JPH06335381A - 細胞培養基板 - Google Patents
細胞培養基板Info
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- JPH06335381A JPH06335381A JP12759393A JP12759393A JPH06335381A JP H06335381 A JPH06335381 A JP H06335381A JP 12759393 A JP12759393 A JP 12759393A JP 12759393 A JP12759393 A JP 12759393A JP H06335381 A JPH06335381 A JP H06335381A
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- cells
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- cultured
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 基板表面に電解重合法にてポリマー膜を形成
することによって基板表面に細胞を安定的に吸着し、培
養し得るようにしたことを特徴とする細胞培養基板。 【効果】 細胞への接着機能だけではなく、培養細胞の
機能を保持できる細胞培養基板が提供される。
することによって基板表面に細胞を安定的に吸着し、培
養し得るようにしたことを特徴とする細胞培養基板。 【効果】 細胞への接着機能だけではなく、培養細胞の
機能を保持できる細胞培養基板が提供される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞を培養するための
細胞培養基板に関するものである。
細胞培養基板に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、動植物の細胞を種々の条件下にお
いて培養する研究、あるいは特定の培養細胞の代謝活動
による産生物の研究が活発に行われており、特に人工的
には合成が困難であったり、あるいは、合成が極めて困
難な物質を特定の細胞活動を利用して製造することが多
方面において検討されている。
いて培養する研究、あるいは特定の培養細胞の代謝活動
による産生物の研究が活発に行われており、特に人工的
には合成が困難であったり、あるいは、合成が極めて困
難な物質を特定の細胞活動を利用して製造することが多
方面において検討されている。
【０００３】このような細胞の培養は、通常、細胞を多
糖類、タンパク質、ポリスチレン等の高分子物質（特開
昭５８−８９１７９号公報、特開昭５９−１６４０１５
号公報、特開昭６０−２５７７４５号公報、特開昭６１
−５２２８１号公報）あるいはそれらを表面処理した基
体等の培養床に植込みあるいは接種したものを、例えば
培地中におく、当該細胞株に適応した環境条件下でイン
キュベーションすることによって行われている。
糖類、タンパク質、ポリスチレン等の高分子物質（特開
昭５８−８９１７９号公報、特開昭５９−１６４０１５
号公報、特開昭６０−２５７７４５号公報、特開昭６１
−５２２８１号公報）あるいはそれらを表面処理した基
体等の培養床に植込みあるいは接種したものを、例えば
培地中におく、当該細胞株に適応した環境条件下でイン
キュベーションすることによって行われている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上述したように、細胞
の培養は、通常、培養床に細胞を播種したものを培地中
に存在させ、当該細胞をその培養に適した環境下におく
ことによって行われているが、このような細胞の培養に
おいては、培養床の特性が大きな影響を及ぼし、例えば
正常２倍体細胞等の接着依存性細胞は培養床に接着し単
層で増殖するものであるので、培養効率は培養床の特
性、特にその接着性、増殖性の良否に大きく左右され
る。
の培養は、通常、培養床に細胞を播種したものを培地中
に存在させ、当該細胞をその培養に適した環境下におく
ことによって行われているが、このような細胞の培養に
おいては、培養床の特性が大きな影響を及ぼし、例えば
正常２倍体細胞等の接着依存性細胞は培養床に接着し単
層で増殖するものであるので、培養効率は培養床の特
性、特にその接着性、増殖性の良否に大きく左右され
る。
【０００５】このような細胞培養床としては、酸素プラ
ズマあるいは空気プラズマ中で表面を酸化し、親水化処
理したポリスチレンが最も一般的に用いられているが、
プラズマ処理によって表面を親水化しても、親水性が不
安定で、表面の均一性が悪く、かつ経時変化を起こし時
間とともに親水性が劣化する等の欠点があり、このよう
な細胞培養床による培養においては、培養効率が必ずし
も十分とはいえず、新規で有用な細胞培養床の出現が強
く望まれていた。
ズマあるいは空気プラズマ中で表面を酸化し、親水化処
理したポリスチレンが最も一般的に用いられているが、
プラズマ処理によって表面を親水化しても、親水性が不
安定で、表面の均一性が悪く、かつ経時変化を起こし時
間とともに親水性が劣化する等の欠点があり、このよう
な細胞培養床による培養においては、培養効率が必ずし
も十分とはいえず、新規で有用な細胞培養床の出現が強
く望まれていた。
【０００６】特に、細胞への接着機能だけではなく、培
養細胞の機能を保持できる培養床の開発は研究者に課せ
られた課題であった。
養細胞の機能を保持できる培養床の開発は研究者に課せ
られた課題であった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の如
き従来の合成樹脂等を用いた細胞培養床の問題点を解決
すべく鋭意研究を重ねた結果、電解重合法にてポリマー
膜を形成した基板表面が、細胞を安定的に粘着し、長期
にわたって細胞の生育・増殖に関して安定したデータが
得られるという事実を見いだし、本発明に完成するに至
った。
き従来の合成樹脂等を用いた細胞培養床の問題点を解決
すべく鋭意研究を重ねた結果、電解重合法にてポリマー
膜を形成した基板表面が、細胞を安定的に粘着し、長期
にわたって細胞の生育・増殖に関して安定したデータが
得られるという事実を見いだし、本発明に完成するに至
った。
【０００８】即ち、本発明は、以下の発明を包含する。 （１）基板表面に電解重合法にてポリマー膜を形成する
ことによって基板表面に細胞を安定的に吸着し、培養し
得るようにしたことを特徴とする細胞培養基板。 （２）ポリマー膜が導電性高分子であることを特徴とす
る前記（１）に記載の細胞培養基板。 （３）基板表面に、電解重合法によるポリマー膜の規則
性を有する微細なパターンを形成することによって基板
表面に細胞を安定的に吸着し、培養し得るようにした前
記（１）又は（２）に記載の細胞培養基板。 （４）基板表面に、電解重合法によるポリマー膜の所望
のパターンを形成し、該パターン上に所望の細胞を該パ
ターンの形状に沿って選択的に吸着し、培養し得るよう
にした前記（１）又は（２）に記載の細胞培養基板。
ことによって基板表面に細胞を安定的に吸着し、培養し
得るようにしたことを特徴とする細胞培養基板。 （２）ポリマー膜が導電性高分子であることを特徴とす
る前記（１）に記載の細胞培養基板。 （３）基板表面に、電解重合法によるポリマー膜の規則
性を有する微細なパターンを形成することによって基板
表面に細胞を安定的に吸着し、培養し得るようにした前
記（１）又は（２）に記載の細胞培養基板。 （４）基板表面に、電解重合法によるポリマー膜の所望
のパターンを形成し、該パターン上に所望の細胞を該パ
ターンの形状に沿って選択的に吸着し、培養し得るよう
にした前記（１）又は（２）に記載の細胞培養基板。
【０００９】本発明において電解重合法によるポリマー
膜の形成に用いる基板としては、導電性を有する基板で
あれば如何なるものでもよく、例えば、金属等の導電性
基板、あるいはガラス、セラミックス、金属、ポリマー
等、所望の強度を有する基板上にＩＴＯ、酸化錫等の透
明導電膜、又は金属もしくは金属化合物をスパッタ、蒸
着、化学蒸着（ＣＶＤ）等を成膜したものが好ましく用
いられる。
膜の形成に用いる基板としては、導電性を有する基板で
あれば如何なるものでもよく、例えば、金属等の導電性
基板、あるいはガラス、セラミックス、金属、ポリマー
等、所望の強度を有する基板上にＩＴＯ、酸化錫等の透
明導電膜、又は金属もしくは金属化合物をスパッタ、蒸
着、化学蒸着（ＣＶＤ）等を成膜したものが好ましく用
いられる。
【００１０】本発明においてポリマー膜を形成する高分
子材料としては、電解重合可能な高分子であれば如何な
るものでもよいが、導電性高分子、例えばポリピロー
ル、ポリ（Ｎ−メチルピロール）、ポリアニリン、ポリ
チオフェン、ポリアセチレン、ポリアズレン、及びこれ
らのポリマーの繰り返し単位の一部が脂肪族アルキル
基、芳香族アルキル基、エーテル基、アセチル基等にて
置換されているものが好ましく用いられる。
子材料としては、電解重合可能な高分子であれば如何な
るものでもよいが、導電性高分子、例えばポリピロー
ル、ポリ（Ｎ−メチルピロール）、ポリアニリン、ポリ
チオフェン、ポリアセチレン、ポリアズレン、及びこれ
らのポリマーの繰り返し単位の一部が脂肪族アルキル
基、芳香族アルキル基、エーテル基、アセチル基等にて
置換されているものが好ましく用いられる。
【００１１】電解重合膜は、指示電解質（ドーパント）
を加えたモノマー溶液中に所望の基板表面と対向電極と
に一定時間電解をかけることによって容易に作製可能で
ある。また高分子材料が導電性高分子であると、接着性
細胞が培養基板に接着した場合に接着した基板表面の性
質を細胞が刺激として捕らえ細胞が示す様々な応答、例
えば、形態変化、分泌物や受容体などの発現、分化、増
殖、又は細胞死にいたる等、の生化学的なシグナルを材
料の電気的性質の変化としてとらえる場合、即ち細胞の
出した情報伝達物質や受容にともなう電気的活動を受信
するのに都合がよい。
を加えたモノマー溶液中に所望の基板表面と対向電極と
に一定時間電解をかけることによって容易に作製可能で
ある。また高分子材料が導電性高分子であると、接着性
細胞が培養基板に接着した場合に接着した基板表面の性
質を細胞が刺激として捕らえ細胞が示す様々な応答、例
えば、形態変化、分泌物や受容体などの発現、分化、増
殖、又は細胞死にいたる等、の生化学的なシグナルを材
料の電気的性質の変化としてとらえる場合、即ち細胞の
出した情報伝達物質や受容にともなう電気的活動を受信
するのに都合がよい。
【００１２】ドーパントとしては、アニオン性の物質で
あれば如何なるものでも使用可能であり、例えば、塩化
ナトリウム等の無機塩、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸等の有機アニオン、アニオン性の界面活
性剤、１，３，６−ナフタレンスルホン酸、各種アミノ
酸、アニオン性ペプチド、アニオン性蛋白質、ポリアク
リル酸、ポリスチレンスルホン酸等が好ましく用いられ
る。
あれば如何なるものでも使用可能であり、例えば、塩化
ナトリウム等の無機塩、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸等の有機アニオン、アニオン性の界面活
性剤、１，３，６−ナフタレンスルホン酸、各種アミノ
酸、アニオン性ペプチド、アニオン性蛋白質、ポリアク
リル酸、ポリスチレンスルホン酸等が好ましく用いられ
る。
【００１３】電解重合膜のパターン化は、電解重合膜を
形成した後に行ってもよいが、あらかじめ導電性基板を
パターン化しておき、このパターン上に選択的に電解重
合膜を形成した方がより効率的である。導電性基板のパ
ターン化は、一般の半導体加工に用いられているリソグ
ラフィー手法にて容易に行うことができる。
形成した後に行ってもよいが、あらかじめ導電性基板を
パターン化しておき、このパターン上に選択的に電解重
合膜を形成した方がより効率的である。導電性基板のパ
ターン化は、一般の半導体加工に用いられているリソグ
ラフィー手法にて容易に行うことができる。
【００１４】即ち、例えばＩＴＯ膜を有するガラス基板
上に感光性樹脂を塗布し、所望の熱処理等を行った後、
電子線描画装置等によるパターンの直接描画、又は所望
のパターンを有するフォトマスクを介して露光する。こ
の基板を所定の条件にて現像して感光性樹脂からなるパ
ターンを得、続いて、必要に応じて熱処理等を行った
後、感光性樹脂に覆われていない部分を選択的にエッチ
ング除去し、最後に残存する感光性樹脂を除去してＩＴ
Ｏからなるパターンを得る。この基板を充分に洗浄した
後、前記電解重合膜合成プロセスを行うことにより、所
望の電解重合膜からなるパターンを有する基板を得るこ
とができる。
上に感光性樹脂を塗布し、所望の熱処理等を行った後、
電子線描画装置等によるパターンの直接描画、又は所望
のパターンを有するフォトマスクを介して露光する。こ
の基板を所定の条件にて現像して感光性樹脂からなるパ
ターンを得、続いて、必要に応じて熱処理等を行った
後、感光性樹脂に覆われていない部分を選択的にエッチ
ング除去し、最後に残存する感光性樹脂を除去してＩＴ
Ｏからなるパターンを得る。この基板を充分に洗浄した
後、前記電解重合膜合成プロセスを行うことにより、所
望の電解重合膜からなるパターンを有する基板を得るこ
とができる。
【００１５】
【作 用】本発明は、電解重合法にて形成したポリマー
表面上で、種々の細胞を効率的に培養しようとするもの
である。本発明により電解重合法にて形成したポリマー
表面上で、細胞が増殖しやすくかつ機能が維持されると
いう機構の詳細は不明であるが、本発明者らは次の如く
考えている。
表面上で、種々の細胞を効率的に培養しようとするもの
である。本発明により電解重合法にて形成したポリマー
表面上で、細胞が増殖しやすくかつ機能が維持されると
いう機構の詳細は不明であるが、本発明者らは次の如く
考えている。
【００１６】細胞の粘着機構は、細胞の表面の粘着因子
（レセプター）及びその膜流動と粘着に関与する培地中
のタンパク質と、培養基板の表面高次構造に深い関係が
あると考えられる。従って、制御された表面構造を示す
基板に、まず粘着に関与するタンパク質が選択的に吸着
する。この際、吸着タンパク質も基板の表面高次構造の
影響を受けて吸着パターンに制御性が生じている。この
タンパク層の上に当該細胞が、膜表面のレセプターを介
して粘着する。
（レセプター）及びその膜流動と粘着に関与する培地中
のタンパク質と、培養基板の表面高次構造に深い関係が
あると考えられる。従って、制御された表面構造を示す
基板に、まず粘着に関与するタンパク質が選択的に吸着
する。この際、吸着タンパク質も基板の表面高次構造の
影響を受けて吸着パターンに制御性が生じている。この
タンパク層の上に当該細胞が、膜表面のレセプターを介
して粘着する。
【００１７】このとき、電解重合法にて形成された基板
表面が、高次構造が制御された、又は安定した表面にな
っているために、タンパク質や細胞の大きさ、レセプタ
ーの種類等に最適な条件になっており、細胞が安定的に
生育するものと考えている。
表面が、高次構造が制御された、又は安定した表面にな
っているために、タンパク質や細胞の大きさ、レセプタ
ーの種類等に最適な条件になっており、細胞が安定的に
生育するものと考えている。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、本発明は下記実施例によりその技術的範囲が
制限されるものではない。 （実施例１）細胞培養基板として、ガラス基板上にスパ
ッタ法にてＩＴＯを成膜し、この上にポリピロールを電
解重合法より合成したものを用いた。
明するが、本発明は下記実施例によりその技術的範囲が
制限されるものではない。 （実施例１）細胞培養基板として、ガラス基板上にスパ
ッタ法にてＩＴＯを成膜し、この上にポリピロールを電
解重合法より合成したものを用いた。
【００１９】このポリピロールからなる電解重合膜は、
０．１Ｍのモノマーと指示電解質として０．０５Ｍの塩
化ナトリウムを加えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ
／ｃｍ2の定電流電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行
い、それぞれＩＴＯ上に成長させた。出来上がった基板
は、７０％エタノール水溶液に浸漬して充分滅菌洗浄し
た後、クリーンベンチ内で乾燥させた。
０．１Ｍのモノマーと指示電解質として０．０５Ｍの塩
化ナトリウムを加えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ
／ｃｍ2の定電流電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行
い、それぞれＩＴＯ上に成長させた。出来上がった基板
は、７０％エタノール水溶液に浸漬して充分滅菌洗浄し
た後、クリーンベンチ内で乾燥させた。
【００２０】培養細胞としては、ウシの新鮮な副腎髄質
より単離したクロマフィン細胞を用いた。クロマフィン
細胞は、神経性外胚葉に由来し交感神経支配を受けてア
ドレナリンやノルアドレナリンといったカテコールアミ
ンを合成・分泌する神経細胞の一種である。クロマフィ
ン細胞を使用した理由は、比較的接着性の低い細胞のた
め、材料表面に対する細胞接着性の指標にしやすいこと
と、カテコールアミンの合成・分泌量が比較的高いの
で、神経伝達物質の定量評価がしやすいことからであ
る。
より単離したクロマフィン細胞を用いた。クロマフィン
細胞は、神経性外胚葉に由来し交感神経支配を受けてア
ドレナリンやノルアドレナリンといったカテコールアミ
ンを合成・分泌する神経細胞の一種である。クロマフィ
ン細胞を使用した理由は、比較的接着性の低い細胞のた
め、材料表面に対する細胞接着性の指標にしやすいこと
と、カテコールアミンの合成・分泌量が比較的高いの
で、神経伝達物質の定量評価がしやすいことからであ
る。
【００２１】培養は、培養液としてＤＭＥＭ（１０％ウ
シ胎児血清（ＦＣＳ）を含む）を使い、約１×１０5ｃ
ｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図１に示すよう
な培養基板に播種して５％ＣＯ2インキュベータ内３７
℃下で行った。評価は、培養開始一定期間後の細胞形態
観察と抗チロシン水酸化酵素（ＴＨ）抗体染色による機
能評価にて行った。ＴＨは、クロマフィン細胞内に存在
する酵素で、チロシンを出発物質としてカテコールアミ
ンを合成する際に、チロシンからドーパ（ＤＯＰＡ）へ
の合成に関与する酵素である。このＴＨに対する抗体で
染色された場合、細胞内にＴＨが存在し、カテコールア
ミンを合成する機能が維持されているものと考えられ
る。
シ胎児血清（ＦＣＳ）を含む）を使い、約１×１０5ｃ
ｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図１に示すよう
な培養基板に播種して５％ＣＯ2インキュベータ内３７
℃下で行った。評価は、培養開始一定期間後の細胞形態
観察と抗チロシン水酸化酵素（ＴＨ）抗体染色による機
能評価にて行った。ＴＨは、クロマフィン細胞内に存在
する酵素で、チロシンを出発物質としてカテコールアミ
ンを合成する際に、チロシンからドーパ（ＤＯＰＡ）へ
の合成に関与する酵素である。このＴＨに対する抗体で
染色された場合、細胞内にＴＨが存在し、カテコールア
ミンを合成する機能が維持されているものと考えられ
る。
【００２２】培養開始１週間後及び２週間後に、抗体染
色を行ってそれぞれの基板上で培養された細胞の機能を
確認した結果、コントロールとして用いたコラーゲン上
にて培養した細胞と有意な差はなく、同様な染色挙動が
認められた。このことと、光学顕微鏡による培養細胞の
形態観察で異常がなかったことから、ポリピロールの電
解重合膜上で良好な細胞培養が行えることがわかった。
色を行ってそれぞれの基板上で培養された細胞の機能を
確認した結果、コントロールとして用いたコラーゲン上
にて培養した細胞と有意な差はなく、同様な染色挙動が
認められた。このことと、光学顕微鏡による培養細胞の
形態観察で異常がなかったことから、ポリピロールの電
解重合膜上で良好な細胞培養が行えることがわかった。
【００２３】（実施例２）細胞培養基板として、ＩＴＯ
を成膜したガラス基板上に、ポリ（Ｎ−メチルピロー
ル）を電解重合法より合成したものを用いた。このポリ
（Ｎ−メチルピロール）からなる電解重合膜は、０．１
Ｍのモノマーと指示電解質として０．０５Ｍの塩化ナト
リウムを加えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ／ｃｍ
2の定電流電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行い、そ
れぞれＩＴＯ上に成長させた。
を成膜したガラス基板上に、ポリ（Ｎ−メチルピロー
ル）を電解重合法より合成したものを用いた。このポリ
（Ｎ−メチルピロール）からなる電解重合膜は、０．１
Ｍのモノマーと指示電解質として０．０５Ｍの塩化ナト
リウムを加えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ／ｃｍ
2の定電流電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行い、そ
れぞれＩＴＯ上に成長させた。
【００２４】出来上がった基板は、７０％エタノール水
溶液に浸漬して充分滅菌洗浄した後、クリーンベンチ内
で乾燥させた。培養細胞としては、ウシの新鮮な副腎髄
質より単離したクロマフィン細胞を用いた。培養は、培
養液としてＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳを含む）を使い、約
１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図
１に示すような培養基板に播種して５％ＣＯ2インキュ
ベータ内３７℃下で行った。
溶液に浸漬して充分滅菌洗浄した後、クリーンベンチ内
で乾燥させた。培養細胞としては、ウシの新鮮な副腎髄
質より単離したクロマフィン細胞を用いた。培養は、培
養液としてＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳを含む）を使い、約
１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図
１に示すような培養基板に播種して５％ＣＯ2インキュ
ベータ内３７℃下で行った。
【００２５】評価は、培養開始一定期間後の細胞形態観
察と抗ＴＨ抗体染色による機能評価にて行った。培養開
始１週間後及び２週間後に、抗体染色を行ってそれぞれ
の基板上で培養された細胞の機能を確認した結果、コン
トロールとして用いたコラーゲン上にて培養した細胞と
有意な差はなく、同様な染色挙動が認められた。このこ
とと、光学顕微鏡による培養細胞の形態観察で異常がな
かったことから、ポリ（Ｎ−メチルピロール）の電解重
合膜上で良好な細胞培養が行えることがわかった。
察と抗ＴＨ抗体染色による機能評価にて行った。培養開
始１週間後及び２週間後に、抗体染色を行ってそれぞれ
の基板上で培養された細胞の機能を確認した結果、コン
トロールとして用いたコラーゲン上にて培養した細胞と
有意な差はなく、同様な染色挙動が認められた。このこ
とと、光学顕微鏡による培養細胞の形態観察で異常がな
かったことから、ポリ（Ｎ−メチルピロール）の電解重
合膜上で良好な細胞培養が行えることがわかった。
【００２６】（実施例３）細胞培養基板として、ガラス
基板上にスパッタ法にてＩＴＯを成膜し、この上にポリ
ピロールを電解重合法より合成したものを用いた。この
ポリピロールからなる電解重合膜は、０．１Ｍのモノマ
ーと指示電解質として０．０５Ｍの塩化ナトリウムを加
えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ／ｃｍ2の定電流
電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行い、それぞれＩＴ
Ｏ上に成長させた。
基板上にスパッタ法にてＩＴＯを成膜し、この上にポリ
ピロールを電解重合法より合成したものを用いた。この
ポリピロールからなる電解重合膜は、０．１Ｍのモノマ
ーと指示電解質として０．０５Ｍの塩化ナトリウムを加
えた水溶液に、電流密度が２．１ｍＡ／ｃｍ2の定電流
電解を５秒間、１０秒間、３０秒間行い、それぞれＩＴ
Ｏ上に成長させた。
【００２７】出来上がった基板は、７０％エタノール水
溶液に浸漬して充分滅菌洗浄した後、クリーンベンチ内
で乾燥させた。培養細胞としては、ウシの新鮮な副腎髄
質より単離したクロマフィン細胞を用いた。培養は、培
養液としてＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳを含む）を使い、約
１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図
１に示すような培養基板にシリコーン樹脂製のセルを設
けた培養床に播種して５％ＣＯ2インキュベータ内３７
℃下で行った。
溶液に浸漬して充分滅菌洗浄した後、クリーンベンチ内
で乾燥させた。培養細胞としては、ウシの新鮮な副腎髄
質より単離したクロマフィン細胞を用いた。培養は、培
養液としてＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳを含む）を使い、約
１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、図
１に示すような培養基板にシリコーン樹脂製のセルを設
けた培養床に播種して５％ＣＯ2インキュベータ内３７
℃下で行った。
【００２８】培養開始１週間後に、培養細胞にアセチル
コリンを加えて細胞を刺激し、合成及び細胞から放出さ
れた神経伝達物質であるカテコールアミンを高速液体ク
ロマトグラフィーにて定量した。その結果、クロマフィ
ン細胞が合成したカテコールアミン量（図２）は、コン
トロールとして用いたコラーゲン上にて培養した細胞の
合成量と差がなかった。このことから、電解重合による
ポリピロール膜が細胞に対して障害を起こさないことが
わかった。
コリンを加えて細胞を刺激し、合成及び細胞から放出さ
れた神経伝達物質であるカテコールアミンを高速液体ク
ロマトグラフィーにて定量した。その結果、クロマフィ
ン細胞が合成したカテコールアミン量（図２）は、コン
トロールとして用いたコラーゲン上にて培養した細胞の
合成量と差がなかった。このことから、電解重合による
ポリピロール膜が細胞に対して障害を起こさないことが
わかった。
【００２９】また、カテコールアミンの放出量はコラー
ゲンに対し、約２倍量であり（図３）、ポリピロール膜
上で培養されたクロマフィン細胞がアセチルコリン刺激
に対してカテコールアミンを放出しやすくなることがわ
かった。
ゲンに対し、約２倍量であり（図３）、ポリピロール膜
上で培養されたクロマフィン細胞がアセチルコリン刺激
に対してカテコールアミンを放出しやすくなることがわ
かった。
【００３０】
【発明の効果】本発明によれば、細胞への接着機能だけ
ではなく、培養細胞の機能を保持できる細胞培養基板を
提供することができる。
ではなく、培養細胞の機能を保持できる細胞培養基板を
提供することができる。
【図１】本発明に用いた細胞培養基板の一例を示す図で
ある。
ある。
【図２】培養細胞が合成したカテコールアミン量を示す
図である。
図である。
【図３】培養細胞が放出したカテコールアミン量を示す
図である。
図である。
Ｐｙ１ 合成時間５秒間のポリピロール Ｐｙ２ 合成時間１０秒間のポリピロール Ｐｙ３ 合成時間３０秒間のポリピロール
Claims (4)
- 【請求項１】 基板表面に電解重合法にてポリマー膜を
形成することによって基板表面に細胞を安定的に吸着
し、培養し得るようにしたことを特徴とする細胞培養基
板。 - 【請求項２】 ポリマー膜が導電性高分子であることを
特徴とする請求項１記載の細胞培養基板。 - 【請求項３】 基板表面に、電解重合法によるポリマー
膜の規則性を有する微細なパターンを形成することによ
って基板表面に細胞を安定的に吸着し、培養し得るよう
にした請求項１又は２記載の細胞培養基板。 - 【請求項４】 基板表面に、電解重合法によるポリマー
膜の所望のパターンを形成し、該パターン上に所望の細
胞を該パターンの形状に沿って選択的に吸着し、培養し
得るようにした請求項１又は２記載の細胞培養基板。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12759393A JPH06335381A (ja) | 1993-05-28 | 1993-05-28 | 細胞培養基板 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12759393A JPH06335381A (ja) | 1993-05-28 | 1993-05-28 | 細胞培養基板 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06335381A true JPH06335381A (ja) | 1994-12-06 |
Family
ID=14963922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12759393A Pending JPH06335381A (ja) | 1993-05-28 | 1993-05-28 | 細胞培養基板 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06335381A (ja) |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003038031A1 (fr) * | 2001-10-31 | 2003-05-08 | Hakuju Institute For Health Science Co., Ltd. | Systeme de culture de cellules et procede de mesure dose-reponse |
| JP2004201689A (ja) * | 2002-12-20 | 2004-07-22 | Maco Pharma | 細胞培養のための熱成形容器 |
| JP2005143382A (ja) * | 2003-11-14 | 2005-06-09 | Dainippon Printing Co Ltd | パターニング用基板および細胞培養基板 |
| WO2005085414A1 (ja) * | 2004-03-10 | 2005-09-15 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | 血管細胞培養用パターニング基板 |
| WO2007032208A1 (ja) * | 2005-09-15 | 2007-03-22 | Nippon Sheet Glass Company, Limited | 細胞培養基板 |
| US7687251B2 (en) | 2004-03-26 | 2010-03-30 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Method for producing cell culture substrate and apparatus for producing cell culture substrate |
| US7883865B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | National University Corporation Nagoya University | Production of cell culture product and material for use in said production |
| US7919305B2 (en) | 2004-02-19 | 2011-04-05 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Method for manufacturing cell culture substrate |
| WO2012049784A1 (ja) * | 2010-10-15 | 2012-04-19 | 大日本印刷株式会社 | 細胞遊走測定用基板および細胞遊走試験法 |
| JP2012120451A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Dainippon Printing Co Ltd | 補助電極付き細胞試験用基板 |
| JP2012120453A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Dainippon Printing Co Ltd | 細胞試験用容器及びそれを用いた細胞試験方法 |
| WO2013154381A1 (ko) * | 2012-04-12 | 2013-10-17 | 연세대학교 산학협력단 | 근적외선에 의한 세포의 선택적 탈착, 패턴 및 수확 방법 |
| US9062341B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-06-23 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Substrate used for cell migration assays and method for cell migration assays |
| US9249386B2 (en) | 2005-06-06 | 2016-02-02 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Substrate for cell transfer |
| US10385303B2 (en) | 2012-04-12 | 2019-08-20 | Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University | Methods of selective cell attachment/detachment, cell patternization and cell harvesting by means of near infrared rays |
-
1993
- 1993-05-28 JP JP12759393A patent/JPH06335381A/ja active Pending
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003038031A1 (fr) * | 2001-10-31 | 2003-05-08 | Hakuju Institute For Health Science Co., Ltd. | Systeme de culture de cellules et procede de mesure dose-reponse |
| JP2004201689A (ja) * | 2002-12-20 | 2004-07-22 | Maco Pharma | 細胞培養のための熱成形容器 |
| JP4584571B2 (ja) * | 2002-12-20 | 2010-11-24 | マコ・ファルマ | 細胞培養のための熱成形容器 |
| JP2005143382A (ja) * | 2003-11-14 | 2005-06-09 | Dainippon Printing Co Ltd | パターニング用基板および細胞培養基板 |
| JP4554913B2 (ja) * | 2003-11-14 | 2010-09-29 | 大日本印刷株式会社 | パターニング用基板および細胞培養基板 |
| US7919305B2 (en) | 2004-02-19 | 2011-04-05 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Method for manufacturing cell culture substrate |
| WO2005085414A1 (ja) * | 2004-03-10 | 2005-09-15 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | 血管細胞培養用パターニング基板 |
| US7687251B2 (en) | 2004-03-26 | 2010-03-30 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Method for producing cell culture substrate and apparatus for producing cell culture substrate |
| US7883865B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | National University Corporation Nagoya University | Production of cell culture product and material for use in said production |
| US9249386B2 (en) | 2005-06-06 | 2016-02-02 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Substrate for cell transfer |
| WO2007032208A1 (ja) * | 2005-09-15 | 2007-03-22 | Nippon Sheet Glass Company, Limited | 細胞培養基板 |
| US9062341B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-06-23 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Substrate used for cell migration assays and method for cell migration assays |
| WO2012049784A1 (ja) * | 2010-10-15 | 2012-04-19 | 大日本印刷株式会社 | 細胞遊走測定用基板および細胞遊走試験法 |
| JP2012120451A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Dainippon Printing Co Ltd | 補助電極付き細胞試験用基板 |
| JP2012120453A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Dainippon Printing Co Ltd | 細胞試験用容器及びそれを用いた細胞試験方法 |
| WO2013154381A1 (ko) * | 2012-04-12 | 2013-10-17 | 연세대학교 산학협력단 | 근적외선에 의한 세포의 선택적 탈착, 패턴 및 수확 방법 |
| KR101460853B1 (ko) * | 2012-04-12 | 2014-11-19 | 연세대학교 산학협력단 | 근적외선에 의한 세포의 선택적 탈착, 패턴 및 수확 방법 |
| CN104379725A (zh) * | 2012-04-12 | 2015-02-25 | 延世大学校产学协力团 | 通过近红外线方式来进行选择性的细胞粘附/脱落、细胞图案化及细胞收集的方法 |
| US10385303B2 (en) | 2012-04-12 | 2019-08-20 | Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University | Methods of selective cell attachment/detachment, cell patternization and cell harvesting by means of near infrared rays |
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