JPH06253874A

JPH06253874A - リン脂質の製造法

Info

Publication number: JPH06253874A
Application number: JP5066108A
Authority: JP
Inventors: Takashi Fujita; 孝藤田; Taisuke Iwasaki; 泰介岩崎; Hisashi Matsuda; 恒松田; Takayoshi Sato; 孝義佐藤
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1993-03-02
Filing date: 1993-03-02
Publication date: 1994-09-13

Abstract

(57)【要約】【目的】ユーグレナからホスファチジルイノシトール
含量の高いリン脂質を得る方法を提供する。【構成】ユーグレナを培養して細胞中にリン脂質を生
産、蓄積させた後、その細胞をエイジングすることによ
り、ホスファチジルイノシトール含量の高いリン脂質を
製造する。【効果】このようにして得られたホスファチジルイノ
シトール含量の高いリン脂質は、水産生物の飼料として
利用することが可能である。また、高純度のホスファチ
ジルイノシトールを分離、精製する際に、このホスファ
チジルイノシトール含量の高いリン脂質を用いることも
できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ホスファチジルイノシ
トール含量の高いリン脂質を製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）
は、広く動植物界に分布しているイノシトールリン脂質
のひとつであって、動物細胞中に含まれる量としては全
リン脂質の数パーセントに過ぎないが、植物の種子や酵
母などに含まれる量としては全リン脂質の２０〜３０％
を占めている。このＰＩは、生体内の情報伝達に関与す
る物質として知られている。また、ＰＩについては、制
癌作用の利用、リポソーム基剤としての利用、氷核活性
の利用及び水産生物用の飼料としての利用などについて
研究がなされている。

【０００３】このＰＩの調製法としては、全リン脂質に
占める割合が２０％というＰＩ含量の高いパン酵母を利
用し、自己融解によって全リン脂質の４０％を占めるホ
スファチジルコリン（ＰＣ）を分解、除去して、ＰＩ含
量の高いリン脂質を調製した後、有機溶媒で抽出し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーで分離、精製を行う
方法が知られている。また、大豆油抽出時に副産物とし
て得られるペーストをアセトンで洗浄し、油分を除去し
た大豆レシチンを用い、抽出、精製を行う方法〔食品産
業ハイセパレーション・システム技術研究組合編、「機
能性食品素材の高度分離・精製と開発＜ハイセパレーシ
ョン・システム＞」、４０５頁、１９９２年〕などが知
られている。しかし、ＰＩを大量に調製するに際して、
ＰＩ含量の僅かな動物細胞を用いることは、行われてい
ない。

【０００４】一方、ユーグレナは、単細胞の真核生物で
あって生物分類学上はミドリムシ植物門に分類される植
物であり、また、原生動物門に属する動物でもある特異
な生物である。このユーグレナは、淡水中に広く分布し
ており、多くは池や沼のような静水中に生息するが、海
水中や汚水中でも生育が可能である。そして、ユーグレ
ナは、比較栄養学の材料生物として有用であって、その
生理について多くの研究がなされている〔北岡正三郎
編、「ユーグレナ−生理と生化学」、学会出版センタ
ー、１９８９年発行〕。また、ユーグレナは、アラキド
ン酸やエイコサペンタエン酸などの高度不飽和脂肪酸、
あるいはビタミンＣ、Ｅ、β−カロチンなどのビタミン
類、さらには良質の蛋白質や多糖類などの有用物質を生
産することも知られている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ユーグ
レナを培養して種々の有用物質を生産させるための条件
についての研究の過程で、ユーグレナを培養して細胞中
にリン脂質を生産、蓄積させた後、その細胞をエイジン
グすることにより、ＰＩ含量の高いリン脂質を得ること
ができることを見出し、本発明を成すに至った。したが
って、本発明は、ユーグレナからＰＩ含量の高いリン脂
質を製造する方法を提供することを課題とする。なお、
ユーグレナのリン脂質を構成する主要な成分として、Ｐ
Ｃ、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）及びホス
ファチジルセリン（ＰＳ）が知られているが〔北岡正三
郎編、「ユーグレナ−生理と生化学」、学会出版センタ
ー、１９８９年発行〕、ユーグレナからＰＩ含量の高い
リン脂質を製造する方法については知られていない。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明では、ユーグレナ
を培養して細胞中にリン脂質を生産、蓄積させた後、そ
の細胞をエイジングすることにより、リン脂質に占める
ＰＩ含量を高めるものである。

【０００７】本発明では、ユーグレナ属に属する全ての
種について使用可能であるが、代表的なユーグレナとし
て、Ｅｕｇｌｅｎａｇｒａｃｉｌｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎ
ａｇｒａｃｉｌｉｓｖａｒ．ｂａｃｉｌｌａｒｉｓ、
Ｅｕｇｌｅｎａｖｉｒｉｄｉｓなどが挙げることがで
き、これらの変異種も利用することができる。これらの
ユーグレナの培養に用いることのできる培地は、特に限
定されるものではなく、通常ユーグレナの培養に用いる
ものであれば何れでも良い。文献上既知の培地を含め、
炭素源、窒素源、無機化合物及びビタミン類など、如何
なる組合せの培地であっても良い。例えば、ハトナー培
地〔ジャーナル・オブ・プロトズーオロジー、第６巻、
２３頁、１９５９年〕、コレン−ハトナー培地〔ジャー
ナル・オブ・プロトズーオロジー、第１４巻、１７頁、
１９６７年〕など公知の培地を用いることもできる。な
お、ハトナー培地には、培地１リットル当たり、リンゴ
酸２ｇ、グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二水素カ
リウム０．４ｇ、リン酸水素二アンモニウム０．２ｇ、
硫酸マグネシウム０．５ｇ、炭酸カルシウム０．２ｇ、
硫酸亜鉛２２ｍｇ、硫酸マンガン５．８ｍｇ、硫酸第一
鉄アンモニウム５．７ｍｇ、モリブデン酸アンモニウム
１．５ｍｇ、硫酸銅１．６ｍｇ、硫酸コバルト１．９ｍ
ｇ、ホウ酸１１．４ｍｇ、ＥＤＴＡ・２Ｎａ５０ｍｇ
及びビタミンＢ₁ ２．５ｍｇ、ビタミンＢ₁₂０．０２ｍ
ｇが含まれており、ｐＨは３．３である。

【０００８】本発明では、ユーグレナの培養開始時、培
地に炭素源及び窒素源としてグルコース、グルタミン酸
及びリン酸水素二アンモニウムを添加して培養を開始す
ると良い。この時の培地のｐＨは２．５〜８．０、好ま
しくは３．０〜４．５、培養温度は１０〜３５℃、好ま
しくは２５〜３２℃、光照射下あるいは暗黒下培養のど
ちらでも良い。培養は２〜１０日間、好ましくは３〜７
日間行う。なお、ユーグレナの細胞を大量に得るには、
先に本発明者らが提案している培養装置〔特開平３−９
８５７４号公報〕を用いることが望ましく、また、ユー
グレナの細胞中にリン脂質をより多く生産、蓄積させる
には、同じく本発明者らが提案している流加培養法〔特
願平４−３１０９８１号〕を用いることが望ましい。

【０００９】次に、このユーグレナ細胞を４〜５０℃，
好ましくは１５〜４０℃で１時間〜１４日間、好ましく
は１２時間〜１０日間エイジング処理する。ここで言う
エイジング処理とは、培養装置中などでユーグレナ細胞
を光照射下あるいは暗黒下に静置させておくことであっ
て、培養中の攪拌されている条件とは異なる状態にあ
る。このエイジング処理により、培養直後にはリン脂質
に占める割合の高かったＰＣが顕著に減少し、ＰＩ含量
の高いリン脂質を得ることができる。

【００１０】このような処理を行って得たユーグレナ細
胞については、遠心分離などの処理を行って回収し、以
下の方法によってリン脂質画分を抽出することができ
る。すなわち、有機溶媒を用いてユーグレナ細胞から脂
質を抽出する。この抽出に使用することのできる溶媒と
しては、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、
アセトン、メタノール、エタノールなどの通常の脂質抽
出に用いられているものであれば良く、これらの溶媒を
単一あるいは適当な比率で混合して用いる。抽出方法
は、浸漬、振とうあるいは攪拌など通常の抽出方法で十
分である。次に、抽出液からの溶媒の留去は、減圧下、
含有成分が分解しない程度の温度で行う。最後に、総脂
質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの適当な
方法により分画し、リン脂質画分を回収する。次に、実
施例を示して本発明を詳細に説明する。

【００１１】

【実施例１】容量２リットルの発酵槽にグルコース１８
ｇ／ｌ、グルタミン酸３ｇ／ｌ、リン酸水素二アンモニ
ウム２．５ｇ／ｌを含む改変ハトナー培地１．３ｌを充
填して滅菌し、同培地で前培養したユーグレナ・グラシ
リス（Ｅｕｇｌｅｎａｇｒａｃｉｌｉｓ）ＳＭ−Ｚ
Ｋを５％接種した。培養は、２５℃で特殊な攪拌羽根
〔特開平３−９８５７４号公報〕を用いて６０ｒｐｍの
速度で攪拌しながら７日間行った。通気速度は、培養０
〜３日が０．３２ｌ／分、３〜５日が１．３ｌ／分、５
〜７日が１．９５ｌ／分とし、培養３日目と５日目にグ
ルコース１３ｇ／ｌ、グルタミン酸３ｇ／ｌ及びリン酸
水素二アンモニウム１．５ｇ／ｌをそれぞれ添加する流
加培養法〔特願平４−３１０９８１号〕を用いた。培養
終了後、このユーグレナ細胞を培養装置中で２５℃、７
日間静置することによってエイジング処理を行い、ユー
グレナ細胞中のリン脂質に占めるＰＩ含量を高めた。こ
のエイジング処理の後、３，０００ｒｐｍで１５分間の
遠心分離を行ってユーグレナ細胞を回収し、凍結乾燥を
行って乾燥ユーグレナ細胞３９ｇを得た。

【００１２】この乾燥ユーグレナ細胞について、そのリ
ン脂質成分の分析を行った。ユーグレナ細胞中に含まれ
る総脂質は、クロロホルム／メタノール（２／１）の溶
媒で１０回振とう抽出した後、３５℃で減圧下に溶媒を
留去して回収した。次に、この総脂質をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーによって分画した。すなわち、１
０％ジエチルエーテルを含むｎ−ヘキサン溶液でワック
スエステルを、２０％ジエチルエーテルを含むｎ−ヘキ
サン溶液でトリグリセリドを、１％メタノールを含むク
ロロホルム溶液で遊離脂肪酸を、１０％メタノールを含
むクロロホルム溶液で少量のリン脂質を含むその他の画
分をそれぞれ溶出した後、１００％メタノールでリン脂
質画分を溶出して回収した。そして、このリン脂質画分
を薄層クロマトグラフィー〔吸着剤：ＨＰＴＬＣプレー
ト、シリカゲル（メルク社製）、展開溶媒：クロロホル
ム／ｎ−プロパノール／酢酸エチル／メタノール／０．
２５％塩化カリウム水溶液（２３／２５／２５／１５／
９）〕に供し、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬陽性
のスポットを二波長クロマトスキャナ（（株）島津製作
所製）で定量した。各リン脂質については、標品と同様
のＲｆ値を有するものをそれぞれのリン脂質と同定し、
その他のスポットについては、未同定のリン脂質として
定量した。なお、同様に培養してエイジング処理を行わ
なかった乾燥ユーグレナ細胞についても、同様の処理を
行い、リン脂質成分の分析を行った。その結果を表１に
示す。

【００１３】

【表１】

【００１４】このように、ユーグレナ細胞を２５℃で７
日間エイジングすることにより、ユーグレナ細胞に含ま
れるリン脂質のＰＩ含量を高めることができた。

【００１５】

【発明の効果】本発明により、ＰＩ含量の高いユーグレ
ナリン脂質を得ることができる。このようにして得られ
たＰＩ含量の高いリン脂質は、水産生物の飼料として用
いることが可能であり、また、高純度のＰＩを分離、精
製する際の出発原料として有用である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ユーグレナ属に属する生物を培養して細
胞中にリン脂質を生産、蓄積させた後、その細胞をエイ
ジングすることを特徴とするホスファチジルイノシトー
ル含量の高いリン脂質の製造法。
【請求項２】エイジングを１５〜４０℃で１〜１０日
間行うものである請求項１記載のホスファチジルイノシ
トール含量の高いリン脂質の製造法。