JPH06107697A - ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 - Google Patents
ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用Info
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）のウィルス
合成を抑制するペプチドを提供する。 【構成】 ＨＩＶｇａｇタンパク質の選択されたペプチ
ドおよびその誘導体であって、２種類のペプチド配列Ｎ
ＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡ
の少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸より大き
くない。上記のペプチドは、ＨＩＶの感染を抑制するた
めの医薬として適している。
合成を抑制するペプチドを提供する。 【構成】 ＨＩＶｇａｇタンパク質の選択されたペプチ
ドおよびその誘導体であって、２種類のペプチド配列Ｎ
ＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡ
の少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸より大き
くない。上記のペプチドは、ＨＩＶの感染を抑制するた
めの医薬として適している。
Description
【０００１】本発明は、ウイルス合成を抑制するＨＩＶ
ｇａｇ（ヒト免疫不全ウィルスの群特異性抗原）配列の
選択されたペプチドに関する。ＨＩＶ複製を抑制するた
めの４１個の一連のペプチドの試験において、ｐ１７亜
膜（submembrane)タンパク質からのアミノ酸配列ＷＡＳ
ＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＮ
ＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱＩＬＧＱＬＱＰＳＬＱＴを有
する重複ペプチド４および５、およびｐ２４コアタンパ
ク質からのアミノ酸配列ＡＮＰＤＣＫＴＩＬＫＡＬＧＰ
ＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡＣＱ
ＧＶＧＧＰＧＨＫＡがＨＩＶの複製を抑制することが見
出だされた（重複領域はそれぞれの場合に下線で示して
いる）。上記のまたは少なくとも重複領域を含む類似の
型のペプチドはＨＩＶの感染を抑制するための医薬とし
て好適である。
ｇａｇ（ヒト免疫不全ウィルスの群特異性抗原）配列の
選択されたペプチドに関する。ＨＩＶ複製を抑制するた
めの４１個の一連のペプチドの試験において、ｐ１７亜
膜（submembrane)タンパク質からのアミノ酸配列ＷＡＳ
ＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＮ
ＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱＩＬＧＱＬＱＰＳＬＱＴを有
する重複ペプチド４および５、およびｐ２４コアタンパ
ク質からのアミノ酸配列ＡＮＰＤＣＫＴＩＬＫＡＬＧＰ
ＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡＣＱ
ＧＶＧＧＰＧＨＫＡがＨＩＶの複製を抑制することが見
出だされた（重複領域はそれぞれの場合に下線で示して
いる）。上記のまたは少なくとも重複領域を含む類似の
型のペプチドはＨＩＶの感染を抑制するための医薬とし
て好適である。
【０００２】ＨＩＶによって引き起こされる病気である
ＡＩＤＳは、治療上活性な物質および新規なワクチンの
開発における科学的研究に対する重大な挑戦である。考
え得る治療学的方法の全範囲に亙って研究は行われてい
るが、新規な好結果をもたらす治療の展望を約束する物
質は極めて僅かである。今日までのところ、市場で認め
られている抗−ＨＩＶ活性を有する唯一の物質は、ウェ
ルカム社製の活性成分ジドヴディン(zidovudine)を有す
るＲレトロヴィル(Retrovir)である。このヌクレオチド
類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）は、インビトロ
およびインビボでＨＩＶ特異的逆転写酵素を極めて効果
的に阻害するが、不利な特性を持たないものではない。
今日までのところ、ＡＺＴ治療に代わるものはない。
ＡＩＤＳは、治療上活性な物質および新規なワクチンの
開発における科学的研究に対する重大な挑戦である。考
え得る治療学的方法の全範囲に亙って研究は行われてい
るが、新規な好結果をもたらす治療の展望を約束する物
質は極めて僅かである。今日までのところ、市場で認め
られている抗−ＨＩＶ活性を有する唯一の物質は、ウェ
ルカム社製の活性成分ジドヴディン(zidovudine)を有す
るＲレトロヴィル(Retrovir)である。このヌクレオチド
類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）は、インビトロ
およびインビボでＨＩＶ特異的逆転写酵素を極めて効果
的に阻害するが、不利な特性を持たないものではない。
今日までのところ、ＡＺＴ治療に代わるものはない。
【０００３】ＨＩＶのウイルス構造およびウイルスの成
熟における各種のウイルス構造タンパク質によって果た
される役割の研究によって、ウイルス合成を効果的に阻
害する幾つかの方法を提供することが実現されており、
化学療法剤によるウイルスプロテアーゼの阻害は様々な
研究グループによって現在検討されている一例にすぎな
い。ｇａｇ配列はＨＩＶゲノムにおける高度に保存され
た領域の一つであるということから、これがウイルス複
製にとって極めて重要なタンパク質であることが示唆さ
れ、この示唆は異なるＨＩＶ単離物の間の配列の小さな
差異によって支持される（第１表（表１〜３）参照）。
ウイルス合成の工程はｇａｇタンパク質合成およびｇａ
ｇタンパク質の必要なミリストイル化（myristoylatio
n）によって開始される。引き続く組み立ては、感染し
た細胞の脂質膜上で起こる。ｇａｇタンパク質の並置に
よって細胞膜上に突起部が生じ、「粒子」または未成熟
ウイルスの脱離（発芽）が起こる。この工程は、ｇａｇ
遺伝子のみが細胞中に挿入されるときにも起こるという
ことは、ワクシニアまたはバキュロベクターにおける組
換えｇａｇ配列での検討によって示されている（カラコ
スタス(Karacostas)ら（1989) ワクシニアウイルス発現
ベクターによって産生されるヒト免疫不全ウイルス様粒
子、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86巻, 8965-8967 ；
ゲイセン(Gheysen) ら、（1989）組換えバキュロウイル
スに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体ｐｒｇａ
ｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、Cell, 59, 10
3-112 ）。他の出版物には、ｇａｇ配列内にプロセシン
グに重要な領域があることが示されている。プロセシン
グに関するいくつかの領域はｇａｇ配列内に特異的変異
を導入することによって同定されている（ゲットリンガ
ー(Goettlinger) ら（1990）ヒト免疫不全ウイルス１型
の形態形成および感染性におけるキャプシド前駆体プロ
セシングおよびミリストイル化の役割、Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 86巻, 5781-5785 ）。
熟における各種のウイルス構造タンパク質によって果た
される役割の研究によって、ウイルス合成を効果的に阻
害する幾つかの方法を提供することが実現されており、
化学療法剤によるウイルスプロテアーゼの阻害は様々な
研究グループによって現在検討されている一例にすぎな
い。ｇａｇ配列はＨＩＶゲノムにおける高度に保存され
た領域の一つであるということから、これがウイルス複
製にとって極めて重要なタンパク質であることが示唆さ
れ、この示唆は異なるＨＩＶ単離物の間の配列の小さな
差異によって支持される（第１表（表１〜３）参照）。
ウイルス合成の工程はｇａｇタンパク質合成およびｇａ
ｇタンパク質の必要なミリストイル化（myristoylatio
n）によって開始される。引き続く組み立ては、感染し
た細胞の脂質膜上で起こる。ｇａｇタンパク質の並置に
よって細胞膜上に突起部が生じ、「粒子」または未成熟
ウイルスの脱離（発芽）が起こる。この工程は、ｇａｇ
遺伝子のみが細胞中に挿入されるときにも起こるという
ことは、ワクシニアまたはバキュロベクターにおける組
換えｇａｇ配列での検討によって示されている（カラコ
スタス(Karacostas)ら（1989) ワクシニアウイルス発現
ベクターによって産生されるヒト免疫不全ウイルス様粒
子、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86巻, 8965-8967 ；
ゲイセン(Gheysen) ら、（1989）組換えバキュロウイル
スに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体ｐｒｇａ
ｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、Cell, 59, 10
3-112 ）。他の出版物には、ｇａｇ配列内にプロセシン
グに重要な領域があることが示されている。プロセシン
グに関するいくつかの領域はｇａｇ配列内に特異的変異
を導入することによって同定されている（ゲットリンガ
ー(Goettlinger) ら（1990）ヒト免疫不全ウイルス１型
の形態形成および感染性におけるキャプシド前駆体プロ
セシングおよびミリストイル化の役割、Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 86巻, 5781-5785 ）。
【０００４】しかしながら、ｇａｇ配列のある一定の領
域がＨＩＶによるウイルス合成を阻害するペプチドをコ
ードするという証拠はない。
域がＨＩＶによるウイルス合成を阻害するペプチドをコ
ードするという証拠はない。
【０００５】本発明の基礎となっている実験では、イン
ビトロ試験におけるウイルス合成でのＨＩＶ−１ｇａｇ
配列の４１種類の相互に重複している合成ペプチドの阻
害機能について検討した。これらのペプチドは２４個の
アミノ酸の長さであり、ラトナー(Ratner)らによって発
表された配列と同様に合成した（ＡＩＤＳウイルスＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列、Nature, 313,
277-284 (1985) ）。
ビトロ試験におけるウイルス合成でのＨＩＶ−１ｇａｇ
配列の４１種類の相互に重複している合成ペプチドの阻
害機能について検討した。これらのペプチドは２４個の
アミノ酸の長さであり、ラトナー(Ratner)らによって発
表された配列と同様に合成した（ＡＩＤＳウイルスＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列、Nature, 313,
277-284 (1985) ）。
【０００６】これらのペプチドを各種の濃度（２００〜
４０μｇ／ｍｌ）で新たに感染したジァーカット(jurka
t)細胞に加えた。感染は１００〜１０００ＴＣＩＤ50で
行った。感染は顕微鏡的評価および感染性ＨＩＶの含量
についての上澄液の検討によって分析した。この目的の
ため、細胞上澄液を不感染ジァーカット(jurkat)細胞に
加えた。２週間インキュベーションした後、このディテ
クター細胞培養物を顕微鏡下および逆転写酵素分析によ
ってＨＩＶについて検討した。これから、ウイルス合成
について阻害作用を行う２つのｇａｇ領域があることが
判った。これらの２種類の領域は、それぞれ２種類のペ
プチド、すなわちｐ１７内部に配置されている第一のペ
プチド（ペプチド４＋５）およびｐ２４内部に配置され
ている第二のペプチド（ペプチド２８＋２９）によって
表わされる。
４０μｇ／ｍｌ）で新たに感染したジァーカット(jurka
t)細胞に加えた。感染は１００〜１０００ＴＣＩＤ50で
行った。感染は顕微鏡的評価および感染性ＨＩＶの含量
についての上澄液の検討によって分析した。この目的の
ため、細胞上澄液を不感染ジァーカット(jurkat)細胞に
加えた。２週間インキュベーションした後、このディテ
クター細胞培養物を顕微鏡下および逆転写酵素分析によ
ってＨＩＶについて検討した。これから、ウイルス合成
について阻害作用を行う２つのｇａｇ領域があることが
判った。これらの２種類の領域は、それぞれ２種類のペ
プチド、すなわちｐ１７内部に配置されている第一のペ
プチド（ペプチド４＋５）およびｐ２４内部に配置され
ている第二のペプチド（ペプチド２８＋２９）によって
表わされる。
【０００７】第４表（表６）から明らかなように、ｐ２
４はこれらのペプチドで処理した後のＨＩＶに感染した
細胞中に検出されない。これらの細胞培養液の上澄液
は、コントロール培養物に感染することができる感染性
のＨＩＶを含まない。図１および２には、２つのディテ
クター細胞培養物の逆転写酵素（ＲＴ）活性が示されて
いる。４種類の選択されたペプチドは２００〜４０μｇ
／ｍｌの濃度でＨＩＶ合成を極めて効果的に阻害するこ
とができる（ＨＩＶ阻害の証明の詳細についての例を参
照されたい）。
４はこれらのペプチドで処理した後のＨＩＶに感染した
細胞中に検出されない。これらの細胞培養液の上澄液
は、コントロール培養物に感染することができる感染性
のＨＩＶを含まない。図１および２には、２つのディテ
クター細胞培養物の逆転写酵素（ＲＴ）活性が示されて
いる。４種類の選択されたペプチドは２００〜４０μｇ
／ｍｌの濃度でＨＩＶ合成を極めて効果的に阻害するこ
とができる（ＨＩＶ阻害の証明の詳細についての例を参
照されたい）。
【０００８】感染性ウイルスの様々な濃度の、実験の経
路に対する効果は比較的低く、主として測定されたＲＴ
活性の水準によって表わされる（実験１、図１；実験
２、図２を参照されたい）。様々な濃度の添加ペプチド
は阻害について重要な効果を持たず、これは、加えられ
たペプチドの濃度を効果に影響を与えることなく更に減
少させることができることを示している。第三の実験の
結果を図３に示す。ここに表わされている逆転写酵素活
性は、濃縮後に細胞培養液の上澄液について測定したと
ころ、ディテクター細胞培養液の２週間のインキュベー
ション後には５倍であった。これもまた、ＨＩＶ−１合
成についてのペプチド２，４，５，９，２８および２９
の強力な阻害作用を示している。ペプチド４，５，２８
および２９によるＨＩＶ−２合成の阻害も、極めて明ら
かである。しかしながら、この場合には、加えたペプチ
ドの阻害効果はこれより弱いようである。従って、ペプ
チド２および９では阻害されないが、２８では２００μ
ｇ／ｍｌの投与量のみでウイルスの合成を完全に阻害す
ることがでる。細胞毒性は、総ての４１種類の検討した
ペプチドの中でペプチド９についてのみ見出された。
路に対する効果は比較的低く、主として測定されたＲＴ
活性の水準によって表わされる（実験１、図１；実験
２、図２を参照されたい）。様々な濃度の添加ペプチド
は阻害について重要な効果を持たず、これは、加えられ
たペプチドの濃度を効果に影響を与えることなく更に減
少させることができることを示している。第三の実験の
結果を図３に示す。ここに表わされている逆転写酵素活
性は、濃縮後に細胞培養液の上澄液について測定したと
ころ、ディテクター細胞培養液の２週間のインキュベー
ション後には５倍であった。これもまた、ＨＩＶ−１合
成についてのペプチド２，４，５，９，２８および２９
の強力な阻害作用を示している。ペプチド４，５，２８
および２９によるＨＩＶ−２合成の阻害も、極めて明ら
かである。しかしながら、この場合には、加えたペプチ
ドの阻害効果はこれより弱いようである。従って、ペプ
チド２および９では阻害されないが、２８では２００μ
ｇ／ｍｌの投与量のみでウイルスの合成を完全に阻害す
ることがでる。細胞毒性は、総ての４１種類の検討した
ペプチドの中でペプチド９についてのみ見出された。
【０００９】したがって、本発明は、２種類のペプチド
配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭ
ＭＴＡの少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸よ
り大きくない、特に４０個のアミノ酸より大きくない、
具体的には３０個のアミノ酸より大きくない、好ましく
は２０個のアミノ酸より大きくないペプチドに関する。
特に好ましいペプチドはペプチド４，５，２８または２
９を含む。
配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭ
ＭＴＡの少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸よ
り大きくない、特に４０個のアミノ酸より大きくない、
具体的には３０個のアミノ酸より大きくない、好ましく
は２０個のアミノ酸より大きくないペプチドに関する。
特に好ましいペプチドはペプチド４，５，２８または２
９を含む。
【００１０】本発明の他の態様は２種類のペプチド配列
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含むペプチドであって、７個のア
ミノ酸まで、好ましくは４個のアミノ酸までＮおよび／
またはＣ末端で切り詰められているが６個のアミノ酸よ
り短い長さのものがないようにすることができるペプチ
ドに関する。また、ペプチドの互いのまたはキャリヤー
への結合を達成するために本発明によるペプチドを１個
またはそれ以上のアミノ酸、例えばシステインだけ伸ば
すことが有利なこともしばしばある。
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含むペプチドであって、７個のア
ミノ酸まで、好ましくは４個のアミノ酸までＮおよび／
またはＣ末端で切り詰められているが６個のアミノ酸よ
り短い長さのものがないようにすることができるペプチ
ドに関する。また、ペプチドの互いのまたはキャリヤー
への結合を達成するために本発明によるペプチドを１個
またはそれ以上のアミノ酸、例えばシステインだけ伸ば
すことが有利なこともしばしばある。
【００１１】本発明は、更に２種類のペプチド配列ＮＰ
ＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの
誘導体であって、当業者に既知の方法によって下記の置
換すなわちグルタミンによるアスパラギン、またはアス
パラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリンによる
プロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによるロイ
シン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリンによ
るトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セリンに
よるシステイン、リジンによるアルギニン、グリシンに
よるアラニンおよび／またはノルロイシンによるメチオ
ニン、の置換の１つまたはそれ以上を行うことができる
ものに関する。天然アミノ酸の変則的な（unnatural)ア
ミノ酸、例えばヒドロキシプロリンまたはノルロイシン
による置換が好ましい。これにより、この誘導体を開裂
する内生的プロテアーゼを防ぐことが可能になり、これ
により通常は半減期を増加させることになる。本発明に
よる２種類のペプチド配列よりも誘導体の溶解度を改良
しおよび／または吸収をより良くすることも可能であ
る。
ＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの
誘導体であって、当業者に既知の方法によって下記の置
換すなわちグルタミンによるアスパラギン、またはアス
パラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリンによる
プロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによるロイ
シン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリンによ
るトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セリンに
よるシステイン、リジンによるアルギニン、グリシンに
よるアラニンおよび／またはノルロイシンによるメチオ
ニン、の置換の１つまたはそれ以上を行うことができる
ものに関する。天然アミノ酸の変則的な（unnatural)ア
ミノ酸、例えばヒドロキシプロリンまたはノルロイシン
による置換が好ましい。これにより、この誘導体を開裂
する内生的プロテアーゼを防ぐことが可能になり、これ
により通常は半減期を増加させることになる。本発明に
よる２種類のペプチド配列よりも誘導体の溶解度を改良
しおよび／または吸収をより良くすることも可能であ
る。
【００１２】本発明は、更にタンパク質化学または遺伝
子操作による製造および本発明によるペプチドの医薬と
しての使用に関する。
子操作による製造および本発明によるペプチドの医薬と
しての使用に関する。
【００１３】本発明によるペプチドは、好ましくは例え
ばバラニ、ジー(BARANI,G.) およびメリーフィールド、
アール・ビー(MERRIFIELD, R.B.)著、「ペプチド、分
析、合成および生物学(The Peptides, Analysis, Synth
esis and Biology) 」２巻、アカデミック・プレス(Aca
demic Press) 1980 、エルハード・グロス(Erhard Gros
s)，ヨハネス・マイエンホーファー(Johannes Meienhof
er) 監修に記載されているタンパク質化学によって調製
される。
ばバラニ、ジー(BARANI,G.) およびメリーフィールド、
アール・ビー(MERRIFIELD, R.B.)著、「ペプチド、分
析、合成および生物学(The Peptides, Analysis, Synth
esis and Biology) 」２巻、アカデミック・プレス(Aca
demic Press) 1980 、エルハード・グロス(Erhard Gros
s)，ヨハネス・マイエンホーファー(Johannes Meienhof
er) 監修に記載されているタンパク質化学によって調製
される。
【００１４】本発明は、例において詳細に説明され特許
請求の範囲に含まれる。
請求の範囲に含まれる。
【００１５】
例１： 一般的原理 細胞：永久に生育するＴリンパ球（ジァーカット(jurka
t)またはＨ９細胞）をインヒドロ実験に用いた。用いた
培地は、１０％ＦＣＳ、２％ＮａＨＣＯ３（５％強
度）、１％ペニシリン／ストレプトアビジン溶液および
２ｍｇ／ｌポリブレンを含む通常のＲＰＭＩ１６４０で
あった。実験は９６−ウェルマイクロタイタープレート
（ヌンク(Nunc)）または２４−ウェルプレート（ヌンク
(Nunc)）で行った。
t)またはＨ９細胞）をインヒドロ実験に用いた。用いた
培地は、１０％ＦＣＳ、２％ＮａＨＣＯ３（５％強
度）、１％ペニシリン／ストレプトアビジン溶液および
２ｍｇ／ｌポリブレンを含む通常のＲＰＭＩ１６４０で
あった。実験は９６−ウェルマイクロタイタープレート
（ヌンク(Nunc)）または２４−ウェルプレート（ヌンク
(Nunc)）で行った。
【００１６】ウイルス：ＨＩＶ−１ウイルスＨＴＬＶ−
ＩＩＩＢ株およびＨＩＶ−２ＲＯＤ株を用いた。 ペプチド合成およびペプチド精製：ペプチドは、ラトナ
ー(Ratner)ら(1985)によって発表されたＨＩＶ−１配列
にしたがって自動合成装置（ミリゲン(Milligen)９０５
０、ミリゲン有限会社(Milligen GmbH) 、Eschborn、ド
イツ連邦共和国）中で、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（バッヒ
ェム株式会社(Bachem AG) 、ハイデルベルク、ドイツ連
邦共和国）を用いて調製した（アサートン(Atherton)ら
(1978)：固相ペプチド合成の温和な方法；フルオレニル
メチルオキシカルボニルアミノ酸の使用：J. Chem. So
c. Chem Commun. 13, 539-540）。それぞれの場合に用
いた支持体材料は、酸に安定なＡＭリンカーを有するＲ
テンタゲル(Tentagel)樹脂（ラップ−ポリメーレ(Rapp-
Polymere) 、チュービンゲン、ドイツ連邦共和国）であ
った。アミノ酸はそれぞれＤＭＦに溶解した後、結合さ
せ、ヒドロキシベンゾトリアゾール活性化エステルに変
換した。反応時間が１０分間の迅速合成サイクルを結合
のために用いた。次に、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン
で除去した。この反応は螢光測定法によって完了したこ
とをチェックした。
ＩＩＩＢ株およびＨＩＶ−２ＲＯＤ株を用いた。 ペプチド合成およびペプチド精製：ペプチドは、ラトナ
ー(Ratner)ら(1985)によって発表されたＨＩＶ−１配列
にしたがって自動合成装置（ミリゲン(Milligen)９０５
０、ミリゲン有限会社(Milligen GmbH) 、Eschborn、ド
イツ連邦共和国）中で、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（バッヒ
ェム株式会社(Bachem AG) 、ハイデルベルク、ドイツ連
邦共和国）を用いて調製した（アサートン(Atherton)ら
(1978)：固相ペプチド合成の温和な方法；フルオレニル
メチルオキシカルボニルアミノ酸の使用：J. Chem. So
c. Chem Commun. 13, 539-540）。それぞれの場合に用
いた支持体材料は、酸に安定なＡＭリンカーを有するＲ
テンタゲル(Tentagel)樹脂（ラップ−ポリメーレ(Rapp-
Polymere) 、チュービンゲン、ドイツ連邦共和国）であ
った。アミノ酸はそれぞれＤＭＦに溶解した後、結合さ
せ、ヒドロキシベンゾトリアゾール活性化エステルに変
換した。反応時間が１０分間の迅速合成サイクルを結合
のために用いた。次に、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン
で除去した。この反応は螢光測定法によって完了したこ
とをチェックした。
【００１８】合成を完了した後、保護されたペプチドを
有する樹脂を５０％ＴＦＡ／ＤＣＭに懸濁した。スカベ
ンジャーとして、１％アニソール、１％ｍ−クレゾー
ル、１％フェノールおよび、Ｔｒｐが特定の配列に存在
するときには、５％メルカプトエタノールを加えた。樹
脂に対する結合およびＴｒｔおよびｔＢＯＣ保護基は、
室温でアルゴン保護ガス下で４時間インキュベーション
して除去した。ＡｒｇからＭｔｒ保護基除去するため、
除去したペプチドを樹脂から分離し、溶媒をロータリー
エバポレーターで除去し、残りの固形物質を通常のスカ
ベンジャー（前記を参照されたい）を含む１００％で一
晩インキュベーションした。脱保護したペプチドは、溶
媒を除去した後、５０％酢酸に溶解し、大容積の氷冷ｔ
−ブチルエチルエーテルで沈澱させ、数回洗浄し、凍結
乾燥した。乾燥した粗製物質を、１．５％重炭酸アンモ
ニウムに吸収させた。不溶性成分を濾過によって除去し
た。濾液を再度乾燥させた。ペプチドを、通常はヘリウ
ムを通した０〜70％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡの
溶出グラディエントに用いる半調製用プロペプ(Propep)
逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃ２／Ｃ18コポリマー、ファルマ
シア／エル・ケイ・ビー(Pharmacia/LKB) 、フライブル
ク、ドイツ連邦共和国）上で精製した。精製したペプチ
ドの配列を気相シークエンサー（アプライド・バイオシ
ステムス(Applied Biosystems)、ヴェスターシュタッ
ト、ドイツ連邦共和国）でチェックした。用いたペプチ
ドは、第２表（表４）に示されるアミノ酸配列に対応す
る。前記のペプチドを遺伝子操作によって例えば原核−
または真核細胞系における好適な融合タンパク質として
調製することも勿論可能である。
有する樹脂を５０％ＴＦＡ／ＤＣＭに懸濁した。スカベ
ンジャーとして、１％アニソール、１％ｍ−クレゾー
ル、１％フェノールおよび、Ｔｒｐが特定の配列に存在
するときには、５％メルカプトエタノールを加えた。樹
脂に対する結合およびＴｒｔおよびｔＢＯＣ保護基は、
室温でアルゴン保護ガス下で４時間インキュベーション
して除去した。ＡｒｇからＭｔｒ保護基除去するため、
除去したペプチドを樹脂から分離し、溶媒をロータリー
エバポレーターで除去し、残りの固形物質を通常のスカ
ベンジャー（前記を参照されたい）を含む１００％で一
晩インキュベーションした。脱保護したペプチドは、溶
媒を除去した後、５０％酢酸に溶解し、大容積の氷冷ｔ
−ブチルエチルエーテルで沈澱させ、数回洗浄し、凍結
乾燥した。乾燥した粗製物質を、１．５％重炭酸アンモ
ニウムに吸収させた。不溶性成分を濾過によって除去し
た。濾液を再度乾燥させた。ペプチドを、通常はヘリウ
ムを通した０〜70％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡの
溶出グラディエントに用いる半調製用プロペプ(Propep)
逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃ２／Ｃ18コポリマー、ファルマ
シア／エル・ケイ・ビー(Pharmacia/LKB) 、フライブル
ク、ドイツ連邦共和国）上で精製した。精製したペプチ
ドの配列を気相シークエンサー（アプライド・バイオシ
ステムス(Applied Biosystems)、ヴェスターシュタッ
ト、ドイツ連邦共和国）でチェックした。用いたペプチ
ドは、第２表（表４）に示されるアミノ酸配列に対応す
る。前記のペプチドを遺伝子操作によって例えば原核−
または真核細胞系における好適な融合タンパク質として
調製することも勿論可能である。
【００１９】逆転者酵素分析：ウイルスの逆転写酵素を
検出するための微量分析は、グレガーセン(Gregersen)
らの方法によって行った（グレガーセン(Gregersen) ら
(1988)、細胞培養上澄液中のヒト免疫不全ウイルスおよ
び他のレトロウイルスの逆転写酵素微量分析による検
出、J. Virol. Methods 19, 161-168 ）。細胞培養上澄
液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。陽性のコント
ロール（ＶＣ）は未処理の感染細胞培養液の上澄液であ
り、陰性コントロール（ＮＣ）は未感染細胞からの細胞
培養上澄液であった。ＮＣについて測定した値を二倍に
して陰性細胞を除外する値として用いた。透明度を改良
するため、測定したＲＴ値を対数表記で示す（図１、
２、３を参照されたい）。
検出するための微量分析は、グレガーセン(Gregersen)
らの方法によって行った（グレガーセン(Gregersen) ら
(1988)、細胞培養上澄液中のヒト免疫不全ウイルスおよ
び他のレトロウイルスの逆転写酵素微量分析による検
出、J. Virol. Methods 19, 161-168 ）。細胞培養上澄
液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。陽性のコント
ロール（ＶＣ）は未処理の感染細胞培養液の上澄液であ
り、陰性コントロール（ＮＣ）は未感染細胞からの細胞
培養上澄液であった。ＮＣについて測定した値を二倍に
して陰性細胞を除外する値として用いた。透明度を改良
するため、測定したＲＴ値を対数表記で示す（図１、
２、３を参照されたい）。
【００２０】例２：ＨＩＶ合成の阻害の証明 実験の設計は、第３表（表５）に図式的に示す。それぞ
れの場合に、ＨＩＶ合成の阻害について２つの実験を総
ての４１種類の利用可能なペプチドを用いて行った。第
一の実験では、１×１０６ジャーカット細胞／ｍｌ ５
０μｌを９６ウェルプレートのそれぞれのウェルにピペ
ットで移し、それぞれを５０μｌ（１０００ＴＣＩ
Ｄ50）のＨＴＬＶ−ＩＩＩＢで感染させた。ｇａｇペプ
チド濃度を２００μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／ｍｌに調
整した。１週間後に上澄液１００μｌを採り、未だ含ま
れている細胞を遠心分離によって除去した。次いで、上
澄液８０μｌを未感染ジャーカット細胞培養物上に置い
た。ウイルス抗原が、ウェスターンブロット後の免疫標
識によって感染細胞中で検出された。このために、阻害
実験の後に残っている細胞を２×ＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料
緩衝液に吸収させ、１４％ＰＡＧで分別した。次に、分
別したタンパク質をニトロセルロース膜上にブロット
し、抗−ｐ２４ＨＩＶ−１単クローン性抗体とインキュ
ベーションしてウイルス性タンパク質を検出した。特異
的染色は、結合したアルカリホスファターゼで第二の抗
−マウス抗体によって行った。ペプチド処理細胞の上澄
液での感染性ＨＩＶを、逆転写酵素分析によって分析し
た。
れの場合に、ＨＩＶ合成の阻害について２つの実験を総
ての４１種類の利用可能なペプチドを用いて行った。第
一の実験では、１×１０６ジャーカット細胞／ｍｌ ５
０μｌを９６ウェルプレートのそれぞれのウェルにピペ
ットで移し、それぞれを５０μｌ（１０００ＴＣＩ
Ｄ50）のＨＴＬＶ−ＩＩＩＢで感染させた。ｇａｇペプ
チド濃度を２００μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／ｍｌに調
整した。１週間後に上澄液１００μｌを採り、未だ含ま
れている細胞を遠心分離によって除去した。次いで、上
澄液８０μｌを未感染ジャーカット細胞培養物上に置い
た。ウイルス抗原が、ウェスターンブロット後の免疫標
識によって感染細胞中で検出された。このために、阻害
実験の後に残っている細胞を２×ＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料
緩衝液に吸収させ、１４％ＰＡＧで分別した。次に、分
別したタンパク質をニトロセルロース膜上にブロット
し、抗−ｐ２４ＨＩＶ−１単クローン性抗体とインキュ
ベーションしてウイルス性タンパク質を検出した。特異
的染色は、結合したアルカリホスファターゼで第二の抗
−マウス抗体によって行った。ペプチド処理細胞の上澄
液での感染性ＨＩＶを、逆転写酵素分析によって分析し
た。
【００２１】第二の実験は、一層低濃度の感染性単位
（１００ＴＣＩＤ50）で第一の実験法と同様にして行っ
た。細胞培養上澄液中の感染性ウイルスおよび感染した
細胞培養物中のＨＩＶタンパク質の分析は、第一の実験
と同様にして行った。第三の実験法では、ＨＩＶ−１合
成で阻害効果を示す選択されたペプチド（２，４，５，
９，２８，２９）をＨＩＶ−２に対する阻害効果につい
てと同じ条件下で試験した。Ｈ９細胞を、この実験につ
いて１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−２で感染させた。感染の
分析は、２種類の先行実験と同様にして行った。
（１００ＴＣＩＤ50）で第一の実験法と同様にして行っ
た。細胞培養上澄液中の感染性ウイルスおよび感染した
細胞培養物中のＨＩＶタンパク質の分析は、第一の実験
と同様にして行った。第三の実験法では、ＨＩＶ−１合
成で阻害効果を示す選択されたペプチド（２，４，５，
９，２８，２９）をＨＩＶ−２に対する阻害効果につい
てと同じ条件下で試験した。Ｈ９細胞を、この実験につ
いて１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−２で感染させた。感染の
分析は、２種類の先行実験と同様にして行った。
【００２２】第一の２種類の実験では、ｇａｇ配列内部
の２つの領域であってそのそれぞれが２つの重複するペ
プチドによって表わされ、ＨＩＶ合成に阻害効果を示す
ものが同定された。ペプチド４および５はｐ１７タンパ
ク質配列内部に配置され、２８および２９はｐ２４タン
パク質配列内部に配置されている。
の２つの領域であってそのそれぞれが２つの重複するペ
プチドによって表わされ、ＨＩＶ合成に阻害効果を示す
ものが同定された。ペプチド４および５はｐ１７タンパ
ク質配列内部に配置され、２８および２９はｐ２４タン
パク質配列内部に配置されている。
【００２３】各種のＨＩＶｇａｇタンパク質配列を比較
している第１表（表１〜３）では、ペプチド４，５およ
び２８，２９によって表わされる領域は、箱印で表わし
ている。第２表（表４）には、４１種類の相互に重複す
る配列のアミノ酸配列が示されている。
している第１表（表１〜３）では、ペプチド４，５およ
び２８，２９によって表わされる領域は、箱印で表わし
ている。第２表（表４）には、４１種類の相互に重複す
る配列のアミノ酸配列が示されている。
【００２４】表の説明： 第１表（表１〜３）：各種ＨＩＶｇａｇタンパク質配列
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー(Ratner)
らによって発表された配列と同様にして合成した。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー(Ratner)
らによって発表された配列と同様にして合成した。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【図１】ｇａｇペプチドによるＨＩＶウイルス合成の阻
害（実験１）を示す説明図。１０００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ
−１を用いて、ジャーカット細胞に感染させた。ディテ
クター細胞培養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測
定した逆転写酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５
倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰
性コントロール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養
物を除外した。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対
数表記で記録されている。
害（実験１）を示す説明図。１０００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ
−１を用いて、ジャーカット細胞に感染させた。ディテ
クター細胞培養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測
定した逆転写酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５
倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰
性コントロール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養
物を除外した。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対
数表記で記録されている。
【図２】ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻害（実験
２）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１を用い
てジャーカット細胞を感染させた。ディテクター細胞培
養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写
酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮し
た。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰性コントロ
ール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養物を除外し
た。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対数表記で記
録されている。
２）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１を用い
てジャーカット細胞を感染させた。ディテクター細胞培
養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写
酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮し
た。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰性コントロ
ール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養物を除外し
た。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対数表記で記
録されている。
【図３】ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻害（実験
３）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１および
ＨＩＶ−２を用いてジャーカットおよびＨ９細胞をそれ
ぞれ感染させた。ディテクター細胞培養液からの細胞培
養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写酵素活性。上澄液
をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルス
コントロール；ＮＣ＝陰性コントロール。２度、ＮＣ値
を用いて、陰性細胞培養物を除外した。透明度を改良す
るため、ＲＴ値が図に対数表記で記録されている。
３）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１および
ＨＩＶ−２を用いてジャーカットおよびＨ９細胞をそれ
ぞれ感染させた。ディテクター細胞培養液からの細胞培
養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写酵素活性。上澄液
をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルス
コントロール；ＮＣ＝陰性コントロール。２度、ＮＣ値
を用いて、陰性細胞培養物を除外した。透明度を改良す
るため、ＲＴ値が図に対数表記で記録されている。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成４年３月１１日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２４】表の説明： 第１表（表１〜３）：各種ＨＩＶｇａｇタンパク質配列
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー（Ｒａｔ
ｎｅｒ）らによって発表された配列と同様にして合成し
た。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー（Ｒａｔ
ｎｅｒ）らによって発表された配列と同様にして合成し
た。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハンス、ボルフ ドイツ連邦共和国シュタルンベルク、ヨー ゼフ‐イエーゲルフーバー‐シュトラー セ、９
Claims (8)
- 【請求項１】２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥ
ＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なくとも一つを
含み且つ５０アミノ酸より大きくない、ＨＩＶの群特異
性抗原タンパク質のペプチド。 - 【請求項２】ペプチドＰ４、Ｐ５、Ｐ２８またはＰ２９
を含む、請求項１に記載のペプチド。 - 【請求項３】２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥ
ＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡがＮおよび／または
Ｃ末端の７個までのアミノ酸だけ切り詰められているが
それぞれ場合において６個のアミノ酸よりも短くはな
い、請求項１または２に記載のペプチド。 - 【請求項４】下記のアミノ酸交換：グルタミンによるア
スパラギン、またはアスパラギンによるグルタミン、ヒ
ドロキシプロリンによるプロリン、イソロイシンまたは
ノルロイシンによるロイシン、アスパラギン酸によるグ
ルタミン酸、セリンによるトレオニンまたはトレオニン
によるセリン、セリンによるシステイン、リジンによる
アルギニン、グリシンによるアラニンおよび／またはノ
ルロイシンによるメチオニン、の交換の一つもしくはそ
れ以上を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の
ペプチド。 - 【請求項５】医薬としての請求項１〜４の少なくとも１
項に記載のペプチド。 - 【請求項６】不活性な賦形剤と共に請求項１〜５の少な
くとも１項に記載の少なくとも１つのペプチドを含む治
療用組成物。 - 【請求項７】方法がタンパク質化学の方法である、請求
項１〜４の少なくとも１項に記載のペプチドの製造法。 - 【請求項８】ＡＩＤＳを抑制するための医薬の製造のた
めの、請求項１〜５の少なくとも１項に記載のペプチド
の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4039925A DE4039925A1 (de) | 1990-12-14 | 1990-12-14 | Ausgewaehlte peptide des gruppenspezifischen antigens (gag) von humanem immundefizienzvirus (hiv), ihre herstellung und verwendung |
| DE4039925.7 | 1990-12-14 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002269239A Division JP2003176299A (ja) | 1990-12-14 | 2002-09-13 | ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06107697A true JPH06107697A (ja) | 1994-04-19 |
| JP3369585B2 JP3369585B2 (ja) | 2003-01-20 |
Family
ID=6420301
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35235391A Expired - Lifetime JP3369585B2 (ja) | 1990-12-14 | 1991-12-13 | ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 |
| JP2002269239A Withdrawn JP2003176299A (ja) | 1990-12-14 | 2002-09-13 | ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002269239A Withdrawn JP2003176299A (ja) | 1990-12-14 | 2002-09-13 | ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5612453A (ja) |
| EP (2) | EP0732339B1 (ja) |
| JP (2) | JP3369585B2 (ja) |
| KR (1) | KR920012114A (ja) |
| AT (2) | ATE143974T1 (ja) |
| AU (1) | AU661464B2 (ja) |
| CA (1) | CA2057612C (ja) |
| DE (3) | DE4039925A1 (ja) |
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