JPH06133778A - 非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系 - Google Patents
非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系Info
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- JPH06133778A JPH06133778A JP36044191A JP36044191A JPH06133778A JP H06133778 A JPH06133778 A JP H06133778A JP 36044191 A JP36044191 A JP 36044191A JP 36044191 A JP36044191 A JP 36044191A JP H06133778 A JPH06133778 A JP H06133778A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】本発明は、非Ａ非Ｂ型（ＮＡＮＢ型）肝炎ウイ
ルスＨＣ−Ｊ８株の全遺伝子配列を解明し、これにもと
づいてＮＡＮＢ型肝炎ウイルスを高感度に検出する方法
を提供することを目的とする。 【構成】本発明は、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発
明であり、これに関連するポリヌクレオチド、ｃＤＮＡ
クローン、ポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノ
クローナル抗体の発明であり、また、これらに用いたＮ
ＡＮＢ型肝炎ウイルス検出系の発明である。 【効果】本発明のポリペプタイド、抗体は、ＮＡＮＢ型
肝炎を高感度に検出することができ、また関連するポリ
ヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンは、これらの検出系を
製造することができる。
ルスＨＣ−Ｊ８株の全遺伝子配列を解明し、これにもと
づいてＮＡＮＢ型肝炎ウイルスを高感度に検出する方法
を提供することを目的とする。 【構成】本発明は、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発
明であり、これに関連するポリヌクレオチド、ｃＤＮＡ
クローン、ポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノ
クローナル抗体の発明であり、また、これらに用いたＮ
ＡＮＢ型肝炎ウイルス検出系の発明である。 【効果】本発明のポリペプタイド、抗体は、ＮＡＮＢ型
肝炎を高感度に検出することができ、また関連するポリ
ヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンは、これらの検出系を
製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス（以下「ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス」と略記する）遺伝
子、これに関連するポリヌクレオチド、ポリペプタイ
ド、ならびに関連抗原、抗体検出系に関する。
ス（以下「ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス」と略記する）遺伝
子、これに関連するポリヌクレオチド、ポリペプタイ
ド、ならびに関連抗原、抗体検出系に関する。
【０００２】
【従来の技術】ウイルスに由来する肝炎には、既に病原
体が解明されその診断法や予防法が確立したものとして
Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎がある。これ以外は一括して、非Ａ
非Ｂ型肝炎（以下「ＮＡＮＢ型肝炎」という）と呼ばれ
てきた。日本における輸血後肝炎は、Ｂ型肝炎の検出法
が輸血血液のスクリーニングに導入された後は格段に減
少したが、なお、年間推定２８万例が、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスにより発症していると考えられてきた。
体が解明されその診断法や予防法が確立したものとして
Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎がある。これ以外は一括して、非Ａ
非Ｂ型肝炎（以下「ＮＡＮＢ型肝炎」という）と呼ばれ
てきた。日本における輸血後肝炎は、Ｂ型肝炎の検出法
が輸血血液のスクリーニングに導入された後は格段に減
少したが、なお、年間推定２８万例が、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスにより発症していると考えられてきた。
【０００３】近年、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス肝炎は、タ
イプ別にＣ型、Ｄ型、Ｅ型と命名され、その病原体につ
いての研究が進展し、撲滅に向けての努力が世界的に進
められるようになった。輸血後肝炎に関して、１９８８
年アメリカのカイロン社がＣ型肝炎ウイルス（以下「Ｈ
ＣＶ」と略記する）のＲＮＡウイルスゲノムのクローン
化に成功したと発表し、これを基にＨＣＶ（Ｃ１００−
３）抗体の測定系を開発した。現在、Ｃ１００−３抗体
測定系は、輸血血液のスクリーニングや肝疾患患者の診
断に、日本を始めとして各国で用いられている。このＣ
１００−３抗体の測定系はＮＡＮＢ型肝炎との関連性が
確かに一部では認められる。しかし、ＮＡＮＢ型慢性肝
炎の捕捉率は約７０％にすぎず、また急性Ｃ型肝炎にお
ける早期の診断が困難である等重大な問題点が残されて
いる。したがって、カイロン社の前記開発によってもＮ
ＡＮＢ型肝炎への対処は依然として解決されていない。
ＮＡＮＢ型肝炎の経過は不良であり、水平感染によって
も持続感染化（キャリア化）し、慢性肝炎に進展するこ
とが確認されている。また、肝硬変、肝がんへ進展する
ケースも多いと予想され、一日も早いウイルス本体の全
貌解明と診断、治療方法の確立が望まれていた。
イプ別にＣ型、Ｄ型、Ｅ型と命名され、その病原体につ
いての研究が進展し、撲滅に向けての努力が世界的に進
められるようになった。輸血後肝炎に関して、１９８８
年アメリカのカイロン社がＣ型肝炎ウイルス（以下「Ｈ
ＣＶ」と略記する）のＲＮＡウイルスゲノムのクローン
化に成功したと発表し、これを基にＨＣＶ（Ｃ１００−
３）抗体の測定系を開発した。現在、Ｃ１００−３抗体
測定系は、輸血血液のスクリーニングや肝疾患患者の診
断に、日本を始めとして各国で用いられている。このＣ
１００−３抗体の測定系はＮＡＮＢ型肝炎との関連性が
確かに一部では認められる。しかし、ＮＡＮＢ型慢性肝
炎の捕捉率は約７０％にすぎず、また急性Ｃ型肝炎にお
ける早期の診断が困難である等重大な問題点が残されて
いる。したがって、カイロン社の前記開発によってもＮ
ＡＮＢ型肝炎への対処は依然として解決されていない。
ＮＡＮＢ型肝炎の経過は不良であり、水平感染によって
も持続感染化（キャリア化）し、慢性肝炎に進展するこ
とが確認されている。また、肝硬変、肝がんへ進展する
ケースも多いと予想され、一日も早いウイルス本体の全
貌解明と診断、治療方法の確立が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記カイロン社のＣ１
００−３抗体検出キットでは診断できないＮＡＮＢ型肝
炎が多数存在することから、日本におけるＮＡＮＢ型肝
炎ウイルスゲノムがカイロン社の解明したＨＣＶゲノム
とは必ずしも一致せず、サブタイプの違いがあると推定
された。したがって、特異性、感度においてさらに優れ
たＮＡＮＢ型肝炎診断薬、および有効なワクチンを開発
するためには、サブタイプ別にＮＡＮＢ型肝炎ウイルス
の遺伝子レベル、アミノ酸レベルでの解析を完成するこ
とが待望されていた。本発明の目的は、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスゲノムの塩基配列を、全体にわたって完全に解
明し、これに基づいてアミノ酸レベルでの解析を行うこ
と、ならびにこれを用いてＮＡＮＢ型肝炎ウイルス関連
抗原、抗体の検出系の確立を図ることである。
００−３抗体検出キットでは診断できないＮＡＮＢ型肝
炎が多数存在することから、日本におけるＮＡＮＢ型肝
炎ウイルスゲノムがカイロン社の解明したＨＣＶゲノム
とは必ずしも一致せず、サブタイプの違いがあると推定
された。したがって、特異性、感度においてさらに優れ
たＮＡＮＢ型肝炎診断薬、および有効なワクチンを開発
するためには、サブタイプ別にＮＡＮＢ型肝炎ウイルス
の遺伝子レベル、アミノ酸レベルでの解析を完成するこ
とが待望されていた。本発明の目的は、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスゲノムの塩基配列を、全体にわたって完全に解
明し、これに基づいてアミノ酸レベルでの解析を行うこ
と、ならびにこれを用いてＮＡＮＢ型肝炎ウイルス関連
抗原、抗体の検出系の確立を図ることである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＮＡＮＢ
型肝炎ウイルスの治療、予防、検査に不可欠なポリヌク
レオチドを見出すために鋭意研究をつづけ、その結果、
ヒトおよびチンパンジーキャリアの血清よりＮＡＮＢ型
肝炎ウイルスのＲＮＡを単離し、非コード領域を含む遺
伝子領域全体をカバーするＣＤＮＡをクローン化してそ
のゲノム全体の塩基配列を特定し、さらにこれにコード
されるポリペプタイドのアミノ酸配列を特定した。その
結果本発明者らは、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスであるＨＣ
−Ｊ８ゲノムの遺伝子全体の塩基配列を完全に解明する
ことに成功した。かかる遺伝子及びアミノ酸レベルでの
研究によって本発明は完成された。本発明のＮＡＮＢ型
肝炎ウイルス（ＨＣ−Ｊ８ゲノム）は、カイロン社のＨ
ＣＶゲノムとは別異のものである。
型肝炎ウイルスの治療、予防、検査に不可欠なポリヌク
レオチドを見出すために鋭意研究をつづけ、その結果、
ヒトおよびチンパンジーキャリアの血清よりＮＡＮＢ型
肝炎ウイルスのＲＮＡを単離し、非コード領域を含む遺
伝子領域全体をカバーするＣＤＮＡをクローン化してそ
のゲノム全体の塩基配列を特定し、さらにこれにコード
されるポリペプタイドのアミノ酸配列を特定した。その
結果本発明者らは、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスであるＨＣ
−Ｊ８ゲノムの遺伝子全体の塩基配列を完全に解明する
ことに成功した。かかる遺伝子及びアミノ酸レベルでの
研究によって本発明は完成された。本発明のＮＡＮＢ型
肝炎ウイルス（ＨＣ−Ｊ８ゲノム）は、カイロン社のＨ
ＣＶゲノムとは別異のものである。
【０００６】本発明は、配列番号１記載の塩基配列を有
するＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発明であり、ＲＮ
Ａ５′末端より３４１箇のヌクレオチドからなる非コー
ド領域、これに続く構造蛋白質および非構造蛋白質をコ
ードする領域を含む９０９９箇のヌクレオチド、ならび
に３′末端３０箇のＵストレッチを含む７１箇のヌクレ
オチドからなる、配列番号１記載のウイルス遺伝子の発
明であり、これらと、部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝
炎ウイルス変異株遺伝子の発明である。また、配列番号
２記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドＮ−９５１
１、およびこれと部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝炎ウ
イルス変異株ヌクレオチドの発明である。さらに前記遺
伝子またはポリヌクレオチドにコードされるポリペプタ
イド、配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
タイドＰ−３０３３、配列番号４記載のアミノ酸配列を
有するポリペプタイドＰ−３０３３−２、前記遺伝子、
ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンの全部または一部
を宿主細胞に組み込み発現させて得たポリペプタイド、
前記各ポリペプタイドに対するポリクローナル抗体また
はモノクローナル抗体の発明である。配列番号３、同４
記載のポリペプタイドは、配列番号１記載の遺伝子によ
ってコードされるポリペプタイドのうち２種のみを例示
したものであって、上記遺伝子によってコードされるポ
リペプタイドは上記２種に限定されるものでなく、した
がって本発明のポリペプタイドがこれらに限定されるも
のでないことは明らかである。さらに、前記各ポリペプ
タイドを用いたＮＡＮＢ型肝炎検出系、前記ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体を用いたＮＡＮＢ型
肝炎検出系の発明である。
するＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発明であり、ＲＮ
Ａ５′末端より３４１箇のヌクレオチドからなる非コー
ド領域、これに続く構造蛋白質および非構造蛋白質をコ
ードする領域を含む９０９９箇のヌクレオチド、ならび
に３′末端３０箇のＵストレッチを含む７１箇のヌクレ
オチドからなる、配列番号１記載のウイルス遺伝子の発
明であり、これらと、部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝
炎ウイルス変異株遺伝子の発明である。また、配列番号
２記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドＮ−９５１
１、およびこれと部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝炎ウ
イルス変異株ヌクレオチドの発明である。さらに前記遺
伝子またはポリヌクレオチドにコードされるポリペプタ
イド、配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
タイドＰ−３０３３、配列番号４記載のアミノ酸配列を
有するポリペプタイドＰ−３０３３−２、前記遺伝子、
ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンの全部または一部
を宿主細胞に組み込み発現させて得たポリペプタイド、
前記各ポリペプタイドに対するポリクローナル抗体また
はモノクローナル抗体の発明である。配列番号３、同４
記載のポリペプタイドは、配列番号１記載の遺伝子によ
ってコードされるポリペプタイドのうち２種のみを例示
したものであって、上記遺伝子によってコードされるポ
リペプタイドは上記２種に限定されるものでなく、した
がって本発明のポリペプタイドがこれらに限定されるも
のでないことは明らかである。さらに、前記各ポリペプ
タイドを用いたＮＡＮＢ型肝炎検出系、前記ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体を用いたＮＡＮＢ型
肝炎検出系の発明である。
【０００７】本発明のＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子は
次のようにして得て、その塩基配列を決定した。ヒトお
よびチンパンジー血漿より得た検体、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ
−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ８を用いて本研究を進めた。ＨＣ−Ｊ
１、ＨＣ−Ｊ８は日本人供血者由来で、いずれもＣ１０
０−３抗体陽性と判定された検体より得た。ＨＣ−Ｊ４
はＮＡＮＢ型肝炎の感染性を確認したチンパンジーから
得た検体に由来するが、しかしこれはカイロン社の前記
のＣ１００−３抗体では（−）であった。この３種の血
漿検体よりＲＮＡを調整し、これらによってＲＮＡの塩
基配列を調べた。このうちＨＣ−Ｊ１およびＨＣ−Ｊ４
に関し、ＲＮＡの５′末端側の約２５００、および３′
末側の約１１００の塩基配列については既に特願平３−
１９１３７６号ならびに特願平３−２４７１２０号にお
いてその一部を開示した。本発明者らは、さらに研究を
進め、今回単離したＨＣ−Ｊ８について、新たにＲＮＡ
塩基の完全長について特定し、本発明を完成させるに至
った。
次のようにして得て、その塩基配列を決定した。ヒトお
よびチンパンジー血漿より得た検体、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ
−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ８を用いて本研究を進めた。ＨＣ−Ｊ
１、ＨＣ−Ｊ８は日本人供血者由来で、いずれもＣ１０
０−３抗体陽性と判定された検体より得た。ＨＣ−Ｊ４
はＮＡＮＢ型肝炎の感染性を確認したチンパンジーから
得た検体に由来するが、しかしこれはカイロン社の前記
のＣ１００−３抗体では（−）であった。この３種の血
漿検体よりＲＮＡを調整し、これらによってＲＮＡの塩
基配列を調べた。このうちＨＣ−Ｊ１およびＨＣ−Ｊ４
に関し、ＲＮＡの５′末端側の約２５００、および３′
末側の約１１００の塩基配列については既に特願平３−
１９１３７６号ならびに特願平３−２４７１２０号にお
いてその一部を開示した。本発明者らは、さらに研究を
進め、今回単離したＨＣ−Ｊ８について、新たにＲＮＡ
塩基の完全長について特定し、本発明を完成させるに至
った。
【０００８】ＨＣ−Ｊ８ゲノムは、実施例に示すよう
に、５′末端より３４１個のヌクレオドよりなる５′非
コード領域を有し、それに続いて構造蛋白質をコードす
る領域が続き、さらに非構造蛋白質をコードする領域を
有する。他方、３′末端側は、非構造蛋白質をコードす
る領域に続いて３０塩基のＵ−ストレッチを含む７１塩
基の非コード領域を有する。５′末端側から３４２番目
のアデニンより始まるコード領域は９０９９塩基の一本
の長いオープンリーディングフレームよりなり、これが
３０３３アミノ酸をコードしていることが明らかとなっ
た。ＨＣＶ、すなわちＣ型肝炎ウイルスはその遺伝子構
造からフラビウイルスに近縁であると考えられている
が、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコード領域
も図１に示す如く、Ｃ（コア）、Ｅ（エンベロープ）、
ＮＳ１（非構造蛋白１）、ＮＳ２（同２）、ＮＳ３（同
３）、ＮＳ４（同４）、ＮＳ５（同５）からなると考え
られる。
に、５′末端より３４１個のヌクレオドよりなる５′非
コード領域を有し、それに続いて構造蛋白質をコードす
る領域が続き、さらに非構造蛋白質をコードする領域を
有する。他方、３′末端側は、非構造蛋白質をコードす
る領域に続いて３０塩基のＵ−ストレッチを含む７１塩
基の非コード領域を有する。５′末端側から３４２番目
のアデニンより始まるコード領域は９０９９塩基の一本
の長いオープンリーディングフレームよりなり、これが
３０３３アミノ酸をコードしていることが明らかとなっ
た。ＨＣＶ、すなわちＣ型肝炎ウイルスはその遺伝子構
造からフラビウイルスに近縁であると考えられている
が、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコード領域
も図１に示す如く、Ｃ（コア）、Ｅ（エンベロープ）、
ＮＳ１（非構造蛋白１）、ＮＳ２（同２）、ＮＳ３（同
３）、ＮＳ４（同４）、ＮＳ５（同５）からなると考え
られる。
【０００９】本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノムは、ヨーロッパ
特許公開第３８８，２３２号（カイロン社）に示された
ＨＣＶゲノム（ＨＣＶ−１）と比較すると、ヌクレオチ
ド配列について全領域では６６．４％の相同性を、また
アミノ酸配列については全領域で７１．０％の相同性を
示すにすぎない。領域ごとに個別に相同性を調べると、
５′末側非コード領域において塩基配列で９３．８％、
コア領域においてアミノ酸配列で９０．１％であり、こ
れらの領域では比較的高い相同性を示している。他方、
エンベロープ部分より下流の領域ではＥ、ＮＳ１、ＮＳ
２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５のそれぞれのアミノ酸配列
で５４．７％。７３．１％、５５．６％、８１．３％、
７２．１％、６７．３％、３′末側非コード領域の塩基
配列で２５．９％といずれも低い相同性を示すにすぎ
ず、結局、ＨＣ−Ｊ８がカイロン社の発見したＨＣＶ−
１と大きく異なることが明らかとなった。
特許公開第３８８，２３２号（カイロン社）に示された
ＨＣＶゲノム（ＨＣＶ−１）と比較すると、ヌクレオチ
ド配列について全領域では６６．４％の相同性を、また
アミノ酸配列については全領域で７１．０％の相同性を
示すにすぎない。領域ごとに個別に相同性を調べると、
５′末側非コード領域において塩基配列で９３．８％、
コア領域においてアミノ酸配列で９０．１％であり、こ
れらの領域では比較的高い相同性を示している。他方、
エンベロープ部分より下流の領域ではＥ、ＮＳ１、ＮＳ
２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５のそれぞれのアミノ酸配列
で５４．７％。７３．１％、５５．６％、８１．３％、
７２．１％、６７．３％、３′末側非コード領域の塩基
配列で２５．９％といずれも低い相同性を示すにすぎ
ず、結局、ＨＣ−Ｊ８がカイロン社の発見したＨＣＶ−
１と大きく異なることが明らかとなった。
【００１０】本発明者らが、Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．６０，３，１６７−１７７において
既に公表したＣ型肝炎ウイルスゲノムＨＣ−Ｊ１（Ｔｙ
ｐｅＩ）株、ＨＣ−Ｊ４（ＴｙｐｅＩＩ）株と本発明の
ＨＣ−Ｊ８株を比較すると、５′末側約３０００塩基の
配列について、その相同性がそれぞれ７０．１％、６
７．１％であり、また特願平３−２８７４０２号に開示
したＨＣ−Ｊ６（ＴｙｐｅＩＩＩ）株との比較では、全
塩基配列について、その相同性が７６．９％と、いずれ
も低い値を示した。これに対して、特願平３−１９６１
７５号に開示したＨＣ−Ｊ７（ＴｙｐｅＩＶ）株と比較
すると、５′末側約３０００塩基について、その配列が
９３．１％と、高い相同性を示した。同じＴｙｐｅに分
類されると推定される株の間では相同性が大きく、例え
ば先記カイロン社のＨＣＶゲノムＨＣＶ−１と本発明者
らの解明したＨＣ−Ｊ１とでは５′末側約３０００塩基
について９５．６％の相同性を示し、ともにＴｙｐｅＩ
に属するものと考えられる。これに対し、本発明のＨＣ
−Ｊ８は、ＨＣＶ−１、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ
−Ｊ６とは相同性が低く、ＴＹＰＥＩ、ＴｙｐｅＩＩ、
ＴｙｐｅＩＩＩとは異なるＴｙｐｅの株であって、ＨＣ
−Ｊ７と同様にＴｙｐｅＩＶに属するものと推定され
る。
Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．６０，３，１６７−１７７において
既に公表したＣ型肝炎ウイルスゲノムＨＣ−Ｊ１（Ｔｙ
ｐｅＩ）株、ＨＣ−Ｊ４（ＴｙｐｅＩＩ）株と本発明の
ＨＣ−Ｊ８株を比較すると、５′末側約３０００塩基の
配列について、その相同性がそれぞれ７０．１％、６
７．１％であり、また特願平３−２８７４０２号に開示
したＨＣ−Ｊ６（ＴｙｐｅＩＩＩ）株との比較では、全
塩基配列について、その相同性が７６．９％と、いずれ
も低い値を示した。これに対して、特願平３−１９６１
７５号に開示したＨＣ−Ｊ７（ＴｙｐｅＩＶ）株と比較
すると、５′末側約３０００塩基について、その配列が
９３．１％と、高い相同性を示した。同じＴｙｐｅに分
類されると推定される株の間では相同性が大きく、例え
ば先記カイロン社のＨＣＶゲノムＨＣＶ−１と本発明者
らの解明したＨＣ−Ｊ１とでは５′末側約３０００塩基
について９５．６％の相同性を示し、ともにＴｙｐｅＩ
に属するものと考えられる。これに対し、本発明のＨＣ
−Ｊ８は、ＨＣＶ−１、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ
−Ｊ６とは相同性が低く、ＴＹＰＥＩ、ＴｙｐｅＩＩ、
ＴｙｐｅＩＩＩとは異なるＴｙｐｅの株であって、ＨＣ
−Ｊ７と同様にＴｙｐｅＩＶに属するものと推定され
る。
【００１１】本発明のＨＣ−Ｊ８株は、配列番号１、同
２に記号Ｍ、Ｒ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、Ｋ、Ｂで記したとおり塩
基配列の変異を有し、また配列番号３と同４の対比から
理解されるようにアミノ酸配列の変異を有する。これら
の変異は、全塩基配列において約１．４％、全アミノ酸
配列において約１．７％に及ぶ。したがって、上記程度
の変異がある場合であっても本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノ
ム、ポリヌクレオチド、ポリペプタイドに包含されるも
のと認められる（請求項３、請求項５、請求項６）。
２に記号Ｍ、Ｒ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、Ｋ、Ｂで記したとおり塩
基配列の変異を有し、また配列番号３と同４の対比から
理解されるようにアミノ酸配列の変異を有する。これら
の変異は、全塩基配列において約１．４％、全アミノ酸
配列において約１．７％に及ぶ。したがって、上記程度
の変異がある場合であっても本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノ
ム、ポリヌクレオチド、ポリペプタイドに包含されるも
のと認められる（請求項３、請求項５、請求項６）。
【００１２】さらに、ＨＣ−Ｊ８株において変異の激し
いエンベロープ領域（アミノ酸番号第１９２〜第３８３
である、５７６塩基／１９２アミノ酸残基）およびＮＳ
１領域（アミノ酸番号第３８４〜第７３３である、１０
５０塩基／３５０アミノ酸残基）ではそれぞれ、２０塩
基／７アミノ酸、３７塩基／１９アミノ酸の変異が認め
られた。塩基配列にしてそれぞれ３．４７％、３．５２
％、またアミノ酸配列にして３．６４％、５．４２％の
変異率に相当する。したがって、これらの領域では３．
５％〜５．５％程度の変異が認められる場合も本発明の
ＨＣ−Ｊ８ゲノムヌクレオチドおよびこれにコードされ
るポリペプタイドに含まれる。
いエンベロープ領域（アミノ酸番号第１９２〜第３８３
である、５７６塩基／１９２アミノ酸残基）およびＮＳ
１領域（アミノ酸番号第３８４〜第７３３である、１０
５０塩基／３５０アミノ酸残基）ではそれぞれ、２０塩
基／７アミノ酸、３７塩基／１９アミノ酸の変異が認め
られた。塩基配列にしてそれぞれ３．４７％、３．５２
％、またアミノ酸配列にして３．６４％、５．４２％の
変異率に相当する。したがって、これらの領域では３．
５％〜５．５％程度の変異が認められる場合も本発明の
ＨＣ−Ｊ８ゲノムヌクレオチドおよびこれにコードされ
るポリペプタイドに含まれる。
【００１３】
【作用】本発明の遺伝子、ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡ
クローンは、その全部または一部を大腸菌、枯草菌等の
宿主細胞に組み込んでポリペプタイドを発現させること
ができる。本発明のポリペプタイドは、ＮＡＮＢ型肝炎
の検出系として用いることができ、さらに、これに対す
るポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を製造
することができる。本発明のポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体は、ＮＡＮＢ型肝炎検出系として用
いることができる。
クローンは、その全部または一部を大腸菌、枯草菌等の
宿主細胞に組み込んでポリペプタイドを発現させること
ができる。本発明のポリペプタイドは、ＮＡＮＢ型肝炎
の検出系として用いることができ、さらに、これに対す
るポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を製造
することができる。本発明のポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体は、ＮＡＮＢ型肝炎検出系として用
いることができる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明の実施例について述べるが、も
とより本発明がこれらの実施例に限定されるものではな
い。
とより本発明がこれらの実施例に限定されるものではな
い。
【００１５】実施例１ （１）ＲＮＡ抽出 日本人供血者の血漿から得た、Ｃ１００−３抗体陽性
（オーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製、オ
ーソＨＣＶＡｂＥＬＩＳＡキット）と判定された検体Ｈ
Ｃ−Ｊ８より、次のようにしてＲＮＡを抽出した。血漿
にトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、
６８×１０３ｒｐｍで１時間遠心した。得られたペレッ
トに２００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２％
（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、および
１ｍｇ／ｍｌのプロテナーゼＫを含むトリス塩酸緩衝液
（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、６０℃で１時間加温
し、エタノール沈澱を行い、ＲＮＡを得た。
（オーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製、オ
ーソＨＣＶＡｂＥＬＩＳＡキット）と判定された検体Ｈ
Ｃ−Ｊ８より、次のようにしてＲＮＡを抽出した。血漿
にトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、
６８×１０３ｒｐｍで１時間遠心した。得られたペレッ
トに２００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２％
（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、および
１ｍｇ／ｍｌのプロテナーゼＫを含むトリス塩酸緩衝液
（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、６０℃で１時間加温
し、エタノール沈澱を行い、ＲＮＡを得た。
【００１６】（２）ＨＣ−Ｊ８ｃＤＮＡ合成 ＨＣ−Ｊ８血漿より抽出したＲＮＡを７０℃で１分間加
温熱変性し、これを鋳型としての逆転写酵素（Ｓｕｐｅ
ｒｓｃｒｉｐｔ，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社）およびオリゴ
ヌクレオチドプライマー（２０−ｍｅｒ）２０ｐｍｏｌ
を加えて、４２℃、１時間反応させてｃＤＮＡを得た。
温熱変性し、これを鋳型としての逆転写酵素（Ｓｕｐｅ
ｒｓｃｒｉｐｔ，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社）およびオリゴ
ヌクレオチドプライマー（２０−ｍｅｒ）２０ｐｍｏｌ
を加えて、４２℃、１時間反応させてｃＤＮＡを得た。
【００１７】（３）ポリメラーゼチェインリアクション
（ＰＣＲ）によｃＤＮＡの増幅 Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＤＮＡ増幅試薬キット（パーキンエ
ルマー・シータス社）を用いたＳａｉｋｉらの方法（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３９，４８７−４９１，１９８８）に
より、ＤＮＡサーマイクラー（パーキンエルマー・シー
タス社）にて３５サイクルのｃＤＮＡ増幅を行った。ｃ
ＤＮＡ合成用およびＰＣＲ用プライマーとして特願平２
−１５３４０２号記載の合成プライマー、または特願平
３−１９６１７５号、特願平３−２８７４０２号記載の
ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ６の各ゲノム塩基配
列を基に合成したプライマーを用いた。
（ＰＣＲ）によｃＤＮＡの増幅 Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＤＮＡ増幅試薬キット（パーキンエ
ルマー・シータス社）を用いたＳａｉｋｉらの方法（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３９，４８７−４９１，１９８８）に
より、ＤＮＡサーマイクラー（パーキンエルマー・シー
タス社）にて３５サイクルのｃＤＮＡ増幅を行った。ｃ
ＤＮＡ合成用およびＰＣＲ用プライマーとして特願平２
−１５３４０２号記載の合成プライマー、または特願平
３−１９６１７５号、特願平３−２８７４０２号記載の
ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ６の各ゲノム塩基配
列を基に合成したプライマーを用いた。
【００１８】（４）ＨＣ−Ｊ８の５′末端側塩基配列の
特定 ＨＣ−Ｊ８の５′末端側（領域ａ）の塩基配列は図１に
示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られたク
ローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体から
得たＲＮＡについて、ｎｔ２４６〜２６５のアンチセン
スプライマー＃３６（５′−ＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧ
ＣＴＡＧＣＡＧＴ−３′）を用いて、前記（２）の方法
に従ってｃＤＮＡを合成したのち、ターミナルデオキシ
ヌクレオチジルトランスフェラーゼによりｃＤＮＡの
３′末端にｄＴ付加、またはｄＡ付加を行い、２段階の
ｏｎｅ−Ｓｉｄｅｄ ＰＣＲ増幅を行った。すなわち、
１回目は＃１６５（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡ
ＣＡＴＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ａ）１７−３′）、また
は＃１７１（５′ーＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴ
ＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ｔ）１７−３′）と、アンチセ
ンスプライマーの＃４８（５′−ＧＴＴＧＡＴＣＣＡＡ
ＧＡＡＡＧＧＡＣＣＣ−３′、ｎｔ１８８〜２０７）を
用いて３５サイクルのＰＣＲ増幅を行い、２回目はその
ＰＣＲ産物を鋳型にして非特異的プライマー＃１６６
（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＣＧＡＴ−
３′）と、アンチセンスプライマーの＃１０９（５′ー
ＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＴ−３′）
を用いて３０サイクルのＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物をＭ１３ファージベクターにサブクローニング
し、完全長の５′末端配列を有すると考えられる１３個
の独立したクローンＣ１４９５１、Ｃ１４９５２、Ｃ１
４９５３、Ｃ１４９５８、Ｃ１４９６０、Ｃ１４９６
８、Ｃ１４９７１、Ｃ１４９７２、Ｃ１４９７４（以上
ポリｄＴ付加したクローン）およびＣ１４９８７、Ｃ１
４９９６、Ｃ１４９９９、Ｃ１５０００（以上ポリｄＴ
を付加したクローン）を得て、これらのコンセンサスシ
ークエンスからｎｔ１〜１３９の塩基配列を特定した。
特定 ＨＣ−Ｊ８の５′末端側（領域ａ）の塩基配列は図１に
示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られたク
ローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体から
得たＲＮＡについて、ｎｔ２４６〜２６５のアンチセン
スプライマー＃３６（５′−ＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧ
ＣＴＡＧＣＡＧＴ−３′）を用いて、前記（２）の方法
に従ってｃＤＮＡを合成したのち、ターミナルデオキシ
ヌクレオチジルトランスフェラーゼによりｃＤＮＡの
３′末端にｄＴ付加、またはｄＡ付加を行い、２段階の
ｏｎｅ−Ｓｉｄｅｄ ＰＣＲ増幅を行った。すなわち、
１回目は＃１６５（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡ
ＣＡＴＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ａ）１７−３′）、また
は＃１７１（５′ーＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴ
ＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ｔ）１７−３′）と、アンチセ
ンスプライマーの＃４８（５′−ＧＴＴＧＡＴＣＣＡＡ
ＧＡＡＡＧＧＡＣＣＣ−３′、ｎｔ１８８〜２０７）を
用いて３５サイクルのＰＣＲ増幅を行い、２回目はその
ＰＣＲ産物を鋳型にして非特異的プライマー＃１６６
（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＣＧＡＴ−
３′）と、アンチセンスプライマーの＃１０９（５′ー
ＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＴ−３′）
を用いて３０サイクルのＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物をＭ１３ファージベクターにサブクローニング
し、完全長の５′末端配列を有すると考えられる１３個
の独立したクローンＣ１４９５１、Ｃ１４９５２、Ｃ１
４９５３、Ｃ１４９５８、Ｃ１４９６０、Ｃ１４９６
８、Ｃ１４９７１、Ｃ１４９７２、Ｃ１４９７４（以上
ポリｄＴ付加したクローン）およびＣ１４９８７、Ｃ１
４９９６、Ｃ１４９９９、Ｃ１５０００（以上ポリｄＴ
を付加したクローン）を得て、これらのコンセンサスシ
ークエンスからｎｔ１〜１３９の塩基配列を特定した。
【００１９】（５）ＰＣＲ法によるｃＤＮＡクローンの
増幅 ＨＣ−Ｊ８ゲノムのｎｔ１４０から下流の塩基配列は図
１に示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られ
たクローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体
から得たＲＮＡについて、種々のアンチセンスプライマ
ーを用いて、前記（２）の方法に従ってｃＤＮＡを合成
したのちＰＣＲ増幅を行った。得られたＰＣＲ産物をＭ
１３ファージベクターにサブクローニングし、得られた
複数クローンのコンセンサスシークエンスから塩基配列
を特定した。各増幅領域について、以下にｃＤＮＡ合成
を用いたプライマーとＰＣＲ増幅に用いたプライマー、
および得られたクローンの番号を示す。なおアルファベ
ットで示した増幅領域の記号は図１に対応する。
増幅 ＨＣ−Ｊ８ゲノムのｎｔ１４０から下流の塩基配列は図
１に示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られ
たクローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体
から得たＲＮＡについて、種々のアンチセンスプライマ
ーを用いて、前記（２）の方法に従ってｃＤＮＡを合成
したのちＰＣＲ増幅を行った。得られたＰＣＲ産物をＭ
１３ファージベクターにサブクローニングし、得られた
複数クローンのコンセンサスシークエンスから塩基配列
を特定した。各増幅領域について、以下にｃＤＮＡ合成
を用いたプライマーとＰＣＲ増幅に用いたプライマー、
および得られたクローンの番号を示す。なおアルファベ
ットで示した増幅領域の記号は図１に対応する。
【００２０】領域ｂ ｎｔ４５−８４７ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１２２（５′−ＡＧＧＴＴ
ＣＣＣＴＧＴＴＧＣＡＴＡＡＴＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃３２Ａ（５′ーＣＴＧ
ＴＧＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴ−３′） アンチセンス：＃１２２ クローン：Ｃ１５２２１、Ｃ１５２２２、Ｃ１５２２３
ＣＣＣＴＧＴＴＧＣＡＴＡＡＴＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃３２Ａ（５′ーＣＴＧ
ＴＧＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴ−３′） アンチセンス：＃１２２ クローン：Ｃ１５２２１、Ｃ１５２２２、Ｃ１５２２３
【００２１】領域ｃ ｎｔ７３２−１３５４ ｃＣＤＮＡ合成プライマー：＃５４（５′−ＡＴＣＧＣ
ＧＴＡＣＧＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃５０（５′−ＧＣＣＧ
ＡＴＣＴＣＡＴＧＧＧＧＴＡＣＡＴ−３′） アンチセンス：＃５４ クローン：Ｃ１５２５６、Ｃ１５２５７、Ｃ１５２５８
ＧＴＡＣＧＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃５０（５′−ＧＣＣＧ
ＡＴＣＴＣＡＴＧＧＧＧＴＡＣＡＴ−３′） アンチセンス：＃５４ クローン：Ｃ１５２５６、Ｃ１５２５７、Ｃ１５２５８
【００２２】領域ｄ ｎｔ１３００−１８７９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１９９（５′ーＧＧＧＧＴ
ＧＡＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０５（５′ーＧＧＧ
ＡＣＡＴＧＡＴＧＡＴＣＡＡＣＴＧＧ−３′） アンチセンス：＃１９９ クローン：Ｃ１４２２１、Ｃ１４２２２、Ｃ１４２２３
ＧＡＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０５（５′ーＧＧＧ
ＡＣＡＴＧＡＴＧＡＴＣＡＡＣＴＧＧ−３′） アンチセンス：＃１９９ クローン：Ｃ１４２２１、Ｃ１４２２２、Ｃ１４２２３
【００２３】領域ｅ ｎｔ１８３３−２５１８ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１４６（５′−ＡＧＴＡＧ
ＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１５０（５′−ＡＴＣ
ＧＴＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＣＧＧＴ−３′） アンチセンス：＃１４６ クローン：Ｃ１１５３５、Ｃ１１５４０、Ｃ１１５６６
ＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１５０（５′−ＡＴＣ
ＧＴＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＣＧＧＴ−３′） アンチセンス：＃１４６ クローン：Ｃ１１５３５、Ｃ１１５４０、Ｃ１１５６６
【００２４】領域ｆ ｎｔ２４３３−３４５１ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１７０（５′−ＧＣＡＴＡ
ＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＧＧＧＧＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１６０（５′−ＣＡＧ
ＡＡＣＡＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＧＣＡ−３′） アンチセンス：＃１７０ クローン：Ｃ１５３４８、Ｃ１５３４９、Ｃ１５３５６
ＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＧＧＧＧＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１６０（５′−ＣＡＧ
ＡＡＣＡＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＧＣＡ−３′） アンチセンス：＃１７０ クローン：Ｃ１５３４８、Ｃ１５３４９、Ｃ１５３５６
【００２５】領域ｇ ｎｔ３４０４−４３００ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２２５（５′−ＴＣＧＣＡ
ＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＴＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３８（５′−ＣＴＡ
ＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＧＡ−３′） アンチセンス：＃２２５ クローン：Ｃ１５７０１、Ｃ１５７０２、Ｃ１５７０３
ＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＴＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３８（５′−ＣＴＡ
ＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＧＡ−３′） アンチセンス：＃２２５ クローン：Ｃ１５７０１、Ｃ１５７０２、Ｃ１５７０３
【００２６】領域ｈ ｎｔ４２２１−５０１５ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２１６（５′−ＧＴＧＧＴ
ＣＴＡＧＡＣＡＴＡＣＧＧＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３０（５′−ＣＣＣ
ＡＴＣＡＣＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡ−３′） アンチセンス：＃２１６ クローン：Ｃ１５３９１、Ｃ１５３９２、Ｃ１５３９３
ＣＴＡＧＡＣＡＴＡＣＧＧＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３０（５′−ＣＣＣ
ＡＴＣＡＣＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡ−３′） アンチセンス：＃２１６ クローン：Ｃ１５３９１、Ｃ１５３９２、Ｃ１５３９３
【００２７】領域ｉ ｎｔ４６９５−５０６２ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２１０（５′−ＧＣＡＴＣ
ＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０９（５′−ＴＴＣ
ＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＴＣＧＡＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２１０ クローン：Ｃ１４０８７、Ｃ１４０８８、Ｃ１４０８９
ＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０９（５′−ＴＴＣ
ＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＴＣＧＡＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２１０ クローン：Ｃ１４０８７、Ｃ１４０８８、Ｃ１４０８９
【００２８】領域ｊ ｎｔ５０２１−６１６９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１６２（５′−ＴＣＣＧＡ
ＣＴＣＣＧＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２７（５′−ＧＴＴ
ＣＴＧＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡ−３′） アンチセンス：＃１６２ クローン：Ｃ１５４２１、Ｃ１５４２２、Ｃ１５４２３
ＣＴＣＣＧＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２７（５′−ＧＴＴ
ＣＴＧＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡ−３′） アンチセンス：＃１６２ クローン：Ｃ１５４２１、Ｃ１５４２２、Ｃ１５４２３
【００２９】領域ｋ ｎｔ６０２７−６８８９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２３２（５′ーＧＡＴＧＧ
ＧＴＣＴＧＴＴＡＧＣＡＴＧＧＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４２（５′−ＴＴＧ
ＧＴＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２３２ クローン：Ｃ１５７３３、Ｃ１５７３４、Ｃ１５７３５
ＧＴＣＴＧＴＴＡＧＣＡＴＧＧＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４２（５′−ＴＴＧ
ＧＴＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２３２ クローン：Ｃ１５７３３、Ｃ１５７３４、Ｃ１５７３５
【００３０】領域ｌ ｎｔ６８３４−７７３５ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２３９（５′−ＡＴＣＧＧ
ＴＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４１（５′−ＣＣＴ
ＴＧＣＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＣＴＧＡ−３′） アンチセンス：＃２３９ クローン：Ｃ１５７９８、Ｃ１５７９９、Ｃ１５８００
ＴＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４１（５′−ＣＣＴ
ＴＧＣＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＣＴＧＡ−３′） アンチセンス：＃２３９ クローン：Ｃ１５７９８、Ｃ１５７９９、Ｃ１５８００
【００３１】領域ｍ ｎｔ７６５６−８６３０ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２２２（５′−ＧＡＣＣＡ
ＧＧＴＣＧＴＣＴＣＣＡＣＡＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２９（５′−ＧＴＣ
ＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＴＣ−３′） アンチセンス：＃２２２ クローン：Ｃ１５３７６、Ｃ１５３７８、Ｃ１５３８１
ＧＧＴＣＧＴＣＴＣＣＡＣＡＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２９（５′−ＧＴＣ
ＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＴＣ−３′） アンチセンス：＃２２２ クローン：Ｃ１５３７６、Ｃ１５３７８、Ｃ１５３８１
【００３２】領域ｎ ｎｔ８３２５−９５１１ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１６５ ＰＣＲ用プライマー：センス：＃８０（５′−ＧＡＣＡ
ＣＣＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣ−３′） （Ａ）１７非特異プライマー：＃１６５ クローン：Ｃ１５２７０、Ｃ１５２７１、Ｃ１５２７２
ＣＣＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣ−３′） （Ａ）１７非特異プライマー：＃１６５ クローン：Ｃ１５２７０、Ｃ１５２７１、Ｃ１５２７２
【００３３】（５）以上の解析結果にもとづいて、本発
明のＨＣ−Ｊ８ゲノムに相当するｃＤＮＡ塩基配列を配
列番号２記載のとおり特定した。さらに、ゲノムの完全
長ＲＮＡ塩基配列を配列番号１記載のとおり特定した。
また、ＨＣ−Ｊ８ゲノムによりコードされる本発明のア
ミノ酸配列を配列番号３および４記載のとおり特定し
た。
明のＨＣ−Ｊ８ゲノムに相当するｃＤＮＡ塩基配列を配
列番号２記載のとおり特定した。さらに、ゲノムの完全
長ＲＮＡ塩基配列を配列番号１記載のとおり特定した。
また、ＨＣ−Ｊ８ゲノムによりコードされる本発明のア
ミノ酸配列を配列番号３および４記載のとおり特定し
た。
【００３４】
【発明の効果】本発明は、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスＨＣ
−Ｊ８を単離し、そのウイルス遺伝子の全塩基配列を解
明したことにもとづく発明であって、ＮＡＮＢ型肝炎肝
炎ウイルスを高感度に検出することができ、また、これ
に必要なポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体を提供することができる。
−Ｊ８を単離し、そのウイルス遺伝子の全塩基配列を解
明したことにもとづく発明であって、ＮＡＮＢ型肝炎肝
炎ウイルスを高感度に検出することができ、また、これ
に必要なポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体を提供することができる。
【図１】は、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコ
ード領域の構造、ならびにＰＣＲ法による塩基配列決定
の方法。
ード領域の構造、ならびにＰＣＲ法による塩基配列決定
の方法。
【図１】において、Ｃはコア、Ｅはエンベロープ、ＮＳ
１は非構造蛋白質１、ＮＳ２は同２、ＮＳ３は同３、Ｎ
Ｓ４は同４、ＮＳ５は同５を示す。
１は非構造蛋白質１、ＮＳ２は同２、ＮＳ３は同３、Ｎ
Ｓ４は同４、ＮＳ５は同５を示す。
【配列表】
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年９月２９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の詳細な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス（以下「ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス」と略記する）遺伝
子、これに関連するポリヌクレオチド、ポリペプタイ
ド、ならびに関連抗原、抗体検出系に関する。
ス（以下「ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス」と略記する）遺伝
子、これに関連するポリヌクレオチド、ポリペプタイ
ド、ならびに関連抗原、抗体検出系に関する。
【０００２】
【従来の技術】ウイルスに由来する肝炎には、既に病原
体が解明されその診断法や予防法が確立したものとして
Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎がある。これ以外は一括して、非Ａ
非Ｂ型肝炎（以下「ＮＡＮＢ型肝炎」という）と呼ばれ
てきた。日本における輸血後肝炎は、Ｂ型肝炎の検出法
が輸血血液のスクリーニングに導入された後は格段に減
少したが、なお、年間推定２８万例が、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスにより発症していると考えられてきた。
体が解明されその診断法や予防法が確立したものとして
Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎がある。これ以外は一括して、非Ａ
非Ｂ型肝炎（以下「ＮＡＮＢ型肝炎」という）と呼ばれ
てきた。日本における輸血後肝炎は、Ｂ型肝炎の検出法
が輸血血液のスクリーニングに導入された後は格段に減
少したが、なお、年間推定２８万例が、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスにより発症していると考えられてきた。
【０００３】近年、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルス肝炎は、タ
イプ別にＣ型、Ｄ型、Ｅ型と命名され、その病原体につ
いての研究が進展し、撲滅に向けての努力が世界的に進
められるようになった。輸血後肝炎に関して、１９８８
年アメリカのカイロン社がＣ型肝炎ウイルス（以下「Ｈ
ＣＶ」と略記する）のＲＮＡウイルスゲノムのクローン
化に成功したと発表し、これを基にＨＣＶ（Ｃ１００−
３）抗体の測定系を開発した。現在、Ｃ１００−３抗体
測定系は、輸血血液のスクリーニングや肝疾患患者の診
断に、日本を始めとして各国で用いられている。このＣ
１００−３抗体の測定系はＮＡＮＢ型肝炎との関連性が
確かに一部では認められる。しかし、ＮＡＮＢ型慢性肝
炎の捕捉率は約７０％にすぎず、また急性Ｃ型肝炎にお
ける早期の診断が困難である等重大な問題点が残されて
いる。したがって、カイロン社の前記開発によってもＮ
ＡＮＢ型肝炎への対処は依然として解決されていない。
ＮＡＮＢ型肝炎の経過は不良であり、水平感染によって
も持続感染化（キャリア化）し、慢性肝炎に進展するこ
とが確認されている。また、肝硬変、肝がんへ進展する
ケースも多いと予想され、一日も早いウイルス本体の全
貌解明と診断、治療方法の確立が望まれていた。
イプ別にＣ型、Ｄ型、Ｅ型と命名され、その病原体につ
いての研究が進展し、撲滅に向けての努力が世界的に進
められるようになった。輸血後肝炎に関して、１９８８
年アメリカのカイロン社がＣ型肝炎ウイルス（以下「Ｈ
ＣＶ」と略記する）のＲＮＡウイルスゲノムのクローン
化に成功したと発表し、これを基にＨＣＶ（Ｃ１００−
３）抗体の測定系を開発した。現在、Ｃ１００−３抗体
測定系は、輸血血液のスクリーニングや肝疾患患者の診
断に、日本を始めとして各国で用いられている。このＣ
１００−３抗体の測定系はＮＡＮＢ型肝炎との関連性が
確かに一部では認められる。しかし、ＮＡＮＢ型慢性肝
炎の捕捉率は約７０％にすぎず、また急性Ｃ型肝炎にお
ける早期の診断が困難である等重大な問題点が残されて
いる。したがって、カイロン社の前記開発によってもＮ
ＡＮＢ型肝炎への対処は依然として解決されていない。
ＮＡＮＢ型肝炎の経過は不良であり、水平感染によって
も持続感染化（キャリア化）し、慢性肝炎に進展するこ
とが確認されている。また、肝硬変、肝がんへ進展する
ケースも多いと予想され、一日も早いウイルス本体の全
貌解明と診断、治療方法の確立が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記カイロン社のＣ１
００−３抗体検出キットでは診断できないＮＡＮＢ型肝
炎が多数存在することから、日本におけるＮＡＮＢ型肝
炎ウイルスゲノムがカイロン社の解明したＨＣＶゲノム
とは必ずしも一致せず、サブタイプの違いがあると推定
された。したがって、特異性、感度においてさらに優れ
たＮＡＮＢ型肝炎診断薬、および有効なワクチンを開発
するためには、サブタイプ別にＮＡＮＢ型肝炎ウイルス
の遺伝子レベル、アミノ酸レベルでの解析を完成するこ
とが待望されていた。本発明の目的は、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスゲノムの塩基配列を、全体にわたって完全に解
明し、これに基づいてアミノ酸レベルでの解析を行うこ
と、ならびにこれを用いてＮＡＮＢ型肝炎ウイルス関連
抗原、抗体の検出系の確立を図ることである。
００−３抗体検出キットでは診断できないＮＡＮＢ型肝
炎が多数存在することから、日本におけるＮＡＮＢ型肝
炎ウイルスゲノムがカイロン社の解明したＨＣＶゲノム
とは必ずしも一致せず、サブタイプの違いがあると推定
された。したがって、特異性、感度においてさらに優れ
たＮＡＮＢ型肝炎診断薬、および有効なワクチンを開発
するためには、サブタイプ別にＮＡＮＢ型肝炎ウイルス
の遺伝子レベル、アミノ酸レベルでの解析を完成するこ
とが待望されていた。本発明の目的は、ＮＡＮＢ型肝炎
ウイルスゲノムの塩基配列を、全体にわたって完全に解
明し、これに基づいてアミノ酸レベルでの解析を行うこ
と、ならびにこれを用いてＮＡＮＢ型肝炎ウイルス関連
抗原、抗体の検出系の確立を図ることである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＮＡＮＢ
型肝炎ウイルスの治療、予防、検査に不可欠なポリヌク
レオチドを見出すために鋭意研究をつづけ、その結果、
ヒトおよびチンパンジーキャリアの血清よりＮＡＮＢ型
肝炎ウイルスのＲＮＡを単離し、非コード領域を含む遺
伝子領域全体をカバーするｃＤＮＡをクローン化してそ
のゲノム全体の塩基配列を特定し、さらにこれにコード
されるポリペプタイドのアミノ酸配列を特定した。その
結果本発明者らは、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスであるＨＣ
−Ｊ８ゲノムの遺伝子全体の塩基配列を完全に解明する
ことに成功した。かかる遺伝子及びアミノ酸レベルでの
研究によって本発明は完成された。本発明のＮＡＮＢ型
肝炎ウイルス（ＨＣ−Ｊ８ゲノム）は、カイロン社のＨ
ＣＶゲノムとは別異のものである。
型肝炎ウイルスの治療、予防、検査に不可欠なポリヌク
レオチドを見出すために鋭意研究をつづけ、その結果、
ヒトおよびチンパンジーキャリアの血清よりＮＡＮＢ型
肝炎ウイルスのＲＮＡを単離し、非コード領域を含む遺
伝子領域全体をカバーするｃＤＮＡをクローン化してそ
のゲノム全体の塩基配列を特定し、さらにこれにコード
されるポリペプタイドのアミノ酸配列を特定した。その
結果本発明者らは、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスであるＨＣ
−Ｊ８ゲノムの遺伝子全体の塩基配列を完全に解明する
ことに成功した。かかる遺伝子及びアミノ酸レベルでの
研究によって本発明は完成された。本発明のＮＡＮＢ型
肝炎ウイルス（ＨＣ−Ｊ８ゲノム）は、カイロン社のＨ
ＣＶゲノムとは別異のものである。
【０００６】本発明は、配列番号１記載の塩基配列を有
するＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発明であり、ＲＮ
Ａ５′末端より３４１箇のヌクレオチドからなる非コー
ド領域、これに続く構造蛋白質および非構造蛋白質をコ
ードする領域を含む９０９９箇のヌクレオチド、ならび
に３′末端３０箇のＵストレッチを含む７１箇のヌクレ
オチドからなる、配列番号１記載のウイルス遺伝子の発
明であり、これらと、部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝
炎ウイルス変異株遺伝子の発明である。また、配列番号
２記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドＮ−９５１
１、およびこれと部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝炎ウ
イルス変異株ヌクレオチドの発明である。さらに前記遺
伝子またはポリヌクレオチドにコードされるポリペプタ
イド、配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
タイドＰ−３０３３、配列番号４記載のアミノ酸配列を
有するポリペプタイドＰ−３０３３−２、前記遺伝子、
ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンの全部または一部
を宿主細胞に組み込み発現させて得たポリペプタイド、
前記各ポリペプタイドに対するポリクローナル抗体また
はモノクローナル抗体の発明である。配列番号３、同４
記載のポリペプタイドは、配列番号１記載の遺伝子によ
ってコードされるポリペプタイドのうち２種のみを例示
したものであって、上記遺伝子によってコードされるポ
リペプタイドは上記２種に限定されるものでなく、した
がって本発明のポリペプタイドがこれらに限定されるも
のでないことは明らかである。さらに、前記各ポリペプ
タイドを用いたＮＡＮＢ型肝炎検出系、前記ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体を用いたＮＡＮＢ型
肝炎検出系の発明である。
するＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発明であり、ＲＮ
Ａ５′末端より３４１箇のヌクレオチドからなる非コー
ド領域、これに続く構造蛋白質および非構造蛋白質をコ
ードする領域を含む９０９９箇のヌクレオチド、ならび
に３′末端３０箇のＵストレッチを含む７１箇のヌクレ
オチドからなる、配列番号１記載のウイルス遺伝子の発
明であり、これらと、部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝
炎ウイルス変異株遺伝子の発明である。また、配列番号
２記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドＮ−９５１
１、およびこれと部分的置換を有するＮＡＮＢ型肝炎ウ
イルス変異株ヌクレオチドの発明である。さらに前記遺
伝子またはポリヌクレオチドにコードされるポリペプタ
イド、配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
タイドＰ−３０３３、配列番号４記載のアミノ酸配列を
有するポリペプタイドＰ−３０３３−２、前記遺伝子、
ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンの全部または一部
を宿主細胞に組み込み発現させて得たポリペプタイド、
前記各ポリペプタイドに対するポリクローナル抗体また
はモノクローナル抗体の発明である。配列番号３、同４
記載のポリペプタイドは、配列番号１記載の遺伝子によ
ってコードされるポリペプタイドのうち２種のみを例示
したものであって、上記遺伝子によってコードされるポ
リペプタイドは上記２種に限定されるものでなく、した
がって本発明のポリペプタイドがこれらに限定されるも
のでないことは明らかである。さらに、前記各ポリペプ
タイドを用いたＮＡＮＢ型肝炎検出系、前記ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体を用いたＮＡＮＢ型
肝炎検出系の発明である。
【０００７】本発明のＮＡＮＢ型肝炎ウイルス遺伝子は
次のようにして得て、その塩基配列を決定した。ヒトお
よびチンパンジー血奨より得た検体、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ
−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ８を用いて本研究を進めた。ＨＣ−Ｊ
１、ＨＣ−Ｊ８は日本人供血者由来で、いずれもＣ１０
０−３抗体陽性と判定された検体より得た。ＨＣ−Ｊ４
はＮＡＮＢ型肝炎の感染性を確認したチンパンジーから
得た検体に由来するが、しかしこれはカイロン社の前記
のＣ１００−３抗体では（−）であった。この３種の血
奨検体よりＲＮＡを調整し、これらによってＲＮＡの塩
基配列を調べた。このうちＨＣ−Ｊ１およびＨＣ−Ｊ４
に関し、ＲＮＡの５′末端側の約２５００、および３′
末側の約１１００の塩基配列については既に特願平３−
１９１３７６号ならびに特願平３−２４７１２０号にお
いてその一部を開示した。本発明者らは、さらに研究を
進め、今回単離したＨＣ−Ｊ８について、新たにＲＮＡ
塩基の完全長について特定し、本発明を完成させるに至
った。
次のようにして得て、その塩基配列を決定した。ヒトお
よびチンパンジー血奨より得た検体、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ
−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ８を用いて本研究を進めた。ＨＣ−Ｊ
１、ＨＣ−Ｊ８は日本人供血者由来で、いずれもＣ１０
０−３抗体陽性と判定された検体より得た。ＨＣ−Ｊ４
はＮＡＮＢ型肝炎の感染性を確認したチンパンジーから
得た検体に由来するが、しかしこれはカイロン社の前記
のＣ１００−３抗体では（−）であった。この３種の血
奨検体よりＲＮＡを調整し、これらによってＲＮＡの塩
基配列を調べた。このうちＨＣ−Ｊ１およびＨＣ−Ｊ４
に関し、ＲＮＡの５′末端側の約２５００、および３′
末側の約１１００の塩基配列については既に特願平３−
１９１３７６号ならびに特願平３−２４７１２０号にお
いてその一部を開示した。本発明者らは、さらに研究を
進め、今回単離したＨＣ−Ｊ８について、新たにＲＮＡ
塩基の完全長について特定し、本発明を完成させるに至
った。
【０００８】ＨＣ−Ｊ８ゲノムは、実施例に示すよう
に、５′末端より３４１個のヌクレオドよりなる５′非
コード領域を有し、それに続いて構造蛋白質をコードす
る領域が続き、さらに非構造蛋白質をコードする領域を
有する。他方、３′末端側は、非構造蛋白質をコードす
る領域に続いて３０塩基のＵ−ストレッチを含む７１塩
基の非コード領域を有する。５′末端側から３４２番目
のアデニンより始まるコード領域は９０９９塩基の一本
の長いオープンリーディングフレームよりなり、これが
３０３３アミノ酸をコードしていることが明らかとなっ
た。ＨＣＶ、すなわちＣ型肝炎ウイルスはその遺伝子構
造からフラビウイルスに近縁であると考えられている
が、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコード領域
も図１に示す如く、Ｃ（コア）、Ｅ（エンベロープ）、
ＮＳ１（非構造蛋白１）、ＮＳ２（同２）、ＮＳ３（同
３）、ＮＳ４（同４）、ＮＳ５（同５）からなると考え
られる。
に、５′末端より３４１個のヌクレオドよりなる５′非
コード領域を有し、それに続いて構造蛋白質をコードす
る領域が続き、さらに非構造蛋白質をコードする領域を
有する。他方、３′末端側は、非構造蛋白質をコードす
る領域に続いて３０塩基のＵ−ストレッチを含む７１塩
基の非コード領域を有する。５′末端側から３４２番目
のアデニンより始まるコード領域は９０９９塩基の一本
の長いオープンリーディングフレームよりなり、これが
３０３３アミノ酸をコードしていることが明らかとなっ
た。ＨＣＶ、すなわちＣ型肝炎ウイルスはその遺伝子構
造からフラビウイルスに近縁であると考えられている
が、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコード領域
も図１に示す如く、Ｃ（コア）、Ｅ（エンベロープ）、
ＮＳ１（非構造蛋白１）、ＮＳ２（同２）、ＮＳ３（同
３）、ＮＳ４（同４）、ＮＳ５（同５）からなると考え
られる。
【０００９】本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノムは、ヨーロッパ
特許公開第３８８，２３２号（カイロン社）に示された
ＨＣＶゲノム（ＨＣＶ−１）と比較すると、ヌクレオチ
ド配列について全領域では６６．４％の相同性を、また
アミノ酸配列については全領域で７１．０％の相同性を
示すにすぎない。領域ごとに個別に相同性を調べると、
５′末側非コード領域において塩基配列で９３．８％、
コア領域においてアミノ酸配列で９０．１％であり、こ
れらの領域では比較的高い相同性を示している。他方、
エンベロープ部分より下流の領域ではＥ、ＮＳ１、ＮＳ
２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５のそれぞれのアミノ酸配列
で５４．７％。７３．１％、５５．６％、８１．３％、
７２．１％、６７．３％、３′末側非コード領域の塩基
配列で２５．９％といずれも低い相同性を示すにすぎ
ず、結局、ＨＣ−Ｊ８がカイロン社の発見したＨＣＶ−
１と大きく異なることが明らかとなった。
特許公開第３８８，２３２号（カイロン社）に示された
ＨＣＶゲノム（ＨＣＶ−１）と比較すると、ヌクレオチ
ド配列について全領域では６６．４％の相同性を、また
アミノ酸配列については全領域で７１．０％の相同性を
示すにすぎない。領域ごとに個別に相同性を調べると、
５′末側非コード領域において塩基配列で９３．８％、
コア領域においてアミノ酸配列で９０．１％であり、こ
れらの領域では比較的高い相同性を示している。他方、
エンベロープ部分より下流の領域ではＥ、ＮＳ１、ＮＳ
２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５のそれぞれのアミノ酸配列
で５４．７％。７３．１％、５５．６％、８１．３％、
７２．１％、６７．３％、３′末側非コード領域の塩基
配列で２５．９％といずれも低い相同性を示すにすぎ
ず、結局、ＨＣ−Ｊ８がカイロン社の発見したＨＣＶ−
１と大きく異なることが明らかとなった。
【００１０】本発明者らが、Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．６０，３，１６７−１７７において
既に公表したＣ型肝炎ウイルスゲノムＨＣ−Ｊ１（Ｔｙ
ｐｅＩ）株、ＨＣ−Ｊ４（ＴｙｐｅＩＩ）株と本発明の
ＨＣ−Ｊ８株を比較すると、５′末側約３０００塩基の
配列について、その相同性がそれぞれ７０．１％、６
７．１％であり、また特願平３−２８７４０２号に開示
したＨＣ−Ｊ６（ＴｙｐｅＩＩＩ）株との比較では、全
塩基配列について、その相同性が７６．９％と、いずれ
も低い値を示した。これに対して、特願平３−１９６１
７５号に開示したＨＣ−Ｊ７（ＴｙｐｅＩＶ）株と比較
すると、５′末側約３０００塩基について、その配列が
９３．１％と、高い相同性を示した。同じＴｙｐｅに分
類されると推定される株の間では相同性が大きく、例え
ば先記カイロン社のＨＣＶゲノムＨＣＶ−１と本発明者
らの解明したＨＣ−Ｊ１とでは５′末側約３０００塩基
について９５．６％の相同性を示し、ともにＴｙｐｅＩ
に属するものと考えられる。これに対し、本発明のＨＣ
−Ｊ８は、ＨＣＶ−１、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ
−Ｊ６とは相同性が低く、ＴＹＰＥＩ、ＴｙｐｅＩＩ、
ＴｙｐｅＩＩＩとは異なるＴｙｐｅの株であって、ＨＣ
−Ｊ７と同様にＴｙｐｅＩＶに属するものと推定され
る。
Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．６０，３，１６７−１７７において
既に公表したＣ型肝炎ウイルスゲノムＨＣ−Ｊ１（Ｔｙ
ｐｅＩ）株、ＨＣ−Ｊ４（ＴｙｐｅＩＩ）株と本発明の
ＨＣ−Ｊ８株を比較すると、５′末側約３０００塩基の
配列について、その相同性がそれぞれ７０．１％、６
７．１％であり、また特願平３−２８７４０２号に開示
したＨＣ−Ｊ６（ＴｙｐｅＩＩＩ）株との比較では、全
塩基配列について、その相同性が７６．９％と、いずれ
も低い値を示した。これに対して、特願平３−１９６１
７５号に開示したＨＣ−Ｊ７（ＴｙｐｅＩＶ）株と比較
すると、５′末側約３０００塩基について、その配列が
９３．１％と、高い相同性を示した。同じＴｙｐｅに分
類されると推定される株の間では相同性が大きく、例え
ば先記カイロン社のＨＣＶゲノムＨＣＶ−１と本発明者
らの解明したＨＣ−Ｊ１とでは５′末側約３０００塩基
について９５．６％の相同性を示し、ともにＴｙｐｅＩ
に属するものと考えられる。これに対し、本発明のＨＣ
−Ｊ８は、ＨＣＶ−１、ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ
−Ｊ６とは相同性が低く、ＴＹＰＥＩ、ＴｙｐｅＩＩ、
ＴｙｐｅＩＩＩとは異なるＴｙｐｅの株であって、ＨＣ
−Ｊ７と同様にＴｙｐｅＩＶに属するものと推定され
る。
【００１１】本発明のＨＣ−Ｊ８株は、配列番号１、同
２に記号Ｍ、Ｒ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、Ｋ、Ｂで記したとおり塩
基配列の変異を有し、また配列番号３と同４の対比から
理解されるようにアミノ酸配列の変異を有する。これら
の変異は、全塩基配列において約１．４％、全アミノ酸
配列において約１．７％に及ぶ。したがって、上記程度
の変異がある場合であっても本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノ
ム、ポリヌクレオチド、ポリペプタイドに包含されるも
のと認められる（請求項３、請求項５、請求項６）。
２に記号Ｍ、Ｒ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、Ｋ、Ｂで記したとおり塩
基配列の変異を有し、また配列番号３と同４の対比から
理解されるようにアミノ酸配列の変異を有する。これら
の変異は、全塩基配列において約１．４％、全アミノ酸
配列において約１．７％に及ぶ。したがって、上記程度
の変異がある場合であっても本発明のＨＣ−Ｊ８ゲノ
ム、ポリヌクレオチド、ポリペプタイドに包含されるも
のと認められる（請求項３、請求項５、請求項６）。
【００１２】さらに、ＨＣ−Ｊ８株において変異の激し
いエンベロープ領域（アミノ酸番号第１９２〜第３８３
である、５７６塩基／１９２アミノ酸残基）およびＮＳ
１領域（アミノ酸番号第３８４〜第７３３である、１０
５０塩基／３５０アミノ酸残基）ではそれぞれ、２０塩
基／７アミノ酸、３７塩基／１９アミノ酸の変異が認め
られた。塩基配列にしてそれぞれ３．４７％、３．５２
％、またアミノ酸配列にして３．６４％、５．４２％の
変異率に相当する。したがって、これらの領域では３．
５％〜５．５％程度の変異が認められる場合も本発明の
ＨＣ−Ｊ８ゲノムヌクレオチドおよびこれにコードされ
るポリペプタイドに含まれる。
いエンベロープ領域（アミノ酸番号第１９２〜第３８３
である、５７６塩基／１９２アミノ酸残基）およびＮＳ
１領域（アミノ酸番号第３８４〜第７３３である、１０
５０塩基／３５０アミノ酸残基）ではそれぞれ、２０塩
基／７アミノ酸、３７塩基／１９アミノ酸の変異が認め
られた。塩基配列にしてそれぞれ３．４７％、３．５２
％、またアミノ酸配列にして３．６４％、５．４２％の
変異率に相当する。したがって、これらの領域では３．
５％〜５．５％程度の変異が認められる場合も本発明の
ＨＣ−Ｊ８ゲノムヌクレオチドおよびこれにコードされ
るポリペプタイドに含まれる。
【００１３】
【作用】本発明の遺伝子、ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡ
クローンは、その全部または一部を大腸菌、枯草菌等の
宿主細胞に組み込んでポリペプタイドを発現させること
ができる。本発明のポリペプタイドは、ＮＡＮＢ型肝炎
の検出系として用いることができ、さらに、これに対す
るポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を製造
することができる。本発明のポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体は、ＮＡＮＢ型肝炎検出系として用
いることができる。
クローンは、その全部または一部を大腸菌、枯草菌等の
宿主細胞に組み込んでポリペプタイドを発現させること
ができる。本発明のポリペプタイドは、ＮＡＮＢ型肝炎
の検出系として用いることができ、さらに、これに対す
るポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を製造
することができる。本発明のポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体は、ＮＡＮＢ型肝炎検出系として用
いることができる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明の実施例について述べるが、も
とより本発明がこれらの実施例に限定されるものではな
い。
とより本発明がこれらの実施例に限定されるものではな
い。
【００１５】実施例１ （１）ＲＮＡ抽出 日本人供血者の血奨から得た、Ｃ１００−３抗体陽性
（オーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製、オ
ーソＨＣＶＡｂＥＬＩＳＡキット）と判定された検体Ｈ
Ｃ−Ｊ８より、次のようにしてＲＮＡを抽出した。血奨
にトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、
６８×１０３ｒｐｍで１時間遠心した。得られたペレッ
トに２００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２％
（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、および
１ｍｇ／ｍｌのプロテナーゼＫを含むトリス塩酸緩衝液
（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、６０℃で１時間加温
し、エタノール沈澱を行い、ＲＮＡを得た。
（オーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製、オ
ーソＨＣＶＡｂＥＬＩＳＡキット）と判定された検体Ｈ
Ｃ−Ｊ８より、次のようにしてＲＮＡを抽出した。血奨
にトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、
６８×１０３ｒｐｍで１時間遠心した。得られたペレッ
トに２００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２％
（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、および
１ｍｇ／ｍｌのプロテナーゼＫを含むトリス塩酸緩衝液
（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加え、６０℃で１時間加温
し、エタノール沈澱を行い、ＲＮＡを得た。
【００１６】（２）ＨＣ−Ｊ８ｃＤＮＡ合成 ＨＣ−Ｊ８血奨より抽出したＲＮＡを７０℃で１分間加
温熱変性し、これを鋳型としての逆転写酵素（Ｓｕｐｅ
ｒｓｃｒｐｔ，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ 社）およびオリゴ
ヌクレオチドプライマー（２０−ｍｅｒ）２０ｐｍｏｌ
を加えて、４２℃、１時間反応させてｃＤＮＡを得た。
温熱変性し、これを鋳型としての逆転写酵素（Ｓｕｐｅ
ｒｓｃｒｐｔ，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ 社）およびオリゴ
ヌクレオチドプライマー（２０−ｍｅｒ）２０ｐｍｏｌ
を加えて、４２℃、１時間反応させてｃＤＮＡを得た。
【００１７】（３）ポリメラーゼチェインリアクション
（ＰＣＲ）によるｃＤＮＡの増幅 Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＤＮＡ増幅試薬キット（パーキンエ
ルマー・シータス社）を用いたＳａｉｋｉらの方法（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３９，４８７−４９１，１９８８）に
より、ＤＮＡサーマイクラー（パーキンエルマー・シー
タス社）にて３５サイクルのｃＤＮＡ増幅を行った。ｃ
ＤＮＡ合成用およびＰＣＲ用プライマーとして特願平２
−１５３４０２号記載の合成プライマー、または特願平
３−１９６１７５号、特願平３−２８７４０２号記載の
ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ６の各ゲノム塩基配
列を基に合成したプライマーを用いた。
（ＰＣＲ）によるｃＤＮＡの増幅 Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＤＮＡ増幅試薬キット（パーキンエ
ルマー・シータス社）を用いたＳａｉｋｉらの方法（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３９，４８７−４９１，１９８８）に
より、ＤＮＡサーマイクラー（パーキンエルマー・シー
タス社）にて３５サイクルのｃＤＮＡ増幅を行った。ｃ
ＤＮＡ合成用およびＰＣＲ用プライマーとして特願平２
−１５３４０２号記載の合成プライマー、または特願平
３−１９６１７５号、特願平３−２８７４０２号記載の
ＨＣ−Ｊ１、ＨＣ−Ｊ４、ＨＣ−Ｊ６の各ゲノム塩基配
列を基に合成したプライマーを用いた。
【００１８】（４）ＨＣ−Ｊ８の５′末端側塩基配列の
特定 ＨＣ−Ｊ８の５′末端側（領域ａ）の塩基配列は図１に
示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られたク
ローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体から
得たＲＮＡについて、ｎｔ２４６〜２６５のアンチセン
スプライマー＃３６（５′−ＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧ
ＣＴＡＧＣＡＧＴ−３′）を用いて、前記（２）の方法
に従ってｃＤＮＡを合成したのち、ターミナルデオキシ
ヌクレオチジルトランスフェラーゼによりｃＤＮＡの
３′末端にｄＴ付加、またはｄＡ付加を行い、２段階の
ｏｎｅ−ｓｉｄｅｄ ＰＣＲ増幅を行った。すなわち、
１回目は＃１６５（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡ
ＣＡＴＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ａ）１７−３′）、また
は＃１７１（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴ
ＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ｔ）１７−３′）と、アンチセ
ンスプライマーの＃４８（５′−ＧＴＴＧＡＴＣＣＡＡ
ＧＡＡＡＧＧＡＣＣＣ−３′、ｎｔ１８８〜２０７）を
用いて３５サイクルのＰＣＲ増幅を行い、２回目はその
ＰＣＲ産物を鋳型にして非特異的プライマー＃１６６
（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＣＧＡＴ−
３′）と、アンチセンスプライマーの＃１０９（５′−
ＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＴ−３′）
を用いて３０サイクルのＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物をＭ１３ファージベクターにサブクローニング
し、完全長の５′末端配列を有すると考えられる１３個
の独立したクローンＣ１４９５１、Ｃ１４９５２、Ｃ１
４９５３、Ｃ１４９５８、Ｃ１４９６０、Ｃ１４９６
８、Ｃ１４９７１、Ｃ１４９７２、Ｃ１４９７４（以上
ポリｄＴ付加したクローン）およびＣ１４９８７、Ｃ１
４９９６、Ｃ１４９９９、Ｃ１５０００（以上ポリｄＴ
を付加したクローン）を得て、これらのコンセンサスシ
ークエンスからｎｔ１〜１３９の塩基配列を特定した。
特定 ＨＣ−Ｊ８の５′末端側（領域ａ）の塩基配列は図１に
示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られたク
ローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体から
得たＲＮＡについて、ｎｔ２４６〜２６５のアンチセン
スプライマー＃３６（５′−ＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧ
ＣＴＡＧＣＡＧＴ−３′）を用いて、前記（２）の方法
に従ってｃＤＮＡを合成したのち、ターミナルデオキシ
ヌクレオチジルトランスフェラーゼによりｃＤＮＡの
３′末端にｄＴ付加、またはｄＡ付加を行い、２段階の
ｏｎｅ−ｓｉｄｅｄ ＰＣＲ増幅を行った。すなわち、
１回目は＃１６５（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡ
ＣＡＴＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ａ）１７−３′）、また
は＃１７１（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴ
ＣＧＡＴＡＡＴＡＣＧ（Ｔ）１７−３′）と、アンチセ
ンスプライマーの＃４８（５′−ＧＴＴＧＡＴＣＣＡＡ
ＧＡＡＡＧＧＡＣＣＣ−３′、ｎｔ１８８〜２０７）を
用いて３５サイクルのＰＣＲ増幅を行い、２回目はその
ＰＣＲ産物を鋳型にして非特異的プライマー＃１６６
（５′−ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＣＧＡＴ−
３′）と、アンチセンスプライマーの＃１０９（５′−
ＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＴ−３′）
を用いて３０サイクルのＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物をＭ１３ファージベクターにサブクローニング
し、完全長の５′末端配列を有すると考えられる１３個
の独立したクローンＣ１４９５１、Ｃ１４９５２、Ｃ１
４９５３、Ｃ１４９５８、Ｃ１４９６０、Ｃ１４９６
８、Ｃ１４９７１、Ｃ１４９７２、Ｃ１４９７４（以上
ポリｄＴ付加したクローン）およびＣ１４９８７、Ｃ１
４９９６、Ｃ１４９９９、Ｃ１５０００（以上ポリｄＴ
を付加したクローン）を得て、これらのコンセンサスシ
ークエンスからｎｔ１〜１３９の塩基配列を特定した。
【００１９】（５）ＰＣＲ法によるｃＤＮＡクローンの
増幅 ＨＣ−Ｊ８ゲノムのｎｔ１４０から下流の塩基配列は図
１に示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られ
たクローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体
から得たＲＮＡについて、種々のアンチセンスアライマ
ーを用いて、前記（２）の方法に従ってｃＤＮＡを合成
したのちＰＣＲ増幅を行った。得られたＰＣＲ産物をＭ
１３ファージベクターにサブクローニングし、得られた
複数クローンのコンセンサスシークエンスから塩基配列
を特定した。各増幅領域について、以下にｃＤＮＡ合成
を用いたプライマーとＰＣＲ増幅に用いたプライマー、
および得られたクローンの番号を示す。なおアルファベ
ットで示した増幅領域の記号は図１に対応する。
増幅 ＨＣ−Ｊ８ゲノムのｎｔ１４０から下流の塩基配列は図
１に示すように、ｃＤＮＡをＰＣＲにて増幅して得られ
たクローンの解析結果により特定した。ＨＣ−Ｊ８検体
から得たＲＮＡについて、種々のアンチセンスアライマ
ーを用いて、前記（２）の方法に従ってｃＤＮＡを合成
したのちＰＣＲ増幅を行った。得られたＰＣＲ産物をＭ
１３ファージベクターにサブクローニングし、得られた
複数クローンのコンセンサスシークエンスから塩基配列
を特定した。各増幅領域について、以下にｃＤＮＡ合成
を用いたプライマーとＰＣＲ増幅に用いたプライマー、
および得られたクローンの番号を示す。なおアルファベ
ットで示した増幅領域の記号は図１に対応する。
【００２０】領域ｂ ｎｔ４５−８４７ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１２２（５′−ＡＧＧＴＴ
ＣＣＣＴＧＴＴＧＣＡＴＡＡＴＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃３２Ａ（５′−ＣＴＧ
ＴＧＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴ−３′） アンチセンス：＃１２２ クローン：Ｃ１５２２１、Ｃ１５２２２、Ｃ１５２２３
ＣＣＣＴＧＴＴＧＣＡＴＡＡＴＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃３２Ａ（５′−ＣＴＧ
ＴＧＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴ−３′） アンチセンス：＃１２２ クローン：Ｃ１５２２１、Ｃ１５２２２、Ｃ１５２２３
【００２１】領域ｃ ｎｔ７３２−１３５４ ｃＣＤＮＡ合成プライマー：＃５４（５′−ＡＴＣＧＣ
ＧＴＡＣＧＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃５０（５′−ＧＣＣＧ
ＡＴＣＴＣＡＴＧＧＧＧＴＡＣＡＴ−３′） アンチセンス：＃５４ クローン：Ｃ１５２５６、Ｃ１５２５７、Ｃ１５２５８
ＧＴＡＣＧＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃５０（５′−ＧＣＣＧ
ＡＴＣＴＣＡＴＧＧＧＧＴＡＣＡＴ−３′） アンチセンス：＃５４ クローン：Ｃ１５２５６、Ｃ１５２５７、Ｃ１５２５８
【００２２】領域ｄ ｎｔ１３００−１８７９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１９９（５′−ＧＧＧＧＴ
ＧＡＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０５（５′−ＧＧＧ
ＡＣＡＴＧＡＴＧＡＴＣＡＡＣＴＧＧ−３′） アンチセンス：＃１９９ クローン：Ｃ１４２２１、Ｃ１４２２２、Ｃ１４２２３
ＧＡＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０５（５′−ＧＧＧ
ＡＣＡＴＧＡＴＧＡＴＣＡＡＣＴＧＧ−３′） アンチセンス：＃１９９ クローン：Ｃ１４２２１、Ｃ１４２２２、Ｃ１４２２３
【００２３】領域ｅ ｎｔ１８３３−２５１８ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１４６（５′−ＡＧＴＡＧ
ＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１５０（５′−ＡＴＣ
ＧＴＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＣＧＧＴ−３′） アンチセンス：＃１４６ クローン：Ｃ１１５３５、Ｃ１１５４０、Ｃ１１５６６
ＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１５０（５′−ＡＴＣ
ＧＴＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＣＧＧＴ−３′） アンチセンス：＃１４６ クローン：Ｃ１１５３５、Ｃ１１５４０、Ｃ１１５６６
【００２４】領域ｆ ｎｔ２４３３−３４５１ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１７０（５′−ＧＣＡＴＡ
ＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＧＧＧＧＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１６０（５′−ＣＡＧ
ＡＡＣＡＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＧＣＡ−３′） アンチセンス：＃１７０ クローン：Ｃ１５３４８、Ｃ１５３４９、Ｃ１５３５６
ＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＧＧＧＧＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃１６０（５′−ＣＡＧ
ＡＡＣＡＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＧＣＡ−３′） アンチセンス：＃１７０ クローン：Ｃ１５３４８、Ｃ１５３４９、Ｃ１５３５６
【００２５】領域ｇ ｎｔ３４０４−４３００ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２２５（５′−ＴＣＧＣＡ
ＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＴＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３８（５′−ＣＴＡ
ＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＧＡ−３′） アンチセンス：＃２２５ クローン：Ｃ１５７０１、Ｃ１５７０２、Ｃ１５７０３
ＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＴＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３８（５′−ＣＴＡ
ＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＧＡ−３′） アンチセンス：＃２２５ クローン：Ｃ１５７０１、Ｃ１５７０２、Ｃ１５７０３
【００２６】領域ｈ ｎｔ４２２１−５０１５ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２１６（５′−ＧＴＧＧＴ
ＣＴＡＧＡＣＡＴＡＣＧＧＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３０（５′−ＣＣＣ
ＡＴＣＡＣＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡ−３′） アンチセンス：＃２１６ クローン：Ｃ１５３９１、Ｃ１５３９２、Ｃ１５３９３
ＣＴＡＧＡＣＡＴＡＣＧＧＧＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２３０（５′−ＣＣＣ
ＡＴＣＡＣＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡ−３′） アンチセンス：＃２１６ クローン：Ｃ１５３９１、Ｃ１５３９２、Ｃ１５３９３
【００２７】領域ｉ ｎｔ４６９５−５０６２ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２１０（５′−ＧＣＡＴＣ
ＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０９（５′−ＴＴＣ
ＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＴＣＧＡＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２１０ クローン：Ｃ１４０８７、Ｃ１４０８８、Ｃ１４０８９
ＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２０９（５′−ＴＴＣ
ＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＴＣＧＡＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２１０ クローン：Ｃ１４０８７、Ｃ１４０８８、Ｃ１４０８９
【００２８】領域ｊ ｎｔ５０２１−６１６９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１６２（５′−ＴＣＣＧＡ
ＣＴＣＣＧＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２７（５′−ＧＴＴ
ＣＴＧＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡ−３′） アンチセンス：＃１６２ クローン：Ｃ１５４２１、Ｃ１５４２２、Ｃ１５４２３
ＣＴＣＣＧＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２７（５′−ＧＴＴ
ＣＴＧＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡ−３′） アンチセンス：＃１６２ クローン：Ｃ１５４２１、Ｃ１５４２２、Ｃ１５４２３
【００２９】領域ｋ ｎｔ６０２７−６８８９ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２３２（５′−ＧＡＴＧＧ
ＧＴＣＴＧＴＴＡＧＣＡＴＧＧＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４２（５′−ＴＴＧ
ＧＴＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２３２ クローン：Ｃ１５７３３、Ｃ１５７３４、Ｃ１５７３５
ＧＴＣＴＧＴＴＡＧＣＡＴＧＧＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４２（５′−ＴＴＧ
ＧＴＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧ−３′） アンチセンス：＃２３２ クローン：Ｃ１５７３３、Ｃ１５７３４、Ｃ１５７３５
【００３０】領域ｌ ｎｔ６８３４−７７３５ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２３９（５′−ＡＴＣＧＧ
ＴＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４１（５′−ＣＣＴ
ＴＧＣＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＣＴＧＡ−３′） アンチセンス：＃２３９ クローン：Ｃ１５７９８、Ｃ１５７９９、Ｃ１５８００
ＴＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＣ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２４１（５′−ＣＣＴ
ＴＧＣＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＣＴＧＡ−３′） アンチセンス：＃２３９ クローン：Ｃ１５７９８、Ｃ１５７９９、Ｃ１５８００
【００３１】領域ｍ ｎｔ７６５６−８６３０ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃２２２（５′−ＧＡＣＣＡ
ＧＧＴＣＧＴＣＴＣＣＡＣＡＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２９（５′−ＧＴＣ
ＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＴＣ−３′） アンチセンス：＃２２２ クローン：Ｃ１５３７６、Ｃ１５３７８、Ｃ１５３８１
ＧＧＴＣＧＴＣＴＣＣＡＣＡＣＡ−３′） ＰＣＲ用プライマー：センス：＃２２９（５′−ＧＴＣ
ＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＴＣ−３′） アンチセンス：＃２２２ クローン：Ｃ１５３７６、Ｃ１５３７８、Ｃ１５３８１
【００３２】領域ｎ ｎｔ８３２５−９５１１ ｃＤＮＡ合成プライマー：＃１６５ ＰＣＲ用プライマー：センス：＃８０（５′−ＧＡＣＡ
ＣＣＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣ−３′） （Ａ）１７非特異プライマー：＃１６５ クローン：Ｃ１５２７０、Ｃ１５２７１、Ｃ１５２７２
ＣＣＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣ−３′） （Ａ）１７非特異プライマー：＃１６５ クローン：Ｃ１５２７０、Ｃ１５２７１、Ｃ１５２７２
【００３３】（５）以上の解析結果にもとづいて、本発
明のＨＣ−Ｊ８ゲノムに相当するｃＤＮＡ塩基配列を配
列番号２記載のとおり特定した。さらに、ゲノムの完全
長ＲＮＡ塩基配列を配列番号１記載のとおり特定した。
また、ＨＣ−Ｊ８ゲノムによりコードされる本発明のア
ミノ酸配列を配列番号３および４記載のとおり特定し
た。
明のＨＣ−Ｊ８ゲノムに相当するｃＤＮＡ塩基配列を配
列番号２記載のとおり特定した。さらに、ゲノムの完全
長ＲＮＡ塩基配列を配列番号１記載のとおり特定した。
また、ＨＣ−Ｊ８ゲノムによりコードされる本発明のア
ミノ酸配列を配列番号３および４記載のとおり特定し
た。
【００３４】
【発明の効果】本発明は、ＮＡＮＢ型肝炎ウイルスＨＣ
−Ｊ８を単離し、そのウイルス遺伝子の全塩基配列を解
明したことにもとづく発明であって、ＮＡＮＢ型肝炎肝
炎ウイルスを高感度に検出することができ、また、これ
に必要なポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体を提供することができる。
−Ｊ８を単離し、そのウイルス遺伝子の全塩基配列を解
明したことにもとづく発明であって、ＮＡＮＢ型肝炎肝
炎ウイルスを高感度に検出することができ、また、これ
に必要なポリペプタイド、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体を提供することができる。
【００３５】
【配列表】
【００３６】
【００３７】
【００３８】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】は、本発明のＮＡＮＢ肝炎ウイルス遺伝子のコ
ード領域の構造、ならびにＰＣＲ法による塩基配列決定
の方法。
ード領域の構造、ならびにＰＣＲ法による塩基配列決定
の方法。
【符号の説明】
【図１】において、Ｃはコア、Ｅはエンベロープ、ＮＳ
１は非構造蛋白質１、ＮＳ２は同２、ＮＳ３は同３、Ｎ
Ｓ４は同４、ＮＳ５は同５を示す。
１は非構造蛋白質１、ＮＳ２は同２、ＮＳ３は同３、Ｎ
Ｓ４は同４、ＮＳ５は同５を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/569 Ｌ 9015−2Ｊ 33/576 Ｚ 9015−2Ｊ
Claims (12)
- 【請求項１】配列番号１記載の塩基配列を有する非Ａ非
Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子。 - 【請求項２】ＲＮＡ５′末端より３４１箇のヌクレオチ
ドからなる非コード領域、これに続く構造蛋白質および
非構造蛋白質をコードする領域を含む９０９９箇のヌク
レオチド、ならびに３′末端３０箇のＵストレッチを含
む７１箇のヌクレオチドからなる、請求項第１項記載の
ウイルス遺伝子。 - 【請求項３】請求項第１項または第２項記載の遺伝子と
部分的置換を有する非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス変異株遺伝
子。 - 【請求項４】配列番号２記載の塩基配列を有するポリヌ
クレオチドＮ−９５１１。 - 【請求項５】請求項第４項記載のヌクレオチドと部分的
置換を有する非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス変異株ヌクレオチ
ド。 - 【請求項６】請求項第１項ないし第５項記載の遺伝子ま
たはポリヌクレオチドにコードされるポリペプタイド。 - 【請求項７】配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポ
リペプタイドＰ−３０３３。 - 【請求項８】配列番号４記載のアミノ酸配列を有するポ
リペプタイドＰ−３０３３−２。 - 【請求項９】請求項第１項ないし第５項記載の遺伝子、
ポリヌクレオチド、ｃＤＮＡクローンの全部または一部
を宿主細胞に組込み発現させて得たポリペプタイド。 - 【請求項１０】請求項第６項ないし第９項記載のポリペ
プタイドに対するポリクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体。 - 【請求項１１】請求項第６項ないし第９項記載のポリペ
プタイドを用いた非Ａ非Ｂ型肝炎検出系。 - 【請求項１２】請求項第１０項記載の抗体を用いた非Ａ
非Ｂ型肝炎検出系。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP36044191A JPH06133778A (ja) | 1991-12-05 | 1991-12-05 | 非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系 |
| EP19920306952 EP0532167A3 (en) | 1991-08-09 | 1992-07-30 | Non-a, non-b hepatitis virus genome, polynucleotides, polypeptides, antigen, antibody and detection systems |
| US07/925,695 US5428145A (en) | 1991-08-09 | 1992-08-07 | Non-A, non-B, hepatitis virus genome, polynucleotides, polypeptides, antigen, antibody and detection systems |
| CA002075611A CA2075611A1 (en) | 1991-08-09 | 1992-08-07 | Non-a, non-b hepatitis virus genome, polynucleotides, polypeptides, antigen, antibody, and detection systems |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP36044191A JPH06133778A (ja) | 1991-12-05 | 1991-12-05 | 非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06133778A true JPH06133778A (ja) | 1994-05-17 |
Family
ID=18469416
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP36044191A Pending JPH06133778A (ja) | 1991-08-09 | 1991-12-05 | 非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06133778A (ja) |
-
1991
- 1991-12-05 JP JP36044191A patent/JPH06133778A/ja active Pending
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