JPH06165673A - 酵素ブロス流を凝集させるための、マンニツヒアクリルアミドポリマー類と第四級ポリアミン類の混合物の利用 - Google Patents
酵素ブロス流を凝集させるための、マンニツヒアクリルアミドポリマー類と第四級ポリアミン類の混合物の利用Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 マンニッヒアクリルアミドポリマー類と第四
級ポリアミン類との混合物からなる、酵素ブロス流（ｓ
ｔｒｅａｍ）のための凝集剤。 【効果】 いずれかのポリマーを単独で用いるのに比べ
て高い固体圧縮度と著しい上清清澄度をもたらす。
級ポリアミン類との混合物からなる、酵素ブロス流（ｓ
ｔｒｅａｍ）のための凝集剤。 【効果】 いずれかのポリマーを単独で用いるのに比べ
て高い固体圧縮度と著しい上清清澄度をもたらす。
Description
【０００１】
【従来の技術】醗酵による酵素の製造は多年にわたり実
施されてきた。醗酵は普通ステンレス・スチール装置、
即ち混合及び配合槽、及び種及び主醗酵器中で実施され
る。異種微生物が存在しないことが必須であるので、一
定の温度、自動的泡及びｐＨ制御器及び空気清浄機が用
いられる。一般的に水道水（ｔａｐ ｗａｔｅｒ）を培
地成分と合体し、醗酵が終わると直ちに酵素の回収を始
める。培地を冷却し、遠心分離器を用いて上清から細菌
（ｂａｃｔｅｒｉｓ）及び大きな不溶物を除去し、次い
でフィルターにより小さな不溶物を分離する。酵素を濃
縮し、沈殿剤を添加して濾液から取り出す。その沈殿物
をさらに濾過、乾燥などで処理し、そして例えば塩化ナ
トリウムの利用により標準化する。
施されてきた。醗酵は普通ステンレス・スチール装置、
即ち混合及び配合槽、及び種及び主醗酵器中で実施され
る。異種微生物が存在しないことが必須であるので、一
定の温度、自動的泡及びｐＨ制御器及び空気清浄機が用
いられる。一般的に水道水（ｔａｐ ｗａｔｅｒ）を培
地成分と合体し、醗酵が終わると直ちに酵素の回収を始
める。培地を冷却し、遠心分離器を用いて上清から細菌
（ｂａｃｔｅｒｉｓ）及び大きな不溶物を除去し、次い
でフィルターにより小さな不溶物を分離する。酵素を濃
縮し、沈殿剤を添加して濾液から取り出す。その沈殿物
をさらに濾過、乾燥などで処理し、そして例えば塩化ナ
トリウムの利用により標準化する。
【０００２】プロテアーゼは、チーズ製造、肉柔和（ｍ
ｅａｔ ｔｅｎｄｅｒｉｎｇ）、パン焼き、ビールのも
や除去、消化補助剤製造、衣服の洗濯、薬剤製造などを
含む工業領域において特に有用であることが見出された
酵素である。培養により製造されたこれらのプロテアー
ゼは食品添加剤として用いることができる。
ｅａｔ ｔｅｎｄｅｒｉｎｇ）、パン焼き、ビールのも
や除去、消化補助剤製造、衣服の洗濯、薬剤製造などを
含む工業領域において特に有用であることが見出された
酵素である。培養により製造されたこれらのプロテアー
ゼは食品添加剤として用いることができる。
【０００３】プロテアーゼ酵素ブロスの特性は沈殿しな
い懸濁液を形成することである。試験管内でサンプルを
遠心分離すると、固体は試験管の下側に７０％に沈下
し、管の上側３０％だけが上清溶液となるだろう。
い懸濁液を形成することである。試験管内でサンプルを
遠心分離すると、固体は試験管の下側に７０％に沈下
し、管の上側３０％だけが上清溶液となるだろう。
【０００４】酵素製造に含まれる最も難しい問題の１つ
は、そのブロスからの酵素の単離である。多くの凝集剤
が酵素ブロスの沈殿のために用いられたが、ほとんどが
その剤を商業的に魅力のないものとする何らかの無力さ
に悩まされた。商業的に用いられる凝集剤の例には、ジ
エチレントリアミン／ジシアンアミドで架橋したエピク
ロルヒドリン‐ジメチルアミン縮合生成物；及び米国特
許第４,９９７,７５９号に示されているマニッヒアクリ
ルアミドポリマー類とポリジメチルジアリルアンモニウ
ムハライド混合物が含まれる。これらの添加剤は多くの
状況下で有用ではあるが、全ての酵素ブロス清澄化（ｃ
ｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のために普遍的に受け入れ
られるとは証明されておらず、それ故工業界ではこの目
的に有用な他の材料について聞き続き探求されている。
は、そのブロスからの酵素の単離である。多くの凝集剤
が酵素ブロスの沈殿のために用いられたが、ほとんどが
その剤を商業的に魅力のないものとする何らかの無力さ
に悩まされた。商業的に用いられる凝集剤の例には、ジ
エチレントリアミン／ジシアンアミドで架橋したエピク
ロルヒドリン‐ジメチルアミン縮合生成物；及び米国特
許第４,９９７,７５９号に示されているマニッヒアクリ
ルアミドポリマー類とポリジメチルジアリルアンモニウ
ムハライド混合物が含まれる。これらの添加剤は多くの
状況下で有用ではあるが、全ての酵素ブロス清澄化（ｃ
ｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のために普遍的に受け入れ
られるとは証明されておらず、それ故工業界ではこの目
的に有用な他の材料について聞き続き探求されている。
【０００５】
【発明の要約】本発明は、凝集剤（ｆｌｏｃｃｕｌａｔ
ｉｎｇ ｏｇｅｎｔ）としてマニッヒアクリルアミドポ
リマー（Ｍａｎｎｉｃｈ ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｐｏ
ｌｙｍｅｒ）と少くとも約２５，０００の分子量を有す
る第四級ポリアミンとの混合物を用いることを含んでな
る、水性酵素ブロス（ａｑｕｅｏｕｓ ｅｎｚｙｍｅｂ
ｒｏｔｈ）を沈殿させるための組成物及び方法に関す
る。かかる凝集剤は沈殿物の効果的凝集をもたらすこと
が見出された。
ｉｎｇ ｏｇｅｎｔ）としてマニッヒアクリルアミドポ
リマー（Ｍａｎｎｉｃｈ ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｐｏ
ｌｙｍｅｒ）と少くとも約２５，０００の分子量を有す
る第四級ポリアミンとの混合物を用いることを含んでな
る、水性酵素ブロス（ａｑｕｅｏｕｓ ｅｎｚｙｍｅｂ
ｒｏｔｈ）を沈殿させるための組成物及び方法に関す
る。かかる凝集剤は沈殿物の効果的凝集をもたらすこと
が見出された。
【０００６】
【好適な態様を含む発明の記載】本発明は、（１）マニ
ッヒアクリルアミドポリマーと（２）少くとも約２５，
０００の分子量を有する第四級ポりアミンとの混合物
（ｂｌｅｎｄ）を含有してなる凝集剤を水性酵素ブロス
に添加することを含んでなる、水性酵素ブロスを沈殿さ
せるための組成物及び方法に関する。
ッヒアクリルアミドポリマーと（２）少くとも約２５，
０００の分子量を有する第四級ポりアミンとの混合物
（ｂｌｅｎｄ）を含有してなる凝集剤を水性酵素ブロス
に添加することを含んでなる、水性酵素ブロスを沈殿さ
せるための組成物及び方法に関する。
【０００７】該混合物は２つのポリマー（１）及び
（２）をそれぞれ実体ポリマー固体重量で９９：１〜
１：９９、好ましくは９０：１０〜１０：９０の割合で
含有してなる。
（２）をそれぞれ実体ポリマー固体重量で９９：１〜
１：９９、好ましくは９０：１０〜１０：９０の割合で
含有してなる。
【０００８】該マンニッヒアクリルアミドポリマーは一
般的に当該技術分野で周知であり、その具体例は米国特
許第４，１３７，１６４号に開示されている。一般的に
これらのポリマーはアクリルアミドのホモポリマー又は
これと得られるコポリマーの最大約５０％、好ましくは
５〜５０％の量のアクリロニトリル、メタクリルアミ
ド、アクリル酸などのコモノマーとの共重合体である。
般的に当該技術分野で周知であり、その具体例は米国特
許第４，１３７，１６４号に開示されている。一般的に
これらのポリマーはアクリルアミドのホモポリマー又は
これと得られるコポリマーの最大約５０％、好ましくは
５〜５０％の量のアクリロニトリル、メタクリルアミ
ド、アクリル酸などのコモノマーとの共重合体である。
【０００９】該ポリマーは約１０，０００〜約３，００
０，０００の範囲の分子量を有し、かつ該ポリマーが２
５〜１００モル％、好ましくは少くとも４０モル％のジ
メチルアミノメチル基を含有する程度にジメチルアミノ
メチル基を付与するために、化学的に修飾される。
０，０００の範囲の分子量を有し、かつ該ポリマーが２
５〜１００モル％、好ましくは少くとも４０モル％のジ
メチルアミノメチル基を含有する程度にジメチルアミノ
メチル基を付与するために、化学的に修飾される。
【００１０】該第四級ポリアミンは商業的に入手可能
な、或いは先行技術で公知の方法により製造することが
できるどのようなポリアミンであってもよい。好ましく
は該第四級ポリアミンは５０，０００〜３５０，００
０、特に好ましくは２５０，０００〜３００，０００の
範囲内に分子量がある。
な、或いは先行技術で公知の方法により製造することが
できるどのようなポリアミンであってもよい。好ましく
は該第四級ポリアミンは５０，０００〜３５０，００
０、特に好ましくは２５０，０００〜３００，０００の
範囲内に分子量がある。
【００１１】好ましい第四級ポリアミンは、約０°〜１
００℃の範囲の温度で１モルのモノ（又はジ‐）アルキ
ルアミン又はモノ（またはジ‐）アルカノールアミンを
約０．５〜約１.５モル、好ましくは約０．７〜約１．
２モルのエピハロヒドリンと反応させることにより製造
することができる。少量の、即ち最大約１０モル％の多
官能アミンも一緒に反応させることができる。前に述べ
た内容は米国特許第４，７１７，５５０号及びそれに記
された引例、特に米国特許第１，９７７，２５３号及び
第３，２４８，３５３号に記載の通りである。好適なア
ミンはアンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、メ
タノールアミン、ジメタノイールアミン、エチレンジア
ミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン及び
同様のもの、又は前記のいずれかの混合物である。好ま
しくはジメチルアミン及びエチレンジアミンを含有する
混合物である。
００℃の範囲の温度で１モルのモノ（又はジ‐）アルキ
ルアミン又はモノ（またはジ‐）アルカノールアミンを
約０．５〜約１.５モル、好ましくは約０．７〜約１．
２モルのエピハロヒドリンと反応させることにより製造
することができる。少量の、即ち最大約１０モル％の多
官能アミンも一緒に反応させることができる。前に述べ
た内容は米国特許第４，７１７，５５０号及びそれに記
された引例、特に米国特許第１，９７７，２５３号及び
第３，２４８，３５３号に記載の通りである。好適なア
ミンはアンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、メ
タノールアミン、ジメタノイールアミン、エチレンジア
ミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン及び
同様のもの、又は前記のいずれかの混合物である。好ま
しくはジメチルアミン及びエチレンジアミンを含有する
混合物である。
【００１２】好ましい第四級ポリアミンは（ｉ）モノ
（又はジ‐）アルキルアミン又はモノ（又はジ‐）アル
カノールアミン及び（ｉｉ）エピハロヒドリン及び（ｉ
ｉｉ）最大約１０モル％までのアルキレンジアミン又は
アンモニアの反応生成物である。モノアルキルアミンと
して好ましいものはモノメチルアミンであり、モノアル
カノールアミンとして好ましいものはモノエタノールア
ミンであり、ジアルキルアミンとして好ましいものはジ
メチルアミンであり、そしてエピハロヒドリンとして好
ましいものはエピクロルヒドリンである。
（又はジ‐）アルキルアミン又はモノ（又はジ‐）アル
カノールアミン及び（ｉｉ）エピハロヒドリン及び（ｉ
ｉｉ）最大約１０モル％までのアルキレンジアミン又は
アンモニアの反応生成物である。モノアルキルアミンと
して好ましいものはモノメチルアミンであり、モノアル
カノールアミンとして好ましいものはモノエタノールア
ミンであり、ジアルキルアミンとして好ましいものはジ
メチルアミンであり、そしてエピハロヒドリンとして好
ましいものはエピクロルヒドリンである。
【００１３】最も好ましい第四級ポリアミンは、約５０
モルのエピクロルヒドリン、約４９モル％のジメチルア
ミン及び約１モル％のエチレンジアミンの反応生成物で
ある。もし得られたポリマーが約２５０，０００〜約３
００，０００の分子量をもつなら、優れた結果が得られ
る。
モルのエピクロルヒドリン、約４９モル％のジメチルア
ミン及び約１モル％のエチレンジアミンの反応生成物で
ある。もし得られたポリマーが約２５０，０００〜約３
００，０００の分子量をもつなら、優れた結果が得られ
る。
【００１４】ポリマー組成物を混合するとき、マンニッ
ヒアクリルアミドポリマーは好ましくは固形分３〜８％
の水溶液であり、第四級ポリアミンは好ましくは固形分
５０重量％の水溶液である。
ヒアクリルアミドポリマーは好ましくは固形分３〜８％
の水溶液であり、第四級ポリアミンは好ましくは固形分
５０重量％の水溶液である。
【００１５】該ポリマー混合物（ｂｌｅｎｄ）は該酵素
ブロスにそのまま添加することができ、或いは２つのポ
リマーを別々に、しかし出来るだけ同時に近く添加する
ことができる。というのも、該ポリマーの増強された効
果はブロス中に一緒に存在することによるからである。
該ブロス添加されるべき混合物の量は、最も清澄な上清
を形成し、可能な限り高い固体圧縮度（ｓｏｌｉｄ ｃ
ｏｍｐａｃｔｉｏｎ）を達成するのに効果的な量であ
る。一般的に、ブロス１ｌ当り約１０〜１００ｇのポリ
マー混合物、好ましくは約２５〜７５ｇ／ｌの範囲の量
が効果的であり、特別な場合にはより高い又は低い量を
用いることができる。
ブロスにそのまま添加することができ、或いは２つのポ
リマーを別々に、しかし出来るだけ同時に近く添加する
ことができる。というのも、該ポリマーの増強された効
果はブロス中に一緒に存在することによるからである。
該ブロス添加されるべき混合物の量は、最も清澄な上清
を形成し、可能な限り高い固体圧縮度（ｓｏｌｉｄ ｃ
ｏｍｐａｃｔｉｏｎ）を達成するのに効果的な量であ
る。一般的に、ブロス１ｌ当り約１０〜１００ｇのポリ
マー混合物、好ましくは約２５〜７５ｇ／ｌの範囲の量
が効果的であり、特別な場合にはより高い又は低い量を
用いることができる。
【００１６】本発明の方法はその好ましい態様におい
て、（ｂ）該酵素ブロスと凝集剤を混合し；そして
（ｃ）酵素ブロス／凝集剤混合物を沈殿させる、工程を
も包含する。
て、（ｂ）該酵素ブロスと凝集剤を混合し；そして
（ｃ）酵素ブロス／凝集剤混合物を沈殿させる、工程を
も包含する。
【００１７】
【好ましい態様の記載】以下の実施例は単に説明目的の
ためであり、本発明を制限するものと解釈されるべきで
はない。製品ＡおよびＢ用いられた量に関し以下の表中
で０．０６５％水性ポリマー溶液として記載され、一
方、製品Ｃ及びＤは５０．０％水性ポリマー溶液として
表現されている。清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）はサンプに
より、６６０ミクロンまたは５５０、ミクロンのＵＶ吸
収で、或いは視覚観察で測定される。
ためであり、本発明を制限するものと解釈されるべきで
はない。製品ＡおよびＢ用いられた量に関し以下の表中
で０．０６５％水性ポリマー溶液として記載され、一
方、製品Ｃ及びＤは５０．０％水性ポリマー溶液として
表現されている。清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）はサンプに
より、６６０ミクロンまたは５５０、ミクロンのＵＶ吸
収で、或いは視覚観察で測定される。
【００１８】以下の実施例において、採用されたマンニ
ッヒアクリルアミドポリマーは各々７０％アミノメチル
化のマンニッヒポリアクリルアミドであり、更に以下の
ように示される：
ッヒアクリルアミドポリマーは各々７０％アミノメチル
化のマンニッヒポリアクリルアミドであり、更に以下の
ように示される：
【００１９】
【表１】 ブルックフィールド （Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ） 製品 固体％ 粘度‐ｃｐｓ Ａ ５.９〜６.４％ ２６,０００〜３４,０００ Ｂ ５.５〜６.１ ３４,０００〜４６,０００ 第四級ポリアミンはエピクロルヒドリン、ジメチルアミ
ン、及びエチレンジアミンの反応生成物であり、更に以
下の如く示される：
ン、及びエチレンジアミンの反応生成物であり、更に以
下の如く示される：
【００２０】
【表２】 製品 固体％ 平均分子量 Ｃ ４９〜５１％ ３００,０００ Ｄ ４９〜５１％ ２５０,０００ 酵素ブロスの凝集における種々のポリマーの効果を試験
するために、以下の試験手順を用いた：１５ｍｌの臨床
用目盛り付き遠心チューブ中の５ｍｌのブロスに種々の
濃度のポリマー溶液５ｍｌを添加する。栓をした該臨床
用チューブを２０回逆転することにより各々の試料を混
合し、そして臨床用チューブを５分間遠心し、圧縮した
酵素の体積を目で測定する。値が小さいほど良い。更に
上清の清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）を、事情に応じて５５
０及び６６０ミクロンでのＵＶ吸収により測定する。
０．３〜０．４％の値は許容でき、０．１以下は優秀で
ある。
するために、以下の試験手順を用いた：１５ｍｌの臨床
用目盛り付き遠心チューブ中の５ｍｌのブロスに種々の
濃度のポリマー溶液５ｍｌを添加する。栓をした該臨床
用チューブを２０回逆転することにより各々の試料を混
合し、そして臨床用チューブを５分間遠心し、圧縮した
酵素の体積を目で測定する。値が小さいほど良い。更に
上清の清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）を、事情に応じて５５
０及び６６０ミクロンでのＵＶ吸収により測定する。
０．３〜０．４％の値は許容でき、０．１以下は優秀で
ある。
【００２１】表Ｉは６６０ミクロンで測定されたＵＶ吸
収を用いた、酵素ブロスの沈殿に対する単一ポリマー凝
集剤の効果の測定結果である。これは比較表であり、製
品Ａ、Ｂ及び／又はＣは圧縮度（ｃｏｍｐａｃｔｉｏ
ｎ）（固体体積％）又は清澄度各々に関しては、効果を
達成することができるが、凝集剤単独では両方の基準に
ついては満足することができないことを示す。
収を用いた、酵素ブロスの沈殿に対する単一ポリマー凝
集剤の効果の測定結果である。これは比較表であり、製
品Ａ、Ｂ及び／又はＣは圧縮度（ｃｏｍｐａｃｔｉｏ
ｎ）（固体体積％）又は清澄度各々に関しては、効果を
達成することができるが、凝集剤単独では両方の基準に
ついては満足することができないことを示す。
【００２２】
【表３】
【００２３】表ＩＩは５５０ミクロンで測定したＵＶ吸
収を用いた、酵素ブロスの沈殿に対する単一ポリマー凝
集剤の効果の測定結果である。それは、製品Ａ及びＤは
圧縮度（固体体積％）又は清澄度の各々に関しては効果
を達成しうるが、凝集剤単独では両方の基準については
十分に達成し得ないことを示す比較表である。
収を用いた、酵素ブロスの沈殿に対する単一ポリマー凝
集剤の効果の測定結果である。それは、製品Ａ及びＤは
圧縮度（固体体積％）又は清澄度の各々に関しては効果
を達成しうるが、凝集剤単独では両方の基準については
十分に達成し得ないことを示す比較表である。
【００２４】
【表４】
【００２５】表ＩＩＩは本発明に従い酵素ブロスに対し
Ｂ及びＣポリマーの混合物を用いたときに達成される予
測できないほどの優れた結果を示している。何らかの特
別な理論に限定することを望むわけではないが、実施例
１〜６の結果は、Ｃポリマーに対してＢポリマーが５０
対５０の比の凝集剤組成物を、酵素ブロス１ｌ当り１５
〜２５ｇの低要領で用いたとき、ポリマーＢ（比較例７
＊〜９＊）又はポリマーＣ（比較例１０＊〜１２＊）を
いずれか単独で用いて得られる上清に比べて改善された
清澄度と圧縮度（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ）を有する上清
を生成することを証明している。
Ｂ及びＣポリマーの混合物を用いたときに達成される予
測できないほどの優れた結果を示している。何らかの特
別な理論に限定することを望むわけではないが、実施例
１〜６の結果は、Ｃポリマーに対してＢポリマーが５０
対５０の比の凝集剤組成物を、酵素ブロス１ｌ当り１５
〜２５ｇの低要領で用いたとき、ポリマーＢ（比較例７
＊〜９＊）又はポリマーＣ（比較例１０＊〜１２＊）を
いずれか単独で用いて得られる上清に比べて改善された
清澄度と圧縮度（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ）を有する上清
を生成することを証明している。
【００２６】
【表５】
【００２７】表ＶＩは本発明に従い酵素ブロスに対し種
々の比のＡ及びＤポリマーの混合物を用いたときに達成
される、予測できない優れた結果を示している。そのデ
ータは記載された容量において観測された圧縮度と吸収
を含んでいる。実施例７〜２４の結果は、ポリマーＡと
Ｄの混合物はポリマーＡ（比較例１３＊〜１８＊）又は
ポリマーＤ（比較例１９＊〜２４＊）のいずれか単独を
用いた上清と比べて改善された清澄度と圧縮度をもつ上
清が得られるという相乗効果を生じることを証明してい
る。
々の比のＡ及びＤポリマーの混合物を用いたときに達成
される、予測できない優れた結果を示している。そのデ
ータは記載された容量において観測された圧縮度と吸収
を含んでいる。実施例７〜２４の結果は、ポリマーＡと
Ｄの混合物はポリマーＡ（比較例１３＊〜１８＊）又は
ポリマーＤ（比較例１９＊〜２４＊）のいずれか単独を
用いた上清と比べて改善された清澄度と圧縮度をもつ上
清が得られるという相乗効果を生じることを証明してい
る。
【００２８】
【表６】
【００２９】表Ｖは本発明に従い酵素ブロスに対し種々
の割合のＡ及びＤポリマーの混合物を用いたときに達成
される予期されない優れた結果を示している。データに
は記載された容量での清澄度及び圧縮度が含まれてい
る。その清澄度は目視観察に基づくものであり、各々の
サンプルは栓止めされた臨床用チューブを１５回逆転さ
せることにより混合する。これらの結果は、ポリマーＤ
に対するＡの好ましい割合は７０〜３０重量部のＤに対
し３０〜７０重量部のＡ、最も好ましい割合は７０〜５
０重量部のＤに対し３０〜５０重量部のＡであることを
示す。実施例４９〜６０の結果は、酵素ブロスと凝集剤
混合物の混合を増加しても上清の清澄度又は圧縮度に他
の顕著な影響もないことを示している。
の割合のＡ及びＤポリマーの混合物を用いたときに達成
される予期されない優れた結果を示している。データに
は記載された容量での清澄度及び圧縮度が含まれてい
る。その清澄度は目視観察に基づくものであり、各々の
サンプルは栓止めされた臨床用チューブを１５回逆転さ
せることにより混合する。これらの結果は、ポリマーＤ
に対するＡの好ましい割合は７０〜３０重量部のＤに対
し３０〜７０重量部のＡ、最も好ましい割合は７０〜５
０重量部のＤに対し３０〜５０重量部のＡであることを
示す。実施例４９〜６０の結果は、酵素ブロスと凝集剤
混合物の混合を増加しても上清の清澄度又は圧縮度に他
の顕著な影響もないことを示している。
【００３０】
【表７】
【００３１】
【表８】
【００３２】上記の特許、刊行物及び試験方法は引用に
よりこれに組み入れる。
よりこれに組み入れる。
【００３３】本発明における多くの変更（ｖａｒｉａｔ
ｉｏｎ）が上記の詳細な説明に照らして当業者に示唆さ
れるであろう。例えばジメチルアミンの代りに、該ポリ
アミンはメチルアミン、メタノールアミンまたはジメタ
ノールアミンから誘導される単位を含むことができる。
アクリルアミドのマンニッヒ・ホモポリマーの代りに、
５〜５０％のコポリマーを含有するアクリルアミドのマ
ンニッヒ・コポリマーを用いることができる。エチレン
ジアミンの代わりに、該第四級ポリアミンはアンモニア
又はジエチレントリアミンから誘導することができる。
全てのこれらの自明な改変は、特許請求の範囲の完全に
意図された領域に入っている。
ｉｏｎ）が上記の詳細な説明に照らして当業者に示唆さ
れるであろう。例えばジメチルアミンの代りに、該ポリ
アミンはメチルアミン、メタノールアミンまたはジメタ
ノールアミンから誘導される単位を含むことができる。
アクリルアミドのマンニッヒ・ホモポリマーの代りに、
５〜５０％のコポリマーを含有するアクリルアミドのマ
ンニッヒ・コポリマーを用いることができる。エチレン
ジアミンの代わりに、該第四級ポリアミンはアンモニア
又はジエチレントリアミンから誘導することができる。
全てのこれらの自明な改変は、特許請求の範囲の完全に
意図された領域に入っている。
【００３４】本発明の主たる特徴及び態様を要約すれば
以下のとおりである。
以下のとおりである。
【００３５】１．（ａ）水性酵素ブロス（ａｅｕｅｏｕ
ｓ ｅｎｚｙｍｅ ｂｒｏｔｈ）に、（１）マンニッヒ
（Ｍａｎｎｎｉｃｈ）アクチルアミドポリマー、及び
（２）少くとも約２５，０００の分子量を有する第四級
ポリアミンの混合物（ｂｌｅｎｄ）を含有してなる凝集
剤（ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ）を添加することを特徴とす
る水性酵素ブロスの凝集法。
ｓ ｅｎｚｙｍｅ ｂｒｏｔｈ）に、（１）マンニッヒ
（Ｍａｎｎｎｉｃｈ）アクチルアミドポリマー、及び
（２）少くとも約２５，０００の分子量を有する第四級
ポリアミンの混合物（ｂｌｅｎｄ）を含有してなる凝集
剤（ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ）を添加することを特徴とす
る水性酵素ブロスの凝集法。
【００３６】２．（１）対（２）の比が、それぞれの実
体ポリマー固体（ｒｅａｌ ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｏｌｉ
ｄ）重量で約９９：１〜１：９９の範囲内にある第１項
の方法。
体ポリマー固体（ｒｅａｌ ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｏｌｉ
ｄ）重量で約９９：１〜１：９９の範囲内にある第１項
の方法。
【００３７】３．（１）がアクリルアミドのマンニッヒ
ホモポリマーである第１項の方法。 ４．（１）が５〜５０％のコモノマーを含有するアクリ
ルアミドのマンニッヒコポリマーである第１項の方法。
ホモポリマーである第１項の方法。 ４．（１）が５〜５０％のコモノマーを含有するアクリ
ルアミドのマンニッヒコポリマーである第１項の方法。
【００３８】５．（１）が２５〜１００モル％のジメチ
ルアミノメチル基を含有する第１項の方法。
ルアミノメチル基を含有する第１項の方法。
【００３９】６．用いる第四級ポリアミンが、（ｉ）モ
ノ（又はジ‐）アルキルアミン又はモノ（又はジ‐）ア
ルカノールアミン及び、（ｉｉ）エピハロヒドリン、及
び（ｉｉｉ）最大約１０モル％のアルキレンジアミン又
はアンモニアから製造される第１項の方法。
ノ（又はジ‐）アルキルアミン又はモノ（又はジ‐）ア
ルカノールアミン及び、（ｉｉ）エピハロヒドリン、及
び（ｉｉｉ）最大約１０モル％のアルキレンジアミン又
はアンモニアから製造される第１項の方法。
【００４０】７．用いる該モノ（又はジ‐）アルキルア
ミンがモノメチルアミン又はジメチルアミンである第６
項の方法。
ミンがモノメチルアミン又はジメチルアミンである第６
項の方法。
【００４１】８．用いる該モノアルカノールアミンがモ
ノエタノールアミンである第６項の方法。
ノエタノールアミンである第６項の方法。
【００４２】９．（ｂ）該酵素ブロスと凝集剤とを混合
し；そして（ｃ）該酵素ブロス／凝集剤混合物を沈殿さ
せる、工程をも含む第１項の方法。
し；そして（ｃ）該酵素ブロス／凝集剤混合物を沈殿さ
せる、工程をも含む第１項の方法。
【００４３】１０．（２）がエピハロヒドリン及びアミ
ン又はアミンの混合物の反応生成物である第四級ポリア
ミンであり、該ポリアミンが約２５，０００〜約３５
０，０００の範囲内の分子量を有する第１項の方法。
ン又はアミンの混合物の反応生成物である第四級ポリア
ミンであり、該ポリアミンが約２５，０００〜約３５
０，０００の範囲内の分子量を有する第１項の方法。
【００４４】１１．該エピハロヒドリンがエピハロヒド
リンである第６項の方法。
リンである第６項の方法。
【００４５】１２．該アミンがジメチルアミンとエチレ
ンジアミンの混合物を含有してなる第６項の方法。
ンジアミンの混合物を含有してなる第６項の方法。
【００４６】１３．第四級ポリアミン（２）が約５０モ
ル％のエピクロルヒドリン、約４９モル％のジメチルア
ミンで及び約１モル％のエチレンジアミンの反応生成物
であり、該ポリアミンが約５０，０００〜約３００，０
００の分子量を有する第６項の方法。
ル％のエピクロルヒドリン、約４９モル％のジメチルア
ミンで及び約１モル％のエチレンジアミンの反応生成物
であり、該ポリアミンが約５０，０００〜約３００，０
００の分子量を有する第６項の方法。
【００４７】１４．該酵素がプロデアーゼ（ｐｒｏｔｅ
ａｓｅ）である第１項の方法。
ａｓｅ）である第１項の方法。
【００４８】１５．約１０〜約１００ｇ／ブロス１ｌの
凝集剤混合物を添加する第１項の方法。
凝集剤混合物を添加する第１項の方法。
【００４９】１６．（１）マンニッヒアクリルアミドポ
リマー １．０〜９９．０重量部、及び（２）少くとも
約２５，０００の分子量を有する第四級ポリアミン９
９．０〜１．０重量部を含有することを特徴とする、約
１０〜約１００ｇ／ｌブロスの量で水性酵素ブロス上清
（ｓｅｐｅｒｎａｔａｎｔ）に添加したときに該上清の
清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）と圧縮度（ｃｏｍｐａｔｉｏ
ｎ）とを改善する凝集剤組成物。
リマー １．０〜９９．０重量部、及び（２）少くとも
約２５，０００の分子量を有する第四級ポリアミン９
９．０〜１．０重量部を含有することを特徴とする、約
１０〜約１００ｇ／ｌブロスの量で水性酵素ブロス上清
（ｓｅｐｅｒｎａｔａｎｔ）に添加したときに該上清の
清澄度（ｃｌａｒｉｔｙ）と圧縮度（ｃｏｍｐａｔｉｏ
ｎ）とを改善する凝集剤組成物。
Claims (2)
- 【請求項１】 （ａ）水性酵素ブロスに、（イ）マンニ
ッヒアクリルアミドポリマー、及び（ロ）少くとも約２
５，０００の分子量を有する第四級ポリアミンの混合物
を含有してなる凝集剤を添加することを特徴とする水性
酵素ブロスの凝集法。 - 【請求項２】 （１）マンニッヒアクリルアミドポリマ
ー １．０〜９９．０重量部、及び （２）少くとも約２５，０００の分子量を有する第四級
ポリアミン ９９．０〜１．０重量部 を含有することを特徴とする、約１０〜約１００ｇ／ｌ
ブロスの量で水性酵素ブロス上清に添加したときに該上
清の清澄度と圧縮度とを改善する凝集剤組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US921666 | 1978-07-03 | ||
| US92166692A | 1992-07-30 | 1992-07-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06165673A true JPH06165673A (ja) | 1994-06-14 |
Family
ID=25445782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5204417A Pending JPH06165673A (ja) | 1992-07-30 | 1993-07-28 | 酵素ブロス流を凝集させるための、マンニツヒアクリルアミドポリマー類と第四級ポリアミン類の混合物の利用 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0581002A2 (ja) |
| JP (1) | JPH06165673A (ja) |
| KR (1) | KR940005796A (ja) |
| AR (1) | AR247759A1 (ja) |
| AU (1) | AU663606B2 (ja) |
| BR (1) | BR9303020A (ja) |
| CA (1) | CA2101469A1 (ja) |
| FI (1) | FI933405A (ja) |
| MX (1) | MX9304428A (ja) |
| TW (1) | TW345595B (ja) |
| ZA (1) | ZA935498B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1098907B1 (en) | 1998-07-21 | 2004-09-29 | Monsanto Technology LLC | Clarification of protein precipitate suspensions using anionic polymeric flocculants |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3503946A (en) * | 1967-07-14 | 1970-03-31 | American Cyanamid Co | Process for the manufacture of cationic polyacrylamide |
| US3695999A (en) * | 1970-07-22 | 1972-10-03 | Peter Salvatore Forgione | Isolation of enzymes from aqueous media by means of polyanions |
| US4250269A (en) * | 1979-11-26 | 1981-02-10 | Buckman Laboratories, Inc. | Water-soluble mixtures of quaternary ammonium polymers, nonionic and/or cationic vinyl-addition polymers, and nonionic and/or cationic surfactants |
| US4319020A (en) * | 1980-12-05 | 1982-03-09 | American Cyanamid Company | Polyquaternary flocculants |
| US4508825A (en) * | 1983-03-30 | 1985-04-02 | Miles Laboratories, Inc. | Method for the separation of extracellular amylase and protease produced during the fermentation of enzyme producing microorganisms |
| JPS63258607A (ja) * | 1987-04-17 | 1988-10-26 | Ebara Infilco Co Ltd | 凝集剤 |
| US4997759A (en) * | 1990-02-05 | 1991-03-05 | American Cyanamid Company | Use of blends of mannich acrylamide polymers and dimethyldiallylammonium halide polymers for flocculating enzyme broth streams |
-
1993
- 1993-06-11 EP EP93109404A patent/EP0581002A2/en not_active Withdrawn
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- 1993-07-28 CA CA002101469A patent/CA2101469A1/en not_active Abandoned
- 1993-07-28 BR BR9303020A patent/BR9303020A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-07-28 JP JP5204417A patent/JPH06165673A/ja active Pending
- 1993-07-29 FI FI933405A patent/FI933405A/fi not_active Application Discontinuation
- 1993-07-29 AR AR93325564A patent/AR247759A1/es active
- 1993-07-29 KR KR1019930014833A patent/KR940005796A/ko not_active Application Discontinuation
- 1993-07-29 AU AU44293/93A patent/AU663606B2/en not_active Ceased
- 1993-07-29 ZA ZA935498A patent/ZA935498B/xx unknown
Also Published As
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|---|---|
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| EP0581002A3 (ja) | 1994-03-30 |
| FI933405A (fi) | 1994-01-31 |
| AU4429393A (en) | 1994-02-03 |
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| MX9304428A (es) | 1994-02-28 |
| AR247759A1 (es) | 1995-03-31 |
| FI933405A0 (fi) | 1993-07-29 |
| BR9303020A (pt) | 1994-03-01 |
| KR940005796A (ko) | 1994-03-22 |
| ZA935498B (en) | 1994-02-28 |
| CA2101469A1 (en) | 1994-01-31 |
| TW345595B (en) | 1998-11-21 |
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