JPH06279450A - ハリスタチン２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 新しい抗がん剤の原料としての海産生物の長
期にわたる熱心な研究の結果、西インド洋の海綿である
Ａｘｉｎｅｌｌａ ｃａｒｔｅｒｉ（Ｄｅｎｄｙ）か
ら、ハリピラン型の新規なポリエーテルマクロライドで
あるハリスタチン２（Ｈａｌｉｓｔａｔｉｎ２）が単離
され、主としてハイフィールドＮＭＲ及び質量分光分析
によりその構造が決定された。 【作用】 ハリスタチン２は１．４×１０^−６％収率で
得られ、有糸分裂で阻止された細胞の蓄積を惹起し、チ
ューブリンの重合を阻害しそして放射能ラベルされたビ
ンブラスチンとＧＴＰのチューブリンへの結合を阻害
し、さらにハリスタチン２に幾つかのヒト腫瘍細胞系に
対してすぐれた活性を示した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトにがんを生起させ
るとして国立がん研究所（ＮＣＩ）で認定された種々の
細胞系の生長を阻害することが見出された新規化合物に
関するものであり、更に詳しくは、西インド洋産の海綿
のＡｘｉｎｅｌｌａ ｃａｒｔｅｒｉから単離されたハ
リピラン型の新規なポリエーテルマクロライドに関する
ものである。ハリスタチン２は有糸分裂で阻止された細
胞の蓄積を惹起し、チューブリンの重合を阻止し、放射
能ラベルしたビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ
ｅ）とＧＴＰのチューブリンへの結合を阻止し、そして
いろんなヒト腫瘍細胞に対して効果的な新生物活性を示
すことが見出された。

【０００２】

【従来の技術；発明が解決しようとする課題】コケムシ
綱、軟体動物門及び海綿動物の門に属する昔の水産の無
脊椎動物の多くは何十億年もの昔から地球上の海中にい
た。それらに今日のレベルの細胞機能、組織及び防御に
達するまでには、その進化の化学のなかで莫大な生合成
反応を行ってきたであろう。海産のスポンジ類は約５億
年のあいだその外観は殆ど変っていないが、これは少く
ともその間は外的条件の変化に応じての極めて有効な化
学的進化のあったことを示唆する。生物学的に活性な水
産動物成分の利用についての潜在力の認識は、紀元前、
２７００年にエジプトで記録されている。そして紀元年
２００年までに、ウミアラシの抽出物が医療用にギリシ
ャで使用されていた。海産生物（とくに無脊椎動物やサ
メ）が殆どがんを発達させないという一般的観察と共
に、上記の考えは海産動物や植物の抗がん成分の最初の
系統的研究へと導くものであった。

【０００３】１９６８年までに、アメリカの国立がん研
究所（ＮＣＩ）の実験的がん系に基いて、ある種の水産
生物は新しくて構造的に新規の抗新生物及び／又は細胞
毒的物質をもつという十分な証明を得た。同様な検討
は、水産生物はまた、たとえばウイルス性疾患のような
重篤な医学的チャレンジのための効果的な新しい医薬を
も提供することを示唆した。さらに、水産生物は当時の
医化学技術の発見を逃れるような、前例のよい構造タイ
プの有用な医薬の候補（及び生化学的プローブ）を含有
していると期待された。幸にもこれらの期待はそのうち
に現実のものとなった。その成功例はアリゾナ州のテン
プのがん研究所によるブリオスタチン、ドラスケン及び
セファロスタチンの発見であり、これらの系統の数種の
すぐれた抗がん剤の候補品が、今やヒトによる臨床試験
又は前臨床段階にある、アメリカ特許４８１６４４４，
４８３３２５７，４８７３２４５及び４８７９２７８参
照。

【０００４】医学の研究に現在従事している人に公知の
ように、新しい化合物の親からその市販までは最短で少
くとも数年を要し、幾つもの関門を必要とする。したが
って、政府と関連して、産業界は２つの目的のための多
くの試験を考案した。一つの目的は、化合物の特性が、
更なる投資として経済的に逆効果になるような化合物を
なくすることである。第２の、そしてもっと重要な目的
は、法規制をクリアし上市可能となるような化合物を見
出すことである。

【０００５】現在、そのデータを得るには一化合物につ
いて１千万ドルもの費用を必要とする。経済性の面から
は、それが回収可能である時にのみ投資すべきである。
このようなチャンスは特許の保護によって成さるべき
で、それがよい時は投資に行われず、生命保険の薬剤の
進歩は停止するであろう。

【０００６】僅か２００年以前に、多くの病気で人類を
破滅した。その病気の多くは制御され一掃された。その
開発過程では適切な実験動物が極めて重要であった。い
ろんなタイプのがんやＨＩＶウイルスでは現在そのよう
な研究が進行中である。いろんながんの治療研究に、政
府機関たるＮＣＩが主催し抗がん研究を助けている。あ
る化合物が抗がん活性をもつかどうかについて、ＮＣＩ
が開発した多くのプロトコールがある。そのひとつは６
０種のヒト腫瘍細胞系を含む細胞系パネルに対するテス
トから成る。このプロトコールは実証され学界で受け入
れられている。このプロトコールと、そこから得た統計
的評価法は文献に記載がある。すなわち、テストプロト
コールの詳細はＭｉｃｈａｅｌ Ｒ．Ｂｏｙｄ：Ｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅｓ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃ
ｏｌｏｇｙ，（ＰＰＯ最新版），Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１
０（１９８９年１０月）を参照。また統計的分析は次の
文献に説明がある。“ヒト腫瘍細胞系に対する医薬の特
異活性のパターンの分析と展示：平均グラフとＣＯＭＰ
ＡＲＥアルゴリズムの光度”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆｔｈ
ｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅ，Ｒｅｐｏｒｔｓ，Ｖｏｌ．８１，Ｎｏ．１４，
ｐ．１０８８（１９８９年７月１４日）（著者はＫ．
Ｄ．Ｐａｕｌｌほか）これら両文献はこの参照により本
明細書の一部を成すものである。

【０００７】過去２０年にわたる熱心な努力の大部分
は、海産の抗新生物及び／又は細胞毒的な生合成生産物
に向けられてきた。多くの特殊なポリエーテルマクロラ
イド、ペプチド及びヘテロ環化合物が見出された。これ
らの努力は、こゝにハリスタチン２と命名される新規で
強力な細胞毒のマクロライドの単離と構造決定を包含す
るものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段；作用】新しい抗がん剤の
原料としての海産生物の長期にわたる熱心な探究に、西
インド洋の海綿Ａｘｉｎｅｌｌａ ｃａｒｔｅｒｉ（Ｄ
ｅｎｄｙ）からハリスタチン２（Ｈａｌｉｓｔａｔｉｎ
２）という新しいハリピラン系のポリエーテルマクロラ
イドの単離と構造決定（主として高いフィールドＮＭＲ
及び質量スペクトルによる）をもたらした。ハリスタチ
ン２（収率は１．４×１０^−６％）は有糸分裂で阻止さ
れた細胞の蓄積を惹起し、チューブリンの重合を阻害
し、そして放射能ラベルしたビンブラスチンとＧＴＰの
チューブリンへの結合を阻害しそして下記の構造をもつ
ことがわかった。

【０００９】

【化１】

【００１０】ハリスタチン２の細胞系に対する平均の負
ｌｏｇ_１０ＧＩ_５０値を、各細胞系について示せば、次
のようである。すなわちＣＣＲＦ−ＣＥＭ（９．７
０），ＨＬ−６０ＴＢ（９．８０），Ｋ−５６２（９．
６４），ＭＯＬＴ−４（９．３９），ＲＰＭＩ−８２２
６（９．３９），ＳＲ（９．６７）；Ａ５４９／ＡＴＣ
Ｃ（８．７４），ＥＫＶＳ（８．３９），ＨＯＰ−１８
（８．５５），ＨＯＰ−６２（９．１６），ＨＯＰ−９
２（８．９２），ＮＣＩ−Ｈ２２６（９．１４），ＮＣ
Ｉ−Ｈ２３（９．１８），ＮＣＩ−Ｈ３２２Ｍ（８．５
２），ＮＣＩ−Ｈ４６０（９．４２），ＮＣＩ−Ｈ５２
２（９．７０），ＬＸＦＬ ５２９（９．３５）；ＤＭ
Ｓ １１４（９．４７），ＤＭＳ ２７３（９．８
９），ＣＯＬＯ２０５（９．６６），ＤＬＤ−１（８．
９２），ＨＣＣ−２９９８（８．８９），ＨＣＴ−１１
６（９．２６），ＨＣＴ−１５（８．２６），ＨＴ２９
（９．３４），ＫＭ１２（９．２７），ＫＭ２０Ｌ２
（９．３７），ＳＷ−６２０（９．４０）；ＳＦ−２６
８（８．７４），ＳＦ−２９５（９．７４），ＳＦ−５
３９（９．４９）；ＳＮＢ−１９（８．６８），ＳＮＢ
−７５（９．５７），ＳＮＢ−７８（９．９２），Ｕ２
５１（９．３２），ＸＦ ４９８（９．３７），ＬＯＸ
ＩＭＶＩ（９．３０），ＭＡＬＭＥ−３Ｍ（９．６
４），Ｍ１４（９．１７），Ｍ１９−ＭＥＬ（９．５
１），ＳＫ−ＭＥＬ−２（９．５１），ＳＫ−ＭＥＬ−
２８（９．００），ＳＫ−ＭＥＬ−５（９．７４），Ｕ
ＡＣＣ−２５７（８．６４），ＵＡＣＣ−６２（９．４
７），ＩＧＲＯＶ１（９．０５），ＯＶＣＡＲ−３
（９．５５），ＯＶＣＡＲ−４（８．１１），ＯＶＣＡ
Ｒ−５（８．７４），ＯＶＣＡＲ−８（８．８９），Ｓ
Ｋ−ＯＶ−３（９．１７），７８６−Ｏ（９．４１），
Ａ４９８（８．７４），ＡＣＨＮ（８．３６），ＣＡＫ
Ｉ−１（８．８９），ＲＸＦ−３９３（９．３２），Ｓ
Ｎ１２Ｃ（８．７４），ＴＫ−１０（８．２６），ＵＯ
−３１（８．２２）．

【００１１】従って本発明の主な目的は、抗有糸分裂能
をもちハリスタチン２と呼ばれる新しいポリエーテルマ
クロライドの単離であり、もう１つの目的はハリスタチ
ン２の構造決定である。これら及びそれ以外の目的は以
下の記載から明らかであろう。

【００１２】

【実施例】直立海綿Ａｘｉｎｅｌｌａ ｃａｒｔｅｒｉ
（メタノール中）の１９８９年の採集物（湿量６００ｋ
ｇ）をつくる。これをメタノール−ジクロロメタンで抽
出し、クロロカーボン分画をメタノール−水（９：１→
３：２）中でヘキサン→ジクロロメタンの間で分配す
る。得られたＰＳ細胞系活性（ＥＤ_５０ ０．３０μｇ
／ｍｌ）のジクロロメタン分画を、下記チャート１に示
すように、一連のゲル透過及び分配カラムクロマト工程
（セファデックスＬＨ−２０）、次いでＲＰ逆相シリカ
ゲル上でのＨＰＬＣによって分離する。

【００１３】ＰＳ細胞系でのバイオアッセイによりＡ．
ｃａｒｔｅｒｉから１．４×１０^−６％収率で新しく極
めて活性な、次の構造のマクロライドたるハリスタチン
２を分離した。

【００１４】

【化１】

【００１５】ハリスタチン２の構造は２Ｄ ＮＭＲその
他の分光学的データに基いてアサインされた。ハリスタ
チン２のＩＲスペクトルは３３５８，１７３４及び１６
５３ｃｍ^−１にそれぞれ対応する水酸基、エステルカル
ボニル及び二重結合の吸収をもつ、ハリスタチン２のＦ
ＡＢＭＳは、理論分子量１１３８に対応するｍ／ｚ１１
４５〔Ｍ＋Ｌｉ〕^＋のピークによりＣ_６１Ｈ_８６Ｏ_２０
の分子式が考えられる。

【００１６】

【チャート１】

【００１７】

【チャート１】

【００１８】^１Ｈ ＮＭＲ及び^１Ｈ−^１Ｈ ＣＯＳＹデ
ータは、遊離水酸基のＣ−１０への結合を示す。詳しい
データを表１に示す。

【００１９】

【表１】

【００２０】ハリスタチン２のＮＭＲアサインメント
（ＣＤ_３ＣＤ溶液、但し内部標準としてテトラメチルシ
ラン使用）

【００２１】

【表１】

【００２２】カッブリング定数としてはＨｚを用いた。
ｎとｐはＡＰＴの結果である。Ｃ−１３に対する^１３Ｃ
ＮＭＲシグナルは溶媒のシグナルと重なっている。幾
つかのカップリングパターン及び／又はカップリング定
数は、重なり合いの故に測定してよい。他の４つの未ア
サインの^１３Ｃ ＮＭＲシグナルは、Ｃ−５，Ｃ−１
５，Ｃ−２１及びＣ−２２に対応するδ３０．０９，３
１．４７，３３．０６及び３５．９２である。

【００２３】たとえばδ４．７３（トリプレット，Ｊ＝
４．６Ｈｚ，Ｈ−１２）のシグナルは、δ４．２５（Ｈ
−１１）のシグナル及び１．９６（Ｈ−１３）のアップ
フィールドとカップリングしている。δ４．２４（Ｈ−
８）のシグナルはδ３．７４（Ｈ−９）のブロードはダ
ブレットシグナルとカップリングして、δ４．２５（Ｈ
−１１）のシグナルとの長い範囲のカップリングを示
す。

【００２４】^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおいて、ハリ
スタチン２からの６１の炭素シグナルが認められる。こ
れらのシグナルのうち、δ１０３．７５（Ｃ−１０），
１１０８３（Ｃ−１４），１１４．７８（Ｃ−３８）及
び９８．１４ｐｐｍ（Ｃ−４４）の４つはヘミアセター
ルであることが、^１Ｈ−^１３Ｃ相関及びＡＰＴスペクト
ルで判明した。ハリスタチン２のＣ−１からＣ−１４ま
でのシグナルは、ハリスタチン１のＣ−１〜Ｃ−１４の
シグナルに極めて類似している。アサインされた構造と
一致して、１８コのメチレン基のシグナルが、^１３Ｃ
ＮＭＲスペクトルのδ５０〜２８ｐｐｍ領域のハリスタ
チン２からのものと認められる。さらに、表１に示すＨ
ＭＢＣスペクトルの解決は、下記のアサインされた構造
を強く支持する。

【００２５】δ１０３．７５（Ｃ−１０）のヘミアセタ
ールシグナルはＨ−８，Ｈ−９，Ｈ−１１及びＨ−１２
のシグナルとのクロスピークを示し、δ１１０．８３の
Ｃ−１４炭素シグナルはＨ−８，Ｈ−１１，Ｈ−１２及
びＨ−１３とのクロスピークを示す。Ｃ−１０水酸基
は、光学旋光（〔α〕^２５ _Ｄ−５９°）及び表２のｎＯ
ｅ差分光光度に基づきα−配位とアサインされる。

【００２６】

【表２】

【００２７】ハリスタチン２のｎＯｅ差分光データの解
釈のスペクトルはＣＤ_３ＯＤで測定

【００２８】

【表２】

【００２９】ＮＣＩのインビトロ第１次スクリーニング
での評価では、ハリスタチン２は著しい細胞毒活性（た
とえばＧＩ_５０は７×１０^−１０Ｍ）を示す。分析結果
はハリスタチン２のスクリーニングプロファイルはチュ
ーブリン・相互作用抗有糸分裂剤の群の一般的な作用特
性を示す。この群は、臨床的に活性な抗腫瘍剤であるビ
ンクリスチン、ビンブラスチン及びタキソール並に新し
く研究中の例えばドラスタチン１０のような種々の薬剤
を包含する。

【００３０】ハリスタチン２は、単離された微小管関連
蛋白による微小管集合及び精製チューブリンの重合を妨
害する抗有糸分裂剤であるか否かを決定するために評価
が行われた。

【００３１】Ｌ１２１０マウス白血病細胞に対し、ハリ
スタチン２はすぐれた細胞毒性（ＩＣ_５０ ０．４）を
示し、細胞毒濃度での有糸分裂係数は２０％もの高い値
までの顕著な上昇を示した。精製チューブリンのグルタ
メート−誘導重合で、ハリスタチン２のＩＣ_５０は４．
９±０．５μＭであった。ハリスタチン２は、放射能ラ
ベルしたビンブラスチンのチューブリンへの結合の非競
走的阻害剤であり、チューブリンのヌクレオチド交換を
阻害することがわかった。ハリスタチン２は５及び１０
μＭでヌクレオチド交換の阻害剤としてすぐれており、
上記２種の濃度で放射能ラベルしたビンブラスチンのチ
ューブリンへの結合を５１％及び７５％阻害した。ラベ
ルしたＧＴＰのチューブリンへの結合については、同じ
濃度では１７％及び５１％反応を阻害した。

【００３２】以下にＡ．ｃａｒｔｅｒｉからのハリスタ
チン２の抽出と単離、及び新しく単離したハリスタチン
２のＮＣＩ第一次スクリーニングテストによる生物学的
データを示す。

【００３３】海綿の抽出と溶媒分配。Ａ．ｃａｒｔｅｒ
ｉ約６００ｋｇ（湿量）からのメタノール輸送溶液を傾
斜し、この液に同量のジクロロメタン（６００ｌ）及び
充分な量（１０−２０ｖｏｌ％）の水を加え二相とす
る。ジクロロメタン相を分離し減圧で溶媒を除いて最初
の抽出物１．４３ｋｇをうる。海綿に５５０ｌのジクロ
ロメタン−メタノール（１：１）を加える。２８日後に
水（１５ｖｏｌ％）を加え、そこでクロロカーボン相を
分離し減圧で濃縮し第２の抽出物１．６６ｋｇをうる。
回収したジクロロメタンを上部の層（メタノール−水）
と合せてジクロロメタン−メタノール−水溶媒混合物
（約２：３．８：１．２）とし、海綿に戻し、以下類似
した操作（抽出期間：１８〜３２日）で第３のジクロロ
メタン抽出分画６０７ｇをうる。合併したジクロロメタ
ン抽出物（３．７ｋｇ）を、各２０ｌのヘキサン及びメ
タノール−水（９：１）の混合物にとかし、５５ｌのス
チール容器中でヘキサンにより６回抽出する。ヘキサン
分画を３０℃で濃縮し、ついで温度を５０℃に上昇させ
て水を除去する。濃い色の残渣は１．６５ｋｇであっ
た。メタノール−水（９：１）の溶液を濾過し（濾紙）
褐色の沈澱を集める（ＥＤ_５０＞１００μｇ／ｍｌ）。
溶液に水１２ｌを加えて３：２に締めジクロロメタン２
０ｌで３回抽出する。減圧濃縮により、クロロカーボン
抽出物から１８１ｇの分画、そして、メタノール−水か
らは４９３ｇの分画をうる。バイオアッセイの結果（Ｐ
Ｓ ＥＤ_５０ ０．３０μｇ／ｍｌ）は、ジクロロメタ
ン残渣が抗新生物成分を含有していることを示す。ＰＳ
細胞系活性分画（１８１ｇ）を、メタノールにパックさ
れたセファデックスＬＨ−２０カラム（１５×１２０ｃ
ｍ）を通してのゲル透過によって分離する。カラムをメ
タノール２５ｌで溶離し、分画をＰ３８８細胞系バイオ
アッセイでモニターし、活性分画（３）をジクロロメタ
ン−メタノール（３：２）中の他のセファデックスＬＨ
−２０カラム（９×９２ｃｍ）の頂上に加え、同じ溶媒
で溶離する。活性分画を、ジクロロメタン−メタノール
（９５：５）を溶離液とするセファデックスＬＨ−２０
カラム（４．５×８０ｃｍ）分配クロマトでさらに分離
する。次いで、得た活性分画を、シクロヘキサン−イソ
プロパノール−メターノル（８：１：１）の溶媒系を用
いた。セファデックスＬＨ−２０カラム（２．５×４０
ｃｍ）上で分離する。ＨＰＬＣによる最終の分離精製に
よりハリスタチン２の８．５ｍｇ（収率１．４×１０
^−６％）をうるハリスタチン２は無定形の固体として単
離される。ｍｐ１９４−１９８℃（コフラータイプのホ
トステージ）、〔α〕^２５ _Ｄ−５９°（Ｃ＝０．４８，
ＣＨ_３ＯＨ），ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ １１３９〔Ｍ＋
Ｈ〕^＋（Ｃ_６１Ｈ_８６Ｏ_２０＝１１３８），１１２１
〔Ｍ−Ｈ_２Ｏ＋Ｈ〕^＋，ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ １１
４５．５８７１〔Ｍ＋Ｌｉ〕^＋，Ｃ_６１Ｈ_８６Ｏ_２０Ｌ
ｉとしての計算値１１４５．５８７２，ＩＲ：ν_ｍａｘ
（ＮａＣｌフィルム）３３５８（ＯＨ），１７３４（Ｃ
ＯＯＲ），１６５３（Ｃ＝Ｃ），１１８６，１１３２，
１０７８，１０２２．

【００３４】カラムクロマトに用いる溶媒は再蒸留す
る。カラムクロマト分離に使うセファデックスＬＨ−２
０（粒子径：２５−１００μｍ）にスウェーデン，ウプ
サラのファルマシア・ファイン・ケミカルズＡＢから入
手できる。ＴＬＣプレートはアナルテック社（Ａｎａｌ
ｔｅｃｈ Ｉｎｃ）のものである。このＴＬＣプレート
は先ず短波長（２５０ｎｍ）の紫外線下でしらべ、次い
で３Ｎ硫酸中の硫酸セリウムをスプレーし約１５０℃で
熱する。ＨＰＬＣ分離のための条件は次のとおりであ
る。フェノメネックス．プレペックスＲＰ−８逆相セミ
分取カラム（１０．０×２５０ｍｍ，粒子サイズ５−２
０μｍ）；アセトニトリルーメタノール−水（５：５：
６）を溶離液として使用；アキシオム マイクロコンピ
ューターでコントロールされたＡｌｔｅｘ１１０Ａポン
プ；Ｒａｉｎｉｎ ＲＩ−１屈折率検出器、レンジ３
２、時間定数０．２５、流速（０．８又は１．０ｍｌ／
分）及び注入サンプル（１．０〜４．０ｍｇ）は変化さ
せる。^１Ｈ−ＮＭＲ，ＡＰＴ，^１Ｈ−^１Ｈ ＣＯＳＹ，
^１Ｈ−^１３Ｃ ＣＯＳＹ，ｎＯｅ及び^１３Ｃ−ＮＭＲ実
験は、クリオマグネット及びＡＳＰＥＣＴ−３００電算
機を具えたＢｒｕｃｋｅｒＡＭ−４００ ＮＭＲ分光計
を用いて行う。ＨＭＢＣスペクトルはＶＡＲＩＡＮ ５
００ ＮＭＲ分光計で記録する。光学旋光はパーキン−
エルマ−２４１旋光計で測定する。

【００３５】生物学的テスト；データ表示と分析；スク
リーンニングデータの概要。新しく単離したハリスタチ
ン２を、ＮＩＣのヒト腫瘍で、疾患基準のインビトロ第
１次スクリーニングテストし、データ計算を行った。表
３に、ハリスタチン２の四重スクリーニングの平均ＧＩ
_５０値から構成した平均グラフの集大成である。すべて
のパネルの平均ＧＩ_５０値は６．８×１０^−１０Ｍハリ
スタチン２であり、平均標準誤差にそれぞれの平均値の
１０％より小である。

【００３６】Ｐ３８８リンパ細胞白血病を用いインビボ
でテストしたハリスタチン２は、Ｇｅｒａｎほか（１９
７２年）のＣａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ
Ｒｅｐｏｒｔｓ，第３部，第３巻，１−１０３ページに
記載のマウスを用いてＮＣＩプロトコールで、ＢＤＦで
４０μｇ／ｋｇ宿主体重において１００％の生存率を示
し、そして１８％の治癒率であり治癒したもののうち２
２０％の延命率を示した。ＢＤＦにおいて、マウスは４
０μｇ／ｋｇ宿主体重のハリスタチン２を投与された。

【００３７】ハリスタチン２の各々の細胞系に対する平
均の負のｌｏｇ_１０ＧＩ_５０値を、個々の細胞系と共に
示せば、次のようである。すなわちＣＣＲＦ−ＣＥＭ
（９．７０），ＨＬ−６０ＴＢ（９．８０），Ｋ−５６
２（９．６４），ＭＯＬＴ−４（９．３９），ＲＰＭＩ
−８２２６（９．３９），ＳＲ（９．６７）；Ａ５４９
／ＡＴＣＣ（８．７４），ＥＫＶＳ（８．３９），ＨＯ
Ｐ−１８（８．５５），ＨＯＰ−６２（９．１６），Ｈ
ＯＰ−９２（８．９２），ＮＣＩ−Ｈ２２６（９．１
４），ＮＣＩ−Ｈ２３（９．１８），ＮＣＩ−Ｈ３２２
Ｍ（８．５２），ＮＣＩ−Ｈ４６０（９．４２），ＮＣ
Ｉ−Ｈ５２２（９．７０），ＬＸＦＬ ５２９（９．３
５）；ＤＭＳ １１４（９．４７），ＤＭＳ ２７３
（９．８９），ＣＯＬＯ ２０５（９．６６），ＤＬＤ
−１（８．９２），ＨＣＣ−２９９８（８．８９），Ｈ
ＣＴ−１１６（９．２６），ＨＣＴ−１５（８．２
６），ＨＴ２９（９．３４），ＫＭ１２（９．２７），
ＫＭ２０Ｌ２（９．３７），ＳＷ−６２０（９．４
０）；ＳＦ−２６８（８．７４），ＳＦ−２９５（９．
７４），ＳＦ−５３９（９．４９）；ＳＮＢ−１９
（８．６８），ＳＮＢ−７５（９．５７），ＳＮＢ−７
８（９．９２），Ｕ２５１（９．３２），ＸＦ ４９８
（９．３７）；ＬＯＸ ＩＭＶＩ（９．３０），ＭＡＬ
ＭＥ−３Ｍ（９．６４），Ｍ１４（９．１７），Ｍ１９
−ＭＥＬ（９．５１），ＳＫ−ＭＥＬ−２（９．５
１），ＳＫ−ＭＥＬ−２８（９．００），ＳＫ−ＭＥＬ
−５（９．７４），ＵＡＣＣ−２５７（８．６４），Ｕ
ＡＣＣ−６２（９．４７），ＩＧＲＯＶ１（９．０
５），ＯＶＣＡＲ−３（９．５５），ＯＶＣＡＲ−４
（８．１１），ＯＶＣＡＲ−５（８．７４），ＯＶＣＡ
Ｒ−８（８．８９），ＳＫ−ＯＶ−３（９．１７），７
８６−Ｏ（９．４１），Ａ４９８（８．７４），ＡＣＨ
Ｎ（８．３６），ＣＡＫＩ−１（８．８９），ＲＸＦ−
３９３（９．３２），ＳＮ１２Ｃ（８．７４），ＴＫ−
１０（８．２６），ＵＯ−３１（８．２２）．

【００３８】図１に示すように、個々の細胞系はがん細
胞を採取したヒト患者の診断によって分類してある。す
なわち白血病、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、大腸が
ん、中枢神経系（ＣＮＳ）又は脳部がん、黒色腫、卵巣
がん及び腎臓がん。図１のデータから明らかなように、
ハリスタチン２の活性は白血病、小細胞肺がん、大腸が
ん、ＣＮＳがん及び黒色腫に対して特に顕著である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ハリスタチン２の活性を示すものである。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ハリスタチン２と称する物質
2. 【請求項２】 次の構造式をもつ請求項１の物質 【化１】
3. 【請求項３】 次のＮＭＲをもつ請求項１の物質 【表１】
4. 【請求項４】 必須活性成分がハリスタチン２である医
   薬製剤
5. 【請求項５】 ハリスタチン２を、白血病、非小細胞肺
   がん、小細胞肺がん、大腸がん、ＣＮＳがん、黒色腫、
   卵巣がん及び腎臓がんから成る群より選ばれたヒトのが
   ん細胞に投与することから成る、該ヒトのがん細胞の生
   育を阻止する方法
6. 【請求項６】 ハリスタチン２の治療有効量を医薬的に
   許容される担体と混合し該混合物で次の腫瘍細胞系、す
   なわちＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＨＬ−６０ＴＢ，Ｋ−５６
   ２，ＭＯＬＴ−４，ＲＰＭＩ−８２２６，ＨＯ−６０Ｔ
   Ｂ，Ｋ−５６２，ＭＯＬＴ−４，ＲＰＭＩ−１２２６，
   ＳＲ，Ａ５４９／ＡＴＣＣ，ＥＫＶＳ，ＨＯＰ−１８，
   ＨＯＰ−６２，ＨＯＰ−９２，ＮＣＩ−Ｈ２３，ＮＣＩ
   −Ｈ３２２Ｍ，ＮＣＩ一Ｈ４６０，ＮＣＩ−Ｈ５２２，
   ＬＸＦＬ５２９，ＤＭＳ１１４，ＤＭＳ２７３，ＣＯＬ
   Ｏ ２０５，ＤＬＤ−１，ＨＣＣ−２９９８，ＨＣＴ−
   １１６，ＨＣＴ−１５，ＨＴ２９，ＫＭ１２，ＫＭ２０
   Ｌ２，ＳＷ−６２０，ＳＦ−２６８，ＳＦ−２９５，Ｓ
   Ｆ−５３９，ＳＮＢ−１９，ＳＮＢ−７５，ＳＮＢ−７
   ８，Ｕ２５１，ＸＦ４９８，ＬＯＸ ＩＭＶＩ，ＭＡＬ
   ＭＥ−３Ｍ，Ｍ１４，Ｍ１９−ＭＥＬ，ＳＫ−ＭＥＬ−
   ２，ＳＫ−ＭＥＬ−２８，ＳＫ−ＭＥＬ−５，ＵＡＣＣ
   −２５７，ＵＡＣＣ−６２，ＩＧＲＯＶ１，ＯＶＣＡＲ
   −３，ＯＶＣＡＲ−４，ＯＶＣＡＲ−５，ＯＶＣＡＲ−
   ８，ＳＫ−ＯＶ−３，７８６−Ｏ，Ａ４９８，ＡＣＨ
   Ｎ，ＣＡＫＩ−１，ＲＸＦ−３９３，ＳＮ１２Ｃ，ＴＫ
   −１０及びＵＯ−３１より成る群から選ばれたものを処
   置することから成る請求項５のがん細胞の生育の阻止方
   法
7. 【請求項７】 リンパ細胞白血病にかかっている宿主に
   対し、治療有効量のハリスタチン２含有の医薬的に許容
   される担体を投与することから成る該宿主の治療方法