JPH06157333A

JPH06157333A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH06157333A
Application number: JP4303855A
Authority: JP
Inventors: Manabu Suzuki; 学鈴木; Tomoko Kikuchi; とも子菊池; Fumihiko Takatsuki; 文彦高月; Junji Hamuro; 淳爾羽室
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1992-11-13
Filing date: 1992-11-13
Publication date: 1994-06-03
Anticipated expiration: 2016-08-13
Also published as: JP3199081B2

Abstract

(57)【要約】【目的】延命効果、腫瘍縮小効果を併せ持ち、末期癌
患者や悪液質状態の患者においても有用性の期待される
抗腫瘍剤を提供する。【構成】生体防御賦活剤とヒトインターロイキン２と
癌悪液質抑制剤との組み合わせよりなる抗腫瘍剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は（ａ）生体防御賦活剤お
よび（ｂ）インターロイキン２（以下、ＩＬ−２と称
す）またはＩＬ−２産生誘導物質と（ｃ）癌悪液質抑制
剤とを有効成分とする抗腫瘍剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】現在、癌患者に対する薬物療法としては
細胞毒としての化学療法剤、免疫療法剤等が用いられて
いる。外科的治療のみでは完治し得ない患者や外科手術
が不可能な患者に対しては腫瘍縮小効果および延命効果
を期待して薬物療法が行われており、一方、治癒切除患
者に対しては再発防止による無病期間の延長を期待して
薬物療法が行われている。

【０００３】担癌末期状態の患者においては、しばしば
極度の体重減少および全身性消耗状態が認められる。こ
の状態は癌悪液質と呼ばれており、担癌末期状態では、
患者の予後は腫瘍増殖の速度よりも悪液質の進行との相
関が強いと言われている。癌悪液質の成因には、古くよ
りトキソホルモンと称されるホルモン様の液性因子の関
与が想定されていたが、近年の研究の結果、癌細胞およ
び宿主炎症性細胞より産生されるＴＮＦ，ＩＬ−６等の
サイトカインや活性酸素分子種が重要な役割を担うこと
が明らかにされつつある。これらサイトカインによる血
中リポ蛋白リパーゼ（ＬＰＬ）活性の低下が脂質代謝異
常を誘発し、脂肪組織の著しい縮小を引き起こす。ま
た、これらサイトカインにより誘導されるプロスタグラ
ンジンＥ２（以下、ＰＧＥ２と称す）を介し発熱が誘導
され、食欲不振にも至る。更に、これらサイトカインは
血中ＡＣＴＨの上昇を介し、高コルチゾール血症を誘発
し糖代謝異常を引き起こす。また、炎症性細胞から産生
される活性酸素により全身性の臓器、組織障害が引き起
こされる。これら複数の作用が重なりあい全身性の消
耗、および体重減少が誘発され癌悪液質と呼ばれる状態
に陥るものと考えられている。また、腫瘍細胞から産生
されるＴＧＦ−βやＰＧＥ２、コルチゾール等は免疫抑
制活性を示す事が知られており、担癌末期状態では多く
の場合、免疫抑制状態に陥るといわれている。

【０００４】一方、癌の転移、再発には癌細胞が薬剤や
宿主細胞から種々の刺激を受け遺伝的な変化を生じ原発
癌細胞に比べ、細胞運動能の増強、浸潤能の増強、化学
療法剤耐性、免疫抑制物質産生増強等の多くの新たな形
質を獲得する（癌細胞の悪性化）ことによると言われて
いる。近年、この癌細胞の悪性化形質の獲得に化学療法
剤自身や、宿主炎症性細胞から産生されるＴＮＦ，ＩＬ
−６等のサイトカインやプロテアーゼや活性酸素分子種
などが関与することが明らかになりつつある（Ｌａｎｇ
ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｔｒｉ．Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．
５，１０３−１２３ページ（１９９１））。

【０００５】腫瘍細胞に対し直接的傷害作用を示す癌化
学療法剤の多くは腫瘍縮小効果を示すものの延命効果は
ほとんど示さない事、術後補助療法として用いた場合に
も有意な効果が見られない事などが明らかになるにつ
れ、レンチナンのような免疫賦活剤、生体防御賦活剤に
よる生体機能の修飾、増強に加えて、悪液質の改善およ
び悪性化の防止が癌患者の治療効果を左右する重要な因
子である事が認識され始めている。このような状況の中
で、悪液質の改善および癌細胞の悪性化の防止作用を示
し、かつ、抗腫瘍効果を合わせ持つ薬剤の開発が求めら
れている。近年、化学療法剤の一種である５−フルオロ
ウラシル（以下、５−ＦＵと称す）の誘導体である５’
−ＤＦＵＲやＰＧＥ２合成に関与するシクロオキシゲナ
ーゼの阻害剤であるインドメサシン等が癌悪液質改善効
果を示す事が示唆されているが、これら薬剤を単独で用
いても生存期間の若干の延長を示すのみで著明な抗腫瘍
効果は認められない。即ち、現在、癌悪液質および癌細
胞の悪性化を抑制し、延命効果、腫瘍縮小効果を併せ持
つ薬剤は市場に存在しない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は延命効
果、腫瘍縮小効果を併せ持ち、末期癌患者や悪液質状態
の患者においても有用性の期待される抗腫瘍剤を提供す
ることである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために末期癌担癌状態や悪液質状態、癌の悪
性化について鋭意研究を行った結果、生体防御賦活剤
と、ＩＬ−２もしくはＩＬ−２産生誘導物質と悪液質抑
制剤の３種類の作用の異なる薬物の組み合わせからなる
薬剤によって末期癌状態や悪液質状態においても延命効
果、腫瘍縮小効果が得られることを動物モデルで確認し
本発明を完成した。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。

【０００９】近年、癌悪液質の誘導にＴＮＦ，ＩＬ−６
等のサイトカインやＰＧＥ２、活性酸素などが関与する
可能性が疑われるようになってきた。これらの因子は、
化学療法剤や宿主炎症細胞と癌細胞との相互作用の結果
産生するものと考えられる。担癌状態において、腫瘍組
織に好中球、マクロファージを中心とする宿主炎症性細
胞の浸潤が起こり、腫瘍細胞との相互作用の結果、ＴＧ
Ｆ−β、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ、ＩＬ−６等の細胞傷害性
サイトカインや活性酸素分子種やプロテアーゼなどを放
出する。癌が進行している場合や、宿主細胞が充分に活
性化されていない場合や腫瘍細胞が免疫抑制因子や悪液
質を誘導する場合には、宿主細胞による腫瘍細胞の傷害
をすり抜けた腫瘍が退縮に向かうこと無く腫瘍が増殖し
たり、遠隔転移する。宿主炎症性細胞より産生されるＴ
ＮＦ，ＩＬ−６等のサイトカインやＰＧＥ２は、直接も
しくは中枢系のＣＲＨ−ＡＣＴＨ軸を介してコルチゾー
ル産生増強を誘導し、また血中ＬＰＬ活性を低下させる
ことにより宿主を悪液質状態に導く。ＰＧＥ２やコルチ
ゾール、更には上記サイトカインの影響で悪性化した腫
瘍細胞から産生されるＴＧＦ−βは宿主の免疫系を抑制
し腫瘍抵抗性を弱め、腫瘍の増殖を容易にする。一方、
腫瘍細胞内に誘導された活性酸素は腫瘍細胞のＤＮＡに
傷害を与えることにより遺伝的な変異を引き起こし、癌
細胞の悪性化を誘導し、またメタロプロテアーゼなども
腫瘍内で活性化され癌細胞に組織浸潤能を付与し再発、
転移の原因となる。化学療法剤の多くがＤＮＡに損傷を
与え腫瘍細胞を傷害せしめる作用を持つことから、この
様な状況下での化学療法剤の使用によっては腫瘍の縮小
効果は認められても、癌悪液質および癌細胞の悪性化を
増悪し、延命効果には結びつかない。一方、免疫機能の
賦活化を介し作用を発揮する、いわゆる、免疫療法剤
も、悪液質状況下で生体の免疫能が抑制されている状態
ではその効果は充分に発揮し得ない。

【００１０】そこで本発明者らは、癌細胞の悪性化、悪
液質の原因となる腫瘍細胞と非特異的炎症性細胞との相
互作用もしくはその相互作用により誘導され悪性化およ
び悪液質の誘因となる物質の機能および産生を阻害する
悪液質抑制剤とＣＴＬ等の特異的エフェクターをも増強
可能である生体防御賦活剤とＩＬ−２もしくはＩＬ−２
誘導物質を組み合わせて用いることにより、悪液質状況
下においても著明な抗腫瘍効果を発現可能な薬剤の開発
に成功した。

【００１１】本発明に用いられる生体防御賦活剤の代表
例としてのレンチナンは、骨髄細胞からの免疫担当細胞
への成熟を増強し、また細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴ
Ｌ）前駆細胞のＩＬ−２の応答性を増強する事が解明さ
れている（秋山ら、「多糖の抗腫瘍性発現の機構と免疫
学的性状の特徴」蛋白質、核酸、酵素，ｖｏｌ．２６，
２０８−２２４ページ（１９８１））。従って、担癌状
態で低下しているＩＬ−２産生能を薬剤としてＩＬ−２
を投与することでバイパスし、担癌状態で同様に抑制さ
れているＩＬ−２に対する応答性をレンチナンを投与す
ることで修飾すれば効率的な癌治療の行えることも本発
明者等によって示されている（日本国特許公告平４−５
００５）。このレンチナンもしくはレンチナン同様の作
用を持つ抗腫瘍性多糖や生体防御賦活剤とＩＬ−２の併
用でも、腫瘍縮小効果が如実に発揮されない癌種がある
こと、また癌が小さい間や外科手術との併用では著明な
抗腫瘍効果を立証することができるものの、末期癌状態
や悪液質誘導性の癌の場合には腫瘍縮小効果の認め難い
ことが、その後の研究で判明した（羽室ら、「生体防御
を最適化する免疫化学療法の検討；５−ＦＵ投与量のレ
ンチナン抗腫瘍効果発現に及ぼす影響」Ｂｉｏｔｈｅｒ
ａｐｙ、ｖｏｌ．６，３９５ページ（１９９２））。そ
の理由が前述の癌悪液質の産生や活性酸素分子種による
癌細胞の悪性化にあることを見いだし本発明は完成され
たものである。本発明は、抗腫瘍効果を中心とする生体
防御賦活剤とＩＬ−２の併用に更に加えるべき薬物とし
て悪液質抑制物質を考え、この３者による抗腫瘍効果の
一層の増強方法の考案によってなされたものである。本
発明で用いられる悪液質抑制剤としては、腫瘍内への非
特異的炎症細胞の浸潤を抑える、腫瘍血管増殖抑制因子
（代表的なものとしてはフマギリン誘導体を挙げられ
る）や、癌の進展に伴い炎症細胞との相互作用の結果誘
導される酵素（代表的なものとしてはピリミジンヌクレ
オチドホスフォリラーゼやマトリックスメタロプロテア
ーゼが挙げられる）により活性化される癌化学療法剤の
プロドラッグ（代表的なものとして、５’−ＤＦＵＲが
挙げられる）なども用いることができる。癌細胞の悪性
化によりこれら血管増殖が増強されると共に炎症性細胞
由来のサイトカインにより癌細胞中の種々の遺伝子が活
性化され、ピリミジンヌクレオチドホスフォリラーゼや
マトリックスメタロプロテアーゼなど各種の酵素活性が
増強することを活用するものである。これら悪性化癌細
胞で選択的に増強する酵素によりプロドラッグが活性体
に変換される事により、活性体としての化学療法剤は正
常細胞を傷害することなく悪性化癌細胞を選択的に傷害
することにより癌悪液質を抑制する。例えば、本発明に
使われる５’−ＤＦＵＲは、悪性化した癌細胞で増強す
るピリミジンヌクレオチドホスフォリラーゼにより活性
体である５−フルオウラシル（５−ＦＵ）に変換され、
代謝拮抗作用による癌細胞傷害作用を示すものである。
このピリミジンヌクレオチドホスファリラーゼは血小板
由来の血管内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）と同一
構造ともされる（Ｆｕｒｕｋａｗａら、Ｎａｔｕｒｅ
ｖｏｌ．３５６，６６８ページ（１９９２））。また、
腫瘍局所に浸潤した非特異的炎症細胞から産生される活
性酸素の捕捉剤やその誘導物質（代表的なものとしては
カタラーゼ、次硝酸ビスマス、マンニトール、ＳＯＤ、
チオレドキシン、グルタチオンなどが挙げられる）を用
いることもできる。癌悪性化の過程でこれらの活性酸素
が重要な働きをしていることは細川らによって報告され
ている（岡田ら、「癌細胞の悪性化の進展における抗腫
瘍エフェクター細胞由来活性酸素の役割」第５０回日本
癌学会総会（東京）１６０ページ（１９９１））。ま
た、同様に炎症性細胞から産生されるＰＧＥ２を始めと
するアラキドン酸代謝物阻害剤（代表的なものとして非
ステロイド系酸性抗炎症剤であるインドメサシン、イブ
プロフェンなどが挙げられる）やＴＧＦ−β、ＴＮＦ、
ＩＬ−６の産生、作用阻害剤（代表的なものとして各サ
イトカインに対する中和抗体や同レセプターのアンタゴ
ニスト等が挙げられる）やＡＣＴＨ阻害剤なども用いる
ことができる。

【００１２】本発明で用いられる生体防御賦活剤として
は、レンチナン、ソニフィラン等のような抗腫瘍剤とし
て使用されている薬剤を始めとする多糖類、ピシバニー
ル、クレスチン並びにこれらと同様の作用を有する物質
を用いることができる。中でも、中性多糖に属し、マク
ローファージからの炎症性サイトカイン誘導能を持た
ず、悪液質の一成因であるＰＧＥ２の産生を抑制し、か
つ生体防御機能の賦活化に優れているレンチナンを好ま
しいものとして挙げることができる。特に、上記で具体
的に列挙した抗腫瘍性多糖はそれ自体公知の化合物であ
り、例えば、レンチナンについてはＢｉｏｔｈｅｒａｐ
ｙ、ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６，１１１４−１１２６ページ
（１９９０）および、ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅ
ｓｅａｒｃｈＶｏｌ．７４，２２７−２４０ページ
（１９７９）に詳細な記載がある。

【００１３】本発明に用いるＩＬ−２もそれ自体公知で
あり、哺乳類起源の天然に見いだされるものおよび遺伝
子組換え技術を利用したものを用いることができる。こ
れらのうちヒト由来のものが好ましく、例えば、Ｔａｎ
ｉｇｕｃｈｉらのＮａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３０２，３０
５−３１０ページ（１９８３）に記載のＩＬ−２を具体
的なものとして挙げることができる。また、特願昭５８
−１５７７２３に記載されるＩＬ−２活性検定法におい
てＩＬ−２活性を示すものであれば、ＩＬ−２の構造の
一部を追加、欠損、変異させたものでも良い。また、ｉ
ｎｖｉｖｏにおいてＩＬ−２の発現を誘導するような
物質を上記ＩＬ−２に替えて用いることもできる。本発
明に用いるＩＬ−２誘導物質としては、その作用を示す
ものであれば如何なるものでもよいが後記実施例２で示
すように、ＤＨＥＡやエストラジオール等のＩＬ−２産
生増強作用が知られているホルモン（Ｄａｙｎｅｓら、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．２０，７９３−
８０２ページ（１９９０））や核酸誘導体やアミノ酸誘
導体などを用いて外からＩＬ−２を投与すると同様の効
果をもたらすことができる。また、後記実施例３で示す
ように、患者末梢血、腫瘍浸潤リンパ球もしくはこれら
の細胞を適切なサイトカインの存在下で培養し、活性化
した細胞、または、不活化した自己腫瘍細胞に、哺乳類
細胞中で発現する形で構築したＩＬ−２遺伝子を含むベ
クター、例えば、ＫａｓｉｄらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８７，４７３−４７７ページ
（１９９０）に記載のレトロウイルスベクター等を用い
ＩＬ−２遺伝子を導入することにより構成的にＩＬ−２
を産生するようになった細胞を患者の体内に戻す事によ
り生体内でＩＬ−２を構成的に誘導する方法によって
も、体内で相応のＩＬ−２濃度をＩＬ−２投与同様に保
持することができれば良い。

【００１４】本発明者らは、ｉｎｖｉｖｏにおいて免
疫化学療法による治療をすり抜けた癌細胞株が治療の回
数を増すに従い、免疫化学療法に対し抵抗性を獲得する
事、そして、この抵抗性の獲得には、悪液質の一成因と
考えられているＰＧＥ２の癌細胞での産生増強が関与す
る事を見いだしている（菊池ら、「免疫化学療法剤のｔ
ｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎに対する作用」第５
１回日本癌学会総会（大阪）２５６（１９９２））。本
発明者等は、鋭意研究を重ねた結果、該免疫化療剤抵抗
性株に対する治療効果を以て、癌悪液質状況下で悪液質
を抑制しかつ腫瘍増殖抑制効果を持つ新規薬剤の評価系
として使用可能である事を見いだした。すなわち、後記
実施例１で示す様にＰＧＥ２産生量が低い元株にたいし
ては、化学療法剤単独、レンチナン単独、もしくはＩＬ
−２単独では抗腫瘍効果を示さないが、化学療法剤とレ
ンチナンもしくはレンチナンとＩＬ−２の併用によって
著明な抗腫瘍効果が発現されることを確認した。一方、
免疫化学療法による治療を３回すり抜けた細胞株であり
中程度にＰＧＥ２産生が増強した細胞株であるｖｐ３に
対しては、もはや癌化学療法剤とレンチナンの併用は治
療効果を示さず、レンチナンとＩＬ−２の併用のみが効
果を示す。しかしながら、免疫化学療法のｉｎｖｉｖ
ｏ治療を５回すり抜けた、よりＰＧＥ２産生の程度が増
した細胞株であるｖｐ５に対してはレンチナンとＩＬ−
２の併用でも治療効果が確認されなかった。。このよう
にｉｎｖｉｖｏにおける免疫化学療法剤治療を用いた
選択の結果得られた本耐性株は悪液質成因の一要因であ
るＰＧＥ２産生の亢進により化学療法及び免疫化学療法
いずれに対しても効果を示さず、担癌末期での悪液質に
類似した状況を示す。すなわち、本耐性株を用いること
により速やかに担癌末期での状況と同様の状況を作り出
すことが可能となった。本発明者らは、本耐性株を用い
多くの薬剤をスクリーニングした結果、後記実施例１に
示すごとく、抗腫瘍性多糖を始めとする生体防御賦活剤
とＩＬ−２および５’−ＤＦＵＲや、インドメサシン
や、次硝酸ビスマスなどの悪液質抑制剤との組み合わせ
が本耐性株（ｖｐ．５）においても著明な抗腫瘍効果を
発現することを見いだした。本知見は、これら３剤の併
用が臨床における担癌末期での悪液質状態下において悪
液質を改善し更に抗腫瘍効果を示す事を示唆するもので
ある。そこで、これら３剤併用療法の悪液質状況下での
治療効果の有無をより臨床での悪液質状態に近いと想定
される担癌末期における治療効果により評価した。後記
実施例２に示す如く、担癌末期においてはこれら３剤の
単独およびそれぞれ２者の併用においては有意な抗腫瘍
効果は認められなかった。例外的に、５’−ＤＦＵＲと
レンチナンとの併用では一部のマウスで完全治癒が認め
られるものの、大部分のマウスを治癒にいたらしめるに
は至らなかった。一方、３剤併用では大多数のマウスが
完全治癒に至り、従来の薬剤には認められない効果が発
現された。本効果は従来の知見からは類推不能な相乗的
な抗腫瘍効果として確認されたものである。また、レン
チナンに換えて生体防御賦活剤としてソニフィラン用い
た場合やＩＬ−２に換えてＩＬ−２誘導物質であるＤＨ
ＥＡを用いた場合いずれも同様の結果が得られた。

【００１５】更に、後記実施例３に示すごとく、これら
の３剤併用療法は臨床での悪液質パラメーターの一つで
ある宿主体重の減少を誘発する悪液質モデル系に於いて
も宿主体重の減少の抑制という悪液質抑制効果に加え、
著明な腫瘍縮小効果という抗腫瘍効果も合わせ持つこと
が明らかになった。

【００１６】以上の事実は、これら３剤併用薬剤が、臨
床においても抗腫瘍効果を発現する薬剤としての有用性
を示すものである。

【００１７】このような（ａ）レンチナンを始めとする
抗腫瘍性多糖、および（ｂ）ＩＬ−２もしくはＩＬ−２
誘導物質、および（ｃ）悪液質抑制剤の組み合わせから
なる薬剤とは、それぞれの有効成分を個別にまたは同時
に含んで成る薬剤であって、本発明の目的とする効能を
奏するものであればその剤形並びに使用する賦形剤、割
合および投与経路を問わない。従って、有効成分を個別
に含んで成る薬剤にあっては、それぞれ異なる経路およ
び／または異なる時間に同一の患者に対して投与された
場合であっても所期の効能を示す限り本発明の組み合わ
せよりなる薬剤の概念に包含される。

【００１８】本発明の製剤は、場合によりさらに別の効
能を有する薬剤を含有することができ、それ自体既知の
方法によって製造される。そして有効成分である上記
（ａ），（ｂ），（ｃ）をそれぞれ約０．１％−９９．
９％。、好ましくは、約１．０％−９９．０％、また凍
結乾燥の場合には１００％まで含むことができる。

【００１９】本発明の薬剤の投与は、患者の病態に応じ
てその最適の投与方法および単位投与量を専門医が選ぶ
ことができる。これらの製剤は同時に、または相違する
時期に同一または異なる経路で投与する事ができる。

【００２０】

【実施例】以下の各例は、本発明をより具体的に説明す
ることを目的として提供する。従って、本発明が以下の
実施例により何等制限を受けるものではない。

【００２１】実施例１レンチナン、ＩＬ−２、インド
メサシン、次硝酸ビスマス、５’−ＤＦＵＲ、による免
疫化学療法剤耐性株に対する癌退縮効果Ｂ１０．Ｄ２マウスに同系腫瘍Ｓ９０８．Ｄ２線維肉腫
２Ｘ１０⁶／０．１ｍｌ皮内移植し、１０日後にシクロ
フォスファミド（以後、ＣＹと称す）を１００ｍｇ／ｋ
ｇ腹腔内投与し、１７日後より５日間レンチナン５ｍｇ
／ｋｇ腹腔内投与すると（以後、免疫化学療法治療と称
す）、９匹中全てのマウス原発巣の完全退縮が認められ
るが、完全治癒に至るマウスは中８匹であり、残り１匹
はリンパ節に転移再発を来す。この転移巣由来の癌細胞
株をｖｐ．１と名付けた。ｖｐ．１を元株と同様に同系
マウスに移植後、同様の免疫化学療法治療を行ったが、
完全治癒に至るマウスは９匹中６匹に留まり、免疫化学
療法治療に対し部分的抵抗性を獲得している事が示され
た。表１に示すように、この治療抵抗性は免疫化学療法
を繰り返すに従い増強することが明らかになった（繰り
返した治療の回数は各癌細胞株のｖｐ．の後の数字に対
応する）。また、治療抵抗性の獲得に従い、悪液質成因
の一つと想定されているＰＧＥ２産生能の増強が認めら
れた（表１）。このようにして得られた免疫化療剤抵抗
性株ｖｐ．５に対する５’−ＤＦＵＲ，インドメサシ
ン、次硝酸ビスマス、レンチナン、ＩＬ−２単独もしく
は併用での抗腫瘍効果を検討した。癌細胞株は、同系マ
ウスに２Ｘ１０⁶／０．１ｍｌ皮内移植した。５’−Ｄ
ＦＵＲは、移植後１０日目より、１日おきに１３０ｍｇ
／ｋｇ腹腔内投与した。インドメサシンは、移植後１０
日目より１４μｇ／ｍｌの濃度で飲料水に混合し、経口
投与した。次硝酸ビスマスは移植後１０日目より７日間
５０ｍｇ／ｋｇ経口投与した。レンチナンは移植後１７
日目より、５日間５ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与した。ＩＬ−
２は１９日目より４日間、１日２回２μｇ／匹腹腔内投
与した。治療効果の判定は、腫瘍移植６０日目における
触知法による残存腫瘍の有無を以て判断した。結果を表
２に示す。

【００２２】

【表１】＊完全治癒とは、腫瘍が触知不能になり２５０日以上の
間増殖せず、マウス個体も生存しているものを示す。

【００２３】

【表２】

【００２４】表２に示す如く、元株に対しては、それぞ
れ単独では治療効果を認めないが、５’−ＤＦＵＲとレ
ンチナンの併用およびインドメサシンとレンチナンの併
用、更にレンチナンとＩＬ−２との併用によりそれぞれ
８／９、６／９、９／９のマウスで治療効果を示した。
然るに、免疫化学療法耐性株（ｖｐ．５）においては
５’−ＤＦＵＲとレンチナンとＩＬ−２との３剤併用も
しくはインドメサシンとレンチナンとＩＬ−２との３剤
併用および次硝酸ビスマスとレンチナンとＩＬ−２の３
剤併用のみがそれぞれ８／９，７／９，６／９のマウス
で治療効果を示した。

【００２５】実施例２レンチナン、ソニフィラン、Ｉ
Ｌ−２、ＤＨＥＡ、５’−ＤＦＵＲ、による担癌末期状
態における癌退縮効果Ｂ１０．Ｄ２マウスに同系腫瘍Ｓ９０８．Ｄ２線維肉腫
２Ｘ１０⁶／０．１ｍｌ皮内移植し、２４日後からの
５’−ＤＦＵＲ、レンチナン、ソニフィラン、ＩＬ−２
単独もしくは併用での抗腫瘍効果を検討した。５’−Ｄ
ＦＵＲは、移植後２４日目より、１日おきに１３０ｍｇ
／ｋｇ腹腔内投与した。レンチナンまたはソニフィラン
は移植後３１日目より、５日間５ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与
した。ＩＬ−２は３２日目より４日間、１日２回２μｇ
／匹腹腔内投与した。ＤＨＥＡは３２日目より１４日間
０．４５％のＤＨＥＡを含む飲料水を自由摂取させた。
治療効果の判定は、平均生存日数と腫瘍移植１４０日目
における残存腫瘍の有無を以て判断した。

【００２６】

【表３】

【００２７】表３に示すように、レンチナン、ソニフィ
ラン、ＩＬ−２、ＤＨＥＡ単独では無治療マウスに比
し、有意な生存日数の延長は認められなかった。５’−
ＤＦＵＲでは約２０％の生存日数の延長は認められた
が、移植後１４０日での生存マウスは認められなかっ
た。５’−ＤＦＵＲとＩＬ−２もしくはＤＨＥＡとの併
用は５’−ＤＦＵＲ単独に比し、有意な治療効果の増強
は認められなかった。５’−ＤＦＵＲとレンチナン、レ
ンチナンとＩＬ−２、およびレンチナンとＤＨＥＡとの
併用ではそれぞれ平均生存日数１１４．２日、１０３．
５日、９４．１日であり、また移植後１４０日での残存
腫瘍の存在しないマウスもそれぞれ３／９，１／９，１
／９の割合で認められた。更に、５’−ＤＦＵＲとレン
チナンとＩＬ−２との３剤併用および５’−ＤＦＵＲと
レンチナンとＤＨＥＡとの３剤併用および５’−ＤＦＵ
ＲとソニフィランとＩＬ−２の３剤併用ではそれぞれ平
均生存日数＞２１８．３日、＞１９５．６日、＞１８
９．１日であり、また１４０日目の残存腫瘍の存在しな
いマウスの割合も８／９，６／９，６／９と著明な治療
効果を発揮することが明らかになった。

【００２８】実施例３５’−ＤＦＵＲ、レンチナン、
ＩＬ−２遺伝子導入活性化リンパ球による悪液質モデル
（体重減少）における癌退縮効果ＣＤＦ１マウスにマウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６１Ｘ
１０⁶を皮下移植し、１０日後の所属リンパ節細胞を採
取し、ｉｎｖｉｔｒｏにてＩＬ−２（１００ｕ／ｍ
ｌ）、１０％牛胎仔血清を含むＲＰＭＩ１６４０で５日
間培養した。この細胞にヒトＩＬ−２遺伝子およびＮｅ
ｏ耐性遺伝子を哺乳類細胞中で発現可能な形で導入した
レトロウイルスベクター（ｐＤＧＬ／ｐＤＧＬ−ＩＬ−
２）（図１；高原ら、ＨｕｍａｎＣｅｌｌ、ｖｏｌ．
４、１８−２４ページ、（１９９１））を含む組み替え
ウイルスを感染させることにより遺伝子を導入した。遺
伝子導入細胞のみを選択するためにＧ４１８（５０μｇ
／ｍｌ）、ＩＬ−２（１００ｕ／ｍｌ）、１０％牛胎仔
血清を含むＲＰＭＩ１６４０で５日間培養した後の生存
細胞をＩＬ−２（１００ｕ／ｍｌ）、１０％牛胎仔血清
を含むＲＰＭＩ１６４０で１０日間培養したものをＩＬ
−２遺伝子導入活性化リンパ球とした。対象の活性化リ
ンパ球としてはＮｅｏ耐性遺伝子のみを含むレトロウイ
ルスベクター（ｐＤＧＬ−Ｎｅｏ）を感染させて得た細
胞を用いた。これら活性化リンパ球、ＩＬ−２、レンチ
ナン、５’−ＤＦＵＲの単独もしくは併用での抗腫瘍効
果を以下の系で確認した。すなわち、ＣＤＦ１マウスに
マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６１Ｘ１０⁶を皮下移植
した。１４日後より１日おきに１３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内
投与した。レンチナンは２０日目より５日間５ｍｇ／ｋ
ｇ腹腔内投与した。ＩＬ−２は２２日目より５日間、１
日２回２μｇ／匹腹腔内投与した。ＩＬ−２遺伝子導入
活性化リンパ球もしくは対象の活性化リンパ球は２２日
目に１Ｘ１０⁷を尾静脈より１回投与した。治療効果の
判定は、移植後４０日目の平均腫瘍重量、残存腫瘍の有
無、宿主体重の変化を以て行った。

【００２９】

【表４】

【００３０】表４に示す如く、レンチナンもしくはＩＬ
−２単独での治療もしくはこれら２剤の併用治療では、
無治療群に対し腫瘍増殖および宿主体重の減少の有意な
抑制は認められなかった。５’−ＤＦＵＲ単独では有意
な腫瘍増殖および宿主体重の減少の抑制が認められた
が、移植後４０日目における残存腫瘍が存在しないマウ
スは見られなかった。５’−ＤＦＵＲとＩＬ−２との併
用は、５’−ＤＦＵＲ単独に比し有意な治療効果の増強
は認められなかった。５’−ＤＦＵＲとレンチナンとの
併用は５’−ＤＦＵＲ単独に比し、有意な腫瘍増殖の抑
制が認められたが、移植後４０日目の残存腫瘍が存在し
ないマウスは認められなかった。一方、５’−ＤＦＵ
Ｒ、レンチナン、ＩＬ−２との併用では、宿主体重の減
少の抑制に加え、強い腫瘍増殖の抑制が認められ、更に
移植後４０日目の残存腫瘍の存在しないマウスも７／９
の割合で認められ、実質的治療効果を示した。また、
５’−ＤＦＵＲ、レンチナン、ＩＬ−２遺伝子導入リン
パ球の併用においても強い腫瘍増殖の抑制が認められ、
残存腫瘍が存在しないマウスの割合も４／９で認められ
た。ＩＬ−２遺伝子導入活性化リンパ球の代わりにＩＬ
−２遺伝子を導入していない活性化リンパ球を用いた場
合には、残存腫瘍が存在しないマウスは認められなかっ
た。

【００３１】

【発明の効果】延命効果、腫瘍縮小効果を併せ持ち、末
期癌患者や悪液質状態の患者においても有用性の期待さ
れる抗腫瘍剤を提供することができた。

【図面の簡単な説明】

【図１】ｐＤＧＬベクターの構造を表わす。領域ＩはpL
MV-1（）のSma I-Bgl II(1.9 kb) 断片で
ある。領域IIはpZIP-NeoSV(X)1.3' スプライス・アクセ
プター部位のBam HI-Sma I(0.34 kb)（
）断片である。領域IIIは HTLV-I プロバイラス・ゲ
ノムの Hind III-Bam HI(0.21 kb)（）断片である。領
域IV は pDOL の Bam HI-Sma I (5'LTR)8.3 KB 断片
（）である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成５年１月２５日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正内容】

【図面の簡単な説明】

【図１】ｐＤＧＬベクターの構造を表わす。領域ＩはpM
LV-1（ Berms A. J. M.et al., J. Viol., 36, p.254-2
63 (1980)）のSma I-Bgl II(1.9 kb) 断片である。領域
IIはpZIP-NeoSV(X)1.3' スプライス・アクセプター部位
のBam HI-Sma I(0.34 kb)（ Cepko C. L. et al., Cel
l. 37, p.1053-1062 (1984)）断片である。領域IIIは H
TLV-I プロバイラス・ゲノムの Hind III-Bam HI(0.21
kb) （ Seiki M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. US
A, 80, p.3618-3622 (1983)）断片である。領域IV は p
DOL の Bam HI-Sma I (5'LTR)8.3 KB 断片（Korman A.
J.et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, p.2150-2
154 (1987)）である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者羽室淳爾神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生体防御賦活剤とヒトインターロイキン
２と癌悪液質抑制剤との組み合わせよりなる抗腫瘍剤。
【請求項２】生体防御賦活剤が、抗腫瘍性多糖である
ことを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】生体防御賦活剤が、レンチナン、ソニフ
ィランもしくはクレスチンであることを特徴とする請求
項２記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】癌悪液質抑制剤が、アラキドン酸代謝産
物産生阻害剤であることを特徴とする請求項１記載の抗
腫瘍剤。
【請求項５】癌悪液質抑制剤が、炎症性サイトカイン
（ＴＧＦ−β、ＴＮＦ、ＩＬ−６など）の産生、作用阻
害剤であることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項６】癌悪液質抑制剤が、腫瘍血管増殖阻害剤
であることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項７】癌悪液質抑制剤が、炎症性マクロファー
ジを選択的に消去したり同細胞の誘導を抑制したりする
ものであることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項８】癌悪液質抑制剤が、活性酸素捕捉剤や活
性酸素スカベンジャー誘導剤であることを特徴とする請
求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項９】癌悪液質抑制剤が、癌の悪性化の進展に
伴い癌局所に増強する酵素によって活性体に変換される
癌化学療法剤のプロドラッグであることを特徴とする請
求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項１０】アラキドン酸代謝産物産生阻害剤が、非
ステロイド系抗炎症剤である事を特徴とする請求項４記
載の抗腫瘍剤。
【請求項１１】腫瘍内血管増殖阻害剤が、フマギリン誘
導体であることを特徴とする請求項６記載の抗腫瘍剤。
【請求項１２】活性酸素捕捉剤や活性酸素捕捉剤誘導剤
が、カタラーゼ、次硝酸ビスマス、マンニトール、スー
パーオキシドデスミューテース（ＳＯＤ）、チオレドキ
シン、もしくはグルタチオンであることを特徴とする請
求項８記載の抗腫瘍剤。
【請求項１３】癌化学療法剤のプロドラッグが、ピリミ
ジンヌクレオチドホスフォリラーゼ、マトリックスメタ
ロプロテアーゼにより活性体に変換される癌化学療法剤
のプロドラッグであることを特徴とする請求項９記載の
抗腫瘍剤。
【請求項１４】癌化学療法剤のプロドラッグが、５’−
デオキシ−５−フルオロウリジンであることを特徴とす
る請求項１３記載の抗腫瘍剤。
【請求項１５】ヒトインターロイキン２が、薬剤の投与
により生体内で誘導されるものである事を特徴とする請
求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項１６】ヒトインターロイキン２産生誘導物質
が、デヒドロキシエピアンドロステロン、エストラジオ
ールなどのホルモン類、核酸誘導体もしくはアミノ酸誘
導体のいずれかであることを特徴とする請求項１５記載
の抗腫瘍剤。
【請求項１７】ヒトインターロイキン２産生誘導物質
が、ヒトインターロイキン２遺伝子を哺乳類細胞中で発
現可能な形で構築されたプラスミドであることを特徴と
する請求項１５記載の抗腫瘍剤。
【請求項１８】プラスミドが、不活化腫瘍細胞もしく
は、正常細胞もしくは免疫エフェクター細胞（ＣＴＬ，
ＴＩＬ，ＬＡＫ，ＮＫ細胞）に導入された細胞によりヒ
トインターロイキン２を産生させることを特徴とする請
求項１７記載の抗腫瘍剤。
【請求項１９】プラスミドが、生体内に投与することに
より体内標的細胞に選択的に導入され選択的に遺伝子発
現し、局所でヒトインターロイキン２を産生させること
を特徴とする請求項１７記載の抗腫瘍剤。
【請求項２０】各構成物質をキットの形で含むことを特
徴とする請求項１ないしは１９記載の抗腫瘍剤。