JPH06292563A - 組換え大腸菌の培養方法 - Google Patents
組換え大腸菌の培養方法Info
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- JPH06292563A JPH06292563A JP8322093A JP8322093A JPH06292563A JP H06292563 A JPH06292563 A JP H06292563A JP 8322093 A JP8322093 A JP 8322093A JP 8322093 A JP8322093 A JP 8322093A JP H06292563 A JPH06292563 A JP H06292563A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 温度感受性プロモーターを用いた目的タンパ
ク質の大腸菌での生産における温度誘導発現を確実に行
い、また誘導発現後の目的タンパク質の熱ショックタン
パク質による変性を防いで生産効率を高めることのでき
る方法を提供すること。 【構成】 温度感受性プロモーターの下流に目的タンパ
ク質をコードする遺伝子を連結したベクタープラスミド
で形質転換した大腸菌を培養する際に、２０〜３７℃の
範囲の培養温度及び６．５〜７．５の範囲の培地ｐＨで
培養を開始した後、培養温度を３８〜４４℃に上昇させ
るとともに培地ｐＨを４．５〜６．５の範囲に低下させ
ることで目的タンパク質の誘導発現を行う。更に、必要
に応じて、誘導発現開始後３〜１０時間経過したところ
で、培養温度を２．０〜１０．０℃低い温度に低下さ
せ、かつ培地のｐＨを０．１〜０．５上昇させて目的タ
ンパク質の熱ショックタンパク質による変性を防ぐ。
ク質の大腸菌での生産における温度誘導発現を確実に行
い、また誘導発現後の目的タンパク質の熱ショックタン
パク質による変性を防いで生産効率を高めることのでき
る方法を提供すること。 【構成】 温度感受性プロモーターの下流に目的タンパ
ク質をコードする遺伝子を連結したベクタープラスミド
で形質転換した大腸菌を培養する際に、２０〜３７℃の
範囲の培養温度及び６．５〜７．５の範囲の培地ｐＨで
培養を開始した後、培養温度を３８〜４４℃に上昇させ
るとともに培地ｐＨを４．５〜６．５の範囲に低下させ
ることで目的タンパク質の誘導発現を行う。更に、必要
に応じて、誘導発現開始後３〜１０時間経過したところ
で、培養温度を２．０〜１０．０℃低い温度に低下さ
せ、かつ培地のｐＨを０．１〜０．５上昇させて目的タ
ンパク質の熱ショックタンパク質による変性を防ぐ。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、温度感受性プロモータ
ーを有するベクタープラスミドで形質転換された組換え
大腸菌の培養方法に関する。
ーを有するベクタープラスミドで形質転換された組換え
大腸菌の培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】温度感受性プロモーターは、通常の培養
温度ではその下流にある遺伝子の転写がリプレッサーに
より抑制されるが、培養温度を上昇させると、リプレッ
サーが不活性化されてその遺伝子の転写が誘導される。
温度ではその下流にある遺伝子の転写がリプレッサーに
より抑制されるが、培養温度を上昇させると、リプレッ
サーが不活性化されてその遺伝子の転写が誘導される。
【０００３】この温度感受性プロモーター、例えばλフ
ァージのＰＬプロモーターを利用して目的タンパク質を
大腸菌で生産させる場合、最初に増殖に好適な条件で培
養を開始し、対数増殖期において十分な培養菌体量が得
られた段階で、培養温度のみを４１．０〜４２．０に上
昇させることにより温度感受性リプレッサータンパク質
を不活性化して目的タンパク質の温度誘導発現を行い、
目的タンパク質をより効率良く生産させる方法が一般的
に用いられている。しかしながら、この方法では、目的
タンパク質の種類によっては、温度上昇のみでは目的タ
ンパク質の発現がほとんどの認めらないか、非常に低い
場合がある。さらに十分な誘導発現が得られた場合で
も、誘導発現後培養系が高温条件下におかれるために目
的タンパク質がプロテアーゼの一種である熱ショックタ
ンパク質による変性を強く受けるため、結果的に目的タ
ンパク質の高い誘導発現量を得ることが困難となる場合
もあった。
ァージのＰＬプロモーターを利用して目的タンパク質を
大腸菌で生産させる場合、最初に増殖に好適な条件で培
養を開始し、対数増殖期において十分な培養菌体量が得
られた段階で、培養温度のみを４１．０〜４２．０に上
昇させることにより温度感受性リプレッサータンパク質
を不活性化して目的タンパク質の温度誘導発現を行い、
目的タンパク質をより効率良く生産させる方法が一般的
に用いられている。しかしながら、この方法では、目的
タンパク質の種類によっては、温度上昇のみでは目的タ
ンパク質の発現がほとんどの認めらないか、非常に低い
場合がある。さらに十分な誘導発現が得られた場合で
も、誘導発現後培養系が高温条件下におかれるために目
的タンパク質がプロテアーゼの一種である熱ショックタ
ンパク質による変性を強く受けるため、結果的に目的タ
ンパク質の高い誘導発現量を得ることが困難となる場合
もあった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、温度感受性
プロモーターを用いて目的タンパク質の生産を行う際の
上記従来技術における目的タンパク質の誘導発現の不確
実性を解消できる温度誘導発現方法を提供するととも
に、産生された目的タンパク質が熱ショックタンパク質
による変性を受けない培養方法を提供するものである。
プロモーターを用いて目的タンパク質の生産を行う際の
上記従来技術における目的タンパク質の誘導発現の不確
実性を解消できる温度誘導発現方法を提供するととも
に、産生された目的タンパク質が熱ショックタンパク質
による変性を受けない培養方法を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するこ
とのできる本発明の組換え大腸菌の培養方法は、温度感
受性プロモーターに目的タンパク質をコードする遺伝子
を機能的に連結した構成を有するベクタープラスミドで
形質転換された組換え大腸菌を培養するにあたり、２０
〜３７℃の範囲の培養温度及び６．５〜７．５の範囲の
培地ｐＨで培養を開始した後、培養温度を３８〜４４℃
に上昇させるとともに培地ｐＨを４．５〜６．３の範囲
に低下させることにより前記遺伝子の誘導発現を行うこ
とを特徴とする。
とのできる本発明の組換え大腸菌の培養方法は、温度感
受性プロモーターに目的タンパク質をコードする遺伝子
を機能的に連結した構成を有するベクタープラスミドで
形質転換された組換え大腸菌を培養するにあたり、２０
〜３７℃の範囲の培養温度及び６．５〜７．５の範囲の
培地ｐＨで培養を開始した後、培養温度を３８〜４４℃
に上昇させるとともに培地ｐＨを４．５〜６．３の範囲
に低下させることにより前記遺伝子の誘導発現を行うこ
とを特徴とする。
【０００６】また、誘導発現開始後３〜１０時間経過し
たところで、培養温度を２．０〜１０．０℃低下させ、
かつ培地のｐＨを０．１〜０．５上昇させることは、目
的タンパク質の熱ショックタンパク質による変性を制御
し、その生産効率を上昇させる上で好ましい。
たところで、培養温度を２．０〜１０．０℃低下させ、
かつ培地のｐＨを０．１〜０．５上昇させることは、目
的タンパク質の熱ショックタンパク質による変性を制御
し、その生産効率を上昇させる上で好ましい。
【０００７】本発明で組換え大腸菌の形成に用いるベク
タープラスミドとしては、温度感受性プロモーターに目
的タンパク質をコードする遺伝子が機能的に連結され、
更に大腸菌内で複製可能な構成を有するものであれば制
限なく利用できる。目的タンパク質をコードする遺伝子
が温度感受性プロモーターに機能的に連結されるとは、
該遺伝子の発現が該プロモーターによって制御されるよ
うにこれらを連結することをいい、必要に応じてターミ
ネーターなどの各種機能部位を追加してもよい。温度感
受性プロモーターとしては、例えばλファージのＰＬプ
ロモーターなどを挙げることができる。
タープラスミドとしては、温度感受性プロモーターに目
的タンパク質をコードする遺伝子が機能的に連結され、
更に大腸菌内で複製可能な構成を有するものであれば制
限なく利用できる。目的タンパク質をコードする遺伝子
が温度感受性プロモーターに機能的に連結されるとは、
該遺伝子の発現が該プロモーターによって制御されるよ
うにこれらを連結することをいい、必要に応じてターミ
ネーターなどの各種機能部位を追加してもよい。温度感
受性プロモーターとしては、例えばλファージのＰＬプ
ロモーターなどを挙げることができる。
【０００８】また、本発明で宿主として使用する大腸菌
としては、温度感受性プロモーターのリプレッサーを発
現するものであれば特に制限はなく、用いる温度感受性
プロモーターの種類に応じて選択する。例えば、λファ
ージのＰＬプロモーターを用いる場合には、ＣＩ８５７
リプレッサー遺伝子を有する大腸菌Ｎ４８３０−Ｉ株な
どが利用できる。宿主の形質転換は、常法により行うこ
とができる。例えば、上記構成のベクタープラスミドを
塩化カルシウム法などの方法により宿主に導入し、形質
転換された菌体を薬物耐性遺伝子等のマーカーを用いて
選択する方法によって得ることができる。
としては、温度感受性プロモーターのリプレッサーを発
現するものであれば特に制限はなく、用いる温度感受性
プロモーターの種類に応じて選択する。例えば、λファ
ージのＰＬプロモーターを用いる場合には、ＣＩ８５７
リプレッサー遺伝子を有する大腸菌Ｎ４８３０−Ｉ株な
どが利用できる。宿主の形質転換は、常法により行うこ
とができる。例えば、上記構成のベクタープラスミドを
塩化カルシウム法などの方法により宿主に導入し、形質
転換された菌体を薬物耐性遺伝子等のマーカーを用いて
選択する方法によって得ることができる。
【０００９】組換え大腸菌を培養する培地としては、大
腸菌用の培地であれば特に制限はなく、目的タンパク質
の種類などに応じて選択する。例えば、グルコースを炭
素源としたＹＭ培地、２倍濃度のＹＭ培地等を用いると
良い。また、必要に応じてアンピシリンやテトラサイク
リンなどの抗生物質を添加しても良い。さらには、グル
コースなどの炭素源に加えて窒素源、無機塩を含む合成
培地を用いることもできる。
腸菌用の培地であれば特に制限はなく、目的タンパク質
の種類などに応じて選択する。例えば、グルコースを炭
素源としたＹＭ培地、２倍濃度のＹＭ培地等を用いると
良い。また、必要に応じてアンピシリンやテトラサイク
リンなどの抗生物質を添加しても良い。さらには、グル
コースなどの炭素源に加えて窒素源、無機塩を含む合成
培地を用いることもできる。
【００１０】本発明の培養方法においては、培養開始時
から対数増殖期の所定時期まで目的タンパク質の誘導発
現が起らない２０〜３７℃、好ましくは３１〜３３℃の
範囲の温度で培養が行われる。対数増殖期の所定時期に
達した段階で、培養温度を３８〜４４℃、好ましくは３
９〜４３℃の範囲の温度に上昇させて目的タンパク質の
発現を誘導する。この培養温度のシフトは速やかに、例
えば５分以内に実施することが好ましい。また、培地の
ｐＨは培養開始時から前述の温度シフトによる発現の誘
導をかけるまでは６．５〜７．５、好ましくは６．８〜
７．３の範囲のｐＨに設定し、温度シフトと同時に４．
５〜６．３に低下させる。このような培養条件のシフト
によって目的タンパク質の発現を効果的に行うことがで
きる。対数増殖期における培養条件をシフトする時期
は、通常の回分培養においては菌体濃度約２．０ｇ／ｌ
の時点（Ｏ．Ｄ．660 が約５．０）か、または培養開始
後約５時間を目安とすれば良い。
から対数増殖期の所定時期まで目的タンパク質の誘導発
現が起らない２０〜３７℃、好ましくは３１〜３３℃の
範囲の温度で培養が行われる。対数増殖期の所定時期に
達した段階で、培養温度を３８〜４４℃、好ましくは３
９〜４３℃の範囲の温度に上昇させて目的タンパク質の
発現を誘導する。この培養温度のシフトは速やかに、例
えば５分以内に実施することが好ましい。また、培地の
ｐＨは培養開始時から前述の温度シフトによる発現の誘
導をかけるまでは６．５〜７．５、好ましくは６．８〜
７．３の範囲のｐＨに設定し、温度シフトと同時に４．
５〜６．３に低下させる。このような培養条件のシフト
によって目的タンパク質の発現を効果的に行うことがで
きる。対数増殖期における培養条件をシフトする時期
は、通常の回分培養においては菌体濃度約２．０ｇ／ｌ
の時点（Ｏ．Ｄ．660 が約５．０）か、または培養開始
後約５時間を目安とすれば良い。
【００１１】温度シフトによる発現誘導をかけた後、３
〜１０時間後に培養温度を２〜１０℃低下させ、即ち２
８〜４１℃の範囲の温度とし、かつｐＨを０．１〜０．
５、好ましくは０．１５〜０．３上昇させ、産生された
目的タンパク質の熱ショックタンパク質による変性を制
御し、培養終了まで継続する。培養の終了は、残グルコ
ース濃度がゼロとなるか、ＣＯ2 の発生が停止したこと
により確認することができる。
〜１０時間後に培養温度を２〜１０℃低下させ、即ち２
８〜４１℃の範囲の温度とし、かつｐＨを０．１〜０．
５、好ましくは０．１５〜０．３上昇させ、産生された
目的タンパク質の熱ショックタンパク質による変性を制
御し、培養終了まで継続する。培養の終了は、残グルコ
ース濃度がゼロとなるか、ＣＯ2 の発生が停止したこと
により確認することができる。
【００１２】以上述べた培養条件を採用した本発明の方
法によれば、温度感受性プロモーターに目的遺伝子を機
能的に連結した構成のベクタープラスミドを有する形質
転換体の培養における誘導発現を所定条件での培養温度
と培地ｐＨの同時シフトにより実施しているので、目的
タンパク質の発現を確実に行うことができるとともに、
誘導発現後に培養温度及びｐＨの誘導発現時とは異なる
条件での同時シフトを更に行うので、目的タンパク質の
熱ショックタンパク質による変性を制御でき、目的タン
パク質の大幅な生産性の向上が図れる。
法によれば、温度感受性プロモーターに目的遺伝子を機
能的に連結した構成のベクタープラスミドを有する形質
転換体の培養における誘導発現を所定条件での培養温度
と培地ｐＨの同時シフトにより実施しているので、目的
タンパク質の発現を確実に行うことができるとともに、
誘導発現後に培養温度及びｐＨの誘導発現時とは異なる
条件での同時シフトを更に行うので、目的タンパク質の
熱ショックタンパク質による変性を制御でき、目的タン
パク質の大幅な生産性の向上が図れる。
【００１３】
【実施例】以下実施例を用いて本発明をさらに詳細に説
明する。 実施例１ ベクタープラスミドｐＰＬＺ１の構築は、マーカーとし
てアンピシリン耐性遺伝子を有するプラスミドｐＰＬ−
ｌａｍｄａ（ファルマシア製）のＰＬプロモーターから
３２１塩基下流にあるＨＰａＩ部位に、プラスミドｐＭ
Ｃ１８７１（ファルマシア製）から得たβ−ガラクトシ
ダーゼ遺伝子を含む３．１ｋｂの断片（ＢａｍＨＩで切
り出し、末端を平滑化処理したもの）を挿入することで
行った。なお、具体的な操作は常法に従った。このクロ
ーニング部位（ＨＰａＩ部位）には、λファージＮ遺伝
子中に存在するため、この組換えプラスミドを用いて生
産されるβ−ガラクトシダーゼは、そのＮ末端にλ−フ
ァージＮ遺伝子由来の約３０個のアミノ酸残基が付加し
た融合タンパク質として得られる。この組換えプラスミ
ドｐＰＬＺ１を、その染色体に１コピーの温度感受性リ
プレッサーＣＩ８５７遺伝子を持つ大腸菌Ｎ４８３０−
１（ファルマシア製）に常法により導入して、アンピシ
リン耐性をマーカーとして形質転換体を選択して得た。
図１に組換えプラスミドｐＰＬＺ１の構築過程のフロー
を示す。
明する。 実施例１ ベクタープラスミドｐＰＬＺ１の構築は、マーカーとし
てアンピシリン耐性遺伝子を有するプラスミドｐＰＬ−
ｌａｍｄａ（ファルマシア製）のＰＬプロモーターから
３２１塩基下流にあるＨＰａＩ部位に、プラスミドｐＭ
Ｃ１８７１（ファルマシア製）から得たβ−ガラクトシ
ダーゼ遺伝子を含む３．１ｋｂの断片（ＢａｍＨＩで切
り出し、末端を平滑化処理したもの）を挿入することで
行った。なお、具体的な操作は常法に従った。このクロ
ーニング部位（ＨＰａＩ部位）には、λファージＮ遺伝
子中に存在するため、この組換えプラスミドを用いて生
産されるβ−ガラクトシダーゼは、そのＮ末端にλ−フ
ァージＮ遺伝子由来の約３０個のアミノ酸残基が付加し
た融合タンパク質として得られる。この組換えプラスミ
ドｐＰＬＺ１を、その染色体に１コピーの温度感受性リ
プレッサーＣＩ８５７遺伝子を持つ大腸菌Ｎ４８３０−
１（ファルマシア製）に常法により導入して、アンピシ
リン耐性をマーカーとして形質転換体を選択して得た。
図１に組換えプラスミドｐＰＬＺ１の構築過程のフロー
を示す。
【００１４】実施例２ 実施例１で得た形質転換体を、２０ｇ／ｌのグルコース
を含む２倍濃度のＹＭ培地に接種して、図２に示す培養
条件での培養を行った。発現の誘導は、対数増殖期前半
で菌体濃度が２．０ｇ／ｌに達した段階で、培養温度を
３２℃から４２℃に、培地ｐＨを７．２から５．５に同
時シフトすることによって行った。その際のβ−ガラク
トシダーゼ生産量を、β−ガラクトシダーゼ活性をＯＮ
ＰＧを基質とする常法により測定することによって追跡
した。結果を図２に示す。図２の結果から明らかなよう
に、β−ガラクトシダーゼの生産は単位培地当たり２５
００ユニットに達し、これは後述する従来法（比較例
１）による温度誘導発現法に対し約５０倍の生産増に相
当する。しかしながら、培養後期において、β−ガラク
トシダーゼ活性は急激に減少し、ピーク時の約６０％と
なった。
を含む２倍濃度のＹＭ培地に接種して、図２に示す培養
条件での培養を行った。発現の誘導は、対数増殖期前半
で菌体濃度が２．０ｇ／ｌに達した段階で、培養温度を
３２℃から４２℃に、培地ｐＨを７．２から５．５に同
時シフトすることによって行った。その際のβ−ガラク
トシダーゼ生産量を、β−ガラクトシダーゼ活性をＯＮ
ＰＧを基質とする常法により測定することによって追跡
した。結果を図２に示す。図２の結果から明らかなよう
に、β−ガラクトシダーゼの生産は単位培地当たり２５
００ユニットに達し、これは後述する従来法（比較例
１）による温度誘導発現法に対し約５０倍の生産増に相
当する。しかしながら、培養後期において、β−ガラク
トシダーゼ活性は急激に減少し、ピーク時の約６０％と
なった。
【００１５】実施例３ 実施例１で得た形質転換体を、２０ｇ／ｌのグルコース
を含む２倍濃度のＹＭ培地に接種し、３２℃、ｐＨ７．
２の条件で培養し、対数増殖期前半で菌体濃度が２．０
ｇ／ｌに達したところで、培養温度を３２℃から４２℃
に、培地ｐＨを７．２から５．５に同時シフトすること
によってβ−ガラクトシダーゼの発現を誘導した。その
後培養をその培養条件を維持して継続し、培養開始から
１２時間（発現誘導のための培養条件のシフトから７時
間）経過時に培養温度を３８℃に低下させるとともに、
培地ｐＨを５．６５に上昇させた。その際のβ−ガラク
トシダーゼの生産量の経時的変化を図３に示す。図３に
示されたように、β−ガラクトシダーゼ生産量は実施例
２のように培養後期において減少することなく、継続し
て増加し、最終的に４７００ユニット／ｍｌに達した。
を含む２倍濃度のＹＭ培地に接種し、３２℃、ｐＨ７．
２の条件で培養し、対数増殖期前半で菌体濃度が２．０
ｇ／ｌに達したところで、培養温度を３２℃から４２℃
に、培地ｐＨを７．２から５．５に同時シフトすること
によってβ−ガラクトシダーゼの発現を誘導した。その
後培養をその培養条件を維持して継続し、培養開始から
１２時間（発現誘導のための培養条件のシフトから７時
間）経過時に培養温度を３８℃に低下させるとともに、
培地ｐＨを５．６５に上昇させた。その際のβ−ガラク
トシダーゼの生産量の経時的変化を図３に示す。図３に
示されたように、β−ガラクトシダーゼ生産量は実施例
２のように培養後期において減少することなく、継続し
て増加し、最終的に４７００ユニット／ｍｌに達した。
【００１６】実施例４ 誘導発現温度を種々変更する以外は、実施例２と同様に
して形質転換体の培養を行って得られた各培養過程にお
ける最大β−ガラクトシダーゼ活性を図４に示す。
して形質転換体の培養を行って得られた各培養過程にお
ける最大β−ガラクトシダーゼ活性を図４に示す。
【００１７】実施例５ 誘導発現期のｐＨを種々変更する以外は、実施例２と同
様にして形質転換体の培養を行って得られた各培養過程
における最大β−ガラクトシダーゼ活性を図５に示す。
様にして形質転換体の培養を行って得られた各培養過程
における最大β−ガラクトシダーゼ活性を図５に示す。
【００１８】比較例１ 培地のｐＨを７．２に一定にする以外は、実施例２と同
様にして形質転換体の培養を行った。得られた結果を図
６に示す。図６に示されるように、この方法にβ−ガラ
クトシダーゼ生産量は約５ユニットと極めて低いもので
あった。
様にして形質転換体の培養を行った。得られた結果を図
６に示す。図６に示されるように、この方法にβ−ガラ
クトシダーゼ生産量は約５ユニットと極めて低いもので
あった。
【００１９】
【発明の効果】本発明の方法によれば、温度感受性プロ
モーターを用いた目的タンパク質の大腸菌における誘導
発現を培養温度および培地ｐＨの同時シフトによりおこ
なうので、高誘導発現を確実に行うことができ、しかも
培養後期においても誘導発現時とは異なる条件での培養
温度と培地ｐＨの同時シフトを行うので、目的タンパク
質の熱ショックタンパク質による変質が制御され、生産
効率の大幅な向上が図れる。
モーターを用いた目的タンパク質の大腸菌における誘導
発現を培養温度および培地ｐＨの同時シフトによりおこ
なうので、高誘導発現を確実に行うことができ、しかも
培養後期においても誘導発現時とは異なる条件での培養
温度と培地ｐＨの同時シフトを行うので、目的タンパク
質の熱ショックタンパク質による変質が制御され、生産
効率の大幅な向上が図れる。
【図１】ベクタープラスミドｐＰＬＺ１の構築過程を示
すフローチャートである。
すフローチャートである。
【図２】実施例２における培養結果を示す図であり、○
−○は菌体濃度の、□−□はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
−○は菌体濃度の、□−□はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
【図３】実施例３における培養結果を示す図であり、○
−○は菌体濃度の、●−●はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
−○は菌体濃度の、●−●はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
【図４】実施例４における誘導発現温度とβ−ガラクト
シダーゼ生産量の関係を示すグラフである。
シダーゼ生産量の関係を示すグラフである。
【図５】実施例５における誘導発現期のｐＨとβ−ガラ
クトシダーゼ生産量の関係を示すグラフである。
クトシダーゼ生産量の関係を示すグラフである。
【図６】従来法における培養結果を示す図であり、○−
○は菌体濃度の、□−□はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
○は菌体濃度の、□−□はβ−ガラクトシダーゼ活性
の、△−△は培地中のグルコース濃度の経時変化をそれ
ぞれ表わす。
Claims (5)
- 【請求項１】 温度感受性プロモーターに目的タンパク
質をコードする遺伝子を機能的に連結した構成を有する
ベクタープラスミドで形質転換された組換え大腸菌を培
養するにあたり、２０〜３７℃の範囲の培養温度及び
６．５〜７．５の範囲の培地ｐＨで培養を開始した後、
培養温度を３８〜４４℃に上昇させるとともに培地ｐＨ
を４．５〜６．３の範囲に低下させることにより前記遺
伝子の誘導発現を行うことを特徴とする組換え大腸菌の
培養方法。 - 【請求項２】 誘導発現開始後３〜１０時間経過したと
ころで、培養温度を２．０〜１０．０℃低い温度に低下
させ、かつ培地のｐＨを０．１〜０．５上昇させる請求
項１に記載の培養方法。 - 【請求項３】 温度感受性のプロモーターが、λファー
ジのＰＬプロモーターである請求項１または２に記載の
培養方法。 - 【請求項４】 組換え大腸菌形成用の宿主が、ＣＩ８５
７リプレッサー遺伝子を有する大腸菌である請求項１〜
３の何れかに記載の培養方法。 - 【請求項５】 宿主が、大腸菌Ｎ４８３０−１株である
請求項４に記載の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5083220A JP2771756B2 (ja) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | 組換え大腸菌の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5083220A JP2771756B2 (ja) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | 組換え大腸菌の培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06292563A true JPH06292563A (ja) | 1994-10-21 |
| JP2771756B2 JP2771756B2 (ja) | 1998-07-02 |
Family
ID=13796237
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP5083220A Expired - Fee Related JP2771756B2 (ja) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | 組換え大腸菌の培養方法 |
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| JP (1) | JP2771756B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013164854A (ja) * | 2013-03-13 | 2013-08-22 | Action Research:Kk | 自己解体メカニズム自動制御装置及び方法 |
| WO2020158877A1 (ja) | 2019-01-31 | 2020-08-06 | Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 | 組換えタンパク質の製造方法 |
-
1993
- 1993-04-09 JP JP5083220A patent/JP2771756B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY=1989 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013164854A (ja) * | 2013-03-13 | 2013-08-22 | Action Research:Kk | 自己解体メカニズム自動制御装置及び方法 |
| WO2020158877A1 (ja) | 2019-01-31 | 2020-08-06 | Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 | 組換えタンパク質の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2771756B2 (ja) | 1998-07-02 |
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