JPH0578392A - 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 副作用がなく、少量で抗菌効果を有する抗菌
性ペプチド、抗菌剤、抗菌性ペプチド配合物、およびこ
の抗菌剤をもちいて物品を処理する方法を提供する。 【構成】 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys（こ
こでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ酸残
基、X7はL-アルギニン残基またはL-リジン残基をそれぞ
れ示す）のアミノ酸配列を含む抗菌性ペプチドまたはそ
の誘導体、これらを有効成分として少なくとも１μＭの
濃度で含有する抗菌剤、抗菌性ペプチド配合剤、抗菌剤
で物品を処理する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、新規な抗菌性ペプチ
ド、このペプチドを含有する抗菌剤、このペプチドを含
有する抗菌性ペプチド配合物、およびこの抗菌剤を用い
て物品を処理する方法に関するものである。さらに詳し
くは、この発明は、新規な抗菌性ペプチドまたはその誘
導体、このペプチド、またはこのペプチドの誘導体の塩
類、またはそれらの２以上の混合物を有効成分として含
有する抗菌剤、このペプチド、またはこのペプチドの誘
導体の塩類、またはそれらの２以上の混合物を有効成分
として含有する抗菌性ペプチド配合物、およびこの抗菌
剤で物品を処理する方法に関するものである。

【０００２】本明細書において、アミノ酸およびペプチ
ドはアイユーピーエーシー・アイユービー生化学命名委
員会（IUPAC-IUB CBN ）で採用された略記法に基づいて
表示され、例えば次の略号が使用される。 Ala−：Ｌ−アラニン残基 Gln−：Ｌ−グルタミン残基 Arg−：Ｌ−アルギニン残基 Glu−：Ｌ−グルタミン酸残基 Asn−：Ｌ−アスパラギン残基 Gly−：Ｌ−グリシン残基 Asp−：Ｌ−アスパラギン酸残基 His−：Ｌ−ヒスチジン残基 Cys−：Ｌ−システイン残基 Ile−：Ｌ−イソロイシン残基 Leu−：Ｌ−ロイシン残基 Ser−：Ｌ−セリン残基 Lys−：Ｌ−リジン残基 Thr−：Ｌ−スレオニン残基 Met−：Ｌ−メチオニン残基 Trp−：Ｌ−トリプトファン残基 Phe−：Ｌ−フェニルアラニン残基 Tyr−：Ｌ−チロシン残基 Pro−：Ｌ−プロリン残基 Val−：Ｌ−バリン残基

【０００３】

【従来の技術】従来より、種々の微生物に対して抗菌作
用を有するペプチドについては多数の発明が知られてい
る。例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性菌に有効な
ホスホノトリペプチド（特開昭57-106689 号公報）、ホ
スホノジペプチド誘導体（特開昭58-13594号公報）、環
状ペプチド誘導体（特開昭58-213744 号公報）、抗菌お
よび抗ウイルス作用を示すペプチド（特開昭59-51247号
公報）、酵母に有効なポリペプチド（特開昭60-130599
号公報）、グラム陽性菌に有効な糖ペプチド誘導体（特
開昭60-172998 号公報、特開昭61-251699 号公報、特開
昭63-44598号公報）、グラム陽性菌に有効なオリゴペプ
チド（特開昭62-22798号公報）、ペプチド系抗生物質
（特開昭62-51697号公報、特開昭63-17897号公報）、そ
の他北米産カブトガニの血球から抽出した抗菌性ペプチ
ド（特開平2-53799 号公報）、蜜蜂の血リンパから単離
した抗菌性ペプチド（特開平2-500084号公報）等が知ら
れている。

【０００４】一方、ラクトフェリン（以下ＬＦと記載す
る）は涙、唾液、末梢血、乳汁等に含まれている天然の
鉄結合性蛋白質であり、大腸菌、カンジダ菌、クロスト
リジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すこと
が知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス
（Journal of Pediatrics ）、第９４巻、第１ページ、
1979年］。しかしながら、ＬＦの加水分解物から単離さ
れ、特定のアミノ酸配列を有するペプチドの抗菌作用に
ついては、文献未記載であり、従来知られていない。更
に上記のアミノ酸配列を有するペプチドにおいて、抗菌
性を有する特定のアミノ酸配列については、全く知られ
ていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】この発明の発明者等
は、望ましくない副作用等（例えば抗原性等）がなく、
耐熱性があり、かつ強い抗菌作用を有する物質を自然界
から安価に単離することを企図し、チーズ製造時の副産
物であるホエーに着目し、この中に含まれているＬＦの
抗菌性について研究を行い、ＬＦを酸または酵素により
加水分解した分解物が未分解のＬＦよりも強い耐熱性お
よび抗菌性を有することを見出し、既に特許出願を行っ
た（特願平2-13315 号。以下先願１と記載する）。先願
１を出願後、本発明者等は、更にＬＦの加水分解物中に
存在する抗菌性物質の究明を行っていたが、特定のアミ
ノ酸配列を有する新規な抗菌性ペプチドを単離し、既に
特許出願を行った（特願平2-238364号。以下先願２と記
載する）しかしながら、このような新規な抗菌性ペプチ
ドについては、その抗菌性を有するアミノ酸配列の解明
が十分ではなかった。

【０００６】この発明は、以上の通りの事情に鑑みてな
されたものであり、従来技術および先願発明の課題を解
消し、ＬＦの加水分解物から単離または化学的に合成す
ることのできる特定の抗菌性アミノ酸配列を有する新規
な抗菌性ペプチドと、このペプチドを有効成分として含
有する抗菌剤、このペプチドを有効成分として含有する
抗菌性配合物、およびこのペプチドを有効成分として含
有する抗菌剤で物品を処理する方法を提供することを目
的としている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、少なくとも下記のアミノ酸配列
を含む抗菌性ペプチド、および少なくとも下記のアミノ
酸配列を含むペプチド、それらの薬理学的に許容される
塩類およびそれらの２以上の混合物からなる群より選択
される物質を有効成分として含有することを特徴とする
抗菌剤、この抗菌性ペプチドを有効成分として含有する
抗菌性ペプチド配合物、およびこのペプチドで物品を処
理する方法を提供する。 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys （ここでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ
酸残基、X7は、Ｌ−アルギニン残基またはＬ−リジン残
基、をそれぞれ示す）。

【０００８】またこの発明は、上記抗菌剤、および抗菌
性ペプチド配合物が、有効成分を少なくとも１マイクロ
モル（μＭ）の濃度で含有することを好ましい態様とし
てもいる。以下、この発明の構成および作用、効果につ
いて詳しく説明する。この発明の抗菌性ペプチドは、常
法により分離した牛ＬＦまたは市販のＬＦから酵素で加
水分解し、製造することもでき、常法により化学的に合
成することもできる。

【０００９】この発明の抗菌性ペプチドを化学的に合成
する例を示せば次のとおりである。ペプチド自動合成装
置（例えば、ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社
製。LKB Biolynx 4170）を用い、シェパード等［ジャー
ナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキンＩ
（Journal of Chemical Society Perkin Ｉ），第538
ページ、1981年］による固相ペプチド合成法に基づいて
合成する。アミン官能基を９−フルオレニルメトキシカ
ルボニル（Fmoc）基で保護したアミノ酸（以下Fmoc−ア
ミノ酸と略記する）に、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカ
ルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無水物を生成
させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用いる。ペプ
チド鎖を製造するためにＣ−末端のアミノ酸残基に相当
するFmoc−アミノ酸無水物を、そのカルボキシル基を介
し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウルトロシン
Ａ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製）
に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含むジメチ
ルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸のアミン官
能基の保護基を除去する。のち所望のペプチドのアミノ
酸配列のＣ−末端から２番目のアミノ酸残基に相当する
Fmoc−アミノ酸無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介
して樹脂に固定された１番目のアミノ酸の脱保護アミン
官能基にカップリングさせる。以下同様にして順次所望
のアミノ酸を固定する。全部のアミノ酸のカップリング
が終了し、所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成され
た後、溶媒［例えば、９４％（重量。以下特に断りのな
い限り同じ）トリフルオロ酢酸、５％フェノールおよび
１％エタンジオールからなる］でアセトアミドメチル以
外の保護基の除去およびペプチドの脱離を行い、高速液
体クロマトグラフ法によりペプチドを精製する。

【００１０】この発明の抗菌性ペプチドを酵素による加
水分解で製造する例を示せば次のとおりである。ＬＦを
０．５〜２０％、望ましくは５〜１５％の濃度で水、殺
菌水、精製水等に溶解し、酵素を添加し、加水分解を行
う。使用する酵素には特に制限はなく、市販品、例えば
モルシンＦ（商標。盛進製薬社製。至適pH２．５〜３．
０）、豚ペプシン（和光純薬社製。至適pH２〜３）、ス
ミチームＡＰ（商標。新日本化学社製。至適pH３．
０）、アマノＡ（商標。天野製薬社製。至適pH７．
０）、トリプシン（ノボ社製。至適pH８．０）等のエン
ドペプチダーゼを単独または任意に組合わせて使用する
ことができる。更にこれらの酵素に、例えば特公昭48-
43878 号公報記載の方法により得られる乳酸菌由来のエ
キソペプチダーゼ、ペプチダーゼを含有する市販の醤油
酵素（田辺製薬社製）を組合わせて使用することもでき
る。酵素の量は、基質に対して０．１〜５．０％の範囲
が望ましい。

【００１１】ＬＦ溶液のpHを使用する酵素の至適pH付近
に調整し、所定量の酵素を添加し、１５〜５５℃、望ま
しくは３０〜５０℃で３０〜６００分間、望ましくは６
０〜３００分間保持し、加水分解する。のち反応液をそ
のまままたは中和し、常法により酵素を失活させ、必要
に応じて中和し、脱色することもできる。以上のよにう
して得られたＬＦ加水分解物から通常のクロマトグラフ
法等により所望の抗菌性ペプチドを単離することができ
る。例えば、ＴＳＫゲルＯＤＳ１２０Ｔ（東ソー社製）
を用いた高速液体クロマトグラフ法では、アセトニトリ
ルのグラジエントで単離することができる。

【００１２】以上のようにして得た抗菌性ペプチド、そ
れらの薬理学的に許容される塩類、またはそれらの２種
以上の混合物を有効成分として少なくとも１マクロモ
ル、望ましくは５〜２０マイクロモル、の濃度で含有さ
せ、この発明の抗菌剤を得ることができる。この発明に
よる抗菌性ペプチドまたはその誘導体は、そのまま人ま
たは動物に投与することができ、あるいは食品、医薬品
（例えば、目薬、乳房炎治療剤、下痢予防剤、水虫薬
等）、医薬部外品（例えば、口中洗浄剤、制汗剤、養毛
剤等）、各種化粧品（例えば、整髪料等）、各種歯磨用
品（例えば、歯磨、歯ブラシ等）、各種生理用品、各種
ベビー用品（例えば、オムツ等）、各種高齢者用品（例
えば、入れ歯固定剤、オムツ等）、各種洗剤（例えば、
石鹸、薬用石鹸、シャンプー、リンス、洗濯用洗剤、キ
ッチン用洗剤、住宅用洗剤等）、各種除菌用品（例え
ば、キッチン用除菌ペーパー、トイレット用除菌ペーパ
ー等）、飼料、それらの原料となる素材、その他一般に
微生物の増殖の防止、抑制が望まれるあらゆる物品に添
加、配合、噴霧、付着、被覆、含浸等を行ってもよい。

【００１３】また、この発明による抗菌性ペプチドまた
はその誘導体は、各々単独または他の抗菌剤と併用して
食品、医薬品（例えば、目薬、乳房炎治療剤、下痢予防
剤、水虫薬等）、医薬部外品（例えば、口中洗浄剤、制
汗剤、養毛剤等）、各種化粧品（例えば、整髪料等）、
各種歯磨用品（例えば、歯磨、歯ブラシ等）、各種生理
用品、各種ベビー用品（例えば、オムツ等）、各種高齢
者用品（例えば、入れ歯固定剤、オムツ等）、各種洗剤
（例えば、石鹸、薬用石鹸、シャンプー、リンス、洗濯
用洗剤、キッチン用洗剤、住宅用洗剤等）、各種除菌用
品（例えば、キッチン用除菌ペーパー、トイレット用除
菌ペーパー等）、飼料、それらの原料となる素材、その
他一般に微生物の増殖の防止、抑制が望まれるあらゆる
物品の処理に用いることができる。

【００１４】次に試験例を示してこの発明をさらに詳し
く説明する。 （試験例１）この試験は、抗菌性ペプチドの抗菌活性を
調べるために行った。 （１）試料の調製 実施例１〜５と同一の方法により化学的に合成した試料
１〜５を用いた。

【００１５】（２）試験方法 1) 前培養液の調製 大腸菌（Escherichia coli）の保存スラントから１白金
耳を採取し、標準寒天培地（日水製薬社製）に塗抹して
３５℃で１６時間好気培養し、標準寒天培地の表面に生
育したコロニーを白金耳でかき取り、滅菌生理食塩水に
懸濁し、分光光度計（日立製作所製）で測定した濁度
（O. D. ; 660nm）を1.0 に調整し、前培養液を調製し
た。

【００１６】2) 基本培地の調製 バクトカジトン（ディフコ社製）を１％の濃度で精製水
に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウムでpHを7.0 に調整し、
115 ℃で１５分間滅菌し、基本培地（液体培地）を調製
した。 3) 試験培地および対照培地の調製 各試料を0.01％の濃度で精製水に溶解し、滅菌フィルタ
ー（アドバンテック社製）で除菌し、0.5 ，１，２，
５，１０，２０および100 マイクロモル（μＭ）の濃度
で基本培地に添加した試験培地および無添加の対照培地
を調製した。

【００１７】4) 抗菌性試験 上記試験培地および対照培地に上記前培養液を１％の濃
度で接種し、３５℃で１６時間好気培養し、培養液の濁
度を上記と同様の方法で測定し、次式から大腸菌の増殖
阻止率を算出した。 増殖阻止率（％）＝100 （１−Ａ／Ｂ） ［ここで、Ａは試験培養液の濁度差（培養１６時間後の
試験培養液の濁度と培養前の試験培養液の濁度との差）
を、Ｂは対照培地の濁度（培養１６時間後の対照培養液
の濁度と培養前の対照培養液の濁度との差）を、それぞ
れ示す。なお、増殖阻止率の百分率は重量によるもので
はない（以下同じ）。］ （３）試験結果 この試験の結果は、表１に示したとおりである。

【００１８】

【表１】

【００１９】この表１からも明らかなように、試料１〜
５は、いずれも１μＭで抗菌性が認められ、５〜２０μ
Ｍの範囲で強い抗菌性を示し、５０μＭ以上では濃度の
増加による抗菌性の増加は認められなかった。従って、
抗菌性を有する濃度は、少なくとも１μＭ、望ましくは
５〜２０μＭである。この量は、アミノベンジルペニシ
リンとほぼ同等の抗菌活性である。

【００２０】なお、上記試料１〜５以外のアミノ酸配列
を有するペプチド、それらの誘導体、およびそれらの塩
についても抗菌性を試験したが、ほぼ同様な結果が得ら
れた。 （試験例２）この試験は試験例１で使用した抗菌性ペプ
チドのアミノ酸配列を確認するために行った。

【００２１】試験例１で得た試料１〜５のペプチドを６
Ｎ塩酸で加水分解し、アミノ酸分析計を用いて常法によ
りアミノ酸組成を分析した。同一の試料を気相シークェ
ンサー（アプライド・バイオシステムズ社製）を用いて
エドマン分解を行い、１１個のアミノ酸残基の配列を決
定した。その結果、このペプチドは、１１個のアミノ酸
残基からなり、次のアミノ酸配列を有していた。

【００２２】 試料１：Lys-Thr-Arg-Arg-Trp-Gln-Trp-Arg-Met-Lys-Ly
s 試料２：Lys-Ser-Arg-Arg-Arg-Gln-Trp-Arg-Met-Lys-Ly
s 試料３：Lys-Thr-Val-Ser-Trp-Gln-Thr-Tyr-Met-Lys-Ly
s 試料４：Lys-Thr-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Ly
s 試料５：Lys-Thr-Leu-Arg-Trp-Gln-Asn-Glu-Met-Arg-Ly
s （試験例３）この試験は、この発明の抗菌性ペプチドの
抗菌スペクトルを調べるために行った。

【００２３】(1) 試料の調製 実施例１〜実施例５と同一の方法により抗菌性ペプチド
を調製し、使用前にフィルター（０．４５μｍマイレッ
クス・フィルター）で瀘過して除菌した。なお、これら
の試料をそれぞれ試料１〜試料５とした。 (2) 試験方法 表２に示した各種微生物の対数期の菌株を、０、1.5 、
３、６、12、25、50、および100 μM の割合で各試料を
含む１％バクトペプトン（ディフコ・ラボラトリー社
製）からなるペプトン培地に10６ /ml の割合で接種
し、その１６０μトンを９６穴マイクロタイタープレー
ト（ファルコン社製）を用いて37℃または30℃で17時間
培養した。各種微生物の各種試料および濃度における成
育状態を660nm の吸光度で測定し、各種微生物の成育を
完全に阻止した各種試料の最小濃度から最小増殖阻止濃
度（MIC;μM ）を決定した。

【００２４】尚、この試験に使用した各微生物はいずれ
も東京大学医科学研究所(IID) 、理化学研究所(JCM) 、
日本国際酪農連盟(IDF) から容易に入手できるものであ
り、MMI は出願人の研究所保存株である。 (3) 試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなように、抗菌性ペプチドは、グラム陰性細菌で
あるPseudomonas aeruginosa MMI 603（表２においてPA
と表示）、およびKlebsiella pneumoniae JCM 1662T
（表２においてKPと表示）に対して50μM 以下の濃度で
抗菌作用を示し、グラム陽性細菌であるListeria monoc
ytogenes IDF 1b （表２においてLMと表示）、およびSt
aphylococcus aureus JCM 2151（表２においてSAと表
示）に対して12μM 以下の低濃度で抗菌作用を示した。

【００２５】尚、この発明の他の抗菌性ペプチド、その
誘導体およびそれらの塩についてもほぼ同様の結果が得
られた。

【００２６】

【表２】

【００２７】（試験例４）この試験は、この発明の抗菌
剤による物品の処理効果を調べるために行った。市販の
一次加工野菜（いわゆるカット野菜）を、100gずつ２群
に分け、実施例６と同一の方法により製造した抗菌性ペ
プチド誘導体の20マイクロモル水溶液にそれぞれ30秒間
浸漬し、充分に水を切り、５℃で保存し、生菌数の変化
を常法により経時的に測定した。尚、対照として抗菌性
ペプチドを添加しない水道水に浸漬した試料ついても、
上記と同一の試験を行った。

【００２８】この試験の結果は、表３に示すとおりであ
る。表３から明らかなようにこの発明の抗菌性ペプチド
誘導体で処理した野菜は、顕著に細菌の増殖が抑制され
ていた。尚、その他の実施例と同一の方法で合成した抗
菌性ペプチド、その誘導体およびその塩についても、ほ
ぼ同様の結果が得られた。

【００２９】

【表３】

【００３０】（試験例５）この試験は、この発明の抗菌
性ペプチド誘導体の抗菌効果を調べるために行った。
(1) 試料の調製 実施例６と同一の方法により抗菌性ペプチド誘導体を調
製した。 (2) 試験方法 試験例３と同一の方法によった。ただし、Escherichia
coli MMI 0111 およびEscherichia coli IID 861を追加
した。また菌株の入手先は試験例３と同一である。 (3) 試験結果 各微生物に対する最小増殖阻止濃度（MIC;μM ）は、Es
cherichia coli MMI 0111 が６、Escherichia coli IID
861が３、Pseudomonas aeruginosa MMI 603が３、Kleb
siella pneumoniae JCM 1662T が12、Listeria monocyt
ogenes IDF 1bが1.5 、およびStaphylococcus aureus J
CM 2151が３であった。尚、その他の実施例と同一の方
法で合成した抗菌性ペプチド、その誘導体およびその塩
についても、ほぼ同様の結果が得られた。

【００３１】次に実施例を示してこの発明をさらに具体
的に説明するが、この発明は以下の実施例に限定される
ものではない。

【００３２】

【実施例】

実施例１ ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジー社製。LKB Biolynx 4170）を用い、シェパード
等［ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー・パ
ーキン Ｉ（Journal of Chemical Society Perkin
Ｉ）、第538ページ、1981年］による固相ペプチド合成
法に基づいて次のようにして合成した。

【００３３】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸に、Ｎ，Ｎ′−ジシク
ロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の
無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に
用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のリジン
残基に相当するFmoc−リジン無水物を、そのカルボキシ
ル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウル
トロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジ
ー社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含
むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸の
アミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列の
Ｃ−末端から２番目に相当するFmoc−リジン無水物を前
記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定されたリジ
ンの脱保護アミン官能基にカップリングさせた。以下同
様にして順次メチオニン、アルギニン、トリプトファ
ン、グルタミン、トリプトファン、アルギニン、アルギ
ニン、スレオニン、およびリジンを固定した。

【００３４】全部のアミノ酸のカップリングが終了し、
所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４
％トリフルオロ酢酸、５％フェノール、および１％エタ
ンジオールからなる溶媒でアセトアミドメチル以外の保
護基の除去およびペプチドの脱離を行い、高速液体クロ
マトグラフ法によりペプチドを精製した。この溶液を濃
縮し、乾燥し、ペプチド約１６mgを得た。 実施例２ Ｃ−末端から７および１０番目のアミノ酸残基をアルギ
ニン残基およびセリン残基に変更した以外は、実施例１
と同一の方法によりLys-Ser-Arg-Arg-Arg-Gln-Trp-Arg-
Met-Lys-Lys のアミノ酸配列を有するペプチド約２０mg
得た。 実施例３ Ｃ−末端から４，５，８，および９番目のアミノ酸残基
を、それぞれチロシン残基、スレオニン残基、セリン残
基、およびバリン残基に変更した以外は、実施例１と同
一の方法によりLys-Thr-Val-Ser-Trp-Gln-Thr-Tyr-Met-
Lys-Lys のアミノ酸配列を有するペプチド約１７mg得
た。 実施例４ Ｃ−末端から２，４，５，８，および９番目のアミノ酸
残基を、それぞれアルギニン残基、アスパラギン残基、
アルギニン残基、グルタミン残基、およびフェニルアラ
ニン残基に変更した以外は、実施例１と同一の方法によ
りLys-Thr-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys のア
ミノ酸配列を有するペプチド約１３mg得た。 実施例５ Ｃ−末端から２，４，５，および９番目のアミノ酸残基
の種類を、それぞれアルギニン残基、グルタミン酸残
基、アスパラギン残基、およびロイシン残基に変更した
以外は、実施例１と同一の方法によりLys-Thr-Leu-Arg-
Trp-Gln-Asn-Glu-Met-Arg-Lys のアミノ酸配列を有する
ペプチド約１６mg得た。 実施例６ ウルトロシンＢ樹脂（ファルマシアLKB 社製）を用いた
以外は、実施例１と同一の方法により順次アミノ酸残基
を固定した。全アミノ酸の結合が終了後、94%トリフル
オロ酢酸、5%フェノール、および1%エタンジチオールか
らなる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基を除去
し、飽和アンモニア／メタノール溶液でペプチドを離脱
し、高速液体クロマトクラフィーによりペプチドを精製
し、濃縮し、乾燥し、Lys-Thr-Arg-Arg-Trp-Gln-Trp-Ar
g-Met-Lys-Lys-NH2 のアミノ酸配列を有するペプチド約
15mgを得た。 実施例７ 次の配合のスキンクリームを製造した。

【００３５】 ステアリン酸 １５０ｇ セタノール ２０ｇ スクワラン ３０ｇ ミリスチン酸オクチルドデシル ５０ｇ グリセリン １００ｇ １，３−ブチレングリコールモノステアリン酸ボリオキシ エチレン（２０モル）ソルビタン ３０ｇ 実施例１の抗菌性ペプチド ４０ｍｇ 精製水 ５３０ｇ 実施例８ ブルーベリー果実４．５ｋｇ、砂糖４．５ｋｇ、ペクチ
ン０．０７ｋｇ、クエン酸０．０１ｋｇ、ショ糖脂肪酸
エステル（ＨＬＢ：１０）０．０１ｋｇ、および実施例
５と同一の方法で製造した抗菌性ペプチド４００ｍｇを
水１ｋｇと混合し、溶解し、かき取り式熱交換器を用い
て１０２℃で５分間殺菌し、８５℃に冷却し、カラス瓶
に１５０ｇずつ充填し、密封し、冷却し、ブルーベリー
ジャム（糖度：５０゜Ｂｘ）６０個を製造した。 実施例９ 次の配合の成豚用配合飼料１０ｋｇに実施例４と同一の
方法により製造した抗菌性ペプチド４００ｍｇを添加
し、均一に混合し、成豚用飼料を得た。

【００３６】 トウモロコシ ３４．７（％） マイロ ３０．０ 大豆油粕 ９．０ 魚粉 ５．０ ふすま １０．０ アルファルファミール ６．０ 糖蜜 ３．０ リン酸３カルシウム １．１ 炭酸カルシウム ０．４ 食塩 ０．４ ビタミン類混合物 ０．２ ミネラル類混合物 ０．２ 実施例１０ 次の配合の皮膚外用軟膏を製造した。

【００３７】 ワセリン ２５０ｇ パラフィン ５０ｇ セトステアリルアルコール ２０ｇ プロピレングリコール １００ｇ ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン グリコールエーテル ３０ｇ 実施例２の抗菌性ペプチド ４０ｍｇ 精製水 ５００ｇ 実施例１１ 次の配合の皮膚用クリーム状洗浄剤を製造した。

【００３８】 モノラウリルリン酸ナトリウム 35.5(%) モノセチルリン酸ナトリウム 10.0 塩化ナトリウム 7.0 ポリエチレングリコール（分子量8000） 5.0 ソルビトール 5.0 香料 0.7 実施例６の抗菌性ペプチド 0.002 実施例１２ リン燐酸緩衝液（pH 6.5）120 トンに市販のセルラーゼ
製剤セルラーゼ「アマノ」（天野製薬製。繊維素糖化力
15,000 単位/g。以下単位をu と記載する）105gを添加
し、40℃に加温しながらコンニャク粉（清水化学社製）
6.0kg を攪拌溶解し、40℃に16時間保持した後に、95℃
で10分間加熱して反応を停止させた。この反応液を6,00
0 ×g で連続遠心分離し、上澄液を陽イオン交換樹脂ダ
ウエックス50W ×8 （Ｈ＋型。ダウケミカル社製）1,50
0ml および陰イオン交換樹脂ダウエックス１×８（ＯＨ
− 型。ダウケミカル社製）6,000ml に順次通液して脱
塩し、濃縮し、噴霧乾燥し、中性多糖類分解物約4,200g
を得た。

【００３９】この中性多糖類分解物 3000g、塩化ナトリ
ウム（石津社製）57.91g、塩化カルシウム２水塩（石津
社製）2.57g 、塩化マグネシウム６水塩（国産化学社
製）1.53g 、乳酸ナトリウム（和光純薬工業社製）39.2
g 、アミノ酸混合物（味の素社製）50g および実施例３
と同一の方法で製造した抗菌性ペプチド0.4gを、水10ト
ンに溶解し、分画分子量13,000の限外瀘過膜ACL-1050
（旭化成工業社製）を用いて限外瀘過し、得られて透過
液を121 ℃で10分間滅菌し、無菌であり、かつ発熱物質
を含まない腹膜透析液約９トンを得た。

【００４０】

【発明の効果】以上詳しく説明した通り、この発明によ
って以下の効果が奏せられる。 （１） この発明の抗菌性ペプチドは、天然のＬＦおよ
びＬＦ加水分解物よりも顕著にすぐれた抗菌作用を有し
ている。 （２） この発明の抗菌性ペプチドは、少量で抗菌効果
を呈するので、食品等に使用した場合風味への影響がほ
とんどない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＺ 8314−4Ｃ // Ｃ０７Ｋ 99:00 8318−4Ｈ (72)発明者 山内 恒治 神奈川県鎌倉市玉縄４−２−２ ガーデン ハイツ鎌倉玉縄405 (72)発明者 若林 裕之 神奈川県横浜市旭区南希望ケ丘118 森永 希望ケ丘寮 (72)発明者 時田 由起子 神奈川県相模原市旭町３−６ フラツトス トーン相模201号

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも下記のアミノ酸配列を含むペ
   プチドまたその誘導体。 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys （ここでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ
   酸残基、X7は、L-アルギニン残基またはL-リジン残基、
   をそれぞれ示す）
2. 【請求項２】 少なくとも下記のアミノ酸配列を含むペ
   プチドまたはその誘導体、その薬理学的または食品学的
   に許容される塩類、及びそれらの２以上の混合物からな
   る群より選択される物質を有効成分として含有すること
   を特徴とする抗菌剤。 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys （ここでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ
   酸残基、X7は、L-アルギニン残基またはL-リジン残基、
   をそれぞれ示す）
3. 【請求項３】 有効成分が少なくとも１マイクロモル
   （μＭ）の濃度で含有されている請求項２の抗菌剤。
4. 【請求項４】 少なくとも下記のアミノ酸配列を含むペ
   プチドまたはその誘導体、その薬理学的または食品学的
   に許容される塩類、及びそれらの２以上の混合物からな
   る群より選択される物質を有効成分として含有すること
   を特徴とする抗菌性ペプチド配合物。 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys （ここでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ
   酸残基、X7は、L-アルギニン残基またはL-リジン残基、
   をそれぞれ示す）
5. 【請求項５】 少なくとも下記のアミノ酸配列を含むペ
   プチドまたはその誘導体、それらの薬理学的または食品
   学的に許容される塩類、及びそれらの２以上の混合物か
   らなる群より選択される物質を有効成分として含有する
   抗菌剤を用いて物品を処理する方法。 Lys-X1-X2-X3-X4-Gln-X5-X6-Met-X7-Lys （ここでX1〜X6は、システイン残基を除く任意のアミノ
   酸残基、X7は、L-アルギニン残基またはL-リジン残基、
   をそれぞれ示す）