JPH0646831A - 細胞培養基材及びその製造方法 - Google Patents
細胞培養基材及びその製造方法Info
- Publication number
- JPH0646831A JPH0646831A JP20350892A JP20350892A JPH0646831A JP H0646831 A JPH0646831 A JP H0646831A JP 20350892 A JP20350892 A JP 20350892A JP 20350892 A JP20350892 A JP 20350892A JP H0646831 A JPH0646831 A JP H0646831A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phospholipid
- cell culture
- culture
- composition
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 スチレン系ポリマー及び／またはジエン系合
成ゴムとリン脂質とを混合し、リン脂質の濃度を５〜８
０ｗｔ％とした組成物を細胞培養基材とし、この基材を
上記ポリマー及び／またはゴムとリン脂質の共通溶媒溶
液を用いて、培養用容器の表面に塗布して、細胞培養器
具を得る。 【効果】 従来の細胞培養シャーレでは、接着して剥離
の困難な足場非依存性細胞を、接着させずに培養可能
で、無傷で容易に回収でき、また、従来の細胞培養シャ
ーレでは、機能低下の生じる単層培養しかできなかった
足場依存性細胞を、ほとんど接着させずに経時的にスフ
ェロイドを形成させ、その機能を高く維持しつつ培養す
ることが可能である。
成ゴムとリン脂質とを混合し、リン脂質の濃度を５〜８
０ｗｔ％とした組成物を細胞培養基材とし、この基材を
上記ポリマー及び／またはゴムとリン脂質の共通溶媒溶
液を用いて、培養用容器の表面に塗布して、細胞培養器
具を得る。 【効果】 従来の細胞培養シャーレでは、接着して剥離
の困難な足場非依存性細胞を、接着させずに培養可能
で、無傷で容易に回収でき、また、従来の細胞培養シャ
ーレでは、機能低下の生じる単層培養しかできなかった
足場依存性細胞を、ほとんど接着させずに経時的にスフ
ェロイドを形成させ、その機能を高く維持しつつ培養す
ることが可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞培養基材、及びそ
れを使用した細胞培養器具の製造方法に関するものであ
る。
れを使用した細胞培養器具の製造方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】リンパ球などの足場非依存性細胞は、従
来、市販の低温プラズマ処理を施した培養器具や、未処
理の細菌培養器具などを用いて培養されてきた。しか
し、これらの培養器具では、リンパ球の中でも特にＮＳ
−１やＭＯＬＴ４のように、培養器具に接着し回収が困
難な細胞が少なくない。このような場合、トリプシン等
の酵素やＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラアセティッ
クアシッド）を用いるか、あるいはセルスクレーパーな
どを用いる物理的方法で、細胞を剥離する方法がとられ
ているが、細胞へのダメージが大きく、細胞の生存率を
低下させるなどの問題があった。
来、市販の低温プラズマ処理を施した培養器具や、未処
理の細菌培養器具などを用いて培養されてきた。しか
し、これらの培養器具では、リンパ球の中でも特にＮＳ
−１やＭＯＬＴ４のように、培養器具に接着し回収が困
難な細胞が少なくない。このような場合、トリプシン等
の酵素やＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラアセティッ
クアシッド）を用いるか、あるいはセルスクレーパーな
どを用いる物理的方法で、細胞を剥離する方法がとられ
ているが、細胞へのダメージが大きく、細胞の生存率を
低下させるなどの問題があった。
【０００３】一方、足場依存性細胞は、基本的には親水
性を制御した低温プラズマ処理培養器具等を用いて、単
層培養する方法が主として行なわれている。しかし、最
近になって、親水性のＰＨＥＭＡ（ポリヒドロキシエチ
ルメタクリレート）を塗布した培養器具で、肝細胞がス
フェロイドを形成すること（ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ
ＣＥＬＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，２００，３２６−３３
２（１９９２））が報告されており、また、セルロース
にプロピルイソシアネートで表面修飾した材料上では、
血管内皮細胞が線状凝集塊を形成する（生体材料，ｖｏ
ｌ．１０，Ｎo.１（１９９２））などが報告されるよう
になってきた。
性を制御した低温プラズマ処理培養器具等を用いて、単
層培養する方法が主として行なわれている。しかし、最
近になって、親水性のＰＨＥＭＡ（ポリヒドロキシエチ
ルメタクリレート）を塗布した培養器具で、肝細胞がス
フェロイドを形成すること（ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ
ＣＥＬＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，２００，３２６−３３
２（１９９２））が報告されており、また、セルロース
にプロピルイソシアネートで表面修飾した材料上では、
血管内皮細胞が線状凝集塊を形成する（生体材料，ｖｏ
ｌ．１０，Ｎo.１（１９９２））などが報告されるよう
になってきた。
【０００４】これは、足場依存性細胞は単に単層培養す
るよりも、３次元的な細胞構造を形成させる方が、その
機能維持に有利であると言われるようになってきた為で
ある。しかし、種々の足場依存性細胞についての、この
ような研究はほとんどなされておらず、かなり広範な足
場依存性細胞について、ほぼ普遍的にこのような凝集塊
を形成させるような基材もまだ見出されていない。
るよりも、３次元的な細胞構造を形成させる方が、その
機能維持に有利であると言われるようになってきた為で
ある。しかし、種々の足場依存性細胞についての、この
ような研究はほとんどなされておらず、かなり広範な足
場依存性細胞について、ほぼ普遍的にこのような凝集塊
を形成させるような基材もまだ見出されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、足場非依存
性細胞を接着させずに培養し、無傷のままの回収を容易
にし、また、足場依存性細胞についてもほとんど接着さ
せずに経時的に凝集塊を形成させ、その機能を維持向上
させるような培養基材もしくは培養器具を提供すること
を目的としている。
性細胞を接着させずに培養し、無傷のままの回収を容易
にし、また、足場依存性細胞についてもほとんど接着さ
せずに経時的に凝集塊を形成させ、その機能を維持向上
させるような培養基材もしくは培養器具を提供すること
を目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】即ち本発明は、スチレン
系ポリマー及び／またはジエン系合成ゴムとリン脂質と
の混合組成物であって、リン脂質の濃度が組成物全体の
５乃至８０ｗｔ％であることを特徴とする細胞培養基材
であり、更に、スチレン系ポリマー及び／またはジエン
系合成ゴムとリン脂質とを、これらの組成物中に占める
リン脂質の濃度が５乃至８０ｗｔ％、溶媒に対する該組
成物の濃度が１乃至３５ｗｔ％になるように有機溶媒に
溶解して溶液を調製し、ディッシュ、プレート、フラス
コ等の培養用容器に塗布した後、乾燥することを特徴と
する細胞培養器具の製造方法である。
系ポリマー及び／またはジエン系合成ゴムとリン脂質と
の混合組成物であって、リン脂質の濃度が組成物全体の
５乃至８０ｗｔ％であることを特徴とする細胞培養基材
であり、更に、スチレン系ポリマー及び／またはジエン
系合成ゴムとリン脂質とを、これらの組成物中に占める
リン脂質の濃度が５乃至８０ｗｔ％、溶媒に対する該組
成物の濃度が１乃至３５ｗｔ％になるように有機溶媒に
溶解して溶液を調製し、ディッシュ、プレート、フラス
コ等の培養用容器に塗布した後、乾燥することを特徴と
する細胞培養器具の製造方法である。
【０００７】本発明者らは先に、基材表面にリン脂質を
疎水結合させると超親水性の表面が得られ、該表面には
足場依存性細胞も足場非依存性細胞もほとんど接着しな
いことを見出し、特願平３−３３０９４０号及び特願平
４−１４９１０４号に開示した。しかしながら、こられ
の発明ではリン脂質が比較的大量に必要であること、リ
ン脂質処理層の厚みにばらつきがあることなどの問題が
あった。そこで、鋭意研究を進めてこれらの問題を解決
し、本発明を完成させるに至った。
疎水結合させると超親水性の表面が得られ、該表面には
足場依存性細胞も足場非依存性細胞もほとんど接着しな
いことを見出し、特願平３−３３０９４０号及び特願平
４−１４９１０４号に開示した。しかしながら、こられ
の発明ではリン脂質が比較的大量に必要であること、リ
ン脂質処理層の厚みにばらつきがあることなどの問題が
あった。そこで、鋭意研究を進めてこれらの問題を解決
し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】本発明に於いて使用するスチレン系ポリマ
ーは特に限定しないが、ポリスチレン、スチレン−ブタ
ジエン共重合体、スチレン−エチレン−ブチレン３元共
重合体（俗にＳＥＢＳと呼ばれる。）等が利用できる。
また、ジエン系合成ゴムも特に限定しないが、イソプレ
ン重合体、ブタジエン−スチレン共重合体、線状ポリブ
タジエン、１，２−ポリブタジエン、プチルゴム（イソ
プレン−イソブチレン共重合体）、クロロプレン重合体
等が利用できる。
ーは特に限定しないが、ポリスチレン、スチレン−ブタ
ジエン共重合体、スチレン−エチレン−ブチレン３元共
重合体（俗にＳＥＢＳと呼ばれる。）等が利用できる。
また、ジエン系合成ゴムも特に限定しないが、イソプレ
ン重合体、ブタジエン−スチレン共重合体、線状ポリブ
タジエン、１，２−ポリブタジエン、プチルゴム（イソ
プレン−イソブチレン共重合体）、クロロプレン重合体
等が利用できる。
【０００９】ここで重要なことは、これらのスチレン系
ポリマー及びジエン系合成ゴムが、他の高分子とは異な
り、リン脂質との共通溶媒が見出せる点である。従っ
て、スチレン系ポリマーやジエン系合成ゴムとリン脂質
との混合溶液が、極めて容易に調製可能で、これによっ
て本発明が実現し得たものである。
ポリマー及びジエン系合成ゴムが、他の高分子とは異な
り、リン脂質との共通溶媒が見出せる点である。従っ
て、スチレン系ポリマーやジエン系合成ゴムとリン脂質
との混合溶液が、極めて容易に調製可能で、これによっ
て本発明が実現し得たものである。
【００１０】本発明に於ける、これらのの共通溶媒はヘ
キサン、エチルエーテル、石油エーテル、ベンゼン、ト
ルエン、クロロホルム等である。スチレン系ポリマー及
びジエン系合成ゴムとリン脂質との組合わせあるいは配
合比によって、これらの溶媒を適宜選択することが重要
であり、場合によってはこれらの溶媒の任意の比率の混
合溶媒を用いることもできる。
キサン、エチルエーテル、石油エーテル、ベンゼン、ト
ルエン、クロロホルム等である。スチレン系ポリマー及
びジエン系合成ゴムとリン脂質との組合わせあるいは配
合比によって、これらの溶媒を適宜選択することが重要
であり、場合によってはこれらの溶媒の任意の比率の混
合溶媒を用いることもできる。
【００１１】本発明に於いて使用するリン脂質は、ホス
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、
スフィンゴミエリン、レシチン及びこれらの不飽和脂肪
酸を水添したもの、あるいはこれらの誘導体からなる群
から選ばれた少なくとも１種のリン脂質からなってい
る。
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、
スフィンゴミエリン、レシチン及びこれらの不飽和脂肪
酸を水添したもの、あるいはこれらの誘導体からなる群
から選ばれた少なくとも１種のリン脂質からなってい
る。
【００１２】本発明による細胞培養基材中に於ける、ス
チレン系ポリマー及びジエン系合成ゴムとリン脂質との
混合割合、あるいは各成分の濃度は極めて重要である。
細胞をほとんど接着させないためには、リン脂質の濃度
は全組成物に対して、５乃至８０ｗｔ％が好ましい。リ
ン脂質が５ｗｔ％未満では細胞が接着し易く、８０ｗｔ
％を越えると組成物が培養液中で膨潤し易くなるなどの
欠点が生ずる。実際的には、コスト及び性能の両面か
ら、リン脂質の全組成物に対する割合は２０乃至６０ｗ
ｔ％が好ましい。
チレン系ポリマー及びジエン系合成ゴムとリン脂質との
混合割合、あるいは各成分の濃度は極めて重要である。
細胞をほとんど接着させないためには、リン脂質の濃度
は全組成物に対して、５乃至８０ｗｔ％が好ましい。リ
ン脂質が５ｗｔ％未満では細胞が接着し易く、８０ｗｔ
％を越えると組成物が培養液中で膨潤し易くなるなどの
欠点が生ずる。実際的には、コスト及び性能の両面か
ら、リン脂質の全組成物に対する割合は２０乃至６０ｗ
ｔ％が好ましい。
【００１３】また、この細胞培養基材を容器に塗布する
際の、全組成物の有機溶媒中での濃度は、培養用容器へ
の塗布時の塗布厚みを調節する上で重要であり、１乃至
３５ｗｔ％が良く、好ましくは５乃至２５ｗｔ％が良
い。また、組成物の塗布厚みは、最低１μｍあれば効果
を発揮するが、塗布時のばらつきを考慮すると、平均５
乃至１０μｍの厚みに塗布することが好ましい。本発明
の細胞培養器具の製造方法に於いては、スチレン系ポリ
マー及びジエン系合成ゴムとリン脂質の内、配合比の多
い方を優先的に溶媒に溶解することが好ましい。これ
は、均一な組成物溶液を調製する上で重要である。
際の、全組成物の有機溶媒中での濃度は、培養用容器へ
の塗布時の塗布厚みを調節する上で重要であり、１乃至
３５ｗｔ％が良く、好ましくは５乃至２５ｗｔ％が良
い。また、組成物の塗布厚みは、最低１μｍあれば効果
を発揮するが、塗布時のばらつきを考慮すると、平均５
乃至１０μｍの厚みに塗布することが好ましい。本発明
の細胞培養器具の製造方法に於いては、スチレン系ポリ
マー及びジエン系合成ゴムとリン脂質の内、配合比の多
い方を優先的に溶媒に溶解することが好ましい。これ
は、均一な組成物溶液を調製する上で重要である。
【００１４】これらの溶液を塗布する培養用容器は特に
限定するものではなく、プラスチック製、ガラス製、金
属製の容器が利用可能である。但し、プラスチック製の
培養用容器はほとんどのものがポリスチレン製であり、
耐溶剤性が十分ではないが、本発明に使用し得る溶媒の
内、ヘキサン等を用いて迅速に乾燥工程に着手すれば十
分に効果的に塗布することが可能である。
限定するものではなく、プラスチック製、ガラス製、金
属製の容器が利用可能である。但し、プラスチック製の
培養用容器はほとんどのものがポリスチレン製であり、
耐溶剤性が十分ではないが、本発明に使用し得る溶媒の
内、ヘキサン等を用いて迅速に乾燥工程に着手すれば十
分に効果的に塗布することが可能である。
【００１５】このようにして得られた細胞培養器具の表
面（基材）上に足場非依存性細胞を播種すると、細胞は
市販の組織培養ディッシュ上とほぼ同様の増殖性・細胞
生存率を示しながら、かつ基材に接着することなく容易
に回収が可能である。
面（基材）上に足場非依存性細胞を播種すると、細胞は
市販の組織培養ディッシュ上とほぼ同様の増殖性・細胞
生存率を示しながら、かつ基材に接着することなく容易
に回収が可能である。
【００１６】また、足場依存性細胞を播種すると、細胞
はほとんど接着せず、増殖性が抑制されながら次第に凝
集塊を形成しその機能を維持向上させることが可能であ
る。さらに、ここで重要なことは、足場依存性細胞の場
合、本発明の基材への接着性は細胞の種類によって微妙
に異なり、自ずからその機能発現性も異なってくること
である。例えば、同じ神経細胞であっても、ＰＣ−１２
よりもＮＢ６９は、リン脂質の量がかなり少なくても接
着しにくく、凝集塊を作り易い傾向がある。従って、厳
密には、足場依存性細胞の種類によって、本発明に於け
る基材のリン脂質の配合比や塗布厚みを制御することが
重要であり、また、それらを簡単に制御できることが本
発明の大きな特徴の一つでもある。
はほとんど接着せず、増殖性が抑制されながら次第に凝
集塊を形成しその機能を維持向上させることが可能であ
る。さらに、ここで重要なことは、足場依存性細胞の場
合、本発明の基材への接着性は細胞の種類によって微妙
に異なり、自ずからその機能発現性も異なってくること
である。例えば、同じ神経細胞であっても、ＰＣ−１２
よりもＮＢ６９は、リン脂質の量がかなり少なくても接
着しにくく、凝集塊を作り易い傾向がある。従って、厳
密には、足場依存性細胞の種類によって、本発明に於け
る基材のリン脂質の配合比や塗布厚みを制御することが
重要であり、また、それらを簡単に制御できることが本
発明の大きな特徴の一つでもある。
【００１７】
【実施例】以下、実施例によって本発明の効果を説明す
る。 実施例１ スチレン−ブタジエン系熱可塑性エラストマー（ＪＳＲ
製ＴＲ２０００）をクロロホルムに溶解し、濃度１５ｗ
ｔ％の溶液を調製した。これに、卵黄レシチン（和光純
薬製、生化学グレード）を上記ポリマーに対して４０ｗ
ｔ％に相当する量だけ添加し、室温下で１時間攪拌し均
一溶液を得た。
る。 実施例１ スチレン−ブタジエン系熱可塑性エラストマー（ＪＳＲ
製ＴＲ２０００）をクロロホルムに溶解し、濃度１５ｗ
ｔ％の溶液を調製した。これに、卵黄レシチン（和光純
薬製、生化学グレード）を上記ポリマーに対して４０ｗ
ｔ％に相当する量だけ添加し、室温下で１時間攪拌し均
一溶液を得た。
【００１８】この溶液をピペットで０．５ｍｌ取り、直
径３５ｍｍのガラス製シャーレに注ぎ、シャーレの底及
び側壁に塗布し、クリーンベンチ内で１時間風乾した
後、４０℃の乾燥器で２時間乾燥した。その後、クリー
ンベンチ内で紫外線を３０分照射して滅菌した。こうし
て得られたシャーレにマウス由来骨髄腫Ｐ３／ＮＳ１／
１−Ａｇ４−１（第日本製薬（株）製）を１×１０4 個
／ｍｌの濃度で２ｍｌ播種した。使用した培地はＲＰＭ
Ｉ−１６４０（フローラボラトリー社製）５００ｍｌに
グルタミン０．１５ｍｇ（日水製薬製）及び牛胎児血清
（フローラボラトリー社製）５０ｍｌを添加したものを
使用した。一方、比較として、実施例１と同じ細胞を同
条件で、市販の組織培養シャーレ（岩城硝子（株）製、
corning ３５Ｎ）に播種した。
径３５ｍｍのガラス製シャーレに注ぎ、シャーレの底及
び側壁に塗布し、クリーンベンチ内で１時間風乾した
後、４０℃の乾燥器で２時間乾燥した。その後、クリー
ンベンチ内で紫外線を３０分照射して滅菌した。こうし
て得られたシャーレにマウス由来骨髄腫Ｐ３／ＮＳ１／
１−Ａｇ４−１（第日本製薬（株）製）を１×１０4 個
／ｍｌの濃度で２ｍｌ播種した。使用した培地はＲＰＭ
Ｉ−１６４０（フローラボラトリー社製）５００ｍｌに
グルタミン０．１５ｍｇ（日水製薬製）及び牛胎児血清
（フローラボラトリー社製）５０ｍｌを添加したものを
使用した。一方、比較として、実施例１と同じ細胞を同
条件で、市販の組織培養シャーレ（岩城硝子（株）製、
corning ３５Ｎ）に播種した。
【００１９】いずれも、三日後に細胞の状態を倒立顕微
鏡にて観察し、細胞数を血球計算盤にて計数した。ま
た、細胞液を１０μｌサンプリングし、トリパンプルー
で染色することによって、細胞の生存率を求めた。尚、
接着が強く細胞の回収が困難なものはセルスクレーパー
（住友ベークライト（株）製）にて剥離し、ピペッティ
ング後に計数した。その結果は表１に示した通りで、本
発明による細胞培養器具（基材）はリンパ球のような足
場非依存性細胞の接着を大幅に抑制し、培養後の回収が
極めて容易で、かつ市販シャーレと同等以上の細胞増殖
性を示す新規な培養基材であることが分る。
鏡にて観察し、細胞数を血球計算盤にて計数した。ま
た、細胞液を１０μｌサンプリングし、トリパンプルー
で染色することによって、細胞の生存率を求めた。尚、
接着が強く細胞の回収が困難なものはセルスクレーパー
（住友ベークライト（株）製）にて剥離し、ピペッティ
ング後に計数した。その結果は表１に示した通りで、本
発明による細胞培養器具（基材）はリンパ球のような足
場非依存性細胞の接着を大幅に抑制し、培養後の回収が
極めて容易で、かつ市販シャーレと同等以上の細胞増殖
性を示す新規な培養基材であることが分る。
【００２０】
【表１】
【００２１】実施例２ スチレン−エチレン−ブチレン３元共重合体（旭化成
（株）製タフテックＨ１０４１）をｎ−ヘキサンに溶解
し、１０ｗｔ％の溶液を調製した。これに、上記ポリマ
ーと同量のジパルミトイルホスファチジルコリンを溶解
し均一溶液を得た。
（株）製タフテックＨ１０４１）をｎ−ヘキサンに溶解
し、１０ｗｔ％の溶液を調製した。これに、上記ポリマ
ーと同量のジパルミトイルホスファチジルコリンを溶解
し均一溶液を得た。
【００２２】次いで、直径３５ｍｍのシャーレ（住友ベ
ークライト（株）製、スミロンＭＳ−１０３５Ｆ）に上
記溶液を１ｍｌ添加し、速やかにこの溶液を排出し、温
風乾燥機内で４０℃にて１２時間乾燥した。その後、ク
リーンベンチ内で５分間、紫外線滅菌した。続いて、ヒ
ト肝癌由来株細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）を無血清培地（味の
素（株）社製、ＡＳＦ１０４）を用いて１×１０4 個／
ｍｌの濃度に調製し、上記のシャーレ及び比較として上
記スミロンＭＳ−１０３５Ｆに２ｍｌずつ播種し、３７
℃５％ＣＯ2 インキュベータ内で７日間培養した。
ークライト（株）製、スミロンＭＳ−１０３５Ｆ）に上
記溶液を１ｍｌ添加し、速やかにこの溶液を排出し、温
風乾燥機内で４０℃にて１２時間乾燥した。その後、ク
リーンベンチ内で５分間、紫外線滅菌した。続いて、ヒ
ト肝癌由来株細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）を無血清培地（味の
素（株）社製、ＡＳＦ１０４）を用いて１×１０4 個／
ｍｌの濃度に調製し、上記のシャーレ及び比較として上
記スミロンＭＳ−１０３５Ｆに２ｍｌずつ播種し、３７
℃５％ＣＯ2 インキュベータ内で７日間培養した。
【００２３】上記の実施例及び比較例について、下記の
方法で細胞の形態観察及びアルブミンの分泌能を評価し
た。その結果は表２に示した通りで、本発明に於ける培
養基材上では、肝細胞はスフェロイドを形成し、単層培
養に比較して極めて高いアルブミン合成能を示し、細胞
の機能が十分に維持されていたことが分る。 １） 培養形態 ７日目に倒立顕微鏡にて観察した。 ２） アルブミン分泌能の測定 培地中のアルブミン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定し、
同時にシャーレ中の細胞数を測定して、単位細胞数あた
りのアルブミン量を比較した。結果は実施例の単位細胞
数あたりの分泌量を１００として比較した。
方法で細胞の形態観察及びアルブミンの分泌能を評価し
た。その結果は表２に示した通りで、本発明に於ける培
養基材上では、肝細胞はスフェロイドを形成し、単層培
養に比較して極めて高いアルブミン合成能を示し、細胞
の機能が十分に維持されていたことが分る。 １） 培養形態 ７日目に倒立顕微鏡にて観察した。 ２） アルブミン分泌能の測定 培地中のアルブミン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定し、
同時にシャーレ中の細胞数を測定して、単位細胞数あた
りのアルブミン量を比較した。結果は実施例の単位細胞
数あたりの分泌量を１００として比較した。
【００２４】
【表２】
【００２５】
【発明の効果】以上のように、スチレン系ポリマー及び
／またはジエン系合成ゴムとリン脂質との混合組成物で
ある培養基材上では、足場非依存性細胞は接着せずに増
殖して高い生存率を示し、また、足場依存性細胞は接着
せずに経時的にスフェロイドを形成して、その機能を高
く維持することが可能になった。このように、本発明の
細胞培養基材およびそれを使用した細胞培養器具は、広
範囲の足場依存性細胞、足場非依存性細胞にとって極め
て有用である。
／またはジエン系合成ゴムとリン脂質との混合組成物で
ある培養基材上では、足場非依存性細胞は接着せずに増
殖して高い生存率を示し、また、足場依存性細胞は接着
せずに経時的にスフェロイドを形成して、その機能を高
く維持することが可能になった。このように、本発明の
細胞培養基材およびそれを使用した細胞培養器具は、広
範囲の足場依存性細胞、足場非依存性細胞にとって極め
て有用である。
Claims (4)
- 【請求項１】 スチレン系ポリマー及び／またはジエン
系合成ゴムとリン脂質との混合組成物であって、リン脂
質の濃度が組成物全体の５乃至８０ｗｔ％であることを
特徴とする細胞培養基材。 - 【請求項２】 リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホ
スファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリ
ン、レシチン、及びこれらの不飽和脂肪酸を水添したも
の、あるいはこれらの誘導体からなる群から選ばれた少
なくとも１種のリン脂質からなることを特徴とする、請
求項１記載の細胞培養基材。 - 【請求項３】 スチレン系ポリマー及び／またはジエン
系合成ゴムとリン脂質とを、これらの組成物中に占める
リン脂質の濃度が５乃至８０ｗｔ％、溶媒に対する該組
成物の濃度が１乃至３５ｗｔ％になるように、前記ポリ
マー及び／またはゴムとリン脂質との共通有機溶媒に溶
解して溶液を調製し、これをディッシュ、プレート、フ
ラスコ等の培養用容器に塗布した後、乾燥することを特
徴とする細胞培養器具の製造方法。 - 【請求項４】 共通有機溶媒が、ヘキサン、エチルエー
テル、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、及びクロロ
ホルムから選ばれた１種、もしくはこれらの混合物であ
ることを特徴とする、請求項３記載の細胞培養器具の製
造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20350892A JPH0646831A (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 細胞培養基材及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20350892A JPH0646831A (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 細胞培養基材及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0646831A true JPH0646831A (ja) | 1994-02-22 |
Family
ID=16475322
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20350892A Pending JPH0646831A (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 細胞培養基材及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0646831A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998053800A1 (en) * | 1997-05-29 | 1998-12-03 | Applied Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for preventing adhesion |
| WO2010147122A1 (ja) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | 株式会社資生堂 | 細胞凝集塊形成用容器及び細胞凝集塊の形成方法 |
-
1992
- 1992-07-30 JP JP20350892A patent/JPH0646831A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998053800A1 (en) * | 1997-05-29 | 1998-12-03 | Applied Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for preventing adhesion |
| WO2010147122A1 (ja) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | 株式会社資生堂 | 細胞凝集塊形成用容器及び細胞凝集塊の形成方法 |
| US9347031B2 (en) | 2009-06-15 | 2016-05-24 | Shiseido Company, Ltd. | Container for forming a cell aggregate and a method for forming a cell aggregate |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4567936B2 (ja) | 細胞培養用支持体材料、細胞の共培養方法およびそれより得られる共培養細胞シート | |
| US6221663B1 (en) | Co-cultivation of cells in a micropatterned configuration | |
| Castano et al. | Polypyrrole thin films formed by admicellar polymerization support the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells | |
| Biggs et al. | Interactions with nanoscale topography: adhesion quantification and signal transduction in cells of osteogenic and multipotent lineage | |
| Woodfield et al. | The regulation of expanded human nasal chondrocyte re-differentiation capacity by substrate composition and gas plasma surface modification | |
| WO1994000552A1 (en) | Fullerene coated surfaces and uses thereof | |
| AU7514296A (en) | Colloidal silica films for cell culture | |
| WO2010039933A2 (en) | Methods and compositions for high-resolution micropatterning for cell culture | |
| Lee et al. | Optimization of 3D hydrogel microenvironment for enhanced hepatic functionality of primary human hepatocytes | |
| Chou et al. | Surface zwitterionization on versatile hydrophobic interfaces via a combined copolymerization/self-assembling process | |
| JP3270286B2 (ja) | 細胞培養容器とその製造方法、及び細胞培養方法 | |
| JPH0646831A (ja) | 細胞培養基材及びその製造方法 | |
| JP2013506416A (ja) | 細胞遊離のための方法及びキット | |
| JPH06335381A (ja) | 細胞培養基板 | |
| Liu et al. | Cell adhesion on nanopatterned fibronectin substrates | |
| JPH05260950A (ja) | コラーゲンコート細胞培養器具およびその製造方法 | |
| JPH05260957A (ja) | 肝細胞スフェロイド及びその調製法 | |
| JPH05244938A (ja) | 細胞及びその培養法 | |
| US8093050B2 (en) | mTOR inhibtors and mTOR signaling pathway inhibitors induce differentiation of human embryonic stem cells into the osteoblastic lineage | |
| JP4269256B2 (ja) | 神経細胞培養基材及びその製造方法 | |
| Kim et al. | Modulating human connective tissue progenitor cell behavior on cellulose acetate scaffolds by surface microtextures | |
| WO2022230734A1 (ja) | 細胞培養基材及びその製造方法、多能性幹細胞の分化誘導方法、並びに細胞培養キット | |
| US20180051247A1 (en) | Proteinase-free coatings for colony passaging | |
| EP0080384A1 (en) | A bed for culturing biological cells and a culture method employing said bed | |
| JPH07135961A (ja) | 血管内皮細胞培養用基材及びその製造方法 |