JPH06172219A - 癌関連医薬品組成物 - Google Patents
癌関連医薬品組成物Info
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- JPH06172219A JPH06172219A JP4329414A JP32941492A JPH06172219A JP H06172219 A JPH06172219 A JP H06172219A JP 4329414 A JP4329414 A JP 4329414A JP 32941492 A JP32941492 A JP 32941492A JP H06172219 A JPH06172219 A JP H06172219A
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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Abstract
(57)【要約】
【目的】ムチン型糖鎖を認識する抗体により癌関連抗原
を特異的に検出する。 【構成】Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮ
Ａｃα１→１Ｃｅｒで表される糖脂質を認識するモノク
ローナル抗体Ｆ１α−７５を含有する、胃癌に対する医
薬品組成物。
を特異的に検出する。 【構成】Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮ
Ａｃα１→１Ｃｅｒで表される糖脂質を認識するモノク
ローナル抗体Ｆ１α−７５を含有する、胃癌に対する医
薬品組成物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、糖鎖を認識する抗体を
含有する、癌に関する医薬品組成物に関するものであ
る。
含有する、癌に関する医薬品組成物に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】細胞が癌化すると、正常細胞では見られ
ないような糖鎖が癌細胞表面に検出されることが報告さ
れている。
ないような糖鎖が癌細胞表面に検出されることが報告さ
れている。
【０００３】一方、癌の診断や治療に役立つ抗体を得る
という実用的な目的で作製された抗体のうちには、癌細
胞の異常糖鎖を認識するものが数多く存在し、その一部
は、癌の血清診断に応用されている。しかしながらこれ
らの抗体の多くは、ヒトの癌細胞でマウスを免疫すると
いう方法で得られており、最初から必ずしも一定の糖鎖
をターゲットとしたものではない。
という実用的な目的で作製された抗体のうちには、癌細
胞の異常糖鎖を認識するものが数多く存在し、その一部
は、癌の血清診断に応用されている。しかしながらこれ
らの抗体の多くは、ヒトの癌細胞でマウスを免疫すると
いう方法で得られており、最初から必ずしも一定の糖鎖
をターゲットとしたものではない。
【０００４】このように、癌の糖鎖抗原をいわゆる腫瘍
マーカーとして診断や治療に役立てる方法論が近年活発
になってきているが、いまだ十分な感度と特異性をもつ
腫瘍マーカーはないのが現状である。
マーカーとして診断や治療に役立てる方法論が近年活発
になってきているが、いまだ十分な感度と特異性をもつ
腫瘍マーカーはないのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】糖鎖抗原のうち、本発
明者らは、糖蛋白質の糖鎖，特にムチン型糖鎖に着目し
てきた。これらは細胞表層に存在するのみならず分泌さ
れることも知られておりその癌性変化についても報告さ
れている。すなわち、癌特異的なムチン型糖鎖に対する
抗体が得られれば、その抗体が癌関連抗原を特異的に認
識することが期待されるが、糖蛋白質を抗原としてモノ
クローナル抗体を作製すると、蛋白質部分に対する抗体
が得られ、特定のムチン型糖鎖に対する抗体を得ること
は困難であった。
明者らは、糖蛋白質の糖鎖，特にムチン型糖鎖に着目し
てきた。これらは細胞表層に存在するのみならず分泌さ
れることも知られておりその癌性変化についても報告さ
れている。すなわち、癌特異的なムチン型糖鎖に対する
抗体が得られれば、その抗体が癌関連抗原を特異的に認
識することが期待されるが、糖蛋白質を抗原としてモノ
クローナル抗体を作製すると、蛋白質部分に対する抗体
が得られ、特定のムチン型糖鎖に対する抗体を得ること
は困難であった。
【０００６】このように、糖蛋白質のムチン型糖鎖を認
識する抗体により癌関連抗原を特異的に認識せしめるこ
とは困難なことであった。そのため本発明者らは、糖蛋
白質のムチン型糖鎖とセラミドを結合させた合成糖脂質
誘導体を認識する抗体を作製し、これらの抗体が糖脂質
誘導体と特異的に反応することを確認した（特開平３−
２８０８９４号公報参照）。
識する抗体により癌関連抗原を特異的に認識せしめるこ
とは困難なことであった。そのため本発明者らは、糖蛋
白質のムチン型糖鎖とセラミドを結合させた合成糖脂質
誘導体を認識する抗体を作製し、これらの抗体が糖脂質
誘導体と特異的に反応することを確認した（特開平３−
２８０８９４号公報参照）。
【０００７】しかしながら、これらの抗体が実際に癌を
特異的に認識するかどうかについては不明であり、これ
らの抗体が癌の診断や治療に有用かどうかについては検
討されていなかった。
特異的に認識するかどうかについては不明であり、これ
らの抗体が癌の診断や治療に有用かどうかについては検
討されていなかった。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗体と癌
組織との反応性について鋭意検討した結果、ある種のム
チン型糖鎖を認識する抗体が癌組織を特異的に認識する
ことを見出だし本発明を完成するにいたった。
組織との反応性について鋭意検討した結果、ある種のム
チン型糖鎖を認識する抗体が癌組織を特異的に認識する
ことを見出だし本発明を完成するにいたった。
【０００９】即ち本発明は、式（１） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃ （１） で表されるムチン型糖鎖を認識する抗体を、有効成分と
して含有することを特徴とする、癌に関する医薬品組成
物である。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
して含有することを特徴とする、癌に関する医薬品組成
物である。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１０】本発明でいう医薬品組成物とは、例えば癌
の診断薬、治療薬などがあげられる。癌の診断薬として
は、抗体を用いたあらゆる方法に適用することができ
る。例えばサンドイッチ法や競合法による酵素免疫測定
法（ＥＬＩＳＡ）または放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、
さらにサイトフルオロメトリック分析（ＦＡＣＳ）を用
いる方法などがあげられる。
の診断薬、治療薬などがあげられる。癌の診断薬として
は、抗体を用いたあらゆる方法に適用することができ
る。例えばサンドイッチ法や競合法による酵素免疫測定
法（ＥＬＩＳＡ）または放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、
さらにサイトフルオロメトリック分析（ＦＡＣＳ）を用
いる方法などがあげられる。
【００１１】診断の形態としては、血液や尿などの体液
中の癌関連抗原の検出（例えば血清診断）、組織や細胞
の癌関連抗原の検出（例えば組織診断や細胞診断な
ど）、さらには、放射性同位元素などで標識した抗体を
体内に投与し腫瘍の検出に用いる方法などをあげること
ができる。
中の癌関連抗原の検出（例えば血清診断）、組織や細胞
の癌関連抗原の検出（例えば組織診断や細胞診断な
ど）、さらには、放射性同位元素などで標識した抗体を
体内に投与し腫瘍の検出に用いる方法などをあげること
ができる。
【００１２】癌の治療薬としては、やはり抗体を用いた
あらゆる方法に適用することができる。例えば抗体をそ
のまま、または毒素や放射性同位元素など細胞毒性を示
す物質と結合させて治療薬として体内に投与する方法な
どを例示することができる。
あらゆる方法に適用することができる。例えば抗体をそ
のまま、または毒素や放射性同位元素など細胞毒性を示
す物質と結合させて治療薬として体内に投与する方法な
どを例示することができる。
【００１３】本発明に用いられる抗体としては、式
（１）で表される糖鎖を認識する抗体であり、例えば式
（２）で表される糖脂質を認識する、特開平３−２８０
８９４号公報に記載のモノクローナル抗体Ｆ１α−７
５、Ｆ１α−５０またはＦ１α−８７などをあげること
ができる。
（１）で表される糖鎖を認識する抗体であり、例えば式
（２）で表される糖脂質を認識する、特開平３−２８０
８９４号公報に記載のモノクローナル抗体Ｆ１α−７
５、Ｆ１α−５０またはＦ１α−８７などをあげること
ができる。
【００１４】本発明の抗体の調製法としては、従来の方
法と遺伝子工学を用いる方法が例示される。従来法では
モノクローナルとポリクローナル抗体に区別される。
法と遺伝子工学を用いる方法が例示される。従来法では
モノクローナルとポリクローナル抗体に区別される。
【００１５】モノクローナル抗体は、ケーラー（Ｋｏｈ
ｌｅｒ，Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９
５−４９７（１９７５））に従い、動物を抗原で免疫
し、脾臓細胞を取りだし、これと動物のミエローマ細胞
とを融合して得られたハイブリドーマ細胞を培養するこ
とにより製造することができる。
ｌｅｒ，Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９
５−４９７（１９７５））に従い、動物を抗原で免疫
し、脾臓細胞を取りだし、これと動物のミエローマ細胞
とを融合して得られたハイブリドーマ細胞を培養するこ
とにより製造することができる。
【００１６】例えば本発明に用いられる抗体を産生する
ハイブリドーマの取得方法としては、特開平３−２８０
８９４号公報に記載された方法をあげることができる。
得られたハイブリドーマを通常のハイブリドーマの培養
と同様にして培養すれば、培養液中に抗体が生産され
る。また、マウス等にハイブリドーマを移植し、腹水中
にモノクローナル抗体を生産させることもできる。
ハイブリドーマの取得方法としては、特開平３−２８０
８９４号公報に記載された方法をあげることができる。
得られたハイブリドーマを通常のハイブリドーマの培養
と同様にして培養すれば、培養液中に抗体が生産され
る。また、マウス等にハイブリドーマを移植し、腹水中
にモノクローナル抗体を生産させることもできる。
【００１７】ポリクローナル抗体についても、常法に従
って式（２）で表される糖脂質を免疫し、その抗血清を
得ればよい。
って式（２）で表される糖脂質を免疫し、その抗血清を
得ればよい。
【００１８】また遺伝子工学を用いる方法では、式
（２）で表される糖脂質をマウスに免疫し、脾臓細胞を
取りだし、ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡライブラリーを作
製し、抗原との結合性を指標として目的の遺伝子を単離
する。そして抗体発現ベクターを導入した微生物や動物
細胞を培養し、抗体を生産させ、通常の方法で精製すれ
ばよい。
（２）で表される糖脂質をマウスに免疫し、脾臓細胞を
取りだし、ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡライブラリーを作
製し、抗原との結合性を指標として目的の遺伝子を単離
する。そして抗体発現ベクターを導入した微生物や動物
細胞を培養し、抗体を生産させ、通常の方法で精製すれ
ばよい。
【００１９】このように本発明に用いられる抗体は、天
然型の抗体だけでなく、遺伝子工学や蛋白質化学的方法
を用いて作製された人工型の抗体でもよい。遺伝子工学
的方法を用いて作製された人工型の抗体の例として、抗
原との結合に必要な可変領域はマウス由来で、抗原との
結合に不必要な不変領域はヒト由来の構造を持つキメラ
抗体が例示される。
然型の抗体だけでなく、遺伝子工学や蛋白質化学的方法
を用いて作製された人工型の抗体でもよい。遺伝子工学
的方法を用いて作製された人工型の抗体の例として、抗
原との結合に必要な可変領域はマウス由来で、抗原との
結合に不必要な不変領域はヒト由来の構造を持つキメラ
抗体が例示される。
【００２０】このような抗体の作製方法は、それ自体当
分野において良く知られた方法により行うことができ
る。
分野において良く知られた方法により行うことができ
る。
【００２１】また、蛋白質化学的方法を用いて作製され
た人工型の抗体の例として、パパインやペプシンなどの
酵素により抗体分子を切断し、調製されるＦａｂなどフ
ラグメント化されたものがあげられる。さらに、ＮＫ細
胞やＬＡＫ細胞などの抗腫瘍性細胞を認識する抗体と結
合させたいわゆるＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ抗体の一部とし
て調製することも可能である。
た人工型の抗体の例として、パパインやペプシンなどの
酵素により抗体分子を切断し、調製されるＦａｂなどフ
ラグメント化されたものがあげられる。さらに、ＮＫ細
胞やＬＡＫ細胞などの抗腫瘍性細胞を認識する抗体と結
合させたいわゆるＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ抗体の一部とし
て調製することも可能である。
【００２２】本発明で用いられる式（１）で表される糖
鎖を認識する抗体は、癌に関する医薬品として利用され
るが、特に消化器系の癌に対する医薬品組成物として利
用される。中でも胃癌に対しては、非常に高い陽性率を
示すので、特に胃癌に対する医薬品組成物として有用で
ある。
鎖を認識する抗体は、癌に関する医薬品として利用され
るが、特に消化器系の癌に対する医薬品組成物として利
用される。中でも胃癌に対しては、非常に高い陽性率を
示すので、特に胃癌に対する医薬品組成物として有用で
ある。
【００２３】
【実施例】以下に本発明をさらに詳細に説明するために
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
【００２４】なお実施例では、特開平３−２８０８９４
号公報に記載の方法で得た、式（２）で表される糖脂質
を免疫して得られたモノクローナル抗体Ｆ１α−７５を
用いた。
号公報に記載の方法で得た、式（２）で表される糖脂質
を免疫して得られたモノクローナル抗体Ｆ１α−７５を
用いた。
【００２５】実施例１ 糖脂質を認識するモノクローナ
ル抗体の胃癌組織の認識 モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の胃癌組織に対する反
応性を、胃癌組織切片に対する免疫組織染色の手法を用
いて調べた。癌組織としては、胃癌患者から摘出した癌
組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた免疫組
織染色の実験は、以下のように行った。
ル抗体の胃癌組織の認識 モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の胃癌組織に対する反
応性を、胃癌組織切片に対する免疫組織染色の手法を用
いて調べた。癌組織としては、胃癌患者から摘出した癌
組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた免疫組
織染色の実験は、以下のように行った。
【００２６】即ち切除組織標本を１０％ホルマリン固定
後、パラフィン包埋したブロックから３μｍの薄片切片
を作製した。切片は脱パラフィン後、０．３％過酸化水
素付加メタノールで内因性パーオキシダーゼを除去し
た。被検抗体を含む試料を常温で約１時間反応させた
後、切片をＬｉｐｓｈａｗ／Ｉｍｍｕｎｏｎ社製ＡＢＣ
キットを用いる酵素抗体法の手順に従って処理し、カウ
ンター染色はヘマトキシリンを使用した。
後、パラフィン包埋したブロックから３μｍの薄片切片
を作製した。切片は脱パラフィン後、０．３％過酸化水
素付加メタノールで内因性パーオキシダーゼを除去し
た。被検抗体を含む試料を常温で約１時間反応させた
後、切片をＬｉｐｓｈａｗ／Ｉｍｍｕｎｏｎ社製ＡＢＣ
キットを用いる酵素抗体法の手順に従って処理し、カウ
ンター染色はヘマトキシリンを使用した。
【００２７】組織染色性の評価は、癌組織が全く染色さ
れない；（−）、染色される面積が５％以下；（＋）、
染色される面積が５〜３０％；（＋＋）、染色される面
積が３０％以上；（＋＋＋）とした。
れない；（−）、染色される面積が５％以下；（＋）、
染色される面積が５〜３０％；（＋＋）、染色される面
積が３０％以上；（＋＋＋）とした。
【００２８】胃癌８１症例について検討した結果は、以
下の通りであった。正常胃組織は染色されず、胃癌組織
においては、（−）；２１．０％、（＋）；２９．６
％、（＋＋）；２９．６％、（＋＋＋）；１９．８％で
あり、全体としての陽性率は、７９．０％であった。さ
らに癌に隣接した粘膜上皮では２７．０％が染色され、
これらの組織がある程度癌に近い状態であることを示し
ている。
下の通りであった。正常胃組織は染色されず、胃癌組織
においては、（−）；２１．０％、（＋）；２９．６
％、（＋＋）；２９．６％、（＋＋＋）；１９．８％で
あり、全体としての陽性率は、７９．０％であった。さ
らに癌に隣接した粘膜上皮では２７．０％が染色され、
これらの組織がある程度癌に近い状態であることを示し
ている。
【００２９】胃癌の組織型別検討では、低分化腺癌での
陽性率が最も高く９２．１％、中分化管状腺癌；７６．
５％、乳頭状腺癌；６３．６％、高分化管状腺癌；５
７．１％であった。
陽性率が最も高く９２．１％、中分化管状腺癌；７６．
５％、乳頭状腺癌；６３．６％、高分化管状腺癌；５
７．１％であった。
【００３０】早期胃癌における陽性率は、５８．３％
で、進行胃癌では、７９．２％であった。
で、進行胃癌では、７９．２％であった。
【００３１】このようにモノクローナル抗体Ｆ１α−７
５は正常胃組織とは反応せず、胃癌に対し、組織型、進
行の程度を問わず、高い陽性率を示すものであった。
５は正常胃組織とは反応せず、胃癌に対し、組織型、進
行の程度を問わず、高い陽性率を示すものであった。
【００３２】実施例２ モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の大腸癌組織の認識 モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の大腸癌組織に対する
反応性を、大腸癌組織切片に対する免疫組織染色の手法
を用いて調べた。癌組織としては、大腸癌患者から摘出
した癌組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた
免疫組織染色の実験は、実施例１で用いた方法と同様で
ある。
反応性を、大腸癌組織切片に対する免疫組織染色の手法
を用いて調べた。癌組織としては、大腸癌患者から摘出
した癌組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた
免疫組織染色の実験は、実施例１で用いた方法と同様で
ある。
【００３３】大腸癌７８症例について検討した結果は以
下の通りであった。（評価の表示は、実施例１と同様で
ある。） 正常大腸組織は染色されず、大腸癌組織においては
（−）；６１．６％、（＋）；２０．５％、（＋＋）；
１６．４％、（＋＋＋）；１．４％であり、全体として
の陽性率は、３８．４％であった。
下の通りであった。（評価の表示は、実施例１と同様で
ある。） 正常大腸組織は染色されず、大腸癌組織においては
（−）；６１．６％、（＋）；２０．５％、（＋＋）；
１６．４％、（＋＋＋）；１．４％であり、全体として
の陽性率は、３８．４％であった。
【００３４】大腸癌の組織型別検討では、陽性率は高分
化腺癌；４３．５％、中分化腺癌；３０．０％であっ
た。
化腺癌；４３．５％、中分化腺癌；３０．０％であっ
た。
【００３５】このようにモノクローナル抗体Ｆ１α−７
５は、正常大腸組織とは反応せず、大腸癌に対し高い反
応性を示した。
５は、正常大腸組織とは反応せず、大腸癌に対し高い反
応性を示した。
【００３６】実施例３ モノクローナル抗体Ｆ１α−７
５の膵癌組織の認識 モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の膵癌組織に対する反
応性を、膵癌組織切片に対する免疫組織染色の手法を用
いて調べた。癌組織としては、膵癌患者から摘出した癌
組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた免疫組
織染色の実験は、実施例１で用いた方法と同様である。
５の膵癌組織の認識 モノクローナル抗体Ｆ１α−７５の膵癌組織に対する反
応性を、膵癌組織切片に対する免疫組織染色の手法を用
いて調べた。癌組織としては、膵癌患者から摘出した癌
組織切片を実験試料として用いた。抗体を用いた免疫組
織染色の実験は、実施例１で用いた方法と同様である。
【００３７】結果は、膵癌７症例のうち４症例の組織切
片に対し、癌組織特異的な染色反応が見られた。陽性率
は、５７．１％であった。
片に対し、癌組織特異的な染色反応が見られた。陽性率
は、５７．１％であった。
【００３８】以上の結果から明らかなように、式（１）
で表されるムチン型糖鎖を認識する抗体が癌組織を特異
的に認識することが示され、本抗体が癌の診断薬や治療
薬として有用であることが理解される。
で表されるムチン型糖鎖を認識する抗体が癌組織を特異
的に認識することが示され、本抗体が癌の診断薬や治療
薬として有用であることが理解される。
【００３９】
【発明の効果】式（１）で表されるムチン型糖鎖を認識
する抗体を含有する医薬品組成物は、癌の診断や治療に
有用な手段を提供するものである。
する抗体を含有する医薬品組成物は、癌の診断や治療に
有用な手段を提供するものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 斎藤 貴司 神奈川県中郡大磯町石神台１−５−９ (72)発明者 村山 敬一 神奈川県海老名市河原口2398番地
Claims (4)
- 【請求項１】式（１） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃ （１） で表されるムチン型糖鎖を認識する抗体を、有効成分と
して含有することを特徴とする、癌に関する医薬品組成
物。 - 【請求項２】請求項１に記載の医薬品組成物において、
ムチン型糖鎖が式（２） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅr （２） であることを特徴とする医薬品組成物。 - 【請求項３】請求項１または２に記載の医薬品組成物に
おいて、癌が消化器癌であることを特徴とする医薬品組
成物。 - 【請求項４】請求項３に記載の医薬品組成物において、
消化器癌が胃癌であることを特徴とする医薬品組成物。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4329414A JPH06172219A (ja) | 1992-12-09 | 1992-12-09 | 癌関連医薬品組成物 |
| EP93309918A EP0601859B1 (en) | 1992-12-09 | 1993-12-09 | Pharmaceutic composition comprising cancer-related antibodies |
| DE69324776T DE69324776T2 (de) | 1992-12-09 | 1993-12-09 | Pharmazeutische Zusammensetzung die krebserkennende Antikörper enthält |
| US08/432,005 US5561050A (en) | 1992-12-09 | 1995-05-01 | Methods for diagnosis of colon, stomach and pancreatic cancer using antibodies specific for a mucin-type carbohydrate chain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4329414A JPH06172219A (ja) | 1992-12-09 | 1992-12-09 | 癌関連医薬品組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06172219A true JPH06172219A (ja) | 1994-06-21 |
Family
ID=18221140
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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