JPH0616702B2 - 高分子化セレン含有菌体の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ 本発明は、高分子化セレン含有菌体の製造法に関し、本
発明で得られる高分子化セレン含有菌体は動物用飼料、
餌料または食品等に添加せしめることによりヒトまたは
動物のセレン欠乏症の予防等に利用できる。

＜従来の技術＞ セレンは原子番号３４、原子量７９の元素であり、以前
は元素としては単に生体に有害なものとしてのみ知られ
ていたが、１９５７年にＳｃｈｗａｒｚらが初めてセレ
ン（以下、セレンとは元素セレンを示す）に生理的な役
割があることを発表し（J.Am.Chem.Soc.,79:3292,195
7）、有毒であるとともに使用法によっては生体内の有
効成分になることが判明した。それ以来セレンの生体内
における有用性が注目されてきており、その後Ｓｃｏｔ
ｔらの研究によりビタミンＥの欠乏による家畜の障害で
ある子牛等の白筋症、豚の肝臓ネフローゼ、筋肉の発育
異常等の防止にセレンが有効であることが認められ（Fe
edstuffs.29,41,20(1957))、１９６９年にはＴｈｏｍｐ
ｓｏｎとＳｃｏｔｔらによりセレンそのものが動物にと
って必須の元素であることが証明され（J.Nutr.,97:33
5,1969）、ヒトでも必須元素であることは間違いないと
された。

現在までに多くの種でセレン欠乏症が知られておりオー
ストラリアやニュージーランドではセレンを鉱物塩また
は肥料に加えるか配合飼料の補助剤として用いている。
また、セレン単独またはセレンとビタミン混合物として
世界中のセレン欠乏地域において広範に使用されてお
り、その後も１９７２年にはセレンがグルタチオンパー
オキシダーゼの構成成分であることが発表され、１９７
４年米国ＦＤＡでセレンの飼料添加が認可される等、セ
レンの生理学的な研究がより活発になされてきている。

一方、供給源を無機セレンとしてではなく有機化したセ
レンとする報告としては、セレンとアミノ酸の結合体に
関する報告やセレンを含有する微生物の供給に関する報
告がされている。例えば米国特許第４５３０８４６号の
セレン酵母の製造法等が挙げられ、また、日本国内では
安全性の面から飼料，食品等へ無機セレンのまま添加す
ることは認可されていない状況下、いくつかの有機化セ
レンに関する報告がされている。例えば特公昭５５−３
６３１４号は、予め微生物の生育を著しく阻害しない水
溶性無機セレン化合物を添加した培地で、セレンを菌体
内に蓄積することのできる微生物を培養・増殖させるこ
とにより有機化されたセレン含有微生物菌体を得る製造
法であり、さらに特開昭５７−１７４０９８号はセレン
化合物を添加した培地で培養して得たセレン含有酵母菌
体から生理活性含セレン蛋白多糖体を得る方法であり、
特開昭６０−１８０５８２号はセレン化合物を含有する
培地で培養することによりＬ−セレノシステインを蓄積
できる細菌を報告している。また、その他にも合成法に
よるセレン結合蛋白質の製造法等も報告されている。さ
らに特開昭６０−２２４４５１号は、予め無機セレンを
添加した培地で微生物を培養・増殖させることにより得
た有機化セレン含有微生物菌体を家畜・家禽用飼料に添
加した飼料組成物を報告している。

＜発明が解決しようとする問題点＞ 上述の、無機セレンを有機化セレンとする方法は、いづ
れも予め無機セレンを添加させた培地で微生物を培養・
増殖せしめることにより有機化セレン含有菌体を得てい
る。この場合、菌体にセレンを取込ませるに当たって無
機セレンの存在下に微生物の増殖をも行わせてセレンを
有機化するが、添加するセレンが無機セレンであること
から微生物の生育が無機セレンの毒性により生育阻害を
受けるため、無機セレン濃度は該微生物の生育を著しく
阻害しない最低限度量に当然制限されなければならな
い。また、添加するセレン濃度を微生物の生育を著しく
阻害しない最低限度量にしても、やはり何らセレンを添
加しない通常の培地で培養・増殖させる場合に比べると
菌体増殖に長時間を要し増殖率も極めて悪く、また菌体
のセレン取込み効率も悪く、したがって有機化セレン含
有菌体の収率は極めて低くなる。さらに、微生物の生育
を阻害しない最低限度量である低濃度のセレン添加に制
限されることにより、培地中のセレン濃度を常に測定し
つつ目的濃度まで複数回に渡って添加しなければならな
いという繁雑な培養工程を行う必要性もあり、そのよう
に培養を行っても、菌体濃度に限界があることから菌体
内に取込まれずに培養上清に残存する無機セレン濃度が
高くなり、廃液処理時に培養上清に残存する無機セレン
を除去する作業が必要となる。また、培養上清中には他
にも種々成分が混在することから、無機セレンを除去す
るためには極めて煩雑な操作が必要であり、したがって
コストアップにもつながっていた。

＜問題点を解決するための手段＞ 本発明者らは、上記の問題点を解決すべく鋭意研究を行
ったところ、有機化されたセレン、即ち高分子化セレン
を菌体内に蓄積することのできる微生物を、予め実質的
にセレンを添加しない培地で適宜培養・増殖させ、その
後菌体を集菌し、必要に応じて水洗して培養培地成分を
除去した後、菌体の培養・増殖を必要としない条件、好
ましくは菌体濃度をバイロジカルスペース以上になるよ
うに、該菌体をセレンの高分子化基質となり得る有機化
合物である糖および／またはアミノ酸と必要に応じリン
酸塩ならびに水溶性無機セレン化合物を含有する水溶液
に分散せしめることにより、意外にも実質的に菌体の培
養・増殖を必要とせずにセレンが効率的に菌体内に取り
込まれ蛋白質等と結合されて高分子化セレンとなり、菌
体内に安定に多量の高分子化セレンを蓄積せしめること
が可能であることを見出し、以上から新規な高分子化セ
レン含有菌体の製造法を確立するに至った。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたもので、即
ち、高分子化セレンを菌体内に蓄積することのできる微
生物を培養して得た菌体を、バイオロジカルスペース以
上の菌体濃度となるようにセレンの高分子化基質である
有機化合物および水溶性無機セレン化合物を含有する水
溶液に分散せしめることにより、該菌体に高分子化セレ
ンを蓄積せしめることを特徴とする高分子化セレン含有
菌体の製造法である。

本発明において、菌体をセレンの高分子化基質となり得
る有機化合物および水溶性無機セレン化合物を含有する
水溶液（以下、反応液ということがある）に分散せしめ
ることにより菌体に高分子化セレンが蓄積される過程を
推定すれば、まずセレンの高分子化基質となり得るとし
た有機化合物である糖および／またはアミノ酸等が、菌
体の培養・増殖を必要としない状態、好ましくはバイオ
ロジカルスペース濃度以上に調製されて分散された菌体
に接触して菌体内でエネルギーを発生させる基質とな
り、水溶性無機セレン化合物中のセレンを菌体内に取込
む現象を活性化させるためのエネルギー源を与えると推
測される。言い換えれば、菌体が反応液に分散されて反
応液中の糖やアミノ酸等のエネルギー基質を基に菌体内
反応機構である高エネルギーリン酸化合物合成機構が働
くことにより生成されるエネルギーを利用して、菌体内
にセレンを取込ませる反応を触発せしめると推測され
る。高エネルギーリン酸化合物にはアデノシン三リン酸
（ＡＴＰ），ウリジン三リン酸（ＵＴＰ），グアノシン
三リン酸（ＧＴＰ），シチジン三リン酸（ＣＴＰ）があ
るが、本発明で利用されているエネルギーは上記のいづ
れであってもよい。主に糖および／またはアミノ酸を基
質として菌体内で合成されたそれらは、まずセレンが菌
体細胞膜を透過するために利用され、さらに細胞膜を透
過したセレンが菌体内に取り込まれて菌体内蛋白質と結
合して高分子化セレンに変換される迄の反応を通して有
効に利用されると推測するが、本発明は何らこれらによ
って限定されるものではない。

本発明の製造法の目的は、予めセレンを添加しない実質
的にセレンを含有しない培地で菌体を培養・増殖させる
ため、培養時にセレンによる生育阻害が無く、従来技術
にある予めセレンを添加させた培地で培養・増殖させる
場合に比すと菌体の増殖速度が早く、また増殖率も優れ
ている方法を提供する。

また、本発明は菌体を培地で充分培養・増殖させ、集菌
後に反応液へ該菌体を分散させるため、菌体を濃縮化す
ることが可能であることから反応系を小さくでき、した
がって反応後の廃液を少量化することができ、また、反
応液中にセレン以外の金属を含まないため廃液処理を簡
便にする方法を提供する。

さらに、本発明は菌体を適宜増殖させ、集菌後に水洗し
て培養培地成分を除去した後菌体濃度を好ましくはバイ
オロジカルスペース以上となるように調製して培養・増
殖を停止させるため、当然反応せしめる際には菌体増殖
の必要は無く、菌体増殖阻害を生ずるセレンを反応液中
で高濃度にすることが可能であり、かつ菌体内に取込ま
せ蓄積できる高分子化セレン濃度も高く、高濃度の高分
子化セレンを含有した菌体を製造することを提供する。

以下に本発明を詳細に説明する。

まず、使用する微生物菌体に関しては、菌体内にセレン
を透過・吸収して高分子化セレンを蓄積し、高分子化セ
レン含有菌体となりうることが可能な微生物菌体であれ
ば広く対象とすることができる。このような菌体は、セ
レンの高分子化基質である有機化合物および水溶性セレ
ン化合物を含有する水溶液の条件下にてセレンを菌体内
に取込み蛋白質等と結合させ、菌体内反応機構により無
機セレンを高分子セレンに変換し得るものと推測され
る。また、特に本発明で得られるセレン含有菌体は、動
物用飼料や餌料に添加して動物に給与したり、食品へ添
加することが主に期待されるため、使用する微生物菌体
は可食性であることが好ましい。

上記の微生物に該当するものとしては、酵母，細菌，カ
ビ，単細胞緑藻等が挙げられる。酵母では各種の食品製
造に用いられ安全性が認められているものとしてビール
酵母，日本酒用酵母，パン酵母，アルコール酵母，ワイ
ン酵母等で知られている例えばサッカロミセス属に属す
る酵母が挙げられ、特に好ましくはサッカロミセス・セ
レビシェ（Saccharomyces cerevisiae）に属する酵母で
あり、また、みそ・醤油等に用いられるものして例えば
サッカロミセス・ロキシ（Saccharomycesrouxii）やチ
ゴサッカロミセス・エスピー（Zygosaccharomyces s
p.）に属する酵母等、その他にもハンセヌラ（Hansenul
a）属、キャンディダ（Candida）属、トルラスポラ（To
rulaspora）属、トルロプシス（Torulopsis）属、ミコ
トルラ（Mycotorula）属に属する幅広い範囲の可食性酵
母が本発明に使用できる。

細菌としては、乳酸菌として知られるラクトバチルス・
カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・ア
シドフィラス（Lactobacillus acidophilus）等、また
納豆菌として知られるバチルス・ナット（Bacillus nat
to）等広範囲の可食性の細菌、カビとしてはアスペルギ
ルス・ニガー（Aspergillus niger）やアスペルギルス
・アワモリ（Aspergillus awamori）に属するものがご
く一部として例示され、他にも広範囲の可食性のカビが
使用できる。

また、可食性の単細胞緑藻であるクロレラとしてクロレ
ラ・ブルガリスやスピルリナも本発明に有効に使用でき
る。

このような高分子化セレンを蓄積することのできる微生
物菌体は、予め適当な方法に従って調製された培地また
は媒体で適宜培養・増殖したものを用いればよい。培養
に当たっては、上記に例示した対象とする微生物菌体の
それぞれを、通常培養する場合に使用されている培養培
地組成例えば炭素源，窒素源，無機等または培養媒体組
成を用い、好適培養温度にて培養すればよく、必要に応
じ予備培地または媒体で種菌培養した後各培養培地また
は媒体で適宜培養・増殖せしめればよい。培養を停止し
培養菌体を集菌する時期としては、単に菌体増殖曲線に
おける対数増殖期後期から定常期後期までの適宜な培養
を行って通常の遠心分離等の手段により集菌すればよ
い。例えば水溶性無機セレン化合物として亜セレン酸を
用いる場合、好ましくは一般に菌体増殖曲線における亜
セレン酸還元酵素が生成される前段階である対数増殖期
後期から定常期初期の段階まで適宜培養して集菌すれ
ば、増殖菌体数が多く好適であるとともに、該菌体を用
いて実質的に菌体増殖を必要としない条件、好ましくは
バイオロジカルスペース以上の菌体濃度に調製して亜セ
レン酸と反応せしめた場合、セレンが菌体に取込まれて
も亜セレン酸還元酵素の作用を受けないことから実質的
に無機セレンの生成を防止でき、良好な高分子化セレン
含有菌体を得ることができる。

例えば菌体として酵母を用いた場合は、例えばＹＰＧ培
地等で種菌培養した後糖蜜培地で通常２５℃〜３５℃で
８時間〜２８時間特に好ましくは８時間〜２０時間培養
・増殖させた後培養菌体を集菌するのが好ましい。細菌
として乳酸菌を用いた場合は例えばロイコノストック培
地等で通常２５℃〜３５℃で１５時間〜３０時間特に好
ましくは２０時間〜２４時間培養・増殖させて集菌すれ
ばよく、カビを用いた場合は例えばＹＭ培地で通常２０
℃〜３０℃で３０時間〜５０時間特に好ましくは３５時
間〜４０時間培養・増殖させて集菌すればよく、単細胞
緑藻を用いた場合は例えば水を媒体とするかもしくは実
施例２２に示した培地で通常２５℃〜３３℃で２４時間
〜４８時間特に好ましくは３０時間〜４０時間培養・増
殖させて集菌すればよい。

次いで、該集菌した菌体から培養・増殖に用いた培養培
地または媒体を水等で数回洗浄して洗い流して除去し、
さらに、該菌体をセレンの高分子化基質および／または
水溶性無機セレン化合物を含有する水溶液に分散せしめ
て無機セレンを高分子化セレンとして菌体内に蓄積せし
めるが、この反応をせしめる際、該菌体をバイオロジカ
ルスペース以上の菌体濃度に調製して菌体増殖によるセ
レンの高分子化基質の消費を完全に停止させ、セレンの
高分子化基質の消費を専ら高分子化の反応用に向けさせ
ることが必要である。このバイオロジカルスペース以上
の菌体濃度に調製するとは、菌体懸濁液（反応液）が本
質的には該菌体の増殖を許す成分を含んでいても、懸濁
液の一定容積中に菌体が実質的にそれ以上増殖すること
のできない状態、菌体増殖曲線における定常状態の菌体
濃度以上の濃度の状況下に調製することを意味する。通
常、例えば、酵母では１０^９コ／ｍｌ以上、乳酸菌では
１０^８コ／ｍｌ以上、クロレラでは１０^９コ／ｍｌ以上
であるので、反応に際しては酵母では１〜５×１０^９コ
／ｍｌ、乳酸菌では１〜５×１０^８コ／ｍｌ、クロレラ
では１〜５×１０^９コ／ｍｌの菌体濃度で行うことが好
ましく、実用上はこれら微生物の懸濁液における菌体濃
度の測定は分光光度計によるＯＤ値で行うことから、対
象菌体の増殖曲線の定常期状態におけるＯＤ値の±１０
％とすればよい。また、カビの場合はＯＤによる測定が
不可能であるので培養液量より少ない反応液に菌体を懸
濁して使用すればよい。

次いで、該菌体をセレンの高分子化基質となり得る有機
化合物および／または水溶性無機セレン化合物を含有す
る水溶液に分散せしめて、菌体内に高分子化セレンを蓄
積せしめる。

反応液中でセレンの高分子化基質となり得る有機化合物
および水溶性無機セレン化合物を含有する水溶液は、両
方を混合した水溶液にした後、バイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように菌体を該水溶液に分散させ
ても、または高分子化基質となり得る有機化合物、水溶
性無機セレン化合物および菌体を逐次分散させても、ま
たは分散する順序を逆としてもいずれでもかまわない。

まず、セレンの高分子化基質となり得る有機化合物と
は、菌体内反応機構である高エネルギーリン酸化合物合
成機構、例えば解糖系反応機構やＴＣＡ回路反応機構を
作動させるに不可欠な成分であり、即ち菌体にとってエ
ネルギー基質となり得る有機化合物であればよく、糖お
よび／またはアミノ酸が挙げられる。糖としては、例え
ば、グルコース，フルクトース，ガラクトース，シュク
ロース，マルトース，トレハロースが挙げられ、特に好
ましくはグルコースである。アミノ酸としては、例えば
ロイシン，イソロイシン，セリン等のグルコゲニックア
ミノ酸系であればよく、特に好ましくはロイシンまたは
イソロイシンである。反応液である該有機反応水溶液に
は少なくとも上記糖および／またはアミノ酸と、必要に
応じ緩衝液としてリン酸塩等を含有する水溶液であるの
が好ましい。

さらに、必要に応じ高エネルギーリン酸化合物の補給源
となりうるものとして、アデニン，アデノシンを上記系
に添加すると、より有効に高分子化セレンが菌体内に蓄
積される。

上記、有機化合物水溶液の反応に用いる際、該水溶液の
ｐＨはｐＨ３〜７特にｐＨ４〜６に調製するのが好まし
い。リン酸塩等緩衝液を用いた場合には該緩衝液を好ま
しいｐＨに調製すればよい。

有機化合物水溶液の各々の成分の量的関係については、
有機化合物水溶液全量に対し、糖とアミノ酸は単独かま
たは併用してもよく、糖は0.3％〜２％を含有させるの
が好ましく、アミノ酸は0.3％〜２％、また必要に応じ
緩衝液であるリン酸塩は0.01Ｍ〜0.3Ｍ用いればよく、
また、アデニン，アデノシンを加える場合には、0.001
％〜0.02％を用いればよい。

次いで、本発明に使用できるセレンの供給源である水溶
性無機セレン化合物は、対象菌体の細胞膜を透過し、菌
体内で蛋白質と結合して高分子化セレンに変換されうる
適当な水溶性の無機セレン化合物であればよく、例えば
亜セレン酸（H₂SeO₃），二酸化セレン（SeO₂），セレン
酸（H₂SeO₄）等の無機セレンが挙げられるが、特に亜セ
レン酸を用いるのが好ましい。反応に用いる量としては
反応液中のセレン濃度が２ｐｐｍ以上、好ましくは１０
〜１００ｐｐｍとなるように水溶性セレン化合物の添加
量を調製すればよい。

上述のとうり、反応液へ菌体を同時または逐次に分散
し、振盪させて反応せしめるが、反応における反応温度
は２０℃〜４０℃特に好ましくは２５℃〜３５℃で、反
応時間は４時間以上特に８〜２４時間反応せしめるのが
好ましい。

反応後、遠心分離等の手段で集菌し、さらに回収菌体を
水で数回洗浄することにより高分子化されたセレンを含
有する微生物菌体が得られる。また得られた高分子化セ
レン含有菌体は必要に応じ凍結乾燥等をして保存すれば
よい。

本発明は、以上のようにして効率的で安定な高分子化セ
レン含有微生物菌体を得る方法を提供する。

＜実施例＞ 以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例１ 酵母の培養と増殖曲線の作成 ｐＨ５に調製したＹＰＧ培地（グルコース４％、ペプト
ン１％、イーストエキス0.5％、リン酸カリウム0.5％、
硫酸マグネシウム0.2％）100ｍｌを500ｍｌ容三角フラ
スコに分注し121℃で１５分殺菌した後、サッカロミセ
ス・セレビシェＦＴＹ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３２
６）を１白金耳植付け、３０℃で２４時間振盪培養し、
種菌とした。その後、ｐＨ５に調製した糖蜜培地（糖蜜
１０％（蔗糖として４％含有）、尿素0.5％、７５％リ
ン酸0.1％、硫酸亜鉛0.0003％）100ｍｌに種菌５ｍｌを
植え付け、３０℃で３０時間培養して増殖速度を求め、
増殖曲線を第１図に示した。

このように、培地中に実質的にセレンを含有しないこと
から菌体増殖は極めて良好であった。

実施例２ 培養時間と反応（振盪）時間によるセレン取
込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３の菌体を、培養時間８，１２，１６，２０，２
４，２８時間毎に各々遠心分離して（3000rpm，１５分
間）集菌し、100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体濃度
が１〜1.6×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グルコース
を含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）５０ｍｌに懸濁
し、亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として60ｐｐｍ）を
加えて３０℃で振盪して反応せしめた。振盪（反応）時
間２，１４，１６，２４時間目毎に各々菌体濃度を測定
して遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で
２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取込まれたセレン
濃度を測定した。その結果を第１表に示す。

尚、菌体濃度の測定は反応液を水で適宜希釈し、660ｎ
ｍで吸光度を測定したものであり、また菌体内に取込ま
れたセレン濃度の測定は、乾燥菌体約100mgを秤量し湿
式灰化した後原子吸光法にて測定したものであり、以下
の実施例における菌体濃度および菌体内に取込まれたセ
レン濃度の測定はすべて同様の方法にて行った。

以上から、反応時間経過における菌体増殖はほとんど認
められないものの、各培養時間における菌体ともセレン
取込み濃度は反応時間とともに増加し、サッカロミセス
・セレビシェを用いた場合、培養８〜２０時間程度の培
養菌体を用いて反応せしめることが最も好適であった。

参考例 予め亜セレン酸を添加した培地で培養した場合
のセレン取込みへの影響 糖蜜培地100ｍｌに予め亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度
として30ｐｐｍ）を加え、実施例１のＹＰＧ培地で培養
したサッカロミセス・セレビシェＦＴＹ−３の種菌５ｍ
ｌを植付け、３０℃で３０時間培養し、１６，２０，２
４，３０時間目毎に菌体濃度を測定し、遠心分離にて集
菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結
乾燥し、菌体内に取込まれたセレン濃度を測定した。そ
の結果を第２表に示す。尚、３０時間培養後の乾燥菌体
量は690ｍｇであった。

以上から、予め亜セレン酸を添加した培地で培養しなが
らセレンを菌体に取込ませた場合は、本発明よりも菌体
のセレン取込み率が極めて低いことがわかった。

実施例３ 二酸化セレンを用いた場合のセレン取込みへ
の影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養し、培養液100ｍｌよ
り得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.5×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グルコース
を含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）５０ｍｌに懸濁
し、水に溶解した二酸化セレン酸4.15ｍｇ（セレン濃度
として50ｐｐｍ）を加えて３０℃で２０時間振盪して反
応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌ
の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体1.19ｇ（菌
体内セレン濃度1420ｐｐｍ）を得た（取込み率51.2
％）。

実施例４ セレン酸を用いた場合のセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養し、培養液100ｍｌよ
り得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.5×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グルコース
を含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌに懸濁
し、水に溶解したセレン酸3.7ｍｇ（セレン濃度として4
0ｐｐｍ）を加えて３０℃で２０時間振盪して反応せし
め、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で
２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体1.11ｇ（菌体内セ
レン濃度1440ｐｐｍ）を得た（取込み率80％）。

実施例５ リン酸無添加によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養し、培養液100ｍｌよ
り得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.5×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を0.5％，１％，
２％の各々の濃度のグルコース50ｍｌに懸濁し、亜セレ
ン酸５ｍｇ（セレン濃度として60ｐｐｍ）を各々加え、
３０℃で１８時間振盪して反応せしめ、菌体濃度を測定
して遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で
２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取込まれたセレン
濃度を測定した。その結果を第３表に示す。

以上から、リン酸を添加しなくとも、良好にセレンが菌
体内に取り込まれた。

実施例６ アデニン，アデノシンの添加によるセレン取
込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で２０時間培養し、培養液100ｍｌよ
り得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.6×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グルコース
を含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌに懸濁
し、アデノシン、アデニンを各々0.02％および無添加の
ものを調製し、亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として60
ｐｐｍ）を各々加え、３０℃で２０時間振盪して反応せ
しめ、菌体濃度を測定して遠心分離にて集菌し、さらに
菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体
内に取込まれたセレン濃度を測定した。その結果を第４
表に示す。

以上の通り、アデニン，アデノシンの添加によりセレン
の菌体内への取込みはより有効であった。

実施例７ セレン濃度によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で２０時間培養し、培養液100ｍｌよ
り得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.7×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
の菌体濃度となるように、該菌体を１％グルコースを含
む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌに懸濁し、亜
セレン酸０ｇ（セレン濃度として０ｐｐｍ），１ｍｇ
（セレン濃度として12.5ppm），２ｍｇ（セレン濃度と
して25ppm），４ｍｇ（セレン濃度として50ppm），６ｍ
ｇ（セレン濃度として75ppm），８ｍｇ（セレン濃度と
して100ppm）を各々加えて調製し、３０℃で１６時間振
盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を
100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体量
と菌体内に取り込まれたセレン濃度を測定した。その結
果を第５表に示す。

以上から、反応液へ添加する亜セレン酸は、１ｍｇ〜８
ｍｇ（セレン濃度として12ｐｐｍ〜100ｐｐｍを使用す
ることにより良好に菌体にセレンが取り込まれた。

実施例８ 反応液のｐＨによるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養を行い、培養液10
0ｍｌより得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した
後、菌体濃度が1.8×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカル
スペース以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グ
ルコースを含むｐＨ３，４，５，６，７，８の範囲の各
々に調製した0.1Ｍリン酸緩衝液５０ｍｌに懸濁し、亜
セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として60ｐｐｍ）を加え、
３０℃で２０時間振盪し反応せしめ、遠心分離にて集菌
し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾
燥し、菌体内に取り込まれたセレン濃度を各々測定し
た。その結果を第６表に示す。

以上から、反応液のｐＨは、ｐＨ４〜６に調製すること
により、良好に菌体内にセレンが取込まれた。

実施例９ 反応（振盪）温度によるセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について５本のフラスコ培養を行い、培養液10
0ｍｌより得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した
後、菌体濃度が1.5×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカル
スペース以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グ
ルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌ
に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として60ｐｐ
ｍ）を加え、20℃，25℃，30℃，35℃，40℃の各々の温
度範囲で２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集
菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結
乾燥し、菌体内に取り込まれたセレン濃度を各々測定し
た。その結果を第７表に示す。

以上から、反応せしめる際の反応（振盪）温度は、25℃
〜35℃であることにより良好に菌体内にセレンが取込ま
れた。

実施例１０ アデニン添加濃度によるセレン取込みへの
影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養を行い、培養液10
0ｍｌより得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した
後、菌体濃度が1.5×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカル
スペース以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グ
ルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌ
に懸濁し、アデニンを０％，0.001％，0.003％，0.01
％，0.03％，0.1％の範囲の各々に調製して添加し、亜
セレン酸６ｍｇ（セレン濃度として72ｐｐｍ）を加え、
３０℃で２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集
菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結
乾燥し、菌体内に取り込まれたセレン濃度を各々測定し
た。その結果を第８表に示す。

以上から、反応液にアデニンを添加する場合、使用濃度
は、0.003％〜0.1％に調製することにより良好に菌体内
にセレンが取込まれた。

実施例１１ リン酸添加濃度によるセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養を行い、培養液10
0ｍｌより得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した
後、菌体濃度が1.6×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカル
スペース以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％グ
ルコースを含む0.1Ｍ，0.003Ｍ，0.01Ｍ，0.03Ｍ，0.1
Ｍ，0.3Ｍの各々に調製したリン酸緩衝液（ｐＨ５）５
０ｍｌに懸濁し、各々亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度と
して60ｐｐｍ）を加え、３０℃で２０時間振盪して反応
せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの
水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取り込まれた
セレン濃度を各々測定した。その結果を第９表に示す。

以上から、反応液にリン酸緩衝液を添加する場合、リン
酸の濃度は0.003Ｍ〜0.3Ｍに調製することにより良好に
菌体内にセレンが取り込まれた。

実施例１２ 実施例１と同様の条件でＹＰＧ培地で２４時間フラスコ
培養したサッカロミセス・セレビシェＦＴＹ−３の種菌
各々500ｍｌを３０容ジャーファ−メンター４基を用
い、ｐＨ５に調製して120℃で３０分加熱滅菌した糖蜜
培地２０に植付け、３２℃、通気量３０／分、攪拌
速度300rpmで１６時間培養した。連続遠心機を使用して
集菌し（１２０／時間）、約２０の水を加えて菌体
を懸濁し、遠心分離して菌体を洗浄した。この操作を３
回繰り返した後、菌体濃度が2.5×１０^９コ／ｍｌのバ
イオロジカルスペース以上の菌体濃度となるように該菌
体を、0.5％グルコースを含む0.03Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５）５に懸濁し、亜セレン酸0.4ｇ（セレン濃度と
して48ｐｐｍ）を加えて通気量１０／分、攪拌速度20
0rpm、振盪（反応）温度３０℃で反応せしめた。１８時
間後、遠心分離して集菌し、さらに２０の水で３回洗
浄し、湿菌体3.5Ｋｇを得た。その後、７の水を加え
て攪拌、分散した後、９０℃で１５分加熱し、コチワ式
スプレードライヤーを用い、送風１４０℃，排風６０
℃，送液４／時間の条件でスプレードライし、乾燥粉
末1.1Ｋｇを得た（水分4.1％，菌体内セレン濃度１９１
０ｐｐｍ）。

参考例 実施例１２で得られた菌体５ｇを５０ｍｌの水に懸濁
し、１Ｎ苛性ソーダでｐＨ７に調製した後、ポジトロン
破砕機で菌体を破砕し、さらに９５℃で１０分加熱した
後、10000rpmで15分間遠心分離し、上清３８ｍｌを得た
（セレン濃度174ｐｐｍ）。上清１０ｍｌを凍結乾燥し
た後、２ｍｌの水に溶解し、その内１ｍｌを用いてセフ
ァデックスＧ５０の100ｍｌカラム（２×32cm）による
溶出パターンとセレンの分布を調べた。その結果、第２
図の如く、85％以上のセレンが高分子分画に存在した。

実施例１３ グルコース濃度と、反応（振盪）時間によ
るセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養して得た培養液600ｍ
ｌを遠心分離して集菌し（3000rpm，１５分間）、500ｍ
ｌの水で３回洗浄した後、菌体濃度が1.4×１０^９コ／
ｍｌのバイオロジカルスペース以上の菌体濃度となるよ
うに該菌体を、0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）に懸濁し
て300ｍｌにメスアップし、その内５０ｍｌを500ｍｌ容
三角フラスコに分注し、亜セレン酸4.1ｍｇ（セレン濃
度として50ｐｐｍ）とグルコース０％，0.1％，0.3％，
１％，２％，３％，５％の各々を加えて３０℃で振盪し
反応せしめた。その後、４，１６，２４時間目の各々で
菌体濃度を測定し、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を
100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体内
に取込まれたセレン濃度を測定した。その結果を第10表
に示す。

以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てグルコースを使用した場合、添加濃度は0.3％以上で
あることが好ましかった。

実施例１４ 糖源の種類によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養し、培養液100ｍｌか
ら得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.8×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を１％のグルコー
ス，フラクトース，ガラクトース，シュークロース，マ
ルトース，トレハロースを各々含む0.1Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ５）５０ｍｌに懸濁し、各々亜セレン酸５ｍｇ
（セレン濃度として60ｐｐｍ）を加えて３０℃で２０時
間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌
体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌
体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を各々測定し
た。その結果を第11表に示す。

以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てグルコース以外にもフラクトース，シュクロース，マ
ルトース，トレハロースを使用することにより良好に菌
体内にセレンを取込ませることができた。

実施例１５ アミノ酸添加によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサッカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０℃で１６時間培養し、培養液100ｍｌか
ら得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体
濃度が1.8×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度となるように、該菌体を0.5％のロイシ
ン，イソロイシン，セリン，グルタミン酸，アスパラギ
ンを各々含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｌに
懸濁し、各々亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として60ｐ
ｐｍ）を加えて３０℃で２０時間振盪して反応せしめ、
遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回
洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体量と菌体内に取り込ま
れたセレン濃度を各々測定した。その結果を第12表に示
す。

以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てロイシン，イソロイシンを使用することにより良好に
菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１６ 微生物をキャンディダ・クルゼイとした場
合 キャンディダ・クルゼイ（Candida krusei）１５６−２
５Ａ（ＩＦＯ−０８４１）をＹＰＧ培地で３０℃で２０
時間培養し、培養液100ｍｌから得られた菌体を100ｍｌ
の水で３回洗浄した後、菌体濃度が1.2×１０^９コ／ｍ
ｌのバイオロジカルスペース以上の菌体濃度となるよう
に、該菌体を１％グルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６）２５ｍｌに懸濁し、亜セレン酸1.3ｍｇ（セ
レン濃度として30ｐｐｍ）を加えて、３０℃で２０時間
振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体
を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体
量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を測定した。その
結果を第13表に示す。

以上から、キャンデイダ属の酵母を使用した場合も良好
に菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１７ 微生物をトルラスポラ・デルブレッキイと
した場合 トルラスポラ・デルブレッキイ（Torulasupora delbrue
ckii）１５４−ＣＡ（ＩＦＯ−１１２９）をＹＰＧ培地
で３０℃で２０時間培養し、培養液100ｍｌから得られ
た菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体濃度が1.8
×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルスペース以上の菌体
濃度となるように、該菌体を１％グルコース含む0.1Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６）２５ｍｌに懸濁し、亜セレン酸
1.3ｍｇ（セレン濃度として30ｐｐｍ）を加えて、３０
℃で２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌
し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾
燥し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を
測定した。その結果を第14表に示す。

以上から、トルラスポラ属の酵母を使用した場合も良好
に菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１８ 微生物をラクトバチルス・カゼイとした場
合 ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）Ｂ−
１０４５（ＩＦＯ−３４２５）をｐＨ７に調製したロイ
コノストック培地（２％グルコース，0.5％イーストエ
キス，0.5％ペプトン：120℃で１５分殺菌）で３０℃で
２０時間培養し、培養液100ｍｌから得られた菌体を100
ｍｌの水で３回洗浄した後、菌体濃度が1.2×１０^８コ
／ｍｌのバイオロジカルスペース以上の菌体濃度となる
ように、該菌体を１％グルコース含む0.1Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６）２５ｍｌに懸濁し、亜セレン酸1.3ｍｇ
（セレン濃度として30ｐｐｍ）を加えて、３０℃で２０
時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに
菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥
菌体量と菌体に取り込まれたセレン濃度を測定した。そ
の結果を第15表に示す。

以上から、微生物として乳酸菌を使用した場合も良好に
菌体内にセレンを取込ませることができた。

実施例１９ 微生物をラクトバチルス・アシドフィラス
とした場合 ラクトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acid
ophilus）Ｂ−１０５１（ＩＦＯ−３９５３）をｐＨ７
に調製したロイコノストック培地で３０℃で２０時間培
養し、培養液100ｍｌから得られた菌体を100ｍｌの水で
３回洗浄した後、菌体濃度が1.1×１０^８コ／ｍｌのバ
イオロジカルスペース以上の菌体濃度となるように、該
菌体を１％グルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
６）２５ｍｌに懸濁し、亜セレン酸1.3ｍｇ（セレン濃
度として30ｐｐｍ）を加えて、３０℃で２０時間振盪し
て反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100
ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体量と菌
体内に取り込まれたセレン濃度を測定した。その結果を
第16表に示す。

実施例２０ 微生物をアスペルギルス・ニガーとした場
合 アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）Ｓ−７
（ＩＦＯ−６３４１）をｐＨ７に調製したＹＭ培地（１
％グルコース，0.5％ペプトン、0.3％イーストエキス、
0.3％マルトエキス：120℃で１５分殺菌）で２５℃で２
０時間培養し、培養液100ｍｌから得られた菌体を100ｍ
ｌの水で３回洗浄した後、該菌体を１％グルコースを含
む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）１５ｍｌに懸濁し、亜
セレン酸1.25ｍｇ（セレン濃度として50ｐｐｍ）を加え
て、３０℃で１８時間振盪して反応せしめ、遠心分離に
て集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水で２回洗浄した後
凍結乾燥し、乾燥菌体0.48ｇを得た。菌体内に取込まれ
たセレン濃度９２０ｐｐｍ（取込み率４６％）であっ
た。

実施例２１ 微生物をアスペルギルス・アワモリとした
場合 アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）Ｎ
０４Ａ（ＩＦＯ−４０３３）をｐＨ７に調製したＹＭ培
地で２５℃で３０時間培養し、培養液100ｍｌから得ら
れた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した後、該菌体を１
％グルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）２５
ｍｌに懸濁し、亜セレン酸2.5ｍｇ（セレン濃度として6
0ｐｐｍ）を加えて、３０℃で１８時間振盪して反応せ
しめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を100ｍｌの水
で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体0.62ｇを得た。
菌体内に取込まれたセレン濃度は、２３０ｐｐｍ（取込
み率７０％）であった。

以上から、微生物としてカビを使用した場合も良好に菌
体にセレンを取込ませることができた。

実施例２２ 微生物をクロレラ・ブルガリスとした場合 クロレラ・ブルガリス（Chlorella vulgaris）Ｅ−２５
を２％グルコース、0.4％尿素、0.1％リン酸塩、0.1％
硫酸マグネシウム、0.03％硫酸第一鉄、0.1％塩化カル
シウムを含む培地で３０℃で３０時間培養し、培養液10
0ｍｌから得られた菌体を100ｍｌの水で３回洗浄した
後、菌体濃度が２×１０^９コ／ｍｌのバイオロジカルス
ペース以上の菌体濃度となるように、該菌体を0.5％グ
ルコースを含む0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）２５ｍｌ
に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ（セレン濃度として120ｐ
ｐｍ）を加えて、３０℃で１８時間振盪して反応せし
め、菌体濃度を測定して遠心分離にて集菌し、さらに菌
体を100ｍｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内
に取り込まれたセレン濃度を測定した。その結果を第17
表に示す。

以上から、微生物として単細胞緑藻を使用した場合も良
好に菌体にセレンを取込ませせることができた。

＜発明の効果＞ 本発明の製造法の目的は、予めセレンを添加しない実質
的にセレンを含有しない培地で菌体を培養・増殖させる
ため、培養時にセレンによる生育阻害が無く、従来技術
にある予めセレンを添加させた培地で培養・増殖させる
場合に比すと菌体の増殖速度が早く、また増殖率も優れ
ている方法を提供する。

また、本発明は菌体を培地で充分培養・増殖させ、集菌
後に反応液へ該菌体を分散させるため、菌体を濃縮化す
ることが可能であることから反応系を小さくでき、した
がって反応後の廃液を少量化することができ、また、反
応液中にセレン以外の金属を含まないため廃液処理を簡
便にする方法を提供する。

さらに、本発明は菌体を適宜増殖させ、集菌後に水洗し
て培養培地成分を除去した後菌体濃度を好ましくはバイ
オロジカルスペース以上に調製して培養・増殖を停止さ
せるため、当然反応せしめる際には菌体増殖の必要は無
く、菌体増殖阻害を生ずるセレンを反応液中で高濃度に
することが可能であり、かつ、菌体内に取込ませ蓄積で
きる高分子化セレン濃度も高く、高濃度の高分子化セレ
ンを含有した菌体を製造することを提供する。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で求めた菌体の増殖曲線を示し、第２
図は実施例１２参考例で求めた溶出パターンとセレンの
分布を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ 7236−4Ｂ 1/14 Ａ 7236−4Ｂ 1/16 Ｊ 7236−4Ｂ 1/20 Ａ 7236−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ１２Ｒ 1:89） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:665） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:685） (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:865） (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:72） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:245） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:23）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】高分子化セレンを菌体内に蓄積することの
   できる微生物を培養して得た菌体を、バイオロジカルス
   ペース以上の菌体濃度となるようにセレンの高分子化基
   質である有機化合物および水溶性無機セレン化合物を含
   有する水溶液に分散せしめることにより、該菌体に高分
   子化セレンを蓄積せしめることを特徴とする高分子化セ
   レン含有菌体の製造法。
2. 【請求項２】高分子化セレンを菌体内に蓄積することの
   できる微生物が可食性の酵母，細菌，カビまたは単細胞
   緑藻である請求項第１項記載の製造法。
3. 【請求項３】可食性の酵母がサッカロミセス(Saccharom
   yces)属，トルラスポラ（Torulaspora)属，トルロプシ
   ス(Torulopsis)属，ミコトルラ(Mycotorula)属，キャン
   ディダ(Candida)属，ハンセヌラ(Hansenula)属に属する
   酵母である請求項第２項記載の製造法。
4. 【請求項４】水溶性無機セレン化合物が亜セレン酸，二
   酸化セレンまたはセレン酸である請求項第１項記載の製
   造法。
5. 【請求項５】セレンの高分子化基質である有機化合物が
   糖および／またはアミノ酸である請求項第１項記載の製
   造法。
6. 【請求項６】糖がグルコース，フラクトース，シュクロ
   ース，マルトースまたはトレハロースであり、アミノ酸
   がロイシンまたはイソロイシンである請求項第５項記載
   の製造法。
7. 【請求項７】セレンの高分子化基質である有機化合物水
   溶液が少なくとも糖および／またはアミノ酸およびリン
   酸塩を含有してなる請求項第５項記載の製造法。
8. 【請求項８】高分子化セレンを菌体内に蓄積することの
   できる微生物を培養して得た菌体が、８〜２０時間の培
   養時間で得られた菌体である請求項第１項記載の製造
   法。
9. 【請求項９】高分子化セレンを菌体内に蓄積することの
   できる微生物を培養して得た菌体を、水溶性無機セレン
   化合物を含有する水溶液に分散せしめる時間が、８〜２
   ４時間である請求項第１項記載の製造法。
10. 【請求項１０】水溶性無機セレン化合物のセレン濃度
    が、１０〜１００ｐｐｍである請求項第１項記載の製造
    法。