JPH06192127A - ウズラを用いた抗体の製造方法 - Google Patents
ウズラを用いた抗体の製造方法Info
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- JPH06192127A JPH06192127A JP25048292A JP25048292A JPH06192127A JP H06192127 A JPH06192127 A JP H06192127A JP 25048292 A JP25048292 A JP 25048292A JP 25048292 A JP25048292 A JP 25048292A JP H06192127 A JPH06192127 A JP H06192127A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ウズラに抗原物質を感作して抗体を産生させ
た後、そのウズラの卵黄を採取し、その卵黄から抗体を
ポルソン（ｐｏｌｓｏｎ）の方法とアフィニティクロマ
トグラフィを用いた精製方法によって精製単離すること
を特徴とする抗体の製造方法。 【効果】 本発明の特定系統のウズラを用い且つその卵
黄から特定の単離精製法を用いて抗体を製造する方法
は、従来ニワトリでは得ることが困難であった分子量３
０，０００以下の抗原物質に対する抗体を容易に製造で
きるという効果を有する。
た後、そのウズラの卵黄を採取し、その卵黄から抗体を
ポルソン（ｐｏｌｓｏｎ）の方法とアフィニティクロマ
トグラフィを用いた精製方法によって精製単離すること
を特徴とする抗体の製造方法。 【効果】 本発明の特定系統のウズラを用い且つその卵
黄から特定の単離精製法を用いて抗体を製造する方法
は、従来ニワトリでは得ることが困難であった分子量３
０，０００以下の抗原物質に対する抗体を容易に製造で
きるという効果を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ウズラを用いた抗体の
製造方法に関する。
製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ニワトリに抗原物質を感作免疫し、その
ニワトリの卵の卵黄から抗体を単離精製して抗体を得る
方法は従来より公知であり、その抗体の利用についても
種々の試みがなされている。しかし、ニワトリは分子量
３０，０００以上の抗原物質に対する抗体産生には有用
であるが、それ以下の分子量の抗体に対する抗体産生能
が低いため、分子量３０，０００以下の分子量の抗原に
対する抗体の製造には不向きであるという問題点があ
る。又、ニワトリはマウスの近交系にみられるような明
確な系統化がされていないため、遺伝子にばらつきがあ
るという問題点もある。
ニワトリの卵の卵黄から抗体を単離精製して抗体を得る
方法は従来より公知であり、その抗体の利用についても
種々の試みがなされている。しかし、ニワトリは分子量
３０，０００以上の抗原物質に対する抗体産生には有用
であるが、それ以下の分子量の抗体に対する抗体産生能
が低いため、分子量３０，０００以下の分子量の抗原に
対する抗体の製造には不向きであるという問題点があ
る。又、ニワトリはマウスの近交系にみられるような明
確な系統化がされていないため、遺伝子にばらつきがあ
るという問題点もある。
【０００３】
【発明が解決しょうとする課題】本発明の課題は、ニワ
トリでは困難であった分子量３０，０００以下の抗原物
質に対する抗体を産生することができ、且つ系統がはっ
きりしていて、しかもニワトリと同様に大量に入手しや
すい鳥の卵黄を用いた新規な抗体製造方法を開発するこ
とにある。
トリでは困難であった分子量３０，０００以下の抗原物
質に対する抗体を産生することができ、且つ系統がはっ
きりしていて、しかもニワトリと同様に大量に入手しや
すい鳥の卵黄を用いた新規な抗体製造方法を開発するこ
とにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため、種々の鳥を用いて研究を行った結果、
ウズラにはニワトリに比べ近交化が進み、遺伝子のばら
つきが少ないものが繁殖されており、且つニワトリの場
合の最大の問題点であった分子量３０，０００以下の抗
原物質に対する抗体産生能があることを見出し、この知
見に基づき更にその抗体の単離精製法を開発することに
より本願発明を完成した。すなわち、本発明はウズラに
抗原物質を感作して抗体を産生させた後、そのウズラの
卵黄を採取し、その卵黄から抗体をポルソン（ｐｏｌｓ
ｏｎ）の方法とアフィニティクロマトグラフィを用いた
精製方法によって精製単離することを特徴とする抗体の
製造方法を提供するものである。
を解決するため、種々の鳥を用いて研究を行った結果、
ウズラにはニワトリに比べ近交化が進み、遺伝子のばら
つきが少ないものが繁殖されており、且つニワトリの場
合の最大の問題点であった分子量３０，０００以下の抗
原物質に対する抗体産生能があることを見出し、この知
見に基づき更にその抗体の単離精製法を開発することに
より本願発明を完成した。すなわち、本発明はウズラに
抗原物質を感作して抗体を産生させた後、そのウズラの
卵黄を採取し、その卵黄から抗体をポルソン（ｐｏｌｓ
ｏｎ）の方法とアフィニティクロマトグラフィを用いた
精製方法によって精製単離することを特徴とする抗体の
製造方法を提供するものである。
【０００５】以下本発明を詳細に説明する。本発明のウ
ズラを用いた抗体の製造方法は次に示す方法によって行
われる。まず、抗原物質をウズラに常法により免疫す
る。これによりウズラはこの抗原に対する抗体を産生
し、この抗体は卵黄の中に蓄積される。次いでこの卵黄
を集め、これに３〜５倍量の弱アルカリ性緩衝液を加え
て希釈し、次いで塩析する。析出物を除去し、得られた
上澄み液を再度塩析し、析出物を回収する。この析出物
を２〜３倍量の弱アルカリ性緩衝液に溶解させ次いで塩
析し、析出物を回収する。この析出物を弱アルカリ性緩
衝液に溶解し、アフィニティクロマトグラフィーにかけ
た後、吸着抗体を溶出することにより抗体を回収する。
ズラを用いた抗体の製造方法は次に示す方法によって行
われる。まず、抗原物質をウズラに常法により免疫す
る。これによりウズラはこの抗原に対する抗体を産生
し、この抗体は卵黄の中に蓄積される。次いでこの卵黄
を集め、これに３〜５倍量の弱アルカリ性緩衝液を加え
て希釈し、次いで塩析する。析出物を除去し、得られた
上澄み液を再度塩析し、析出物を回収する。この析出物
を２〜３倍量の弱アルカリ性緩衝液に溶解させ次いで塩
析し、析出物を回収する。この析出物を弱アルカリ性緩
衝液に溶解し、アフィニティクロマトグラフィーにかけ
た後、吸着抗体を溶出することにより抗体を回収する。
【０００６】本発明が対象とする抗体は従来ニワトリを
用いて産生していた各種抗体をはじめとして特に限定さ
れるものではないが、本発明がその特徴を発揮するのは
前記するように分子量が３０，０００以下である抗原物
質、例えば、αs1−カゼイン（分子量２３，０００）、
β−ラクトグロブリン（分子量１８，０００）、α−ラ
クトアルブミン（分子量１４，０００）、インスリン
（分子量５，７００）等の抗体である。
用いて産生していた各種抗体をはじめとして特に限定さ
れるものではないが、本発明がその特徴を発揮するのは
前記するように分子量が３０，０００以下である抗原物
質、例えば、αs1−カゼイン（分子量２３，０００）、
β−ラクトグロブリン（分子量１８，０００）、α−ラ
クトアルブミン（分子量１４，０００）、インスリン
（分子量５，７００）等の抗体である。
【０００７】本願発明におけるウズラ卵黄中から抗体を
単離するために用いられる弱アルカリ性緩衝液を用いた
塩析を何回かくりかえすという方法はいわゆるポルソン
（ｐｏｌｓｏｎ）の方法と呼ばれる方法の一部であっ
て、その詳細は例えばＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ Ｉ
ＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮＳ，１４（４），３２３−３
２７（１９８５）に記載されている。
単離するために用いられる弱アルカリ性緩衝液を用いた
塩析を何回かくりかえすという方法はいわゆるポルソン
（ｐｏｌｓｏｎ）の方法と呼ばれる方法の一部であっ
て、その詳細は例えばＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ Ｉ
ＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮＳ，１４（４），３２３−３
２７（１９８５）に記載されている。
【０００８】一方、後段のアフィニティクロマトグラフ
ィーを用いて抗体を精製する工程は本発明者が新たにウ
ズラ卵黄抗体の精製のために開発したものである。ちな
みに、ニワトリの場合に有効なポルソンの方法もそれだ
けでは難溶性のウズラ卵黄抗体しか得ることができず実
用的でない。
ィーを用いて抗体を精製する工程は本発明者が新たにウ
ズラ卵黄抗体の精製のために開発したものである。ちな
みに、ニワトリの場合に有効なポルソンの方法もそれだ
けでは難溶性のウズラ卵黄抗体しか得ることができず実
用的でない。
【０００９】ここで用いられるアフィニティクロマトグ
ラフィーとしてはＡｖｉｄ ＡＬアフィニティクロマト
グラフィーが好ましい。その製法はＡｖｉｄ ＡＬゲル
をメチルアルコールに懸濁し良く攪拌した後、静置し遠
心分離にかけてゲルを回収する。次に、カラムにゲルを
充填しＮａＣｌを含むリン酸緩衝液でゲルを平衡化した
後、上述の沈殿をリン酸緩衝液に溶解しゲルに吸着させ
る。続いて、リン酸緩衝液でゲルを十分に洗浄した後、
Ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ緩衝液を用いて吸着抗体
を溶出することによって行われる。
ラフィーとしてはＡｖｉｄ ＡＬアフィニティクロマト
グラフィーが好ましい。その製法はＡｖｉｄ ＡＬゲル
をメチルアルコールに懸濁し良く攪拌した後、静置し遠
心分離にかけてゲルを回収する。次に、カラムにゲルを
充填しＮａＣｌを含むリン酸緩衝液でゲルを平衡化した
後、上述の沈殿をリン酸緩衝液に溶解しゲルに吸着させ
る。続いて、リン酸緩衝液でゲルを十分に洗浄した後、
Ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ緩衝液を用いて吸着抗体
を溶出することによって行われる。
【００１０】次にウズラ卵黄から得られた抗体の力価を
測定するには、酵素免疫測定法を用いるのがよい。即
ち、炭酸緩衝液に溶解した家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを用いて
抗原、即ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを９６穴マイクロタイタ
ープレートに固定化し、次いでＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで洗
浄後、精製ウズラ卵黄ＩｇＧをＰＢＳ−ｔｗｅｅｎに溶
解しその溶液を注入する。反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで
洗浄し、続いてペルオキシダーゼを標識した二次抗体溶
液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の希釈液を注入し反応後
ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで洗浄する。最後に基質溶液を注入
し反応後、Ｈ2 ＳＯ4 を添加して反応を停止する。反応
停止後直ちに４９０ｎｍにおける吸光度を測定するとい
う方法で行う。
測定するには、酵素免疫測定法を用いるのがよい。即
ち、炭酸緩衝液に溶解した家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを用いて
抗原、即ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを９６穴マイクロタイタ
ープレートに固定化し、次いでＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで洗
浄後、精製ウズラ卵黄ＩｇＧをＰＢＳ−ｔｗｅｅｎに溶
解しその溶液を注入する。反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで
洗浄し、続いてペルオキシダーゼを標識した二次抗体溶
液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の希釈液を注入し反応後
ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで洗浄する。最後に基質溶液を注入
し反応後、Ｈ2 ＳＯ4 を添加して反応を停止する。反応
停止後直ちに４９０ｎｍにおける吸光度を測定するとい
う方法で行う。
【００１１】
【実施例】以下実施例で本発明を具体的に説明する。
【００１２】実施例１（ウズラ系統別の抗体産生） ＰＮＮ、ＰＳＮ、ＴＫＰＨ、ＴＫＰＬ、ＡＭＲＰ、ＳＢ
ＰＮおよびＲＷＬｆの７系統の日本ウズラ（９週令、財
団法人日本生物科学研究所）に分子量１５０，０００の
牛ＩｇＧ、分子量６６，０００のＢＳＡ、分子量２３，
０００の牛αs1−Ｃａｓｅｉｎ（αs1−ＣＮ）、分子量
１８，０００の牛β−Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（β
−Ｌｇ）、分子量１４，０００の牛α−Ｌａｃｔａｌｂ
ｕｍｉｎ（α−Ｌａ）、および分子量５，７００の牛Ｉ
ｎｓｕｌｉｎの各抗原１００μｇ／ｍｌづつを滅菌生理
的食塩水０．１ｍｌに溶解し、同量のＦｒｅｕｎｄの完
全アジュバンドを加えてエマルジョンにした後、ウズラ
の左右深胸筋肉にそれぞれ０．１ｍｌづつ注射した。注
射は７日間隔で６回行った。
ＰＮおよびＲＷＬｆの７系統の日本ウズラ（９週令、財
団法人日本生物科学研究所）に分子量１５０，０００の
牛ＩｇＧ、分子量６６，０００のＢＳＡ、分子量２３，
０００の牛αs1−Ｃａｓｅｉｎ（αs1−ＣＮ）、分子量
１８，０００の牛β−Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（β
−Ｌｇ）、分子量１４，０００の牛α−Ｌａｃｔａｌｂ
ｕｍｉｎ（α−Ｌａ）、および分子量５，７００の牛Ｉ
ｎｓｕｌｉｎの各抗原１００μｇ／ｍｌづつを滅菌生理
的食塩水０．１ｍｌに溶解し、同量のＦｒｅｕｎｄの完
全アジュバンドを加えてエマルジョンにした後、ウズラ
の左右深胸筋肉にそれぞれ０．１ｍｌづつ注射した。注
射は７日間隔で６回行った。
【００１３】一方、６回目の注射終了１週間後に各ウズ
ラより血清を採取し、５６℃３０分間加熱し補体を不活
化した。これを各ウズラの最終血清としてその血清中の
上記６種のタンパク質に対する抗体力価を酵素免疫法に
より測定した。すなわち、０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．
５に溶解した１００μｇ／ｍｌ濃度の家兎抗鶏卵黄Ｉｇ
Ｇを９６穴マイクロタイタープレートに３００μｌ／ｗ
ｅｌｌ注入し、４℃で一夜放置することにより抗原、即
ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを固定化した。次いでＰＢＳ−ｔ
ｗｅｅｎ（０．０５％ ｔｗｅｅｎ２０と０．１５Ｍ塩
化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．
２）で３回洗浄後、ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで１０２４倍希
釈した各ウズラ最終血清を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し
た。２５℃において１２０分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅ
ｎで５回洗浄した。
ラより血清を採取し、５６℃３０分間加熱し補体を不活
化した。これを各ウズラの最終血清としてその血清中の
上記６種のタンパク質に対する抗体力価を酵素免疫法に
より測定した。すなわち、０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．
５に溶解した１００μｇ／ｍｌ濃度の家兎抗鶏卵黄Ｉｇ
Ｇを９６穴マイクロタイタープレートに３００μｌ／ｗ
ｅｌｌ注入し、４℃で一夜放置することにより抗原、即
ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを固定化した。次いでＰＢＳ−ｔ
ｗｅｅｎ（０．０５％ ｔｗｅｅｎ２０と０．１５Ｍ塩
化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．
２）で３回洗浄後、ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで１０２４倍希
釈した各ウズラ最終血清を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し
た。２５℃において１２０分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅ
ｎで５回洗浄した。
【００１４】続いてペルオキシダーゼを標識した二次抗
体溶液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の１０，０００倍希
釈液を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し２５℃において６０
分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。最後に
基質溶液（０．４％Ｏ−フェニレンジアミンと０．０３
％過酸化水素水を含む０．１Ｍクエン酸・リン酸緩衝液
ｐＨ５．０）を１００μｌ／ｗｅｌｌづつ注入し２５℃
で１５分間反応後、４ＮＨ2 ＳＯ4 ２５ｍｌを添加して
反応を停止した。反応停止後直ちに４９０ｎｍにおける
吸光度を測定した。その結果を表１に示した。なお、こ
の実験に先立ち免疫二重拡散法によって家兎抗鶏卵黄Ｉ
ｇＧとウズラＩｇＧが結合することを確認した。
体溶液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の１０，０００倍希
釈液を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し２５℃において６０
分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。最後に
基質溶液（０．４％Ｏ−フェニレンジアミンと０．０３
％過酸化水素水を含む０．１Ｍクエン酸・リン酸緩衝液
ｐＨ５．０）を１００μｌ／ｗｅｌｌづつ注入し２５℃
で１５分間反応後、４ＮＨ2 ＳＯ4 ２５ｍｌを添加して
反応を停止した。反応停止後直ちに４９０ｎｍにおける
吸光度を測定した。その結果を表１に示した。なお、こ
の実験に先立ち免疫二重拡散法によって家兎抗鶏卵黄Ｉ
ｇＧとウズラＩｇＧが結合することを確認した。
【００１５】
【表１】
【００１６】実施例２（ウズラ卵黄からのＩｇＧ精製） 実施例１で各抗原を感作免疫して夫々のウズラから卵を
採取し、それより卵黄を取り出した。次にそのウズラ卵
黄の４倍量の０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．６とポリ
エチレングリコール＃６０００を３．５％濃度になるよ
うに添加し、遠心分離（３，０００ｒ．ｐ．ｍ．，３０
ｍｉｎ．）を行った。得られた上澄に、８．５％濃度と
なるようにポリエチレングリコール＃６０００を加え、
室温で１０ｍｉｎ．放置後、再度遠心分離（３，０００
ｒ．ｐ．ｍ．，４０ｍｉｎ．）し、沈殿を得た。
採取し、それより卵黄を取り出した。次にそのウズラ卵
黄の４倍量の０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．６とポリ
エチレングリコール＃６０００を３．５％濃度になるよ
うに添加し、遠心分離（３，０００ｒ．ｐ．ｍ．，３０
ｍｉｎ．）を行った。得られた上澄に、８．５％濃度と
なるようにポリエチレングリコール＃６０００を加え、
室温で１０ｍｉｎ．放置後、再度遠心分離（３，０００
ｒ．ｐ．ｍ．，４０ｍｉｎ．）し、沈殿を得た。
【００１７】得られた沈殿を最初に用いた卵黄の２．５
倍量の０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．６に溶解し、さ
らに最終濃度が１２％となるようにポリエチレングリコ
ール＃６０００を加え、再び室温にて１０ｍｉｎ．放置
後、遠心分離（３，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２５ｍｉ
ｎ．）し、沈殿を得た。得られた沈殿を下記のアフィニ
ティクロマトグラフィーを用いてさらに精製した。
倍量の０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．６に溶解し、さ
らに最終濃度が１２％となるようにポリエチレングリコ
ール＃６０００を加え、再び室温にて１０ｍｉｎ．放置
後、遠心分離（３，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２５ｍｉ
ｎ．）し、沈殿を得た。得られた沈殿を下記のアフィニ
ティクロマトグラフィーを用いてさらに精製した。
【００１８】アフィニティクロマトグラフィーはＡＶｉ
ｄ ＡＬゲルを用いた。即ち、Ａｖｉｄ ＡＬゲル２ｍ
ｌを２０％メチルアルコールに懸濁し良く攪拌した後、
５分間静置し遠心分離（２，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２ｍ
ｉｎ．）にかけてゲルを回収した。次に、カラムにゲル
を充填し０．１５Ｍ ＮａＣｌを含む０．０１Ｍリン酸
緩衝液ｐＨ７．４でゲルを平衡化した後、上述の沈殿を
０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．４に溶解しゲルに吸着
させた。
ｄ ＡＬゲルを用いた。即ち、Ａｖｉｄ ＡＬゲル２ｍ
ｌを２０％メチルアルコールに懸濁し良く攪拌した後、
５分間静置し遠心分離（２，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２ｍ
ｉｎ．）にかけてゲルを回収した。次に、カラムにゲル
を充填し０．１５Ｍ ＮａＣｌを含む０．０１Ｍリン酸
緩衝液ｐＨ７．４でゲルを平衡化した後、上述の沈殿を
０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．４に溶解しゲルに吸着
させた。
【００１９】続いて、０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．
４でゲルを十分に洗浄した後、０．１Ｍ Ｓｏｄｉｕｍ
ａｃｅｔａｔｅ緩衝液ｐＨ２．３を用いて吸着抗体を
溶出した。本精製法によりウズラ卵９０個から採取した
卵黄３００ｍｌより４５．４ｍｇのウズラ卵黄ＩｇＧ主
体とする画分が得られた。
４でゲルを十分に洗浄した後、０．１Ｍ Ｓｏｄｉｕｍ
ａｃｅｔａｔｅ緩衝液ｐＨ２．３を用いて吸着抗体を
溶出した。本精製法によりウズラ卵９０個から採取した
卵黄３００ｍｌより４５．４ｍｇのウズラ卵黄ＩｇＧ主
体とする画分が得られた。
【００２０】実施例３（ウズラ卵黄ＩｇＧ抗体力価の測
定） 実施例２によって単離精製したウズラ卵黄ＩｇＧ抗体の
力価の測定には酵素免疫測定法を用いた。即ち、０．１
Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．５に溶解した１００μｇ／ｍｌ濃
度の家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを９６穴マイクロタイタープレ
ートに３００μｇ／ｗｅｌｌ注入し、４℃で一夜放置す
ることにより抗原、即ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを固定化し
た。
定） 実施例２によって単離精製したウズラ卵黄ＩｇＧ抗体の
力価の測定には酵素免疫測定法を用いた。即ち、０．１
Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．５に溶解した１００μｇ／ｍｌ濃
度の家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを９６穴マイクロタイタープレ
ートに３００μｇ／ｗｅｌｌ注入し、４℃で一夜放置す
ることにより抗原、即ち家兎抗鶏卵黄ＩｇＧを固定化し
た。
【００２１】次いでＰＢＳ−ｔｗｅｅｎ（０．０５％
ｔｗｅｅｎ２０と０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．
０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．２）で３回洗浄後、１μｇ
／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍ
ｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌそして１ｍｇ
／ｍｌ濃度となるように精製ウズラ卵黄ＩｇＧをＰＢＳ
−ｔｗｅｅｎに溶解し、それぞれの溶液を１００μｌ／
ｗｅｌｌ注入した。２５℃において１２０分間反応後Ｐ
ＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。
ｔｗｅｅｎ２０と０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．
０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．２）で３回洗浄後、１μｇ
／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍ
ｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌそして１ｍｇ
／ｍｌ濃度となるように精製ウズラ卵黄ＩｇＧをＰＢＳ
−ｔｗｅｅｎに溶解し、それぞれの溶液を１００μｌ／
ｗｅｌｌ注入した。２５℃において１２０分間反応後Ｐ
ＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。
【００２２】続いてペルオキシダーゼを標識した二次抗
体溶液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の１０，０００倍希
釈液を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し２５℃において６０
分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。最後に
基質溶液（０．４％Ｏ−フェニレンジアミンと０．０３
％過酸化水素水を含む０．１Ｍクエン酸・リン酸緩衝液
ｐＨ５．０）を１００μｌ／ｗｅｌｌづつ注入し２５℃
において１５分間反応後、４規定Ｈ2 ＳＯ4 ２５ｍｌを
添加して反応を停止した。反応停止後直ちに４９０ｎｍ
における吸光度を測定した。結果を図１に示す。
体溶液（山羊抗鶏卵黄ＩｇＧ抗体）の１０，０００倍希
釈液を１００μｌ／ｗｅｌｌ注入し２５℃において６０
分間反応後ＰＢＳ−ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。最後に
基質溶液（０．４％Ｏ−フェニレンジアミンと０．０３
％過酸化水素水を含む０．１Ｍクエン酸・リン酸緩衝液
ｐＨ５．０）を１００μｌ／ｗｅｌｌづつ注入し２５℃
において１５分間反応後、４規定Ｈ2 ＳＯ4 ２５ｍｌを
添加して反応を停止した。反応停止後直ちに４９０ｎｍ
における吸光度を測定した。結果を図１に示す。
【００２３】
【発明の効果】本発明の特定系統のウズラを用い且つそ
の卵黄から特定の単離精製法を用いて抗体を製造する方
法は、従来ニワトリでは得ることが困難であった分子量
３０，０００以下の抗原物質に対する抗体を容易に製造
できるという効果を有する。而して、本発明の製造方法
によって得られたウズラ卵黄抗体は、診断薬、歯周病あ
るいは虫歯予防、各種感染症予防、さらにはアレルギー
予防等に幅広く利用することができるのである。
の卵黄から特定の単離精製法を用いて抗体を製造する方
法は、従来ニワトリでは得ることが困難であった分子量
３０，０００以下の抗原物質に対する抗体を容易に製造
できるという効果を有する。而して、本発明の製造方法
によって得られたウズラ卵黄抗体は、診断薬、歯周病あ
るいは虫歯予防、各種感染症予防、さらにはアレルギー
予防等に幅広く利用することができるのである。
【図１】本発明の実施例３で得たウズラ卵黄ＩｇＧの抗
体力価を示すグラフである。
体力価を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】 ウズラに抗原物質を感作して抗体を産生
させた後、そのウズラの卵黄を採取し、その卵黄から抗
体をポルソン（ｐｏｌｓｏｎ）の方法とアフィニティク
ロマトグラフィを用いた精製方法によって精製単離する
ことを特徴とする抗体の製造方法。 - 【請求項２】 抗原物質が分子量３０，０００以下であ
ることを特徴とする請求項１記載の抗体の製造方法。 - 【請求項３】 ウズラがＰＳＮ又はＳＢＰＮ系ウズラで
ある請求項２記載の抗体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25048292A JPH06192127A (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | ウズラを用いた抗体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25048292A JPH06192127A (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | ウズラを用いた抗体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06192127A true JPH06192127A (ja) | 1994-07-12 |
Family
ID=17208517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25048292A Pending JPH06192127A (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | ウズラを用いた抗体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06192127A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10029705A1 (de) * | 2000-06-09 | 2002-01-03 | Good Biotech Corp | Herstellung von IgY(AFc)-Antikörpern und deren Verwendung |
| US8173783B2 (en) | 2000-12-08 | 2012-05-08 | Good Biotech Corporation | Process for selectively isolating IgY antibodies from egg yolk of an anseriform bird and IgY antibodies obtained thereby |
| JP2022501375A (ja) * | 2018-09-20 | 2022-01-06 | ウニベルシダージ デ アベイロUniversidade De Aveiro | 卵黄から抗体を精製するプロセス、その製品及び使用 |
-
1992
- 1992-08-27 JP JP25048292A patent/JPH06192127A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10029705A1 (de) * | 2000-06-09 | 2002-01-03 | Good Biotech Corp | Herstellung von IgY(AFc)-Antikörpern und deren Verwendung |
| US8173783B2 (en) | 2000-12-08 | 2012-05-08 | Good Biotech Corporation | Process for selectively isolating IgY antibodies from egg yolk of an anseriform bird and IgY antibodies obtained thereby |
| JP2022501375A (ja) * | 2018-09-20 | 2022-01-06 | ウニベルシダージ デ アベイロUniversidade De Aveiro | 卵黄から抗体を精製するプロセス、その製品及び使用 |
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