JPH06265550A - 磁性担体粒子を用いた免疫測定方法 - Google Patents
磁性担体粒子を用いた免疫測定方法Info
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- JPH06265550A JPH06265550A JP5555593A JP5555593A JPH06265550A JP H06265550 A JPH06265550 A JP H06265550A JP 5555593 A JP5555593 A JP 5555593A JP 5555593 A JP5555593 A JP 5555593A JP H06265550 A JPH06265550 A JP H06265550A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 迅速かつ高感度な測定が可能な、磁性粒子を
用いる免疫測定法を提供する。 【構成】 試料中の抗原もしくは抗体（以下被検体とい
う）と、被検体に対応する磁性担体粒子に結合させた抗
体もしくは抗原とを反応させ、結合した被検体の量を定
量する方法において、反応を非磁性で且つ反応に関与す
る抗原および抗体とは結合しない担体を充填したカラム
内で行わせることを特徴とする方法。
用いる免疫測定法を提供する。 【構成】 試料中の抗原もしくは抗体（以下被検体とい
う）と、被検体に対応する磁性担体粒子に結合させた抗
体もしくは抗原とを反応させ、結合した被検体の量を定
量する方法において、反応を非磁性で且つ反応に関与す
る抗原および抗体とは結合しない担体を充填したカラム
内で行わせることを特徴とする方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は臨床検査診断薬等の分野
で、磁性担体粒子を利用する免疫測定法に関する。
で、磁性担体粒子を利用する免疫測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫測定法において、未反応の標識体
（Ｆｒｅｅ）を試料中の抗原もしくは抗体（以下被検体
という）と結合した標識体（Ｂｏｕｎｄ）から分離除去
する操作（ＢＦ分離）を簡便に効率よく行うため、被検
体に対応する抗体もしくは抗原に磁性担体粒子を結合さ
せ、磁力でＢｏｕｎｄを効率良く集める方法が知られて
いる〔ダイナビーズ（免疫磁気ビーズ）カタログ，日本
ダイナル社〕。
（Ｆｒｅｅ）を試料中の抗原もしくは抗体（以下被検体
という）と結合した標識体（Ｂｏｕｎｄ）から分離除去
する操作（ＢＦ分離）を簡便に効率よく行うため、被検
体に対応する抗体もしくは抗原に磁性担体粒子を結合さ
せ、磁力でＢｏｕｎｄを効率良く集める方法が知られて
いる〔ダイナビーズ（免疫磁気ビーズ）カタログ，日本
ダイナル社〕。
【０００３】磁性担体粒子を用いた免疫測定法におい
て、磁場を帯びたマイクロチューブ中に被検体に対応す
る磁性担体粒子に結合させた抗体もしくは抗原（以下磁
性担体粒子結合抗体または抗原という）、ついで被検
体、標識体を順に充填し、Ｆｒｅｅを洗浄溶出した後、
マイクロチューブの磁場を解除しＢｏｕｎｄを特異的に
溶出する方法（マイクロチューブ法）が開示されている
〔アナリティカルケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），６４巻，１３５６頁，１９９
２年〕。
て、磁場を帯びたマイクロチューブ中に被検体に対応す
る磁性担体粒子に結合させた抗体もしくは抗原（以下磁
性担体粒子結合抗体または抗原という）、ついで被検
体、標識体を順に充填し、Ｆｒｅｅを洗浄溶出した後、
マイクロチューブの磁場を解除しＢｏｕｎｄを特異的に
溶出する方法（マイクロチューブ法）が開示されている
〔アナリティカルケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），６４巻，１３５６頁，１９９
２年〕。
【０００４】
【発明が解決する課題】マイクロチューブ法は、操作が
煩雑な上、被検体の検出感度が酵素免疫法より１００倍
以上低い。本発明により、操作が簡便で検出感度もよい
磁性担体粒子を利用する免疫測定法が提供される。
煩雑な上、被検体の検出感度が酵素免疫法より１００倍
以上低い。本発明により、操作が簡便で検出感度もよい
磁性担体粒子を利用する免疫測定法が提供される。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、試料中の被検
体と、磁性担体粒子結合抗体または抗原とを反応させ、
結合した被検体の量を定量する方法において、反応を非
磁性で且つ反応に関与する抗原および抗体が結合しない
担体（以下非磁性担体という）を充填したカラム内で行
わせることを特徴とする方法に関する。好ましい具体的
方法としては、非磁性担体をカラムに充填し、これを磁
場に配置し、次いで磁性担体粒子結合抗体または抗原を
カラムに加えて分散させ、次いで被検体を含有する試料
を加えて抗原抗体反応を行わせ、これに標識体を加え、
未反応の標識体を溶出し、磁場を解除した後、標識体が
結合した被検体結合磁性担体粒子結合抗体または抗原を
溶出させ、これを定量することを特徴とする方法に関す
る。
体と、磁性担体粒子結合抗体または抗原とを反応させ、
結合した被検体の量を定量する方法において、反応を非
磁性で且つ反応に関与する抗原および抗体が結合しない
担体（以下非磁性担体という）を充填したカラム内で行
わせることを特徴とする方法に関する。好ましい具体的
方法としては、非磁性担体をカラムに充填し、これを磁
場に配置し、次いで磁性担体粒子結合抗体または抗原を
カラムに加えて分散させ、次いで被検体を含有する試料
を加えて抗原抗体反応を行わせ、これに標識体を加え、
未反応の標識体を溶出し、磁場を解除した後、標識体が
結合した被検体結合磁性担体粒子結合抗体または抗原を
溶出させ、これを定量することを特徴とする方法に関す
る。
【０００６】本発明の測定方法を以下に説明する。必要
により水または緩衝液により、非磁性担体を膨潤させ
る。カラム下端をナイロンメッシュ、グラスウール等で
栓をした後、水または緩衝液に懸濁しゲル状になった非
磁性担体をカラムへ充填し、カラム内でゲル層を形成さ
せる。充填したカラムに磁場をかける。次いで、水また
は緩衝液中で５〜５０００μｇ／ｍｌの濃度に調整した
磁性担体粒子結合抗体または抗原をカラムに加え、ゲル
層に分散させる。磁性担体粒子結合抗体または抗原は、
磁場内に配置されているのでカラム内に保持される。被
検体を含んだ試料をカラムに加えて磁性担体粒子結合抗
体または抗原と反応させる。ついで５０〜５０００μｇ
／ｍｌの標識体を加え磁性粒子結合抗体または抗原と結
合した被検体と反応させる。この後、水または緩衝液１
００μｌ〜１００ｍｌを自然滴下速度以下の流速で流し
カラム内の非磁性担体を洗浄し、未反応の標識体を溶出
させる。溶出が終了した段階で、磁場を消失させる。さ
らに水または緩衝液１００μｌ〜１００ｍｌで被検体結
合磁性担体粒子結合抗体または抗原（Ｂｏｕｎｄ）を溶
出（溶出速度は自然滴下速度以下）させる。被検体を加
えてからＢｏｕｎｄを溶出させるまでの時間は３〜３０
分であり、カラム内の温度は１５〜４０℃に保つことが
好ましい。溶出させたＢｏｕｎｄ中の標識体量を公知の
方法により測定することにより、被検体量を定量するこ
とができる。
により水または緩衝液により、非磁性担体を膨潤させ
る。カラム下端をナイロンメッシュ、グラスウール等で
栓をした後、水または緩衝液に懸濁しゲル状になった非
磁性担体をカラムへ充填し、カラム内でゲル層を形成さ
せる。充填したカラムに磁場をかける。次いで、水また
は緩衝液中で５〜５０００μｇ／ｍｌの濃度に調整した
磁性担体粒子結合抗体または抗原をカラムに加え、ゲル
層に分散させる。磁性担体粒子結合抗体または抗原は、
磁場内に配置されているのでカラム内に保持される。被
検体を含んだ試料をカラムに加えて磁性担体粒子結合抗
体または抗原と反応させる。ついで５０〜５０００μｇ
／ｍｌの標識体を加え磁性粒子結合抗体または抗原と結
合した被検体と反応させる。この後、水または緩衝液１
００μｌ〜１００ｍｌを自然滴下速度以下の流速で流し
カラム内の非磁性担体を洗浄し、未反応の標識体を溶出
させる。溶出が終了した段階で、磁場を消失させる。さ
らに水または緩衝液１００μｌ〜１００ｍｌで被検体結
合磁性担体粒子結合抗体または抗原（Ｂｏｕｎｄ）を溶
出（溶出速度は自然滴下速度以下）させる。被検体を加
えてからＢｏｕｎｄを溶出させるまでの時間は３〜３０
分であり、カラム内の温度は１５〜４０℃に保つことが
好ましい。溶出させたＢｏｕｎｄ中の標識体量を公知の
方法により測定することにより、被検体量を定量するこ
とができる。
【０００７】本測定方法において、非磁性担体の膨潤、
磁性担体粒子結合抗体または抗原の希釈、溶出操作等に
用いる水また緩衝液とは、蒸留水、イオン交換水、生理
食塩水またはｐＨ４〜１０で濃度範囲が５〜２００ｍ
Ｍ、好ましくは１０〜１００ｍＭの緩衝液があげられ
る。緩衝液としてはリン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝
液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩衝液、グッ
ドの緩衝液等があげられる。なお、水または緩衝液は必
要により、塩化ナトリウム等の塩、牛血清アルブミン等
の安定化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤、ポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０）
等の界面活性剤を含有していてもよい。
磁性担体粒子結合抗体または抗原の希釈、溶出操作等に
用いる水また緩衝液とは、蒸留水、イオン交換水、生理
食塩水またはｐＨ４〜１０で濃度範囲が５〜２００ｍ
Ｍ、好ましくは１０〜１００ｍＭの緩衝液があげられ
る。緩衝液としてはリン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝
液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩衝液、グッ
ドの緩衝液等があげられる。なお、水または緩衝液は必
要により、塩化ナトリウム等の塩、牛血清アルブミン等
の安定化剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤、ポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０）
等の界面活性剤を含有していてもよい。
【０００８】試料中の抗原もしくは抗体（被検体）とし
ては、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、免疫グロブリン（Ｉ
ｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）、補体 （Ｃ
３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ１ｑ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、
α1 −アンチトリプシン、α 1 −マイクログロブリン、
β2 −マイクログロブリン、ハプトグロブリン、トラン
スフェリン、セルロプラスミン、フェリチン、アルブミ
ン、ヘモグロビンＡ1、ヘモグロビンＡ1C、ミオグロビ
ン、ミオシン、デュパン−２、α−フェトプロテイン
（ＡＦＰ）、組織ポリペプチド抗原（ＴＰＡ）、アポリ
ポ蛋白Ａ1 、アポリポ蛋白Ｅ、リウマチ因子、抗ストレ
プトリジンＯ（ＡＳＯ）、フィブリン分解産物（ＦＤ
Ｐ）、フィブリン分解産物Ｄ分画（ＦＤＰ−Ｄ）、フィ
ブリン分解産物Ｄ−Ｄ分画（ＦＤＰ−Ｄ Ｄｉｍｅ
ｒ）、フィブリン分解産物Ｅ分画（ＦＤＰ−Ｅ）、アン
チトロンビン−III （ＡＴ−III)等の蛋白質、アミラー
ゼ、前立腺由来酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特
異エノラーゼ（ＮＳＥ）、フィブリノーゲン、エラスタ
ーゼ、プラスミノーゲン、クレアチンキナーゼ心筋型
（ＣＫ−ＭＢ）等の酵素、インシュリン、甲状腺刺激ホ
ルモン（ＴＳＨ）、3,5,3 ´−トリヨードサイロニン
（Ｔ3 ）、サイロキシン（Ｔ4 ）、副腎皮質刺激ホルモ
ン（ＡＣＴＨ）、生長ホルモン（ＧＨ）、黄体化ホルモ
ン（ＬＨ）等のホルモン、Ｂ型肝炎ウイルス関連抗体、
Ｂ型肝炎ウイルス関連抗原、Ｃ型肝炎ウイルス抗体、Ｈ
ＴＬＶ（成人Ｔ細胞白血病ウイルス）抗体、ＨＩＶ（エ
イズウイルス）抗体、クラミジア抗体、梅毒の抗体、ト
キソプラズマ抗体等各種感染症の原因ウイルスに対する
抗体等があげられる。
ては、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、免疫グロブリン（Ｉ
ｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）、補体 （Ｃ
３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ１ｑ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、
α1 −アンチトリプシン、α 1 −マイクログロブリン、
β2 −マイクログロブリン、ハプトグロブリン、トラン
スフェリン、セルロプラスミン、フェリチン、アルブミ
ン、ヘモグロビンＡ1、ヘモグロビンＡ1C、ミオグロビ
ン、ミオシン、デュパン−２、α−フェトプロテイン
（ＡＦＰ）、組織ポリペプチド抗原（ＴＰＡ）、アポリ
ポ蛋白Ａ1 、アポリポ蛋白Ｅ、リウマチ因子、抗ストレ
プトリジンＯ（ＡＳＯ）、フィブリン分解産物（ＦＤ
Ｐ）、フィブリン分解産物Ｄ分画（ＦＤＰ−Ｄ）、フィ
ブリン分解産物Ｄ−Ｄ分画（ＦＤＰ−Ｄ Ｄｉｍｅ
ｒ）、フィブリン分解産物Ｅ分画（ＦＤＰ−Ｅ）、アン
チトロンビン−III （ＡＴ−III)等の蛋白質、アミラー
ゼ、前立腺由来酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特
異エノラーゼ（ＮＳＥ）、フィブリノーゲン、エラスタ
ーゼ、プラスミノーゲン、クレアチンキナーゼ心筋型
（ＣＫ−ＭＢ）等の酵素、インシュリン、甲状腺刺激ホ
ルモン（ＴＳＨ）、3,5,3 ´−トリヨードサイロニン
（Ｔ3 ）、サイロキシン（Ｔ4 ）、副腎皮質刺激ホルモ
ン（ＡＣＴＨ）、生長ホルモン（ＧＨ）、黄体化ホルモ
ン（ＬＨ）等のホルモン、Ｂ型肝炎ウイルス関連抗体、
Ｂ型肝炎ウイルス関連抗原、Ｃ型肝炎ウイルス抗体、Ｈ
ＴＬＶ（成人Ｔ細胞白血病ウイルス）抗体、ＨＩＶ（エ
イズウイルス）抗体、クラミジア抗体、梅毒の抗体、ト
キソプラズマ抗体等各種感染症の原因ウイルスに対する
抗体等があげられる。
【０００９】また被検体に対応する抗体は、試料中の抗
原に対するポリクローナル抗体、試料中の抗原に対する
モノクローナル抗体等通常抗原に対して反応し得る抗体
があげられる〔「単クーロン抗体実験マニュアル」，富
山朔二ら編、講談社サイエンティフィック刊，１９８７
年：新生化学実験講座 第１２巻，「分子免疫学 III抗
原、抗体、補体」，日本生化学会編，東京化学同人社
刊，１９９２年〕。該抗体は複数の抗体からなるもので
もよく、抗体を限定分解したもの、蛋白修飾したもので
もよい。
原に対するポリクローナル抗体、試料中の抗原に対する
モノクローナル抗体等通常抗原に対して反応し得る抗体
があげられる〔「単クーロン抗体実験マニュアル」，富
山朔二ら編、講談社サイエンティフィック刊，１９８７
年：新生化学実験講座 第１２巻，「分子免疫学 III抗
原、抗体、補体」，日本生化学会編，東京化学同人社
刊，１９９２年〕。該抗体は複数の抗体からなるもので
もよく、抗体を限定分解したもの、蛋白修飾したもので
もよい。
【００１０】また被検体に対応する抗原は、天然の抗原
の抗体結合部位でもよく、遺伝子操作等により人工的に
作成されたものでもよい。例えば、被測定抗体が各種感
染症の原因ウイルスに対する抗体である場合、被測定抗
体に対する抗原は上述の感染症のウイルスのマーカー蛋
白質等を用いることができる。該抗原は複数の抗原分子
からなるものでもよく、抗原分子を限定分解したもの、
蛋白修飾したものでもよい。
の抗体結合部位でもよく、遺伝子操作等により人工的に
作成されたものでもよい。例えば、被測定抗体が各種感
染症の原因ウイルスに対する抗体である場合、被測定抗
体に対する抗原は上述の感染症のウイルスのマーカー蛋
白質等を用いることができる。該抗原は複数の抗原分子
からなるものでもよく、抗原分子を限定分解したもの、
蛋白修飾したものでもよい。
【００１１】磁性担体粒子とは、鉄、銅、マンガン等の
常磁性金属を含む微粒子であればどのうようなものでも
よいが、ラテックス系磁性担体粒子〔ヨーロピアン サ
ージカル リサーチ（Ｅｕｒ．，Ｓｕｒｇ．，Ｒｅ
ｓ．）１６巻、８０頁、１９８４年〕、シラナイズド
アイロン オキサイド等のガラス系磁性担体粒子（特開
昭６０号−１５６４号公報）、ポリマー系磁性担体粒子
（特開平３─４６５６５号公報）等を用いることができ
る。磁性担体粒子の大きさは、カラム下端のグラスウー
ル等による栓を通過し得る大きさであればよいが、通常
直径０．０１〜１００μｍの大きさの磁性担体粒子を用
いる。
常磁性金属を含む微粒子であればどのうようなものでも
よいが、ラテックス系磁性担体粒子〔ヨーロピアン サ
ージカル リサーチ（Ｅｕｒ．，Ｓｕｒｇ．，Ｒｅ
ｓ．）１６巻、８０頁、１９８４年〕、シラナイズド
アイロン オキサイド等のガラス系磁性担体粒子（特開
昭６０号−１５６４号公報）、ポリマー系磁性担体粒子
（特開平３─４６５６５号公報）等を用いることができ
る。磁性担体粒子の大きさは、カラム下端のグラスウー
ル等による栓を通過し得る大きさであればよいが、通常
直径０．０１〜１００μｍの大きさの磁性担体粒子を用
いる。
【００１２】磁性担体粒子結合抗体または抗原の製造
法、すなわち磁性担体粒子と被検体に対応する抗体また
は抗原との結合方法は、どのようなものでもよく、物理
的吸着法または化学的結合法等により結合されていれば
よい（石川榮治ら編「酵素免疫測定法 第３版」１９８
７年 医学書院刊）。例えばアミノ基同士を結合させ
る、ジイソシアネート法、グルタルアルデヒド法、ジフ
ルオロベンゼン法もしくはベンゾキノン法、またはカル
ボキシル基同士を結合させるサクシンイミド法等を用い
ることができる。
法、すなわち磁性担体粒子と被検体に対応する抗体また
は抗原との結合方法は、どのようなものでもよく、物理
的吸着法または化学的結合法等により結合されていれば
よい（石川榮治ら編「酵素免疫測定法 第３版」１９８
７年 医学書院刊）。例えばアミノ基同士を結合させ
る、ジイソシアネート法、グルタルアルデヒド法、ジフ
ルオロベンゼン法もしくはベンゾキノン法、またはカル
ボキシル基同士を結合させるサクシンイミド法等を用い
ることができる。
【００１３】標識体は、抗ヒトイムノグロブリンを結合
した標識物質または被検体に対応する抗体または抗原を
結合した標識物質を意味し、標識物質としては、西洋ワ
サビのペルオキシダ−ゼ（ＰＯＤ）、アルカリフォスフ
ァターゼ、βガラクトシダーゼ、グルコースオキシダー
ゼ等の酵素、アクリジウム−Ｉ等の発光物質、フルオレ
ッセイン等の蛍光物質、トリチウム等の放射性同位元素
があげられる。
した標識物質または被検体に対応する抗体または抗原を
結合した標識物質を意味し、標識物質としては、西洋ワ
サビのペルオキシダ−ゼ（ＰＯＤ）、アルカリフォスフ
ァターゼ、βガラクトシダーゼ、グルコースオキシダー
ゼ等の酵素、アクリジウム−Ｉ等の発光物質、フルオレ
ッセイン等の蛍光物質、トリチウム等の放射性同位元素
があげられる。
【００１４】標識体量の測定法としては、標識物質が酵
素の場合は基質を用いた該酵素活性の測定法、発光物質
の場合は発光光度計を用いた発光光度測定法、蛍光物質
の場合は蛍光光度計を用いた蛍光光度測定法、放射性同
位元素の場合は液体シンチレーションカウンターによる
測定法等があげられる。酵素活性測定法のうちＰＯＤ活
性の測定には基質としてｏ−フェニレンジアミン、ヒド
ロキシフェニルプロピオン酸等が、アルカリフォスファ
ターゼ活性の測定には基質として３−（２’−スピロア
ダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−ホスフォ
ピロキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン〔ＡＭＰＰ
Ｄ〕、ｐ−ニトロフェニルフォスフェートが、βガラク
トシダーゼ活性の測定には基質としてｐ−ニトロフェニ
ル−β−ガラクトシド、４−メチルウムベリフェリル−
β−ガラクトシド等が用いられる。また、グルコースオ
キシダーゼ活性にはグルコースを酸化する際に生じる過
酸化水素の検出をＰＯＤにより行う。
素の場合は基質を用いた該酵素活性の測定法、発光物質
の場合は発光光度計を用いた発光光度測定法、蛍光物質
の場合は蛍光光度計を用いた蛍光光度測定法、放射性同
位元素の場合は液体シンチレーションカウンターによる
測定法等があげられる。酵素活性測定法のうちＰＯＤ活
性の測定には基質としてｏ−フェニレンジアミン、ヒド
ロキシフェニルプロピオン酸等が、アルカリフォスファ
ターゼ活性の測定には基質として３−（２’−スピロア
ダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−ホスフォ
ピロキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン〔ＡＭＰＰ
Ｄ〕、ｐ−ニトロフェニルフォスフェートが、βガラク
トシダーゼ活性の測定には基質としてｐ−ニトロフェニ
ル−β−ガラクトシド、４−メチルウムベリフェリル−
β−ガラクトシド等が用いられる。また、グルコースオ
キシダーゼ活性にはグルコースを酸化する際に生じる過
酸化水素の検出をＰＯＤにより行う。
【００１５】本発明における非磁性担体としては、抗原
抗体反応およびＢｏｕｎｄ等の溶出を妨害しない分析用
の担体であればどのようなものでもよく、例えばセルロ
ファインＧ２５Ｃ、同ＧＣＬ２５ｍ、同ＧＣ１５ｍ（商
標名：以上生化学工業製）等のセルロース樹脂、セファ
デックスＧ１５、同Ｇ２５、同Ｇ５０（商標名：以上フ
ァルマシア社製）等のセファデックス樹脂、シリカゲル
等があげられる。
抗体反応およびＢｏｕｎｄ等の溶出を妨害しない分析用
の担体であればどのようなものでもよく、例えばセルロ
ファインＧ２５Ｃ、同ＧＣＬ２５ｍ、同ＧＣ１５ｍ（商
標名：以上生化学工業製）等のセルロース樹脂、セファ
デックスＧ１５、同Ｇ２５、同Ｇ５０（商標名：以上フ
ァルマシア社製）等のセファデックス樹脂、シリカゲル
等があげられる。
【００１６】カラムは、ガラス、プラスチック等磁気を
帯びない材質からなり，カラム内部への磁場をかけるこ
とおよび磁場を消去することが可能で、非磁性担体を充
填し得るものであればどのようなものでもよい。
帯びない材質からなり，カラム内部への磁場をかけるこ
とおよび磁場を消去することが可能で、非磁性担体を充
填し得るものであればどのようなものでもよい。
【００１７】カラムヘ磁場をかける方法としては、非磁
性担体を充填したカラムをスタンドに固定したＮＳ両極
の磁石の間にカラムを挿入する方法、カラムの外壁に永
久磁石または通電した電磁石を装着する方法等があげら
れ、磁場を消去する方法としては、スタンド等に固定し
た磁石のＮＳ両極の間にカラムを挿入する方法において
は、カラムを該磁石のＮＳ両極の間から離せばよく、カ
ラムの外壁に永久磁石または電磁石を装着する方法にお
いては該磁石をカラムの外壁から離すか、または電磁石
への通電を停止すればよい。
性担体を充填したカラムをスタンドに固定したＮＳ両極
の磁石の間にカラムを挿入する方法、カラムの外壁に永
久磁石または通電した電磁石を装着する方法等があげら
れ、磁場を消去する方法としては、スタンド等に固定し
た磁石のＮＳ両極の間にカラムを挿入する方法において
は、カラムを該磁石のＮＳ両極の間から離せばよく、カ
ラムの外壁に永久磁石または電磁石を装着する方法にお
いては該磁石をカラムの外壁から離すか、または電磁石
への通電を停止すればよい。
【００１８】上記の磁場をかける方法および消去する方
法に好適なカラムとしては、カラムの形状および大きさ
が、円筒状、円錐状、角筒状で内径０．１〜１０ｍｍ、
長さ５〜１００ｍｍのカラムを用いることが好ましい。
また、カラムの外壁に永久磁石または電磁石を装着する
方法においては、カラムの外壁に該磁石が装着できるよ
うな装置を備えたカラムを用いればよい。なお、上記の
カラムを用いたときの、非磁性担体のカラムへの充填量
は膨潤状態で５０〜５０００μｌである。
法に好適なカラムとしては、カラムの形状および大きさ
が、円筒状、円錐状、角筒状で内径０．１〜１０ｍｍ、
長さ５〜１００ｍｍのカラムを用いることが好ましい。
また、カラムの外壁に永久磁石または電磁石を装着する
方法においては、カラムの外壁に該磁石が装着できるよ
うな装置を備えたカラムを用いればよい。なお、上記の
カラムを用いたときの、非磁性担体のカラムへの充填量
は膨潤状態で５０〜５０００μｌである。
【００１９】スタンド等に固定した磁石のＮＳ両極の間
にカラムを挿入した略図を図１に示す。
にカラムを挿入した略図を図１に示す。
【００２０】本発明の測定法を用いた抗原または抗体の
測定用キットは例えば、次の組成を有する化合物から構
成される。
測定用キットは例えば、次の組成を有する化合物から構
成される。
【００２１】測定キット１個中、非磁性担体を充填した
カラム（内径０．１〜１０ｍｍ、長さ５〜１００ｍｍ）
１〜１００個、該カラムに磁場をかけるための磁石（長
さ５〜１００ｍｍ）１〜２００個、磁性担体粒子結合抗
体または抗原１ｐｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ）１〜１００
ｍｌ、標識体（１ｐｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ）１〜１０
０ｍｌ、必要であればカラムおよび／または磁石を支持
するスタンド１〜２００個、標識物質が酵素の場合はそ
の基質（０．１μＭ〜１０ｍＭ）１〜１００ｍｌ、標識
物質が発光物質の場合は過酸化水素（０．１〜３０
％）、水酸化ナトリウム（０．１Ｎ〜１０Ｎ）等を含ん
だ発光化剤１〜１００ｍｌ、緩衝液１〜５００ｍｌ等を
含む。
カラム（内径０．１〜１０ｍｍ、長さ５〜１００ｍｍ）
１〜１００個、該カラムに磁場をかけるための磁石（長
さ５〜１００ｍｍ）１〜２００個、磁性担体粒子結合抗
体または抗原１ｐｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ）１〜１００
ｍｌ、標識体（１ｐｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ）１〜１０
０ｍｌ、必要であればカラムおよび／または磁石を支持
するスタンド１〜２００個、標識物質が酵素の場合はそ
の基質（０．１μＭ〜１０ｍＭ）１〜１００ｍｌ、標識
物質が発光物質の場合は過酸化水素（０．１〜３０
％）、水酸化ナトリウム（０．１Ｎ〜１０Ｎ）等を含ん
だ発光化剤１〜１００ｍｌ、緩衝液１〜５００ｍｌ等を
含む。
【００２２】次に実施例を用いて本発明を説明する。
【００２３】
実施例１ 癌胎児性抗原（ＣＥＡ）の測定 （１）抗ＣＥＡ抗体の4-(2- サクシニミジルオキシカル
ボニルエチル）フェニル-10-メチルアクリジウム-9- カ
ルボン酸 フルオロ硫酸（アクリジニウム−Ｉ、以下Ａ
−Ｉと略記する）による標識化
ボニルエチル）フェニル-10-メチルアクリジウム-9- カ
ルボン酸 フルオロ硫酸（アクリジニウム−Ｉ、以下Ａ
−Ｉと略記する）による標識化
【００２４】発光物質であるＡ−Ｉ（同人化学社製）
を、イアンウイークスらの方法〔クリニカルケミストリ
ー（CLIN.CHEM.）29巻，8 号 ,1474-1479 頁，1983年〕
により抗ＣＥＡマウスモノクローナル抗体に結合させた
標識化抗ＣＥＡ抗体を次のように作成した。
を、イアンウイークスらの方法〔クリニカルケミストリ
ー（CLIN.CHEM.）29巻，8 号 ,1474-1479 頁，1983年〕
により抗ＣＥＡマウスモノクローナル抗体に結合させた
標識化抗ＣＥＡ抗体を次のように作成した。
【００２５】０．５ｍＭのＡ−Ｉのジメチルホルムアミ
ド溶液１０μｌに５０μｇの抗ＣＥＡマウスモノクロー
ナル抗体（宝酒造製）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）３００μｌを添加し、１０分間標識化反応し
たのち、１０g/l のリジン塩酸塩溶液１００μｌを加え
て反応を停止させた。 反応液をセファデックスＧ−５
０カラムクロマトグラフィー（８０×６ｍｍ、ファルマ
シア社）で精製し、未反応のＡ−Ｉを除去し、標識化抗
ＣＥＡ抗体を得た。
ド溶液１０μｌに５０μｇの抗ＣＥＡマウスモノクロー
ナル抗体（宝酒造製）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）３００μｌを添加し、１０分間標識化反応し
たのち、１０g/l のリジン塩酸塩溶液１００μｌを加え
て反応を停止させた。 反応液をセファデックスＧ−５
０カラムクロマトグラフィー（８０×６ｍｍ、ファルマ
シア社）で精製し、未反応のＡ−Ｉを除去し、標識化抗
ＣＥＡ抗体を得た。
【００２６】（２）抗ＣＥＡ抗体固定化磁性粒子の調製 磁性担体粒子としてダイナビーズ〔商標名〕 Ｍ２８０
（日本ダイナル社製）を使用した。該磁性担体粒子は活
性化された状態で販売されており、抗体と混合するだけ
で共有結合により次のように固定化できる。なお以下の
操作において、抗体は標識に使用した抗体とは反応性の
異なる抗ＣＥＡモノクローナル抗体（生化学工業製）を
使用した。
（日本ダイナル社製）を使用した。該磁性担体粒子は活
性化された状態で販売されており、抗体と混合するだけ
で共有結合により次のように固定化できる。なお以下の
操作において、抗体は標識に使用した抗体とは反応性の
異なる抗ＣＥＡモノクローナル抗体（生化学工業製）を
使用した。
【００２７】０．５Ｍ ホウ酸緩衝液（ｐＨ９．５）に
溶解した１５０μｇ／ｍｌの抗体溶液を３０ｍｇ／ｍｌ
の活性化磁性担体粒子に等量添加し１晩放置する。磁石
で粒子を集め、上清を吸引除去後、０．１％ＢＳＡおよ
び０．１％ＮａＮ3 を含むｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸
緩衝液（ＢＳＡ／ＰＢＳ）を５００μｌ加えた。得られ
た抗ＣＥＡ抗体固定化磁性担体粒子は使用時までこのま
ま保存した。
溶解した１５０μｇ／ｍｌの抗体溶液を３０ｍｇ／ｍｌ
の活性化磁性担体粒子に等量添加し１晩放置する。磁石
で粒子を集め、上清を吸引除去後、０．１％ＢＳＡおよ
び０．１％ＮａＮ3 を含むｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸
緩衝液（ＢＳＡ／ＰＢＳ）を５００μｌ加えた。得られ
た抗ＣＥＡ抗体固定化磁性担体粒子は使用時までこのま
ま保存した。
【００２８】（３）対照のマイクロチューブ法に用いる
磁性担体粒子キャピラリーカラムの作成 内径０．３ｍｍのポリプロピレンチューブをスタンドに
固定したＮＳ両極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立
てた。（２）で作成した磁性担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳ
で１００μｇ／ｍｌに希釈し、希釈した磁性担体粒子５
００μｌをゆっくりとチューブに流した。磁性担体粒子
が磁力で保持蓄積されカラム状となった。
磁性担体粒子キャピラリーカラムの作成 内径０．３ｍｍのポリプロピレンチューブをスタンドに
固定したＮＳ両極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立
てた。（２）で作成した磁性担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳ
で１００μｇ／ｍｌに希釈し、希釈した磁性担体粒子５
００μｌをゆっくりとチューブに流した。磁性担体粒子
が磁力で保持蓄積されカラム状となった。
【００２９】（４）セファデックスＧ２５の共存した磁
性担体粒子キャピラリーカラムの作成 カラムエンドとしてナイロンメッシュを固定した内径２
ｍｍのポリプロピレンチューブをスタンドに固定したＮ
Ｓ両極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立てた。前述
のＢＳＡ／ＰＢＳで膨潤させたセファデックスＧ２５を
充填した後、（２）で作成した抗ＣＥＡ抗体固定化磁性
担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳで１００μｇ／ｍｌに希釈
し、その５００μｌをゆっくりとチューブに流した。粒
子が磁力で保持され、カラム状となった。
性担体粒子キャピラリーカラムの作成 カラムエンドとしてナイロンメッシュを固定した内径２
ｍｍのポリプロピレンチューブをスタンドに固定したＮ
Ｓ両極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立てた。前述
のＢＳＡ／ＰＢＳで膨潤させたセファデックスＧ２５を
充填した後、（２）で作成した抗ＣＥＡ抗体固定化磁性
担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳで１００μｇ／ｍｌに希釈
し、その５００μｌをゆっくりとチューブに流した。粒
子が磁力で保持され、カラム状となった。
【００３０】（５）ＣＥＡの測定 （４）で調製したセファデックスＧ２５の共存した磁性
担体粒子キャピラリーカラム〔対照には、（３）で調製
した磁性担体粒子キャピラリーカラムを用いた〕に、２
５、５０、１００、２００、４００または８００ｎｇ／
ｍｌの標準ＣＥＡ（５０μｌ）を添加しゲル層に分散さ
せた。続いて（１）で調製した標識化抗ＣＥＡ抗体１０
０μｌを添加しゲル層に分散させた。更に０．０５％の
ｔｗｅｅｎ２０を含む洗浄液２００μｌを添加した。洗
浄終了後にカラムを磁石から離し、蒸留水１００μｌに
て磁性担体粒子を押し出し、発光分析用チューブに分取
した。磁性担体粒子に結合した標識化抗ＣＥＡ抗体の量
は、０．１Ｍ水酸化ナトリウムと０．３％過酸化水素を
含む水溶液を２００μｌ添加し標識物質を発光させた
後、発光光度計（バイオルマットＬＢ９５００Ｔ；ベル
トールド社製）で測定した。結果を第１表および図２に
示した。
担体粒子キャピラリーカラム〔対照には、（３）で調製
した磁性担体粒子キャピラリーカラムを用いた〕に、２
５、５０、１００、２００、４００または８００ｎｇ／
ｍｌの標準ＣＥＡ（５０μｌ）を添加しゲル層に分散さ
せた。続いて（１）で調製した標識化抗ＣＥＡ抗体１０
０μｌを添加しゲル層に分散させた。更に０．０５％の
ｔｗｅｅｎ２０を含む洗浄液２００μｌを添加した。洗
浄終了後にカラムを磁石から離し、蒸留水１００μｌに
て磁性担体粒子を押し出し、発光分析用チューブに分取
した。磁性担体粒子に結合した標識化抗ＣＥＡ抗体の量
は、０．１Ｍ水酸化ナトリウムと０．３％過酸化水素を
含む水溶液を２００μｌ添加し標識物質を発光させた
後、発光光度計（バイオルマットＬＢ９５００Ｔ；ベル
トールド社製）で測定した。結果を第１表および図２に
示した。
【００３１】
【表１】
【００３２】第１表によれば、対照のマイクロチューブ
法のＣＥＡ測定下限が２００ｎｇ／ｍｌであるのに対
し、本願発明方法は２５ｎｇ／ｍｌでも十分測定可能で
あった。また図２によれば、本願発明方法のほうがマイ
クロチューブ法より高いカウントで測定でき、測定しや
すかった。
法のＣＥＡ測定下限が２００ｎｇ／ｍｌであるのに対
し、本願発明方法は２５ｎｇ／ｍｌでも十分測定可能で
あった。また図２によれば、本願発明方法のほうがマイ
クロチューブ法より高いカウントで測定でき、測定しや
すかった。
【００３３】実施例２ ＡＦＰの測定 （１）ウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体の西洋ワサビパーオキシ
ダーゼ（ＨＲＰ）による標識化 ウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体のＨＲＰによる標識化は石川ら
の方法（酵素免疫測定法 医学書院刊）に従って次のよ
うに行った。まず、Ｎ−サクシニジル−４−（Ｎ−マレ
イミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート
を用いてＨＲＰにマレイミド基を導入した。一方、抗ヒ
トＡＦＰ抗体をペプシン消化して得られたＦ（ａｂ）’
2 画分を還元し、ＳＨ基を遊離させたＦ（ａｂ）’を調
製した。マレイミド化ＨＲＰおよびＦ（ａｂ）’を混合
し反応させ、ＨＲＰ標識化抗ＡＦＰ抗体を得た。
ダーゼ（ＨＲＰ）による標識化 ウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体のＨＲＰによる標識化は石川ら
の方法（酵素免疫測定法 医学書院刊）に従って次のよ
うに行った。まず、Ｎ−サクシニジル−４−（Ｎ−マレ
イミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート
を用いてＨＲＰにマレイミド基を導入した。一方、抗ヒ
トＡＦＰ抗体をペプシン消化して得られたＦ（ａｂ）’
2 画分を還元し、ＳＨ基を遊離させたＦ（ａｂ）’を調
製した。マレイミド化ＨＲＰおよびＦ（ａｂ）’を混合
し反応させ、ＨＲＰ標識化抗ＡＦＰ抗体を得た。
【００３４】（２）抗ＡＦＰ抗体固定化磁性粒子の調製 磁性担体粒子としてマグノシェア〔商標名〕（ステロゲ
ン バイオセパレーション社製）を使用して抗ＡＦＰ抗
体固定化磁性粒子の調製をおこなった。マグノシェアは
アルデヒド基を表面に持ち活性化された状態で販売され
ており、抗体のアミノ基と共有結合により固定化でき
る。０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した抗
体溶液を活性化ビーズに等量添加し、カップリング試薬
である水素化ほう素ナトリウムを終濃度０．１Ｍになる
ように添加し、２時間攪拌し反応させた。磁石で粒子を
集め、上清を吸引除去後、ＢＳＡ／ＰＢＳを５００μｌ
加えた。抗ＡＦＰ抗体固定化磁性担体粒子は、使用時ま
でこのまま保存した。
ン バイオセパレーション社製）を使用して抗ＡＦＰ抗
体固定化磁性粒子の調製をおこなった。マグノシェアは
アルデヒド基を表面に持ち活性化された状態で販売され
ており、抗体のアミノ基と共有結合により固定化でき
る。０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した抗
体溶液を活性化ビーズに等量添加し、カップリング試薬
である水素化ほう素ナトリウムを終濃度０．１Ｍになる
ように添加し、２時間攪拌し反応させた。磁石で粒子を
集め、上清を吸引除去後、ＢＳＡ／ＰＢＳを５００μｌ
加えた。抗ＡＦＰ抗体固定化磁性担体粒子は、使用時ま
でこのまま保存した。
【００３５】（３）セファデックスＧ２５の共存した磁
性担体粒子キャピラリーカラムの作成 カラム下端にナイロンメッシュを固定した内径２ｍｍの
ポリプロピレンチューブを、スタンドに固定したＮＳ両
極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立てた。ＢＳＡ／
ＰＢＳで膨潤させたセファデックスＧ２５を充填し、ゲ
ル層をカラム内で形成させた後、（２）で作成した磁性
担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳで１００μｇ／ｍｌに希釈
し、その５００μｌをゆっくりとチューブに流した。磁
性担体粒子が磁力で保持されチューブ内で蓄積し、カラ
ム状となった。
性担体粒子キャピラリーカラムの作成 カラム下端にナイロンメッシュを固定した内径２ｍｍの
ポリプロピレンチューブを、スタンドに固定したＮＳ両
極の２つの磁石の間に装着し、垂直に立てた。ＢＳＡ／
ＰＢＳで膨潤させたセファデックスＧ２５を充填し、ゲ
ル層をカラム内で形成させた後、（２）で作成した磁性
担体粒子をＢＳＡ／ＰＢＳで１００μｇ／ｍｌに希釈
し、その５００μｌをゆっくりとチューブに流した。磁
性担体粒子が磁力で保持されチューブ内で蓄積し、カラ
ム状となった。
【００３６】（４）対照の酵素免疫測定法に用いる、固
相プレートの作成 ウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体をＰＢＳで１０μｇ／ｍｌに希
釈した後、プレート中の各ウエルに１００μｌの量で分
注した。一晩放置した後、蒸留水を加え洗浄し、洗浄液
を吸引除去した後、ＢＳＡ／ＰＢＳを各ウエルに２００
μｌ分注し、使用時まで保存した。
相プレートの作成 ウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体をＰＢＳで１０μｇ／ｍｌに希
釈した後、プレート中の各ウエルに１００μｌの量で分
注した。一晩放置した後、蒸留水を加え洗浄し、洗浄液
を吸引除去した後、ＢＳＡ／ＰＢＳを各ウエルに２００
μｌ分注し、使用時まで保存した。
【００３７】（５）ＡＦＰの測定 （３）で調製したセファデックスＧ２５の共存した磁性
粒子キャピラリーカラムに３１、６３、１２５、２５
０、５００ｎｇ／ｍｌの標準ＡＦＰ（５０μｌ）を添加
しゲル層に吸着させた。ついでＨＲＰ標識ＡＦＰ抗体を
１００μｌ添加しゲル層に吸着させた。さらに０．０５
％のｔｗｅｅｎ２０を含む洗浄液２００μｌを添加し
た。洗浄終了後に磁石から該カラムを離し、蒸留水１０
０μｌにて磁性粒子を押し出し、呈色反応用チューブに
分取した。そのチューブにＨＲＰ呈色液であるｏ−フェ
ニレンジアミン（ＯＰＤ）溶液〔０．０２％過酸化水素
およびｏ−フェニレンジアミン・二塩酸塩（３ｍｇ／ｍ
ｌ）含有溶液〕を１００μｌ添加した。３７℃で３０分
反応後、０．１Ｎ硫酸５００μｌを加えて反応を停止さ
せ、分光光度計（２２８；日立製）の波長４１２ｎｍで
吸光度を測定した。以上全操作時間は５分であった。
粒子キャピラリーカラムに３１、６３、１２５、２５
０、５００ｎｇ／ｍｌの標準ＡＦＰ（５０μｌ）を添加
しゲル層に吸着させた。ついでＨＲＰ標識ＡＦＰ抗体を
１００μｌ添加しゲル層に吸着させた。さらに０．０５
％のｔｗｅｅｎ２０を含む洗浄液２００μｌを添加し
た。洗浄終了後に磁石から該カラムを離し、蒸留水１０
０μｌにて磁性粒子を押し出し、呈色反応用チューブに
分取した。そのチューブにＨＲＰ呈色液であるｏ−フェ
ニレンジアミン（ＯＰＤ）溶液〔０．０２％過酸化水素
およびｏ−フェニレンジアミン・二塩酸塩（３ｍｇ／ｍ
ｌ）含有溶液〕を１００μｌ添加した。３７℃で３０分
反応後、０．１Ｎ硫酸５００μｌを加えて反応を停止さ
せ、分光光度計（２２８；日立製）の波長４１２ｎｍで
吸光度を測定した。以上全操作時間は５分であった。
【００３８】対照としての酵素免疫測定法は次のように
行った。（４）で調製したプレートウェル中のＢＳＡ／
ＰＢＳを洗浄吸引し、標準抗原１００μｌを添加し、室
温で２時間反応させた。洗浄吸引後、ＨＲＰ標識ＡＦＰ
抗体を各ウエルに対して１００μｌ添加し、室温で２時
間反応させた。洗浄吸引後、前記のＯＰＤ溶液を１００
μｌ加えて、呈色反応を行った。３０分後、反応を停止
させ、プレートリーダー（ＭＰＰ２２；コロナ社製）で
４１２ｎｍの吸光度を測定した。以上全操作時間は４時
間であった。
行った。（４）で調製したプレートウェル中のＢＳＡ／
ＰＢＳを洗浄吸引し、標準抗原１００μｌを添加し、室
温で２時間反応させた。洗浄吸引後、ＨＲＰ標識ＡＦＰ
抗体を各ウエルに対して１００μｌ添加し、室温で２時
間反応させた。洗浄吸引後、前記のＯＰＤ溶液を１００
μｌ加えて、呈色反応を行った。３０分後、反応を停止
させ、プレートリーダー（ＭＰＰ２２；コロナ社製）で
４１２ｎｍの吸光度を測定した。以上全操作時間は４時
間であった。
【００３９】本願発明法および酵素免疫法によるＡＦＰ
の測定結果を、第２表に示した。
の測定結果を、第２表に示した。
【００４０】
【表２】
【００４１】第２表によれば、本願発明方法と対照の酵
素免疫方法共にＡＦＰ３１ｎｇ／ｍｌ〜５００ｎｇ／ｍ
ｌの領域で、ＡＦＰの濃度の増加と吸収の増加が比例し
た。
素免疫方法共にＡＦＰ３１ｎｇ／ｍｌ〜５００ｎｇ／ｍ
ｌの領域で、ＡＦＰの濃度の増加と吸収の増加が比例し
た。
【００４２】実施例３ 磁性粒子担体カラムを用いたＣＥＡ測定キット（５０回用） 磁性担体粒子担体カラム ５０個 磁石付きカラムスタンド １個 磁石なしカラムスタンド １個 検出用チューブ ５０個 抗ヒトＣＥＡ抗体固定化鉄微粒子（１００μｇ／ｍｌ） ２５ｍｌ アクリジニウムエステル標識化抗ヒトＣＥＡ抗体（１００ｎｇ／ｍｌ） ５ｍｌ ０．３％過酸化水素含有０．１Ｍ水酸化ナトリウム溶液 １０ｍｌ
【００４３】
【発明の効果】本発明により、従来の酵素免疫測定法よ
りも操作時間が短く、検出感度が同等の免疫測定法が提
供される。
りも操作時間が短く、検出感度が同等の免疫測定法が提
供される。
【図１】磁性担体粒子担体カラムの概略図
● 磁性担体粒子 ○ 非磁性担体 Ｎ 磁石のＮ極 Ｓ 磁石のＳ極
【図２】本発明方法および対照法によるＣＥＡの検量線
−■−本願発明法 −●−対照方法
Claims (3)
- 【請求項１】 試料中の抗原もしくは抗体（以下被検体
という）と、被検体に対応する磁性担体粒子に結合させ
た抗体もしくは抗原とを反応させ、結合した被検体の量
を定量する方法において、反応を非磁性で且つ反応に関
与する抗原および抗体とは結合しない担体を充填したカ
ラム内で行わせることを特徴とする方法。 - 【請求項２】 請求項１記載の被検体の量を定量する方
法において、非磁性で且つ反応に関与する抗原および抗
体とは結合しない担体（以下非磁性担体という）をカラ
ムに充填し、これを磁場に配置し、次いで被検体に対応
する磁性担体粒子に結合させた抗体もしくは抗原（以下
磁性担体粒子結合抗体または抗原という）をカラムに加
えて分散させ、次いで被検体を含有する試料を加えて抗
原抗体反応を行わせ、これに標識体を加え、未反応の標
識体を溶出し、磁場を解除した後、標識体が結合した被
検体結合磁性担体粒子結合抗体または抗原を溶出させ、
これを定量することを特徴とする方法。 - 【請求項３】 磁性担体粒子結合抗体または抗原、標識
体、非磁性担体および磁石からなる抗原または抗体の測
定用キット。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5555593A JPH06265550A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 磁性担体粒子を用いた免疫測定方法 |
| PCT/JP1994/000396 WO1994022012A1 (en) | 1993-03-16 | 1994-03-11 | Immunoassay using magnetic carrier particles |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5555593A JPH06265550A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 磁性担体粒子を用いた免疫測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06265550A true JPH06265550A (ja) | 1994-09-22 |
Family
ID=13001952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5555593A Pending JPH06265550A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 磁性担体粒子を用いた免疫測定方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06265550A (ja) |
| WO (1) | WO1994022012A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001027619A1 (fr) * | 1999-10-14 | 2001-04-19 | Central Research Institute Of Electric Power Industry | Methode de detection d'un agent chimique exogene de perturbation endocrine et appareil de detection |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02151767A (ja) * | 1988-12-05 | 1990-06-11 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | 磁性微粒子を免疫反応の標識に用いる検体調整法及び検体調整器具 |
| JPH01321363A (ja) * | 1988-06-24 | 1989-12-27 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | レーザ磁気免疫測定方法を実施するための検体調整方法 |
-
1993
- 1993-03-16 JP JP5555593A patent/JPH06265550A/ja active Pending
-
1994
- 1994-03-11 WO PCT/JP1994/000396 patent/WO1994022012A1/ja active Application Filing
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001027619A1 (fr) * | 1999-10-14 | 2001-04-19 | Central Research Institute Of Electric Power Industry | Methode de detection d'un agent chimique exogene de perturbation endocrine et appareil de detection |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1994022012A1 (en) | 1994-09-29 |
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