JPH06502659A

JPH06502659A - 免疫抑制剤としてのラパマイシンプロドラッグの使用

Info

Publication number: JPH06502659A
Application number: JP5500386A
Authority: JP
Inventors: シュルト，ゲアリー　アール
Original assignee: ファイザー　インク
Priority date: 1991-05-31
Filing date: 1992-04-03
Publication date: 1994-03-24
Also published as: US5432183A; FI935298A; WO1992021341A1; CA2102116A1; FI935298A0; PT100556A; IE921728A1; EP0586512A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】制斉としてのラバマイシンプロドラッグの　用及五〇！東本発明は、免疫抑制剤としてのラバマイシンプロドラッグの使用、例えば、器官移植拒絶反応の防止及び／または自己免疫症の治療におけるヒトホストへの使用に関する。本発明はまた、プロドラッグ合成の中間体およびプロドラッグに関する。

１９８３年、米国厚生省は、器官移植手術の分野に革命を起こした抗拒絶薬剤である、シクロスポリンＡにライセンスを付与した。この薬剤は、体内の免疫システムが、移植された他のタンパク質を拒絶する自然保護剤が大量に動員されることを阻害することにより、機能するものである。シクロスポリンＡは、移植拒絶反応に対して効果的であるが、多くの場合、非常に重症な潰瘍、腎不全、および肝臓障害をもたらすという欠点がある。副作用のより少ない、新規で安全な薬剤が、常に研究されている。

ラバマイシンは、米国特許第３，９２９，９９２号に開示されているような抗真菌剤として有用であり、また、マーチルらによる文献（Ｍａｒｔｅｌ、ｅｔａｌ、、Ｃａｎ、Ｊ、Ｐｈｙｓ　ｉｏｌ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、５５．４８−５１（１９７７））に記載されているように、免疫反応を阻害することが可能であることが見いだされている。

又五〇！１本発明は、例えば、自己免疫症を治療する、または器官または組織移植拒絶反応を防止又は回復するなどの、免疫システムを抑制する方法に関し、この方法は、上記治療を必要とする哺乳類に、式［式中、Ｒ１およびＲ２は独立に、水素および以下の式（式中、ｍは１−６、Ｒ３およびＲ４は各々、水素原子；分岐または直鎖の０ｌ−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ３−Ｃ８アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；または、Ｒ３およびＲ４は共に窒素原子に結合して、４または５個の炭素原子を有する飽和へテロ環を形成する）で表される基から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２は双方とも水素原子であることはない］で表される化合物を免疫抑制効果量投与することからなる。本発明の好ましい実施態様においては、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、式ＩＩで表される基であり、より好ましくは、Ｒ３およびＲ４はＣ，−Ｃ８アルキル基である。

本発明はまた、式Ｉで表されるラバマイシンのプロドラッグを形成するための中間体に関し、ここで、Ｒ１またはＲ２は、各々独立に、であり、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である。好ましい脱離基は、Ｂｒ、ｃｌ、工、−０５０２ＣＨ３、およびｐ−）ルエンスルホネートである。

本発明はまた、式■で表されるラバマイシンのプロドラッグまたはその薬剤学的に許容される塩に関し、ここで、Ｒ２は水素原子、Ｒ１は、（式中、ｎは１−６、Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ，−Ｃｓアルキル基；環状Ｃ３−Ｃ，アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；または、Ｒ３およびＲ４は共に窒素原子に結合して、４または５個の炭素原子を有する飽和へテロ環を形成する）である。本発明はまた、プロドラッグを含有する薬剤組成物に関する。

発盟立旧縦久肢吸式■の化合物は、ラバマイシンプロドラッグである。ラバマイシンおよびそのある種のプロドラッグは、米国特許第３，９２９，９９２号；３．９９３，７４９号＋４，３１６，８８５号及び４，６５０，８０３号に記載されて１７％る。

本発明のプロドラッグ化合物は、まず、ラバマイシンの酢酸エステルを形成することにより合成する。これは、ラバマイシン、式Ｉの化合物しここで、Ｒ１およびＲ２の双方ともが水素原子である〕を、弐ＹＣＯ（ＣＨ，）　ｆｆ１Ｘ　（Ｖ）［ここで、ｍは上記と同様］と、非極性溶媒およびアルキルアミン塩基の存在下、反応させる。式Ｖのアシル化剤としては、Ｙがたとえばハロゲン、Ｎ３、− ０であり、Ｘは、たとえばハロゲン、−０５０２ＣＨ３、などの適当な脱離基である。好ましいアシル化剤は、ＸおよびＹが各々、臭素原子である。適当なアミン塩基としては、以下に示すトリアルキルアミン塩基′Ｒ’＝Ｃ，−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基Ｒ’＝Ｈ，Ｃ，−Ｃ４アルキル基、Ｎ　（ＣＨ，）　２Ｒ８、Ｒ１０＝Ｈ，Ｃ，−Ｃ，アルキル基ｎ−Ｈ，１，３゜モノ−及びジアルキルアミン塩基は、アシル物質と反応し、アルカリ水酸化物およびアルカリ水素化物は、この反応からマクロライド系抗生物質にするものである。好ましくはトリアルキルアミン塩基が使用され、２，４．６−コリジンが好ましい。以下の溶媒が単独でまたは混合物で使用可能である：　（１）炭化水素（たとえば、ペンタン、ヘキサンおよびシクロヘキサン）、　（２）ノＸロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、および西塩化炭嚢）、　（３）芳香族炭化水素（たとえば、ベンゼンまたはトルエン）、および（４）エーテル（たとえば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、およびジオキサン）、好ましくはジクロロメタンである。反応条件は、約−７８℃から約＋５０℃の範囲の温度で、好ましくは約−４３℃である。

反応は不活性雰囲気下で、たとえば窒素またはアルゴンガスを用いて行なわれる。

反応時間は、典型的には、５分から２４時間であり、好ましくは約５時間である。

第１工程後、反応混合物は、２８位、４３位、および両方に置換基のついたラバマイシンを含有する。極性に基づいて分離する標準フラッシュクロマトグラフィを用いて、各々を単独で進めるために、３つの置換ラバマイシンを各々単離する。

第２工程は、ラバマイシンの酢酸エステルを式ＨＮＲ３Ｒ’の核性化合物と反応させて、相当するグリシン酸エステルを形成した請求核性化合物としては、Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ，−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ，−Ｃ８アルキル基；フェニル基；またはベンジル基であり、好ましくは各々メチル基である。非極性溶媒としては、以下のものが単独または混合物で使用される二上記した（１）ハロゲン化炭化水素、（２）芳香族炭化水素、および（３）エーテル及び（４）極性非プロトン性溶媒（たとえば、Ｎ、　Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、およびアセトニトリル）、好ましくはジメチルホルムアミドである。反応は、約−７８℃から約室温（約２７℃）の範囲の温度で行なわれ、好ましくは約−４５℃で行なわれる。反応は不活性雰囲気下で、たとえば窒素またはアルゴン雰囲気下で行なわれる。

グリシン酸エステルのプロドラッグ塩は、エステルのアミンを鉱酸及び有機酸（Ｈ”Ｘ）　［ここでＸはたとえばハロゲン、Ｈ２Ｏ２、Ｈ２ＰＯ４、ＨＣＯ，、Ｒ’ＣＯＯ１およびＲ’Ｓ○３であり、ここでＲ７はＣ，−Ｃ２４アルキル基、Ｃ１−Ｃ２４アルケニル基、またはフェニル基である］と反応させることにより、形成するものである。好ましくはＸ＝ＣＩ、ＭｅＳＯ３、ＭｅＣＯＯｌまたはＣＨ３（ＣＨ，）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）、Ｃｏｏ　（オレエート）である。塩形成用溶媒は：　（１）炭化水素、（２）ハロゲン化炭化水素、（３）芳香族炭化水素、および（４）エーテルであり、好ましくはジエチルエーテルである。すべての塩形成は、−７８℃から室温の範囲の温度で行なわれ、好ましくは０℃である。

ラバマイシンおよびそのプロドラッグは、免疫抑制活性、たとえば、Ｔ−細胞活性のポジティブ阻害を示すものである。ラバマイシンおよびそのプロドラッグの免疫抑制効果は、以下の試験により例証可能である。

免疫抑制はヒトリンパ球における３Ｈ−チミジンの取り込みを測定することにより、測定可能である。この方法は、刺激剤集団としての凍結ドナー細胞と、応答剤集団としての単離された新鮮な細胞とを用いた、変性２方混合リンパ球反応（ａ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｔｗｏ−ｗａｙ　ｍ１ｘｅｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）である◇ 応答剤集団は、ヒト血液を０．８ｍｌ　（保存性フリーヘパリン（１００ＯＵＳＰユニツト／ｍ１））含有する滅菌シリンジに入れることにより調製する。２５ｍ１の血液と２０ｍ１のＲＰＭＩ−１６４０リンパ球培地を添加し、遠心分離管で混合する。この混合物に次いで、１０ｍ１のヒストバック（ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ）　−１０８３（シグマ）を下層に入れ、室温で約３０分間、約９２５ｇで遠心分離する。遠心分離完了後、ヒストバック−１０８３の層における単核細胞、すなわち上から３層目を取り出す。これらの細胞は次いでＲＰＭＩ−１６４０で再形成し、１８００ｒｐｍで５分間遠心分離後、上澄み液を除去し、ＲＰＭＩ −１６４０に再懸濁する。この洗浄工程が後２回繰り返される。最終洗浄の後、細胞が懸濁（ＲＰＭＩ−１６４０）した培地を、０．５％ＭＥＭ非必須アミノ酸（１００Ｘ）溶液、１％Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）　、１％ＭＥＭビタミン（１００Ｘ）　、１％ペニシリンストレプトマイシン溶液（１００００ユニツト／ｍ１）、および１５％熱−不活性ヒ）ＡＢ血清（ＮＡＢＩ）を添加する。細胞は約５Ｘ１０’／ｍｌの濃度に調整し、１００μＩ／ウエルの細胞株を丸底９６穴ウエルプレートに添加する。

刺激剤プールは、７つの異なったドナー血液から血液を収集、分離し、上記したような単核細胞と応答剤集団を洗浄し、前記洗浄ステップまでおこなうことにより調製する。最終洗浄後、ドナーからの単核細胞がプールされ、９０％ヒトＡＢ血清およびｌＯ％ＤＭＳＯにおいて２Ｘ　１０’細胞／ｍｌで懸濁し、液体窒素に保存する。テストを行なう準備の際、凍結細胞は、解凍が始まるまで約３７℃ の温度で水浴中に置く。細胞はその時点で水浴から外し、室温でＲＰＭＩ−１６４０をペレットに添加する。細胞が完全に解けた後、一度、ＲＰＭＩ−１６４０で洗浄し、最少容量で再懸濁して、生存能力がたとえばトリパン青排除染色を用いて定められる（生存能力は８０％を越えるべきである）。生存能力標準を示すこれらの細胞は、ＲＰＭＩ−１６４０で希釈して５Ｘ１０５細胞／ｍｌの濃度とし、１００μｍ／ウェルの刺激剤細胞を、応答側細胞を含有するウェルに添加する。

テスト化合物はエタノールまたはＤＭＳ○（１０％）および滅菌水（９０％）に溶解する。溶解された化合物の濃度はテスト化合物溶液を５０μｌ添加することにより、各ウェルの最終濃度が１０．１、またはＯ，１ｍｇ／ｍｌとなるように調整する。各投与に対するテストは、３つずつのウェルにおいて行なわれ、プレートは約３７℃で、５％Ｃｏ２において培養し、５日間湿気に設置する。１μＣｉ／ウエルの３Ｈ−チミジンを次いで各ウェルに入れ、プレートを更に１８時間培養する。この後、細胞が採取され、トリチウムをＬＫＢベータプレート（ＢＥＴＡ　ＰＬＡＴＥ）カウンターシステムを用いてカウントする。

応答剤および刺激剤細胞の３つずつのウェルを含むテスト対照は、別々に行なわれるもの（刺激していないもの）、および薬剤を添加しない細胞の１：ｌ混合物（刺激されたもの）のものに対しても行なわれる。各ウェルの３Ｈ−チミジンの取り込みが定められ、３つずつの各セットの平均ｃｐｍ値を計算する。阻害％は、以下の式を用いて計算する：阻害％＝［１−（薬剤を用いた平均ｃｐｍ）／（刺激対照の平均ｃｐｍ）］全ての化合物濃度に対して５０％以上の阻害を示すものを、活性があるとする。

第２のテストは、インターロイキン−２−バイオシンセシス阻害の評価に関する。ラット膵臓細胞懸濁液がまず、ラットから膵臓を取り出して細かく刻み、細かいメツシュに押して通過させて、ＲＰＭＩ−１６４０，５％の熱不活性なウシ胎児血清（Ｆｅ２）　、１００μｇのストレプトマイシン／ｍｌ、および２ｍＭの１−グルタミン（ＲＰＭＩ１５）で洗浄する。約５Ｘ　１０’の膵臓細胞が、各２００−２５０ｇのラットから回収される。ラット膵臓細胞は、５Ｘ１０’細胞／ｍｌの濃度で、ＲＰＭＩ１５に再懸濁し、２μｇ／ｍｌのＣｏｎＡをこの細胞懸濁液に添加する。

また、ＣＴＬＬ−２細胞も公知の方法を使用して調製し、テストの前に、４０％ラット成長ファクターとともに、６０％ＲＰＭ１１６４０、ｌＯ％ＦＣ５、ペニシリン／ストレプトマイシン（ｐｅｎ／５ｔｒｅｐ）、１−グルタミン（ＲＰＭＩ／１０）に保持する。ラット成長ファクターは、約５Ｘ１０’のラット膵臓細胞／ｍｌを２　ｐ　ｇ　／　ｍ　ｌのＣｏｎＡを用いて４８時間、ＲＰＭＩ１５におＩ／１て培養することにより調製したサイトキンの混合物である。培養物は次し）で遠心分離し、上澄み液を滅菌濾過して、使用するまで一２０℃で保存する。

約１ｍｇのテスト化合物を、１．０ｍｌの約１０％ＤＭＳＯまたはエタノールおよび９０％のリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）または滅菌水に溶解する。化合物は次いでからにＲＰＭＩ１５に希釈して、最終濃度が３０．０．３．０及び０゜３μ ｇ／ｍｌとなるようにする。Ｏ，１ｍｌのテスト化合物の各濃度のものを、０．１ｍｌの上記膵臓細胞懸濁液をすでに含有している細胞培養プレートの各ウェルに添加し、３回繰り返される。Ｏ，１ｍｌの培地をさらに各ウェルに添加し、最終テスト化合物の濃度が１０．０．１．０、及び０．１μｇ／ｍｌとなるようにする。細胞は湿気中、３７℃で５％ＣＯ２の環境下、約２４時間培養する。培養後、Ｏ，１ｍｌの上澄み液を取り除き、ＣＴＬＬ−２細胞を含有する他の組織培養プレートのウェルに添加する。膵臓細胞は生存力測定のため、保存する。

ＣＴＬＬ−２細胞を使用する前の日に、ＣＴＬＬ−２細胞を洗浄し、ラット成長ファクターなしのＲＰＭＩ／１０に１０５細胞／ｍｌで再懸濁し、これを、０．１ｍｌの上記膵臓細胞懸濁液が既に添加されている９６穴ウ工ル組織培養プレートのウェルに、Ｏ，１ｍｌずつプレートする。テスト上澄み液を添加した後、プレートは、５％ＣＯ□雰囲気下、３７℃で４８時間培養する。採集の６時間前に、１．０μＣｉ）リチウム化チミジン（スペクトル活性２．ＯＣｉ／ｍＭ）　を各ウェルに添加する。細胞は次いで、採集され、トリチウムを（ＬＫＢベータープレートシステムを用いて）カウントする。

阻害％は、対照上澄み液としてのＣｏｎＡのみの導入に関して計算され、各濃度で定められる。牌！ｌｉ［ｌＩｌ胞とＣＴＬＬ−２細胞の生存性もまた評価する。８０％以上のＩＬ−２生成を阻害し、ＣｏｎＡｔｔ照例と比較して８０％よりも多し）膵臓細胞の生存性を減らすことなく、さらにＣＴＬＬ−２細胞に対して毒性ではない化合物を、活性であるとする。

延滞タイプ過敏性（ＤＴＨ）の第３の試験は、ヒツジの赤血球のチャレンジに対して感作されたマウスの延滞反応を阻害する化合物の能力を決定するのに使用可能である。試験は、２０ｇのＣ５７ＢＬ／６オスマウス（チャールズ・リノく− ・ブリーディング・ラボラトリーズ）、典型的には１グル一プ５匹を使用する。

繊維素除去したヒツジの血液は、たとえば、スコツト・ラボラトリーズ・インコーコレーションから入手可能である。第１８目、ヒツジの赤血球は、約４ｍｌのヒツジの赤血球（ｓｒｂｃｓ）を３００Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離することにより調製する。上澄み液が流され、赤血球を９ｍｌの滅菌食塩水に再懸濁する。

この洗浄工程は後２回行なわれる。赤血球は次いで５Ｘ　１０’／ｍ　ｌの濃度に調整する。

動物は１０％エタノール、ＤＭＳＯｌまたは類似の媒体における０、２ｍｌのテスト化合物で処理される。対照グループとしては、媒体対照、および無処理免疫対照、および通常、すなわち無感作グループが挙げられる。また、第１８目の上記処理後の約１時間後（動物がどのグループに属するかに依存する）、動物は、１０’５ｒｂｃｓ、０．２ｍｌ　ｉ、Ｖ、を注射することにより感作する。動物はさらなる４日間、毎日処理する。４日目、５ｒｂｃｓが、最終濃度を３ＸｌＯ ’／ｍｌに調整する以外は前と同様調製される。処理後約１時間で、動物は０゜０３ｍ１の容量で、後ろ脚の平らな表面に１０８ｓｒｂｃｓが移植されることによりチャレンジされる。

チャレンジ後約２４時間で、雨後ろ脚の厚みをダイヤルゲージのカリノ（スで測定する。チャレンジされた脚の対照脚に対する脚のサイズの増加が、ＤＴＨの測定であり、典型的には０．８から１．２ｍｍの範囲である。

結果は、対照に対する薬剤処理グループの、ＤＴＨ％阻害として得られる。

本出願のラバマイシンプロドラッグは、免疫抑制活性および抗菌活性を有しており、したがって、移植された器官および組織（たとえば、心臓、心肺、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚など）の拒絶反応、全身性エリテマトーデス、ｌ）シモト甲状腺炎、多発性硬化症、重力筋無力症、タイプ■の糖尿病、ブドウ膜炎、気道閉鎖症、および乾癖）、リウマチ性関節炎などの自己免疫症および病原性微生物による感染症などの治療、防止に有用である。

本発明の薬剤組成物は、ラバマイシンプロドラッグを活性成分として、外部、腸内または非経口投与に適する、有機または無機キャリアまたは賦形剤とともに含有する、たとえば固体状、半固体状、または液体状の薬剤製剤として使用可能である。活性成分はたとえば、錠剤、ペレット、カプセル、生薬、溶液、乳剤、懸濁液、およびその他の使用に適した形態用の、通常の無毒性の、薬剤学的に許容されるキャリアと製剤する。キャリアとしては、水、グルコース、ラクトース、アカシアゴム、ゼラチン、マンニトール、澱粉ペースト、トリケイ酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイダルシリカ、ホテト澱粉、尿素およびその他の製剤調製に適当なキャリアが、固体状、半固体状、または液体状で使用され、さらに補助剤、安定剤、増ちょう剤、および着色剤、および香料が使用されてもよい。

ヒトに対してこのような薬剤組成物を適用するには、非経口または経口投与により、組成物を投与するのが好ましい。ラバマイシンプロドラッグの治療有効投与量は、各治療される患者の年令および病状に依存するが、約１ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２０ｍｇ／ｋｇの１日の投与量で、１回の平均量としては、約０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇが一般には投与される。

以下、本発明を例解する目的で実施例を記載するが、本発明はこれらに限定されるわけではない。

夾施匹上ラバマイシンの４３−ブロモ酢　エステルラバマイシン（５，０ｇｍ、５．４７ｍｍｏ　Ｉ）を５００ｍ１のジクロロメタンに溶解し、次いでこの溶液を一７２ ℃（アセトン／ドライアイス浴）に冷却した。２，４．６−コリジン（１４，４６ｍ１．１０９．４１ｍｍｏ　ｌ）およびブロモアセチルクロリド（４，０６ｍ１．４９．２３ｍｍｏｌ）を順に、冷却したラバマイシン溶液に添加した。４．５時間後、さらに２，４．６−コリジン（７，１２ｍ１．５３．８６ｍｍｏ　Ｉ＞およびブロモアセチルクロリド（２，００ｍ１．２４．２４ｍｍｏ　Ｉ）を添加した。反応は５％炭炭酸水素ナトリウム水氷４００ｍ１／６００ｍ１）混合物に注ぐことにより終了した。全反応時間１ま５５時間であった。この水溶液を酢酸エチル（８００ｍｌ）で抽出した。有機溶液を、５％炭酸水素ナトリウム（４Ｘ５００ｍｌ）　、次いで５％塩酸（４Ｘ５００ｍｌ）で洗浄後、乾燥（無水硫酸ナトリウム）して濾過した。濃縮後、クロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／酢酸エチル、１：１）で精製したところ、純粋な表題化合物（２，０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ、３５％収率）がガラス状物質として得られた。

豊里二二久：高速原子衝撃質量スペクトル（Ｆａｓｔ　ａｔｏｍ　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ｍａｓｓ　５ｐｅｃ、）：ｍ／ｚ１０５７／１０５９　（（Ｍ＋Ｎａ）”、５％）、１０３４／１０３６　（（Ｍ＋Ｈ）＋、１０％）；部分’ＨＮＭＲ（ＣＤ２Ｃ１，）：６４．６８　（ＩＨ，ｄｄｄ）および３．８５　（２Ｈ，ｂｒｓ）。

寒ム匹ｌ −バマイシンの４−Ｎ　Ｎ−ジメチルアミン　エステルラバマイシンの４３−ブロモ酢酸エステル（１，０１ｇ、０．９７８ｍｍ。

１）を２０ｍ１のＮ、　Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いで一４５℃（アセトニトリル／ドライアイス）に冷却した。この溶液に、過剰のジメチルアミン（１ｍｌ）の３ｍｌのＮ、　Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を、反応溶液が一４０℃より低く保持されるようにろうとを経由してゆっくり添加した。１時間後、反応は完結し、６００ｍ１の食塩水と氷に注いだ。水溶液を酢酸エチル（２Ｘ２５０ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル溶液を食塩水（３Ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリム）した後、濾過して濃縮したところ、純粋な表題化合物（０゜９５ｇ、０．９５７ｍｍｏｌ、９８％収率）がガラス状固体として得られた。

腹里二二久：高遠原子衝撃質量スペクトル（Ｆａｓｔ　ａｔｏｍ　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ｍａｓｓ　５ｐｅｃ、）：ｍ／ｚ１０２１　（（Ｍ＋Ｎａ）”、５％）、９９９　（（Ｍ＋Ｈ）　”、１００％）；部分’ＨＮＭＲ（ＣＤ２ＣＩ、）：δ４．６８　（ＩＨ，ｄｄｄ）　、３．１２　（２Ｈ，ｂｒｓ）、および２．３０　（６Ｈ，ｂｒｓ）。

寒施丘ｌラバマイシンの４３−Ｎ　Ｎ−ジメチルグリシン　エステルのＬ叉ヱ五と史ヱ除塚ラバマイシンの４３−Ｎ、Ｎ−ジメチルグリシン酸エステル（０，９５ｇ、−０，９５２ｍｍｏｌ）のサンプルを５ｍＬのジクロロメタン【二溶解し、０℃ｌ：冷却した。メタンスルホン酸（３，２５ｍ１．４９．９ｍｍｏｌ）のジエチフレエーテル（４６，７ｍ１）株溶液を調製した。酸溶液の１ｍｌア１ノコートを、冷却したアミノエステルにゆっくり添加した。添加後、溶液力（濃縮されて、表題化合物（１，０２ｇ、０．９８６ｍｍｏｌ、９８％収率）力τ明黄色固体として得られた。

融点：１００−１２０℃。

能）、４．７９（ＬＨ，ｄｄｄ）、３．８８（２Ｈ，ｂｒｓ）、３．００（６Ｈ１ｂｒｓ）、および２．７３　（３Ｈ％ｓ）。

国際調査報告国際調査報告一υＳ　９２０２５０４Ｓ＾　６０４９４

Claims

【特許請求の範囲】

１．免疫システムを抑制する方法であり、このような治療を必要とする哺乳類に、式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｒ１およびＲ２は独立に、水素および以下の式▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、ｍは１−６、Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ１−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ３−Ｃ８アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；またはＲ３およびＲ４は共に、窒素原子に結合して４または５個の炭素原子を有する飽和ヘテロ環を形成する）で表される基から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２は双方とも水素原子であることはない］で表される化合物を免疫抑制効果量することからなる、免疫システム抑制方法。
２．前記方法が、自己免疫症を治療するのに使用される、請求項１に記載の方法。
３．前記方法が、器官または組織移植拒絶反応を防止又は回復するのに使用される、請求項１に記載の方法。
４．Ｒ３およびＲ４は各々独立に、直鎖Ｃ１−Ｃ８アルキル基である、請求項１に記載の方法。
５．Ｒ３およびＲ４はいずれも、メチル基である、請求項４に記載の方法。
６．ｍが１である、請求項１に記載の方法。
７．Ｒ１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、ｍは１−６、Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ１−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ３−Ｃ８アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；またはＲ３およびＲ４は共に、窒素原子に結合して４または５個の炭素原子を有する飽和ヘテロ環を形成する）である、請求項１に記載の方法。
８．Ｒ３およびＲ４は各々独立に、直鎖Ｃ１−Ｃ８アルキル基である、請求項７に記載の方法。
９．Ｒ３およびＲ４はいずれも、メチル基である、請求項８に記載の方法。
１０．式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｒ１またはＲ２は各々独立に、以下の式▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である）で表される化合物。
１１．ＸがＢｒ、Ｃ１、またはＩである、請求項１０に記載の化合物。
１２．ＸがＢｒである、請求項１１に記載の化合物。
１３．ｍが１である、請求項１０に記載の化合物。
１４．脱離基がＢｒ、−ＯＳＯ、ＣＨ３、ｐ−トルエンスルホネートである、請求項１０に記載の化合物。
１５．Ｒ１は ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である）である、請求項１０に記載の方法。
１６．脱離基がＢｒ、−ＯＳＯ２ＣＨ３、ｐ−トルエンスルホネートである、請求項１５に記載の化合物。
１７．脱離基がＢｒである、請求項１６に記載の化合物。
１８．式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｒ２は水素原子であり、Ｒ１は式▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＶ）（式中、ｎは１−６、Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ１−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ３−Ｃ８アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；またはＲ３およびＲ４は共に、窒素原子に結合して４または５個の炭素原子を有する飽和ヘテロ環を形成する）で表される化合物、またはその薬剤学的に許容される塩。
１９．ｎが１である、請求項１８に記載の化合物。
２０．Ｒ３およびＲ４は各々独立に、直鎖Ｃ１−Ｃ８アルキル基である、請求項１８に記載の化合物。
２１．Ｒ３およびＲ４はいずれも、メチル基である、請求項１８に記載の化合物。
２２．免疫システムを抑制するのに使用する薬剤組成物であり、免疫抑制効果量の請求項２１の化合物と、薬剤学的に許容されるキャリアまたは希釈剤とからなる、薬剤組成物。
２３．式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｒ１またはＲ２は各々独立に、以下の式▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である）で表される化合物の製造方法であり、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１およびＲ２は各々、水素原子である）を、アルキルアミン塩基の存在下、式：ＹＣＯ（ＣＨ２）Ｘ（式中、Ｘおよびｍは上記と同様であり、Ｙは適当な脱離基である）で表されるアシル化剤と反応させることからなる、製造方法。
２４．ＸがＢｒ、Ｃ１、またはＩである、請求項２３に記載の製造方法。
２５．ＸがＢｒである、請求項２４に記載の製造方法。
２６．ｍが１である、請求項２３に記載の製造方法。
２７．脱離基がＢｒ、−ＯＳ０２ＣＨ３、ｐ−トルエンスルホネートである、請求項２３に記載の製造方法。
２８．Ｒ１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である）である、請求項２３に記載の製造方法。
２９．脱離基がＢｒ、−ＯＳＯ２ＣＨ３、ｐ−トルエンスルホネートである、請求項２８に記載の製造方法。
３０．脱離基がＢｒである、請求項２９に記載の製造方法。
３１．式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｒ２は水素原子であり、Ｒ１は式▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ（式中、ｎは１−６；Ｒ３およびＲ４は各々独立に、水素原子；分岐または直鎖のＣ１−Ｃ８アルキル基；環状Ｃ３−Ｃ８アルキル基；フェニル基；ベンジル基であり；Ｒ３およびＲ４は共に窒素原子に結合して、４または５個の炭素原子を有する飽和ヘテロ環を形成する）で表される化合物の製造方法であり、式Ｉの化合物［式中、Ｒ１は水素原子であり、Ｒ２は ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、Ｘは適当な脱離基であり、ｍは１−６である）］を、式：ＨＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３およびＲ４は上記と同様である）で表される化合物と反応させることからなり、所望ならば、式Ｉの化合物を薬剤学的に許容される塩に変換することからなる、製造方法。
３２．ｎが１である、請求項３１に記載の製造方法。
３３．Ｒ３およびＲ４は各々独立に、直鎖Ｃ１−Ｃ８アルキル基である、請求項３１に記載の製造方法。
３４．Ｒ３およびＲ４はいずれも、メチル基である、請求項３１に記載の製造方法。