JP2003176299A - ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用 - Google Patents
ヒト免疫不全ウイルスの群特異性抗原の選択されたペプチド、その調製および使用Info
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）のウィルス
合成を抑制するペプチドを提供する。 【解決手段】 Ｎおよび／またはＣ末端の７個までのア
ミノ酸だけ切り詰められているがそれぞれの場合におい
て６個のアミノ酸よりも短くはない２種類のペプチド配
列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きく
ない、ＨＩＶの複製を抑制するためのＨＩＶ ｇａｇタ
ンパク質のペプチドであって、ただし、該ペプチドは、
２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及び
ＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なくとも一つを含むＨＩＶ
ｇａｇタンパク質のペプチドではない、ペプチド。
合成を抑制するペプチドを提供する。 【解決手段】 Ｎおよび／またはＣ末端の７個までのア
ミノ酸だけ切り詰められているがそれぞれの場合におい
て６個のアミノ酸よりも短くはない２種類のペプチド配
列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きく
ない、ＨＩＶの複製を抑制するためのＨＩＶ ｇａｇタ
ンパク質のペプチドであって、ただし、該ペプチドは、
２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及び
ＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なくとも一つを含むＨＩＶ
ｇａｇタンパク質のペプチドではない、ペプチド。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ウイルス合成を抑
制するＨＩＶｇａｇ（ヒト免疫不全ウィルスの群特異性
抗原）配列の選択されたペプチドに関する。ＨＩＶ複製
を抑制するための４１個の一連のペプチドの試験におい
て、ｐ１７亜膜（submembrane)タンパク質からのアミノ
酸配列ＷＡＳＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣ
ＲＱおよびＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱＩＬＧＱＬＱＰ
ＳＬＱＴを有する重複ペプチド４および５、およびｐ２
４コアタンパク質からのアミノ酸配列ＡＮＰＤＣＫＴＩ
ＬＫＡＬＧＰＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡおよびＡＡＴＬＥＥ
ＭＭＴＡＣＱＧＶＧＧＰＧＨＫＡがＨＩＶの複製を抑制
することが見出だされた（重複領域はそれぞれの場合に
下線で示している）。上記のまたは少なくとも重複領域
を含む類似の型のペプチドはＨＩＶの感染を抑制するた
めの医薬として好適である。
制するＨＩＶｇａｇ（ヒト免疫不全ウィルスの群特異性
抗原）配列の選択されたペプチドに関する。ＨＩＶ複製
を抑制するための４１個の一連のペプチドの試験におい
て、ｐ１７亜膜（submembrane)タンパク質からのアミノ
酸配列ＷＡＳＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣ
ＲＱおよびＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱＩＬＧＱＬＱＰ
ＳＬＱＴを有する重複ペプチド４および５、およびｐ２
４コアタンパク質からのアミノ酸配列ＡＮＰＤＣＫＴＩ
ＬＫＡＬＧＰＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡおよびＡＡＴＬＥＥ
ＭＭＴＡＣＱＧＶＧＧＰＧＨＫＡがＨＩＶの複製を抑制
することが見出だされた（重複領域はそれぞれの場合に
下線で示している）。上記のまたは少なくとも重複領域
を含む類似の型のペプチドはＨＩＶの感染を抑制するた
めの医薬として好適である。
【０００２】
【従来の技術】ＨＩＶによって引き起こされる病気であ
るＡＩＤＳは、治療上活性な物質および新規なワクチン
の開発における科学的研究に対する重大な挑戦である。
考え得る治療学的方法の全範囲に亙って研究は行われて
いるが、新規な好結果をもたらす治療の展望を約束する
物質は極めて僅かである。今日までのところ、市場で認
められている抗−ＨＩＶ活性を有する唯一の物質は、ウ
ェルカム社製の活性成分ジドヴディン(zidovudine)を有
するＲレトロヴィル(Retrovir)である。このヌクレオチ
ド類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）は、インビト
ロおよびインビボでＨＩＶ特異的逆転写酵素を極めて効
果的に阻害するが、不利な特性を持たないものではな
い。今日までのところ、ＡＺＴ治療に代わるものはな
い。
るＡＩＤＳは、治療上活性な物質および新規なワクチン
の開発における科学的研究に対する重大な挑戦である。
考え得る治療学的方法の全範囲に亙って研究は行われて
いるが、新規な好結果をもたらす治療の展望を約束する
物質は極めて僅かである。今日までのところ、市場で認
められている抗−ＨＩＶ活性を有する唯一の物質は、ウ
ェルカム社製の活性成分ジドヴディン(zidovudine)を有
するＲレトロヴィル(Retrovir)である。このヌクレオチ
ド類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）は、インビト
ロおよびインビボでＨＩＶ特異的逆転写酵素を極めて効
果的に阻害するが、不利な特性を持たないものではな
い。今日までのところ、ＡＺＴ治療に代わるものはな
い。
【０００３】ＨＩＶのウイルス構造およびウイルスの成
熟における各種のウイルス構造タンパク質によって果た
される役割の研究によって、ウイルス合成を効果的に阻
害する幾つかの方法を提供することが実現されており、
化学療法剤によるウイルスプロテアーゼの阻害は様々な
研究グループによって現在検討されている一例にすぎな
い。ｇａｇ配列はＨＩＶゲノムにおける高度に保存され
た領域の一つであるということから、これがウイルス複
製にとって極めて重要なタンパク質であることが示唆さ
れ、この示唆は異なるＨＩＶ単離物の間の配列の小さな
差異によって支持される（第１表（表１〜３）参照）。
ウイルス合成の工程はｇａｇタンパク質合成およびｇａ
ｇタンパク質の必要なミリストイル化（myristoylatio
n）によって開始される。引き続く組み立ては、感染し
た細胞の脂質膜上で起こる。ｇａｇタンパク質の並置に
よって細胞膜上に突起部が生じ、「粒子」または未成熟
ウイルスの脱離（発芽）が起こる。この工程は、ｇａｇ
遺伝子のみが細胞中に挿入されるときにも起こるという
ことは、ワクシニアまたはバキュロベクターにおける組
換えｇａｇ配列での検討によって示されている（カラコ
スタス(Karacostas)ら（1989)ワクシニアウイルス発現
ベクターによって産生されるヒト免疫不全ウイルス様粒
子、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86巻,8965-8967 ；
ゲイセン(Gheysen) ら、（1989）組換えバキュロウイル
スに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体ｐｒｇａ
ｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、Cell,59, 103
-112 ）。他の出版物には、ｇａｇ配列内にプロセシン
グに重要な領域があることが示されている。プロセシン
グに関するいくつかの領域はｇａｇ配列内に特異的変異
を導入することによって同定されている（ゲットリンガ
ー(Goettlinger)ら（1990）ヒト免疫不全ウイルス１型
の形態形成および感染性におけるキャプシド前駆体プロ
セシングおよびミリストイル化の役割、Proc. Natl. Ac
ad.Sci. USA, 86巻,5781-5785 ）。
熟における各種のウイルス構造タンパク質によって果た
される役割の研究によって、ウイルス合成を効果的に阻
害する幾つかの方法を提供することが実現されており、
化学療法剤によるウイルスプロテアーゼの阻害は様々な
研究グループによって現在検討されている一例にすぎな
い。ｇａｇ配列はＨＩＶゲノムにおける高度に保存され
た領域の一つであるということから、これがウイルス複
製にとって極めて重要なタンパク質であることが示唆さ
れ、この示唆は異なるＨＩＶ単離物の間の配列の小さな
差異によって支持される（第１表（表１〜３）参照）。
ウイルス合成の工程はｇａｇタンパク質合成およびｇａ
ｇタンパク質の必要なミリストイル化（myristoylatio
n）によって開始される。引き続く組み立ては、感染し
た細胞の脂質膜上で起こる。ｇａｇタンパク質の並置に
よって細胞膜上に突起部が生じ、「粒子」または未成熟
ウイルスの脱離（発芽）が起こる。この工程は、ｇａｇ
遺伝子のみが細胞中に挿入されるときにも起こるという
ことは、ワクシニアまたはバキュロベクターにおける組
換えｇａｇ配列での検討によって示されている（カラコ
スタス(Karacostas)ら（1989)ワクシニアウイルス発現
ベクターによって産生されるヒト免疫不全ウイルス様粒
子、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86巻,8965-8967 ；
ゲイセン(Gheysen) ら、（1989）組換えバキュロウイル
スに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体ｐｒｇａ
ｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、Cell,59, 103
-112 ）。他の出版物には、ｇａｇ配列内にプロセシン
グに重要な領域があることが示されている。プロセシン
グに関するいくつかの領域はｇａｇ配列内に特異的変異
を導入することによって同定されている（ゲットリンガ
ー(Goettlinger)ら（1990）ヒト免疫不全ウイルス１型
の形態形成および感染性におけるキャプシド前駆体プロ
セシングおよびミリストイル化の役割、Proc. Natl. Ac
ad.Sci. USA, 86巻,5781-5785 ）。
【０００４】
【非特許文献１】カラコスタス(Karacostas)ら，ワクシ
ニアウイルス発現ベクターによって産生されるヒト免疫
不全ウイルス様粒子、「Proc.Natl. Acad. Sci. US
A」，（1989)， 86巻, ｐ．8965-8967
ニアウイルス発現ベクターによって産生されるヒト免疫
不全ウイルス様粒子、「Proc.Natl. Acad. Sci. US
A」，（1989)， 86巻, ｐ．8965-8967
【０００５】
【非特許文献２】ゲイセン(Gheysen)ら，組換えバキュ
ロウイルスに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体
ｐｒｇａｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、「Ce
ll」, （1989）， 59, ｐ．103-112
ロウイルスに感染した昆虫細胞からのＨＩＶ−１前駆体
ｐｒｇａｇ５５ウイルス様粒子の集合および放出、「Ce
ll」, （1989）， 59, ｐ．103-112
【０００６】
【非特許文献３】ゲットリンガー(Goettlinger)ら，ヒ
ト免疫不全ウイルス１型の形態形成および感染性におけ
るキャプシド前駆体プロセシングおよびミリストイル化
の役割，「Proc. Natl. Acad.Sci. USA」, （1990），8
6巻, ｐ．5781-5785
ト免疫不全ウイルス１型の形態形成および感染性におけ
るキャプシド前駆体プロセシングおよびミリストイル化
の役割，「Proc. Natl. Acad.Sci. USA」, （1990），8
6巻, ｐ．5781-5785
【０００７】
【非特許文献４】ラトナー(Ratner)ら，ＡＩＤＳウイル
スＨＴＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列，「Natu
re」,(1985)，313, 277-284
スＨＴＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列，「Natu
re」,(1985)，313, 277-284
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ｇａｇ
配列のある一定の領域がＨＩＶによるウイルス合成を阻
害するペプチドをコードするという証拠はない。
配列のある一定の領域がＨＩＶによるウイルス合成を阻
害するペプチドをコードするという証拠はない。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明のＨＩＶの群特異
性抗原タンパク質のペプチドは、２種類のペプチド配列
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡ
の少なくとも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きくな
いペプチドである。
性抗原タンパク質のペプチドは、２種類のペプチド配列
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡ
の少なくとも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きくな
いペプチドである。
【００１０】好ましい実施形態では、上記ペプチドは、
ペプチドＰ４、Ｐ５、Ｐ２８またはＰ２９を含む。
ペプチドＰ４、Ｐ５、Ｐ２８またはＰ２９を含む。
【００１１】他の実施形態では、上記ペプチドは、２種
類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡ
ＴＬＥＥＭＭＴＡがＮおよび／またはＣ末端の７個まで
のアミノ酸だけ切り詰められているがそれぞれ場合にお
いて６個のアミノ酸よりも短くはないペプチドである。
類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡ
ＴＬＥＥＭＭＴＡがＮおよび／またはＣ末端の７個まで
のアミノ酸だけ切り詰められているがそれぞれ場合にお
いて６個のアミノ酸よりも短くはないペプチドである。
【００１２】他の実施形態では、上記ペプチドは、下記
のアミノ酸交換：グルタミンによるアスパラギン、また
はアスパラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリン
によるプロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによ
るロイシン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリ
ンによるトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セ
リンによるシステイン、リジンによるアルギニン、グリ
シンによるアラニンおよび／またはノルロイシンによる
メチオニン、の交換の一つもしくはそれ以上を有するペ
プチドである。
のアミノ酸交換：グルタミンによるアスパラギン、また
はアスパラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリン
によるプロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによ
るロイシン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリ
ンによるトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セ
リンによるシステイン、リジンによるアルギニン、グリ
シンによるアラニンおよび／またはノルロイシンによる
メチオニン、の交換の一つもしくはそれ以上を有するペ
プチドである。
【００１３】好ましい実施形態では、上記ペプチドは、
医薬としてのペプチドである。
医薬としてのペプチドである。
【００１４】また本発明は、不活性な賦形剤と共に上記
のいずれかに記載の少なくとも１つのペプチドを含む治
療用組成物に関する。
のいずれかに記載の少なくとも１つのペプチドを含む治
療用組成物に関する。
【００１５】また本発明は、方法がタンパク質化学の方
法である、上記のいずれかに記載のペプチドの製造法に
関する。
法である、上記のいずれかに記載のペプチドの製造法に
関する。
【００１６】また本発明は、ＡＩＤＳを抑制するための
医薬の製造のための、上記のいずれかに記載のペプチド
の使用に関する。
医薬の製造のための、上記のいずれかに記載のペプチド
の使用に関する。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明の基礎となっている実験で
は、インビトロ試験におけるウイルス合成でのＨＩＶ−
１ｇａｇ配列の４１種類の相互に重複している合成ペプ
チドの阻害機能について検討した。これらのペプチドは
２４個のアミノ酸の長さであり、ラトナー(Ratner)らに
よって発表された配列と同様に合成した（ＡＩＤＳウイ
ルスＨＴＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列、Natu
re,313, 277-284 (1985) ）。
は、インビトロ試験におけるウイルス合成でのＨＩＶ−
１ｇａｇ配列の４１種類の相互に重複している合成ペプ
チドの阻害機能について検討した。これらのペプチドは
２４個のアミノ酸の長さであり、ラトナー(Ratner)らに
よって発表された配列と同様に合成した（ＡＩＤＳウイ
ルスＨＴＬＶ−ＩＩＩの完全なヌクレオチド配列、Natu
re,313, 277-284 (1985) ）。
【００１８】これらのペプチドを各種の濃度（２００〜
４０μｇ／ｍｌ）で新たに感染したジァーカット(jurka
t)細胞に加えた。感染は１００〜１０００ＴＣＩＤ50で
行った。感染は顕微鏡的評価および感染性ＨＩＶの含量
についての上澄液の検討によって分析した。この目的の
ため、細胞上澄液を不感染ジァーカット(jurkat)細胞に
加えた。２週間インキュベーションした後、このディテ
クター細胞培養物を顕微鏡下および逆転写酵素分析によ
ってＨＩＶについて検討した。これから、ウイルス合成
について阻害作用を行う２つのｇａｇ領域があることが
判った。これらの２種類の領域は、それぞれ２種類のペ
プチド、すなわちｐ１７内部に配置されている第一のペ
プチド（ペプチド４＋５）およびｐ２４内部に配置され
ている第二のペプチド（ペプチド２８＋２９）によって
表わされる。
４０μｇ／ｍｌ）で新たに感染したジァーカット(jurka
t)細胞に加えた。感染は１００〜１０００ＴＣＩＤ50で
行った。感染は顕微鏡的評価および感染性ＨＩＶの含量
についての上澄液の検討によって分析した。この目的の
ため、細胞上澄液を不感染ジァーカット(jurkat)細胞に
加えた。２週間インキュベーションした後、このディテ
クター細胞培養物を顕微鏡下および逆転写酵素分析によ
ってＨＩＶについて検討した。これから、ウイルス合成
について阻害作用を行う２つのｇａｇ領域があることが
判った。これらの２種類の領域は、それぞれ２種類のペ
プチド、すなわちｐ１７内部に配置されている第一のペ
プチド（ペプチド４＋５）およびｐ２４内部に配置され
ている第二のペプチド（ペプチド２８＋２９）によって
表わされる。
【００１９】第４表（表６）から明らかなように、ｐ２
４はこれらのペプチドで処理した後のＨＩＶに感染した
細胞中に検出されない。これらの細胞培養液の上澄液
は、コントロール培養物に感染することができる感染性
のＨＩＶを含まない。図１および２には、２つのディテ
クター細胞培養物の逆転写酵素（ＲＴ）活性が示されて
いる。４種類の選択されたペプチドは２００〜４０μｇ
／ｍｌの濃度でＨＩＶ合成を極めて効果的に阻害するこ
とができる（ＨＩＶ阻害の証明の詳細についての例を参
照されたい）。
４はこれらのペプチドで処理した後のＨＩＶに感染した
細胞中に検出されない。これらの細胞培養液の上澄液
は、コントロール培養物に感染することができる感染性
のＨＩＶを含まない。図１および２には、２つのディテ
クター細胞培養物の逆転写酵素（ＲＴ）活性が示されて
いる。４種類の選択されたペプチドは２００〜４０μｇ
／ｍｌの濃度でＨＩＶ合成を極めて効果的に阻害するこ
とができる（ＨＩＶ阻害の証明の詳細についての例を参
照されたい）。
【００２０】感染性ウイルスの様々な濃度の、実験の経
路に対する効果は比較的低く、主として測定されたＲＴ
活性の水準によって表わされる（実験１、図１；実験
２、図２を参照されたい）。様々な濃度の添加ペプチド
は阻害について重要な効果を持たず、これは、加えられ
たペプチドの濃度を効果に影響を与えることなく更に減
少させることができることを示している。第三の実験の
結果を図３に示す。ここに表わされている逆転写酵素活
性は、濃縮後に細胞培養液の上澄液について測定したと
ころ、ディテクター細胞培養液の２週間のインキュベー
ション後には５倍であった。これもまた、ＨＩＶ−１合
成についてのペプチド２，４，５，９，２８および２９
の強力な阻害作用を示している。ペプチド４，５，２８
および２９によるＨＩＶ−２合成の阻害も、極めて明ら
かである。しかしながら、この場合には、加えたペプチ
ドの阻害効果はこれより弱いようである。従って、ペプ
チド２および９では阻害されないが、２８では２００μ
ｇ／ｍｌの投与量のみでウイルスの合成を完全に阻害す
ることがでる。細胞毒性は、総ての４１種類の検討した
ペプチドの中でペプチド９についてのみ見出された。
路に対する効果は比較的低く、主として測定されたＲＴ
活性の水準によって表わされる（実験１、図１；実験
２、図２を参照されたい）。様々な濃度の添加ペプチド
は阻害について重要な効果を持たず、これは、加えられ
たペプチドの濃度を効果に影響を与えることなく更に減
少させることができることを示している。第三の実験の
結果を図３に示す。ここに表わされている逆転写酵素活
性は、濃縮後に細胞培養液の上澄液について測定したと
ころ、ディテクター細胞培養液の２週間のインキュベー
ション後には５倍であった。これもまた、ＨＩＶ−１合
成についてのペプチド２，４，５，９，２８および２９
の強力な阻害作用を示している。ペプチド４，５，２８
および２９によるＨＩＶ−２合成の阻害も、極めて明ら
かである。しかしながら、この場合には、加えたペプチ
ドの阻害効果はこれより弱いようである。従って、ペプ
チド２および９では阻害されないが、２８では２００μ
ｇ／ｍｌの投与量のみでウイルスの合成を完全に阻害す
ることがでる。細胞毒性は、総ての４１種類の検討した
ペプチドの中でペプチド９についてのみ見出された。
【００２１】したがって、本発明は、２種類のペプチド
配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭ
ＭＴＡの少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸よ
り大きくない、特に４０個のアミノ酸より大きくない、
具体的には３０個のアミノ酸より大きくない、好ましく
は２０個のアミノ酸より大きくないペプチドに関する。
特に好ましいペプチドはペプチド４，５，２８または２
９を含む。
配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭ
ＭＴＡの少なくとも一つを含み且つ５０個のアミノ酸よ
り大きくない、特に４０個のアミノ酸より大きくない、
具体的には３０個のアミノ酸より大きくない、好ましく
は２０個のアミノ酸より大きくないペプチドに関する。
特に好ましいペプチドはペプチド４，５，２８または２
９を含む。
【００２２】本発明の他の態様は２種類のペプチド配列
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含むペプチドであって、７個のア
ミノ酸まで、好ましくは４個のアミノ酸までＮおよび／
またはＣ末端で切り詰められているが６個のアミノ酸よ
り短い長さのものがないようにすることができるペプチ
ドに関する。また、ペプチドの互いのまたはキャリヤー
への結合を達成するために本発明によるペプチドを１個
またはそれ以上のアミノ酸、例えばシステインだけ伸ば
すことが有利なこともしばしばある。
ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含むペプチドであって、７個のア
ミノ酸まで、好ましくは４個のアミノ酸までＮおよび／
またはＣ末端で切り詰められているが６個のアミノ酸よ
り短い長さのものがないようにすることができるペプチ
ドに関する。また、ペプチドの互いのまたはキャリヤー
への結合を達成するために本発明によるペプチドを１個
またはそれ以上のアミノ酸、例えばシステインだけ伸ば
すことが有利なこともしばしばある。
【００２３】本発明は、更に２種類のペプチド配列ＮＰ
ＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの
誘導体であって、当業者に既知の方法によって下記の置
換すなわちグルタミンによるアスパラギン、またはアス
パラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリンによる
プロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによるロイ
シン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリンによ
るトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セリンに
よるシステイン、リジンによるアルギニン、グリシンに
よるアラニンおよび／またはノルロイシンによるメチオ
ニン、の置換の１つまたはそれ以上を行うことができる
ものに関する。天然アミノ酸の変則的な（unnatural)ア
ミノ酸、例えばヒドロキシプロリンまたはノルロイシン
による置換が好ましい。これにより、この誘導体を開裂
する内生的プロテアーゼを防ぐことが可能になり、これ
により通常は半減期を増加させることになる。本発明に
よる２種類のペプチド配列よりも誘導体の溶解度を改良
しおよび／または吸収をより良くすることも可能であ
る。
ＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱおよびＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの
誘導体であって、当業者に既知の方法によって下記の置
換すなわちグルタミンによるアスパラギン、またはアス
パラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリンによる
プロリン、イソロイシンまたはノルロイシンによるロイ
シン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セリンによ
るトレオニンまたはトレオニンによるセリン、セリンに
よるシステイン、リジンによるアルギニン、グリシンに
よるアラニンおよび／またはノルロイシンによるメチオ
ニン、の置換の１つまたはそれ以上を行うことができる
ものに関する。天然アミノ酸の変則的な（unnatural)ア
ミノ酸、例えばヒドロキシプロリンまたはノルロイシン
による置換が好ましい。これにより、この誘導体を開裂
する内生的プロテアーゼを防ぐことが可能になり、これ
により通常は半減期を増加させることになる。本発明に
よる２種類のペプチド配列よりも誘導体の溶解度を改良
しおよび／または吸収をより良くすることも可能であ
る。
【００２４】本発明は、更にタンパク質化学または遺伝
子操作による製造および本発明によるペプチドの医薬と
しての使用に関する。
子操作による製造および本発明によるペプチドの医薬と
しての使用に関する。
【００２５】本発明によるペプチドは、好ましくは例え
ばバラニ、ジー(BARANI,G.) およびメリーフィールド、
アール・ビー(MERRIFIELD, R.B.)著、「ペプチド、分
析、合成および生物学(ThePeptides, Analysis, Synthe
sis and Biology) 」２巻、アカデミック・プレス(Acad
emic Press) 1980 、エルハード・グロス(ErhardGros
s)，ヨハネス・マイエンホーファー(Johannes Meienhof
er) 監修に記載されているタンパク質化学によって調製
される。
ばバラニ、ジー(BARANI,G.) およびメリーフィールド、
アール・ビー(MERRIFIELD, R.B.)著、「ペプチド、分
析、合成および生物学(ThePeptides, Analysis, Synthe
sis and Biology) 」２巻、アカデミック・プレス(Acad
emic Press) 1980 、エルハード・グロス(ErhardGros
s)，ヨハネス・マイエンホーファー(Johannes Meienhof
er) 監修に記載されているタンパク質化学によって調製
される。
【００２６】本発明は、例において詳細に説明され特許
請求の範囲に含まれる。
請求の範囲に含まれる。
【００２７】
【実施例】例１：一般的原理
細胞：永久に生育するＴリンパ球（ジァーカット(jurka
t)またはＨ９細胞）をインヒドロ実験に用いた。用いた
培地は、１０％ＦＣＳ、２％ＮａＨＣＯ３（５％強
度）、１％ペニシリン／ストレプトアビジン溶液および
２ｍｇ／ｌポリブレンを含む通常のＲＰＭＩ１６４０で
あった。実験は９６−ウェルマイクロタイタープレート
（ヌンク(Nunc)）または２４−ウェルプレート（ヌンク
(Nunc)）で行った。
t)またはＨ９細胞）をインヒドロ実験に用いた。用いた
培地は、１０％ＦＣＳ、２％ＮａＨＣＯ３（５％強
度）、１％ペニシリン／ストレプトアビジン溶液および
２ｍｇ／ｌポリブレンを含む通常のＲＰＭＩ１６４０で
あった。実験は９６−ウェルマイクロタイタープレート
（ヌンク(Nunc)）または２４−ウェルプレート（ヌンク
(Nunc)）で行った。
【００２８】ウイルス：ＨＩＶ−１ウイルスＨＴＬＶ−
ＩＩＩＢ株およびＨＩＶ−２ＲＯＤ株を用いた。
ＩＩＩＢ株およびＨＩＶ−２ＲＯＤ株を用いた。
【００２９】ペプチド合成およびペプチド精製：ペプチ
ドは、ラトナー(Ratner)ら(1985)によって発表されたＨ
ＩＶ−１配列にしたがって自動合成装置（ミリゲン(Mil
ligen)９０５０、ミリゲン有限会社(MilligenGmbH) 、E
schborn、ドイツ連邦共和国）中で、Ｆｍｏｃ保護アミ
ノ酸（バッヒェム株式会社(Bachem AG) 、ハイデルベル
ク、ドイツ連邦共和国）を用いて調製した（アサートン
(Atherton)ら(1978)：固相ペプチド合成の温和な方法；
フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ酸の使用：
J.Chem. Soc. Chem Commun. 13, 539-540）。それぞれ
の場合に用いた支持体材料は、酸に安定なＡＭリンカー
を有するＲテンタゲル(Tentagel)樹脂（ラップ−ポリメ
ーレ(Rapp-Polymere)、チュービンゲン、ドイツ連邦共
和国）であった。アミノ酸はそれぞれＤＭＦに溶解した
後、結合させ、ヒドロキシベンゾトリアゾール活性化エ
ステルに変換した。反応時間が１０分間の迅速合成サイ
クルを結合のために用いた。次に、Ｆｍｏｃ基を２０％
ピペリジンで除去した。この反応は螢光測定法によって
完了したことをチェックした。
ドは、ラトナー(Ratner)ら(1985)によって発表されたＨ
ＩＶ−１配列にしたがって自動合成装置（ミリゲン(Mil
ligen)９０５０、ミリゲン有限会社(MilligenGmbH) 、E
schborn、ドイツ連邦共和国）中で、Ｆｍｏｃ保護アミ
ノ酸（バッヒェム株式会社(Bachem AG) 、ハイデルベル
ク、ドイツ連邦共和国）を用いて調製した（アサートン
(Atherton)ら(1978)：固相ペプチド合成の温和な方法；
フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ酸の使用：
J.Chem. Soc. Chem Commun. 13, 539-540）。それぞれ
の場合に用いた支持体材料は、酸に安定なＡＭリンカー
を有するＲテンタゲル(Tentagel)樹脂（ラップ−ポリメ
ーレ(Rapp-Polymere)、チュービンゲン、ドイツ連邦共
和国）であった。アミノ酸はそれぞれＤＭＦに溶解した
後、結合させ、ヒドロキシベンゾトリアゾール活性化エ
ステルに変換した。反応時間が１０分間の迅速合成サイ
クルを結合のために用いた。次に、Ｆｍｏｃ基を２０％
ピペリジンで除去した。この反応は螢光測定法によって
完了したことをチェックした。
【００３０】合成を完了した後、保護されたペプチドを
有する樹脂を５０％ＴＦＡ／ＤＣＭに懸濁した。スカベ
ンジャーとして、１％アニソール、１％ｍ−クレゾー
ル、１％フェノールおよび、Ｔｒｐが特定の配列に存在
するときには、５％メルカプトエタノールを加えた。樹
脂に対する結合およびＴｒｔおよびｔＢＯＣ保護基は、
室温でアルゴン保護ガス下で４時間インキュベーション
して除去した。ＡｒｇからＭｔｒ保護基除去するため、
除去したペプチドを樹脂から分離し、溶媒をロータリー
エバポレーターで除去し、残りの固形物質を通常のスカ
ベンジャー（前記を参照されたい）を含む１００％で一
晩インキュベーションした。脱保護したペプチドは、溶
媒を除去した後、５０％酢酸に溶解し、大容積の氷冷ｔ
−ブチルエチルエーテルで沈澱させ、数回洗浄し、凍結
乾燥した。乾燥した粗製物質を、１．５％重炭酸アンモ
ニウムに吸収させた。不溶性成分を濾過によって除去し
た。濾液を再度乾燥させた。ペプチドを、通常はヘリウ
ムを通した０〜70％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡの
溶出グラディエントに用いる半調製用プロペプ(Propep)
逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃ２／Ｃ18コポリマー、ファルマ
シア／エル・ケイ・ビー(Pharmacia/LKB)、フライブル
ク、ドイツ連邦共和国）上で精製した。精製したペプチ
ドの配列を気相シークエンサー（アプライド・バイオシ
ステムス(AppliedBiosystems)、ヴェスターシュタッ
ト、ドイツ連邦共和国）でチェックした。用いたペプチ
ドは、第２表（表４）に示されるアミノ酸配列に対応す
る。前記のペプチドを遺伝子操作によって例えば原核−
または真核細胞系における好適な融合タンパク質として
調製することも勿論可能である。
有する樹脂を５０％ＴＦＡ／ＤＣＭに懸濁した。スカベ
ンジャーとして、１％アニソール、１％ｍ−クレゾー
ル、１％フェノールおよび、Ｔｒｐが特定の配列に存在
するときには、５％メルカプトエタノールを加えた。樹
脂に対する結合およびＴｒｔおよびｔＢＯＣ保護基は、
室温でアルゴン保護ガス下で４時間インキュベーション
して除去した。ＡｒｇからＭｔｒ保護基除去するため、
除去したペプチドを樹脂から分離し、溶媒をロータリー
エバポレーターで除去し、残りの固形物質を通常のスカ
ベンジャー（前記を参照されたい）を含む１００％で一
晩インキュベーションした。脱保護したペプチドは、溶
媒を除去した後、５０％酢酸に溶解し、大容積の氷冷ｔ
−ブチルエチルエーテルで沈澱させ、数回洗浄し、凍結
乾燥した。乾燥した粗製物質を、１．５％重炭酸アンモ
ニウムに吸収させた。不溶性成分を濾過によって除去し
た。濾液を再度乾燥させた。ペプチドを、通常はヘリウ
ムを通した０〜70％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡの
溶出グラディエントに用いる半調製用プロペプ(Propep)
逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃ２／Ｃ18コポリマー、ファルマ
シア／エル・ケイ・ビー(Pharmacia/LKB)、フライブル
ク、ドイツ連邦共和国）上で精製した。精製したペプチ
ドの配列を気相シークエンサー（アプライド・バイオシ
ステムス(AppliedBiosystems)、ヴェスターシュタッ
ト、ドイツ連邦共和国）でチェックした。用いたペプチ
ドは、第２表（表４）に示されるアミノ酸配列に対応す
る。前記のペプチドを遺伝子操作によって例えば原核−
または真核細胞系における好適な融合タンパク質として
調製することも勿論可能である。
【００３１】逆転者酵素分析：ウイルスの逆転写酵素を
検出するための微量分析は、グレガーセン(Gregersen)
らの方法によって行った（グレガーセン(Gregersen) ら
(1988)、細胞培養上澄液中のヒト免疫不全ウイルスおよ
び他のレトロウイルスの逆転写酵素微量分析による検
出、J.Virol. Methods 19, 161-168 ）。細胞培養上澄
液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。陽性のコント
ロール（ＶＣ）は未処理の感染細胞培養液の上澄液であ
り、陰性コントロール（ＮＣ）は未感染細胞からの細胞
培養上澄液であった。ＮＣについて測定した値を二倍に
して陰性細胞を除外する値として用いた。透明度を改良
するため、測定したＲＴ値を対数表記で示す（図１、
２、３を参照されたい）。
検出するための微量分析は、グレガーセン(Gregersen)
らの方法によって行った（グレガーセン(Gregersen) ら
(1988)、細胞培養上澄液中のヒト免疫不全ウイルスおよ
び他のレトロウイルスの逆転写酵素微量分析による検
出、J.Virol. Methods 19, 161-168 ）。細胞培養上澄
液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。陽性のコント
ロール（ＶＣ）は未処理の感染細胞培養液の上澄液であ
り、陰性コントロール（ＮＣ）は未感染細胞からの細胞
培養上澄液であった。ＮＣについて測定した値を二倍に
して陰性細胞を除外する値として用いた。透明度を改良
するため、測定したＲＴ値を対数表記で示す（図１、
２、３を参照されたい）。
【００３２】例２：ＨＩＶ合成の阻害の証明
実験の設計は、第３表（表５）に図式的に示す。それぞ
れの場合に、ＨＩＶ合成の阻害について２つの実験を総
ての４１種類の利用可能なペプチドを用いて行った。
れの場合に、ＨＩＶ合成の阻害について２つの実験を総
ての４１種類の利用可能なペプチドを用いて行った。
【００３３】第一の実験では、１×１０６ジャーカット
細胞／ｍｌ５０μｌを９６ウェルプレートのそれぞれの
ウェルにピペットで移し、それぞれを５０μｌ（１００
０ＴＣＩＤ50）のＨＴＬＶ−ＩＩＩＢで感染させた。ｇ
ａｇペプチド濃度を２００μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／
ｍｌに調整した。１週間後に上澄液１００μｌを採り、
未だ含まれている細胞を遠心分離によって除去した。次
いで、上澄液８０μｌを未感染ジャーカット細胞培養物
上に置いた。ウイルス抗原が、ウェスターンブロット後
の免疫標識によって感染細胞中で検出された。このため
に、阻害実験の後に残っている細胞を２×ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ試料緩衝液に吸収させ、１４％ＰＡＧで分別した。
次に、分別したタンパク質をニトロセルロース膜上にブ
ロットし、抗−ｐ２４ＨＩＶ−１単クローン性抗体とイ
ンキュベーションしてウイルス性タンパク質を検出し
た。特異的染色は、結合したアルカリホスファターゼで
第二の抗−マウス抗体によって行った。ペプチド処理細
胞の上澄液での感染性ＨＩＶを、逆転写酵素分析によっ
て分析した。
細胞／ｍｌ５０μｌを９６ウェルプレートのそれぞれの
ウェルにピペットで移し、それぞれを５０μｌ（１００
０ＴＣＩＤ50）のＨＴＬＶ−ＩＩＩＢで感染させた。ｇ
ａｇペプチド濃度を２００μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／
ｍｌに調整した。１週間後に上澄液１００μｌを採り、
未だ含まれている細胞を遠心分離によって除去した。次
いで、上澄液８０μｌを未感染ジャーカット細胞培養物
上に置いた。ウイルス抗原が、ウェスターンブロット後
の免疫標識によって感染細胞中で検出された。このため
に、阻害実験の後に残っている細胞を２×ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ試料緩衝液に吸収させ、１４％ＰＡＧで分別した。
次に、分別したタンパク質をニトロセルロース膜上にブ
ロットし、抗−ｐ２４ＨＩＶ−１単クローン性抗体とイ
ンキュベーションしてウイルス性タンパク質を検出し
た。特異的染色は、結合したアルカリホスファターゼで
第二の抗−マウス抗体によって行った。ペプチド処理細
胞の上澄液での感染性ＨＩＶを、逆転写酵素分析によっ
て分析した。
【００３４】第二の実験は、一層低濃度の感染性単位
（１００ＴＣＩＤ50）で第一の実験法と同様にして行っ
た。細胞培養上澄液中の感染性ウイルスおよび感染した
細胞培養物中のＨＩＶタンパク質の分析は、第一の実験
と同様にして行った。第三の実験法では、ＨＩＶ−１合
成で阻害効果を示す選択されたペプチド（２，４，５，
９，２８，２９）をＨＩＶ−２に対する阻害効果につい
てと同じ条件下で試験した。Ｈ９細胞を、この実験につ
いて１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−２で感染させた。感染の
分析は、２種類の先行実験と同様にして行った。
（１００ＴＣＩＤ50）で第一の実験法と同様にして行っ
た。細胞培養上澄液中の感染性ウイルスおよび感染した
細胞培養物中のＨＩＶタンパク質の分析は、第一の実験
と同様にして行った。第三の実験法では、ＨＩＶ−１合
成で阻害効果を示す選択されたペプチド（２，４，５，
９，２８，２９）をＨＩＶ−２に対する阻害効果につい
てと同じ条件下で試験した。Ｈ９細胞を、この実験につ
いて１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−２で感染させた。感染の
分析は、２種類の先行実験と同様にして行った。
【００３５】第一の２種類の実験では、ｇａｇ配列内部
の２つの領域であってそのそれぞれが２つの重複するペ
プチドによって表わされ、ＨＩＶ合成に阻害効果を示す
ものが同定された。ペプチド４および５はｐ１７タンパ
ク質配列内部に配置され、２８および２９はｐ２４タン
パク質配列内部に配置されている。
の２つの領域であってそのそれぞれが２つの重複するペ
プチドによって表わされ、ＨＩＶ合成に阻害効果を示す
ものが同定された。ペプチド４および５はｐ１７タンパ
ク質配列内部に配置され、２８および２９はｐ２４タン
パク質配列内部に配置されている。
【００３６】各種のＨＩＶｇａｇタンパク質配列を比較
している第１表（表１〜３）では、ペプチド４，５およ
び２８，２９によって表わされる領域は、箱印で表わし
ている。第２表（表４）には、４１種類の相互に重複す
る配列のアミノ酸配列が示されている。
している第１表（表１〜３）では、ペプチド４，５およ
び２８，２９によって表わされる領域は、箱印で表わし
ている。第２表（表４）には、４１種類の相互に重複す
る配列のアミノ酸配列が示されている。
【００３７】表の説明：
第１表（表１〜３）：各種ＨＩＶｇａｇタンパク質配列
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー(Ratner)
らによって発表された配列と同様にして合成した。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
の比較。ペプチド４、５および２８、２９によって表わ
される領域は箱印を付けている。 第２表（表４）：４１種類の相互に重複する合成ｇａｇ
ペプチドのアミノ酸配列。ペプチドはラトナー(Ratner)
らによって発表された配列と同様にして合成した。 第３表（表５）：ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻
害を示すために行われ且つ計画された実験の図式的実験
設計。 第４表（表６）：ｇａｇペプチドでのＨＩＶ合成の阻
害。感染から２週間後にペプチド処理した後のＨＩＶに
感染した細胞のｐ２４検出の評価。最初のプレートから
の細胞を２×試料緩衝液と混合し、１４％ＰＡＧで分別
した。ニトロセルロース上でのブロッティングの後に、
特異的抗−ｐ２４ＭＡｂｓ．によりＨＩＶタンパク質を
検出した。−＝検出可能な反応なし、（＋）＝検出可能
な若干の反応、＋＝検出可能な良好な陽性反応、＋＋＝
検出可能な強力な反応。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
【表５】
【００４３】
【表６】
【図１】ｇａｇペプチドによるＨＩＶウイルス合成の阻
害（実験１）を示す説明図。１０００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ
−１を用いて、ジャーカット細胞に感染させた。ディテ
クター細胞培養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測
定した逆転写酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５
倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰
性コントロール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養
物を除外した。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対
数表記で記録されている。
害（実験１）を示す説明図。１０００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ
−１を用いて、ジャーカット細胞に感染させた。ディテ
クター細胞培養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測
定した逆転写酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５
倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰
性コントロール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養
物を除外した。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対
数表記で記録されている。
【図２】ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻害（実験
２）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１を用い
てジャーカット細胞を感染させた。ディテクター細胞培
養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写
酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮し
た。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰性コントロ
ール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養物を除外し
た。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対数表記で記
録されている。
２）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１を用い
てジャーカット細胞を感染させた。ディテクター細胞培
養液からの細胞培養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写
酵素活性。上澄液をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮し
た。ＶＣ＝ウイルスコントロール；ＮＣ＝陰性コントロ
ール。２度、ＮＣ値を用いて、陰性細胞培養物を除外し
た。透明度を改良するため、ＲＴ値が図に対数表記で記
録されている。
【図３】ｇａｇペプチドによるＨＩＶ合成の阻害（実験
３）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１および
ＨＩＶ−２を用いてジャーカットおよびＨ９細胞をそれ
ぞれ感染させた。ディテクター細胞培養液からの細胞培
養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写酵素活性。上澄液
をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルス
コントロール；ＮＣ＝陰性コントロール。２度、ＮＣ値
を用いて、陰性細胞培養物を除外した。透明度を改良す
るため、ＲＴ値が図に対数表記で記録されている。
３）を示す説明図。１００ＴＣＩＤ50ＨＩＶ−１および
ＨＩＶ−２を用いてジャーカットおよびＨ９細胞をそれ
ぞれ感染させた。ディテクター細胞培養液からの細胞培
養上澄液中のｃｐｍで測定した逆転写酵素活性。上澄液
をＰＥＧ沈澱によって５倍に濃縮した。ＶＣ＝ウイルス
コントロール；ＮＣ＝陰性コントロール。２度、ＮＣ値
を用いて、陰性細胞培養物を除外した。透明度を改良す
るため、ＲＴ値が図に対数表記で記録されている。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 シュザンネ、モドロブ
ドイツ連邦共和国ミュンヘン、71、ミノー
ルシュトラーセ、20アー
(72)発明者 ハンス、ボルフ
ドイツ連邦共和国シュタルンベルク、ヨー
ゼフ−イエーゲルフーバー−シュトラー
セ、９
Ｆターム(参考） 4C084 AA01 AA02 BA01 BA08 BA19
BA23 CA59 DC50 MA05 NA14
ZB332 ZC552
4H045 AA10 AA30 BA17 BA18 CA05
EA29 FA34 FA61 GA05 GA25
Claims (6)
- 【請求項１】 Ｎおよび／またはＣ末端の７個までのア
ミノ酸だけ切り詰められているがそれぞれの場合におい
て６個のアミノ酸よりも短くはない２種類のペプチド配
列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴ
Ａの少なくとも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きく
ない、ＨＩＶの複製を抑制するためのＨＩＶ ｇａｇタ
ンパク質のペプチドであって、 ただし、該ペプチドは、２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含むＨＩＶ ｇａｇタンパク質のペプチドで
はなく、そしてＧＰＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡＣＱＧでも、
ＫＴＩＬＫＡＬＧＰＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡＣＱＧＶＧで
も、ＤＣＫＴＩＬＫＡＬＧＰＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡＣで
も、ＮＷ(Ｎｌｅ)ＴＥＴＬＬＶＱＮＡＮＰＤＣＫＴＩＬ
ＫＡＬＧＰＡＡＴＬＥＥ(Ｎｌｅ)(Ｎｌｅ)ＴＡＣでも、
ＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＴＳＥＧＣＲＱＩＬＧＱ
ＬＱＰＳＬＱＴでもない、ペプチド。 - 【請求項２】 請求項１に記載のペプチドにおいて、下
記のアミノ酸置換：グルタミンによるアスパラギン、ま
たはアスパラギンによるグルタミン、ヒドロキシプロリ
ンによるプロリン、イソロイシンまたはノルロイシンに
よるロイシン、アスパラギン酸によるグルタミン酸、セ
リンによるトレオニンまたはトレオニンによるセリン、
セリンによるシステイン、リジンによるアルギニン、グ
リシンによるアラニンおよび／またはノルロイシンによ
るメチオニンの一つもしくはそれ以上を有する、ペプチ
ド。 - 【請求項３】 不活性な賦形剤と共にＨＩＶ ｇａｇタ
ンパク質の少なくとも一つのペプチドを含む、ＡＩＤＳ
を抑制するための治療用組成物であって、該ペプチド
が、Ｎおよび／またはＣ末端の７個までのアミノ酸だけ
切り詰められているがそれぞれの場合において６個のア
ミノ酸よりも短くはない２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きくないペプチ
ドであって、 ただし、該ペプチドは、２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含むＨＩＶ ｇａｇタンパク質のペプチドで
はない、組成物。 - 【請求項４】 ＨＩＶ ｇａｇタンパク質の少なくとも
一つのペプチドを含む、ＡＩＤＳを抑制するための医薬
の製造のための組成物であって、該ペプチドが、Ｎおよ
び／またはＣ末端の７個までのアミノ酸だけ切り詰めら
れているがそれぞれの場合において６個のアミノ酸より
も短くはない２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥ
ＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なくとも一つを
含み且つ５０アミノ酸より大きくないペプチドであっ
て、 ただし、該ペプチドは、２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含むＨＩＶ ｇａｇタンパク質のペプチドで
はない、組成物。 - 【請求項５】 不活性な賦形剤と共にＨＩＶ ｇａｇタ
ンパク質の少なくとも一つのペプチドを含む、ＡＩＤＳ
を抑制するための治療用組成物であって、該ペプチド
が、Ｎおよび／またはＣ末端の７個までのアミノ酸だけ
切り詰められているがそれぞれの場合において６個のア
ミノ酸よりも短くはない２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含み且つ５０アミノ酸より大きくないペプチ
ドであって、 ただし、該ペプチドは、２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含むＨＩＶ ｇａｇタンパク質のペプチドで
はなく、 ここで該ペプチドは、下記のアミノ酸置換：グルタミン
によるアスパラギン、またはアスパラギンによるグルタ
ミン、ヒドロキシプロリンによるプロリン、イソロイシ
ンまたはノルロイシンによるロイシン、アスパラギン酸
によるグルタミン酸、セリンによるトレオニンまたはト
レオニンによるセリン、セリンによるシステイン、リジ
ンによるアルギニン、グリシンによるアラニンおよび／
またはノルロイシンによるメチオニンの一つもしくはそ
れ以上を有する、組成物。 - 【請求項６】 ＨＩＶ ｇａｇタンパク質の少なくとも
一つのペプチドを含む、ＡＩＤＳを抑制するための医薬
の製造のための組成物であって、該ペプチドが、Ｎおよ
び／またはＣ末端の７個までのアミノ酸だけ切り詰めら
れているがそれぞれの場合において６個のアミノ酸より
も短くはない２種類のペプチド配列ＮＰＧＬＬＥＴＳＥ
ＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なくとも一つを
含み且つ５０アミノ酸より大きくないペプチドであっ
て、 ただし、該ペプチドは、２種類のペプチド配列ＮＰＧＬ
ＬＥＴＳＥＧＣＲＱ及びＡＡＴＬＥＥＭＭＴＡの少なく
とも一つを含むＨＩＶ ｇａｇタンパク質のペプチドで
はなく、 ここで該ペプチドは、下記のアミノ酸置換：グルタミン
によるアスパラギン、またはアスパラギンによるグルタ
ミン、ヒドロキシプロリンによるプロリン、イソロイシ
ンまたはノルロイシンによるロイシン、アスパラギン酸
によるグルタミン酸、セリンによるトレオニンまたはト
レオニンによるセリン、セリンによるシステイン、リジ
ンによるアルギニン、グリシンによるアラニンおよび／
またはノルロイシンによるメチオニンの一つもしくはそ
れ以上を有する、組成物。
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