JPH0646844A - 液状酵素剤の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 本発明は、酵素結晶が混在する酵素液のｐＨ
を上げて酵素結晶を含まない酵素溶液を得る第１工程と
終濃度が１５〜３０％となる塩類の共存下にこの酵素溶
液のｐＨを下げて酵素を不定形に析出させる第２工程と
を含む液状酵素剤の製造法を提供する。 【効果】 本発明方法によれば、長期に亘り酵素結晶を
析出しない均一濃厚な液状製品を得ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は濃い均一な液状製品を製
造することが困難な酵素の、濃い均一な液状製品の製造
法に関する。詳しくは、濃い水溶液からは結晶となって
沈降しやすいような種類の酵素を、沈降し難い不定形の
固体とすることによる、濃い均一な液状製品の製造法に
関する。

【０００２】

【従来の技術、及び発明が解決しようとする問題点】濃
い水溶液から結晶化しやすい酵素としては、バシラス・
サーモプロテオリティカス（Bacillus thermoproteolyt
icus）が生産するサーモリシンと呼ばれるプロテアー
ゼ、バシラス・ステアロサーモフィラス（Bacillus ste
arothermophillus）が生産するサーモリシンに類似のプ
ロテアーゼ、及びバシラス・リケニフォルミス（Bacill
us licheniformis）又はバシラス・サブティリス（Baci
llus subtilis ）が生産する耐熱性アルファーアミラー
ゼなどが挙げられる。

【０００３】これらの酵素の結晶を溶解し、及び／又は
これらの酵素の結晶化を抑制・防止するのに通常有効で
あることが知られている手段としては、水酸化ナトリウ
ム・水酸化カルシウム・炭酸ナトリウムなどによるｐＨ
上昇、グリセリン・プロピレングリコールなどの多価ア
ルコール及び／又は塩化ナトリウムなどの塩類の添加
（特公平１−３７１１６）が一般的である。しかしこれ
らの公知の方法では、十分に濃い液状酵素剤を製造する
ことができない場合があり、又グリセリンなどの多価ア
ルコールが酵素剤の使用上好ましくない場合もある。

【０００４】

【問題を解決するための手段】濃い液状製品は使いやす
いために使用者に好まれる。濃い液状製品としては固形
物を含まぬものが通常想定されるが、使いやすさの観点
からすれば、固形物が含まれていてもそれが沈降するこ
となく均一に分布し、かつ希釈時にそれが容易に溶解す
れば支障はないと考えられる。本発明はこの着想の下
に、濃い水溶液からは結晶となって沈降しやすいような
種類の酵素を、沈降し難い不定形の固体とすることによ
る、濃い均一な液状酵素剤の製造法を提供するものであ
る。

【０００５】本発明による液状酵素剤は十分に濃く、そ
こに含まれる固体化された酵素は沈降することなく均一
に分布し、かつそれは希釈時に極めて容易に溶解する。
本発明による液状酵素剤にはグリセリンなどの多価アル
コールの添加を要しない。

【０００６】本発明は、酵素の結晶が混在するか又は混
在するかも知れない酵素液のｐＨを上げて酵素の結晶を
溶解させることにより酵素の結晶を含まない酵素溶液を
得る第１工程と、塩類共存下にこの酵素溶液のｐＨを下
げて酵素を不定形に析出させる第２工程からなる。

【０００７】本発明において原料となる酵素液として
は、酵素を含有する培養物を出発物とする各種精製段階
の酵素液、及びそれらからアルコール沈殿・塩析・結晶
化などして得る精製酵素を水に溶解又は懸濁したものが
いずれも使用できるが、精製酵素の水懸濁物を原料とす
るのが濃い液状製品を製造することができるので好まし
い。

【０００８】第１工程において、ｐＨは通常１０．５以
上、約１１〜１２に通常水酸化ナトリウム液又は水酸化
カルシウム液で冷却下（０〜１５℃）に調整される。結
晶化しやすい物質の溶液の場合でも、結晶の核となるべ
き微細結晶などがそこに存在しない溶液からは、結晶の
成長・析出が起こり難いのは一般的事実であるが、核の
除去だけで結晶の成長・析出を長時間抑制することは通
常困難である。本発明の場合も、適量の塩類を含ませて
いない第１工程後の酵素溶液のｐＨを元のｐＨに下げれ
ば、間もなく結晶が析出する。

【０００９】第２工程は塩析である。この目的で添加す
る塩類としては、酵素の塩析に通常使われるアルカリ金
属・アルカリ土類金属・アンモニウムの、塩化物・酢酸
塩・硫酸塩などがいずれも単独又は組合せで使用でき
る。塩類の添加量は終濃度で約１５〜３０％が適当であ
る。塩類の添加は第１工程の後に行っても第１工程の前
に行ってもよい。第２工程におけるｐＨの調整（通常約
５〜８、好ましくは約６〜７）は酢酸などの弱酸による
のが、局部的なｐＨの下がりすぎによる酵素の失活を防
止できので安全である。

【００１０】

【実施例】

実施例１ 本発明をアルコール沈殿により精製されたサーモリシン
に適用した例を示す。培養物のろ液からサーモリシンを
アルコールで沈殿させ、この沈殿をろ別後に真空乾燥し
て製した、工業用サーモリシン製剤であるサモアーゼＰ
Ｓ２００（大和化成製）を水に懸濁して原料酵素液（酵
素濃度６．２％）とした。この原料酵素液を５℃に冷却
し、撹拌下に５Ｎ水酸化ナトリウムを滴下して液のｐＨ
を１１．３〜１１．６に調整して不溶物を溶解した後、
若干残った残滓をろ去して完全に濁りのない酵素液を得
た。この濁りのない酵素液に表１に示すように塩類を加
えて溶かし、攪拌下に氷酢酸で液のｐＨを６．０に調整
して試料とし、これを試験管に入れて保存し状態の変化
を観察した。

【００１１】

【表１】

【００１２】均一性：○ 均一，△ 若干沈降，× 沈
降 溶解性：試料 １ｍｌを３０ｍｌの水に攪拌下に滴下し
た。

【００１３】○ 直ちに透明な溶液となった。

【００１４】× 液はいつまでも不透明であった。

【００１５】実施例２ 本発明を塩析により精製されたサーモリシンに適用した
例を示す。培養物のろ液からサーモリシンを硫酸ナトリ
ウムで沈殿させ、この沈殿をろ別後に乾燥して製した、
工業用サーモリシン製剤であるサモアーゼＣ５００（大
和化成製）を水に懸濁して原料酵素液（酵素濃度８．１
％）とした。サモアーゼＣ５００は実施例１で使ったサ
モアーゼＰＳ２００より精製度が高く、この原料酵素液
は多量の難溶性のサーモリシン結晶を含んでいる。この
原料酵素液を実施例１と同様に処理して試料とし、これ
を試験管に入れて保存し状態の変化を観察した。

【００１６】

【表２】

【００１７】溶解性：△ 数分後に透明な溶液となっ
た。

【００１８】実施例３ 本発明を耐熱性アルファーアミラーゼ（以下アミラーゼ
と略す）に適用した例を示す。培養物のろ液からアミラ
ーゼをアルコールで沈殿・ろ別・真空乾燥して製した、
工業用アミラーゼ製剤であるクライスターゼＹＣ１５
（大和化成製）を原料とした。原料を２０倍量の水に溶
解し、残滓をろ去し、この液（４０℃）１ｌ当たり無水
硫酸ナトリウム２６０ｇを加えてアミラーゼを沈殿さ
せ、沈殿をろ別し、この沈殿を水に懸濁して原料酵素液
（酵素濃度８．２％）とした。この原料酵素液は多量の
難溶性のアミラーゼ結晶を含んでいる。この原料酵素液
を実施例１と同様に処理して試料とし、これを試験管に
入れて保存し状態の変化を観察した。

【００１９】

【表３】

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 酸素の結晶が混在するか又は混在するか
   も知れない酵素液のｐＨを上げて酵素の結晶を溶解させ
   ることにより酵素の結晶を含まない酵素溶液を得る第１
   工程と、終濃度が１５〜３０％となる塩類の共存下にこ
   の酵素溶液のｐＨを下げて酵素を不定形に析出させる第
   ２工程とを含む液状酵素剤の製造法。
2. 【請求項２】 塩類がアルカリ金属・アルカリ土類金属
   ・アンモニウムの、塩化物・酢酸塩・硫酸塩である請求
   項１に記載の液状酵素剤の製造法。
3. 【請求項３】 酵素がバシラス・サーモプロテオリティ
   カス（Bacillus thermoproteolyticus）が生産するサー
   モリシンと呼ばれるプロテアーゼ、バシラス・ステアロ
   サーモフィラス（Bacillus stearothermophillus）が生
   産するサーモリシンに類似のプロテアーゼ、及びバシラ
   ス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）又は
   バシラス・サブティリス（Bacillus subtilis ）が生産
   する耐熱性アルファーアミラーゼである請求項１に記載
   の液状酵素剤の製造法。