JPH0577667B2

JPH0577667B2 -

Info

Publication number: JPH0577667B2
Application number: JP59184384A
Authority: JP
Inventors: Hamao Umezawa; Tomio Takeuchi; Takaaki Aoyanagi; Hironobu Iinuma; Keiji Ogawa; Makoto Moriguchi; Yoshihisa Umeda; Hiroyuki Kuroda; Teruya Nakamura; Akira Oohayashi
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1984-09-05
Filing date: 1984-09-05
Publication date: 1993-10-27
Also published as: DK403585A; GR852138B; ZA856775B; JPS6163661A; PT81086B; PT81086A; EP0175180A1; ES546669A0; DK403585D0; ES8700658A1; HUT40630A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明はアンジオテンシン変換酵素に対して酵
素阻害活性を示す新規なヒスタジン関連化合物に
関する。〔従来の技術〕ヒスタジン（Histargin）は本発明者でもある
梅沢らによつてストレブトミセス属に属するヒス
タジン生産菌ストレプトミセス・ロゼオビリデイ
ス（Streptomyces roseoviridis）MF118−A5
（微工研菌寄7043号）の培養液より単離された
化合物で、次の構造を有する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ヒスタジンは、α−アミノ酸であるヒスチジン
とアルギニンの各α−アミノ基がエチレン基を介
して結合した新しい型の化合物であるため、両ア
ミノ酸を種々のアミノ酸に変換した類縁体を検索
することによつて、より強い阻害活性を有する生
理活性物質を発見できる可能性がある。また、カ
ルボキシペプチダーゼＢやエンケフアリナーゼ以
外の種々のペプチダーゼに対し阻害活性を有する
化合物の検索にも適した化合物群である。本発明
の目的はそのような化合物群を提供することにあ
る。〔問題点を解決するための手段〕本発明は、下記一般式()で表わされるヒスタ
ジン関連化合物又はそれらの塩に関する。

【化】〔式中Ａは、α−アミノ酸（但し、アルギニン
及びヒスチジンを除く）又はその低級アルキルエ
ステルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた
残基を示し、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を
示す。〕本発明者らはヒスタジンの両アミノ酸を種々の
アミノ酸又はそのエステルに変換した化合物を
種々合成し、鋭意検討した結果、ヒスタジンのア
ルギニン部分を他のα−アミノ酸に変換した上記
一般式()で表わされる新規なヒスタジン関連化
合物がアンジオテンシン変換酵素に対して優れた
阻害活性を有することを見出し、本発明を完成す
るに至つた。本発明の化合物は降圧剤として使用
できるものである。更に本発明の化合物の一部は
カルボキシペプチダーゼＢ及び／又はカルボキシ
ペプチダーゼＡに対しても阻害活性を有し、これ
ら酵素に関連する生化学的研究において試薬とし
て利用することができる。本発明を更に詳しく説明すれば、上記一般式
（）中のＡはα−アミノ酸（但し、アルギニン及
びヒスタジンを除く）又はその低級アルキルエス
テルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた残
基（以下単にα−アミノ酸残基という）であり、
公知のα−アミノ酸から誘導される残基であれば
特に制限はない。また、α−アミノ酸残基におい
て光学活性炭素を有するもの、及び()式に含ま
れているヒスチジン部分は、Ｌ−、Ｄ−及びDL
−型のいずれでも使用することができる。具体的なα−アミノ酸を例示すると次の通りで
ある。グリシン、アラニン、α−アミノ酪酸、プ
ロリン、パリン、ノルパリン、イソロイシン、ア
ロイソロイシン、ロイシン、ノルロイシン、セリ
ン、ホモセリン、トレオニン、アロトレオニン、
Ｏ−メチルセリン、Ｏ−エチルセリン、Ｏ−メチ
ルホモセリン、Ｏ−エチルホモセリン、Ｏ−メチ
ルトレオニン、Ｏ−エチルトルオニン、Ｏ−メチ
ルアロトレオニン、Ｏ−エチルアロトレオニン、
オルニチン、リジン、アスパラギン酸、グルタミ
ン酸、アスパラギン、グルタミン、フエニルアラ
ニン、チロシン、トリプトフアン、システイン、
ホモシステイン、Ｓ−メチルシステイン、Ｓ−エ
チルシステイン、メチオニン、エチオニンなどが
挙げられる。ヒスタジン関連化合物は分子内塩又は薬学的に
許容される塩として取扱うこともできる。塩の例
としては、カルボキシル基における薬学的に許容
できる陽イオン、例えばナトリウムイオン、カリ
ウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイ
オンやイミノ基、イミダゾイル基、α−アミノ酸
の側鎖アミノ基における薬学的に許容できる無機
塩、有機塩塩等が挙げられる。ヒスタジン関連化合物の多くは後記の実施例に
示すごとく、合成の最終工程として、各種保護基
を除去し、ダウエツクス 50W（ダウ・ケミカル
社製）のようなイオン交換樹脂を用いて精製し、
非結晶性の化合物の場合は、凍結乾燥により白色
粉末として、結晶性の場合は、再結晶により無色
結晶として得ることができる。本発明において、上記一般式()で表わされる
化合物を便宜的に両アミノ酸の略号の間に−C₂
−と表記することとする。例えばHis−C₂−Phe
はヒスチジンとフエニルアラニンの各α−アミノ
基がエチレン基を介して結合している化合物を示
す。また、一般式()の化合物を合成するための
中間体となる保護されたヒスタジン関連化合物
も、保護基をもつアミノ酸の略号の間に−C₂−
と表記する。例えば、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Lys(Z)−OMeはN〓−ベンジルオキシカルボニル
−Ｌ−ヒスナジンとN〓−ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｌ−リジンメチルエステルの各α−アミノ
基がエチレン基を介して結合している化合物を示
す。本発明の代表的化合物と、参考化合物（化合物
番号１、1a、８、及び8a、以下各表において同
じ）との構造と略号及び分子式を第１表に示す。
第１表に掲げた代表的化合物の中で両アミノ酸が
Ｌ体である化合物の赤外線吸収スペクトル
（KBr錠として測定）及びプロトンNMRスペク
トル〔重水中２，２−ジメチル−２−シラペンタ
ン−５−スルホン酸ナトリウム（DSS）を基準物
質として測定〕を第２表に、比旋光度と融点を第
３表に示す。

【表】

【表】＊非結晶性粉末のため明確な融点を示さな
い。
本発明の化合物はいずれもアンジオテンシン変
換酵素に対して優れた阻害活性を有する。また本
発明の化合物の一部はカルボキシペプチダーゼＢ
及び／又はカルボキシペプチダーゼＡに対しても
阻害活性を示す。次に生理活性について試験例を挙げて説明す
る。カルボキシペプチダーゼＢに対する阻害活性カルボキシペプチダーゼＢに対する阻害活性の
測定は、M.ハヤカリ（M.HAYAKARI）等アナ
リテイカルバイオケミストリー（Analy−tical
Biochemistry）第84巻、第361〜369頁（1978）
記載のアンジオテンシン変換酵素活性測定法を改
良して行つた。すなわち、0.05Mのヒプリル−Ｌ−リジン（蛋
白質研究奨励会製）0.05mlに0.05Mトリス−塩酸
緩衝液（PH8.0）の0.25ml、検体を含む溶液の0.15
mlを加えた混合溶液を37℃、３分間加温した後、
豚膵臓より精製したカルボキシペプチダーゼＢ
（ベーリンガー・マンハイム社製）の1μg／mlと
牛アルブミン１mg／mlを含む水溶液を0.05ml加え
て、37℃、30分間反応させた。1N苛性ソーダの
0.03mlを加え反応を停止し、15分後に0.06Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH7.2）の２mlを加え、１
％塩化シアヌルのメチルセロソルブ溶液の２mlを
加え発色させ、室温に15分間放置後382nmにおけ
る吸光度(a)を測定した。同時に検体だけを除いて
同様に反応した時の対照の反応液の吸光度(b)を測
定した。なお、この時、それぞれに対応する盲検
の吸光度(a)′及び(b)′をも測定した。盲検は先に苛
性ソーダを加えてから酵素液を加え酵素反応を行
わずに発色させたものを用いた。そしてカルボキ
シペプチダーゼＢ阻害率を式：〔１−（ａ−a′）／
（ｂ−b′）〕×100により計算した。この定量法で、化合物番号1a（Ｌ−His−C₂−
Ｌ−His）、2a（Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe）、6a（Ｌ
−His−C₂−Ｌ−Orn）の化合物は、それぞれ
60μg／ml、64μg／ml、112μg／mlの濃度で50％阻
害を示した（後記第４表参照）。カルボキシペプチダーゼＡに対する阻害活性カルボキシペプチダーゼＡに対する阻害活性の
測定はT.タナカ（T.TANAKA）等ザジヤー
ナルオブアンチバイオチクス（The Journal
of Antibiotics）第37巻、第682〜684頁（1984）
記載の方法を用いて行つた。すなわち、0.01Mヒ
プリル−Ｌ−フエニルアラニン（シグマ社製）
0.05mlに0.9Mの食塩を含む0.05Mトリス−塩酸緩
衝液（PH7.5）0.25ml、検体を含む溶液0.15mlを加
えた混合溶液を37℃、３分間加温した後、牛膵臓
より精製されたカルボキシペプチダーゼＡ（シグ
マ社製）の希釈水溶液（同時に１mg／mlの濃度に
精製牛アルブミンを含む）を0.05ml加えて、37
℃、30分間反応させた。1N−苛性ソーダ0.03ml
を加え反応を停止し、15分後に0.06Mリン酸ナト
リウム緩衝液（PH7.2）２mlを加え、次いで１％
塩化シアヌルのメチルセロソルブ溶液２mlを加え
て発色させ、室温に15分放置後382nmにおける吸
光度(a)を測定した。同時に検体だけを除いて同様
に処理した対照の反応液の吸光度(b)を測定した。
なお、この時それぞれに対応する盲検の吸光度
(a)′及び(b)′をも測定した。盲検は先に苛性ソーダ
を加えてから酵素液を加え酵素反応を行わずに発
色させたものを用いた。そして、カルボキシペプ
チダーゼＡの阻害率を式：〔１−（ａ−a′）／（ｂ
−b′）〕×100により計算した。この定量法で、化合物番号2a（Ｌ−His−C₂−
Ｌ−Phe）の化合物は8.4μg／mlの濃度で50％阻
害を示した（第４表参照）。アンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性アンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性の
測定は、M.ハヤカリ等、アナリテイカルバイ
オケミストリー第84巻、第361〜369頁（1978年）
記載のアンジオテンシン変換酵素活性測定法を改
良して行つた。すなわち、食塩0.3Mを含むトリ
ス−塩酸緩衝液（0.5M、PH8.0）に基質ヒプリル
−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシンを５mg／mlの濃
度で溶解し、この溶液0.05mlに検体を含む溶液
0.40mlを加えた混合溶液を37℃、３分間加温した
後、牛肺臓より部分精製したアンジオテンシン変
換酵素溶液を0.05ml加えて、37℃、30分間反応さ
せた。1N苛性ソーダを0.03ml加えて反応を停止
し、15分後に0.06Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.2）を２ml加え、次いで１％塩化シアヌルのメ
チルセロソルブ溶液を２ml加えて発色させ、室温
に15分間放置後、382nmにおける吸光度(a)を測定
した。同時に検体を含まない混合溶液を同様に調
製し、同様に反応させた対照の吸光度(b)を測定し
た。なお、この時、それぞれに対応する盲検の吸
光度（a′）及び（b′）をも測定した。盲検は先に
苛性ソーダを加えてから酵素液を加え酵素反応を
行わずに発色させたものを用いた。そしてアンジ
オテンシン変換酵素阻害率を式：〔１−（ａ−
a′）／（ｂ−b′）〕×100により計算した。この定量法で、第２表に掲げた化合物番号1a
〜6aのいずれの化合物も低濃度で強い阻害活性
を示した（第４表参照）。特に化合物番号1a（Ｌ
−His−C₂−Ｌ−His）及び5a（Ｌ−His−C₂−Ｌ
−Asp）の化合物のIC₅₀（50％阻害濃度）はそれ
ぞれ0.7μg／ml、0.5μg／mlであり、最も阻害活性
の強い化合物であつた。

【表】急性毒性本発明の化合物はいずれも低毒性であり、医薬
として使用することができる。第５表に本発明の
化合物をマウスの腹腔内に投与した急性毒性試験
結果を示す。

【表】本発明のヒスタジン関連化合物は新規物質であ
り、以下その製造法について説明する。２つのα−アミノ酸の各α−アミノ基がエチレ
ン基を介して結合した型の化合物で、従来合成さ
れているものは、２つのα−アミノ酸が同一アミ
ノ酸に限られており、その合成法はα−アミノ酸
と１，２−ジブロモエタンを縮合させる方法であ
つた〔インオーガニツクケミストリー
（Inorganic Chemistry）第７巻、第2405頁
（1968年）参照〕。この場合でも、ヒスチジンを用
いて行われた例はない。本発明のヒスタジン関連化合物のように、異な
るα−アミノ酸を含む化合物を合成する場合、２
種のα−アミノ酸と、１，２−ジブロモエタンを
同一反応容器内で反応させると生成物が複雑にな
り、精製が困難となる。そこで段階的に合成する
方法が優れていることを見出した。すなわちヒスタジンに次式()：

【化】（式中Ｘはハロゲン原子を示し、R₁は低級ア
ルキル基を示す）で表わされる２−ハロゲノ−
１，１−ジアルコキシエタンを作用させ、次式
（）：

【化】（式中R₁は低級アルキル基を示す）で表わさ
れるN〓−（２，２−ジアルコキシエチル）ヒスチ
ジンとする。()式の化合物として具体的には、
市販品である２−ブロモアセトアルデヒドジエチ
ルアセタール、２−ブロモアセトアルデヒドジメ
チルアセタール、２−クロロアセトアルデヒドジ
エチルアセタール、２−クロロアセトアルデヒド
ジメチルアセタールなどが挙げられる。続いて()式に含まれるヒスチジン部分のα−
アミノ基を例えばベンジルオキシカルボニル基な
どのアミノ保護基で保護し、次にアルデヒド保護
基を酸処理により脱保護して次式()：

【化】（式中R₂はアミノ保護基を示す）で表わされ
るＮ−ホルミルメチル誘導体とする。()式の化
合物は次式(′)：

〔実施例〕

以下、本発明を実施例により更に具体的に説明
するが、本発明は、これら実施例に限定されるも
のではない。実施例１−１ N〓−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒス
チジンの合成Ｌ−ヒスタジン50.0ｇ（0.35モル）と炭酸カリ
ウム（無水）44.5ｇをエタノール500mlと水500ml
の混液に溶かし、ブロモアセトアルデヒドジエチ
ルアセタール63.5ｇ（0.32モル）を加え、１日煮
沸還流した。冷却後、水１中に希釈し、PHを
6.8に調整し、エタノールを減圧で留去した。折
出する未反応のＬ−ヒスチジンを去し、水層を
酢酸エチルで２回洗浄後、水層を500mlまで減圧
濃縮した。塩化ナトリウム（以下NaCl）29.2ｇ
を加え、0.5M NaCl溶液とし、あらかじめ0.5M
NaClで調整したダイヤイオン HP−20（三菱化
成社製）２のカラムにかけた。0.5M NaCl6
、水15、20％メタノール７で溶出し、目的
物を含むフラクシヨンを集めて、減圧乾固し、残
留固体にエタノール150mlを加えて不溶のNaClを
去した。この操作を２回繰返し、得られた液
にエチルエーテルを加えて結晶化し、N〓−（２，
２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジンを31.8
ｇ得た。収率36.3％mp160〜162℃。〔α〕²⁵ _D−27.4゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝2970，2870，1645，
1580，1570，1450，1380，1300，1125，1090，
1065，845，800，630，550，480。NMR（重メタ
ノール）δ＝1.20（ｔ，CH₃×２，Ｔ＝７Hz），3.0
〜3.5（ｍ，CH₂×２），3.5〜4.0（ｍ，5H），4.79
（ｔ，CH，Ｔ＝５Hz），6.98（ｓ，CH），7.62（ｓ，
CH）。実施例１−２ N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（２，２
−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジンの合成 N〓−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒス
チジン19.5ｇ（71.7ミリモル）を1N−NaOH71.7
mlに溶かし、氷冷下激しくかくはんしながら、ベ
ンジルオキシカルボニルクロライド22.6mlを５回
に分けて、10分間隔に加えた。この間、反応液の
PHを2N−NaOHで9.0〜10.0に調整し、試薬を添
加後２時間かくはんした。酢酸エチル（150ml）
で３回抽出し、合せた酢酸エチル層を1N−HCl、
飽和食塩水で各２回洗浄後無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。溶媒を留去して得たN〓，N^im−ジベン
ジルオキシカルボニル−N〓−（２，２−ジエトキ
シエチル）−Ｌ−ヒスチジン40.1ｇを無水メタノ
ール250mlに溶かし、28％ナトリウムメチラート
メタノール溶液27.7mlを加え、室温で2.5時間か
くはんした。反応液を水250ml中に希釈し、PH7.0
に調整後、メタノールを減圧で留去して得た水層
を酢酸エチルで２回洗浄した。水層を減圧乾固
し、残留物に少量のメタノールを加えて不溶の
NaClを去した。この操作を２回繰返し、得ら
れた液を減圧濃縮し、シロツプ状のN〓−ベン
ジルオキシカルボニル−N〓−（２，２−ジエトキ
シエチル）−Ｌ−ヒスチジンを26.0ｇ得た。収率
89.3％。〔α〕²⁵ _D−58.9゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝3380，2960，1680，
1600，1460，1450，1390，1340，1250，1125，
1050，1000，810，760，690。NMR（重メタノー
ル）δ＝1.05（ｔ，CH₃×２，Ｔ＝６Hz），3.0〜
4.0（ｍ，9H），4.5（ｍ，1H），5.10（ｓ，CH₂），
6.70（ｓ，CH），7.32（ｓ，5H），7.60（ｓ，CH）。実施例１−３ N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジンの合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（２，２
−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジン25.9ｇ
（63.9ミリモル）をエタノール60mlと水140mlの混
液に溶かし、1N−HClを加え、室温で４時間か
くはんした。反応後、PHを7.0に調整し、エタノ
ールを減圧で留去した。水層をダイヤイオン
HP−20の４のカラムにかけ、水４で洗浄
後、25％メタノールで溶出した。目的物を含むフ
ラクシヨンを集めて減圧濃縮し、N〓−ベンジル
オキシカルボニル−N〓−（ホルミルメチル）−Ｌ
−ヒスチジンを淡黄色粉末として15.1ｇ得た。収
率71.5％。〔α〕²⁵ _D−13.1゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝3450，2950，1700，
1600，1420，1370，1310，1260，1220，1190，
1130，1110，990，825，785，740，705，670。
NMR（重メタノール）δ＝3.1〜3.4（2H），3.9〜
4.2（ｍ，2H），4.3〜4.7（ｍ，1H），5.09（ｓ，
CH₂），5.6〜5.9（ｍ，1H），6.70（ｓ，1H），7.28
及び7.32（各ｓ，5H），7.65（ｓ，1H）実施例１−４（参考例１）Ｌ−His−C₂−Ｌ−His（化合物番号1a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン1.72ｇ（5.2ミリモ
ル）のメタノール（20ml）溶液に、Ｌ−ヒスチジ
ンメチルエステル二塩酸塩2.52ｇ（10.4ミリモ
ル）を水10mlに溶かし、PHを6.7に調整した溶液
を加え、氷冷下かくはんしながら水素化シアノホ
ウ素ナトリウム327mg（5.2ミリモル）を少しずつ
添加した。添加後、室温で４時間かくはんした
後、反応液を減圧濃縮し、得られた残留物を水10
mlに溶かし、ダイヤイオン HP−20の500mlの
カラムにかけた。水1.5で洗浄後、25％メタノール３、50％
メタノール３で溶出し、目的物を含むフラクシ
ヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ
−His−OMeを2.29ｇ得た。NMRスペクトル
（重メタノール）においてδ3.69（ｓ，CH₃），5.03
（ｓ，CH₂），7.28（ｓ，5H）に特徴的なシグナル
を示す。これをメタノール40mlに溶かし、1N−
NaOH 13mlを加え、室温で3.5時間かくはんし
た。反応後PHを6.8に調整し、メタノールを減圧
で留去して得た水層を、ダイヤイオン HP−20
の350mlのカラムにかけ、水１で洗浄後、25％
メタノールで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Hisを1.12ｇ得た（全収率45.8％）。NMRスペク
トル（重メタノール）でδ2.6〜3.5（ｍ，CH₂×
４），4.2〜4.6（ｍ，CH×２），5.00（ｓ，CH₂），
6.56（ｓ，CH），6.80（ｓ，CH），7.23（ｓ，5H），
7.45（ｓ，CH×２）にシグナルを示す。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−His 465mgをエタノー
ル５mlと水５mlの混液に溶かし、1N−HCl ３ml
と10％パラジウム−炭素25mgを加え、水素基流中
3.5時間かくはんした。触媒を去し、液をダ
ウエツクス 50W×８（Ｈ型，ダウ・ケミカル社
製）50mlのカラムにかけ、水200mlで洗浄後、2N
−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて、減圧濃縮して得られる残留物をエタ
ノールより結晶化し、目的物であるＬ−His−C₂
−Ｌ−Hisを225mg得た。収率67.0％。mp227〜
232℃（分解）。〔α〕²⁵ _D＋17.1゜（ｃ＝１，6N−HCl）。実施例２Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe（化合物番号2a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン910mg（2.8ミリモ
ル）、Ｌ−フエニルアラニンエチルエステル一塩
酸塩1.263ｇ（5.5ミリモル）、水素化ホウ素ナト
リウム173mg（2.8ミリモル）を用いて、実施例１
−４と同様に反応を行い、ダイヤイオン HP−
20の250mlのカラムを用いて精製し、Ｚ−Ｌ−
His−C₂−Ｌ−Phe−OEtを1.39ｇ得た。NMRス
ペクトル（重メタノール）においてδ1.17（ｔ，
CH₃，Ｔ＝７Hz），4.10（ｑ，CH₂，Ｔ＝７Hz），
5.00（ｓ，CH₂），7.20（ｓ，5H），7.27（ｓ，5H）
に特徹的なシグナルを示す。次に、実施例１−４
と同様に加水分解反応を行い、ダイヤイオン
HP−20の250mlのカラムで精製し、Ｚ−Ｌ−His
−C₂−Ｌ−Pheを773mg得た（全収率58.5％）。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe 716mg、1N−
HCl4.5ml、10％パラジウム−炭素50mgを用い、
実施例１−４と同様に反応を行い、ダウエツクス
50W×８（Ｈ型）50mlのカラムを用いて精製し、
エタノールより結晶化し、目的物であるＬ−His
−C₂−Ｌ−Pheを277mg得た。収率53.7％。mp
248〜250℃（分解）。〔α〕²⁵ _D＋38.1゜（ｃ＝１，6
N
−HCl）。実施例３Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys（化合物番号3a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン1.71ｇ（5.2ミリモ
ル）、N〓−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジ
ンメチルエステル一塩酸塩2.30ｇ（6.9ミリモ
ル）、水素化シアノホウ素ナトリウム324mg（5.2
ミリモル）を用いて、実施例１−４と同様に反応
を行い、ダイヤイオン HP−20の500mlのカラ
ムを用いて精製し、75％メタノール溶出部より、
Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys(Z)−OMeを主成分と
する残留物3.27ｇを得た。NMRスペクトル（重
メタノール）においてδ3.72（ｓ，CH₂），5.02（ｓ，
CH₂×２），7.29（ｓ，10H）に特徴的なシグナル
を示す。次に実施例１−４と同様に加水分解反応を行
い、ダイヤイオン HP−20の500mlを用いて精
製し、75％メタノール溶出部よりＺ−Ｌ−His−
C₂−Ｌ−Lys(Z)を1.93ｇ得た（全収率62.6％）。
NMRスペクトル（重メタノール）でδ1.2〜2.1
（ｍ，CH₂×３），2.8〜3.6（ｍ，CH₂×５），4.2〜
4.7（ｍ，CH×２），5.04（ｓ，CH₂），5.07（ｓ，
CH₂），6.85（ｓ，CH），7.30（ｓ，5H），8.03（ｓ，
CH）にシグナルを示す。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys(Z)1.88ｇ、1N−
HCl9.6ml、10％パラジウム−炭素100mgを用い、
実施例１−４と同様に反応を行い、触媒を去
し、液を減圧濃縮して得た残留物を水10mlに溶
かし、CM−セフアデツクスＣ−25（Na型，フ
アルマシア社製）150mlにかけた。水１と1M
NaCl １によるグラジエント溶出法で溶出し、
目的物を含むフラクシヨンを集め、ダウエツクス
50W×８（Ｈ型）50mlのカラムにかけ、水洗後、
2N−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラク
シヨンを集めて減圧濃縮した。得られた残留物
（粉末）を水２mlに溶かし、凍結乾燥することに
より、Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lysを白色粉末として
219mg得た。収率23.1％。〔α〕²⁵ _D−32.0゜（ｃ＝１，6N−HCl）。実施例４Ｌ−His−C₂−Ｌ−Pro（化合物番号4a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン4.73ｇ（14.3ミリモ
ル），Ｌ−プロリンベンジルエステル一塩酸塩
6.88ｇ（28.6ミリモル）、水酸化シアノホウ素ナ
トリウム899mg（14.3ミリモル）を用いて、実施
例１−４と同様に反応を行い、ダイヤイオン
HP−20の１のカラムを用いて精製し、75％メ
タノール溶出部より、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Pro・OBzlを2.21ｇ得た。NMRスペクトル（重
メタノール）においてδ1.7〜2.4（ｍ，CH₂×２），
2.8〜3.8（ｍ，CH₂×４），4.2〜4.7（ｍ，CH×
２），5.00（ｓ，CH₂），5.10（ｓ，CH₂），6.72（ｓ，
CH），7.22（ｓ，5H），7.27（ｓ，5H），7.80（ｓ，
CH）にシグナルを示す。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ
−Pro・OBzl 2.10ｇ、1N−HCl12ml、10％パラ
ジウム−炭素100mgを用い、実施例１−４と同様
に反応を行い、触媒を去し、液を減圧濃縮し
て得た残留物を水10mlに溶かし、CM−セフアデ
ツクスＣ−25（Na型）300mlのカラムにかけ、
水で溶出した。目的物を含むフラクシヨンを集
め、ダウエツクス 50W×８（Ｈ型）100mlのカラ
ムにかけ、水洗後、2N−NH₄OHで溶出した。
目的物を含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、
得られた残留物を水５mlに溶かし、凍結乾燥する
ことにより、Ｌ−His−C₂−Ｌ−Proを白色粉末
として646mg得た。全収率15.8％。〔α〕²⁵ _D−24.2゜（ｃ＝１，6N−HCl）実施例５Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（化合物番号5a）の合
成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン2.00ｇ（6.1ミリモ
ル）、Ｌ−アスパラギン酸1.61ｇ（12.1ミリモ
ル）、水素化シアノホウ素ナトリウム380mg（6.1
ミリモル）を用いて実施例１−４と同様に反応を
行い、あらかじめ0.5M NaClで調整したダイヤ
イオン HP−20の250mlのカラムにかけ、0.5M
NaCl １で洗浄後、水で溶出した。目的物を含
むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−
His−C₂−Ｌ−Aspを292mg得た。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp 292mg、1N−HCl
２ml、10％パラジウム−炭素20mgを用いた実施例
１−４と同様に反応を行い、液をCM−セフア
デツクスＣ−25（Na型）100mlのカラムにかけ
水で溶出した。目的物を含むフラクシヨンを集め
て減圧濃縮し、得られた残留物を分取薄層クロマ
トグラフイー〔シリカゲル60F₂₅₄、厚さ２mm（メ
ルク社製）〕にかけ、エタノール：Ｃ−NH₄OH
＝１：１で展開した。目的物を含む帯（Rf0.67）
をかき取り、エタノール：Ｃ−NH₄OH＝１：１
で溶出した。溶出液を減圧濃縮して得た残留物を
ダウエツクス 50w×８（Ｈ型）20mlのカラムに
かけ、水洗後、2N−NH₄OHで溶出した。目的
物を含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得ら
れた残留物をメタノールより結晶化し、Ｌ−His
−C₂−Ｌ−Aspを10.7mg得た。 mp250〜252℃（分解）。〔α〕²⁵ _D＋39.9゜（ｃ＝１
，
6N−HCl）。実施例６Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（化合物番号5a）の別
途合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン3.00ｇ（9.1ミリモ
ル）、Ｌ−アスパラギン酸α，β−ジベンジルエ
ステルトシレート8.79ｇ（18.1ミリモル）、水素
化ホウ素ナトリウム569mg（9.1ミリモル）を用い
て、実施例１−４と同様に反応を用い、反応液を
減圧濃縮し、得られた残留物を水20mlに溶かし、
酢酸エチルで２回洗浄した。水層を半量に減圧濃
縮し、ダイヤイオン HP−20の200mlのカラム
にかけ、水300ml、50％メタノール300mlで洗浄
後、メタノールで溶出した。目的物を含むフラク
シヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−
Ｌ−Asp（OBzl）−OBzlを2.52ｇ得た。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（OBzl）−OBzl2.34
ｇ、1N−HCl10ml、10％パラジウム−炭素200mg
を用い、実施例１−４と同様に反応を行い、反応
後、触媒を去し、液を減圧濃縮して得た残留
物を水10mlに溶かし、ダイヤイオン HP−20の
250mlのカラムにかけ、水で溶出した。目的物を
含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得られた
残留物をメタノールより結晶化し、Ｌ−His−C₂
−Ｌ−Aspを314mg得た。全収率11.8％。実施例７Ｌ−His−C₂−Ｌ−Orn（化合物番号6a）の合
成培養液より得たヒスタジン268mgを飽和水酸
化バリウム水40mlに溶かし、油浴中（105℃）２
時間煮沸還流した。冷却後、炭酸ガスを吹込み生
じた沈殿を去し、液をダウエツクス 50W×
４（Ｈ型）45mlのカラムにかけ、水洗後2.5％−
NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシヨン
を集めて、減圧下に濃縮乾固し、224mgの粗粉末
を得た。この粗粉末を1Mピリジン−酢酸緩衝液
（PH5.0）10mlに溶解し、あらかじめこの緩衝液で
平衡化したダウエツクス 50W×４（Py型）80ml
のカラムにかけ、同じ緩衝液で溶出した。目的物
を含むフラクシヨンを集め、これをダウエツクス
50W×４（Ｈ型）80mlに吸着させ、水洗後、2.5
％−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシ
ヨンを集め減圧濃縮し、得られた残留物を水２ml
に溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ−His−
C₂−Ｌ−Ornの白色粉末を91.5mg得た。〔α〕²⁵ _D＋30.8゜（ｃ＝１，6N−HCl）実施例８Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe−OEt（化合物番号7a）
の合成実施例２で得たＺ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe−
OEt 301mgをエタノール−水（１：１）の混液10
mlに溶かし、1N−HCl1.7mlと10％パラジウム−
炭素25mgを加え、水素気流中４時間かくはんし
た。触媒を去し、液を中和後、半量に減圧濃
縮し、CM−セフアデツクスＣ−25（Na型）
300mlのカラムにかけ、水で溶出した。目的物を
含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得られた
残留物をメタノール１mlに溶かし、セフアデツク
ス LH−20（フアルマシア社製）100mlのカラム
にかけ、メタノールで溶出した。目的物を含むフ
ラクシヨンを集めで減圧濃縮し、得られた残留物
を水１mlに溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ
−His−C₂L−Phe−OEtの一塩酸塩を白色粉末と
して60.5mg得た。〔α〕²⁵ _D＋33.4゜（ｃ＝１，6N−HCl）参考例２Ｌ−His−OMe−C₂−Ｌ−His−OMe（化合
物番号8a）の合成）実施例１−４で得たＺ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
His−OMe1.05ｇをメタノール10mlに溶かし、氷
冷下ジアゾメタンエーテル溶液を加え、メチル化
した。溶媒を留去して得た残留物をエタノール−
水（１：１）の混液15mlに溶かし、1N−HCl5ml
と10％パラジウム−炭素150mlを加え、水素気流
中3.5時間かくはんした。触媒を去し、液を
中和後、半量に減圧濃縮し、CM−セフアデツク
スＣ−25（Na型）200mlのカラムにかけた。水
1.5と1M NaCl1.5によるグラジエント溶出法
で溶出し、目的物を含むフラクシヨンを集めて減
圧濃縮し、得られた残留物をメタノール５mlに溶
かし、不溶のNaClを去した。この操作を２回
繰返し、残留物をメタノール２mlに溶かし、セフ
アデツクス LH−20の150mlのカラムにかけ、
メタノールで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて減圧濃縮し、得られた残留物を水２ml
に溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ−His−
OMe−C₂−Ｌ−His−OMeの二塩酸塩を白色粉
末として176mg得た。〔α〕²⁵ _D＋15.3゜（ｃ＝１，6N
−HCl）。〔発明の効果〕以上説明したように、本発明はアンジオテンシ
ン変換酵素に対して優れた阻害活性を示し、降圧
剤として有用なヒスタジン開連化合物を提供する
ものである。

Claims

【特許請求の範囲】１下記一般式：【化】〔式中Ａは、α−アミノ酸（但し、アルギニン
及びヒスチジンを除く）又はその低級アルキルエ
ステルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた
残基を示し、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を
示す。〕で表わされるヒスタジン関連化合物又は
それらの塩。