒｌ　Ｌ＠％ＩＶ・籠　＾＆ｐ　舛階　５１　！１・　１ｉｌｒ＋　呻　鍔噌　Ｌ−＾１　Ｌ−銅哨　＾ｒ１　−げ＾＾ＣｃＡｔｅｅａａｔａ＾ｔＭｙａＣｔ＾１４ＧＣＡＹＴＡ＾ＩＪＭ＾Ｃ’ＴＡｅｌｉＴＡＣＡＷ＆ｎＬｙｅ　ムｕ　Ｐｒ６　ｋ　＾ｙ　Ａｓｓ　ｋｒ　＾１　＾１ｍ　Ｌａ＋　ＡｆＧ　＾Ｎ　ｔｍａ　＾ｒ＠　Ｔｈｅ　Ｇ（ｎ２１０　２１５　力 ■！ＷＡＩＪＧＣＡＡＡＧＡｇＡｅＡＣＴＡＭＴＡＣＴｇＴ＾ＩＪＣＭＧｅＴ＾Ｃマ＾マ＾Ｆ？りＣＪｄＡＴＴＳＡＴＭＴＴＴＡ丁Ａ丁Ｇ＾１ｉＬＡＩＡＴ丁Ｇ＾Ｔτ＾（ｒＨｉａｔｅｙｃｅｔマ＾ＴＣ丁７６６ＡｃｔＩＫＴ＾Ｇ＾ママＣら九Ｇ６＾＾ｖ’ｙｃｙｅｔ＾ｙｓｃ＾丁マ＾マ！マｃｅｃｔ＾＾ＣＴＣ’Ｔｅｔ？畠１６ムｒ１　＾１ｍ　ＡｆＧ　Ｐｈ＠＠ｌｕ　ａｌｕ　ＰＩＩｅ　ｌ：ｙｍ　ｋｔ　ＩＬ＆ｐ　マｙｒＰｈｅ　＾ｒｌ　＾ａｌｌ　ｋｒ　Ｌ鈎１４４　２＆　２Ａ５　２ＭＡＴａｅｅｅｅｒＡｃａＡＪＪＡＧＴＡＩＴＡＡＡＡＧＡＴＭＴＡＡＴＡＴＡＧＡｆ九九ａＭＡＭＴａ６４１１＊　ＰＰＩＩ　Ｖａｌ　ＧＬＩＩＬＷ　Ｖｅｌ　Ｌａ＋　Ｌｙｓ　細９ｋｒ　Ｍ哨ｌｉｅ　Ａｓ　Ｌ−＾１　細「１ｑ１　２７５　讃　あＧＴＡ　ＣＡＴ　ＱＩＬＧ　ａｆＡ　ＧＴＡ　ＴＴＡ　ＡＴＡ　Ｇ１１Ａ　Ｗ　ＭＴ　ＡＣＡ　Ａ＋−ＡＴＡ　αゴ　ＡＡＧ　ＡＴＡ　９１Q ｖａｔ　Ｎｌａ　Ｇｌｕ　マａＩＶｓＬ　Ｌａ＋　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｓｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　＾Ｃ１ロａ　Ｐｒｅ　Ｌｙｓ　ＩＩ・２鋳　？９１０　あ　刈口＾＾仁＾ＡＣＴＴＡＴＡｅＭＣＡＡＴＴＣＴＴＴＡＡＴＷＴＡＡＧＧＡＡｌ：ｃＡＴＯ丁ＪＩＧＡＴｅＴｅ６０２１Ｂ　＄０５　３１０　３１５　１２１１ＡＴＴＡＡ＋ＣＣＴａＡＴＷＧＥＴＧＴＴＧＣＴｕＴＧＧＴＧｅＡｌｆｃＴＧＴＡＩＪＧＧＩＪＧＣＴｊＭｌｉｅＡｓＰＩＰｒｏＡＭＩＧｌｌｌＡｌａＶａｌ＾１ｓＴｙｒＣ１ｙ＾＋ａ＾１ａＶａｔＧｌｎ＾（畠＾１・膓　巧　３＄０　３３５＾！＾！ｉ＾＾＾＾ＧＩＪＧ丁＾＾＾丁ＡＣＴＡＣＡＣＡＡＧＴＡＣ＾ＡｌｊＴＴＴＡＴＴ＾ＴＹＡＴＴＡＩ０５６１１ｓ　ＬＷ　ＬＴ’ｌ　ＧＩＹ　Ｖａｌ　＾ｗ　ＳＩＰ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　＾−Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌ鞠Ｌ＠ＩＪ本３４０シ５３ＳＯう＾τＣＴＴＧＣＴＣｃＴＴＴＡＴｅＡＴＴＡＱｌｊＴＴＡＧＡＳＡＣＡＧｅＡＧＧＡＧｌｊＧＴＡＡＴＣ１１％Ａｓｐ　Ｖａｌ　＆【ａ　ｅｒａ　Ｌａ＋　ｈｅ　Ｌ報ｃｒｙ　Ｌ報Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ａｌｅ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　ｌ１ｅｔ信２　ゴｓ５　爾　麺Ｓ＾ＣＡ　ＭＡ　ＴＴＡ　＾■＾　ＧＡＡＭＡ　ＡＡｅ　Ｎｕ　ＡＣＡ　ＡＴＡ　ｅｃＡ　ＡＣＡ　ＩＪＡ　ＡＡＡ　ＴＣＡ　ＣＡＡ　１１５Q Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｍｌ　ｌｉｅ　Ｇｌ−＾ｒ＠　Ａａｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ロｅ　Ｐｒｅ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｅ　ｈｒ　Ｇ１ｎ４１１６　３７’０　３７５　Ｓｉｌ。

ＡＩＡＴＴＣＡｅＡＡＣＡＴＡＴＧＣＡＱＴＭＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＯｎＣＴＴＡＴＴＣＡＧＣＴＣ１２００ＴＡＴ　ＧＭ　ＧＩＡ　ＣＡＡ　Ｍｄｍ　ＱｅＴ　ＡｆＧ　ＫＴ　〜−ｕＴ　ＡＡＴ　ＭＹ　ＴＴＡ　口＾　−〜１　１２繍ＴＷＧｌｕ　ｃｌｙ　引−＾ｒ＠　Ａｌｅ　ｈａｔ　Ｔｈｒ　ＬＱ　ンユ　＾−＾ａｌｌ　Ｌ鈎し＆　ｓｔｙ　ＬＱＴＴＣＣＡＴＣＴＡＧＡＴｌｉ！ＴＡＴＡＣｅＴＣＣＶＯＣＡｅｅＴＡＧＡＧＧｆｌｉ↑ＡＣＣＡｅ＾＾＾Ｔｋ１ｍＰｈｅ＋＋ｌ５Ｌａ＋ＡｓｐＧｌｙｌｉｏＰｒｏＰｒｅ＾１ｍｅｒａ＾ｒ＠５ｌｙＶａｌＰｒｏｌｉｌｎＩＩｓ１シシＧｌｕＶｓｌＴｈｒＳｈｅ＾ａｐＩＩｓ＾ＱＡｌｅＡａｌｌＳｌｙｌｉｏ−嘗＾ｉ内ＶａｌＴｈｒ＾ＩＧＣＴＧＣＴＧＣＹ＆ＴｋＣＡＣＡＡＡＡＣＩ：ＴＣＴτ ＧＡ（２）配列番号４の情報（ｉ）　配列の特徴：（Ａ）　長さ・　５３６アミノ酸（Ｂ）型：　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー、　直鎮状（ｉｉ）　配列の種類：　タンパク質（汁）配列：　配列番号４゜＋ｌ＠ＩＩｓ　Ｍ１％　＠Ｉｌｌ　Ｐｒｅ　Ｔｈｒ　＾Ｉｓ　＾１−　＾１＠　ｌｌｓ　Ａｌｅ　Ｉｙ　組ｙ　Ｌａ＋　細ψ　ＬＷ市Ｚｏｏ　２０５Ｌ−＾ａｐＰｒｏｋｒ＾−１＾ｗＳｅｒ＾「１Ａ１ｍＬ＠Ｉ＾「１＾ｒ＠Ｌ嗜１１＾ｒ１τ酵引ｎＡｒｇ　Ａｌｍ　Ａｒｍ　Ｐｈ＊　Ｃ１ｕ　ａｌｕ　Ｆｉｌ＠　Ｃ’ｙｓ　ｌｌｅ＋　ａｓｓ　Ｔｙｒ　Ｐ？ｎ　Ａｒｍ　＾Ｖ　＄＠ｒ　Ｌ| ２６０ｕ５　２力特表十６−５０４１８７　（１２）（２）配列番号５の情報（ｉ）　配列の特徴：（Ａ）　長さ＝　５１３塩基対（Ｂ）　型：　核酸（Ｃ）　＃Ｊｌの数・　両形態（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：　ＤＮＡ（ゲノム）（江）特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置：　１．．５１３（ｘｉ）配列：　配列番号５：１ｉＱＴＡＴＴＭ＾丁＾ＴＡＡＡＣＴマＧｔＴＷＳＴＹＭＡＷマＱＴＴＴマＩＩＣＴＴＡＴＭＹＮｕＴＴｆＣＴＴＡｉＡＡＡＡ＾ｃ＾ＣＣＶＭＴｌｊＴｋＡＴＧＴＡＧＴＴＧＴＴＫＣｅＴＴτＡＴｃＡｅ４３２ＹＴＴＣ（ＴｌｊＡＴＡＣＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣ４Ｃ４ＴＴＣＴＡＡＳｌｌ（２）配列番号６の情報（１）配列の特徴・（、へ）長さ　１７０アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｄ）　トポロンー：ｌＩ直鎖状１１）配列の種類、　タンパク質（ｆｖ）　配列　配列番号６ａｌｖ　Ｇｌｕ　Ａｌｍ　Ａｌｅ　Ａｍｐ　Ｔｈｒ　細ｒ＾１ｍ　１ｒ１ｐ　呻Ｔｈｒ　しＶａｌ　ＬＷ　１ｉｌｕ　ＴＰｐＬ鈎Ｖｓｌ　Ａａｐ　Ｔｈｒ　引Ｙ＾ｒ―菫・ｌ　噂ａ釉組Ｙ＾ｌ・Ｖｓｌ　Ａ１・−Ｌ鈎＾１・ＡＨａｌｕ　ＧＩｙ　Ａｒｇ　ｌｉｅ　ＰＩＩｅ　５１ｙ　Ｃｙｍ　Ａｌｅ　ｌｉｅ　Ａａｐ＾聞ａ１Ｍ　Ａａｑ　Ｇｌｕ　ＨｅｒＡｌｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌａ＋　ＩＩｓ　Ｌｙｌ　−＾ｓ＋−＋　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　ｌｌｅ　ａｔ−陶【陶ｔ　ＬＹＩＣｌｕ　ＡＱ　ＧＩＶ　Ｇｌｕ　ｌｉｅ　１ｉｔｕ　ＬｕＩ　ｌｌｔ　Ａ１１ｌ　Ｃｙｓ　ｒｆ　Ｇｌｕ　Ｍｉｓ　Ｇｌｕ　ＬｕＩＪ　Ｌ＠P ＾Ｐ＠ＩＩ＋１＾１ａ＋＋ｅＶａｔ＾―ｐＣ１ｙＬｙｅ＾ｌ５Ｐｒｏ＾ｙＧｌｙＶａｌＴｙｒＩＩｓＧｌｙＣ１ｙＩｌｅＬｙｓＴｙｒＬｙｓＬ＆Ａｌｅ叡ｕＶａｌＬｙｅＡｐ書ＡＭＩｕｓｅＴｈｒＴｙｔＡａ＋ｖＭｅ　１７１１　Ｉｔｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｐｒｅ　Ａ聞＾−Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｖｓｌ　Ｖｓｌ　１１ｍ　Ｌｕ１ｌ　Ｔｙｒ　ＡＱＣｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｅ　Ｃ１ｕ　組ｎ　Ａｓｎ　Ｌ−＾１ａ　＾−ＡＩｅ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ム１ｓ　ｔｍ　＾１自Ｉｔ５　１５０　１５５　１６０（２）配列番号７の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ：　１４６４塩基対（Ｂ）　型：　核酸（Ｃ）　鎖の数　両形態（Ｄ）　トポロジー、　直鎖状（１１）配列の種Ｒ：　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｘ）　特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置・　１．．１４６４（ｘｉ）　配列：　配列番号７・ｒ　ｃＴｃ　ｅ閲＠ｌｊ　ＦＡＴ　ＣＫ　Ａｔｅ　ＴｋＡ　Ｉ４６４（２）配ダ１ｊ番号８の情報（ｉ）　配列の特徴。

（Ａ）　長さ　４８７アミノ酸（Ｂ）　型・　アミノ酸ＣＤ）　トポロン−Ｉ鎖状（１１）配列の種類・　タンパク質（ｉｖ）　配列：　配列番号８・Ｇｌｕ　Ａｓ　Ａｓｐ　Ｌｙｌ　Ｖａｔ　Ｇｌｕ　ＬｙＩＰｒｏ　Ｈｌｕ　呻　＾−ＬＷ　Ｖａｌ　ｌＪｕ　Ｌｎ　ρｐＨＧｌｕｍａｐＡｓＬｙｓＶｓＬ組ｖｌｙａＰ＋−ｅＧ−＾−−＾ａｌｌＬｙｅＶａｔｌｉｌｕＬｌｌｌＰｒｙｇ　＠　？ＳＷｆｕ１ｍＡｓＬｎＶａｔａｌｕＬｙｓＰｒｔ＋Ｇ−＾−ｐ＾ＱＬＱＶａｌａｌｕＬｙｅＰｒｅ！＠１０５　１１１１Ｇｌｕ　Ａ＆ｐｋｎ　ＬＹＩ　Ｖａｔ　Ｇｔｕ　Ｌｌｌｌ　ｐｒｅ　Ｇｌｕ　＾ −Ａｓｐ　ＬＷ　Ｖａｌ　Ｇ（ｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒ＋＋１６５　＋７’０　１７５！Ｉｙ　Ｐｒｅ　Ｐｒｏ　ＧＩＩ′ＩＡｒ＠　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　帽ｉｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｍ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　＾ｒ＠　Ｐｒｏ　Ｑｌｙ　偶匈ｈ４　シロ　２カＧＩｙ　１ｍ　Ｐｅａ　Ｇｌｒ＋　＾Ｎ　Ｐｎ　Ｓｌｙ　Ｍｉｓ　１ｉｌｙ　Ｐｒｅ　ｌ’ｎ　Ｇｉｎ　＾ｒ＠　Ｐｒｓ　Ｇｌｙ　ｌ１１ｍ２７５　票　あＧｌｙ　Ｐｒ・　Ｐｒ＠ＧＩＦＩ　＾ｒ＠　Ｐｒｅ　Ｇｌｙ　ＩＩｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｅ　叶ａ　ｌｌｓ　＾ｒ＠　Ｐｒｍ　Ｇｌｙ　Ｉｔｓ３０５　ｍ１０　３１５　１２０Ｍｅ　１ｉｌｙ　Ｇｌｙ　Ｉｌ釉Ｐｒ＋＋　シＦ　Ａｔｅ　ｃｔｙ　ｋｒ　Ｇｌｙ　Ａｔｅ　ａｌｙ　Ｓｌｙ　Ｌａ＋　＋１＠　ＰＭＩ巧　Ｊリ　３３５（２）配列番号９の情報（１）配列の特徴。

（Ａ）　長さ：　３６６塩基対（Ｂ）　型：　核酸（Ｃ）　鎖の数・　両形態（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類・　ＤＮＡ（ゲノム）（ＩＸ）特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置：　１．．３６６（ｘｉ）　配列：　配列番号９：Ｓ　Ｉｌｌ　１５ＥＴＥ’ＴＴＣＡＥＣＭＴＡＭＷ１ｍＷＣＡＭＷ＾Ｃ＾＾巴＾ｅａｃａＹＴＧＣＴｓ％＾１ａ　Ａｌｅ　ｋｒ　Ａｌａ　シイ　＾ｒｌ　＠Ｉｙ　＠（ｎ　＠ＩＲ＠ｌ＋＋　Ｐｒａ　・Ｌｒ＋　ｌ１ｌｓ　＾１ｍ　Ｌａ＋　Ｌａ＋２０　Ｂ　ＸＩｅｙａ　ｃａａ　α２　ｍＡ　甑講１１＋ｅｅ　ＣＡマ　−Ｗ　ｅＡａ　ｅ’ＴＡ　ｅＴｌｉ　臨ＣＡｅ　Ｍゴ　ａｌＪ　１４４Ｌ＠１　組ｎ　ＰＭ　組ｕ　Ａｌｅ　＾Ｉｓ　ＩＩａ　Ａｌａ　ＧＩＩＪ　１１１１％　Ｌ−Ｌａ＋　＾ｒ＠　Ｎｌａ　Ｔｈｒ　＾１ｍ３Ｓ　關　４Ｓ＠Ｃ１１Ｅ＾マａＣａ＾＾賜＾＾ｏｅ丁−Ａ■＾ｆｆｌローａＣ丁ＴｅＴＧ０１１＾＾ＧＴ丁ａｅｒａｅ丁Ｃ１９２轟１・＾ｌ５Ｙｎ！ｌ＋ａ引ＩＪ＾１ｍＡａｐＤｒ＠ＩＰＩＬａ＋Ｌａ＋Ｌａ＋ＬｙｅＬａ＋Ｌ・ｕＬ・ＵｅＭＯＪｅｃＡＣＡＣＡＴＴＣＡＴＡＣＧＧＡＧｇＴｍａＷＡＣＡｅｅＡＣＴτＧＣ＾２ｕ６ｓＦｏ　乃　閲ＣＴＡ　Ｍ−赫Ｔ　ＡＡ＠　Ｃ＠Ｔ　ＧＴＣロＷ　ＧＴＣ（ｉＧＴ　ｌｊＴ　父Ｔ　ズ１　りＩ　マＯα講　αＩ　２聞眞講　ＣｔＡ　α＄　ＶＣＴ　α請　ｃｔｃ　Ｔ儲　！リ　＾ム　３請　＾ω　α論　Ｎ４　暢　ｃｒｙ　ａ↑Ｃ１シＡｌａ＾１＾１ａ＄ｅｒＡｌａＶａｌｈｅ＄ｅｒ丁ｈｒ＾し・＾ｒ＠Ｃ１ｙＬｙｓ＾１ｍＬｍＶａｌ＾ｇｃｃｃＣＴＣＣＴＣｖＣＣＷＡＣＡＡマＣＩＪＡＴＴｅ％６＋１５　１２０（２）配列番号１０の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ、１２２アミノ酸（Ｂ）　型：　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（１１）配列の種類：　タンパク質（ｆｖ）　配列　配列番号１０：３Ｓ　關　４５Ｌ＠＋ＪＬｙｅ＾ａｐＬｙｓ＾ｔ＠ＶａｌＩｌｌａ管ｍｌ＠１ｙＵｙ＾１・＾亀 −Ａｌ・１−１ｒＡＬａ＾１ａｓｓ　鴨　ガ（２）配列番号１１の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ・　４１７塩基対（Ｂ）　型：　核酸（Ｃ）　鎖の数・　両形態（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類・　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｘ）　特徴。

（Ａ）　名称／鍵　ＣＤ５（Ｂ）　位置：　１．．４１７（ｘｉ）　配列　配列番号１１：＾Ｃ丁Ｃ丁Ｃ１Ｃ１１ｃＴＨＡｃｔＡｅｃｃＧｅＧｅｅｃＴｅ５ＫＴＫＴＧＣＡＣｅＡｌａＣＣＡＧＣＡ４ＪＴｈｒＬ＾（・＾１魯＾ｌ５ＰｒｅＡｌｅＰｒｏＳｅｒ＾（・＾Ｉｓ＾ｌ５ＰｒｏＡｌ・ム１ａＡｌ自５　ＴＯｌ５ＣｅＡＧｌ講　α講　α（α工　α講　α講　３講　３講　α講　α論　−３講　αゴ　α講　就講　％＾１ｍ　Ａ【・　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｐｒａ　Ｐｍ　Ａｌｅ　ＡＩＩＩ　Ａｌａ　ＰＭ　Ａｌａ　Ａｌｅ　＾１ａ　Ｐｒｅ　Ａｌｅ　＾１・２ｏ　お　箕 −侃講　クエ　は４　α工　ＧＡＴ　α＊　Ｗ　ａａｃ　〜に　Ｍに　−１αｔ　α講　α講　Ａｌ（Ｉ縞幅　ＧＴＧ　Ｗ　＠！　ｌＸ１Ｃ−αに　αｆＴ鋪　 −４αゴ　ロＣａマＣＯｌ　−α論　１ηＣＡＡＩＧＣｅｌＪＧＡＴＧＭＴ＆ＹＧＧＣＣｅＡＡＡｊＡＡＴＴＣＣＡＧＣＡ＠ＣＡＡｌｊａＴｔＧＣＱ２ｕＴｏｏ　１０５　＋１０？１７ｉ　Ｇｕ　ｅＡＡ　ＣＡａ　城ＣＡＧ　ＣＡＧ　ＣＯＧ　ＣＴＡ　Ｍｅ　ＧＬｊ　４１７Ｔｒｐ　ａｌＪ　Ｇｌｎ　１ＪｎＳｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　＾ｒ＠　Ｌ報Ｌｎ　Ｇｌｙ１関　１３ｓ（２）配列番号１２の情報（ｉ）　配列の特徴・（Ａ）　長さ　１３９アミノ酸（Ｂ）型、　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：　タンパク質（ｔｖ）　配列：　配列番号１２（２）配列番号１３の情報（１）配列の特徴。

（Ａ）　長さ・　５８５塩基対（Ｂ）　型・　核酸（Ｃ）　鏑の数：　両形態（Ａ）　名称／ＩＩ：　ＣＤ５（Ｂ）　位置＋　１．．５８５（ｘｌｉ）配列：　配列番号１３ αχ　α＝　αゴ　叙ゴ　Ｃαゴ　―　賦！　ＣＴＣは＝　α誦　〜−α講　〜に　Ｔｌ１ｅ　α講　４Ｌ−Ｑｌ＆　０１１％　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｌ’ｎ　１１＊　＾ｒ＠　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖｓｌ　Ｌｌｌｌ　Ｌｍ　Ｐｒｖ　Ｖａｌ　＾１＾ＣＴ　Ｗ　ＴＧＡＴｈｒ　Ｇｌｙ　５８５（２）配列番号１５の情報（２）配列番号１４の情報（１）配列の特徴：（Ａ）　長さ　１９４アミノ酸（Ｂ）型・　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー：　直鎮状（ｉｉ）　配列の種類　タンパク賀（汁）配列：　配列番号１４：Ｇｌｕ　Ａｌ５Ｐｅａ　ｅｒａ　Ａｔ＠　ＬｍＩＪ　Ｌａ＋　Ｌａ＋　Ｌａ＋　Ｌａ＋　Ｌ報ＬＭ　−Ｐｒｏ　ａｌｒ＋　Ｌｎ（２）配列番号１６の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ　３１６塩基対（Ｂ）　型　核酸（Ｃ）　鏑の数　両形態（Ｄ）　トポロジー、　［鎖状（１）配列の特徴（Ａ）　長さ　１０５アミノ酸（Ｂ）　型、　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（２）配列番号１７の情報（ｉ）　配列の特徴・（Ａ）　長さ　２８４塩基対（Ｂ）　型　核酸（Ｃ）　鎖の数　両形態（Ｄ）　トボロンー：　直鎖状（１１）配列の種類　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｘ）　特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置　１．．２８４（ｘｌ）配列・　配列番号１７：ｓｏＳう６０ｋｒ　Ａｌ・　＾【・　＾１・　Ａｌｍ　Ａｌａ　＾ｒ＠　ｈｅ　Ｑｌｎ　Ａｌｍ　Ｑｌ＋ａ　Ｔｈｅ　ａｔ−＾ｔ―＆ｌ　Ｎ（２）配列番号１８の情報（ｉ）　配列の特徴。

（Ａ）　長さ、　９４アミノ酸（Ｂ）　型　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：　タンパク質（ｔｒ）　配列：　配列番号１８：ＰＰ＠ｅｌｕ！１１．ＩＧｌｎＵｎ＾１畠＾＋ａＧｌｕ＾−Ｌａ＋ＧｌｕＬａ＋＾１ｍ＾ｌａＬｙｅＧ１ｗｓｏ　ｓｓ　１９ｗ　Ａｌｅ　Ａｌｍ　ＡＩＭ　＾１・　Ａｌａ　Ａｒ１　Ｓｅｒ　１ｌｌＩＩ　ＡＩｓ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　組ｕ　組１ｊ　匍（２）配列番号２１の情報（１）配列の特徴：（Ａ）　長さ：　４１１塩基対（Ｂ）　型・　核酸（Ｃ）　輪の数：　両形態（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：　ＤＮＡ（ゲノム）（ｊ、ｘ）　特徴：（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置：　１．．４１１（ｘｉ）　配列：　配列番号２１ＡＱｅＡｌゴ　就講　α講　−−ロｃ　ａａｃ　ａｔに　Ｎに　ａｗｅ　ａｃｅ　Ｗ　Ｍ工　＾讐　α講　α論　鑓１　５　鵞０１５Ｍゴ　ｃ′Ｔｅ　ＧＴＣＧＥ　ＡＧｅ　ｔｔ−ｔ　ｌｊｅ　ＥＣ６Ｍ　−＠ＣＴ　乙−（ｉＡＡ　Ｇｌｔｈ　ＡａＣＡＱｅ　％Ｔｈｒ　ＬＪＩＪ　Ｖｓｌ　組ｙ　５４ｆｌｉｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　＾１−　Ａｌａ　ＧＩｕ　＠ｌ＋ａ　Ｇｌｕ　−げ　シｆｌｅｒ　ｋｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　＾ｒ＠　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｑｌｕ　Ｇｌｕ　組−Ｓｌｙ　ｋｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　−げｎ　４１１　４５ｍ　ａｔ　ｃｃａ　ｏ＋ゴ　乙−巳−Ｗ　ａｃｅ　ａｏｃ　ａｘ　ａａｃ　纒　にＣαｚ　ａｃｅ　ａｃａ　＋ｔｚＴ１１ｒ　ＡＰ＠　４１ｍ　Ａｌｅ　Ｇｌｕ　Ｓｌｕ　＠ｌｕ−ケｋｒ　細ｒ　ｋｒ　ｋｔ　Ｔｈｅ　＾ｒ＠　ｓｅｒ　＾ｒ１ｓｏ　ｓｓ　ｇｇ　ＡＧｅ　ＡＲＡＣＧ　Ｔｅｅｇ　ｇ　ＡＣｅ　ＧＴＣ！　ｅｅｃ　（ｊＪ　ｅＴＴ　ｅｒｅ　ＴＴｅ　Ｇｌｊ　２４０ｂｒ　ｋｅ　細ｒ　Ｔｈｒ　ｌｅｒ　Ｔｈｅ　Ｔｈｒ　Ｔｂｒ　Ｖａｌ　４１ｍ　Ｐｒｏ　＾Ｉｓ　Ｌ鈎Ｌａ＋　Ｐｈｅ　５ｌｙ６５　７０　ｒ５８０ａｃｅ　α−ａｒｃ　紅ｃｃａａ　−鎮ぞ　−４３ｔ　鍼Ｅ　ＡＧＣｗｔ　ａｃｅ　ａａｅ　献ｘａｃｃ　ｚａａｈｅ　Ｇｌｙ　Ｖａ【　ｉｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｌｍ　Ａｌｅ　ＧＩｕ　１ｉｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　シげ　シげ　細「　細「細ｒ＾ＣＣＧＡＡＱＣ＾ＧＣＴＷＣＯＴＡ丁Ｃ＾ＣＣムＧＣ＾ＱＣ以ムＧＣ＾ＣＣロロＣＣ口＾１ｃｅｎａＴｈｒ　Ｇｌｕ　＾Ｉｓ　Ａｌａ　Ｇ−＾４　ｌｊｅｋｒ　ｋｒ　ｋｒ　Ｓｅｒ　細ｒ　Ｔｈｒ　＾ｒ−組１　＾１・−μ　【１；Ｔ　ＧＭＴ＾？　！　＆１に　ａｃｅ　献に　Ｎ−献−３講　α−己−ロＴＧ４１ｉ　 αに　シー１ｉｅｕＡｒ１Ｇｂ＋ＴＹｒｋｒｈｅＢａｒｋｒＹｈｒ＾１＾１辱＾！ａＧｌｕＩＩｓＧ−＾ｒ−ＡＧＣｉｃｅ　Ｍｔｖｃｅ　ａｅ’ｒ　ａｃａ　ａｃｔ　ｃ’ｒｅ　ｖａ　４ｎｋｔ　Ｓｅｒ　ｌｅｒ　ｋｒ　ｙｈｒ　＾ｒ嘗　Ａｌｍ　ＶＳｌｌｓｏ　＋３ｓ（２）配列番号２２の情報（１）配列の特徴。

（Ａ）　長さ　１３６アミノ酸（Ｂ）　型：　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー：　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類・　タンパク質（ｉｔ）　配列：　配列番号２２：Ｓｅｒ　ＴＴ＋ｔ　Ｍｌ・　＾Ｉｓ　Ｕｕ　Ｉｔｓ　ｋｒ−イｌｅｒ　ｋｒ　ｎｔ　ｂｅ　ｎｒ　ＩＩｓ　＾ｔ−＾（・Ｉ　Ｓ　１０　ｌ５ＴｈｒＩＪＩＩＶａｌＳｌｙ＆＃＠ＬｙＶａＬｒｈｅＧｌｕ＾１・＾ｌ５Ｇｌｕｌｉｌｕ＠ｂ＋ｋｒＳｅｒ２ｏ　δ　鳶ｌｅｒ　ｋｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　＾ｒ・　＾（・　Ａｌａ　＠ｌ＋ＪＱｌｕ　ａｌｕ　Ｇｌｙ　細ｒ　５ｅｒ−ケｔａｒ　ｈｅ３ｓ　帷　４Ｓｔｈｅ　＾１　＾（・　ＡＣｅ　１ｌｌｕ　ａｌｕ　ｌｌ＋　＄＠ｒ−ｗ−−８ｅｒ　Ｓｅｒ　マｈｒ　Ａｒ１　−ケ　＾ｒ１＄０　５５　６０１ｅｒ　ｌｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　細ｒ　Ｔｈｒ　Ｔｂｒ　ｉｈｒ　Ｖａｌ　＾１―　卸・　Ａｌａ　Ｌｓａ　ｌｊＪ　Ｎｌｌ　組ｙ６５　７０　乃　閣 −ＷＣｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　ｌｌｕ　４１ｍ　Ａｌｅ　Ｇｌｕ　Ｑｌｙ　ｈｅ　ｋｒ　細ｒ　Ｓｅｒ　ｋｒ　ｋｒ　ｋｒＴｈｒ　ＧＩＩＩ　＾【・　４１ｍ　１ｉｌｕ　＾ｒ＠　Ｉｌｅ　細ｒ　Ｓｕｒ　ｋｒ　ｋｒ　Ｓｅｒ　ｒｈｒ　ｈｒ＠　＾（暑　＾ＩｓシｗＳｉｒＳ・ｒＳｅｒ？！＋ｒ＾ｒ１＾１ａＶａＬｊＷ　１３５（２）配列番号２３の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ・　１２３塩基対（Ｂ）　型、　核酸（Ｃ）　鎖の数　両形態（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（ｉｉ）　配列の種類・　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｘ）　特徴。

（Ａ）　名称／鍵・　ＣＤ５（Ｂ）　位置−１，、１２３（刀）配列・　配列番号２３Ｉ　Ｓ　ＴＯ＋５ＧＴＴ　ｃＡＴ　ｃＭＧＭＴ　ＷＴ　ＣＡＴ　＾ｆＴ　ｎｃ　ｆＭ　７７＾　ＴｅＡ　ＭＹ　＾マＴ　Ｗ　ＭＴ　ＡＡｅ　％Ｖａｌ　＠Ｉｓ　Ｇｌｕ　細ψ　＾ｒｗ　ＩＩｍ　ｌｊｅＰｋｅ　Ｔｙｒ　Ｌｍ　ｋｒ　ｋｒ　ｌ１ｃａｌ＋ａ　〜 −−−Ｖ・１　＾ｒ＠　ａｌｕ　ＴＦ　ＩＩ−＾１　Ｐ〜　ｌｉｔυ（２）配列番号２４の情報（ｊ）　配列の特徴：（Ａ）　長さ＝　４０アミノ酸（Ｂ）　型、アミノ酸（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類　タンパク質（ｊｖ）　配列、　配列番号２４Ｍｅ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　Ａｒ１　Ａｌｅ　ＡＱ　Ａａｐ　Ｖａｌ　＾−Ｐｈｅ　ＡＱ　Ｇｌｕ　Ｇｌｔｈ　Ｇｌｎ　＾１　＾ｔ−＋　５　１０　ｌ５ＶａｔＩＩｓＣ１ｕＡａｐＡｒ＠ｍ１ｓＩＩＩＩＰＩＩｅＴｙＬａ＋Ｓｅｒ＾ｙＩｌｅＣ１ｕＡ＄６ＡａｎＶａｌ＾ｒ１ＣＩＩＩＴｙｒＮｌａ＾ｒ＠ＰＦ＠Ｇｌｌ＋３５　＆。

（２）配列番号２５の情報（１）配列の特徴：（Ａ）　長さ：　４４２塩基対（Ｂ）　型　核酸（Ｃ）　鎖の数二　両形態（Ｄ）　トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類：　ＤＮＡ（ゲノム）（ｉり特徴（Ａ）　名称／鍵：　ＣＤ５（Ｂ）　位置＋　１．．４４２（Ｘｌ）配列・　配列番号２５・（２）配列番号２６の情報（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ、　１４７アミノ酸（Ｂ）　型　アミノ酸（Ｄ）　トポロジー・　ｉ鎖状（１１）配列の種類・　タンパク質（ｔｖ）　配列　配列番号２６Ｆｉｇｕｒｅ　１配列番号ＩＥ、　二込シー抗　原　！Ｔｉｃ−４Ｃ遺伝子のヌクレオチド配列Ｆｉｇｕｒｅ　２配列番号２Ｌ、二込シ＝　抗　ｌ′ＪＰＩＥ−４Ｃのアミノ酸配列ＡｓｎＧｌｕＧｌｙＩｌｅＧｌｕＡユａＧｌｙＡｒｇＧｌｎＧ１ｙＴｈｒＧｌｕＣｙｓＬｅｕＬｅｕＡｒｇＧｌｙＧｌｙＬｙｓＬ＠ｕＰｈｅ　Ｘ　１ｅＧｌｕＶａ　１Ｌｅｕ　Ｉ　１ａＡｓｐＡｌ　ａＳｅｒＬｙｓ　Ｉ　１ａＡｌａＡｌａＴｈｒ入ＣｇｃｙＳ　ＬｅｕＬｅｕkｅｕＡｌａＡｌａ　Ｓｅ　ｒＳｅ　ｒＬｙｓＡｓｐＩ　ｌｅ　１１　ｅ　Ｉ　ｌａＡｒｇｃｌ　ｎＬｅｕＰ　ｒＯＴｅｌ／ｒＴｈ　ｒＧｌｎＡｓｐＬｙrＬ＠ｕＴ”ｆｒＬ ”／５ＡｌａＡ１ａノｕａ−ＤｒｏＴｙｒＳｅｒＡユａＡ１ａＡｌａＧｌｎＧ１ｎＧｌｎＰｒｏｓｅｒＴｙｒＧｌｙＡｌａＰｒｏＰｒｏＡｌａＦｉｇｕｒｅ　３配列番号３Ｌ、ユよ一つ　抗　原　ｒ５ｃｍ５ｃ遺伝子のヌクレオチド配列２５０　２６０　２７０　２８０　２９０　３００゜５’　ＧＧＧＴＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＧＡｆＧＧＧＡＧＡＴ（、入へＴＧ丁丁ＣＴＴＡＴＣ丁ＴＴＧＡＴＡＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧ　３f ５′　Ｃ入ＣＡＴＴＣＡＴＡＧＴ丁τＡＴＡＴＧＡＧＧＧＴＡＴＴＣＡＴＴＡＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＴＴＡＴＣＴＡＧＧＧＣＴＡＣＡＴＴＣR’ ５’ＧＡＧＣ入Ａ丁ＴＣＴＧＴＡＴＧＣＡＴ’ＴＡ’ｆＴＴＣＣＧＴＡＡＣＴＣＴＣＴＴＡτＡＣＣＣＧＴ入ＧＭＡＡＡＧＴＡＣτＭ入Ａ３f ７９０　８００　８１０　８２０　８３０　［１４０Ｆｉｇｕｒｅ　３続きＦｉｇｕｒｅ　４配列番号４ Σ、ｍａｘｉｍ　抗　ｐ　ｍｃ−５ｃのアミノ酸配列Ｆｉ９ｕｒ＠！　４続きｒ幻ｎにｅ５配列番号５！６匹込シ瀘　抗　原　に−３０ｃ遺伝子のヌクレオチド配列Ｆｉｇｕｒｅ　６配列番号６５．１２４ｍ　Ｂ　原ｍｃ−３０ｃのアミノ酸配列ＡＸ　ａ　ＬｅｕＴｙ　ｒＡｓｐＧ　ｌ　ｕＧｌｕＬｙｓＧｌ　ｕＧｌｎＡｓｎＬｙｓＡｌ、ａＡｓｐＡ１酊ａｕＴｈｒＴｈｒＡｌａＬｅｕ`ｌａＰｈａＡｌａＧｌｕＴｙｒＬｅｕＴｙｒＧｌｎＧｌｙＧ１ｙＰｈｅ會貴１１５′ Ｆｉｇｕｒｅ　７配列番号７五、ユαシコク口−７ｒｒｉｃ−３５ｃ遺伝子のヌクレオチド配列Ｆｉ兜ｒｅ　７続きＦｉｇｕｒｅ　８配列番号８ Σ、ユ込−−クローン式−３５０（７）アミノ酸配列ＶａｌＧｌｕＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｓｐＡｓｐＬｙｓＶａ　１ＧｌｕＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｓｐＡｓｐＬｙｓＶａ　ＩＧｌｕＬｙｓＰ　ｒ。

ＧｌｕＡｓｐＡｓｐＬｙｓＶａ　ＩＧｌｕＬｙｓＰ　ｒｏＧｌｕＡｓｐＡｓｐＬｙｓＶａ　Ｉ　ＧｌｕＩ、ｙｓＰｒｏＧｌ　ｕＡｓｐＡｓｐkｙｓ庄ＪシーＰ　ｒｏＧｌｎＡｒｇＰ　ｒｏＧｌ　ｙＨｉ　ｓＧ　１ｙＰｒｏＰｒｏＧｌ　ｎＡｒｇＰ　ｒｏＧｌ　ｙＨｉｓＧ　ｌ　ｙＰ　ｒｏo　ｒｏＧｌ　ｎＡｒｇＰ　ｒｏＧｌ　ｙＨｉ　ｓＧｌ　ｙＰ　ｒｏＰｒ　ｏＧ　１　ｎｊｌｈｇＰ　ｒｏＧｌｙＨｉ　ｓＧｌ　ｙＰｒｏＰ　ｒｏＧｌ　ｎＡ窒■o　ｒｏＧｌｙＨｉ　５ＧｌｙＰ　ｒｏＰ　ｒｏＧｌｎＡｒｇＰｒｏＧｌ　ｙＨｉ　ｓＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｎＡｒｇＰｒｏＧｌ　ｙＨｉｓＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧ撃■ ＡｒｇＰ　ｒｏＧ　１　ｙＨｉ　ｓＧｌ　ｙＰｒｏＰ　ｒｏＧｌｎＡｒｇＰｒｏＧｌｙＨｉ　ｓＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｎＡｒｇＰｒｏＧｌ凾gｉ　５Ｇｌ　ｙＰ　ｒｏＰｒｏＧｌｎＡｒｇＰ　ｒｏＧ　ｌ　ｙＨ４５Ｇ１ｙＰｒｏＰｒｏＧ１　ｎＡｒｇＰｒｏＧｌｙＨｉ　５ＧｌｙＰ　ｒｏＰ@ｒｏＧｌｎｒ１質ｅ８続きＳｅｒＬｅｕＡｒｇＧｌｙＴｙｒＡｒｇＭｅｔ”””Ｆｉｇｕｒｅ　９配列番号９五、２ユ吐巨　抗　原　ｔｑ−３＠遺伝子のヌクレオチド配列５’　ＧＡＡＴＴＣ３’ Ｆｉｇｕｒｅ　１０配列番号１〇五、２ユ江ム　抗　原　ｔｇ−３ｅのアミノ酸配列ｌｕＰｈｅＦｉｇｕｒｅ　１１配列番号１１Ｆｉｇｕｒｅ　１２配列番号１２Ｌ、２ユ吐−抗ｐ　ｔｃ−１１ｅのアミノ酸配列Ｆｉｇｕｒｅ　Ｌ３配列番号１３Ｅ、−二一一　抗　原　ｔｃ−２３ｇのヌクレオチド配列Ｆｉｇｕｒｅ　１４配列番号１４Ｅ、臼Ｊ吐−抗　原　ｔｃ−２３ｇのアミノ酸配列Ｆｉｇｕｒａ　ｉｓ配列番号１５ｚ、２α誌ム抗　原　ｔｃ−２６ｈのヌクレオチド配列Ｓ’　ＧＴＧＴＣＧＴＣ入Ｇ八ＧＴＣ丁丁へ０Ｆｉｇｕｒｅ　１６配列番号１６２−シーａＬＬａ　抗Ｈｔｃ−２６ｈのアミノ酸配列ＶａＬＳｅｒＳｅｒＧｌｕＳｅｒＦｉｇｕｒｅ　１７配列番号１７五、扛α吐ム　抗　原　ｔｃ−３０ｃのヌクレオチド配列Ｆｉｇｕｒｅ　１８配列番号１８五、扛Ｊ吐−抗　原　ｔｃ−３０ｃのアミノ酸配列Ｆｉｇｕｒｅ　１９配列番４１９Ｌ００ユ吐ム　抗　原　ｔｃ−３２ｃのヌクレオチド配列Ｆ’ｉｇｕｒａ　２０配列番号２〇五、２ユ吐ム　抗　原ｔｃ−３２ｃのアミノ酸配列ＧｌｕＨ１ｓＳｅｒＳｅｒＳｅｒＳｅｒＴｈｒＦｉｇｕｒｅ　２１配列番号２１Ｌ、シーよ−１抗　原　ｔｃ−３３ｃのヌクレオチド配列Ｆｉｇｕｒｅ　２２配列番号２２２、ジロー−抗　原　ｔｃ−３３ｃのアミノ酸配列Ｆｉｇｕｒｅ　２３配列番号２３旦・シーａ二１　抗　凍セｃ−３５ｃのヌクレオチド配ダ１１Ｆｉｇｕｒｅ　２４配列番号２４２、シＷ二Ｕ１　抗　原ｔＣ−３５Ｃのアミノ酸配列Ｆｉｇｕｒｅ　２５配列番号２５Ｅ、ｒ、、ＪＪｍ　抗　原　ｍｅ−３７ｃ　ノヌクレｔ　チＦ配ＦＩＩＦｉｇｕｒｅ　２６配列番号２６Ｅ、ユ込立コ　抗原ｍｅ−３７ｃのアミノ酸配列τｒｐＰｒｏＴｙｒＰ　ｒｏＡｒｇＬｅｕＧｌｙ国際調査報告フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｒ１：９０）（７２）発明者　ストラスバーグ、ロバート・エルアメリカ合衆国メリーランド２０９０６、シルバー・スプリング、ハーザウエイ・テラス２８１彊（７２）発明者　ウィルソン、スーザン・ディーアメリカ合衆国メリーランド２０８５３、ロックビレ、ダブネイ・ドライブ４５０７番Ｉ（７２）発明者　ポープ、シャロン・エルアメリカ合衆国メリーランド２０８７９、ガイセルスバーグ、ウィンドブロック・サークル１２０番（７２）発明者　ストラスバーグ、スーザン・り一アメリカ合衆国メリーランド２０９０６、シルバー・スプリング、ハーザウェイ・テラス２８１潜（７２）発明者　レートヘル、ヴオルフガングドイツ連邦共和国デー−６０７２ドライアイヒ、オーデンバルトリング１５６番

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号１に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。２．配列番号２に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。３．配列番号３に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。４、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。５．配列番号５に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。６．配列番号６に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。７．配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。８．配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。９．配列番号９に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。１０．配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。１１．配列番号１１に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。１２．配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。１３．配列番号１３に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。１４．配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。１５．配列番号１５に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。１６．配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。１７．配列番号１７に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。１８．配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。１９．配列番号１９に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。２０．配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。２１．配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。２２．配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。２３．配列番号２３に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。２４．配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。２５．配列番号２５に示されるヌクレオチド配列を含有するクローンされたＤＮＡ分子。２６．配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含有する抗原タンパク質。２７，請求項１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、又は２５に記載のヌクレオチド配列を発現させることのできる調節領域の制御下に該ヌクレオチド配列を含有している発現ベクター。２８．該ベクターがプラスミド、バクテリオファージ、ウイルス及びそれらのハイブリッドの中から選ばれる請求項２７に記載の発現ベクター。２９．請求項２７に記載の発現ベクターによって形質転換された、細菌、酵母、真菌、昆虫及び哺乳動物細胞の中から選はれる宿主細胞又は宿主生物。３０．請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、又は２６に記載の抗原タンパク質を担体又はアジュバントと共に含有している、鳥類コクシジウム症に対して鳥類を免疫するためのワクチン。３１．請求項３０に記載のワクチンの有効量を鳥類に投与することを特徴とする、烏類を鳥類コクシジウム症に対して免疫する方法。３２．抗原タンパク質を注射によって、又はそれを飼料と混合することによって投与する請求項３１に記載の方法。３３．請求項２７に記載の発現ベクターによって形質転換した生微生物を含有する、鳥類コクシジウム症に対して鳥類を免疫するためのワクチン。３４．請求項３３に記載のワクチンを鳥類に投与することを特徴とする、鳥類コクシジウム症に対して鳥類を免疫するための方法。