JPH06192081A - エンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症治療剤 - Google Patents
エンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症治療剤Info
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- JPH06192081A JPH06192081A JP34653092A JP34653092A JPH06192081A JP H06192081 A JPH06192081 A JP H06192081A JP 34653092 A JP34653092 A JP 34653092A JP 34653092 A JP34653092 A JP 34653092A JP H06192081 A JPH06192081 A JP H06192081A
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- endothelin
- aspergillomarasmin
- converting enzyme
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 アスペルギロマラスミンＡ［式（１）］、ア
スペルギロマラスミンＢ［式（２）］、それらの生理学
的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成分とし
て含有するエンドセリン変換酵素阻害剤；及びアスペル
ギロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それら
の生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効
成分として含有する高エンドセリン症予防及び治療剤。 HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(NH2)-C
OOH （１） HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-COOH
（２） 【効果】 安全性が高く、かつ高度なエンドセリン変換
酵素阻害活性を有する。
スペルギロマラスミンＢ［式（２）］、それらの生理学
的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成分とし
て含有するエンドセリン変換酵素阻害剤；及びアスペル
ギロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それら
の生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効
成分として含有する高エンドセリン症予防及び治療剤。 HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(NH2)-C
OOH （１） HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-COOH
（２） 【効果】 安全性が高く、かつ高度なエンドセリン変換
酵素阻害活性を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はエンドセリン変換酵素阻
害剤、高エンドセリン症予防及び治療剤に関し、さらに
詳しくは、本発明はエンドセリン変換酵素阻害作用を有
するアスペルギロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミ
ンＢ、それらの生理学的に許容しうる塩またはそれらの
混合物を有効成分として含有するエンドセリン変換酵素
阻害剤、高エンドセリン症予防及び治療剤。
害剤、高エンドセリン症予防及び治療剤に関し、さらに
詳しくは、本発明はエンドセリン変換酵素阻害作用を有
するアスペルギロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミ
ンＢ、それらの生理学的に許容しうる塩またはそれらの
混合物を有効成分として含有するエンドセリン変換酵素
阻害剤、高エンドセリン症予防及び治療剤。
【０００２】
【従来技術】エンドセリン（Endothelin）は血管内皮細
胞由来の強力かつ著しく持続的な血管平滑筋収縮活性を
有する２１残基のペプチドとして１９８８年報告された
[M.Yanagisawa et al., Nature 332, 411(1988)]。さら
にエンドセリンには３種のサブタイプ（エンドセリン−
１、エンドセリン−２、エンドセリン−３）が存在する
ことが知られている。エンドセリンはヒトを含む各種動
物の微細血管を含む種々の血管（冠動脈、脳底動脈、腸
間膜動脈、大動脈等）を強力に収縮させ、その血管収縮
作用は、従来知られていたアンジオテンシンII、バソプ
レッソン、ニューロペプチドＹなどの収縮性ペプチドよ
りはるかに強力でかつ著しく持続的である。また、エン
ドセリンは血管収縮作用のみならず、強力な気道狭窄反
応を惹起すると報告されている[Y.Uchida et al., Eur.
J. Pharmacol., 154, 227(1988)] 。さらに、エンドセ
リンは腎血管収縮を惹起し、腎血流量、糸球体ろ過量、
尿量及び尿中ナトリウム排泄量を減少させる[W. L. Mil
ler et al., J. Clin. Invest., 83, 317(1989): K. F.
Badr et al., J. Clin. Invest., 83, 336(1989)]等、
様々な生理作用を有することが明らかになってきた。
胞由来の強力かつ著しく持続的な血管平滑筋収縮活性を
有する２１残基のペプチドとして１９８８年報告された
[M.Yanagisawa et al., Nature 332, 411(1988)]。さら
にエンドセリンには３種のサブタイプ（エンドセリン−
１、エンドセリン−２、エンドセリン−３）が存在する
ことが知られている。エンドセリンはヒトを含む各種動
物の微細血管を含む種々の血管（冠動脈、脳底動脈、腸
間膜動脈、大動脈等）を強力に収縮させ、その血管収縮
作用は、従来知られていたアンジオテンシンII、バソプ
レッソン、ニューロペプチドＹなどの収縮性ペプチドよ
りはるかに強力でかつ著しく持続的である。また、エン
ドセリンは血管収縮作用のみならず、強力な気道狭窄反
応を惹起すると報告されている[Y.Uchida et al., Eur.
J. Pharmacol., 154, 227(1988)] 。さらに、エンドセ
リンは腎血管収縮を惹起し、腎血流量、糸球体ろ過量、
尿量及び尿中ナトリウム排泄量を減少させる[W. L. Mil
ler et al., J. Clin. Invest., 83, 317(1989): K. F.
Badr et al., J. Clin. Invest., 83, 336(1989)]等、
様々な生理作用を有することが明らかになってきた。
【０００３】エンドセリンの様々な生理作用から、種々
の疾患に関与していることが予想されており、実際各種
病態及び動物実験モデルにおいて、エンドセリンの関与
が指摘されている。肺高血圧症、腎不全症、心不全症、
狭心症、心筋梗塞症、動脈硬化症、閉塞性血栓性血管炎
（Bueger病）、大動脈炎症候群（高安病）などの患者あ
るいは病態モデル動物において、血漿中のエンドセリン
濃度が上昇していることが知られており、疾病の発生原
因、維持発展に深く関与している可能性が示唆されてい
る[D. J. Stewart et al., Am. Col. Physic., 114,464
(1991); M. Shichiri et al., Hypertension, 15, 493
(1990); K. B. Margulies, Circulation,82, 2226(199
0); T. Toyooka et al., Circulation, 83, 476(1991);
T. Miyauchi et al., Lancet, i, 53(1989); JAMA, 26
4, 2868(1990)] 。エンドセリンの生合成は以下のよう
に推定されている。すなわち、エンドセリン前駆体の２
対の塩基性アミノ酸残基（Lys-Arg, Arg-Arg）にエンド
ペプチダーゼが作用して、ビッグエンドセリン（big E
T）と呼ばれる中間体が生じ、さらにエンドセリン変換
酵素(ECE) と呼ばれる特異的な酵素が作用してエンドセ
リンが生成されると推定されている[M. Yanagisawa et
al., Nature, 332, 411(1988)]。その後、このエンドセ
リン変換酵素は中性金属プロテアーゼであり、ＥＤＴＡ
等のキレート試薬やサーモリシン等の金属プロテアーゼ
の阻害剤であるホスホラミドン（phosphoramidon）によ
って阻害されることが明かとなった[K. Ohnaka et al.,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 168, 1128(1990);
K. Okada et al.,Biochem. Biophys. Res. Commun. 17
1, 1192(1990)] 。しかし、これら阻害剤はその阻害効
果や特異性の問題等より薬剤として開発されるには至っ
ていない。
の疾患に関与していることが予想されており、実際各種
病態及び動物実験モデルにおいて、エンドセリンの関与
が指摘されている。肺高血圧症、腎不全症、心不全症、
狭心症、心筋梗塞症、動脈硬化症、閉塞性血栓性血管炎
（Bueger病）、大動脈炎症候群（高安病）などの患者あ
るいは病態モデル動物において、血漿中のエンドセリン
濃度が上昇していることが知られており、疾病の発生原
因、維持発展に深く関与している可能性が示唆されてい
る[D. J. Stewart et al., Am. Col. Physic., 114,464
(1991); M. Shichiri et al., Hypertension, 15, 493
(1990); K. B. Margulies, Circulation,82, 2226(199
0); T. Toyooka et al., Circulation, 83, 476(1991);
T. Miyauchi et al., Lancet, i, 53(1989); JAMA, 26
4, 2868(1990)] 。エンドセリンの生合成は以下のよう
に推定されている。すなわち、エンドセリン前駆体の２
対の塩基性アミノ酸残基（Lys-Arg, Arg-Arg）にエンド
ペプチダーゼが作用して、ビッグエンドセリン（big E
T）と呼ばれる中間体が生じ、さらにエンドセリン変換
酵素(ECE) と呼ばれる特異的な酵素が作用してエンドセ
リンが生成されると推定されている[M. Yanagisawa et
al., Nature, 332, 411(1988)]。その後、このエンドセ
リン変換酵素は中性金属プロテアーゼであり、ＥＤＴＡ
等のキレート試薬やサーモリシン等の金属プロテアーゼ
の阻害剤であるホスホラミドン（phosphoramidon）によ
って阻害されることが明かとなった[K. Ohnaka et al.,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 168, 1128(1990);
K. Okada et al.,Biochem. Biophys. Res. Commun. 17
1, 1192(1990)] 。しかし、これら阻害剤はその阻害効
果や特異性の問題等より薬剤として開発されるには至っ
ていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、安全
で特異性が高く、効力の強いエンドセリン変換酵素阻害
剤及び高エンドセリン症予防及び治療剤を提供すること
である。
で特異性が高く、効力の強いエンドセリン変換酵素阻害
剤及び高エンドセリン症予防及び治療剤を提供すること
である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために鋭意研究を重ね、エンドセリン変換
酵素に対して阻害作用を有する物質を探索したところ、
アスペルギロマラスミンＡ及びＢがエンドセリン変換酵
素に対して強力な阻害作用を有することを見出し、本発
明を完成するに至った。すなわち本発明は、アスペルギ
ロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それらの
生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成
分として含有するエンドセリン変換酵素阻害剤である。
上述のように様々な病態において血漿中のエンドセリン
量が上昇することが明らかになっていることから、エン
ドセリン変換酵素を阻害することによってエンドセリン
産生を抑制し、高エンドセリン症の治療や予防をするこ
とができる。従って、本発明はまた、アスペルギロマラ
スミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それらの生理学
的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成分とし
て含有する高エンドセリン症予防及び治療剤である。
的を達成するために鋭意研究を重ね、エンドセリン変換
酵素に対して阻害作用を有する物質を探索したところ、
アスペルギロマラスミンＡ及びＢがエンドセリン変換酵
素に対して強力な阻害作用を有することを見出し、本発
明を完成するに至った。すなわち本発明は、アスペルギ
ロマラスミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それらの
生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成
分として含有するエンドセリン変換酵素阻害剤である。
上述のように様々な病態において血漿中のエンドセリン
量が上昇することが明らかになっていることから、エン
ドセリン変換酵素を阻害することによってエンドセリン
産生を抑制し、高エンドセリン症の治療や予防をするこ
とができる。従って、本発明はまた、アスペルギロマラ
スミンＡ、アスペルギロマラスミンＢ、それらの生理学
的に許容しうる塩またはそれらの混合物を有効成分とし
て含有する高エンドセリン症予防及び治療剤である。
【０００６】本明細書中で記する高エンドセリン症と
は、血漿中のエンドセリン濃度が通常よりも上昇するよ
うな病態を意味し、具体的には例えば、高血圧症、腎不
全症、心不全症、狭心症、心筋梗塞症、虚血性脳・末梢
疾患、動脈硬化症、閉塞性血栓性血管炎、大動脈炎症候
群、気管支喘息をはじめとする種々の循環器系疾患、呼
吸器系疾患等が挙げられる。本発明のエンドセリン変換
酵素阻害剤の有効成分であるアスペルギロマラスミンＡ
及びアスペルギロマラスミンＢは、A. L. Haenni et a
l., Helv. Chim. Acta, 48, 729(1965)にその構造が記
載されていて、それぞれ下記式（１）及び（２）によっ
て表される化合物である。しかしながら、アスペルギロ
マラスミンＡ及びＢがエンドセリン変換酵素を阻害する
ことは、従来全く知られていなかった。 HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(NH2)-COOH （１） HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-COOH （２） これらの生理学的に許容しうる塩としては、塩酸塩、硫
酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、酢酸
塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸
塩、シュウ酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩、及びナト
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マ
グネシウム塩などの金属塩といった従来公知の塩が挙げ
られる。
は、血漿中のエンドセリン濃度が通常よりも上昇するよ
うな病態を意味し、具体的には例えば、高血圧症、腎不
全症、心不全症、狭心症、心筋梗塞症、虚血性脳・末梢
疾患、動脈硬化症、閉塞性血栓性血管炎、大動脈炎症候
群、気管支喘息をはじめとする種々の循環器系疾患、呼
吸器系疾患等が挙げられる。本発明のエンドセリン変換
酵素阻害剤の有効成分であるアスペルギロマラスミンＡ
及びアスペルギロマラスミンＢは、A. L. Haenni et a
l., Helv. Chim. Acta, 48, 729(1965)にその構造が記
載されていて、それぞれ下記式（１）及び（２）によっ
て表される化合物である。しかしながら、アスペルギロ
マラスミンＡ及びＢがエンドセリン変換酵素を阻害する
ことは、従来全く知られていなかった。 HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(NH2)-COOH （１） HOOC-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-CH(COOH)-NH-CH2-COOH （２） これらの生理学的に許容しうる塩としては、塩酸塩、硫
酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、酢酸
塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸
塩、シュウ酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩、及びナト
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マ
グネシウム塩などの金属塩といった従来公知の塩が挙げ
られる。
【０００７】アスペルギロマラスミンＡ及びＢは、Aspe
rgillus flavus [A. L. Haenni etal., Helv. Chim. Ac
ta, 48, 729(1965)] 、Aspergillus oryzae [A. L. Hae
nniet al., Helv. Chim. Acta, 48, 729(1965)] 、Coll
etotrichum gloeosporioides [J. F. Bousquet et al.,
Ann. Phytopathol., 3, 407(1971); A. Ballio etal.,
Phytopathol. Medit., 8, 187(1969)]、Fusarium oxys
porum f. sp. melonis [P. Camporota et al., C. R. A
cad. Sci. Ser. D, 276,1903(1973)]及び Pyrenophora
teres [L. Dalgaard, Adv. Mass Spectrom., 7B, 1644
(1978)] によって製造されることが知られているが、本
発明で使用されるアスペルギロマラスミンＡ及びＢはま
た、微工研寄託菌FERM P-13328を使用して後述の製造例
の方法によって製造してもよい。微工研寄託菌FERM P-1
3328は分類学上カビに属する好気性微生物であって、静
岡県藤枝市の土壌から分離された。培地 YM Agar（グル
コース10ｇ、ペプトン５g 、イートエキス３g 、マルト
エキス３g 、寒天20g 、脱イオン水１リットル、pH6.2)
で２５℃で良好に生育する。生育可能な条件はpH5.５〜
１1.４及び温度１５〜４０℃であり、最適生育条件はpH
6.８〜7.９及び温度２５〜３５℃である。
rgillus flavus [A. L. Haenni etal., Helv. Chim. Ac
ta, 48, 729(1965)] 、Aspergillus oryzae [A. L. Hae
nniet al., Helv. Chim. Acta, 48, 729(1965)] 、Coll
etotrichum gloeosporioides [J. F. Bousquet et al.,
Ann. Phytopathol., 3, 407(1971); A. Ballio etal.,
Phytopathol. Medit., 8, 187(1969)]、Fusarium oxys
porum f. sp. melonis [P. Camporota et al., C. R. A
cad. Sci. Ser. D, 276,1903(1973)]及び Pyrenophora
teres [L. Dalgaard, Adv. Mass Spectrom., 7B, 1644
(1978)] によって製造されることが知られているが、本
発明で使用されるアスペルギロマラスミンＡ及びＢはま
た、微工研寄託菌FERM P-13328を使用して後述の製造例
の方法によって製造してもよい。微工研寄託菌FERM P-1
3328は分類学上カビに属する好気性微生物であって、静
岡県藤枝市の土壌から分離された。培地 YM Agar（グル
コース10ｇ、ペプトン５g 、イートエキス３g 、マルト
エキス３g 、寒天20g 、脱イオン水１リットル、pH6.2)
で２５℃で良好に生育する。生育可能な条件はpH5.５〜
１1.４及び温度１５〜４０℃であり、最適生育条件はpH
6.８〜7.９及び温度２５〜３５℃である。
【０００８】本発明のエンドセリン変換酵素阻害剤は、
有効成分であるアスペルギロマラスミンＡ、Ｂ、それら
の生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物の他
に、これらの有効成分を変質させるものや有毒なもので
ない限り、用途に応じて適宜選択しうる添加物を含んで
もよい。本発明のエンドセリン変換酵素阻害剤は例え
ば、高エンドセリン症治療剤や予防剤の成分として使用
することができる。本発明の高エンドセリン症の治療剤
及び予防剤は、経口的または非経口的に投与することが
できる。経口投与剤としては、通常散剤、錠剤、乳剤、
カプセル剤、顆粒剤、液剤などの形態が挙げられる。こ
れらの経口投与剤は有効成分の他に、乳糖、澱粉、デキ
ストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成及
び天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、水酸化
アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナト
リウムといった賦形剤、補助剤、添加剤などの製剤添加
物を含んでもよい。
有効成分であるアスペルギロマラスミンＡ、Ｂ、それら
の生理学的に許容しうる塩またはそれらの混合物の他
に、これらの有効成分を変質させるものや有毒なもので
ない限り、用途に応じて適宜選択しうる添加物を含んで
もよい。本発明のエンドセリン変換酵素阻害剤は例え
ば、高エンドセリン症治療剤や予防剤の成分として使用
することができる。本発明の高エンドセリン症の治療剤
及び予防剤は、経口的または非経口的に投与することが
できる。経口投与剤としては、通常散剤、錠剤、乳剤、
カプセル剤、顆粒剤、液剤などの形態が挙げられる。こ
れらの経口投与剤は有効成分の他に、乳糖、澱粉、デキ
ストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成及
び天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、水酸化
アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナト
リウムといった賦形剤、補助剤、添加剤などの製剤添加
物を含んでもよい。
【０００９】また非経口投与剤としては、注射剤などの
形態が挙げられ、注射剤の場合には無菌性の水性または
非水性の溶剤、懸濁剤、乳濁剤などを含む。水性の溶
剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩
水が挙げられる。非水性の溶剤、懸濁剤としては、例え
ばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オ
リーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコー
ル類、ポリソルベート80（登録商標) などが挙げられ
る。さらに潤滑剤、乳化剤、分散剤のような補助剤を含
んでもよい。これらは、例えばバクテリア保留フィルタ
ーによる濾過または照射によって無菌化される。また、
無菌の固体組成物を製造した後、使用前に無菌水または
無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。上
記の各製剤は常法に従って製造することができる。本発
明の高エンドセリン症予防及び治療剤の投与量は、投与
方法、患者の年齢、体重、状態及び疾患の種類によって
異なるが、通常、経口投与としては一日当たり１〜300m
g 、好ましくは５〜100mg 、非経口投与としては一日当
たり１〜200mg 、好ましくは５〜50mgであり、これを１
〜５回に分割して投与すればよい。
形態が挙げられ、注射剤の場合には無菌性の水性または
非水性の溶剤、懸濁剤、乳濁剤などを含む。水性の溶
剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩
水が挙げられる。非水性の溶剤、懸濁剤としては、例え
ばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オ
リーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコー
ル類、ポリソルベート80（登録商標) などが挙げられ
る。さらに潤滑剤、乳化剤、分散剤のような補助剤を含
んでもよい。これらは、例えばバクテリア保留フィルタ
ーによる濾過または照射によって無菌化される。また、
無菌の固体組成物を製造した後、使用前に無菌水または
無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。上
記の各製剤は常法に従って製造することができる。本発
明の高エンドセリン症予防及び治療剤の投与量は、投与
方法、患者の年齢、体重、状態及び疾患の種類によって
異なるが、通常、経口投与としては一日当たり１〜300m
g 、好ましくは５〜100mg 、非経口投与としては一日当
たり１〜200mg 、好ましくは５〜50mgであり、これを１
〜５回に分割して投与すればよい。
【００１０】以下、製造例、実施例及び試験例によって
本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を
越えない限り下記例の記載に限定されるものではない。
本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を
越えない限り下記例の記載に限定されるものではない。
アスペルギロマラスミンＡ及びＢの製造 微工研寄託菌FERM P-13328をグルコース0.5%、グリセロ
ール1.0%、ペプトン0.5%、イートエキス0.3%、ミートエ
キス0.5%、NaCl 0.5% (pH7.0)を成分とする培地にて３
０℃、６日間培養した後、菌体を除去して培養上清を得
た(25 リットル) 。この培養上清をpH7.0 に調整した
後、活性炭２リットルを入れて１時間攪拌した。活性炭
を除去後、pH2.0 に調整し活性炭４リットルを入れ１時
間攪拌してアスペルギロマラスミンＡ、Ｂを活性炭に吸
着させた。吸着したアスペルギロマラスミンＡ、Ｂは80
％メタノール水溶液８リットルにて溶出して、メタノー
ルを減圧下留去して濃縮液(500ml) を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥粉末(50g) を蒸留水400ml に溶解しpH3.0 に
調整して冷蔵庫に放置するとアスペルギロマラスミンＡ
が結晶として析出した（２ｇ）。さらにこの水溶液をpH
1.5 に調整して０℃にて放置するとアスペルギロマラス
ミンＢが析出した（800mg)。純粋なアスペルギロマラス
ミンＡ及びＢを入手するために、さらに担体として陰イ
オン交換樹脂ＡＧ１ｘ２（バイオラッド社、200-400 メ
ッシュ）を用いた蟻酸による濃度勾配カラムクロマトグ
ラフィーにて精製した。溶出液の濃度勾配は最初蒸留水
より始めて、600 分後に2.0 規定濃度の蟻酸水溶液にな
るように設定した。アスペルギロマラスミンＡ及びＢの
画分を凍結乾燥して純粋なアスペルギロマラスミンＡ
(1.5g)及びアスペルギロマラスミンＢ（600mg)を得た。
こうして得られたアスペルギロマラスミンＡ及びＢの理
化学的データは下記のとおりであった。 アスペルギロマラスミンＡ：分解点 227〜237 ℃;[α]
D 20= −52°(c=1.0、0.2N NaOH); 元素分析値 C 38.74
% 、H 5.63% 、N,13.50%（計算値(C10H17O8N3)C 39.09%
、H 5.58% 、N 13.68%) アスペルギロマラスミンＢ：分解点 223〜233 ℃;[α]
D 20= −21°(c=1.0、0.2N NaOH); 元素分析値 C 38.52
% 、H 5.18% 、N 9.98% （計算値 (C9H14O8N2)C 38.85%
、H 5.07% 、N 10.07%)
ール1.0%、ペプトン0.5%、イートエキス0.3%、ミートエ
キス0.5%、NaCl 0.5% (pH7.0)を成分とする培地にて３
０℃、６日間培養した後、菌体を除去して培養上清を得
た(25 リットル) 。この培養上清をpH7.0 に調整した
後、活性炭２リットルを入れて１時間攪拌した。活性炭
を除去後、pH2.0 に調整し活性炭４リットルを入れ１時
間攪拌してアスペルギロマラスミンＡ、Ｂを活性炭に吸
着させた。吸着したアスペルギロマラスミンＡ、Ｂは80
％メタノール水溶液８リットルにて溶出して、メタノー
ルを減圧下留去して濃縮液(500ml) を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥粉末(50g) を蒸留水400ml に溶解しpH3.0 に
調整して冷蔵庫に放置するとアスペルギロマラスミンＡ
が結晶として析出した（２ｇ）。さらにこの水溶液をpH
1.5 に調整して０℃にて放置するとアスペルギロマラス
ミンＢが析出した（800mg)。純粋なアスペルギロマラス
ミンＡ及びＢを入手するために、さらに担体として陰イ
オン交換樹脂ＡＧ１ｘ２（バイオラッド社、200-400 メ
ッシュ）を用いた蟻酸による濃度勾配カラムクロマトグ
ラフィーにて精製した。溶出液の濃度勾配は最初蒸留水
より始めて、600 分後に2.0 規定濃度の蟻酸水溶液にな
るように設定した。アスペルギロマラスミンＡ及びＢの
画分を凍結乾燥して純粋なアスペルギロマラスミンＡ
(1.5g)及びアスペルギロマラスミンＢ（600mg)を得た。
こうして得られたアスペルギロマラスミンＡ及びＢの理
化学的データは下記のとおりであった。 アスペルギロマラスミンＡ：分解点 227〜237 ℃;[α]
D 20= −52°(c=1.0、0.2N NaOH); 元素分析値 C 38.74
% 、H 5.63% 、N,13.50%（計算値(C10H17O8N3)C 39.09%
、H 5.58% 、N 13.68%) アスペルギロマラスミンＢ：分解点 223〜233 ℃;[α]
D 20= −21°(c=1.0、0.2N NaOH); 元素分析値 C 38.52
% 、H 5.18% 、N 9.98% （計算値 (C9H14O8N2)C 38.85%
、H 5.07% 、N 10.07%)
【００１１】
製剤例：錠剤及びカプセル剤 下記表１の配合組成により常法に従って錠剤及びカプセ
ル剤を製造した。
ル剤を製造した。
【００１２】
【表１】 ─────────────────────────────── 重量（mg) 成分 錠剤 カプセル剤 ─────────────────────────────── アスペルギロマラスミンＡまたはＢ 7 4 トラガカント 10 - ラクトース 247.5 300 トウモロコシ澱粉 25 - 滑石 15 - ステアリン酸マグネシウム 2.5 - ───────────────────────────────
【００１３】
【試験例１】アスペルギロマラスミンＡおよびＢのエン
ドセリン変換酵素阻害活性を次のように測定した。エン
ドセリン変換酵素（ＥＣＥ）はウシ大動脈由来血管内皮
細胞ＢＥＣ−４より調製した。即ち、細胞を酵素調製用
緩衝液（50mM Na2HPO4(pH7.8) 20mlにＥ−64（t-エポキ
シスクシニル-L- ロイシルアミノ-(4-グアニジノ) ブタ
ン（シグマ社））0.71mg、ペプスタチンＡ（pepstatin
A （シグマ社））0.14mg、フルオロリン酸ジイソプロピ
ル（和光純薬）3.68mgを溶解する。）に懸濁し、氷冷下
ガラスホモジナイザーで破砕した。10,000×g 、20分遠
心分離して沈渣を得た。この沈渣に酵素調製用緩衝液を
加えさらに氷冷下で超音波破壊した。10,000×g 、20分
遠心分離して上清を得た後、この上清を100,000 ×g 、
１時間超遠心分離した。得られた沈渣を酵素調製用緩衝
液に懸濁して、この懸濁液を酵素液とした。阻害活性を
測定する試料を、200mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.0 、
緩衝液100ml に対してアクチノニン（シグマ社）385 μ
g 、ＰＣＭＳ（p-クロロマーキュリフェニルスルホン
酸) 、シグマ社）41.2mgを含む。）中に、ＥＣＥととも
に３７℃にて10分間置いた後、ビッグエンドセリン−１
を0.1 μM になるように添加して酵素反応を開始した。
反応溶液量は125 μl 、酵素量は５μg タンパク質で行
った。３７℃、４時間反応させた後、反応容器を沸騰水
に５分間つけて反応を止めた。酵素反応によって生じた
エンドセリン−１は酵素抗体法にて定量した。エンドセ
リン−１の定量は例えばＥＩＡ測定用キット（国際試薬
株式会社）を使用してできる。阻害率は次式（［無添加
時のエンドセリン−１生成量］−［試料添加した際のエ
ンドセリン−１生成量］）／（［無添加時のエンドセリ
ン−１生成量］）×１００（％）を用いて計算して求め
た。このようにしてアスペルギロマラスミンＡ及びＢの
各種濃度において阻害率を測定し、５０％の阻害効果を
示す濃度（ＩＣ50）を決定した。下記表２にその結果を
示す。
ドセリン変換酵素阻害活性を次のように測定した。エン
ドセリン変換酵素（ＥＣＥ）はウシ大動脈由来血管内皮
細胞ＢＥＣ−４より調製した。即ち、細胞を酵素調製用
緩衝液（50mM Na2HPO4(pH7.8) 20mlにＥ−64（t-エポキ
シスクシニル-L- ロイシルアミノ-(4-グアニジノ) ブタ
ン（シグマ社））0.71mg、ペプスタチンＡ（pepstatin
A （シグマ社））0.14mg、フルオロリン酸ジイソプロピ
ル（和光純薬）3.68mgを溶解する。）に懸濁し、氷冷下
ガラスホモジナイザーで破砕した。10,000×g 、20分遠
心分離して沈渣を得た。この沈渣に酵素調製用緩衝液を
加えさらに氷冷下で超音波破壊した。10,000×g 、20分
遠心分離して上清を得た後、この上清を100,000 ×g 、
１時間超遠心分離した。得られた沈渣を酵素調製用緩衝
液に懸濁して、この懸濁液を酵素液とした。阻害活性を
測定する試料を、200mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.0 、
緩衝液100ml に対してアクチノニン（シグマ社）385 μ
g 、ＰＣＭＳ（p-クロロマーキュリフェニルスルホン
酸) 、シグマ社）41.2mgを含む。）中に、ＥＣＥととも
に３７℃にて10分間置いた後、ビッグエンドセリン−１
を0.1 μM になるように添加して酵素反応を開始した。
反応溶液量は125 μl 、酵素量は５μg タンパク質で行
った。３７℃、４時間反応させた後、反応容器を沸騰水
に５分間つけて反応を止めた。酵素反応によって生じた
エンドセリン−１は酵素抗体法にて定量した。エンドセ
リン−１の定量は例えばＥＩＡ測定用キット（国際試薬
株式会社）を使用してできる。阻害率は次式（［無添加
時のエンドセリン−１生成量］−［試料添加した際のエ
ンドセリン−１生成量］）／（［無添加時のエンドセリ
ン−１生成量］）×１００（％）を用いて計算して求め
た。このようにしてアスペルギロマラスミンＡ及びＢの
各種濃度において阻害率を測定し、５０％の阻害効果を
示す濃度（ＩＣ50）を決定した。下記表２にその結果を
示す。
【００１４】
【表２】
【００１５】
【試験例２】 ビッグエンドセリン−１の静脈内投与によって誘発され
るマウスの致死に対する予防効果 （試験方法）６−７週令の雄性ＩＣＲマウスを無麻酔下
で用いた。生理食塩水（溶媒コントロール）または薬物
を溶解した溶液（１−20mmol/lの水酸化ナトリウム溶液
を少量加えた生理食塩水) を50μl/10g 体重の容量でマ
ウスの尾静脈内に投与し、その５分後にビッグエンドセ
リン−１（ペプチド研究所）の27.5nmol/kg を同容量の
生理食塩水に溶解して静脈内投与した。ビッグエンドセ
リン−１を投与直後から60分間観察を行い、動物が死亡
するまでの潜時（秒) を測定した。ビッグエンドセリン
−１投与後60分間で死亡しなかったマウスの潜時は3600
秒とした。 （試験成績）下記表３に成績を示す。アスペルギロマラ
スミンＡ及びＢはいずれもビッグエンドセリン−１によ
る死亡までの潜時の延長作用を示した。このことは、in
vivo においてもアスペルギロマラスミンＡ及びＢによ
り、ビッグエンドセリン−１からエンドセリン−１への
変換が阻害されていることを示す。
るマウスの致死に対する予防効果 （試験方法）６−７週令の雄性ＩＣＲマウスを無麻酔下
で用いた。生理食塩水（溶媒コントロール）または薬物
を溶解した溶液（１−20mmol/lの水酸化ナトリウム溶液
を少量加えた生理食塩水) を50μl/10g 体重の容量でマ
ウスの尾静脈内に投与し、その５分後にビッグエンドセ
リン−１（ペプチド研究所）の27.5nmol/kg を同容量の
生理食塩水に溶解して静脈内投与した。ビッグエンドセ
リン−１を投与直後から60分間観察を行い、動物が死亡
するまでの潜時（秒) を測定した。ビッグエンドセリン
−１投与後60分間で死亡しなかったマウスの潜時は3600
秒とした。 （試験成績）下記表３に成績を示す。アスペルギロマラ
スミンＡ及びＢはいずれもビッグエンドセリン−１によ
る死亡までの潜時の延長作用を示した。このことは、in
vivo においてもアスペルギロマラスミンＡ及びＢによ
り、ビッグエンドセリン−１からエンドセリン−１への
変換が阻害されていることを示す。
【００１６】
【表３】 ──────────────────────────────── 投与量 致死予防作用 投与群 mg/kg iv 潜時延長(%) ──────────────────────────────── アスペルギロマラスミンＡ 10 74.5 * 50 162.1 ** アスペルギロマラスミンＢ 10 94.5 * 50 150.9 ** ──────────────────────────────── * : コントロール群に比べて有意(P<0.05) ** : コントロール群に比べて有意(P<0.01)
【００１７】
【試験例３】 急性毒性試験 アスペルギロマラスミンＡ及びＢをラットに静脈内投与
したところ、そのLD50値は、それぞれ250mg/kg及び660m
g/kgであった。
したところ、そのLD50値は、それぞれ250mg/kg及び660m
g/kgであった。
【００１８】
【発明の効果】本発明のアスペルギロマラスミンＡ、ア
スペルギロマラスミンＢ、それらの生理学的に許容しう
る塩またはそれらの混合物を有効成分として含有するエ
ンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症予防及
び治療剤は、安全性が高く、かつ高度なエンドセリン変
換酵素阻害活性を有する。
スペルギロマラスミンＢ、それらの生理学的に許容しう
る塩またはそれらの混合物を有効成分として含有するエ
ンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症予防及
び治療剤は、安全性が高く、かつ高度なエンドセリン変
換酵素阻害活性を有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/195 ＡＣＦ 9283−4Ｃ Ｃ０７Ｃ 229/26 8930−4Ｈ (72)発明者 芦沢 直樹 静岡県焼津市岡当目10番地 サッポロビー ル株式会社医薬開発研究所内 (72)発明者 松浦 昭宏 静岡県焼津市岡当目10番地 サッポロビー ル株式会社医薬開発研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 アスペルギロマラスミンＡ、アスペルギ
ロマラスミンＢ、それらの生理学的に許容しうる塩また
はそれらの混合物を有効成分として含有するエンドセリ
ン変換酵素阻害剤。 - 【請求項２】 アスペルギロマラスミンＡ、アスペルギ
ロマラスミンＢ、それらの生理学的に許容しうる塩また
はそれらの混合物を有効成分として含有する高エンドセ
リン症予防及び治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34653092A JPH06192081A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | エンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34653092A JPH06192081A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | エンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06192081A true JPH06192081A (ja) | 1994-07-12 |
Family
ID=18384052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34653092A Pending JPH06192081A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | エンドセリン変換酵素阻害剤及び高エンドセリン症治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06192081A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016520582A (ja) * | 2013-05-07 | 2016-07-14 | マクマスター ユニバーシティー | メタロβラクタマーゼの阻害剤 |
| CN106518702A (zh) * | 2015-09-10 | 2017-03-22 | 北京大学 | 曲霉明素a及其衍生物、合成方法与应用 |
-
1992
- 1992-12-25 JP JP34653092A patent/JPH06192081A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016520582A (ja) * | 2013-05-07 | 2016-07-14 | マクマスター ユニバーシティー | メタロβラクタマーゼの阻害剤 |
| US10016383B2 (en) | 2013-05-07 | 2018-07-10 | Mcmaster University | Inhibitors of metallo-β-lactamase-enzymes |
| JP2018154654A (ja) * | 2013-05-07 | 2018-10-04 | マクマスター ユニバーシティー | メタロβラクタマーゼの阻害剤 |
| CN106518702A (zh) * | 2015-09-10 | 2017-03-22 | 北京大学 | 曲霉明素a及其衍生物、合成方法与应用 |
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