JPH06165655A

JPH06165655A - コレステロール低減用組成物

Info

Publication number: JPH06165655A
Application number: JP4191386A
Authority: JP
Inventors: Toshi Nagaoka; 岡利長; Yoshiaki Kanamaru; 丸義敬金; Yasuo Kuzutani; 谷泰雄葛; Tei Kojima; 嶋禎小; Tamotsu Kuwata; 田有桑
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1992-06-26
Filing date: 1992-06-26
Publication date: 1994-06-14

Abstract

(57)【要約】【構成】ホエイ蛋白質、ホエイ蛋白質精製物、ホエイ
蛋白質分画物、及び／又はこ（れら）の酵素分解物から
なるコレステロール低減用組成物。【効果】安全且つ効率的に血清コレステロール濃度を
低減させることを目的として、医薬又は飲食品タイプと
して高コレステロール症の予防、治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コレステロール低減用
組成物に関するものであり、更に詳細には、ホエイ蛋白
質（乳清蛋白質）を処理して得られる誘導体を含有せし
めてなる、血清コレステロール濃度を低減せしめるのに
きわめて有効な組成物に関するものである。

【０００２】本発明に係る組成物は、コレステロール低
減剤として医薬タイプで使用するほか、コレステロール
低減用の飲料、食品、栄養食品、機能性食品、特定保健
用食品等飲食品タイプで使用し、コレステロールの低減
のほか、コレステロール蓄積の予防等に広く利用できる
ものである。

【０００３】

【従来の技術】ステロールとその誘導体は生体に必須の
構成成分である。トリアシルグリセロールはエネルギー
貯蔵としての役割を果たすだけであるが、コレステロー
ルやその脂肪酸エステルは細胞膜の重要な構成成分であ
ると同時に、胆汁酸・ステロイドホルモン・ビタミンＤ
などの体内で種々の重要な機能を果たす誘導体を生じ
る。コレステロールの代謝調節は心血管系を健康に保つ
上で重要であり、その異常は動脈硬化症をきたすことに
なる。

【０００４】近年、食餌性繊維をはじめ、大豆蛋白質、
不飽和脂肪酸など、さまざまな食品成分がコレステロー
ル代謝に好ましい影響を及ぼすことが、国内外で活発に
研究されている。

【０００５】例えば、キャロルとハミルトンは血漿コレ
ステロール値に対する食餌蛋白質について検討し、大豆
蛋白質がカゼイン蛋白質に比べて血漿コレステロール値
を低下させることを明らかにしている（K. K. Carrol a
nd R. M. J. Hamilton, J. Food Sci., 40,18-23(197
5))。

【０００６】また、特開昭６０−１１４２５によれば、
大豆蛋白質を酵素を用いて加水分解して得られた分子量
２００〜１５００のオリゴペプチドに血中コレステロー
ル濃度低下作用があることが示されている。このように
大豆蛋白質などを代表とする植物性蛋白質、およびその
酵素分解物などには、一般に血清コレステロール低下作
用、抗動脈硬化作用を有すると考えられている。

【０００７】一方、動物性蛋白質については、Ｍａｎｎ
らが食事における多量の発酵乳と血清コレステロールの
関係について述べており、ヨーグルトに血清コレステロ
ール低下作用のあることを示している(G. V. Mann and
A. Spaerry, Am. J. Clin. Nutr., 27, 464-469(1974),
G. V. Mann, Atherosclerosis, 26, 335(1977))。ま
た、ヨーグルトのみならず、牛乳や脱脂乳にも血清コレ
ステロールを低下させる効果があることが人間やラット
について認められている(G. Hapner et al., Am. J. Cl
in. Nutr., 32, 19(1979), C. R. Nair and G. V. Man
n, Atherosclerosis. 26, 363(1979)）。

【０００８】牛乳はカルシウム、ビタミンなどを含めた
各種のバランスの良い供給源であるが、最近、牛乳中に
は種々の機能を有する物質が含まれることが明らかにさ
れている。

【０００９】例えば、牛乳中に含まれる蛋白質を酵素で
分解して得られるペプチドに関する研究は盛んに行われ
ている。牛乳中の全窒素源は約80％がカゼイン、残りは
主として乳清蛋白質と非蛋白態窒素化合物である。牛乳
のカゼイン蛋白質は主にαカゼイン、βカゼインからな
るが、これをトリプシンで酵素分解して得られるペプチ
ドには、カルシウムの吸収作用に寄与するといわれるカ
ゼインホスホペプチド、血圧調整に寄与するといわれる
アンジオテンシン調整ペプチド等の存在が知られてい
る。

【００１０】これまでの研究においては、先に示したよ
うに発酵乳について、コレステロール低下作用を示すこ
とが認められているにすぎない。一方、K. K. Carrolに
よる研究に示されているように、カゼインおよびカゼイ
ンをパンクレアチンで酵素分解した蛋白質分解物には血
清コレステロール濃度低下作用は認められていない。

【００１１】これに対して本発明は、ホエイ蛋白質誘導
体、つまりその処理物、精製物ないし分画物に顕著な血
清コレステロール濃度低減作用があることをはじめて見
出し、この新知見を基礎として完成されたものである
が、このようなことは従来全く知られておらず新規であ
る。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、安全性にす
ぐれしかも顕著な血清コレステロール濃度低減作用を有
する物質を新たに開発する目的でなされたものである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明は上記目的を達成
するためになされたものであって、大豆蛋白質などを代
表とする植物性蛋白質は、抗動脈硬化作用を有すると考
えられ、すでに大豆蛋白質からは血清コレステロール低
下作用を発現する可能性のある分子量約１万のペプチド
が単離され現在活発にその有効成分の検討が行われてい
る現状に鑑み、大豆蛋白質と比肩される良質の蛋白質で
ある牛乳蛋白質に着目し、しかも従来、チーズ製造やカ
ゼイン製造時に副生しており格別の用途もなく廃棄され
ていた乳清（ホエイ）の有効利用の開発という面から、
乳清蛋白質に着目した。そして乳清蛋白質及びその酵素
分解物中の血清コレステロール濃度低減作用の有無につ
いて研究を重ね、その作用発現に至る過程を解明する中
で、本発明を完成するに至ったのである。すなわち、

【００１４】ウイスター系雄ラットに対し、コレス
テロールを添加した場合としない場合においてカゼイン
食とホエイ蛋白質食を与えて、血清中の総コレステロー
ル濃度を比較したところ、ホエイ蛋白質はカゼインに比
べて血清コレステロール値を有意に低下させる。

【００１５】牛乳中のホエイ蛋白質を限外濾過装置
（ＵＦ）で濃縮精製した濃縮物（ＷＰＣ）は、コレステ
ロール添加系、無添加系のいずれの場合においても、カ
ゼインと比べて血清および肝臓コレステロール濃度を有
意に低下させる。また、ＷＰＣをさらに脱乳糖、脱ミネ
ラルして、精製を行ったホエイ蛋白質単離物（ＷＰＩ）
はコレステロール添加系において、血清および肝臓コレ
ステロール濃度を有意に低下させる。

【００１６】試料にコレステロールを含有し、高コ
レステロール血症にしたラットにおいてはホエイ蛋白質
の分画物、すなわちα−ラクトアルブミン（α−Ｌ
ａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）も血清コレス
テロール濃度を有意に低下させる。

【００１７】試料にコレステロールを含有し、高コ
レステロール血症にしたラットにおいては、β−ラクト
グロブリンをトリプシンで加水分解した分解物（β−Ｌ
ｇＴ）、あるいはＷＰＩを５％溶液とし、トリプシン
を用いて、ＷＰＩ中のβ−ラクトグロブリンのみを優先
的に酵素分解したＷＰＩ（αＷＰＩ）についても血清コ
レステロール濃度を有意に低下させる。

【００１８】試料にコレステロールを含有し、高コ
レステロール血症にしたラットにおいては、ＷＰＩ、α
−Ｌａ、β−Ｌｇ、β−Ｌｇのペプシン加水分解物には
血清コレステロール濃度を有意に低下させることが認め
られるが、カゼインおよびカゼインのペプシン分解物に
はその傾向は認められない。

【００１９】酸カゼインやカゼインを酵素で分解し
たときに得られるカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）に
は血清および肝臓コレステロール濃度に対する影響は認
められない：ことを見出したのである。

【００２０】以上の実験上の事実から、従来には報告さ
れたことのなかった動物性蛋白質である牛乳蛋白質から
調製したホエイ蛋白質やその種々の分画物、あるいはホ
エイ蛋白質の酵素分解物に血清コレステロール濃度低減
作用が認められること、そしてカゼイン及びその酵素分
解物にはその作用が認められないことを確認し、これら
の新知見に基づき更に研究の結果、本発明の完成に至っ
た。

【００２１】すなわち本発明は、ホエイ蛋白質誘導体を
含有するコレステロール低減用組成物を提供するもので
ある。本発明において有効成分として使用されるホエイ
蛋白質誘導体の起源であるホエイ蛋白質としては、ホエ
イ蛋白質であればすべてのものが使用でき、例えば、牛
乳からチーズを製造するときに分離製造されるスイート
ホエイ、カゼインを製造するときに分離されるカゼイン
ホエイ等が適宜使用される。ホエイ蛋白質誘導体として
は、これらのホエイ蛋白質を精製してなるホエイ蛋白質
精製物、例えば、ホエイを脱乳糖、脱ミネラルして蛋白
質を固形分当り75％程度まで濃縮したホエイ蛋白質濃縮
物（Whey Protein Concentrate、WPC)、あるいは、ＷＰ
Ｃを更に電気透析により脱ミネラルして精製し、蛋白質
濃度を90％以上にまで高め逆に脂肪や炭水化物は低下せ
しめてなるホエイ蛋白質単離物（Whey Protein Isolat
e、WPI)等が使用できる。また、これらのホエイ蛋白質
精製物を酵素処理して得られる酵素分解物も同様に使用
することができ、本発明においては、ホエイ蛋白質から
誘導される物質が広く包含される。

【００２２】したがって、本発明においては、上記のほ
か更に、例えばホエイ蛋白質を分画して得られるホエイ
蛋白質分画物、例えば、α−ラクトアルブミン（α−Ｌ
ａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）、あるいは、
これらの酵素分解物も同様に使用することができる。な
お本発明において各種ホエイ蛋白質ないしその誘導体を
加水分解するのに使用する酵素としては、分子量数百か
ら数千のペプチドにまで加水分解できる酵素で、動物、
植物、微生物起源のプロテアーゼが広く使用でき、例え
ばパパイン、フィシン、ブロメライン、トリプシン、キ
モトリプシン、カリクレイン、ペプシン、パンクレアチ
ン等が１種又は２種以上を組合わせて有利に使用できる
が、エンドペプチダーゼが好適であり、特にペプシン、
トリプシンの使用が有利である。

【００２３】酵素分解は常法によって行えばよく、温
度、ｐＨ、酵素基質等加水分解の条件に格別の制限はな
いが、例えばペプシンを用いる場合は次のようにして行
うことができる。

【００２４】酵素分解の条件はｐＨ１以上３未満、さら
に好ましくは、ｐＨ１．５ないし２付近が適している。
酵素分解の温度は３５℃以上４５℃未満、さらに好まし
くは３７℃以上４３℃未満が適している。

【００２５】酵素分解の基質蛋白質としては、特に、牛
乳からチーズを製造するときに製造されるスイートホエ
イ、またはカゼインを製造するときに分離されるカゼイ
ンホエイを脱乳糖・脱ミネラルして得たホエイ蛋白質濃
縮物（ＷＰＣ）、蛋白質濃度を９０％以上にまで高めた
ホエイ蛋白質単離物（ＷＰＩ）あるいはホエイ蛋白質を
さらに分画して得られるβ−ラクトグロブリン（β−Ｌ
ｇ）が適している。

【００２６】酵素分解の蛋白質の濃度は１０％未満、さ
らに好ましくは、３％以上５％未満が適している。酵素
分解の際に添加すべき酵素の量は基質蛋白質に対して
０．１％以上１０％未満、さらに好ましくは１％以上５
％未満が適している。

【００２７】次にトリプシンを用いた場合について説明
する。

【００２８】酵素分解の条件はｐＨ５以上９未満、さら
に好ましくは、ｐＨ７ないし８付近が適している。酵素
分解の温度は３５℃以上４５℃未満、さらに好ましくは
３７℃以上４３℃未満が適している。

【００２９】酵素分解の基質蛋白質としては、特に、牛
乳からチーズを製造するときに製造されるスイートホエ
イ、またはカゼインを製造するときに分離されるカゼイ
ンホエイを脱乳糖・脱ミネラルして、蛋白質濃度を９０
％以上にまで高めたホエイ蛋白質単離物（ＷＰＩ）ある
いはホエイ蛋白質をさらに分画して得られるβ−ラクト
グロブリン（β−Ｌｇ）が適している。

【００３０】酵素分解の蛋白質の濃度は１０％未満、さ
らに好ましくは、３％以上５％未満が適している。酵素
分解の際に添加すべき酵素の量は基質蛋白質に対して
０．１％以上１０％未満、さらに好ましくは１％以上５
％未満が適している。

【００３１】本発明の蛋白質加水分解物は、このように
して加水分解した後に不溶性画分を遠心分離などの手段
によって除去して精製することにより、更にすぐれた血
清コレステロール濃度低減作用を有する蛋白質加水分解
物を得ることができる。

【００３２】本発明に係るコレステロール低減用組成物
は、上記したホエイ由来の各種物質を一種又は二種以上
有効成分として含有してなるものであって、飲食品又は
医薬として用いるものである。これらの有効成分を食品
として使用する場合には、それ（ら）をそのまま添加し
たり、他の食品ないしは食品成分と併用したりして適宜
常法にしたがって使用できる。また、医薬として使用す
る場合には、経口又は非経口投与することができる。経
口投与の場合には、例えば常法にしたがい、錠剤、顆粒
剤、粉末剤、カプセル剤、散剤とすることができ、又、
非経口投与の場合には、例えば注射薬製剤、点滴剤、坐
剤等として使用することができる。

【００３３】本発明に係る有効成分は、天然起源である
ために毒性が全くないか又は極めて低く、きわめて安全
である（ＬＤ₅₀＞３０００ｍｇ／ｋｇ皮下、＞５０００
ｍｇ／ｋｇ経口：いずれもラット）。

【００３４】以下、本発明を製造例及び実施例により更
に詳しく説明する。

【００３５】

【製造例１】新鮮な生牛乳よりチーズを製造するときに
分離されたスイートホエイ１００ｌを原料とし、遠心分
離機を用いて、ホエイ中のカゼインの微粒子を分離除去
した。ついで、エバポレーターによって固形分濃度４５
〜５０％に濃縮し、その後、プレート式熱交換器によっ
て３０℃に急冷し、ジャケット式タンクに移した。そこ
で攪拌しながらさらに１５〜２０℃に冷却し、出来るか
ぎり微細な結晶が得られるように６〜８時間放置し、乳
糖を結晶分離した。ついで、限外濾過によってホエイ中
の蛋白質を固形分濃度として７６％にまで濃縮し、さら
に電気透析法とイオン交換法により、ホエイ中のミネラ
ルを分離除去した。得られた液を噴霧乾燥し、ＷＰＣ
０．７５ｋｇを得た。

【００３６】

【製造例２】新鮮な生牛乳よりチーズを製造するときに
分離されたスイートホエイ１００ｌを原料とし、遠心分
離機を用いて、ホエイ中のカゼインの微粒子を分離除去
した。ついで、エバポレーターによって固形分濃度４５
〜５０％に濃縮し、その後、プレート式熱交換器によっ
て３０℃に急冷し、ジャケット式タンクに移した。そこ
で攪拌しながらさらに１５〜２０℃に冷却し、出来るか
ぎり微細な結晶が得られるように６〜８時間放置し、乳
糖を結晶分離した。ついで、限外濾過によってホエイ中
の蛋白質を固形分濃度として９０％以上にまで濃縮し、
さらに電気透析法とイオン交換法により、ホエイ中のミ
ネラルを分離除去した。得られた液を噴霧乾燥し、ＷＰ
Ｉ０．６２ｋｇを得た。

【００３７】

【製造例３】新鮮な生牛乳よりチーズを製造するときに
分離されたスイートホエイ１００ｌを原料とし、遠心分
離機を用いて、ホエイ中のカゼインの微粒子を分離除去
した。ついで、エバポレーターによって固形分濃度４５
〜５０％に濃縮し、その後、プレート式熱交換器によっ
て３０℃に急冷し、ジャケット式タンクに移した。そこ
で攪拌しながらさらに１５〜２０℃に冷却し、出来るか
ぎり微細な結晶が得られるように６〜８時間放置し、乳
糖を結晶分離した。ついで、限外濾過によってホエイ中
の蛋白質を固形分濃度として９０％以上にまで濃縮し、
さらに、電気透析法とイオン交換法により、ホエイ中の
ミネラルを分離除去した。得られた液を蛋白質濃度が
１．０％になるように加水し、ついで、ｐＨを４．２５
に調整した。このｐＨ調整液をジャケット加熱機及び撹
拌機をそなえたタンク中で６０℃に加熱し１時間保持し
た。ついで、保持液を４０℃に冷却し、アルファラバル
社製ＭＲＰＸ−４１８型遠心分離機にて沈澱部分と上澄
部分を分離した。得られた沈澱部分を１０％水酸化ナト
リウム溶液にて中和し、常法に従って、殺菌、濃縮、噴
霧乾燥し、α−ラクトアルブミンに富む画分（α−ラク
トアルブミン組成物）０．１１ｋｇを得た。

【００３８】

【製造例４】製造例３で得られた上澄部分を、常法に従
って殺菌、濃縮、噴霧乾燥し、β−ラクトグロブリンに
富む画分（β−ラクトグロブリン組成物）０．３８ｋｇ
を得た。

【００３９】

【製造例５】ＷＰＩ１０ｋｇを１９０ｋｇの水に溶解
し、液温を３５〜３７℃とした。これに水酸化ナトリウ
ムを加えて、ｐＨを７．５〜８．０とし、あらかじめ、
０．０１ＮＨＣｌ溶液に溶解したトリプシン（ＮＯＶＯ
社４５００Ｋ）１００ｇを加えた。ｐＨを保持しながら
約５５分酵素分解を行った後、ただちに急冷し、ｐＨを
６．９〜７．０とした後に、プレート式殺菌機によっ
て、酵素失活を行った。この液を噴霧乾燥することによ
って、ＷＰＩ酵素分解物（αＷＰＩ）約８．５ｋｇを得
た。

【００４０】

【製造例６】製造例４の方法によって製造したβ−ラク
トグロブリン組成物１０ｋｇを１９０ｋｇの水に溶解
し、液温を４２℃とした。これに水酸化ナトリウムを加
えて、ｐＨを７．５〜８．０とし、あらかじめ、０．０
１ＮＨＣｌ溶液に溶解したトリプシン（ＮＯＶＯ社４５
００Ｋ）１００ｇを加えた。ｐＨを保持しながら約３時
間酵素分解を行った後、ただちに急冷し、ｐＨを６．９
〜７．０とした後に、プレート式殺菌機によって、酵素
失活を行った。この液を噴霧乾燥することによって、β
−ラクトグロブリン酵素分解物（β−ＬｇＴ）約９．
０ｋｇを得た。

【００４１】

【製造例７】製造例４の方法によって製造したβ−ラク
トグロブリン組成物１０ｋｇを１９０ｋｇの水に溶解
し、液温を３５〜３７℃とした。これに濃塩酸を加え
て、ｐＨを１．７〜１．９とし、あらかじめ、０．０１
ＮＨＣｌ溶液に溶解したペプシン（オルタナ社）１００
ｇを加えた。ｐＨを保持しながら約２０時間酵素分解を
行った後、ｐＨを６．９〜７．０とし、ただちに８０℃
３０分間加熱し、酵素の失活をおこなった。この液を５
０００ｒ．ｐ．ｍ、２０分間遠心分離して、沈殿物を得
た。これを凍結乾燥することによって、β−ラクトグロ
ブリン酵素分解物（β−ＬｇＰ）約４．５ｋｇを得
た。

【００４２】

【実施例１】初体重９０〜１１０ｇ前後のウイスター系
雄ラットに、市販の固形飼料を５日間与えた。その後、
４群（１群各６匹）に分けて各々特定の飼料を与えた。
その組成を下記表１、表２、表３に示す。すなわちＣ群
（カゼイン添加、コレステロール無添加）、ＣＣ群（カ
ゼイン、コレステロール添加）、Ｗ群（ＷＰＣ添加、コ
レステロール無添加）、ＷＣ群（ＷＰＣ、コレステロー
ル添加）とした。

【００４３】

【表１】

【００４４】

【表２】

【００４５】

【表３】

【００４６】試験期間は７０日間とし、２日毎に体重を
測定し、食餌摂取量は２８日目以降に測定し、下記表４
の結果を得た。なお、以下において、数値は、１群６匹
の平均±ＳＥＭとし、そして、実験結果の統計的分析に
は、Duncan's multiple range testとStudent's t-test
を用いた。

【００４７】

【表４】

【００４８】また、実験食摂取後、０、７、１４、２
１、２８、３５、４２、４９、５６、６３日目の午後１
時３０分から、エーテル麻酔下でヘパリン処理したキャ
ピラリにより尾静脈から採血し、血清コレステロールを
酵素法により測定して下記表５の結果を得た。７０日目
にラットを心臓採血により屠殺した。血清は３０００ｒ
ｐｍ，１５分間の遠心分離により調製した。血清コレス
テロールの定量は酵素法、具体的には市販のキット（モ
ノテストコレステロール；ベーリンガーマンハイム山之
内株式会社）を用いて測定した。スタンダードは（プレ
チセットコレステロール；ベーリンガーマンハイム山之
内株式会社）を用いた。

【００４９】

【表５】

【００５０】また、飼育期間中、３日間糞を集め、全糞
量、糞中の総ステロイド、酸性ステロイド、中性ステロ
イド（コプロスタノール、コレステロール）をそれぞれ
測定し、下記表６の結果を得た。

【００５１】

【表６】

【００５２】これらの結果から明らかとなるように、体
重増加量は７０日間を通じて、４群間に有意な変化は見
られなかった。また、食餌摂取量においても変化はみら
れなかった。血清中の総コレステロールは、実験食摂取
後７日目から、Ｗ群でＣ群に比べて有意な減少が見られ
た。また、実験食摂取後２１日目からＷＣ群はＣＣ群に
比べ有意に減少した。最終的に食餌性コレステロール無
添加の場合、添加の場合の双方で、乳清蛋白質はカゼイ
ンに比べて血清コレステロールを有意に減少させた。糞
中の酸性ステロイドは、Ｃ群とＷ群、ＣＣ群とＷＣ群の
それぞれの間で有意差は見られなかった。糞中の中性ス
テロイドはＣ群とＷ群間には有意差は見られなかった
が、ＣＣ群とＷＣ群間ではＷＣ群が有意に上昇した。糞
中の中性ステロイドをコプロスタノールとコレステロー
ルとに分けて見てみるとコプロスタノールはＣ群とＷ
群、ＣＣ群とＷＣ群のいずれの群間においても有意差は
見られなかったが、コレステロールはＣ群とＷ群間には
有意差はみられなかったが、ＣＣ群とＷＣ群間ではＷＣ
群が有意に上昇した。糞中の総ステロイドは、Ｃ群とＷ
群間には有意差は見られなかったが、ＣＣ群とＷＣ群間
ではＷＣ群が有意に上昇した。糞重量においては、Ｗ群
が４群間の中で有意に低かった。

【００５３】上記結果から、乳清蛋白質がカゼインと比
較してコレステロール無添加時、添加時のいずれにおい
てもラットの血清コレステロール値を低下させることが
観察され、体外へのコレステロール排泄量も高いことか
ら、乳清蛋白質中にはコレステロール低下因子が存在す
ることが確認された。

【００５４】

【実施例２】初体重９０〜１１０ｇ前後のウイスター系
雄ラットに、市販の固形飼料を２日間与えた。その後、
４群（１群各６匹）に分けて、各々特定の飼料を与え
た。その組成を下記表７に示す。すなわち、Ｃ群（カゼ
イン）、ＷＰＩ群（ＷＰＩ）、β−ＬＧ群（β−ラクト
グロブリン）、α−ＬＡ群（α−ラクトアルブミン）と
し、いずれもコレステロール添加（１０ｇ／ｋｇ）とし
た。

【００５５】

【表７】

【００５６】試験期間は１４日間とし、２日毎に体重を
測定し、食餌摂取量は１３日目に測定した。また、実験
食摂取後、１２日目の午後１時３０分から、エーテル麻
酔下でヘパリン処理したキャピラリにより尾静脈から採
血し、血清コレステロールを実施例１と同様にして酵素
法により測定した。また更に、１４日目にラットを心臓
採血により屠殺し、肝臓を取り出した。肝臓は、表面に
付いた血液などをよく拭きとり、０．９％塩化ナトリウ
ム溶液で洗浄後、湿重量を測定した。血清は３０００ｒ
ｐｍ，１５分間の遠心分離により調製した。１４日目の
血清については、血清総コレステロール、ＨＤＬコレス
テロール、中性脂質、リン脂質を測定した。得られた結
果を下記表８に示す。

【００５７】

【表８】

【００５８】また、肝臓については、総脂質、中性脂
質、リン脂質、コレステロールを測定し、下記表９の結
果を得た。

【００５９】

【表９】

【００６０】また、飼育期間中、７日目から１４日目の
７日間糞を集め、全糞量、糞中の総ステロイド、酸性ス
テロイド、中性ステロイド（コプロスタノール、コレス
タノール）をそれぞれ測定し、下記表１０の結果を得
た。

【００６１】

【表１０】

【００６２】これらの結果から明らかなように、体重増
加量は７日目において、各群間に有意な変化はみられな
かった。また、食餌摂取量は１４日目において、Ｃ群と
比べてＷＰＩ群で有意に低下した。血清総コレステロー
ルは、１２日目と１４日目において、ＷＰＩ群、β−Ｌ
Ｇ群、α−ＬＡ群は、Ｃ群と比較して有意に血清総コレ
ステロールを低下させた。血清ＨＤＬコレステロールは
β−ＬＧ群、ＷＰＩ群、α−ＬＡ群がＣ群と比べ有意に
高かった。血清ＬＤＬ＋ＶＬＤＬコレステロールはＣ群
が他の群に比べて有意に高かった。血清中性脂質はＣ群
が他の群に比べて有意に低かった。血清リン脂質はβ−
ＬＧ群が他の群に比べて有意に高かった。肝臓脂質は、
総脂質、コレステロール、中性脂質、リン脂質について
の分析の結果、ｇ肝臓あたりでは、総脂質、コレステロ
ール、中性脂質、リン脂質のすべてにおいて、Ｃ群が他
の群に比べて有意に高かった。また、１００ｇ体重あた
りにおいても同様な結果が得られた。肝臓重量において
はＣ群と比較してＷＰＩ群、β−ＬＧ群で有意に低く、
α−ＬＡ群で有意に高かった。糞中の酸性ステロイド
は、α−ＬＡ群で他の３群に比べて有意に上昇した。糞
中の中性ステロイドは、Ｃ群に比べて他の３群で有意に
上昇し、その中でもα−ＬＡ群が最も高かった。糞中の
中性ステロイドをコプロスタノールとコレステロールと
に分けて見てみるとコプロスタノールに、有意差はみら
れなっかたが、コレステロールは、Ｃ群と比べて他の３
群が有意に高く、中でもα−ＬＡ群が最も高かった。糞
中の総ステロイドは、ＷＰＩ群、β−ＬＧ群、α−ＬＡ
群がＣ群に比べて有意に上昇し、中でもα−ＬＡ群が最
も高い値を示した。糞重量においては、Ｃ群と比べてβ
−ＬＧ群が有意に低く、α−ＬＡ群が有意に高かった。

【００６３】上記結果から、乳清蛋白質およびその分画
物であるα−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン
のすべてがカゼインと比較してコレステロール添加時で
ラットの血清コレステロール値を低下させることが観察
され、体外へのコレステロール排泄量も高いことから、
乳清蛋白質及びその分画物には血清コレステロール濃度
を低下させる作用を発現する成分があることが確認され
た。

【００６４】

【実施例３】初体重９０〜１１０ｇ前後のウイスター系
雄ラットに市販の固形飼料を２日間与えた。その後、６
群（１群各６匹）に分けて、各々特定の飼料を与えた。
その組成を下記表１１に示す。すなわち、Ｃ群（カゼイ
ン）、ＷＰＩ群（ＷＰＩ）、β−ＬＧ群（β−ラクトグ
ロブリン）、ＣＰ群（カゼイン加水分解物）、ＷＰ群
（α−ＷＰＩ：β−ＬＧのみを選択的に加水分解したも
の）、ＧＰ群（β−ＬＧ加水分解物）とし、いずれもコ
レステロール添加（１０ｇ／ｋｇ）とした。

【００６５】

【表１１】

【００６６】試験期間は１４日間とし、２日毎に体重を
測定し、食餌摂取量は１３日目に測定した。実験食摂取
後、１４日目にラットを心臓採血により屠殺し、肝臓を
取り出した。肝臓は、表面に付いた血液などをよく拭き
とり、０．９％塩化ナトリウム溶液で洗浄後、湿重量を
測定した。これらの結果を下記表１２に示す。

【００６７】

【表１２】

【００６８】血清は、３０００ｒｐｍ，１５分間の遠心
分離により調製した。１４日目の血清については、血清
総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、中性脂質、
リン脂質を測定した。肝臓については総脂質、中性脂
質、リン脂質、コレステロールを測定し、それぞれ下記
表１３、表１４の結果を得た。

【００６９】

【表１３】

【００７０】

【表１４】

【００７１】また、飼育期間中、６日目から１３日目の
７日間糞を集め、全糞量、糞中の総ステロイド、酸性ス
テロイド、中性ステロイドをそれぞれ測定し、下記表１
５の結果を得た。

【００７２】

【表１５】

【００７３】これらの結果から明らかなように、体重増
加量は１４日間を通じて、各群間に有意な変化は見られ
なかった。また、食餌摂取量においても６群間に有意な
変化が見られなかった。血清中の総コレステロールおよ
びＬＤＬ＋ＶＬＤＬコレステロールでは、そのままの乳
清蛋白質およびその分画物群とそれらの加水分解物群
で、共通してカゼイン群と比較して、有意に低下した。
血清中のＨＤＬコレステロールはカゼイン群と比較し
て、乳清蛋白質およびその分画物群とそれらの加水分解
物群で、共通して有意に上昇した。血清リン脂質はカゼ
イン群およびカゼイン加水分解物群と比較して、他の４
群で有意に上昇した。血清中性脂質はカゼイン群と比較
して、乳清蛋白質およびその加水分解物群で有意に上昇
した。

【００７４】肝臓脂質は、総脂質、コレステロール、中
性脂質、リン脂質についての分析の結果、ｇ肝臓あたり
では、総脂質は、カゼイン群と比較して、そのままの乳
清蛋白質およびその分画物群とそれらの加水分解物群
で、有意に減少した。コレステロールは、カゼイン群お
よびカゼイン加水分解物群と比較して他の４群で有意に
減少した。中性脂質は、カゼイン群と比較して、乳清蛋
白質群およびカゼイン加水分解物群で、有意に減少し
た。リン脂質は、カゼイン群と比較して、他の５群で有
意に低下した。また、１００ｇ体重あたりにおいても同
様な結果が得られた。肝臓重量群間に有意な変化は認め
られなかった。

【００７５】糞中の酸性ステロイドは、カゼイン群に比
べて、乳清蛋白質およびその分画物の加水分解物群で有
意に上昇した。糞中の中性ステロイドにおいては、カゼ
イン群に比べて他の５群で有意に上昇し、その中でも乳
清蛋白質およびその分画物の加水分解物群で高い値を示
した。糞中の総ステロイドでは、そのままの乳清蛋白質
およびその分画物とそれらの加水分解物群は、共通して
カゼイン群と比較して、糞中の総ステロイドを有意に上
昇させた。糞重量では、乳清蛋白質およびその分画物の
加水分解物群が有意に高い値を示した。

【００７６】上記結果から明らかなように、そのままの
乳清蛋白質およびその分画物とそれらの加水分解物は共
通して、カゼインと比較して、血清コレステロール値を
低下させることが確認された。さらに、糞中の総ステロ
イド排泄量でも、加水分解物はそのままの蛋白質と同様
に、カゼインと比較して、糞中の総ステロイド排泄量を
有意に上昇させた。加水分解しても、そのままの蛋白質
と同様に血清コレステロール濃度を低下させる作用を維
持しており、乳清蛋白質、その分画物、それらの加水分
解物には、血清コレステロール濃度を低下させる成分が
あることが、これらの試験からも明らかにされた。

【００７７】なお、これらの試験において、血清リン脂
質、中性脂質及びＨＤＬコレステロールの定量は、次の
ようにして行った。血清リン脂質の定量：市販のキット
（リン脂質Ｃ−テストワコー；和光純薬工業株式会社）
を用いて測定した。血清中性脂質の定量：市販のキット
（トリグリカラーIII，ＢＭＹ；ベーリンガーマンハイ
ム山之内株式会社）を用いて定量した。スタンダードは
（プレチマットグリセロール；ベーリンガーマンハイム
山之内株式会社）を用いた。血清ＨＤＬコレステロール
の定量：市販のキット（ＨＤＬ−コレスターゼ；日水製
薬株式会社）を用いて測定した。

【００７８】

【実施例４】ビタミンＣ２０ｇ、グラニュー糖５０
ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物３０ｇに、製造
例１で得たＷＰＣを５０ｇ加えて充分に混合した。混合
物を１００等分して袋に詰め、１袋１．５ｇのスティッ
ク状コレステロール低減用栄養健康食品を１００袋製造
した。

【００７９】

【実施例５】ＷＰＣにかえて製造例２で得たＷＰＩを用
い、またビタミンＣ２０ｇにかえてビタミンＣとクエン
酸の等量混合物２０ｇを用いたほかは、実施例４と同様
の処理をくり返し、充分に乾燥せしめた後、コレステロ
ール低減性栄養健康食品を製造した。

【００８０】

【実施例６】次の配合によりコレステロール低減剤を製
造した。（１）製造例３で得たα−ラクトアルブミン組
成物５０ｇ、（２）ラクトース９０ｇ、（３）コー
ンスターチ２９ｇ、（４）ステアリン酸マグネシウム
１ｇ。

【００８１】先ず、（１）、（２）、及び（３）（但し
１７ｇ）を混合し、（３）（但し７ｇ）から調製したペ
ーストとともに顆粒化した。得られた顆粒に（３）（但
し５ｇ）と（４）を加えてよく混合し、この混合物を圧
縮錠剤機により圧縮して、１錠あたりα−ラクトアルブ
ミン組成物を１０ｍｇ含有する錠剤１０００個を製造し
た。

【００８２】投与量は、患者の症状、年令によっても異
なるが、０．１〜１５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで１日１
〜４回投与する。本発明において用いる組成物は本来食
品由来のものであるので、既述のように安全性にはほと
んど問題はなく、したがって上記用量をこえて投与して
も差し支えはない。また、健康の維持、増進、保健、栄
養剤等としてこれを利用する場合は、上記用量よりも少
ない量を長期間に亘って服用すればよい。また、既述の
ように本発明に係る製剤は、経口投与以外の方法でも投
与することができるが、静脈投与及び筋肉投与の場合は
０．０１〜１２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、通常の
製剤と同様にして投与することができる。

【００８３】

【実施例７】次の配合を用意した。（１）製造例６で得
たβ−ラクトグロブリン酵素分解物１０ｇ、（２）塩化
ナトリウム８ｇ、（３）クロロブタノール４ｇ、
（４）炭酸水素ナトリウム１ｇ。

【００８４】全成分を蒸留水１０００ｍｌに溶解し、こ
れを５００ｍｌの点滴ビン２本に分注し、コレステロー
ル低減輸液を製造した。

【００８５】

【発明の効果】本発明によれば、血清コレステロール濃
度をきわめて効率的に低減せしめることができ、しかも
安全性がきわめて高いので、血清コレステロール濃度低
減のための予防ないし治療剤として有用であるだけでな
く、そのための飲食品としても利用することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 37/16 8314−4Ｃ // Ａ２３Ｃ 21/02 (72)発明者小嶋禎東京都東村山市栄町１−21−３明治乳業株式会社中央研究所内 (72)発明者桑田有東京都東村山市栄町１−21−３明治乳業株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ホエイ蛋白質誘導体を含有することを特
徴とするコレステロール低減用組成物。
【請求項２】ホエイ蛋白質誘導体がカゼインホエイ又
はスイートホエイ由来のものであることを特徴とする請
求項１に記載のコレステロール低減用組成物。
【請求項３】ホエイ蛋白質誘導体がホエイ蛋白質を精
製してなるホエイ蛋白質精製物であることを特徴とする
請求項１に記載のコレステロール低減用組成物。
【請求項４】ホエイ蛋白質精製物を更に酵素を用いて
加水分解してなる酵素分解物を含有することを特徴とす
る請求項３に記載のコレステロール低減用組成物。
【請求項５】ホエイ蛋白質精製物がホエイ蛋白質濃縮
物（ＷＰＣ）又はホエイ蛋白質単離物（ＷＰＩ）である
ことを特徴とする請求項３又は請求項４に記載のコレス
テロール低減用組成物。
【請求項６】ホエイ蛋白質誘導体がホエイ蛋白質を分
画精製して得られるホエイ蛋白質分画物であることを特
徴とする請求項１に記載のコレステロール低減用組成
物。
【請求項７】ホエイ蛋白質分画物を更に酵素を用いて
加水分解してなる酵素分解物を含有することを特徴とす
る請求項６に記載のコレステロール低減用組成物。
【請求項８】ホエイ蛋白質分画物がα−ラクトアルブ
ミン又はβ−ラクトグロブリンであることを特徴とする
請求項６又は請求項７に記載のコレステロール低減用組
成物。
【請求項９】加水分解酵素がペプシン又はトリプシン
であることを特徴とする請求項４又は請求項７に記載の
コレステロール低減用組成物。
【請求項10】該組成物がコレステロール低減剤又はコ
レステロール低減用飲食品であることを特徴とする請求
項１〜請求項９のいずれか１項に記載のコレステロール
低減用組成物。