JPH06503068A

JPH06503068A - 細胞静止及び抗ウィルス剤として有用な新規５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン及びそれらの類似体

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Publication number: JPH06503068A
Application number: JP3518509A
Authority: JP
Inventors: クン，アーネスト; メンデレイブ，ジェローム
Original assignee: オクタマー，インコーポレイティド
Priority date: 1990-10-19
Filing date: 1991-10-16
Publication date: 1994-04-07
Anticipated expiration: 2015-05-22
Also published as: WO1992006687A1; DK0553248T3; GR3022041T3; US5519053A; DE69122259D1; US5484951A; ATE142876T1; JP3042711B2; AU8872991A; DE69122259T2; CA2094121A1; EP0553248A1; EP0553248B1; ES2095332T3; CA2094121C

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】細胞静止及び抗ウィルス剤として有用な新規５−ヨード−６−アミノ−１，２− ベンゾピロン及びそれらの類似体発明の分野本発明は一般的に、新規５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン及びそれらの類似体、可能性ある、選択的且つ安全な細胞技術の情況及び関連する開示はとんどの悪性増殖及びウィルス感染の存在する化学療法処理は、ひじょうに毒性の物質及び抗ウィルス剤にほとんど限定されている。

５−ヨード−６−アミツベンゾビロンはこれまで知られておらず、又は記載されてもいない。文献に見出されるわずかに関連する化合に記載される３−アミノ− ６−ヨード−８−メトキシ−１，２−ベンゾピロンである。これらの化合物は、それらの鎮静及び睡眠効果されている。解熱、睡眠、血圧降下及び抗アドレナリン作用が報告いては報告されていない。

前駆体分子、すなわち１，２−ベンゾピロン（クマリン）は、アデノシンジホスホリボーストランスフェラーゼ（ＡＤＰＲＴ）　、すなわち悪性細胞に存在するＤＮＡ−結合核タンパク質の阻害リガンドであることが示されている（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）、　８４　：　１１０７（１９８７乃。

最近、６−ＡＲＰは、触媒的に効果的なりＮＡ末端をまた結合する同じ部位でＡＤＰＲＴに特異的に結合することが知られている。６−ＡＲＰ及びＤＮＡの両者が、ＡＤＰＲＴＬ−の同じ部位のために競争することは明白である。これらの結果はＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、　２１２　：　７３（１９８７）！：開示されている。

最近、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンは、著しく低い毒性物質であり、さらに細胞培養物及びヒト血液において腫瘍発生及びウィルス複製のひじょうに効果的なインヒビターであることが見出された。それらの治療範囲は、癌増殖の抑制及び阻害のために及び最つども危険なウィルス感染、たとえばＡＩＤＳ及び肝炎感染の処理のために特に有用であるように思われる。

要約本発明の１つの観点は、下記式：〔式中、ＲＩＩＲｔｌＲｊ％又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規細胞増殖抑制性、抗腫瘍形成性及び抗ウイルス性化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩に関する。

本発明のもう１つの観点は、下記式：Ｃ式中、Ｒ，、Ｒ２，Ｒ，、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規細胞増殖抑制剤及び抗ウィルス剤及び医薬的に許容できるそれらの塩にも関する。

本発明のさらにもう１つの観点は、下記式：〔式中、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の治療的有効量を哺乳類に投与することによって哺乳類におけるウィルス感染を処理するための方法にも関する。

本発明のさらにもう１つの観点は、下記式：〔式中、ＲＩＩＲｔｌＲ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の治療的有効量を哺乳類に投与することを含んで成るヒトにおける腫瘍形成増殖を阻害し又は抑制するための方法にも関する。

本発明のさらにもう！つの観点は、下記式：〔式中、Ｒ＋　、　Ｒｘ　、Ｒ１、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の治療的有効量を哺乳類に投与することを含んで成る、哺乳類におけるウィルス感染の処理方法にも関する。

本発明のさらにもう１つの観点は、下記式：〔式中、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の治療的有効量を哺乳類に投与することを含んで成る、哺乳類における腫瘍形成増殖を阻害し、又は抑制するための方法にも関する。

さらに本発明のもう１つの観点は、下記式：〔式中、Ｒ＋　、Ｒｔ　、Ｒｚ　、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の調製方法にも関する。

本発明の最後の観点は、下記式：〔式中、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる新規化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩の調製方法にも関する。

図面の簡単な説明図１は、５−Ｉ−６−ＡＢＰ及びその前駆体６−ＡＢＰのＨＮＭＲスペクトルを示す。

図２は、ＡＡ−２細胞における６−ＡＲＰに比較しての５−ｌ−６−ＡＢＰ　ニよルＨＶ［（ｐ２４）阻害を示す。

図３は、６−ＡＲＰに比較しての５−ｌ−６−ＡＢＰのＭＴ２細胞におけるシンシチウム形成に対する阻害効果を示す。

図４は、ｐ２４タンパク質形成により測定される６−ＡＲＰに比較しての５−Ｉ −６−ＡＢＰの抗−１（ＩＶ活性を示す。

図５は、ＡＡ−２細胞に対するＨＩＶの細胞変性効果によりアッセイされる６− ＡＢＰに比較しての５−Ｉ−６−ＡＲＰの抗−ＨＩＶ活性を示す。

図６は、ＭＴ−２細胞に対するＨＩＶの細胞変性効果によりアッセイサｔ’Ｌ６６−ＡＢＰ　ｉ：比較しテ（１’）５−　ｌ−６−ＡＲＰ　（７）抗−ＨＩＭ活性を示す。

発明の詳細な説明５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン又は５−ｌ−６−ＡＢＰ“は、それぞれ、クマリン炭素３．　４．　７及び８に対応するＲ、、Ｒ２，Ｒ２又はＲ４が水素、ヒドロキシ、アミ八アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によってはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はノハロにより置換されたフェニルにより置換されているか又は置換されていない式（Ｉ）の化合物を言及する。

“５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロン”又は“５−１−６−ＮＯＢＰ“　（式ＩＩ）は、クマリン炭素３，４．７及び８に対応するＲ＋　、Ｒｘ　、Ｒｓ又はＲ４がそれぞれ、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、ハロ、シクロアルキル又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、７１０又はヒドロキシにより置換されフェニルにより置換されているか又は置換されていない５−ヨード−６−ＡＢＰの代謝物を言及する。

“ＡＤＰＲＴ”は、ポリ（ＡＤＰ−リポース）ポリメラーゼ（ＥＣ２，４，９９）としても知られているアデノシンジホスホリボーストランスフエラーゼ、すなわちＡＤＰ−リボースの重合を触媒する真核生物の特定のＤＮＡ結合核タンパク質を言及する。酵素工程はＤＮＡに依存する。そのＡＤＰＲＴ酵素は、下記態様で６−アミノ−１，２−ベンゾピロンにより変性される。

調製方法５−ｌ−６−ＡＢＰ及びその代謝物５−　Ｉ−６−ＮＯＢＰ　（ここでＲ１１Ｒ２，Ｒｓ及びＲ４は水素、ヒドロキシ、アミ八アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によってはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルである）の調製のための一般的反応は、下記反応スケムｌに示される。

その反応スケムｌは、５−ｌ−６−ＡＲＰ及びその代謝物５−■−６−ＮＯＢＰの合成に含まれる段階を図的に示す。

典型的には、出発化合物（Ａ）６−ニトロ−１，２−ベンゾピロンは、化合物（ｍ　５−１−６−ＮＯＢＰに段階３により容易に酸化される化合物（１）５−１ −６−ＡＢＰを得るために、第５炭素上を段階２によりヨウ素化される化合物（Ｂ）６−ＡＢＰに段階１により還元される。

段階Ｉ　Ｆｅ／ＫＢＨ４段階２　ニーＣ１段階３Ｈ２０□ 本発明の５−ヨード−６−アミツベンゾビロンは、下記一般式：〔式中、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，及びＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミ八アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によってはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換され得るフェニルから独立して選択される〕で表わされる化合物である。

これらの化合物は新規である。この種の化合物の文献におけるこれまでの記載の例はない。

５−ｌ−６−ＡＲＰ前駆体６−ＡＢＰ化合物（Ｂ）の合成は、酢酸中、鉄粉末による、Ｐｆａｌｔｚ　＆　Ｂａｕｅｒがら得られた６−ニトロクマリン化合物（Ａ）の自発的還元、続く濾過、酢酸の回転蒸発、エタノール中への抽出及びエタノールからの結晶化（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　２１２　＋　７３（１９８７）に使用される方法）により、又は水性メタノールに懸濁された炭素上パラジウム触媒を用いての水素化硼素カリウムによる置換されていない５−ヨード−６ −アミノ−１，２−ベンゾピロンは一般的に、温アルコール、たとえばメタノール、エタノール、プロパツール及び他のアルコール、又は氷弱酸、たとえば氷酢酸、好ましくはエタノール中で、好ましくは１０〜１５分間、１〜２当量のヨウ素試薬、たとえばヨウ素モノクロリドとの反応により、遊離塩基又は塩酸塩のいづれかとして６−アミノ−１，２−ベンゾピロンのヨウ素化により調製される。

他方、それらの化合物は、温アルコール中、ヨウ素及びヨウ素酸の組合せとの１０分〜６時間、好ましくは１〜２時間の、又は塩基、たとえば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は好ましくは水酸化アンモニウムに溶解されたヨウ素との１０分〜６時間、好ましくは１〜２時間の１５℃〜４０℃、好ましくは室温での６ −ＡＲＰとの反応により調製される。反応が完結した後、水及び便利な還元剤、たとえばビスルフィット、チオスルフェート又は他の適切な還元剤がいづれかの未反応ヨウ素試薬を破壊するために添加される。次にヨウ素化された生成物は、過剰の水の添加により沈殿せしめられ、又は適切な有機溶媒、たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム及び同様のもの中に抽出される。溶媒の除去の後、粗ヨード化合物（１）がアルコールから再結晶化される。

６−ＡＢＰ（Ｂ）の５−ｌ−６−ＡＢＰ化合物へのそのような直接的なヨウ素化を用いての詳細な方法は例１に記載される。

他方、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンは、ｌ。

２−ベンゾピロン（クマリン）の一般的Ｐｅｒｋｉｎ合成の手段により調製され、ここで適切に置換された２−ヒドロキシベンズアルデヒド、たとえば５−ニトロ−６−ヨード−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒドが、Ｊ、　Ｉｎｄ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、　４８　：　３７１（１９７１）に記載されるようにして、無水酢酸ナトリウム及び無水酢酸の存在下でグリシンにより縮合され、５−ヨード−６−二トロー１．２−ベンゾピロンが付与され、続いて水性ナトリウムジチオネートによりニトロ基が還元され、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｉ）が付与される。この反応は、それらの化合物の大規模な調製方法のために好ましい。

Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，又はＲ４のいづれに対しても置換を有さない５−ｌ−６−ＡＲＰ化合物（Ｉ）は調製されており、そしてそのＮＭＲスペクトルがその前駆体６ −ＡＲＰ（Ｂ）のスペクトルと比較された。その結果は図１に示される。

図１は、５−ｌ−６−ＡＲＰ（Ｔ）及びその合成前駆体６−ＡＢＰＣＢ）の’ＨＮＭＲスペクトルの比較を示し、そして非交換性プロトンのみを示す。プロトン割当てが示される。すべてのプロトンシグナルは、隣接するプロトンによるスプリットのためにダブレットである。６−　ＡＢＰにおいては、Ｈ−７は、接近− 範囲の隣接するＨ−８によりスプリットされ、そしてそれに対して広範囲（メタ）であるＨ−５によりさらに細かくスプリットされるので、ダブレットの中のダブレットであり、ところが逆に、Ｈ−５はＨ−７により細かくスプリットされる。６−ＡＲＰがヨウ素化される場合、Ｈ−５のためのシグナルが溶出し、そして同様にＨ−７の細かなスプリットが消出した。

さらに、下流場方向へのシグナルのいくらかのシフトが生じた。スペクトルがＤＭＳＯ溶媒中で測定され、そして化学的シフト（ｐｐｍ）はＴＭＳに対して相対的である。５−Ｉ−６−ＡＢＰについての正確な化学的シフトデータが例１に報告されている。

置換された化合物は一般的に、市販されているか、又は例３〜ｌＯに記載されているようにして得られ又は調製された適切に置換された６−ニトロ化合物（Ａ）を用いて、置換されていない上記化合物について記載されるのと同じ又は類似する手段で調製される。置換された前駆体が利用できない化合物は、下記のように当業界において利用できる反応により合成される。

５−Ｉ−６−ＡＲＰのアルキル誘導体は、商業的に入手できる、又は利用できる化学文献に記載されるようにして調製されたアルキル化された１、２−ベンゾピロンから典型的には調製される。たとえば、典型的には、Ａｌｄｒｉｃｈから入手できる７−メチル−１，２−ベンゾピロン及び５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　５９９（１９７５）又は４６４（１９７７）に従って調製された合成３−メチル−１，２−ベンゾピロン又は４−メチル−１、２−ベンゾピロンが、Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、、　７：４９（１９６９）に従って氷酢酸中、硝酸を用いて、又はＥｇｙｐｔ、Ｊ、Ｃｈｅｍ、、　２０　：　４５３（１９７７）に見出されるようにして、６−位置でのニトロ化を優先的に付与する類似する温和なニトロ化条件を用いて、それぞれニトロ化される。

６−ニトロ−１，２−ベンゾピロンは、Ｊ、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｉｃ　Ｃｈｅｍ、、　２３　：８７（１９８６）に記載される方法を用いて水性メタノール中、Ｐｄ（ｃ）触媒と共に水素化硼素カリウム、又は適切な他の還元条件を用いて６ −アミノ−誘導体に還元される。還元に続いて、−塩化ヨウ素１〜２当量を用いてヨウ素化され（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅａ＋、、　２３　：　１７３１（１９５８））　、ここで６−アミノ基がモノ−ヨウ素化を５−位置に向ける。他のアルキル化された化合物は、同じ又は類似する手段で調製される。

５−ｌ−６−ＡＢＰのシクロアルキル誘導体は、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　４６４（１９７７）に従っての４−メチル−１，２−ベンゾピロンの合成においてのメチル基に関して、アルキル基を置換するようにシクロヘキシル基を用いることによって調製される。得られるシクロアルキル、すなわち４−シクロへキシル−１，２−ベンゾピロンは次に、緩酸、好ましくは氷酢酸中、硝酸を用いて６−位置でニトロ化さね、そして水性メタノ−・ル中、Ｐｄ（ｅ）触媒と共に水素化硼素ナトリウムにより又はいづれか他の適切な還元方法によりその対応する６−アミン化合物に還元される。次に、その化合物は、温アルコール、たとえばメタノール、エタノール、プロパツール、ブタノール等における１当量の−１化ヨウ素を用いて、５−位置でヨウ素化される。他のシクロアルキルは、同じ又は類似する手段で調製される。

５−Ｉ−６−ＡＲＰのフェニル又は置換フェニル誘導体は、Ｋｏｇｙｏ−Ｋａｇａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ、　７１　：　１０１０（１９６８）及びＣｈｅ＋＋＋、Ａｂｓｔｒ、、　７０　：　３００２３（１９６９）に記載される方法を用いることによって調製される。たとえばｐ−トリル基が、６−アミノ−３−ｐ−トリル−１，２−ベンゾピロンを付与するために６−アミノ−３−フェニル−１，２ −ベンゾピロンの合成においてフェニル基を置換するために使用される。次に、この化合物がアルコール中、１当量の−１化ヨウ素を用いることによってヨウ素化される。６−アミノ基が活性化し、モして５−位置でのヨウ素化を指図する。

他のアリール誘導体は、同じ又は類似する態様で調製される。フェニル基を他の位置に結合するためには、当業界において利用できる方法が、そのような目的のために使用される。

６−ＡＢＰのヒドロキシ誘導体は典型的には、Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、、　７　：４９（１９６９）に従って温和な条件下、たとえば氷酢酸中、硝酸下でニトロ化し、対応する６−二トロー誘導体を付与し、次に水性アルコール中、Ｐｄ（ｃ）触媒と共に水素化硼素ナトリウム又はカリウムにより又は他の還元方法によりアミノ化合物に還元することによって、市販の合成面躯体、たとえば４− ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロン（Ａｌｄｒｉｃｈ）から調製される。他のヒドロキシル化された５−■−６−ＡＲＰ化合物は、同じ又は類似する態様で調製される。

アルコキシ誘導体は典型的には、上記ヒト占キシ誘導体から容易に調製される。

例として、上記４−ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロンの６−ニトロ−誘導体が、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　［４４（１９７８）に従ってジメチルスルフェートにより処理され、ヒドロキシ基がメトキシ基に転換され、そして次にその得られる化合物が水性アルコール、好ましくはメタノール中、Ｐｄ（ｃ）触媒と共に水素化硼素すｌ・リウム又はカリウムを用いて、４−メトキシ−６−アミノ−１，２ −ベンゾピロンに還元される。次にその化合物は、５−ヨード誘導体を付与するためにアルコール中、当量の−１化ヨウ素によりヨウ素化される。他のアルコキシ化合物は同じ又は類似する態様で調製される。

５−Ｉ−６−ＡＢＰのアミノ誘導体は、たとえばＲ，−Ｒ，上に追加のアミノ置換基を有する前駆体、たとえばＡｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍ、　、　２９６　：　３６５（１９６３）に従って調製された合成３−アミノ−６−ニトロ−１，２−ベンゾピロンを用いることによって調製される。次に、そのアミノ−ニトロ化合物は、水性アルコール、好ましくはメタノール中、Ｐｄ（ｃ）触媒と共に水素化硼素ナトリウム又はカリウムを用いて又は他の適切な還元方法により３．６−ジアミツー１，２−ベンゾピロンに還元される。次に、この化合物はアルコール中、１当量の一塩化ヨウ素によりヨウ素化され、ここで６−アミノ基が５−位置へのヨウ素化を指図する。他のジー又はトリーアミノ誘導体は、同じか又は類似する手段で調製される。

５−ｌ−６−ＡＢＰのハロ誘導体は、続いて連続的に、６−位置においてニトロ化され、アミノ化合物に還元され、モして５−位置においてヨウ素化される所望する合成ハロー置換１，２−ベンゾピロンにより開始し、又は臭素又はヨウ素を用いての直接的なハロゲン化に５−Ｉ−６−ＡＢＰをゆだねることによって調製される。従って、に記載される３−クロロ−及び３−ブロモ−１，２−ベンゾピロンが、氷酢酸中、硝酸により二１・口化され、それぞれ６−ニトロ−誘導体が得られ、次にそれらはその対応する６−アミノ誘導体に水性ナトリウムジチオネート又は水素化硼素ナトリウム又はカリウム／Ｐｄ（ｃ）により還元され、次にアルコール中、１当量の−１化ヨウ素によりヨウ素化され、それぞれ３−ハロー５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンが得られる。直接的なハロゲン化の例として、水酸化アンモニア中、ヨウ素から成る２当量の試薬を用いて（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、　２３：　１７３１（１９５８））　、６−アミノ−１，２−ベンゾピロンが５，７−ジヨードー６−アミノー１，２−ベンゾピロンにヨウ素化される。

本発明の最っとも好ましい化合物は、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（５−ｌ−６−ＡＲＰ）　（化合物りである。しかしながら、ｌ、２−ベンゾピロン（クマリン）位置３，４．７及び８における親水性及び疎水性置換Ｒ３，Ｒ＝　、Ｒ２及びＲ４と共に５−位置におけるヨード置換及び６−位置におけるアミノ置換は、５−ｌ−６−ＡＲＰのそれらの変種に、類似する又はより良好な細胞増殖抑制及び抗ウイルス生物学的活性を付し、そして本発明の範囲本発明の化合物（Ｉ）は、そのニトロソ化合物（ＩＩ）に容易に転換され又は代謝され、従って５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロン（５−Ｉ　−６− ＮＯＢＰ）が形成される。化合物５−■−６−ＮＯＢＰはまた、本発明の好ましい化合物である。５−ｌ−６−ＡＢＰ（Ｉ）と同様に、５−１−６−ＮＯＢＰ　（ＴＩ）はまた、悪性増殖及びウィルス複製の阻害及び抑制のためにも有用である。

典型的には、ニトロソ化合物は水溶液又は水性アルコール溶液のいづれかにおいて調製され、ここで５−ヨード−６−アミノ化合物（１）が溶解され又は懸濁液で存在し、そして前記溶液は好ましくは１当量の鉱酸、たとえば塩酸、硫酸、リン酸、硼酸及び他のもの、好ましくは塩酸、及びタングステン酸又はその塩、又はペルオキシ基を形成できるいづれか他の酸素酸、及び過剰の過酸化水素を含む。

反応の完結後、好ましくは室温又はそれ以下の温度で、ニトロソ生成物が有機溶媒、たとえば酢酸エチル又はクロロホルムにより抽出され、そして溶離溶媒として酢酸エチル、クロロホルム、ヘキサン又はそれらの混合液を用いてシリカゲル上でのクロマトグラフィー処理により精製される。

他方、酸化は非極性溶媒、たとえばクロロホルム、ジクロロメタン又は他のものにおいて行なわれ、ここでアミノ化合物（１）が溶解され、そして０℃〜４０℃ 、好ましくは室温又はそれ以下の温度で供給される、１〜２当量の有機ペルオキシ酸、たとえばペルオキシ安息香酸、メタ−クロロペルオキシ安息香酸又はペルオキシ酢酸と共に組合される。反応の完結の後、その混合物は溶媒の蒸発により濃縮され、そしてニトロソ−生成物（ＩＩ）が上記のような溶離溶媒を用いて、シリカゲル上でのクロマトグラフィー処理により単離される。

利用性５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（１）及びそれらのニトロソ代謝物（ＩＩ）は、腫瘍細胞及びウィルス増殖、特にウィルス、たとえばヒト免疫欠陥ウィルス、ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−２、肝炎ウィルス、Ｈ５Ｖ−】、Ｈ８Ｖ− ２、帯状庖疹ウィルス又はエブスタイン・バールウィルス（ＥＢＶ）　、動物ウィルス、神経羊ウィルス、及びＣＭＶの増殖を選択的に阻害する、可能性ある、特定の且つ非毒性の抗腫瘍及び抗ウィルス剤である。従って、それらの薬物は、腫瘍及びウィルス疾患の予防及び処置のために有用である。これらの化合物は、ＡＩＤＳを存する免疫抑制された患者における腫瘍増殖の特に効果的なインヒビターであり、ここでそれらは、腫瘍増殖、たとえばカボジ肉腫に影響を及ぼすのみならず、またヒト免疫欠陥ウィルス、及び単純ヘルペスウィルス及びザイトメガロウィルスによる感染及び＠瘍増殖、たとえばカボジ肉腫、非ホジキンリンパ腫及び−次リンパ腫の進行をも阻害する。つ、イルスの場合、それらの化合物は、ＡＩＤＳ、ヘルペス性病変及びサイトロメガロウィルス感染の処置のために有用である。さらに、それらの化合物は、存在したとしても、ひじょうに低い毒性を有する。

５−ｌ−６−ＡＢＰ及び／又はその代謝物５−ｌ−６−ＮＯＢＰは、ＡＤＰＲＴの可能性あるインヒビターであることが見出された。それらの生物学的作用範囲は、６−ＡＢＰの範囲にほぼ等しいが、但し、それらの可能性は約１０〜５０倍高かった。そのような可能性は、５−Ｉ−６−ＡＲＰの場合、細胞培養における悪性細胞増殖に対して弗特に十分に裏づけられている。５−ｌ−６−ＡＲＰはまた、ＨＩＶに対してもひじょうに効果的である。この効率は６−ＡＢＰよりも１０〜２０倍高い。

Ａｔ）ＰＲＴへの５−ｌ−６−ＡＢＰのより強い結合は６−ＡＢＰに比較してこの分子のより強い生物学的作用の要因となるように思われるが、化学レベルに基づく作用の基本的な分子機構はたぶん同じである。

５−Ｉ−６−ＡＲＰの６−了ミノ基は、５−ｌ−６−ＮＯＢＰに急速に細胞内酸化され、これは、ＡＤＰＲＴのＺｎ４＋−フィンガードメインに結合することによって、Ｚｎ　３　＋フィンガーポリペプチドにおけるチオール基の酸化による強くキレート化されたＺｎ”を不安定にし、従ってＺｎ■を放す。この手段においては、５ｉ−６−ＡＲＰはこのタンパク質のＡＤＰＲ−形成活性を効果的に不活性化し、そして一定の二本鎖ＤＮＡの“内部ドメイン”と反応するＤＮＡ結合タンパク質にそれを転換する（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２８　：　５６７０（１９８９）　；　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍｕｎ、　、　１６７　：　８４２（１９９０））。これらのＤＮＡドメインは、腫瘍形成性又は増殖性細胞及びウィルスＤＮＡにおいて、たぶん組込み部位で、ＤＮＡ構造体の異常な複製を包含する。

５−ｌ−６−ＡＲＰの抗ウイルス活性式（１）の本発明のヨード化合物、特に５−ｌ−６−ＡＢＰは、非ヨウ素化６− ＡＢＰよりも約１０倍高い可能性（濃度に基づいて）を有する。６−ＡＢＰの■ 、。が１２５μＭであり、モしてＫｉが４７μＭである場合、５−Ｉ−６−ＡＢＰのＩ６゜は１９μＭであり、モしてＫｉは２μＭである。

６−ＡＢＰに比較しての５−Ｉ−６−ＡＢＰの抗ＨＩＶ活性が図２に示され、ここでウィルス性ＨＩＶ増殖がＡＡ−２細胞培養においてアッセイされる。

図２は、培養でのＡＡ−２細胞におけるウィルス増殖の時間に対しての、未処理の培養物に比較しての細胞外適用された５−Ｉ−６−ＡＢＰ及び６−ＡＢＰの効果を示す。３ｄの６−ＡＲＰの効果が、自動ＥＬＩＳＡ試験によるｐ２４形成の従来の分析を用いて、４日でのＨＩＶ複製に刻して、０．２ｍＭの５−ｌ−６− ＡＲＰの効果と比較された。図２から見出されるように、４日で、３０倍低い量（０，１ｍＭ）の５−１−６−　ＡＢＰが、１：１６００のＨＩＶ希釈度でｐ２４生成に対して、３ｍＭの６−ＡＢＰが有するのとほとんど同等の抑制効果を有した。これは、５−１−６−ＡＢＰがＨＩＶ増殖のより可能性あるインヒビターであることを明確に示す。

５−ｌ−６−ＡＢＰ及び６−ＡＢＰの両者によるＭＴ−２細胞におけるシンシチウム形成の阻害を示す図３においては、そのシンシチウム形成に対しての再化合物の作動性かさらに一層明白にされる。１・１６００の旧■希釈度で、阻害は両薬物のために完全である。ｌ・４００の希釈度においては、３０倍低い量の５− 　Ｉ　−６−ＡＢＰ　（０，１ｍＭ）が、３ｍＭの６−ＡＢＰよりもわずかに低い阻害性を示す。これはまた、１：１００のＨＩＶ希釈度においても見出される。すべての観察は４日で完了する。

図２と同様に、図４はＩ（ｆＶ複製の測定としてのｐ２４タンパク質形成を示し、そして３ｍＭの６−ＡＢＰの効果と０．３ｍＭの５−Ｉ−６−ＡＢＰの効果とを比較する。ここで、図２におけるのと同じような効果が見出される。ここで、６−ＡＲＰの量は、５−ｌ−６−ＡＲＰの量よりもたった１０倍高い。従って、５−ｌ−６−ＡＲＰの１０倍低い濃度が、６−ＡＢＰの濃度に比較して、すべての試験においてほぼ効果的である。

図５及び６は、５−ｌ−６−ＡＲＰと６−ＡＲＰとの同じ比較を示すか、但し、ウィルス増殖は、ＡＡ−２細胞（図５）及びＭＴ−２細胞（図６）に対する旧■ の細胞変性効果によりアッセイされる。従って、１０倍低い濃度の５−ｌ−６− ＡＢＰが、６−ＡＲＰの濃度に比較して、すべての試験においてほぼ効果的である。

従って、５−■−６−ＡＢＰは、異常に刺激されたＤＮＡ合成が生じる疾病、たとえばウィルス及び慢性炎症性疾病の処置のために有用である。これらの薬物は、単独で又は６−ＡＢＰと組合して使用され得る。

５−Ｉ〜６−ＡＢＰの細胞増殖抑制効果作用の同じ態様に基づく場合、５ｉ−６ −ＡＲＰはまた、ひじょうに可能性ある細胞増殖抑制抗腫瘍形成活性を育する。

そのような活性が細胞系に対して研究され、そして例１１に詳細に記載される。

結果は表１に示され、ここでＤＮＡ合成は６種の異なった細胞系においてアッセイされる。すべての場合、特に腫瘍形成細胞タイプの複製が５−ｌ−６−ＡＢＰ処理によりひじょうに阻害される。５００μＭの６−ＡＲＰは５０μＭの５−ｌ −６−ＡＩ３Ｐと同じ有効性を示し、すなわち５−ｌ−６−ＡＢＰの抗腫瘍形成活性は少なくとも１０倍又はそれ以上高い。

細胞毒性を包含しない５−ｌ−６−ＡＲＰの細胞増殖抑制効果は、主要腫瘍マスの手術による除去に続いて、転移性癌の処理における薬物としてこの分子を定める。

５−ｌ−６−ＡＲＰ化合物及びそれらの代謝物は、腫瘍細胞有糸分裂及びウィルスＤＮＡ複製をひじょうに特異的且つ効果的に阻害する可能性ある非毒性プロ薬物であることが見出された。５−Ｉ−６−ＡＲＰ及び５−Ｉ−６−ＮＯＢＰの両者は、ＡＤＰＲＴをＤＮＡ鋳型インヒビターに転換することによってＤＮＡ複製を阻害する。

これらの化合物の作用の態様は、次の通りであると思われる。５−Ｉ−６−ＡＢＰは、生理学的ｐＨ＝　７．２〜７．４で、はとんどの哺乳類細胞を限定された程度、透過する“プロ薬物”である。細胞において、５−Ｉ−６−ＡＲＰは、反応性種である５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロン（５−１−６− ＮＯＢＰ）への６−アミノ位置での急速な酸化を受ける。５−Ｉ−６−ＮＯＢＰは酵素ＡＤＰＲＴの亜鉛フィンガーに高い親和性で結合し、そしてそれらの亜鉛フィンガーのＳＨ基の−Ｓ−３基への酸化により、ＡＤＰＲＴから亜鉛を排除し、又は放す。亜鉛放出は代謝的にＡＤＰＲＴを不活性化し、そしてそれを選択的ＤＮＡ結合タンパク質に転換する。最大に複製する細胞においては、ＤＮＡ鋳型の数は約２５．０００であるが、しかしＡＤＰＰＴ分子の数は１６０〜１８０．０００であり、従って個々の鋳型に過剰結合する。次にこのタンパク質（ＡＤＰＲＴ）はＤＮＡ鋳型に結合し、そしてＤＮＡｖＬ製を阻害する。特定の５−Ｉ− ６−ＡＢＰ部位を独占的に有するＡＤＰＲＴは、ウィルス及び＋ｉ瘍影形成複製ひじょうに選択的なインヒビターになる。

５−ｌ−６−ＡＲＰ酸化生成物５−Ｉ　−６−ＮＯＢＰの高い反応性は、細胞グルタチオンとのその速い反応により引き起こされると思われ、結局、５−Ｉ−６ −ＡＢＰにそれを還元する。これは、この薬物の非特異的細胞毒性の不在、及びそれ自体のＡＤＰＲＴ部位へのその特異的結合によるその高い効能の存在を説明する。５−Ｉ−６−ＡＢＰ結合部位はＡＤＰＲＴのために独占的であるので、他の酵素は５−ｌ−６−ＡＢＰにより活性化又は阻害されず、そして従って５−Ｉ −６−ＡＲＰ薬物は完全に非毒性である。その毒性研究は、例１５に記載される。

５−ｌ−６−ＡＢＰの明白な低い毒性は、ヒドロキシルアミン及び結局５−Ｉ− ６−二トロＢＰへのグルタチオンによる還元による細胞内生成された５−Ｉ−６ −ＮＯＢＰ誘導体の急速な代謝還元によりさらに説明され得る。さらに、５−１ −６−二トローＮＢＰへの５−■−６−ＮＯＢＰの酸化、すなわち肝臓において生じる反応は、生化学的活性分子を不活性ニトロ生成物に転換する。この還元− 酸化サイクルは、肝臓において高いが、しかし標的細胞、たとえばリンパ細胞においてはより低い。

５−ｌ−６−ＡＢＰＩ−！、旧Ｖ、　ＨＳＶ及びＣＭｖノ可能性アル特異的且つ非毒性インヒビターである。しかしながら、５−ｌ−６−ＡＢＰは、ＨＳＶ及び他の非レトロウィルス性ウィルスにおいても効果的であるので、特異的レトロウィルスインヒビターではない。その抗ウイルス特異性は、１つのＺｎ！＋フィンガ一部位でのＺｎ”損失により変性されたＡＤＰＲＴによる組込み部位でＤＮＡにおける特異的結合部位の薬物誘発された阻害に関する。その抗ウイルス特異性は、１つのＺｎ”フィンガ一部位でのＺｎ２＋損失により変性されたＡＤＰＲＴによる組込み部位でのＤＮＡにおける特異的結合部位の薬物誘発された阻害に関連する。結果的に、ＡＤＰＲＴ結合を包含するいづれかのウィルスＤＮＡの増殖は５−ｌ−６−ＡＢＰにより阻害される。

実際、本発明の化合物、すなわち式（１）の置換された又は置換されていない５ −ｌ−６−ＡＲＰ又は５−１−６−ＮＯＢＰ　（ＩＩ）又はそれらの医薬的に許容できる塩は宿主細胞にお＋ｊる腫瘍増殖又はウィルス発現を阻害し、又は癌増殖又はウィルス感染の進行を防止するのに十分である量及びそのような目的のために最つども適切な医薬形で投与されるであろう。

本明細書に記載される活性化合物及び塩の投与は、治療剤のための投与の許容される態様のいづれかを通してである。これらの方法は、全身性又は局部投与、たとえば経口、非経口、経皮、皮下又は局部的投与態様を包含する。それらの薬物の投与の好ましい方法は、静脈内投与であり、但し対象が局部腫瘍又は病変を有する場合は、局部的投与が好ましい。他の場合、他の非経口又は経口形で組成物を投与することが必要である。

医薬組成物は、０．１〜９９％、好ましくは１〜７０％の活性５−Ｉ−６−ＡＢＰ成分を含む。もちろん、投与される活性化合物の量は、処理される対象、対象の体重、病気の重症度、投与の態様及び医者の判断に依存するであろう。しかしながら前動な用量は、０．００１〜５０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．　Ｏｌ−１０００ｍｇ／　ｋｇ／日、より好ましくは０．１〜１００　ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。一般的に、薬物用量のための上限は、その可能な毒性により平衡を保たれたその効能である。

５−ｌ−６−ＡＲＰは、適度に溶解性の分子である。それは、１）ｌ（７，２〜７．９で約０゜４ｍＭの水溶液を形成することができ、それは室温で数カ月間、安定し、そして暗室に保存される場合、それはひじょうに少々（０，１％以下）の分解を示す。そのような溶液は、静脈内注射配合物としての使用のために適度に安定している。投与の非経口路は、病気のいづれかの段階での癌又はＨＤ感染に対しての投与の最っとも適切な効果的態様であると思われる。５−ｌ−６−ＡＲＰは血液脳バリヤーを交差すると思われるので、それはまた、ＡＩＤＳ神経学的疾患の処置のためにも有用であろう。５−ｌ−６−ＡＲＰはまた、内部器官のＡＩＤＳ関連カボジ肉腫の処置のためにも効果的である。適切に配合されるなら、それはまた、皮膚疾患のためにも効果的′Ｃあろう。

さらに、その明らかな非毒性により、５−Ｉ−６−ＡＢＰ治療は、単独で又は他の抗ウィルス又は他薬物、たとえばその前駆体６−ＡＲＰ（Ｂ）、　ＡＺＴ、抗 −炎症剤、抗生物質、コルチコステロイド、ビタミン及び他のそのような薬物と組合して提供され得る。

５−ｌ−６−ＡＢＰは、ＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２ノｉｉ４者ｉニーヨリ引キ起こされるヘルペス性病変の処置のために同等に有用である。その薬物は、好ましくは、ｉ、　ｖ、注射又は他の非経口又は全身性投与方法により投与される。潰瘍の場合、その薬物はまた局部的に投与される。

ＣＭＶにより引き起こされる感染は、好ましくは、ＡＩＤＳ処置のために示唆されるような態様で処理される。

５−Ｉ−６−ＡＢＰの１つの主な利点は、毒性の不在である。その薬物は、腫瘍形成性前糸分裂及びウィルス増殖を担当する酵素ＡＤＰＲＴに対してのみひじょうに特異的に作用し、モしていづれの他の酵素に対しても作用しないので、それはいづれの所望しない副作用も育さないように思われる。

より親油性分子を生成するＲ８−Ｒ４上での置換を包含する置換５−Ｉ−６−ＡＢＰは、医薬が細胞壁をより容易に浸透し、そして５−ｌ−６−ＡＢＰよりもより一層高い効能を育するようにし、そして従って、低い濃度でより効果的であるようにする。

次の調製法及び例は本発明を例示するものである。それらは、本発明を限定するものではない。

Ｖｅｒｏ　（アフリカグリーンモンキーの腎臓）及びＭＲＣ−５（ヒト肺線維芽細胞）の細胞（Ｍ、Ａ、Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｗａｌｋｅｒｓｖｔｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ）を、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ緩衝液及びｌＯ％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むイーグル最少必須培地において増殖した。ヒト類表皮癌Ｎｏ、　２　（ＨＥｐ　−２）細胞を、１０％ＦＢＳを含む培地１９９において増殖する。Ｍ、　Ａ、　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓから市販されているリーサスザルの腎臓（ＲＭＫ）細胞を、２％ＦＢＳを含むイーグルＭＥＭ中で増殖した。Ｕ９３７ヒト単球細胞をｌＯ％ＦＢＳ及び１％ピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭ　Ｉ中で増殖した。ＮＩＨから得られたＭＴ２、Ｔ細胞白血病細胞を、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ　１６４０中で増殖した。

ヘルペス単純ウィルス（ＨＳＶ）タイプ１及び２（それぞれＦ及びＧ株）をＨＥｐ−２細胞中で増殖し、そしてＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、　８３　：２７８７（１９８６）に記載されるようにして液体オーバーレイ下でプラークアッセイにより滴定した。

サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）は、病院で得られた患者からの単離物である。

ＣＭＶを１０％ＦＢＳを含むＭＥＭにおいてＭＲＣ−５細胞中で増殖し、ＨＳＶを２％ＦＢＳを含むＭＥＭにおいてＨＥｐ−細胞中で増殖し、アデノウィルス、インフルエンザ及び腸内ウィルスを０．８％ウシ血清アルブミン（画分Ｖ）及び２５ｍＭのＨｅｐｅｓ緩衝液（インフルエンザ）又は２％ＦＢＳ　（アデノウィルス、腸内ウィルス）を含むＭＥＭにおいてＲＭＫ細胞中で増殖、た。ＨＩＶ− １はＮＩＨから得られ、そしてＭｏ１ｔ３細胞中で増殖した。

ＣＭＶのためのウィルス力価は、５０％の細胞変性効果（ＴＣＩＤ５０）を引き起こす最高の希釈度として表わされる。ＨＳＶ−ｉ及びＨＳＶ−２のためのウィルス力価を、シンシチウム形成単位（ＰＦＵ）　／ｍｌとして表わす。ＨＩＶ力価をシンシヂウム形成単位（ＳＦＵ／　ｏｗｌ）として表わし、ＭＴ２細胞上でアッセイする。

この例は、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

５−ｌ−６−ＡＢＰの化学的合成及び特徴化使用される方法は、ヨウ素をクマリン（１，２−ベンゾピロン）化合物中に導入するために一塩化ヨウ素を用いての、Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　。

２３　：　１７３１（１９５８）に記載される方法の変法である。

６５°Ｃでの９５％エタノール５００ｏｌ中、６−アミノ−１，２−ベンゾピロン塩酸塩（４，９５ｇ、０．０２５モル）の撹拌溶液に、−塩化ヨウ素（８，１２ｇ、０．０５０モル）を添加し、そして６０℃での１０分後、ＴＬＣ分析は、すべての６−ＡＲＰが反応したことを示した。次にその混合物を冷却し、モして４１のフラスコに移し、これに酢酸エチル７００ｍ１、水５００ｍ１及び水性２Ｍ亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４）　２５ｍ１を添加した。その混合物を激しく撹拌し、生成物を汚染する過剰のヨウ素試薬の亜硫酸水素塩の破壊を可能にする。追加の水（５００ｍｌ）の添加の後、相の分離が生じ、上層（酢酸エチル）を低層（水性）から分離し、そして分離用漏斗において、前者を２００１１１１の水により３度洗浄し、そして水性層の２回の３００ｍ１酢酸エチル抽出物と共に組合した。硫酸ナトリウム上での乾燥の後、その溶液から回転蒸発により溶媒を除去し、乾燥したカッ色粗生成物６．４０　ｇを得、次にそれを煮沸高温無水エタノール２００ｍ１に溶解し、濾過し、少量の沈殿物を除去し、そして１２５ｍ１の体積に凝縮した。冷却後、暗カッ色生成物の結晶か沈殿しく４．０９ｇ、　ｍ、ｐ、　１５９〜１６５°Ｃ）、次にそれを熱エタ、ノール５０ｍ１から再結晶化し、純粋な標記化合物（ｍ、ｐ、　１６３〜１６５°Ｃ）３．７２ｇ　（５２％の収率）を得た。

固体状態でのその化合物の色は、粒度に依存する。大きな結晶はひじょうに深いカッ色であり、小さな結晶は中ぐらいのカッ色であり、そして微粉砕される場合、すべての場合においてその材料はオレンジ色になる。その前駆体（６−ＡＲＰ）と比較して、標記化合物は、通常の鉱酸と塩を形成しない。２５°Ｃで、控えめに水に溶解しく３７Ｘ１０−’Ｍで均相する）、エタノールに中ぐらい溶解しく４．７Ｘ　１０−’Ｍで飽和する）、モしてＤＭＳＯにひじょうに溶解しく１．９Ｍで飽和する）、そして化合物はすべてのそれらの溶媒において安定性である。さらに、その化合物は煮湯に対して安定性であることが注目される。

ＣｓＨｇ１ＮＯｘについての元素分析：計算値：　Ｃ，３７，６５；　Ｈ，２，１１；１、４４．２３　、　Ｎ、　４．８８゜実測値：　Ｃ，３８，０１；　Ｈ，１，９３；　Ｉ、　４３．９６：（３，２９）、　１９１（２，５５）、　１６０（７８，２４）、　１４３（２，３３）、　１３２（４０，８８）、　１０４（２５，１８）。Ｍ＋ピークについての高解像度データ：　ＣＪ−ＩＮＯ−についての計算値、２８６．９４４３　；実測値、２８６．９４４２　（偏差＝　 −０，５ｐｐｍ）。

Ｕ■吸収スペクトル：無水エタノールにおいてλ、、、　３８６ｎｍ（ε２．８８ＸＩＯす、λｍ、、　２９８ｎｍ（ε１．　ＩＩＸ　１０’）、λ、、、　２４６ｎｍ（ｅ　２．０１　ｘ　１０’）及びλ、、、　２１２ｎｍ（ε２．　ＩＩＸ　１０’）。

ＤＭＳＯ−ｄ、における’ＨＮＭＲスペクトル（ＴＭＳに対するδ（ｐｐｍ）値）二アミノ基のプロトンによる広いシングレット（５，４４５４）　；　Ｈ−３によりスプリットされるＨ−８によるダブレット（６，４５２２及び６．４８５０）　；Ｈ−８によりスプリットされるＨ−７によるダブレット（７，０４９４及び７．０７９２）　；　Ｈ−７によりスプリットされるＨ−８によるダブレット（７，１９３４及び７．２２３０）　；　Ｈ−４によりスプリットされるＨ− ３によるダブレット（７，９５２２２及び７．９８４９）。１．２−ベンゾピロン環システムにおける位置５へのヨウ素原子の割当ては、前駆体分子（６−アミノ−１，２−ベンゾピロン）の’ＨＮＭＲスペクトルとヨード−誘導体との比較に基づく。前者の分子は、ヨード−誘導体に不在であるが、しかしすべての他の対応する非交換性プロトンシグナルは存在するＨ−５（Ｈ−７によりスプリットされた）に寄与するダブレット（６，７５１３及び６．７６０００）を示す。

ＤＭＳＯ−ｄ＠における”ＣＮＭＲスペクトル（ＴＭＳに対するδ（ｐｐｍ）値）二８３．１６８　（Ｃ−５）　、　１１７．０７８（Ｃ−３）　、　１１７．２５３（Ｃ−８）、　１１８．１６２（Ｃ−７）　、　１２０．７３３（Ｃ−１０）　、　１４５．５３８（Ｃ−９）　、　１４６，４９５（Ｃ−４）　、　１４７．２３９（Ｃ−６）及び１５９．８２８（Ｃ−２）。最小のδ値を示す炭素原子（はとんどシールドされている）は、ヨウ素原子（Ｃ−５）に結合される原子であるが、しかし最大値を有する炭素原子（最少にシールドされている）はカルボニル炭素（Ｃ−２）である。そのような割当でのための方法は、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　３３　：　８９９（１９７７）から人手できる。Ｃ−５１での水素とのヨウ素原子の置換は、標記化合物において１１０．１３０　（前駆体におけるＣ−５）から８３．１６８への化学シフト変化を引き起こす。

この例は、５−ヨード−６−アミツーベンゾピロンへの前駆体６−アニノー１．　２−ベンゾピロン化合物（Ｂ）の調製を示す。

６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製６−ＡＢＰを調製するために使用される方法は、Ｊ、　ＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍ、、　２３　：　８７（１９６８）における公表された方法の変法である。

ヒユームフードにおいて、　１２５＋＋＋１のフラスコにおける水３０ｍ１に懸濁された活性炭素上１０％パラジウム触媒０．５ｇに、水３５ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，７０ｇ、０．０５０モル）の溶液をゆっくり添加した。

次に、その組合された混合物を、磁気撹拌機を備えた２１フラスコに移し、そしてメタノール１０１００Ｏ中、市販の６−二トロー１．　２−ベンゾピロン化合物（Ａ）（３，８２ｇ、０．０２０モル）の溶液を室温で徐々に添加した。添加が完結した後、混合物を１５分以上撹拌し、ブフナー漏斗上でのＣｅ１ｉｔｅを通して吸引濾過し、触媒を除き、そして回転蒸発によりメタノールを除去した。

残留物を、冷水にそれを懸濁し、そしてプラナ−漏斗上に注ぐことによって集めた。乾燥の後、材料６−ＡＲＰ（Ｂ）をエタノールから再結晶化し、黄色の生成物（ｍ、　ｐ。

１６６〜１６９°Ｃ）　２．１８ｇ　（６８％の収率）を得た。質量スペクトル＝１６１（Ｍ”　）、　１３３．１０４．７８．５２゜この例は５−ヨード−６ −ニトロソ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

５０％水性エタノール６０ｍ１中、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン０．４３１ｇ　（１，５０ｍモル）の撹拌溶液に、２ＭのＨＣＩ　０．８５［＋ＩＬ水３．Ｏｍｌに溶解されたタングステン酸ナトリウム０．４４１　ｇ　（１，５０ｍモル）及び３０％水性過酸化水素３．６ｍｌを連続的に添加した。

室温での２時間の撹拌の後、ＴＬＣ分析は約ｌＯ％のアミンが反応したことを示した。この時点で、ペルオキシド試薬をさらに０．５ｍｌをその混合物に添加し、そして撹拌を室温で合計２１時間、−晩続け、この時点で、ＴＩ、Ｃ分析は、約９０％のアミンが反応したことを示した。追加の０．５＋ｎｌのペルオキシド試薬を添加し、そしてその混合物を３時間以上撹拌し、そして次に分離用漏斗に移し、これにまた、水５０ｍ１及び酢酸エチル２００ｍ１に添加する。有機生成物を酢酸エチル層中に抽出し、次にこれを分離し、そして蒸留水１００ｍ１により洗浄した。赤カッ色の酢酸エチル溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして次に回転蒸発により２０ｍ１の体積に濃縮した。２つの０．１ｍｌアリコート（合計４．４ｍｇの出発材料を示す）の個々を、分離用ＴＬＣブレー１・（シリカゲル）上に置き、そしてｎ−ヘキサン：酢酸エチルの溶媒混合物（３：　２　；　ｖ／ｖ）により展開した。所望する生成物は最つども早く進行する成分（Ｒｔ　”　０．７０）であり、これは緑黄色を育し、そして５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロン（黄色）として同定される第２成分（Ｒ，＝０．５６）から再溶解できる。生成物をＴＬＣプレートから除去し、そして酢酸エチルによりシリカゲルから溶離し、次に回転蒸発により除去した。乾燥残留物を最少量の温メタノール（０，５＋ｎｌ）に取り、冷蔵庫での冷却の後、薄縁色の固体生成物（２ｍｇ　；　４４％の理論的収率）　、ｍ、ｐ、＝　１７５〜１７７℃ （濃い色を伴う）をもたらした。質量スペクトルは、ｍ／ｚ＝３０１でその主要な高分子量ピークを示し；　Ｃ＝Ｈ４ＩＮＯｓについての計算値：　３００．９２３６゜この例は、アルキル基に１〜４個の炭素原子を有するアルキル−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン及びアルキル−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

０°Ｃに冷却された氷酢酸２０ｍ１中、市販の７−メチル−１，２−ベンゾピロン（７−メチルクマリン、Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　３．２０ｇ（０，０２０モル）の撹拌溶液に、硝酸及び氷酢酸の１　：　１　（ｖ／ｖ）混合物２．０ｍｌを添加する（Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、、　７　：　４９（１９６９））　、　０°Ｃで２時間後、その混合物を粉砕された氷上に注ぎ、沈殿されたニトロ−化生成物を集め、水により洗浄し、そしてエタノールから結晶化する。次の、精製された生成物をメタノール５００ｍ１に溶解し、そして室温で、水５０ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ、０．０４６モル）の水溶液中、活性炭素上１０％パラジウム触媒０．５０ｇの撹拌懸濁液に添加する。１５分後、その混合物を濾過し、触媒を除去し、そして回転蒸発によりメタノール／水を除去する。アミンフリー塩基としての乾燥残留物をエタノールから結晶化し、７−メチル−６−アミノ−１、２−ベンゾピロン（Ｂ）をもたらす。

次に精製されたアミン（１）を温エタノール（６０℃で１２５ｍ１）に再溶解し、これに２Ｍの塩酸３ｍｌ及び−塩化ヨウ素１．９５　ｇ　（０，０１２モル）を添加する。６０°Ｃで１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチルｔ７５ｍｌ、水１２５ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４に中和された）を含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。追加の水の添加（１２５ｍｌ）は、相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を単離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。

残留物を最少量の煮沸熱エタノールに取り、濾過し、そして溶液の冷却の後、ヨウ素化された結晶性生成物７−メチル−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンを生成する。他のアルキル−５−Ｉ−６−ＡＲＰを同じ手段で調製する。

アルキル−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンを、例３に記載される方法を用いて、上記得られたアルキル−５−ヨード−６−アミノ−１，２− ベンゾピロンから調製する。

例５この例はシクロアルキル基に３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル−５− ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

ベンゼン溶媒１００＋ｎｌ中、合成３−シクロへキシル−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、　Ｉｌ、　１８６２（１９８０））１０、２　ｇ　（０，０５０モル）及びエトキシ−カルボニル−メチレン−トリフェニルホスホラン（０，０７５−Ｔ−ル）を、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　４６４（１９７７）に記載される方法を用いて、２４時間還流し、そして生成物８−シクロへキシル−１，２−ベンゾピロンを、溶離剤としてベンゼンを用いてシリカゲル上でのクロマトグラフィー処理により精製する。０℃ に冷却された氷酢酸２０ｍ１中、８−シクロへキシル−１，２−ベンゾピロン４．５６　ｇ　（０，０２０モル）の撹拌溶液に、濃硝酸及び氷酢酸の１＝ｌ（Ｖ　／　Ｖ　）混合物２．Ｏｍｌを添加し、モして０°Ｃで２時間後、その混合物を粉砕された氷上に注ぎ、沈殿した生成物をフィルター上に集め、水により洗浄し、そしてエタノールから結晶化する。次に、ニトロ生成物をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、そして室温で水５０ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ、０．０４６モル）の水溶液中、活性化炭素上１０％パラジウム触媒０．５０　ｇの撹拌懸濁液に添加する。１５分後、その反応混合物を濾過し、回転蒸発によりメタノール／水を除去し、そしてアミンフリー塩基としてその乾燥残留物をエタノールから結晶化し、８−シクロへキシル−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｂ）をもたらす。

次に、精製されたアミン（Ｂ）をエタノール（６０℃で１２５ｍ１）に溶解し、それに２Ｍの塩酸３ｍｌ及び−塩化ヨウ素１．９５　ｇ　（０，０１２モル）を添加する。６０℃で１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル１７５ｍ１水１２５ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４）　６ｍｌを含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。追加の水（１２５ｍｌ）の添加は相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を分離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。残留物を最少量の煮沸エタノールに取り、濾過し、そしてその溶液の冷却に基づいて、結晶性ヨード−生成物、８−シクロへキシル−５−ヨード−６ −アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｉ）を得る。

他のシクロアルキル−５−１−６−ＡＢＰは、同じ態様で調製され得る。

シクロアルキル−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記得られたシクロアルキル−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンから調製できる。

この例は、フェニルが置換されているか又は置換されていない、フェニル−５− ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

６０°Ｃでのエタノール２５０ｍ１中、合成３−フェニル−６−アミノー２、３８　ｇ　（０，０１０モル）の撹拌溶液に、２Ｍの塩酸５ｍｌ及び−塩化ヨウ素１．６２ｇ　（０，０１０モル）を添加する。１５分後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル３５０ｍ１、水２５０ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素すトリウム（ｐｉ（７，４）　５ｍｌを含む大きな分離用漏斗に移す。激しく混合した後、追加の水（２５０ｍｌ）の添加が相の分離を生ぜしめ、そして上部有機相を分離し、水により洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、回転蒸発により溶媒を除去する。次に乾燥せしめられた残留物を最少量の煮沸熱エタノールに溶解し、濾過し、そして冷却し、結晶性ヨード−生成物、３−フェニル−５−ヨード −６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｉ）を得る。

他のフェニル−５−Ｉ−６−ＡＢＰは、同様にして調製され得る。

フェニル−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記で得られたフェニル−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンから調製さこの例は、ヒドロキシ−５−ヨード−６ −アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

０°Ｃに冷却された氷酢酸２０ｍ１中、市販の４−ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロン（４−ヒドロキシクマリン、Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）３、２５　ｇ　（０，０２０モル）の撹拌溶液に、濃硝酸及び氷酢酸の１：ｌ（ｖ／ｖ）混合物２．０ｍｌを添加し、そして０°Ｃで１時間後、その反応混合物を粉砕された氷上に注ぎ、沈殿したニトロ化生成物をフィルター上に集め、水により洗浄し、そしてエタノールから結晶化する。

次に、その生成物をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、そして室温で水５０ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ５０．０４６モル）の水溶液中、活性化炭素上１０％パラジウム触媒０．５０ｇの撹拌懸濁液に添加する。

１５分後、その混合物を濾過し、回転蒸発によりメタノール／水を除去し、そしてアミンフリー塩基としてその乾燥残留物をエタノールから結晶化し、４−ヒドロキシ−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｂ）を得る。

次に、精製されたアミンをエタノール（６０°Ｃで１２５ｍ１）に溶解し、それに２Ｍの塩酸２１０１及び−塩化ヨウ素０．６５　ｇ　（０，００４モル）を添加する。６０℃で１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル１７５ｍ１水１２５ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４）　２ｍｌを含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。追加の水（１２５ｍｌ）の添加は相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を分離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。乾燥残留物を最少量の煮沸エタノールに取り、濾過し、そしてその溶液の冷却に基づいて、結晶性ヨード−生成物、４−ヒドロキシ−５−ヨード−６− アミノ−１，２−ベンゾピロン（１）を得る。

他のヒドロキシ−５−１−６−ＡＢＰは、同じ態様で調製され得る。

ヒドロキシ−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記得られたヒドロキシ−５−ヨード−６− アミノ−１，２−ベンゾピロンから調製できる。

例　８この例はアルコキシ−５−ヨード−６−アミノ−！、２−ベンゾピロンの調製を例示する。

ヘギサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ、　Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　１０ｍ１中、例７に記載される市販の４−ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロンのニトロ化に由来する４−ヒドロキシ−６−二トロー１．　２−ベンゾピロン２．０８　ｇ　（０，０１０モル）の撹拌溶液に、室温で水素化ナトリウム（０，２４ｇ、０．０１０モル）を添加する。水素ガスの発生が完結した後、ＨＭＰＡ　５＋ｎｌ中、硫酸ジメチル（１，５１ｇ、０．０１２モル）を添加し、そしてその混合物を１時間撹拌し、そして次に、酢酸エチル１００［１１１を含む分離用漏斗中に移す。有機層をＩＭの水性塩酸５０［１１１により洗浄し、そして次に水により洗浄する。硫酸ナトリウム上での乾燥の後、溶媒を回転蒸発により除去し、そして残留物を溶解し、そして熱エタノールから結晶化する。メチル化されたニトロ化合物をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、そして室温で水５０ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ、０．０４６モル）の水溶液中、活性化炭素上１０％パラジウム触媒の撹拌懸濁液にそれを添加することによって還元する。１５分後、その混合物を濾過し、触媒を除去し、回転蒸発により溶媒を除去し、ｔしてアミンフリー塩基としての乾燥残留物をエタノールから結晶化し、４−メトキシ−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｂ）を得る。

次に、前記をエタノール（６０°Ｃで１２５１１１１）に溶解し、それに２Ｍの塩酸２ｍｌ及び−塩化ヨウ素０．６５　ｇ　（０，００４モル）を添加する。６０°Ｃで１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル１７５ｍ１、水１２５ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４）　２ｍｌを含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。追加の水（１２５ｍｌ）の添加は相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を分離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。乾燥残留物を最少量の熱エタノールに取り、濾過し、そしてその溶液の冷却に基づいて、結晶性ヨード−生成物、４−メトキシ−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンを得る。

他のアルコキシ−５−１−６−ＡＲＰは、同じ態様で調製され得る。

アルコキシ−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記得られたアルコキシ−５−ヨード−６− アミノ−１，２−ベンゾピロンから調製できる。

この例は、アミノ−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

５−ヨード−３，６−ジアミツー１，２−ベンゾピロンの調製メタノール５００ｍ１中、合成３−アミノ−６−ニトロ−１，２−ベンゾピロン（Ａｒｃｈ、Ｐｈａｒｍ、、　２９６　：　３６５（１９６３））２．０６ｇ（０，０１０モル）の溶液を、水５０ｍ１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ、０．０４６モル）の水溶液中、活性化炭素上１０％パラジウム触媒０．５０ｇの撹拌懸濁液に室温で添加する。１５分後、その混合物を濾過し、触媒を除去し、回転蒸発により溶媒を除去し、そしてアミンフリー塩基としての乾燥残留物をエタノールから結晶化し、３．６−ジアミツー１．２−ベンゾピロン（Ｂ）を得る。

次に、前記ジアミンをエタノール（６０℃で１２５ｍ　ｌ　）に溶解し、それに２Ｍの塩酸２ｍｌ及び−塩化ヨウ素０．６５　ｇ　（０，０６４モル）を添加する。６０゛Ｃで１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル１７５ｍ１、水１２５１１１１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７、４）　２　ｍｌを含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。追加の水（１２５ｍｌ）の添加は相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を分離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。乾燥残留物を最少量の煮沸エタノールに取り、濾過し、そしてその溶液の冷却に基づいて、結晶性ヨード−生成物、５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（Ｉ）を得る。

他のアミノ−５−１−６−ＡＲＰは、同じ態様で調製され得る。

アミノ−５−ヨー・ビー６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記得られたアミノ−５−ヨード−６−アミノ −１，２−ベンゾピロンからｗＲＩＥＩできる。

例１０ハロー５−ヨード−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製この例はハロがフルオロ、クロロ又はブロモであり得るハロー５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製を例示する。

、３−フルオロ−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンの調製０℃に冷却された氷酢酸２０ｍ１中、合成３−フルオロ−１，２−ベンゾピロン（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、　４０３３（１９６１））　３．２８ｇ（０，０２０モル）の撹拌溶液に、濃硝酸及び氷酢酸の１　＋　ｌ　（ｖ／ｖ）混合物２．０ｍｌを添加し、モして０°Ｃで１時間後、その反応混合物を粉砕された氷すに注ぎ、沈殿したニトロ化生成物をフィルター上に集め、水により洗浄し、そしてエタノールから結晶化する。次に、前記生成物をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、そして室温で水５ｆ）ａ＋１中、水素化硼素カリウム（２，５０ｇ、０．０４６モル）の水溶液中、活性化炭素上ｌＯ％バラノウム触媒ｏ、　ｓｏ　ｇの撹拌懸濁液に添加する。１５分後、その混合物を濾過し触媒を除去し、回転蒸発により溶媒を除去し、そし、てアミンフリー塩基としてその乾燥残留物をエタノールから結晶化し、３−フルオロ−６−了ミノー１，２−ベンゾピロン（Ｂ）を得る。

次に、前記アミンをエタノール（６０℃で１２５ｍ１）に溶解し、それに２Ｍの塩酸２ｍｌ及び−塩化ヨウ素０６６５　ｇ　（０，００４モル）を添加する。

６０°Ｃで１５分間の撹拌の後、その混合物を冷却し、そして酢酸エチル１７５ｍ１、水１２５ｍ１及び２Ｍの水性亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７，４）２ｍｌを含む分離用漏斗中に注ぎ、そして内容物を激しく混合する。

追加の水（１２５ｍｌ）の添加は相の分離を生ぜしめ、有機（酢酸エチル）層を分離し、水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、そして回転蒸発により溶媒を除去する。乾燥残留物を最少量の煮沸エタノールに取り、濾過し、そしてその溶液の冷却に基づいて、結晶性ヨード−生成物、３−フルオロ−５−ヨード−６−アミノ−１゜２−ベンゾピロン（１）を得る。

他のハロー５−ｌ−６−ＡＲＰは、同じ態様で調製され得る。

フルオロ−５−ヨード−６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンは、例３に記載される方法を用いることによって、上記得られたフルオロ−５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンから調製できる。

ヨード又はブロモ置換基を含むニトロ誘導体の還元のための合成方法においては、亜ジチオン酸ナトリウムが水素化硼素カリウムと置換される。なぜならば、後者の試薬は芳香族環からそれらの多くのハロゲンを置換できるからである。

例１１この例は、培養細胞におけるＤＮＡ合成に対しての６−アミノ−１゜２−ベンゾピロン（６−ＡＢＰ）及び５−ヨード−６−アミノ−１，２−ペンゾビロン（５ −１−６−ＡＲＰ）の効果を示す。

この研究においては、次の細胞系が使用された：　５ｃｉｅｎｃｅ、　２１５　：２５２（１９８２）に記載されるような、細胞系ＣＧ１．　ＨｅＬａ細胞と正常なヒト線維芽細胞との非腫瘍形成性ハイブリッド及びその対応する腫瘍形成性相当物、ＣＧＩ　ＩＩｌ、これらの細胞はＵＣＩｒｖｉｎｅから得られた。

１４Ｃ細胞は、Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　８４　：　１１０７（１９８７）に記載されるような腫瘍形成性のステロイド誘発性増強を示すＥＪ　−ｒａｓ形質転換Ｒａｔ−１線維芽細胞である。ＨＥｐ−２ヒト類表皮腫細胞は、Ｄｒ、　Ｌ。

Ａｕｒｅｌｉａｎ　（［Ｊｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍａｒｙｌａｎｄ）から提供された。Ｅ−Ｒａｓ細胞は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃ１ｎｃｉｎｎａｔｉから得られ、そしてＰｒｏｃ、　Ｎａｔ　ｌ。

Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、、　７６　：　１３７３（１９７９）に記載されるようなｐｓＶ２ｎｅｏプラスミドによりトランスフェクトされた内皮細胞系を示す。この細胞系は活性化されたヒトＨａ　−ｒａｓ癌遺伝子のいくつかのコピーを含む。

細胞を、６０００±６５０個の細胞／ウェルの密度でＦａｌｃｏｎ組織培養プレートの２　ｃｍ２ウェルに接種した。インヒビターを、水中、　１００ｍＭ０）６−ＡＢＰ　又ハ）ｉｆルス）Ｉ、＊キ’Ｊド（ＤＭＳＯ）巾、５０ｍＭノ５− １−６−ＡＢＰのストック溶液から前記接種懸濁液に添加した。相当する濃度での単独でのＤＭＳＯはＤＮＡ合成に対して効果は育さなかった。増殖培地はダルベツコＭＥＭ　（細胞系＃１及び２）であり、そしてダルベツコ変性イーグル培地（細胞系３〜６）は１０％ウシ胎児血清及びペニシリン（１００μｇ／ｍｌ）並びにストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含む。５％のＣｏ２湿潤雰囲気下での３７°Ｃでの７２時間のインキュベ−’）ａン（Ｄ後、ＤＮＡへ０）　Ｃ’Ｈ）デオキシアゾ／　シン（ＩＣＮ、　１８Ｃｉ／ｍモル）の取り込みは次の通りにして試験された：培地の〔３Ｈ〕デオキシアデノシン（４０μｍ中、４５（）、　０００ｄｐｍ）をウェル（それぞれ培地６００μｍを含む）当たりに添加し、そして３７°Ｃでのインキュベーションを１時間続け、続いて培地を除去し、そしてリン酸緩衝溶液により３度、ウェルをすすいだ。次に、細胞を０．０６ＭのＮａＯＨ５００μｍ中に溶解し、そして酸沈殿性放射能を測定した。

２、ＣＧＩ　ＩＩＩ　−３７，５（±１０．６）％　−６４，４（±１０．７）％３、Ｒａｔ−１−３０，５（±７．９）％　−３５，６（±２．０）％４、　１４Ｃ−５３，３（±６．６）％　−６９，２（±１１．７）％５、ＨＥｐ−２ −４７，６（±９．９）％　−５２，４（±６．３）％６　、Ｅ−Ｒａｓ　−６９，５（±３．９）％　−８１，８（±３．９）％Ｎ＝５；結果は、対照細胞に対しての％阻害率として表わされる。

薬物処理を伴わなかった対照培養物は、ＤＮＡ−取り込み放射能の次の値を示した（ウェル当たりのｄｐｍ）　：ＣＧＩ　［１３，０５０±２．６１０　；ＣＧＩ　ＩＩＩ　２２．５６０±４．５６０　。

Ｒａｔ−１７，９２０±１．５６０　。

１４Ｃ１１，０４０±２．７６０　；ＨＥｐ−２１８，７５０±４，５６０　；Ｅ−Ｒａｓ　２７，２５５±３．９６０゜細胞増殖阻害の結果は表１に示される。すべての場合、特定の腫瘍形成細胞タイプの復製は、５−ｌ−６−ＡＲＰ処理によりひじょうに阻害される。対照的に、５００μＭ）６−ＡＢＰが、５０ＭＭ（７）　５−　ｒ−６−ＡＢＰと同じ有効性を有した。

この例は、ＨＳＶ又はＣＭＶにより感染された細胞培養物におけるＨＳＶ及びＣＭＶ複製に対しての５−ｌ−６−ＡＲＰの阻害活性を示す。

Ｖｅｒｏ、　ＨＥｐ　−２又はＭＲＣ−５細胞を、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２によりそれらを感染する前、０．１〜１０ｍＭの種々の濃度での５−Ｉ−６−ＡＲＰに種々の時間、暴露する（５〜ｔｏ　ＰＰＵ／細胞）。ウィルス力価を２４時間後に測定する。

５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロンはＨＳＶ及びＣＭＶ増殖を阻害する。５−Ｉ−６−ＡＢＰの阻害効果は細胞タイプにより影響されない。

上記と同じ研究がＣＭＶ感染細胞培養物を用いて行なわれる。５−Ｉ　−６−ＡＲＰ処理はまた、ＣＭＶ増殖を効果的に阻害する。

例１３培養物における確立した細胞系における５−Ｉ−６−ＡＢＰの直接的な抗−〇ＩＶ効果この例は、確立した細胞培養物におけるＨＩＶ複製に対しての５−１−６−ＡＲＰの直接的な阻害効果を示す。

ＡＡ−２及びＭＴ−２細胞の５−Ｉ−６−ＡＲＰ処理の効果を、細胞計数及び生存性試験、並びにクローニング効率及びトリバンブルー摂取により直接的に分析した。ウェル当たり０．５Ｘ１０’個の初期細胞計数を有するＡＡ２又はＭＴ− ２細胞培養物を、３ｍＭの６−ＡＲＰ及び／又はＯ，ＩｍＭの５−ｌ−６−ＡＢＰによる処理にゆだね、そして処理されなかった細胞培養物と比較した。細胞は、５−ｌ−６−ＡＢＰ及び６−ＡＢＰによる処理後４日で計数された。

生存性試験は、６−ＡＢＰの毒性効果の証拠を示さなかった。結果は、図２及び３に示されており、そして前で論ぜられた。

５−Ｉ−６−ＡＢＰ及び６−ＡＲＰの両者は、細胞増殖に対して阻害効果を付与することが明らかである。５−ｌ−６−ＡＲＰは抗−旧Ｖ剤としてｌＯ・〜３０倍以上の可能性ををする。そのような阻害効果は、一時的であり、可逆的であり、モしてＨＩＶ複製の完全な廃棄を伴う。

しかしながら、ＡＡ−２又はＭＴ−２細胞における細胞複製の遅延は、いづれの検出できる細胞毒性を伴わず、その現象は他の薬物の細胞増殖抑制抗癌効果を予測する。この発見は、それがいづれかの化合物のための細胞毒性を包含しない限り、ユニークである。

この例は、ヒトリンパ芽球患者におけるＨｒＶ増殖に対する６−ＡＲＰの阻害効果を示す。

これらの実験で使用されるＨＩｖ単離物は感染された患者の血液から単離される。単離の後、ＨＤ感染がＣ２Ｍ細胞に確立され、そしてそれらの感染された細胞が、組織培養感染用量（ＴＣＩＤ）の濃度を測定するために滴定される）ＩＩＶウィルスのストックを生成するために使用される。

５−ｌ−６−ＡＢＰは、必要に応じさらに希釈される量で塩溶液に溶解され、そして予定された濃度で細胞を含む培養培地に添加される。

感染されていない正常な個人からのヒト末梢血液単核細胞を、組織培養において植物凝集素により２〜３日間、刺激し、洗浄し、アリコートを取り、そしてＨＩＶの２００ＴＣＩＤ又は５０ＴＣＩＤと共に一晩、培養し、そしてそのままにし、又は０．０１．０．１．１．０又は１０．０ｍＭの５−Ｉ　−６−ＡＲＰにより処理する。細胞を、ＩＬ−２を含むが、しかし追加の５−Ｉ−６−ＡＲＰを含まない培地における培養物に置き、そして旧Ｖ−ｐ２４コア抗原の生成について又は特定の逆転写酵素の測定のために６〜１２日間モニターする。旧■のそれらのインジケーターのいづれかの量の低下か、正常なヒトリンパ芽球において複製する旧■の能力に対する５−ｌ−６−ＡＲＰによる阻害を示す。

ＨＩＶ　ｐ２４抗原を、５１１ｇ／ｍｌのカットオフを伴って、ＥＬＩＳＡにより測定する。特定の逆転写酵素を、組織培養物流体から遊離ウィルスを遠心分離し、界面活性剤、マグネシウム、Ｈ３−ラベルされたｄＴＴＰ及びポリｒＡ・オリゴｄＴプライマーを含む緩衝液にＨＩＶを溶解し、１時間インキュベートし、そして沈殿可能な放射能を測定することによって測定し、そしてＨＩＶ含有培地の体積当たりのｃｐｍとして表わす。

５−ｌ−６−ＡＲＰ処理に従って観察される）ＩＩＶの阻害は一時的であり且つ可逆的である。従って、６−ＡＲＰの抗増殖効果は、現在使用され又は入手できる細胞増殖抑制剤のしづれかに比べて、検出できる細胞損傷又は死を伴わないで達成され得る。

この例は、５−Ｉ−６−ＡＢＰのラットへの腹腔内投与の後、毒性の欠乏を示す。

５−ｌ−６−ＡＲＰをマウスに投与する毒物学試験は、次の条件下で行なわれた。

４匹のＦｉｓｈｅｒ　３４４／ｓｉｍ　ｆＢＲ雄近交系ラット（１２０〜１３０　ｇの体重、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｇ１１ｒｏｙ、　（Ａ）は、プラスチ・ソクカコ１に入れられ、そしてペレット化された規定食及び水を補助的に受けた。４匹のラットのうち２匹が４日続けて１日１度、５−＋５−ｌ−６−ＡＲＰ（Ｄ中、　１００ｍｇ／　ｋｇ）により注射され（ｉ、　＋１．　）そして他の２匹のラットは同じ処置を受けたが、但し５ −１−６−ＡＢＰ（ＤＭＳＯ中、５９ｍｇ／ｋｇ）のより少ない用量であった。

注射の４日後、明白な毒性効果は観察されなかった。数週間続けられた、　１００〜５００　ｍｇの薬物／実験においては、０．３５ｍＭの相当する濃度１００ｍｇ／ｋｇで、抗ウイルス効果が最大であることが示された。

ＦＩＧＵＲＥ／ＰＰＭ８．０　７．８　７．６　７．４　７．２　７．０　６．８　６．６　６．４ＰＭＦＩＧＵＲＥ２一一Δ−−投与量（０日）一←・−処理されていないｄ４ −Ｃ）−６−ＡＲＰ（３ｍ％ル）ｄ４ −１１−５−ｌ−６−ＡＢＰ（１００μモル）ｄ４ＦＩＧＵＲＥ３ −・−処理されていないｄ４ −ＩＳ−６−ＡＢＰ＜３ｍモル）ｄ４＋　５−ｌ−６−ＡＢＰ（１００μモル）ｄ４ＦＩＧＵＲＥ４ＨＩＶ−希釈度を噂　対照一転〒−１６−ＡＢＰ　（３ｍＭ）（Σべ）　５−ｌ−６−ＡＢＰ（０，３ｍＭ）ＦＩＧＵＲＥ５ｇｏｏ　４００　８００　１６００ＨＩＶ−希釈度シ嗜　対照ｔｒ１＼　６−ＡＢＰ（３ｍＭ）〔Σ−０５−ｌ−６−ＡＢＰ（０，３ｍＭ〕ＦＩＧＵＲＥ６ＨＩＶ−希釈度会噌　対照ｔｒｉ　６−ＡＥＩＰ（３ｍＭ）０−０　５−ｌ−６−ＡＢＰ（０，３ｍＭ）補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成５年４月１９日

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳類におけるウィルス感染の処理方法であって、下記式：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるそれらの塩の有効量を、そのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。
２．前記Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、及びＲ４が水素である請求の範囲第１項記載の方法。
３．哺乳類における腫瘍増殖の処理方法であって、下記式：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるそれらの塩の有効量を、そのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。
４．前記Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、及びＲ４が水素である請求の範囲第３項記載の方法。
５．抗ウィルス剤として有用な、下記式：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるそれらの塩。
６．前記Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、及びＲ４が水素である請求の範囲第５項記載の化合物。
７．抗腫瘍剤として有用な、下記式：（ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物又は医薬的に許容できるそれらの塩。
８．前記Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、及びＲ４が水素である請求の範囲第７項記載の化合物。
９．哺乳類におけるヒト免疫欠陥ウィルス、ヘルペスウィルス、サイトメガロウイルス又は動物ウィルスにより引き起こされるウィルス疾患の処理及び予防のための方法であって、下記式：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるそれらの塩の有効量を、そのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。
１０．前記Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、及びＲ４が水素である請求の範囲第９項記載の方法。
１１．ＡＩＤＳを有する哺乳類における腫瘍増殖の処理及び予防方法であって、下記式：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３、又はＲ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ハロ又は場合によっては、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ又はハロにより置換されたフェニルからそれぞれ独立して選択される〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるそれらの塩の有効量を、そのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。
１２．前記二次性癌がカポジ肉腫、非ホジキンリンパ腫又は一次リンパ腫である請求の範囲第１１項記載の方法。