CN102037130A - 使用网粘菌目微生物来生产含有pufa的油的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及通过来自网粘菌门(phylum Labyrinthulomycota)微生物的细胞发酵获得含有多不饱和脂肪酸(PUFA)并且具有改变的脂肪酸组成的油的方法,该方法的特征在于将络合剂加入到发酵培养基中。
Description
背景技术
不同的多不饱和脂肪酸(PUFA),特别是ω-3脂肪酸(n3脂肪酸)是人类膳食的基本成分。
但是,公知的是在大部分工业国家中,n3脂肪酸的摄入是不足的。另一方面,膳食中的总脂肪含量以及饱和脂肪酸和n6脂肪酸的摄入过高。这归因于我们膳食组成的变化,其主要发生在最近大约150年,并且其与不同的慢性文明病的发生相关,例如诸如心血管病,这是工业国中主要的死亡原因(Simopoulos,A.P.,1999,Am.J.Clin.Nutr.70,560-569)。其后,大量的研究表明心血管疾病的危险可以通过有计划的增加n3脂肪酸,特别是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的摄入而显著降低(Dietary supplementation with n-3 polyunsaturated acids and vitamin E after myocardial infarction:results of GISSI-prevenzione trial.,Lancet 354,447-455;Burr等人,1989,Effects of changes in fat,fish and fire intake on death and myocardial reinfarction:diet and reinfarction trial(DART),Lancet 2,757-761)。因此,许多不同的组织(WHO,FAO,AHA;ISSFAL,British Nutrition Foundation及其他许多组织)推荐显著增加n3脂肪酸的摄入(Kris-Eherton等人,Fish Consumption,Fish Oil,Omega-3 Fatty Acids,and Cardiovascular Disease。Circulation2002,2747-2757)。
获得PUFA和特别是n3脂肪酸的来源主要是海洋冷水鱼和获自它们的油,但是在近些年,将海洋微生物作为市售PUFA源也成为可能。它们具有这样的优点,即,它们能够用于在发酵桶中,在廉价和受控的条件下生产PUFA。在发酵生产中,没有混入杂质(重金属,二氧杂芑,PCB)的风险,例如经常有描述可从鱼或者鱼油中获得的这些杂质(Olsen SF.Int J Epidemiol.2001:1279-80)。此外,通过选择有机体能够生产所规定组成的油。另外,发酵生产不受季节性波动的影响,而季节性波动是鱼和鱼产品所遇到的(Gamez-Meza等人Lipids 1999:639-42)。此外,它是一种环境友好的生产方法,因此首先是保护了天然资源(关键词:过度捕捞),其次是在发酵中使用了可再生的原材料。
已经发现适于获得PUFA的微生物是例如处于弧菌属的细菌中(例如海产微螺菌)或者处于腰鞭毛虫(甲藻类)中,特别是Crypthecodinium属,例如隐甲藻或者处于stramenopiles中,例如Pinguiophyceae例如诸如Glossomastix,Phaeomonas,Pinguiochrysis,Pinguiococcus和Polydochrysis。优选的用于发酵生产PUFA的微生物属于stramenopiles(或者labyrinthulo-mycota),特别是破囊壶菌目(Thraustochytriidea),还特别是Japonochytrium,Schizo-chytrium,破囊壶菌属,Althornia,Labyrinth-uloides,Aplanochytrium和吾肯氏壶菌(Ulkenia)属。
已知的是一些所述的微生物能够用于工业生产脂肪酸,并且已经公开了相应的方法。因此国际专利申请WO91/07498A1公开了用裂殖壶菌和破囊壶菌属的微生物来生产PUFA。WO91/11918A1公开了用隐甲藻来生产PUFA,WO96/33263A1和相应的欧洲专利申请EP0823475A1描述了用裂殖壶菌属微生物来生产PUFA,而专利申请WO98/03671公开了用吾肯氏壶菌属微生物来生产PUFA。
虽然PUFA油的发酵获得具有高品质和其他前述的优点,但是比单纯的鱼油高的生产成本仍然是一个问题。为了提高成本效率,已经进行了一定范围的尝试来提高PUFA油发酵生产率。这些主要是尝试提高生物量生产,通常是通过在发酵过程中供给营养物和/或延长发酵时间来实现的。但是,二者同时也都提高了成本(原材料成本和/或生产运行时间)。还公开了通过加入发酵添加剂来提高产率的尝试。例如US000006410282B1(WO002001073099A1)描述了将PVP(聚乙烯吡咯烷酮)加入到培养基中来提高产率(DHA生物量或者EPA/生物量)。
发明内容
因此,由于现有技术的状况,本发明的目标是提供一种方法,用于有计划的改变脂肪酸组成,同时提高发酵PUFA生产的产率。该目标是通过提高期望的脂肪酸(PUFA,例如DHA,DPA)的浓度和降低不期望的脂肪酸(例如饱和脂肪酸例如棕榈酸)的浓度,来对所述的油进行质量改进。除此之外,生物量中的产物浓度和整体产率(时空产率)也应当提高。
这些问题,和其他没有明确提到,但是能够从此处所引入讨论的内容中容易的得出或者推出的问题,是通过本发明的权利要求中所述的主题来解决的。
权利要求1所述的方法提供了一种培养网粘菌门微生物的有利的方法。该方法包括在合适的发酵培养基中培养,该培养基加入了明确的络合剂,优选的加入浓度是高到0.5mM,并且如果需要,随后将PUFA与微生物和/或培养培养基分离。
本发明进一步包括一种生产高纯PUFA的方法。本发明优选的PUFA是DHA、DPA和EPA。
具体的,前述方法导致了生物量中DHA浓度增加了大于5%,优选大于10%,和非常特别优选大于15%。
具体的,前述方法导致了DHA产率(g/L)的增加大于5%,优选大于10%,和非常特别优选大于15%。
具体的,前述方法导致了所述油中DHA浓度的增加大于2%,优选大于3%和非常特别优选大于4%。
具体的,前述方法导致了所述油中棕榈酸(PA)浓度的降低大于2%,优选大于3%和非常特别优选大于4%。
由此,DHA与PA比值的增加大于4%,优选大于6%和非常特别优选大于8%。
总之,前述方法使得能够在一个步骤中同时提高数量(生产率)和油的品质(提高DHA浓度,降低PA(饱和脂肪酸)浓度)。
完全令人惊讶的是这样的可能性,即,通过加入少量明确的络合剂,对脂肪酸组成以及同时对生物量中目标产物的浓度和发酵的整体产率产生了如此明显的有利影响。
通过在培养之后,将PUFA从微生物(生物量)和/或水性培养物中分离出来,能够获得高产率和高纯度的PUFA。
此外,本发明还包含一种生产生物量的方法,其中该生物量是通过使用本发明的培养方法来获得的。
该生物量可以以任何可能的方式来使用。具体的,该生物量,例如处于干态(干生物量)中时,能够直接作为食品或者饲料使用。
此外,本发明还包含一种油,其是通过进行本发明的培养方法来获得的,并且将该油与微生物和/或水性培养物进行分离。
具体的,这是这样的一种油,其能够有利的用于人的营养,以及许多其他优选的使用目的。
根据本发明,“油”被理解为表示至少70%含量的中性脂质和至少2%的磷脂,其对应于本领域技术人员已知的破囊壶菌的正常脂肪酸光谱。这里该中性脂质优选的组成为至少80%的甘油三酸酯和其他化合物例如诸如双酰基甘油酯,固醇等等。此外,甘油三酸酯优选的重量含量组成为大约95%脂肪酸和5%甘油。
根据本发明,PUFA是不饱和的长链脂肪酸,链长为>C12,并且具有至少两个双键。通过本发明的方法生产的PUFA具体是n3脂肪酸和n6脂肪酸。
在本发明的含义中,n3脂肪酸(ω-3脂肪酸,ω3脂肪酸)被理解为是多不饱和长链脂肪酸,链长>C12,并且具有至少两个或多个双键,其中第一个双键是在从烷基端基开始的碳原子C3和C4之间建立的。相应的在n6脂肪酸中,第一个双键位于在从烷基端基开始的碳原子C6和C7之间。
对于通过本发明的方法来生产PUFA而言,可以考虑网粘菌门微生物。破囊壶菌目微生物(Thrausto-chytriidea)是优选的(Lewis,T.E.,Nichols,P.D.,McMeekin,T.A.,The Biotechnological Potential of Thraustochytrids,Marine Biotechnology,1999,第580-587页和Porter,D.Phylum Labyrinthulomycota in Handbook of protoctista;编辑:Margulis,L.,Corliss,J.O.,Melkonian,M.和Chapman,D.J.,Jones and Bartlett Publishers,ISBN0-86720-052-9,1990,第388-398页)。特别优选的是Japonochytrium,裂殖壶菌属,Thrausto-chytrium,Althornia,Labyrinthuloides,Aplanochytrium和吾肯氏壶菌属的微生物。在它们中非常特别优选的是裂殖壶菌,破囊壶菌和吾肯氏壶菌。特别优选的是Japonochytrium ATCC28207,金黄色破囊壶菌(Thraustochytrium aureum)(特别是ATCC28211或者ATCC34304),粉红色破囊壶菌(Thraustochytrium roseum)ATCC28210,Thrausto-chytrium ATCC20890,ATCC20891,ATCC20892和ATCC26185,聚合裂殖壶菌(Schizochytrium aggregatum)ATCC28209,裂殖壶菌ATCC20888和ATCC20889,Schizo-chytrium SR21和吾肯氏壶菌SAM2179和SAM2180。
适于本发明方法的微生物都是野生型形式的以及由其衍生的突变异种和菌株以及相关有机体的重组体菌株。本发明包含了显著量的突变异种或者重组体菌株,来提高PUFA的生产。
在本发明中,微生物是通过用这些有机体的预培养物接种液体或者固体培养基来进行培养的。
对于网粘菌门微生物来说,合适的培养技术是本领域技术人员公知的。典型的,但是非排他的,该培养是依靠在合适的容器中的水性发酵来进行的。用于这样的发酵的典型的容器的例子包含振荡烧瓶或者生物反应器,例如诸如STR(搅拌的槽式反应器)或者气泡柱。培养典型的是在下面的温度进行的:10℃-40℃,优选20℃-35℃,特别优选25℃-30℃,非常特别优选27℃-29℃和特别是在28±0.5℃的温度。
全部有机体的生长和发育受到矿物、维生素和微量元素以及生长所必需的实际营养物的影响。在宏量元素(其是大量需要的)和微量元素(其仅仅是少量需要的)之间也是有区别的。宏量元素不足会非常快的变明显,而微量元素的不足通常仅仅在更长的时间后变得明显。长期的不足导致了缺乏现象。
最低定律(以Liebig命名)适用:生长取决于以最小量存在的因素。
在使用不同盐的试验中,能够观察到能够通过具体的使用Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和K-EDTA,来有计划的改变产生PUFA的微生物的生长和脂肪酸组成。
在浓度高到0.5mM的适当的EDTA化合物时,能够实现有利的变化。在这里发现Fe-Na-EDTA、Na-EDTA和K-EDTA是有利的。因此Fe-Na-EDTA、Na-EDTA和K-EDTA被称作本发明的EDTA化合物。
在本发明一种优选的实施方式中,将高到0.5mM,优选0.05-0.5mM和特别优选0.1-0.4mM的本发明的EDTA化合物加入到培养基中。非常特别优选的是本发明的EDTA化合物的含量0.2±0.1mM。
该培养基优选进一步包含一种或多种碳源和一种或多种氮源。能够用作培养网粘菌门微生物的碳源物质是本领域技术人员公知的。
能够用于本发明的碳源的例子是碳水化合物例如葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麦芽糖、可溶淀粉、岩藻糖、葡糖胺、葡聚糖、谷氨酸、糖蜜、甘油或者甘露醇或者脂肪和油或者植物水解产物。玉米浆和麦芽膏也包括在其中。
能够用于本发明的天然氮源的例子是蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、蛋白质水解产物或者大豆,能够使用的有机氮源的例子是谷氨酸盐和尿素,但是无机氮源例如诸如醋酸铵、碳酸氢铵、硫酸铵或者硝酸铵也可以用作氮源。
该培养基可以包含全部另外的对本领域技术人员来说在培养网粘菌门微生物中有用的成分,特别是例如Ca、Mg、Na、K、Fe、Ni、Co、Cu、Mn、Mo或者Zn的无机盐。作为举例,可以提到的是磷酸盐例如磷酸二氢钾或者氯化物例如氯化镁和硫酸盐例如硫酸铵、硫酸镁、硫酸铁或者硫酸钠。另外可用的无机盐的例子是卤化物例如溴化钾或者碘化钾以及其他碳酸盐例如诸如碳酸氢钠。
如果需要,该培养基可以包含另外的宏量-或者微量营养物例如氨基酸、嘌呤、嘧啶、玉米浆、蛋白质水解产物、维生素(水可溶的和/或水不溶的)和其他本领域技术人员公知的培养基成分。消泡剂在需要时候可以加入。该培养基可以包含复杂成分或者是化学成分明确的。
单个成分的量可以变化,只要对微生物的生长或者生产率没有不利的影响就行。本领域技术人员能够容易的确定在具体的情况中对应于微生物所需的组成。通常,碳源的加入浓度高到300g/l,氮源的加入浓度高到1-30g/l。氮含量优选是作为培养基中的碳含量的函数。
特别优选的培养基包含葡萄糖、酵母提取物、玉米浆[CSL]、氯化镁、碳酸钙、氯化钙、硫酸钠和磷酸钾和所述的铁或者EDTA化合物。
在发酵开始前,加入合适的酸或者碱溶液来将该培养基的pH调整为3-10,优选4-8,特别优选5-7和非常特别优选大约6。
接下来,对该培养基进行灭菌。用于对培养基灭菌的技术是本领域技术人员公知的,并且作为举例,可以提到的是高压锅灭菌和消毒过滤。
培养可以通过批次的,补料分批的或者连续模式来进行,如本领域技术人员通常已知的那样。
批次的或者补料分批的培养通常进行1-12天,优选2-10天,特别优选是3-9天。
培养基成分可以单独的或者混合的加入到该培养基中,并且还可以是预制的混合物。所述成分,特别是碳和氮源或者所述的添加剂可以在培养之前或者之中加入。该加入可以是一次、重复几次或者甚至连续进行。
所生产的PUFA通常是以中性脂肪的形式存在的,例如作为三酰基甘油酯或者极性脂质例如诸如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺或者磷脂酰环己六醇的形式存在。
含有PUFA的油可以在发酵之后,通过挤压,通过使用溶剂例如己烷、丙酮、乙醇等或者通过细胞破碎和分离来获得。因此获得的油可以进行另外的典型的加工步骤例如漂白、中和、脱矿泥、除臭等等(精炼)。但是,该富含PUFA的生物量也可以直接使用,例如用于动物营养物。
在本发明中,术语PUFA,n3-脂肪酸或者n-3活性物质应当理解为表示全部可能的化学形式,在其中可以存在相应的脂肪酸,即,作为游离脂肪酸、酯、甘油三酸酯、卵磷脂以及作为其他衍生物二者。全部这些物质在下面一起提出,并且该术语是同义使用的。在从培养基中分离之前或者之后,该PUFA随后可以通过化学或者生物催化酯交换例如依靠合适的酶(脂肪酶)进行转化和浓缩。
PUFA与发酵的微生物或者培养基的分离和脂肪酸光谱的分析是通过本领域技术人员已知的和惯常的方法来进行(AOCS方法Ce1-62(American Oil Chemists’Society);Wanasundara,U.N.,Wanasundara,J.,Shahidi,F.,Omega-3 fatty acid concentrates:a review of production technologies,Seafoods-quality,technology and nutraceutical applications,2002,第157-174页;Kang和Wang,A simplifiedmethod for analysis of polyunsaturated fatty acid,BMC Biochemistry 2005,6:5 doi:10.1186/1471-2091-6-5)。
具体实施方式
本发明的用于有计划的改变脂肪酸组成或者提高产率的方法在下面依靠一些实施例进行描述。但是,发酵培养基和本发明不限于这些实施例。
实施例1
吾肯氏壶菌菌株SAM2179的发酵,用于通过加入不同量的Fe-Na-EDTA来生产PUFA
吾肯氏壶菌菌株SAM2179是在50mL的培养基中,在具有挡板的300ml锥形烧瓶中培养的。
培养基组成:
将不同量的(0-2ml/50ml)的Fe-Na-EDTA溶液(3g/L;8.2mM)加入到该培养基中。
用NaOH将pH调整为6.0,然后高压灭菌该培养基。
培养条件:
温度(℃):28
振荡速率(rpm):150
在培养96h后,通过离心分离来收集细胞。接着,冻干该细胞,并测定该干生物量。细胞的破碎和脂肪酸的确定是在60℃的10%甲醇盐酸中,通过热处理2小时(同时搅拌)来进行的。然后在气相色谱中分析该酯,来确定脂肪酸的组成(AOCS方法Ce1-62(American Oil Chemists’Society;www.aocs.org))。
表1(JV39):作为Fe-Na-EDTA浓度的函数的生产率(在每种情况中平均值来自于3个烧瓶)
DBM:干燥生物量;DHA面积(%):脂肪酸光谱中的DHA含量;DPA面积(%):在脂肪酸光谱中的DPA含量;PA面积(%):在脂肪酸光谱中的棕榈酸含量;DHA/DBM:每单位重量DBM的DHA(二十二碳六烯酸)wt%;DHA[mg/L]=在每升发酵培养物中的DHA产量(mg);DHA/PA和DHA/DPA=脂肪酸的比例。
在吾肯氏壶菌SAM2179中,将Fe-Na-EDTA加入到发酵培养基中导致脂肪酸组成发生变化、生物量中DHA含量增加和整体产率的增加。使用0.262mM的Fe-Na-EDTA时,脂肪酸组成的变化对于DHA来说是+4.3%,对于PA来说是-3.4%。DHA/PA的比例增加了10.4%。同时,生物量中的DHA含量增加了20.9%。虽然在生物量中下降,但是这导致了整体到达12.9%的更高的DHA产率(g/L)。因此能够实现油品质的提高(脂肪酸光谱)以及数量提高二者(表1和图1)。
实施例2
吾肯氏壶菌菌株SAM2179的发酵,用于通过加入不同量的Na-EDTA来生产PUFA
培养如实施例1所述,加入Na-EDTA来进行。
在发酵培养基中加入Na-EDTA产生了类似于使用Fe-Na-EDTA的脂肪酸组成,DHA含量/干燥生物量和整体产率的类似变化。使用0.262mM的Na-EDTA时,脂肪酸组成的变化对于DHA来说是+3.8%,对于PA来说是-2.3%。DHA/PA的比例增加了6.3%。同时,生物量中的DHA含量增加了20.1%。虽然在生物量中下降,但是这导致了整体到达17.9%的更高的DHA产率(g/L)。因此能够实现油品质的提高(脂肪酸光谱)以及数量提高二者(表2和图2)。
表2(JV40):作为Na-EDTA浓度的函数的生产率(在每种情况中平均值来自于3个烧瓶)
DBM:干燥生物量;DHA面积(%):脂肪酸光谱中的DHA含量;DPA面积(%):在脂肪酸光谱中的DPA含量;PA面积(%):在脂肪酸光谱中的棕榈酸含量;DHA/DBM:每单位重量DBM的DHA(二十二碳六烯酸)wt%;DHA[mg/L]=在每升发酵培养物中的DHA产量(mg);DHA/PA和DHA/DPA=脂肪酸的比例。
实施例3
吾肯氏壶菌菌株SAM2179的发酵,用于通过加入K-EDTA来生产PUFA
培养如实施例1-2所述,加入K-EDTA来进行。
在发酵培养基中加入K-EDTA产生了类似于使用Fe-Na-EDTA、Na-EDTA和硫酸Fe-III的脂肪酸组成,DHA含量/干燥生物量和整体产率的类似变化。使用0.262mM的K-EDTA时,脂肪酸组成的变化对于DHA来说是+1.6%,对于PA来说是-3.95%。DHA/PA的比例增加了5.8%。同时,生物量中的DHA含量增加了11.5%。虽然在生物量中下降,但是这导致了整体到达11%的更高的DHA产率(g/L)。如前面的试验那样,能够实现油品质的提高(脂肪酸光谱)以及数量提高二者(表3和图3)。
表3(JV55):作为K-EDTA浓度的函数的生产率(在每种情况中平均值来自于3个烧瓶)
DBM:干燥生物量;DHA面积(%):脂肪酸光谱中的DHA含量;DPA面积(%):在脂肪酸光谱中的DPA含量;PA面积(%):在脂肪酸光谱中的棕榈酸含量;DHA/DBM:每单位重量DBM的DHA(二十二碳六烯酸)wt%;DHA[mg/L]=在每升发酵培养物中的DHA产量(mg);DHA/PA和DHA/DPA=脂肪酸的比例。
实施例4
裂殖壶菌SR21的发酵,用于通过加入不同量的Fe-Na-EDTA和Na-EDTA来生产PUFA
本发明所述的方法还导致了用网粘菌的其他有机体来生产PUFA的优化。因此例如微生物裂殖壶菌菌株SR21可以在本发明的培养基上发酵。
培养如实施例1-3所述,加入相应的Fe和EDTA化合物来进行。
使用裂殖壶菌SR21,在发酵培养基中加入所述的EDTA化合物导致了与使用吾肯氏壶菌在脂肪酸组成,DHA含量/干燥生物量和整体产率方面类似的变化。但是,该效果稍有降低。脂肪酸光谱中的变化对于DHA来说是2.3-3.4%,对于PA来说是-1.2到-2.5%。DHA/PA比例升高了2.7-5.6%。同时,生物量中的DHA含量增加了8-12.2%,DHA产率(g/L)增加了9.7-10.6%。因此使用裂殖壶菌SR21同样也能够实现油品质的提高(脂肪酸光谱)以及数量提高二者(图5)。该实施例显示了使用其他的网粘菌成员,作为本发明基础的加入EDTA化合物的方法也产生了发酵结果的提高。
全部前述的实施例显示了相同的趋势:脂肪酸光谱向更多的DHA和更少的PA的偏移,和DHA产率/(生物量和发酵体积)的提高。脂肪酸光谱的偏移使得所生产的油对于健康来说更有价值,因为摄入相同体积的油时,能够获得更多健康的DHA和更少不健康的PA。同样对于产业应用来说,例如对于功能性食品来说,DHA含量的增加是有利的,因为对于同样的作用来说,必须加入整体较少的油。提高的整体产率(每单位发酵体积)和提高的DHA浓度/生物量在生产中产生了经济上的优势。
但是,脂肪酸光谱的偏移还能够产生更洁净的油(并且没有混浊,这归因于过多的甘油棕榈酸酯),并且无需对甘油棕榈酸酯成分另外的分离,例如通过冷滤进行分离。
Claims (23)
1.一种由网粘菌门微生物的细胞发酵生产含有具有改变的脂肪酸组成的多不饱和脂肪酸(PUFA)的油的方法,特征在于将络合剂加入到发酵培养基中。
2.权利要求1所述的方法,特征在于该络合剂是具有一种或多种无机抗衡离子的EDTA化合物。
3.权利要求2所述的方法,特征在于该EDTA化合物选自Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和K-EDTA。
4.权利要求1-3中至少一个所述的方法,特征在于Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和/或K-EDTA的加入浓度最多是0.5mM。
5.权利要求1-4中至少一个所述的方法,特征在于Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和/或K-EDTA的加入浓度是0.1-1mM,优选0.1-0.4mM和特别优选0.2±1mM。
6.权利要求1-5中至少一个所述的方法,特征在于该方法包含下面的步骤:
a).在水性发酵培养基中培养网粘菌门微生物的细胞;
b).任选地将步骤a)的细胞与该水性发酵培养基分离,来获得生物量;和
c).破碎步骤b)的细胞或者任选地直接破碎步骤a)的细胞;
d).和分离含有PUFA的油。
7.权利要求1-6中至少一个所述的方法,特征在于该发酵是在10℃-40℃的温度进行的。
8.权利要求1-7中至少一个所述的方法,特征在于该PUFA是二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)和/或二十碳五烯酸(EPA)。
9.权利要求1-8中至少一个所述的方法,特征在于该微生物属于破囊壶菌目。
10.权利要求9所述的方法,特征在于该微生物属于Japonochytrium、裂殖壶菌属、破囊壶菌属、Althornia、Labyrinthuloides、Aplanochytrium和/或吾肯氏壶菌属。
11.权利要求10所述的方法,特征在于该微生物是吾肯氏壶菌SAM2180和/或裂殖壶菌SR21。
12.权利要求1-11中至少一个所述的方法,特征在于该水性发酵培养基包括一种或多种碳源和一种或多种氮源。
13.权利要求12所述的方法,特征在于该碳源是碳水化合物例如葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麦芽糖、可溶淀粉、岩藻糖、葡糖胺、葡聚糖、谷氨酸、糖蜜、甘油或者甘露醇、脂肪、油、玉米浆、麦芽膏和/或植物水解产物。
14.权利要求12所述的方法,特征在于该氮源是天然氮源例如蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、蛋白质水解产物、大豆,有机氮源例如谷氨酸盐和尿素和/或无机氮源例如醋酸铵、碳酸氢铵、硫酸铵或者硝酸铵。
15.权利要求1-14中至少一个所述的方法,特征在于该发酵是在pH 3-8进行的。
16.含有PUFA的油,其是通过权利要求1-15中至少一个的方法来获得的。
17.权利要求16所述的油,特征在于该DHA浓度提高了大于2%,优选大于3%和特别优选大于4%。
18.权利要求16和/或17所述的油,特征在于棕榈酸(PA)的浓度降低了大于2%,优选大于3%和特别优选大于4%。
19.权利要求16-18中至少一个所述的油,特征在于DHA与PA的比值增加了大于4%,优选大于6%和特别优选大于8%。
20.权利要求16-19中至少一个所述的油,特征在于DHA与棕榈酸的相对比例是至少1.3比1。
21.根据权利要求1-15中至少一个所述的方法所获得的生物量。
22.权利要求21所述的生物量,特征在于它是干的生物量。
23.权利要求16-20中至少一个所述的油的用途,其用作人营养的补充物、食品添加剂、动物饲料和/或药品。
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