JPH05509098A - ３，６または９位において変性されている副甲状腺ホルモン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３．６または９位において変性されている副甲状腺ホルモン類似体 発明の背景 関連出願 本出願は１９９０年７月１３日出願された出願番号第５５３゜７６０号の一部継 続出願てあり、これをここに参照として加入する。

本発明の起源 ここに開示されている調査は、米国国立予防衛生研究所（Ｕ。

Ｓ、　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ）　、許 可番号ＧＭ３９９００、ＣＡ３４７３８およびＡＭ３５３２３並びに復員軍人子 の調査局（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖｅｔｅｒａｎ ｓ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により部分的に支持されている。米国政府 は本発明にある権利本発明は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）　、副甲状腺ホルモ ン様タンパク質（ＰＬＰ）または副甲状腺関連タンパク質（ＰＴＨ’ｒＰ）に対 してアゴニスト特性またはアンタゴニスト特性を有するポリペプチド類似体に関 するものである。３位のセリンアミノ酸、６位のグルタミンアミノ酸または９位 のヒスチジンアミノ酸あるいはこれらの組合せは、他の天然または合成のアミノ 酸により置換される。好ましくは、約３４個のアミノ酸のヒトＰＴＨフラグメン トか、有用な薬理学的活性にとって十分である。これらのポリペプチドは、ガン 、骨粗鬆症、高カルシラム血症または副甲状腺機能亢進症の病気状態にあるし１ −の治療処理に有用である。

関連技術の説明 有効なＰＴＨアゴニストおよび／またはアンタゴニストに関する調査か徹底的に 行われてきた。有効な特定のアンタゴニストの入手可能性は、ＰＴＨの作用並び に生理学的および／または病理学的役割の機構に関する研究に有力な調査手段を 提供する。若干の調査努力の結果インビトロＰＴＨアンタゴニストに到達した。

しかし、これらのポリペプチドのインビボ評価中に、これらのポリペプチドは明 確なアンタゴニスト特性を全く示さないことか多かった。

多くのポリペプチドホルモンにおいて、不連続で局部的な構造上の変性か、受容 体アゴニストを競合的受容体アンタゴニストに転化させるのに十分である。この 観察に基いて、ホルモンの受容体結合性と生物学的作用と開始という別個の作用 か、ポリペプチドホルモン配列内の別個の構造領域によって示されるという考え に達する。副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、このようなポリペプチドホルモンの 十分に研究された例である。ＰＴＨ（１〜３４）は、イヌ腎臓膜におけるアデニ ル酸シクラーゼの活性化に関する天然の８４アミノ酸ホルモンの完全アゴニスト である（下記の参考文献１参照。用いられている文字はアミノ酸配列を記載する のに従来用いられている文字である）。アミノ末端切断によって、ＰＴＨで刺激 されたアデニル酸シクラーゼの競合的アンタゴニストであるポリペプチドか生成 する。

従って、（Ｔｙｒ３４）ｂＰＴＨ（７〜３４）アミドは肝臓ＰＴＨ受容体に対す る適度の親和性を保持しているが、アゴニスト活性を全く示さない。特別な弱い 受容体結合活性かＰＴＨ（２５〜３４）程度に小さいフラグメントにおいて保持 される（参考文献２）。他方、ＰＴＨ（１〜３４）のカルボン酸末端切断によっ て、漸次低下する親和性を有するアゴニストか生成する。

ＰＴＨ（１〜２５）は本質的に不活性であると報告されている（参考文献３〜５ ）。ＰＴＨの「受容体結合性領域」はアミノ酸残基２５〜３４を含み、「活性化 領域」はアミノ酸残基１〜６を含むと考えられる。

最近確認された腫瘍誘導タンパク質はＰＴＨとの制限された配列同一性を有しく 参考文献６〜８）、ＰＴＨの能力に匹敵する能力を有するＰＴＨ応答性アデニル 酸シクラーゼを活性化する（参考文献９〜１１）。この１３９〜１４１アミノ酸 ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）　、およびこれらから誘導された合成アミ ノ末端フラグメントは、腎臓および骨格のＰＴＨ受容体に対して高い親和性を示 す（参考文献１２〜１．５）。また、これらはインビボおよびインビトロにおい てｐＴＨの主要な生物学的作用を再現する（参考文献１２．１５〜１８）。ＰＴ Ｈ関連タンパク質は種々のヒトおよび動物の腫瘍中に見出され、証拠文献はこの タンパク質が難病を伴うことの多い高カルシウム血症において病原性の役割を演 じることを示唆している（参考文献１９．２０）。哺乳類のＰＴＨとＰＴＨｒＰ との間におけるアミノ酸配列の類似性は、主として１〜１３のアミノ末端残基に 限られ、この中８個か同一である（図１参照）。ＰＴＨｒＰはＰＴＨ受容体に対 して高い親和性を示すが、ＰＴＨの２５〜３４の受容体結合性領域における１０ 個のアミノ酸のうち１個のみかＰＴＨｒＰと共通である。さらに、ＰＴＨｒＰ（ １４〜３８）のポリペプチド類似体がＲＯ３１７／２．８ラツト骨肉腫細胞中の ＰＴＨ受容体に結合する（低い親和性で）ことか報告されている（参考文献２１ ）。従って、配列の厳密な保存よりむしろコンホーメーソヨンの類似性か、ＰＴ ＨおよびＰＴＨｒＰと共通の受容体との相互作用の基礎になっていることかある 。

Ｔ、　Ｇａｒｄｅｌｌａ等ｒ（１９８９年９月１２日）　、Ｂｏｎｅ　ａｎｄＭ ｉｎｅｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　Ｔ、　５ｕｐｐ１．、アブストラクト（ａ ｂｓ　ｔ　ｒａｃ　ｔ　’）６４２」は、ヒト副甲状腺ホルモン１〜８４の突然 変異解析に関して簡潔に報告している。最初の４個のうちの任意のアミノ酸の突 然変異かＰＴＨの活性を低下させたと報告されている。

Ｔ、　Ｇａｒｄｅｌｌａ等ｒ（１９９０年６月２３日）　、Ｐｒｏｇｒａｍ　ｏ ｆｔｈｅ　７２ｎｄ　Ａｎｎｕａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅｎｄｏ ｃｒｉｎｅ　５ｏｃｉｅｔｙ、アブストラクト（ａｂｓｔｒａｃｔ）　ｌ　０７ １　Ｊは、新規なＰＴＨＩ〜８４類似体の構想を簡単に報告している。２位およ び４位のアミノ酸の変性が「アブストラクト」に記載されている。

この技術分野における興味あるいくつかの追加の参考文献としては以下のものか ある： １、　Ａ、Ｐ、　Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ等ｒ（１８２）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ 、、　Ｖｏｌ、　１１１゜１５２４−＋５３３　Ｊ。

２、　Ｍ、　Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等ｒ（１９８０）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 、　Ｖｏｌ、　１０７゜５４５−５５０４゜ ３、Ｇ、Ｖ、　Ｓｅｇｒｅ等ｒ（１９７９）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、 　Ｖｏｌ、　２５４゜６９８０−６９９６　Ｊ。

４、Ｍ、　Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ　ｒ（１９８２）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇ ｙ　ｏｆ　ＣａｌｃｉｕｍＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ、　Ｐａｒｓｏｎｓ、　Ｊ、Ａ 、編、（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ、　：、　−ヨーク）　ｐｐ、　１０３−１４ ２　Ｊ中。

５、Ｇ、Ｗ、　Ｔｒｅｇｅａｒ等ｒ（１９７３）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、、　 Ｖｏｌ、　９３．１３４９−１３５３Ｊ。

６、　Ｌ、Ｊ、　５ｕｖａ等ｒ（１９８７）　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏｌ、　２ ３７．８９３−８９６　」。

７、　Ｍ、Ｍａｎｇｉｎ　等　ｒ（１９８８）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓ ｃｉ、ＵＳＡ。

Ｖｏｌ、８５．　５９７−６０１Ｊ　。

８、　Ｍ、Ａ、　Ｔｈｌｅｄｓ等ｒ（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ。

Ｖｏｌ、８５．　４６０５−４６０９Ｊ　。

９、　Ｗ、Ｊ、　Ｂｕｒｔｉｓ等ｒ（１９８７）　Ｊ、　Ｒｉｏｔ、　Ｃｈｅｍ 、、　Ｖｏｌ、　２６２゜７１５１−７１５６　」　。

１０、Ｊ、Ｍ、　Ｍｏ５ｅｌｅｙ等ｒ（１９８７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ。

Ｖｏｌ、８４．　５０４８−５０５２Ｊ　。

１４、　Ｇ、Ｊ、　Ｓｔｒｅｗｌｅｒ等ｒ（１９８７）　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉ ｎｖｅｓｔ、、　Ｖｏｌ、　８０゜１８０３−１８０７　Ｊ　。

１２、Ｎ、　Ｈｏｒｉｕｃｈｉ等ｒ（１９８７）　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏｌ、 　２３８．１５６６−１５６８Ｊ。

１３、Ｈ，Ｊｕｐｐｎｅｒ等ｒ（１９８８）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、 　Ｖｏｌ、　２６３．８５５７゜−８５６０Ｊ　。

１４、Ｒ，Ａ、　Ｎ１５ｓｅｎｓｏｎ等ｒ（１９８８）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ ｈｅｍ、、　Ｖｏｌ、　２３８゜１５６６−１５６８　Ｊ　。

１５、Ｂ、Ｅ、Ｋｅｍｐ　ｒ（１９８７）　５ｃｉｅｎｃｅ、Ｖｏｌ、２３８． 　１５６８−１５７０　Ｊ。

１６、Ａ、Ｆ、　Ｓｔｅｗａｒｔ等ｒ（１９８Ｂ）　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖ ｅｓｔ、、　Ｖａｔ、　８１゜５９６−６００　Ｊ　。

１７、Ａ、Ｊ、Ｐ、　Ｙａｔｅｓ等ｒ（１９８８）　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅ ｓｔ、、　Ｖｏｌ、　８１゜９３２−９３８　Ｊ　。

１８、　Ｄ、Ｄ、　Ｔｈｏｍｐｓｏｎ等ｒ（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ 、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ、Ｖｏｌ、８５．５６７３−５６７７　Ｊ　。

１９、　Ａ、Ａ、　Ｂｕｄａｙｒ等ｒ（１９８９）　Ａｎｎ、　Ｉｎｔ、　Ｍｅ ｄ、、　Ｖｏｌ、　１１１゜８０７−８１２　Ｊ　。

２０、Ｊ、Ｅ、　Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ等ｒ（１９９０）　Ｊ、　Ｂｏｎｅ　Ｍｉ ｎｅｒ、　Ｒｅｓ、、　Ｖｏｌ。

５、　１０５−１１３Ｊ　０ ２１、　Ａ、Ｂ、　Ａｂｏｕ−３ａｍｒａ等ｒ（１９８９）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ ｏｌ、、　Ｖｏｌ、　１２５゜２２１５−２２１７　Ｊ　。

２２、Ｐ、Ｙ、　Ｃｈｏｕ等ｒ（１９７４）　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｖ ｏｌ、　１２．２１１−２４５Ｊ。

２３、Ｊ、Ｒ，Ｇａｒｎｉｅｒ等ｒ（１９７８）　Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、 、Ｖｏｌ、　１２０．９７−１２０Ｊ　。

２４、　Ｅ、Ｔ、にａｉｓｅｒ等ｒ（１９８４）　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏｌ、 　２２３．２４９−２５５Ｊ。

２５、　Ｍ、　５ｃｈｉｆｆｅｒ等ｒ（１９６７）　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｊ、、 　Ｖｏｌ、　７．１２１−１３５Ｊ。

２６、　Ａ、Ｍ、　Ｆｉｓｋｉｎ等ｒ（１９７７）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ ｍ、、　Ｖｏｌ、　２５２゜８２６１−８２６８　Ｊ　。

２７、Ｊ、Ｅ、　Ｚｕｌｌ、等ｒ（１９８０）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ。

Ｖａｔ、７７、　３７９１−３７９５Ｊ　。

２８、Ｊ、Ａ、Ｂａｒｄｅｎ等ｒ（１９８９）　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、Ｖｏｌ、１８４゜３７９−３９４　Ｊ　。

２９、　．１．Ｗ、　Ｔａｙｌｏｒ等区１９８７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｅ ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　’＃ｕ。

Ｒ１およびＧｒｏｓｓｍａｎ、　Ｌ、纒（Ａｄａｍｅｄｉｃ　Ｐｒｅｓｓｓ、　 ［ｎｅ、、米国カリフォルニア州すンディエゴ）、　Ｖｏｌ、　１５４．　ｐｐ 、　４７３−４９８Ｊ中。

３０、Ｊ、Ｍ、　Ｓｔｅｗａｒｔ等ｒ（１９７２）　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　 Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。

Ｌａｎｄｅ、　Ｓ、編（Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｂｒｅａｃｈ、　Ｉｎｃ、、米 国ニューヨーク州ニューヨーク）、　ｐｐ、　５９−６４Ｊ中。

３１、Ｒ，Ｊ、　Ｃｏｔｔｅｒ　ｒ（１９８８）　Ａｎａｌ、　Ｃｈｅｍ、、　 Ｖｏｌ、　６０．７８１Ａ　Ｊ。

３２、Ｒ，Ａ、　Ｎ１５ｓｅｎｓｏｎ等ｒ（１９８５）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ 　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ。

Ｂｉｒｎｂａｕｍｅｒ、　Ｌ、および０°Ｍａｌｌｅｙ、　Ｂ、Ｗ、！！　（Ａ ｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、、米国フロリダ州オーランド−）、　Ｖ ｏｌ。

１０９、　ｐｌ）、　４８−５Ｕ中。

３３、　Ａ、Ｐ、　Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ等ｒ（１９８２）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ ｏｌ、、　Ｖｏｌ、　ＩＩＩ。

１５２４−１５３３　Ｊ　。

３４、Ｒ，Ａ、Ｎ１５ｓｅｎｓｏｎ　ｒ（１９８３）　Ａｓ５ａｙ　ｏｆ　Ｃａ ｌｃｉｕｍ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＨｏｒｍｏｎｅｓ、　Ｂｉｋｌｅ、　Ｄ、Ｄ 、編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、米国ニューヨーク州ニューヨーク）、 　２４７−２５９Ｊ中。

３５、　Ｓ、Ｄ、Ｈ，Ｃｈａｎ等ｒ（１９９０）　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｅｎｄｏｃｒ ｉｎｏｌ、　Ｖｏｌ、　４゜ｐｐ、　６３８−３４６　Ｊ。

３６、Ｙ、　Ｓａｌｏｍｏｎ等ｒ（１９７４）　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、 　Ｖｏｌ、　５８．５４１−５４８」。

３７、Ｊ、Ｅ、　Ｚｕｌｌ　ｒ（１９９０）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ、、　 Ｖｏｌ、　２６５．５６７１−５６７６Ｊ　。

３８、　Ｇ、Ｖ、　５ｈａｈ等ｒ（１９８７）　Ｍｏｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｅｎｄｏｅ ｒｉｎｏｌ、、　Ｖｏｌ、　４９゜２０３−２１０　Ｊ。

３９、　Ｂ、Ｓ、　Ｈｏｎｇ等ｒ（１９８６）　Ｐｅｐｔ　ｅｓ、　Ｖｏｌ、　 ７．１１３１−１１３５　Ｊ。

４０、　Ｔ、Ｊ、　Ｒｉｃｈｍｏｎｄ等ｒ（１９７８）　Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉ ｏｌ、、　Ｖｏｌ、　１１９゜５３７−５５５　Ｊ。

４１、　Ｆ、Ｅ、Ｃｏｈｅｎ等　ｒ（１９７９）　Ｊ、Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、、 Ｖｏｌ、１３２、２７５−２８８」。

４２、Ｒ，Ｍ、　Ｅｐａｎｄ等ｒ（１９８５）　［ｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄ ｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、。

Ｖｏｌ、　２５．５９４−６００Ｊ。

４３、Ｗ、Ｇ、Ｊ、　Ｈｏ１等ｒ（１９７８）　Ｎａｔｕｒｅ、　Ｖｏｌ、２７ ３．４４３−４４６Ｊ。

４４、Ｃ；　Ｃｈｏｔｈｉａ等ｒ（１９７７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａ ｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ。

Ｖｏｌ、　７４．４１３０−４１３４Ｊ。

４５、　Ｓ、Ｒ，ＰｒｅｓｎｅｌＬ等ｒ（１９８９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

Ｖｏｌ、　８６．６５９２−６５９６４゜４６、［、Ｇｌｏｖｅｒ等ｒ（１９８ ３）　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、　Ｖｏｌ、　２２．２９３−３０４」。

４７、Ｓ、Ｃ，Ｌｅｅ等ｒ（１９８９）　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、　Ｖｏｌ、 　２８．　１１１５−１１２７Ｊ。

４８、　Ｊ、Ｍ、　ＣｏｄｄｉＢｔｏｎ等ｒ（１９８９）　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｅｎ ｄｏｃｒｉｎｏＬ、、　Ｖｏｌ。

３、７４９−７５３Ｊ。

４９、　Ａ、Ｌ、　Ｆｒｅｌｉｎｇｅｒ、［１１等ｒ（１９８４）　Ｊ、　Ｂｉ ｏｌ　Ｃｈｅｍ、、　Ｖｏｌ。

２５９、　５５０７−５５１３Ｊ　。

５０、Ｒ，Ａ、　Ｎ１５ｓｅｎｓｏｎ等ｒ（１９７９）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈ ｅｍ、、　Ｖｏｌ、　２５４゜１４６９−１４７５　Ｊ　。

５１、　Ｍ、　Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等ｒ（１９７６）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈ ｅｍ、、　Ｖｏｌ、　２５１゜１５９−１６４　Ｊ　。

５２、　Ｍ、　Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等ｒ（１９７７）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ、　 Ｒｅｓ、　Ｃｏｎ＋ｍｕｎ、。

Ｖｏｌ、４．　１１５−１３３　Ｊ　。

５３、Ｍ、Ｗ、　Ｄｒａｐｅｒ等ｒ（１９８２）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ、 、　Ｖｏｌ、　２５７゜３７１４−３７１８　Ｊ　。

５４、　Ｊ、Ａ、Ｐａｒｓｏｎｓ等　ｒ（１９７５）　Ｃａｌｃｉｕｍ−ｒｅｇ ｕｌａｔｊｎｇ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　 Ｆｉｆｔｈ　Ｐａｒａｔｙｒｏｉｄ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ。

Ｔａｌｍａｇｅ、　Ｒ，Ｖ、、　Ｏｗｅｎ、　Ｍ、およびＰａｒｓｏｎｓ、　Ｊ 、Ａ、纒（Ｅｘｃｅｒｐｔａ　Ｍｅｄｉｃａ、オランダ国アムステルダム）、　 ｐｐ。

３４−３９　Ｊ中。

５５、　Ｊ、Ｅ、　Ｚｕｌ１等ｒ（１９８７）　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｅｎｄ ｏｃｒｉｎｏｌ、、　Ｖｏｌ。

５１、２６７−２７１　Ｊ　。

５６、Ｃ，Ｄ、　５ｔｒａｄｅｒ等ｒ（１９８７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、Ｖｏｌ、　８４．４３８４−４３８８Ｊ。

５７、Ｆ、Ｍ、　Ｒｉｃｈａｒｄｓ　ｒ（１９７４）　Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏ ｌ、　Ｖｏｌ、　８２．１−１４Ｊ。

５８、Ｌ、　Ｃｏｒｐｏｒａｌｅ　ｒ（１９８８）　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：　５ｔ ｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎ、　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　 ｔｈｅ　Ｎ１ｎｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｍｐｏｓｉｕｍ、 　Ｄｅｂｅｒ、　Ｃ，Ｍ、、　Ｈｒｕｂｙ、　Ｖ、Ｊ、およびＫＯＰｐｌｅ。

Ｋ、　Ｄ、編ｐｐ、　６６３−６６６Ｊ中。

５９、Ｈ，Ｂ、　Ｂｒｅｗｅｒ等「米国特許第３．８８６．１３２号明細書」。

６０、Ｍ、　Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等「米国特許第４．７７１．１２４号明細書 」。

６１、　Ｇ、Ｅ、　５ｃｈｕｌｚ等ｒＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｉ ｅｎ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ。

Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ、米国ニューヨーク州ニューヨークｌ５ＢＮ　 ０３８７−９０３３４８　（１９７９）　Ｊ　。

６２、　Ｈ，Ｔ、　Ｋｅｕｔｍａｎｎ等（＋９８５）、　ｒＥｎｄｏｃｒｉｎｏ ｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ。

１１７（３）、　ｐ、　１２３０　Ｊ。

本明細書のどの個所で引用した参考文献、報文、特許、標準等でもすべてこれら の全体をここに参照として加入する。

明細書における括弧内の参照数字は、該当分野において見出される参考文献の番 号である。

現時点において多くのＰＴＨ類似体および研究が、ポリペプチド鎖の主としてｌ Ｏ〜３４領域のアミノ酸の置換に関して報告されている。しかし、アミノ酸力ｑ 〜９位のアミノ酸において置換されているｈＰＴＨまたはｂＰＴＨ等の類似体は ほとんど報告されていない。本発明は、３位および／または６位および／または ９位のアミノ酸が、天然アミノ酸または合成法で製造した不自然な（普通ではな い）アミノ酸を用いて置換されている新規なｈＰＴＨまたはｂＰＴＨ等の類似体 を選択する方法および製造する方法を提供する。３．６または９位において置換 されているこれらの類似体は、受容体結合性および活性を変性するのに有用な表 面側鎖を有する。これらの類似体は、多くの病気状態、特に骨粗慰症の治療処置 におけるアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。

発明の要約 一つの面において、本発明は、次式： ％式％ Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ　−Ｇｉｎ　−Ａｓｐ”　−Ｖａｌ　−１１ｉｓ　 −Ａｓｎ　−Ｐｈｅ”　−Ｚ　（構造式Ｉ） （上式において ３位のアミノ酸Ｂは、Ｌ−セリン、またはＢがグリシンを示さない場合にはセリ ンと同等であるかセリンより大き０空間容積を存する他の天然または合成のＤ− もしくはＬ−アミノ酸力）ら独立的に選択されたものを示し、 ６位のアミノ酸Ｊは、Ｌ−グルタミンまたは他の天然もしくは合成のＤ−アミノ 酸、Ｌ−アミノ酸あるいはＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸との混合物から独立的に 選択されたものを示し、９位のアミノ酸Ｘは、Ｌ−ヒスチジンまたは他の天然も しくは合成のＤ−あるいはＬ−アミノ酸から独立的に選択されたものを示し、た だし原子団ＢがＬ−セリンを示しかつ原子団ＪがＬ−グルタミンを示す場合には 、原子団ＸはＬ−ヒスチジンを示さず、また原子団ＢがＬ−セリンを示しかつ原 子団ＸかＬ−ヒスチジンを示す場合には、原子団ＪはＬ−グルタミンを示さず、 また原子団ＪがＬ−グルタミンを示しかつ原子団Ｘかヒスチジンを示す場合には 、原子団ＢはＬ−セリンを示さず、Ｚは、−ＣＯＯＨ、−Ｃｏｏ−十Ｍ　（式中 のＭ＋は薬理学的に適合性を有する陽イオンから選択されたものを示す）、−（ Ｃ＝Ｏ）ＮＯ３またはヒト副甲状腺ホルモンまたはヒト副甲状腺ホルモン関連タ ンパク質のアミノ酸配列から独立的（こ選択されたものを示す）て表わされる化 合物、またはその医薬として受け入れることのできる塩を含有することを特徴と する医薬組成物に関するものである。

好適例においては、１位のアミノ酸はセリンであり、７位のアミノ酸はロイシン であり、１６位のアミノ酸はＡｓｎであり、１８位のアミノ酸はメチオニン、す なわちヒトＰＴＨの変性された類似体である。

好適例においては、１位のアミノ酸はアラニンであり、７位のアミノ酸はフェニ ルアラニンであり、１６位のアミノ酸はセリンであり、１８位のアミノ酸はメチ オニン、すなわちウシＰＴＨの変性された類似体である。

他の好適例においては、Ｚ、ＢまたはＪは、以下のように独立的に選択されたも のを示す： Ｚは−ＣＯＯＨまたは−Ｃｏｏ−Ｍ＋または−（Ｃ＝Ｏ）ＮＯ３を示し： Ｂは合成アミノ酸を示し： Ｂは天然に存在するアミノ酸を示し： Ｊは合成アミノ酸を示し： Ｊは天然に存在するアミノ酸を示し； ＢはＬ−セリンを示し、ＪはＬｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＳｅｒまたはＰ ｈｅから選択され：あるいはＪはＬ−グルタミンを示し、ＢはＡｌａ、Ｐｈｅ、 Ｇｉｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、ＬｅｕまたはＴｙｒから独立的に選択される 。

また、他の面において、本発明はＪかＬ−セリン、Ａｌａ、ＰｈｅＳＧｌｎ、Ｇ ｌｕＳＬｙｓ、Ｈｉ　ｓまたはＴｙｒから独立的に選択されたものを示す化合物 に関するものである。

さらに他の面において、ＪはＬ−グルタミン、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｇｌｕ 、ＳｅｒまたはＰｈｅから独立的に選択される。

また、他の面において、本発明は構造式Ｉの化合物またはこれらの医薬として受 け入れることのできる塩を、医薬として受け入れることのできる賦形剤と混合し た状態で含有する医薬組成物に関するものである。

他の面において、本発明は、ｈＰＴＨ（１〜３４）の構造を存し、Ｚか−ＣＯＯ Ｈまたは−Ｃｏｏ−Ｍ＋または−＜Ｃ＝○）ＮＯ３（好ましくはアミド）から選 択されたちのである化合物を、医薬として受け入れることのできる賦形剤と混合 した状態で含有する医薬組成物に関するものである。

また、他の面において、本発明は治療処置を必要とする哺乳類を治療処置する方 法に関するものであり、この方法では治療有効量の構造式Ｉの化合物のペプチド 類似体またはこの医薬として受け入れることのできる塩を、医薬として受け入れ ることのできる賦形剤と混合した状態で投与する。

また、他の面において、本発明は治療有効量の構造式Ｉの化合物を、経口、非経 口、皮下、筋肉内、静脈内、膣、直腸、頬、舌下または鼻内手段によって投与す ることに関するものである。

また、他の面において、本発明は治療処置方法に関するものであり、この方法で は構造式Ｉの化合物を用いてヒトにおけるガン、骨粗奮症、高カルシウム血症ま たは副甲状腺機能元通症の病気状態を治療処置する。

他の面において、本発明は、医薬組成物において有用なＰＴＨまたはＰＴＨ（１ 〜３４）の３．　６．　９位またはこれらの組合せにおいて変性されているポリ ペプチド配列を選択する方法に関するものであり、この方法は、 （ａ）　３．　６．　９位またはこれらの組合せにおけるアミノ酸か異なるＤ− もしくはＬ−天然アミノ酸または非天然アミノ酸により置換されているｈＰＴＨ ，ｂＰＴＨ，ｐＰＴＨ，ｈＰＴＨｒＰ、ｂＰＴＨｒＰ、ｈＰＴＨ（１〜３４）　 、ｂＰＴＨ（１〜３４）またはｐＰＴＨ（１〜３４）のアミノ酸配列を作り：（ ｂ）特定の柔組織、膜または細胞を用いてアッセイを行って受容体結合性および 活性を評価し： （Ｃ）特定の骨細胞を用いてアッセイを行って受容体結合性および活性を評価し ： （ｄ）（ｉ）特定の柔組織、膜または細胞において高い結合性および高い活性を 有し、かつ高い特定の骨細胞結合性および高い活性を有するペプチドアミノ酸類 似体を、病気状態の柔組織、膜、細胞または骨を医学的治療処理するためのアゴ ニストとしてさらに評価するために、独立的に選択し；あるいはまた（ｉｉ）高 い結合性および高い活性を有するペプチドアミノ酸類似体を、特定の柔組織、膜 または細胞におけるアゴニストとして、また低い特定の骨細胞結合性および低い 活性を有するペプチドアミノ酸類似体を、病気状態の柔組織、膜または細胞に対 するアゴニストとしてさらに評価するために、独立的に選択し：あるいはまた （ｉｉ）特定の組織、膜および細胞において低い結合性を存し、かつ病気状態の 骨に対して高い特定の骨細胞結合性および高い活性を有するペプチドを、アゴニ ストとして独立的に選択し：あるいはまた （ｉｖ）組織、膜または細胞および骨細胞における高い結合性および低い活性を 、ホルモン異常およびガンを医学的治療処理する際のアンタゴニストとして使用 するために独立的に選択し； （ｅ）アミノ酸類似体について次の種々のアッセイまたは毒性試験を行って有用 な医薬の確認を行うことを特徴とする特 図面の簡単な説明 図１は、５種の哺乳類およびヒト並びにニワトリのＰＴＨｒＰ（１〜３４）から のＰＴＨ（１〜３４）の整列させた配列を示す。配列が同一である位置は実線で 強調されている。

図ＩＡは、ヒトＰＴＨ、ウシＰＴＨおよびブタＰＴＨの１〜８４のアミノ酸を示 す。

図２は、統計学的およびパターンに基いた理論的方法により予想されるｂＰＴＨ （１〜３４）およびヒトＰＴＨｒＰ（１〜３４）の二次構造の特徴を示す。

矢は予想されるα−へリックス構造を示し、波線は可能性のあるβ−ターンを示 す。

図３は、４５％のトリフルオロエタノールの存在下および不存在下におけるペプ チドの円二色性（ＣＤ）スペクトルである。

２０８ｎｍおよび２２２ｎｍにおける最下点は、α−へリックス構造の特性であ る。分析したペプチドは：図３ＡてはｂＰＴＨ（１〜３４）；図３８ではＣＴｙ ｒ”）ｂＰＴＨ（７〜３４）アミド、図３０ではｈＰＴＨｒＰ　（１〜３４）ア ミドである。

図４は、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、　（Ｔｙｒ２４）ｂＰＴＨ（７〜３４） アミド（△）およびｈＰＬＰ　（１〜３４）アミド（・）のα−へリックス含量 に対するトリフルオロエタノールの影響を示す。α−へリックス含量は、Ｔａｙ ｌｏｒおよびＫａｉｓｅｒ（参考文献２９）によって記載されているように、円 二色性スペクトルのディコンボルーンヨン（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）によ り測定した。

図５は、ｂＰＴＨ（１〜３４）およびｈＰＴＨｒＰ（１〜３４）について一対の へリックスモデルを図示的に示したものである。維持されている関連する配列の 位置か示されている。

疎水性コア、結合性領域およびトリガー領域か示されている。

図６は、３．６および９位に置換基を有するＰＴＨ（１〜３４）の類似体のイヌ 腎臓形質膜における生物活性のグラフを示す。

図６Ａは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）および［Ｇ１ｕ３）ｂＰＴＨ（１〜３４ ）（■）、　（Ｈｉｓ３）ｂＰＴＨ（１〜３４）（）、（Ｌｙｓ’　）ｂＰＴＨ （１〜３４）（マ）および（Ｇｉｎ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（◇）によって 生じたアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示す。

図６Ｂは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、（Ａｌａ３）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ３）ｂＰＴＨ（１ 〜３４）（ム）および〔Ｔｙｒ”　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）によって生じ たアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示す。

図６０は、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、（Ａｌａ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、Ｉ：Ｐｈｅ＠）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ”　）ｂＰＴＨ（ １〜３４）（ム）、（Ｓｅｒ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）、（Ｇ　１　ｕ’ 　）　ｂＰＴＨ’（１〜３４）（■）および（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４ ）（）により生じたアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示したものである。

図６Ｄは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、（Ａｌａ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ’　）ｂＰＴＨ（ １〜３４）（ム）および［Ｔｙｒ３］ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）によるＰＴＨ 受容体への競合的結合性を示す。

図６Ｅは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、　（Ｇｌｕ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４ ）（■）、（Ｈｉ　ｓ’　：ｌ　ｂＰＴＨ（１〜３４）（）、（Ｌｙｓ’　）ｂ ＰＴＨ（１〜３４）（マ）および〔ＧＩｎ’　］　ｂＰＴＨ（１〜３４）（◇） によるＰＴＨ受容体ヘノ競合的結合性を示す。

図６Ｆは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、（Ａｌａ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、（Ｐｈｅ”　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ’　）ｂＰＴＨ（ １〜３４）（ム）、（Ｓｅｒ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）およびＣＧ１ｕ’ 　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（■）によるＰＴＨ受容体への競合的結合性を示す。

図７は、３，６および９位に置換基を有するＰＴＨ（１〜３４）の類似体のＵＭ Ｒ１０６−Ｈ５細胞における生物活性のグラフを示す。

図７Ａは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、（Ａｌａ２）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ’　）ｂＰＴＨ（ １〜３４）（ム）および〔Ｔｙｒ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）によって生 じたアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示す。

図７Ｂは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、［Ｈｉｓ’：１ｂＰＴＨ（１〜３４） （）、（Ｌｙｓ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（マ）および（Ｇｉｎ”　）ｂＰＴ Ｈ（１〜３４）（◇）によって生じたアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示 す。

図７０は、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、　（Ａｌａ’）ｂＰＴＨ（１〜３４） （・）、［Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ’　）ｂＰＴＨ （１〜３４）（ム）、（Ｓｅｒ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）および（Ｇｌｕ ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ＩＩ）によって生じたアデニル酸シクラーゼ（Ａ Ｃ）の活性を示す。

図７Ｄは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、（Ａｈａ３）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ・）、　（Ｐｈｅ２）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、ＣＬｅｕ”　）ｂＰＴＨ（ １〜３４）（ム）および〔Ｔｙｒ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）によるＰＴ Ｈ受容体への競合的結合性を示す。

図７Ｅは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、（Ｇｌｕ’）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ ■）、（Ｈｉｓ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（）、（Ｌｙｓ３）ｂＰＴＨ（１〜 ３４）（マ）および〔ＧＩｎ”　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（◇）によるＰＴＨ受 容体への競合的結合性を示す。

図７Ｆは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）、　（Ａｌａ’）ｂＰＴＨ（１〜３４） （・）、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）、（Ｌｅｕ’　）ｂＰＴＨ （１〜３４）（ム）、（Ｓｅｔ＠）ｂＰＴＨ（１〜３４）（ロ）、（Ｇｌｕ’　 ）ｂＰＴＨ（１〜３４）（■）および（Ｐｈｅ”）ヒトＰＴＨ（１〜３４）（） によるＰＴＨ受容体への競合的結合性を示す。

図８は、半アゴニスト（Ｐｈｅ＠）ｂＰＴＨ（１〜３４）にヨル、ｂＰＴＨ（１ 〜３４）で刺激されたアデニル酸シクラーゼの活性の阻害を示す。

図８Ａは、ｂＰＴＨ（１〜３４）（０）、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴ’Ｈ（１〜３４ ）（・）および濃度の異なる（Ｐｈｅ＠）ｂＰＴＨ（１〜３４）（△）の存在下 におけるｂＰＴＨ（１〜３４）（５ｎＭ）によって生じたイヌ腎臓形質膜におけ るアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）の活性を示す。

図８Ｂは、（Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（○）および濃度の変動する（ Ｐｈｅ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）（・）の存在下における０、２ｎＭｂＰＴＨ （１〜３４）によって生じたＵＭＲ１０６Ｈ５細胞におけるアデニル酸ソクラー セ（ＡＣ）の活性を示す。

本明細書の全体において、アミノ酸の名称には肩付き数字か付いていることかあ る。この表示（例えば、Ｔ　ｙ　ｒ　”）は、ＰＴＨの３４位のアミノ酸がチロ シンであることを示す。

「Ｂ３」は、ＰＴＨの３位のアミノ酸Ｂ等を示す。

ｒ、Ｊ＠ｉは、ＰＴＨの６位のアミノ酸Ｊ等を示す。

「Ｘ９」は、ＰＴＨの９位のアミノ酸Ｘ等を示す。

特定の雑誌を参照することは、普通、文章の最後に示した括弧内（参考文献）に 示されている。

ｒｂＰＴＨＪは、特定の１〜８４アミノ酸配列を有するウシＰＴＨの配列を示す 。

ｒｂＰＴＨ（１〜３４）」は、短縮されたウシＰＴＨ配列である活性１〜３４ア ミノ酸配列を示す。

ｒｃＰＴＨ」は、１〜８４ニワトリＰＴＨ配列を示す。

ｒｈＰＴＨＪは１〜８４ヒトＰＴＨ配列を示す。

ｒｈＰＴＨ（１〜３４）」は、ヒトＰＴＨの短縮されたアミノ酸配列を示す。

ｒｈＰＴＨｒＰＪは、天然のヒト副甲状腺ホルモンに関連する１３９〜＋４１ア ミノ酸のタンパク質を示す。ｂ　ＰＴＨｒ　Ｐはウソ細胞から得たちのである。

ｈＰＴＨｒＰはヒト細胞から得たちのである。ｐＰＴＨｒＰはブタ細胞から得た ものである。

ｒｈＰＴＨｒＰ　（１〜３４）Ｊは、天然のヒト副甲状腺ホルモン関連タンパク 質の活性１〜３４アミノ酸を示す。

ｒｐＰＴＨＪはＰＴＨの１〜８４ブタアミノ酸配列を示す。

ｒｐＰＴＨ（１〜３４）」は、ｐＰＴＨの活性ｌ〜３４正常ブタアミノ酸配列を 示す。

先に説明したように、本発明を説明する際の便宜のために、［ＵＰ、ＡＣ−１ｔ ｌＢ　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌ ａｔｕｒｅ。

ｒＢｉｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｖｏｌ、比１７２６　（１９７２）Ｊによって 推奨され、ペプチドの技術分野において広く受け入れられているような、種々の 一般的なアミノ酸に対する従来の略語を用い、これらの略語によってアキラルな アミノ酸であるグリシンを除いてＬ−アミノ酸を示す。ここで述へるすべてのペ プチド配列は、Ｎ末端アミノ酸か左側にありＣ末端アミノ酸か右側にあるとする 広く受け入れられている慣行に従って記載する。本発明の若干のポリペプチドで は、末端−ＣＯＯＨ基がアミド基−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２に転化されている。ポリペ プチドは「−アミド」として識別する。例えば、ｒＧｌｙ−アミド」は末端基− ＣＨ２Ｃ（＝０）−ＮＨ，を示す。

「天然のアミノ酸」とは、その技術分野においてよく知られているものを示す。

これらのアミノ酸を列挙し、標準的略語はＵ、Ｓ、Ｐ、Ｔ、Ｏｌの刊行物、Ｔｒ ａｄｅｍａｒｋ　０ｆｆｉｃｉａｌ　Ｇａｚｅｔｔｅ。

１９９０年５月１５日発行、第３３頁の４６に示されている。

これらのアミノ酸および略語をここに参照として特別に加入する。

以下に天然のアミノ酸を示す： Ａ　Ａｌａ　アラニン Ｄ　Ａｓｐ　アスパラギン酸 Ｅ　Ｇｌｕ　グルタミン酸 Ｆ　Ｐｈｅ　フェニルアラニン ＧＧｌｙ　グリシン ＨＨｉｓ　ヒスチノン ミノ酸は、上述のＴｒａｄｅｍａｒｋ　０ｆｆｉｃｉａｌ　Ｇａｚｅｔｔｅの第 ４７頁および第４８頁に記載されている。普通でなり）力１あるす）（ま変性さ れたアミノ酸は、ここに参考として特別（こ記載した（ヒ合物を含有４Ａｂｕ　 ４−アミノブチル酸、ビペＩＪジン酸ｂＡｉｂ　３−アミノイソブチル酸 、Ａｐｍ　２−アミノピメリン酸 Ｄｂｕ　２．　４−ジアミノブチル酸 ＥｔＧｌｙＮ−エチルグリシン ＥｔＡｓｎ　Ｎ−エチルアスパラギン Ｈｙ１　ヒドロキシリシン ａＨｙｌ　ａｌｌｏ−ヒドロキシリシン３ＨＹｐ３−ヒドロキシプロリン ４Ｈｙｐ４−ヒドロキシプロリン ａｌｌｅ　ａｌｉｏ−イソロイシン ＭｅＧ１ｙ　Ｎ−メチルグリシン、サルコシンＭｅｌｌｅ　Ｎ−メチルイソロイ シン ＭｅＬｙｓ　Ｎ−メチルバリン ３．４または５−フルオロヒスチジン さらに、普通でないかあるいは変性された「アミノ酸」は、分子において別の基 、例えばアルキル基または水酸基てさら（こ置換された置換アミノ酸を含む。代 表的な置換アミノ酸は、例えば、４−ヒドロキシ−し−プロリン、サルコ、シン （また「５ａｒＪはＮ−メチルグリシンとして知られている）、Ｄ−３−（２− ナフチルアラニン）ｒＤ−Ｎａ　ＩＪ　、Ｎ’　−（アミノカルボキシル）−オ ルニチンｒｃｉｔＪ、ピログルタミン酸、オルニチン；ｐｍｐ（１−Ｂ−メルカ プト−β、β−ペンタメチレンブロビオン酸：Ｔｙｒ　（Ｅｔ）、４位の水酸基 においてエチル化されているチロシンを含む。

「随意の」または「随意に」とは、後述の事象または情況が起るかもしれないし 、起らないかもしれないことを意味し、またこの記載は上記事象または情況か起 る場合および起らない場合を含むことを意味する。例えば、「随意に置換された フェニル」とは、フェニルが置換されていることがあるかもしれないし、置換さ れていないかもしれないことを意味し、またこの記載は未置換フェニルおよび置 換が行われているフェニルの両方を含むことを意味する：　「次いて遊離塩基を 酸付加塩に随意に転化する」とは、上記転化か本発明の範囲内にあると記載され ているプロセスにとって適切に実施されているがもしれないし、実施されていな いかもしれないことを意味し、また本発明が遊離塩基を酸付加塩に転化するプロ セスおよびこの転化が行われていないプロセスを含むことを意味する。

ここで用いるように、「医薬として受け入れることのできる塩」とは、親化合物 の所望の生物活性を保持し、かつ不所望な毒物作用を全く示さない塩を意味する 。このような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン 酸、硝酸等によって生成する酸付加塩：および有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸 、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、タンニン酸、バモイ ック酸（ｐａｍｏｉｃ　ａｃｉｄ　）　、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフ タレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸によって生成 する酸付加塩：（ｂ）金属（Ｍ）陽イオン、例えば、ナトリウム、カリウム、亜 鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバ ルト、ニッケル、カドミニウム等との塩。

あるいはＮ、Ｎ’　−ジヘンジルエチレンジアミンまたはエチレンジアミンから 生成する有機陽イオンとの塩：あるいは（Ｃ）（ａ）と（ｂ）との組合せ、例え ば、タンニン酸の亜鉛塩等である。

発明の説明 本発明では、入手できるかあるいは誘導される構造−活性データと、ＰＴＨまた はＰＴＨｒＰの分子構造に関する予測および／または実験による決定とを組み合 わせて、高親和性受容体の結合性および活性において重要な役割を演することが 予想される１〜３４（またはこれより大きい）アミノ酸配列における重要なアミ ノ酸残基を確認する。３．６あるいは９位またはこれらの組合せにおいて置換さ れているアミノ酸を有する類似体を合成し、側鎖極性、電荷および大きさまたは 生物活性の影響について評価する。インビトロバイオアッセイを、イヌ腎臓膜お よびラット骨細胞およびヒト骨細胞におけるＰＴＨ受容体の結合性およびアデニ ル酸シクラーゼの活性について説明する。

これらのインビトロのアッセイの結果は、インビボ生物活性を予知するものであ る。

２種の半経験的方法を用いて唾乳類ＰＴＨ（１〜３４）およびＰＴＨｒＰ（１〜 ３４）の二次構造の特徴を予測した一統計的方法（参考文献２２．２３）および パターンに基いた方法（参考文献２４．２５）（図２）。ＰＴＨ（１〜３４）で は、ペプチドの６８％（２３／２４）〜８２％（２８／３４）を含む２個のらせ んセグメントが、先に示唆されたように（参考文献２６．２７）、予測される。

推定されるＣ０ＯＨ領域のへリックスはホルモンの受容体への結合性に直接的な 役割を演すると考えられる残基を存し、他方ＮＨ２領域のへリックスは受容体に とって活性化に必要である１〜６ペプチドセグメントの部分またはすへてを有す る（Ｇｓて表わされるアデニル酸シクラーゼの刺激性ＧＴＰ結合性成分への結合 の誘発）。同様に、２個のらせんセグメントかＰＴＨｒＰ（１〜３４）について 予測される。これらのセグメントはペプチドの７４％（２３／３４）〜９４％（ ３２／３４）を存する。Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ　（参考文献２２）による計算 はＰＴＨ（１〜３４）の１０−１３位におけるβ−ターンを示唆し、ＰＴＨｒＰ の対応する領域におけるβ−ターンを強く予測させる。

ｂＰＴＨ（１〜３４）、（Ｔｙｒ”）ｂＰＴＨ（７〜３４）アミドおよびｈＰＴ ＨｒＰ（１〜３４）アミドの円二色性（ＣＤ）スペクトルが、トリフルオロエタ ノール（ＴＦＥ）の存在下および不存在下において、水性緩衝液中で得られた。

ＴＦＥの不存在下において、ｂＰＴＨ（１〜３４）は２０８ｎｍに最下点を、２ ２２ｎｍの領域に広い肩部を有するスペクトルを生じた（図３）。４５％のＴＦ Ｅの存在下において２０８ｎｍにおける最下点は一層深くなり、第２の最小点が ２２２ｎｍに現れた。これらの結果は、ｂＰＴＨ（１〜３４）におけるα−へリ ックス構造の存在を示唆するものであって、上述の構造の存在はＴＦＥの存在に よって増強される。楕円率は２００ｎｍ未満の波長において正となり、これは少 量の残留β構造が存在することを示す。驚くへきことには、この特性もまたＴＦ Ｅにより強化された。ｈＰＴＨｒＰ　（１〜３４）アミドおよび（Ｔｙｒ２４〕 アミド（７〜３４）が示すスペクトル特性は定性的に類似していた。

α−へリックス含量（参考文献２９記載のＴａｙｌｏｒおよびＫａｉｓｅｒの方 法によるＣＤスペクトルのディコンボルージョンにより評価した）およびこれら のペプチドに対する溶媒の両親媒性を図４に示す。これらのスペクトルは、ＴＦ Ｅ濃度の増加に従って漸次に増加するα−ヘリックス構造と一致した。４５％の ＴＦＥの存在下において、ｂＰＴＨ（１〜３４）およびｈＰＴＨｒＰ（１〜３４ ）のアミドはそれぞれα−へリックス領域内に２５±３および２４±３個の残基 を育することが計算によって分った。これらの結果は、上述のＣｈｏｎ−Ｆａｓ ｍａｎによる分析によって予測される。また、ＰＴＨ（７〜３４）類似体のＣＤ スペクトルもＣｈｏｎ−Ｆａｓｍａｎによる分析と一致した。ＰＴＨ（７〜３４ ）はｂＰＴＨ（１〜３４）またはｈＰＴＨｒＰ　（１〜３４）アミドのいずれか より７〜８個少ないα−へリックス残基を有し、このことはＰＴＨのアミノ末端 １〜６ドメインがＴＦＥの存在下にα−へリックス構造をとるかあるいは誘発す ることを示唆する直接の証拠を提供する。この結果は、（Ｔｙｒ”）ｂＰＴＨ（ １〜３４）アミドおよび（Ｔｙｒ”）ｂＰＴＨ（７〜３４）アミドかそれぞれ３ ０％のＴＦＥの存在下にそれぞれ２４および１８α−へリックス残基を示すこと が計算された第２実験により確認された。

ＴＦＥの不存在下に、ｂＰＴＨ（１〜３４）　、ｈＰＴＨｒＰ（１〜３４）アミ ドおよび（Ｔｙｒ口）ｂＰＴＨ（７〜３４）アミドは７〜１０のα−へリックス 残基を有することが計算され、これは厳密に極性の溶媒条件下に残存する第２α −へリックストメインと一致する。この後者のドメインは、ＰＴＨおよびＰＴＨ ｒＰの残基１７〜３４の間に存在すると予測される。

これらの結果は、両親媒性化合物の不存在下における水性条件下に、ｂＰＴＨ（ １〜３４）およびｈＰＴＨ（１〜３４Ｘ３７＝３９）については１２未満のα− へリックス残基てあり、ｂＰＴＨ（７〜３４）については９のα−へリックス残 基であるとした従来の評価（参考文献３７）に類似している。ＰＴＨ（７〜３４ ）類似体の二次構造に対するＴＦＥの作用は、増加する溶媒の両親媒性の条件下 において推定のＣ００Ｈ−領域へリックストメインの延長部を反映していること がある。

これらの結果は、適切な溶媒条件下において、ｂＰＴＨ（１〜３４）アミドとｈ ＰＴＨｒＰ（１〜３４）アミドとの両方か主としてα−へリックスである大きな 二次構造を有することを示す。これらの結果に基いて、ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰ の１〜３４配列の三次元モデルを、アミノ−およびカルボキシル−末端α−へリ ックスを一緒に詰め込むことによって構成した（図５）。各ヘリックスの面にお ける疎水性接触面をＲｉｃｈｍｏｎｄおよびＲｉｃｈａｒｄｓの方法（参考文献 ４０）を用いて位置決めした。ヘリックス組立体をＣｏｈｅｎ等の方法（参考文 献４１）によって構成した。鎖の連結性を維持するために、ヘリックス内の詰め 込み角（ｐａｃｋｉｎｇ　ａｎｇｌｅ）は必然的に＋２０°または一２０°　（ ＋１６０°または一１６０°）になった。

このモデルの関係において、維持されている４、７および８位並びに２０．２３ ，２４．２８および３１位の置換基は、疎水性コア中に埋められている残基を含 む。これらの残基は、折り重ねた構造の安定化に寄与すると考えられる。対照的 に、維持されかつ溶媒に曝された３、６．　９および１２位の残基は、リガンド −受容体界面において重要な相互作用に関与していると考えられる。３または６ または９位で一置換されたかあるいは３および６位で二置換されたｂＰＴＨ（１ 〜３４）の２３個の類似体を、一般にペプチドアミノ酸合成法に従って、特に実 験の部に見い出されるようにして合成し、ｌ）　Ｔ　Ｈ受容体へのこれらの結合 性における不活性並びにイヌ腎臓の形質膜および０ＭＲ１０６−Ｈ５ラット骨肉 腫細胞におけるアデニル酸シクラーゼの活性について試験した（図６および７、 並びに表１およびＩＡ）。これらの置換基か受容体への結合性に及ぼす影響は、 腎臓および骨系において類似していた。３位において、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｉｎ およびＨｉｓを含む種々のアミノ酸配列は十分に許容される（結合能力の保持率 ３０％以上）が、Ｌｙｓ、ＰｈｅおよびＴｙｒは余り十分には許容されない（結 合能力の保持率２〜１５％）。（Ｇｌｕ”　）ｂＰＴＨ（１〜３４）は、受容体 結合活性の１０％未満を保持していた。６位における置換の結果、ｂＰＴＨ（１ 〜３４）の活性のわずかに１％（腎臓の膜）および４％（骨肉腫細胞）を保持し ていた（Ｐｈｅ＠）ｂＰＴＨ（１〜３４）を除いて、適度に減少した結合活性を 有する類似体か生成した。

一般に、結合能の減少は、０ＭＲ１０６−Ｈ５細胞中のアデニル酸シクラーゼを 刺激するのに必要なペプチド濃度の匹敵する増加と平行していた。例外は［Ｌｙ ｓ”）および（Ｐｈｅ２）ｂＰＴＨ（１〜３４）であり、これらはそれぞれシク ラーゼ刺激活性において、これらの結合能から予測される値より不均衡に小さい 損失および大きい損失を示した。対照的に、実際−ヒすべての類似体か、腎臓の 膜において不均衡に低いシクラーゼ刺激能力を示した。腎臓の膜の結合能とシク ラーゼ刺激活性との間の同様な不均衡かＰＴＨｒＰ（１〜３４）について記載さ れている（参考文献１４）。従って、大部分の類似体並びにＰＴＨｒＰは、イヌ 腎臓の形質膜中のＰＴＨ受容体をアデニル酸シクラーゼの活性化に結び付ける際 に、ｂＰＴＨ（１〜３４）より明らかに効果か小さい。

４個の合成された類似体は、アデニル酸ツクラーゼアッセイにおいて半アゴニス ト活性を示した。これらの類似体のうちの３種（Ｐｈｅ’　、Ｔｙｒ’　、Ｐｈ ｅ”　）は疎水性残基か置換されていたか、第４類似体は６位においてＳｅｒを 置換するためにＧｉｎを有していた。半アゴニストの挙動を示した類似体は、程 度か若干異なるが、骨および腎臓の両方の系において同様であった。弱い半アゴ ニストは、完全アゴニストＰＴＨｒＰ（１〜３４）およびｂＰＴＨ（１〜３４） に対するアデニル酸シクラーゼの応答を競合的に阻害することができた（図８） 。

アッセイをＵＭＲ１６０−Ｈ５細胞を用いて実施した。これらのアッセイは、Ｃ ｏｈｅｎ等ｒ（１９９１）、　Ｊ、　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ、、２６ ６（３）、　ｔ９９７．＋および実験の部、例えば、実施例■１に記載されてい るようにして実施した。

０ＭＲ１０６−Ｈ５細胞において、い（つかの３位類似体は、腎臓のアデニル酸 シクラーゼと混合した場合に、アデニル酸シクラーゼ活性についての増大した能 力（Ｌｅｕ２、Ｈｉ　ｓ’　）またはアデニル酸シクラーゼにおける増加した活 性（Ｔｙｒ’）を示した。これらの結果は、これらの類似体か比較的骨特異性で あることを示す。

試験した類似体は受容体結合性アデニル酸シクラーゼのアッセイにおいて広範囲 の能力を示したが、ＣＤ分光学により証明されたように、置換は二次構造にほと んど影響を与えなかった。

α−へリックス含量の計算値はこれらのペプチドについて２９〜３６％の間での み変化し、例外は（Ｇｌｕ’　）ｂＰＴＨ（１〜３４）であり、これは１９％の α−へリックス含量を示した（表１）。（Ｇｌｕ”　）ｂＰＴＨ（１〜３４）の 減少したα−ヘリックス含量は、両アッセイ系において生物活性の顕著な損失と 関連していた。残りの類似体については、生物活性における変化は二次構造にお ける主要な変化に依存しないと考えられた。

下記の表１において、ｂＰＴＨ（１〜３４）の能力および活性を１００％として 示し、ペプチド類似体をｂＰＴＨ（１〜３４）に対する百分率で記載した。列挙 した腎臓の膜のアッセイ値は、腎臓組織受容体を使用した場合のポリペプチド類 似体の作用を表わす。ＵＭＲ１０６−Ｈ５アッセイ値はラットの骨組織受容体を 使用した場合の、ペプチド類似体の作用を反映している。５ａ０５−２アツセイ 値は、ヒト骨組織受容体についての、ペプチドの作用を反映している。

活性は、アデニル酸シクラーゼを刺激する固有の能力であると定義し、完全アゴ ニストは１００％の活性を有するとする。

完全アンタゴニストは０％の活性を有する。半アゴニストは〉０およびく１００ ％活性を有する。いずれのアッセイにおいても、理想のアンタゴニストは１００ ％の結合性（Ｂ）および０％の活性（ＡＣ）を育する。いずれのアッセイにおい ても、超アゴニストは、１００％より大きい（例えば２００％）の結合性（Ｂ） および１００％の活性（ＡＣ）を有する。

好適例は骨特異的ペプチド類似体であって、これは腎臓の柔膜において０％に近 い結合性（Ｂ）および０％の活性を有し、０ＭＲ１０６−Ｈ５アッセイにおいて １００％の結合性および活性に近い値またはこれより大きい結合性および活性を 存する。

例えば、表１において類似体（Ｔｙｒ”　ｂＰＴＨ（１〜３４））は、腎臓組織 において低い結合性および活性を示し、かっ０ＭＲ１０６−Ｈ５アッセイにおい て高い結合性および活性を存する好ましいパターンを示す。

表ＩＡでは、ｈＰＴＨ（１〜３４）の能力および活性は、１００％として記載さ れ、ペプチド類似体についてはｈＰＴＨ（１〜３４）（ヒト）に対する百分率で 記載されている。

３．６および９位において変性されているｂＰＴＨ（１〜３４）の類似体に関す るＰＴＨ受容体結合性（Ｂ）およびアデニル酸ンクラーゼ活性（ＡＣ）について の能力および最大活性。

変性されている類似体はＺ−アミドである。

Ｂ、ＡＣおよびＡＣ”の定義は表ＩＡを参照されたい。

両方の値をＰＴＨ（１〜３４）に対する％として示し、ＰＴＨ（１〜３４）に１ ００％の値を割り当てた。変性されているペプチドの最大有効用凰によって生じ たアデニル酸シクラーセの活性を、ｂＰＴＨ（１〜３４）によって生じた活性に 対する値で示す。また、実験の部に記載したように、３０％のトリフルオロエタ ノール（ＴＦＥ）の存在下に得た円二色性（ＣＤ）スペクトルから計算したα− へリックス構造の％を示す。

３．６および９位において変性されているｂＰＴＨ（１〜３４）の類似体に関す るＰＴＨ受容体結合性（Ｂ）およびアデニル酸７／クラーセ活性（ＡＣ）の能力 および最大活性。変性されている類似体はＺ＝ニアミドある。

Ａ　Ｃは最大酵素活性の半分を存する変性されているペプチドの濃度である（ず なオ）ち、曲線の転移部の中間点である一添付した図面から決定することかでき る）。

ＡＣ”は１００％とした基準ＰＴＨに対する多用量の変性されているペプチドの 酵素活性であると定義する。

両方の値をＰＴＨ（１〜３４）に対する％として示し、ＰＴＨ（１〜３４）に１ ００％の値を割り当てた。変性されているベブチ１−の最大有効Ｉによって生し たアデニル酸シクラーセの活性を、ｂＰＴＨ（１〜３４）によって生じた活性に 対する値で示す。また、実験の部に記載したように、３０％のトリフルオロエタ ノール（ＴＦＥ）の存在下に得た円二色性（ＣＤ）スペクトルから計算したα− ヘリックス構造の％を示す。ＮＤは測定していないことを示す。

表に示したＣＤのデータは、ＰＴＨ（１〜３４）およびＰＴＨｒＰ　（１〜３４ ）か、アミノおよびカルボキシルの両末端ドメインにおいてα−へリックス構造 をとるという理論的根拠に基く本発明者等の予測と一致する。従って、ペプチド をアミノ末端α−へリックスおよびカルボキシル末端α−へリックスを存する平 衡状態にある構造の集団と考えた場合には、ＴＦＥ濃度の増加に従って平衡かへ リックス含量の増加する方向に移動ジルコリン小胞の存在下にｈＰＴＨ（１〜３ ４）のα−へリックス含量か同様に増加することを示していた（参考文献４２） 。

また、特定の受容体の非極性環境もＰ　Ｔ　ＨおよびＰＴＨｒＰの高度に構造的 な形態（ｈｉｇｈｌｙ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅｄ　ｆｏｒｍ）を安定化することか できると考えられる。

提案されているモデルは、疎水性コア、各ヘリックスの疎水性表面およびヘリッ クス間のループを存す°るドメイン構造を与える。ｂＰＴＨにおいて疎水性表面 の面積を最大限に埋め込むために、およびヘリックス双極子間の好ましい相互作 用を促進するために（参考文献４３）、相対的に平行な配置（軸線開角（ｉｎｔ ｅｒａｘｉａｌ　ａｎｇｌｅ）　−１６０°）か予測される（図５参照）。

この詰め込み角は、一般にらせん形タンパク質に存在する（参考文献４４．４５ ）。類似し対をなすらせん構造か２８残基トリ膵臓ポリペプチドについてＸ線結 晶学によって示されている（参考文献４６）。

最近、ＢａｒｄｅｎおよびＫｅｍｐ　（参考文献２８）は、２Ｄ−ＮＭＲおよび ＣＤ分光学を用いてＰＴＨｒＰ（１〜３４）アミドおよびこのフラグメントの三 次元構造をｐＨ４，５において特徴づけることを報告した。彼等は、ペプチドが 、１個のＮ末端へリックス（残基３〜９）、２個の逆ターン（ｒｅｖｅｒｓｅ　 ｔｕｒｎ）　（残基１０〜１３および１６〜１９）、およびＣ−末端コイル（残 基２３〜３４）からなる構造をとると結論した。最も重要なことは、これらの研 究者か離れている残基間のＮＯＥクロスビーク（ｃｒｏｓｓ−ｐｅａｋ）を検出 した（参考文献２〜３１．８〜２８．１〜２４）ことで、これによりコンパクト な構造の存在が確認される。らせん構造は、”Ｊ、１９ｈａ−Ｃ８Ｎ□結合定数 およびＰＴＨｒＰ類似体のＣＤスペクトルの解析に基いて、カルボキシル末端領 域ではなくアミノ末端領域に起因するとされた。ＢａｒｄｅｎおよびＫｅｍｐに よりヘリックスであると確認された領域（残基３〜９）は５．４　Ｈｚの平均　 Ｊ　ａｌｐｈａ−ＣＨＮＨを有する。Ｃ−末端領域における残基２４〜３０は６ ．１Ｈｚという類似の平均　Ｊ　ａ＋ｋｈａ−ＣＨＮ　Ｉ＋を有する。しかし、 ＰＴＨｒＰ　（１〜３４）　、ＰＴＨｒＰ（１〜２５）およびＰＴＨｒ　Ｐ　（ ７〜３４）の水中におけるＣＤスペクトルはアミノ末端へリックスのみの証拠を 示すものとして解釈された。また、ｂＰＴＨ（１３〜３４）およびｂＰＴＨ（１ ９〜３４）についてのＣＤスペクトルも、水性条件下においてこれらのペプチド にα−へリックス構造が存在するにしても、はとんど存在しない程度であること を示した（参考文献３７）。

ヘリックス間相互作用またはへリックス自体のいずれかを不安定化するＰＴＨ（ １〜３４）の変性は、その結果として生物活性か減少する。これは、試験したＰ ＴＨの類似体の場合であると考えられる。Ｍｅｔ”のＳＯＭｅ　ｔ　（ｂＰＴＨ Ｃ１〜８４）において）への酸化により、あるいはＣＧ　Ｉ　ｎ”、Ｌｙｓ２ｓ 、Ｌｅｕ”）ｈＰＴＨ（１〜３４）におけるＬｅｕ”のＬｙｓ２″への置換のい ずれかによる疎水性コアの破壊の結果として、生物活性の顕著な（１０〜５０倍 ）損失か生じる（参考文献４９゜５０）。対照的に、ＭｅｔをＮｌｅ””に、Ｍ ｅｔをＭｅｔ−ブチルＬ１８に、ＭｅｔをＭｅｔ−ブチル１１ｓに交換または付 加した同族体、またはＮＰＳ−／ＮＡＰＳ−Ｔｒｐ”類似体におけるように、疎 水性部分を交換または付加しても、その結果生物活性はほとんどまたは全く損失 されない（参考文献４．５１〜５３）。Ｃ−末端カルボン酸を除去した類似体（ ＰＴＨ（１〜３４〕アミド；　［Ｔｙｒ３４）ＰＴＨ［１〜３４）アミド。

（Ｄ　（Ｔｙｒ２４）ＰＴＨ−（１〜３４アミド）では生物活性が増加した（参 考文献５４）。残基２３〜３４かα−へリックスを形成する場合には、ペプチド 双陽子の相対的配列は、約−Ｉ／　２　ｅに等しい存効な負電荷をＣ−末端にお いて生じさせる（参考文献４３）。Ｃ−末端ＣＯＯ−は、双極子との好ましくな い相互作用によってヘリックスを不安定化する。対照的に、Ｃ−末端アミドはヘ リックスを安定化し、おそらく生物学的能力を増加させる。同様に、Ｌｙｓ”（ 提案されたループ領域内）はＰＴＨおよびｄＰＴＨｒＰにおける推定Ｎ末端の双 極子を安定化する。実際に、ＰＴＨ（１〜３４）からＬ　ｙ　ｓ　＋　２を除去 すると、その結果顕著に低下した生物活性を存するペプチドが生成する（参考文 献５５）。対照的に、Ｍｅｔ”の酸化はへリックス間の相互作用を不安定化する と予測されず、また（ＳＯＭｅ　ｔ”）ｂＰＴＨ（１〜８４）は本来のホルモン の活性の５０％近くを保持する（参考文献４９）。

本発明においては、分光学的方法と予測的方法との組合せを用いてＰＴＨ（１〜 ３４）についての構造モデルを展開する（Ｆ、Ｅ、　Ｃｏｈｅｎ等ｒＪ、　Ｂｉ ｏｌ、　Ｃｈｅ＋ｎ、　２６６：　２９９７．１９９１Ｊ　）　、このペプチド は、ループにより隔離された２個の両親媒性α−へリックスからなると考えられ る。アミノ領域のα−へリックスはアミノ末端またはこの付近において始まり、 約残基１０まで延在する。第２α−へリックスは約残基１８において始まり、カ ルボキシル末端まで延在する。ヘリックスは、逆平行に互いの上に折り返されて 重なっており、この結果受容体結合性の中心に含まれると予測される外側に面し た極性残基を存する疎水性コアか形成すると示唆される。

このような３個の極性残基：３位のＳｅｒ；６位のＧｉｎ；および９位のＨｉｓ を変性する。これらの残基は既知のすべてのＰＴＨ／ＰＴＨｒＰ族（図１）中に 維持され、従って重要な受容体決定基と直接に相互作用することかある。いずれ の場合においても、類似体を合成して電荷、疎水性および側鎖容積の変化の影響 を評価する。

本発明においては、いくつかのペプチドは最大有効濃度におけるアデニル酸シク ラーゼ活性化能力の低下を示した。このような類似体の固有活性の低下は、結合 させた後に受容体を完全に機能的なコンホーメーションに転化することができな いことに反映している。大部分について、この性質を示す類似体は、３．６およ び９位において、通常の極性のアミノ酸に置換された疎水性残基を有する。３位 において、ＰｈｅまたはＴｙｒをＳｅｒによって置換すると、ＰＴＨ（１〜３４ ）の固有活性か顕著に減少した。後述のように、この作用は腎臓アッセイに特異 的なものであって、骨細胞では明らかでない。低下した生物活性は、３位に導入 された疎水性側鎖の容積に直接関係し、これは、この残基か受容体ポケット内に 立体的に抑え込まれていることを示唆する。存意な負の相互関係が、３位におけ る側鎖容積（Ｒｉｃｈａｒｄｓの方法（参考文献５７）によって計算した）と、 それぞれのアッセイにおける生物活性との間で得られた。種々のアッセイにおい て、相関係数は−０，６８（確率ｐは０．０５未満）〜−０，９２（確率ｐは０ ．０１未満）の範囲内であった。ＰＴＨ（１〜３４）の６位におけるＧｉｎによ るＰｈｅの置換により、腎臓と骨細胞との両方におけるアデニル酸シクラーゼア ッセイにおける固有活性か顕著に低下している類似体か生成した。疎水性残基は ９位において極めて僅か許容されるにすぎず、ＨｉｓをＡｌａ、ＬｅｕまたはＰ ｈｅによって置換することにより、腎臓のアデニル酸シクラーゼアッセイにおけ る固有活性の損失か生じた。一般に、これらの位置における極性アミノ酸での置 換は、固有生物活性を一層小さくする。例外はＳｅｒ“およびＳｅｒ”　ＰＴＨ （１〜３４）であり、これらはいずれも活性の低下を示した。

受容体結合性活性を保持しているが、固有活性の低下している類似体は、半ＰＴ Ｈアンタゴニストとして作用すると予測される。このことは、試験した２種の半 アゴニスト−（Ｐｈｅ”）および（Ｐｈｅ”　）ＰＴＨ（１〜３４）の場合であ ることか分った。単一の置換によりＰＴＨ（１〜３４）が半アンタゴニストに転 化されることを見い出したのは新規な知見であり、有効なＰＴＨ受容体アンタゴ ニストを開発する新規な方法を示唆するものである。

（ｉｉ）二次構造に及ぼす置換の影響 二次構造に及ぼすアミノ酸置換のＰＴＨ（１〜３４）の影響を評価するために、 本発明の技術分野および本発明においては、円二色性を用いる。水性溶媒条件下 において、実際上すべての一置換類似体は３０〜４０％のα−へリックス含量を 示す。唯一の例外は（’Ｇ１　ｕ）ＰＴＨ（１〜３４）で、これは僅かに１９％ のα−へリックス含量を示し、生物活性の顕著な減少を示した。３０％トリフル オロエタノール中、すなわち形質膜雰囲気において予測されるものに類似した溶 媒条件においては、単一の残基置換を有するすべての類似体か８５％のα−へリ ックス含量を示す。従って、固有活性の上述の損失は、類似体の二次構造の全体 的変化に起因するものではない。以下に記載するように、残基３および６におけ る置換の組み合わせは、受容体活性構造および生物活性に極めて大きい影響を及 ぼす。

（ｉｉ）変化した標的細胞選択性を有するペプチド類似体ある変性の結果、腎臓 対骨細胞バイオアッセイにおける種々の損失か生しる。Ｓｅｔ’を塩基性残基Ｌ ｙｓまたはＨｉｓによって置換することにより、骨細胞において実質的活性を保 持しているか、腎臓の膜においてＰＴＨ（１〜３４）の活性のく３％を有する類 似体か生成する。同様に、（Ｇｌｕ’）および（Ａｌａ’　）ＰＴＨ（１〜３４ ）は、ラット骨細胞のバイオアッセイにおいて腎臓の膜のバイオアッセイにおけ るより有意に大きな活性を保持する。（Ａｌａ’　）ＰＴＨ（１〜３４）の標的 細胞選択性は、類似体の効果がヒト骨細胞と腎臓の膜とにおいて等しいので、種 （ｓｐｅｃｉｅｓ）に依存すると考えられる。対照的に、（Ｌｙｓ３）ＰＴＨ（ １〜３４）は両方の骨細胞アツセイにおいて増大した生物活性を示し、従って腎 臓と骨とにおいて両者におけるＰＴＨ受容体−アデニル酸シクラーゼ系を識別す ることかてきる。

（ｉｖ）　２ケ所で置換を行ったペプチド類似体それぞれ単独では活性に大きな 影響を及ぼさない３位および６位における置換基を、対をなすように導入して両 位置において置換されている一連の類似体を生成する。Ｌｙｓ’　Ａｌａ’ｂ− ＰＴＨおよびＨｉ　ｓ’　Ａ　１　ａ＠ｂ−ＰＴＨは、骨細胞および腎臓の膜に おいて低い受容体親和性および低いシクラーゼ刺激活性を示す。６位のグルタミ ンをアラニンまたはグルタミン酸によって、あるいは３位のセリンをリシンまた はヒスタミンによって単一の置換を行うと固有活性に及はす影響が最小になるた め、この結果は、ＰＴＨ受容体の効果的な活性化かりガントにおける３位と６位 との間の相互作用を含むことを示唆する。

６位においてアラニンかグルタミンによって置換されている類似体のヘリックス 含量はへリックス含量の減少を示すので、この相互作用は明らかにらせん構造を 維持する。対照的に、Ｌｙｓ”Ａ１ａ’およびＨｉｓ２Ａ１ａ”はすべての系に おいて完全アゴニストである。６位に小さい側鎖を有する場合には、３位の塩基 性残基は、らせん構造を不安定化する他のアミノ酸置換のように、不安定化作用 か顕著であり、また結合性に極めて有害である。

９位のアミノ酸は、天然のヒスチジンであるか、あるいは好ましくは容易に正電 荷を受け入れることができ、従ってらせん構造を変性することかできるもの、例 えばチロシン、トリプトファン、フェニルアラニン、ジアミノ酪酸、Ｄ−Ｎａｌ 、オルニチン、シトルリン、３，４または５−フルオロヒスチジン等本発明の他 の観点では、アッセイおよびその結果を用いて、さらに評価するために活性であ るこれらの変性ペプチドを選択して有用な医薬を製造することができる。

この結果はペプチド〔例えばＰＴＨ（１〜３４）〕をここに記載するように３位 、６位または９位で或いはそれらの組合わせて変性させ、特定の柔組織、膜また は細胞を用いてアッセイを実施し、受容体の結合性および活性を評価し、さらに 、特定の骨細胞を用いるアッセイを行いソリッド（Ｓｏｌｉｄ）骨受容体の結合 性および活性を評価することにより達成される。

アッセイの結果に基づき、４種の有用な医薬を決定する。すなわち （ｄＸｉ）さらに評価するために特定の組織、膜または細胞において高い結合性 および高い活性を有し、かつ高い特定な骨細胞結合性並びに高い活性を有するよ うなペプチドのアミノ酸類似体を、病気状態の組織、膜、細胞または骨を医学的 治療をするためのアゴニストとして独立的に選択し；あるいはまた（ｄＸｎ）低 い結合性および高い活性を有するペプチドアミノ類似体を特定の柔組織、膜、ま たは細胞において医学的に治療するための特定のアゴニストとしてまた高い骨細 胞結合性および低い活性を有するペプチドアミノ酸類似体を病気状態の組織、膜 、または細胞もしくは細胞に対するアゴニストとしてさらに評価するために独立 的に選択し：あるいはまた（ｄＸｉｉ）特定の柔組織、膜および細胞において、 低い結合性および低い活性を存しかつ病気状態の骨に対して高い特定の骨細胞結 合性および高い活性を存するペプチドをアゴニストとしてさらに評価するために これらのペプチドを個別に選択し：あるいはまた （ｄＸｉｖ）柔組織、膜または細胞中および骨細胞における高い結合性および低 い活性を、ホルモン異常およびガンの医学的治療する際のアンタゴニストとして 用いるために独立的に選択する。

次の異なる標準アッセイまたは毒性測定を有用な医薬の同定に従ってアミノ酸類 似体につき実施する。

１例においては、（ｄ）（ｉ）工程で特定の組織、膜または細胞における高い結 合性および高い活性ならびに特宵な骨細胞の高い結合性および高い活性はそれぞ れ対照ペプチドのものより約５０％以上高い。

１例においては、（ｄ）（ｉｉ）工程で特定な組織、膜または細胞における医学 的処置用アゴニストとしての高い結合性および高い活性は対照ペプチドのものよ り約５０％以上高く特定な骨細胞の低い結合性は約５〜θ％で骨細胞の低い活性 は約１０％以下である。

１例においては、（ｄＸｉｉ）工程で、特定な組織では低い結合性は１０％未満 てあり低い活性は骨の病気の条件に対し約５〜０％であり、さらに特定な骨細胞 の高い結合性および高い活性は約５０％以上である。

１例においては、（ｄ）（ｉｖ）工程で、ホルモン異常およびガンの医学的治療 に医薬アンタゴニストとして用いるために、柔組織、膜または細胞でもしくは骨 で高い結合性は約５０％より高く低い活性は本質的に５〜０％である。

柔組織等はヒトまたはウシ腎臓から誘導するのが好ましい。

このようにして、本発明の選択処理に基づき（ｇｌｕ“またはａ　１ａ２）ｂＰ ＴＨ（１〜３４）アミドは柔組織用または骨用のアゴニストとして有用である、 （ｄＸｉ）。

同様に、ｐｈｅ”　ｂＰＴＨ（１〜３４）アミドは柔組織等における病気の条件 に対する特定のアゴニストとして有用であるとして選択する、（ｄＸｉｉ）。

同様に、ｐｈｅ”　ｂＰＴＨ（１〜３４）アミドは骨における病気の条件に対す る特定のアゴニストとして有用であるとして選択する、（ｄＸｉｉ）。

また、ｓ　ｅ　ｔ”　ｂＰＴＨ（１〜３４）アミドは柔組織および骨における病 気の条件に対するアンタゴニストとして選択する、（ｄＸｉｖ）。

要約すると、本発明は受容体において生物学的に活性のあるコンホーメーション が約１２残基のループにより結合したＮおよびＣ末端の両親媒性らせんからなる ＰＴＨ（１〜３４）およびＰＴＨｒＰ（１〜３４）の構造に対するモデルを記載 する。

相互らせん状の相互作用は恐らく受容体の結合性および活性化の決定基を含む外 部に面する疎水性残基を存する疎水性中心を生ずる。２つのかかる外部に面する 位置で置換した類似体の合成はアミノ酸の３位、６位または９位か受容体の結合 および活性化の重要な決定基に寄与することを示すことを可能にする。

さらにこれらの位置での構造上の制約の描写は強いＰＴＨアンタゴニストの合理 的な設計を促進する。

本発明の特定例はセリンか１位にあり３位のアミノ酸が異なる次のものを含む。

原子団Ａ′はｈＰＴＨ，ｐＰＴＨ，ｂＰＴＨｌもしくはそれらのＺ＝−ＣＯＯＨ または−Ｃｏｏ−＋Ｍあるいは−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２の末尾をなす誘導体の１〜 ３４活性単位の残りのペプチド、もしくはｈＰＴＨまたはｂＰＴＨあるいはｈＰ ＴＨｒＰの残りの４〜８４配列から個別に選択する。

Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｌｙｓ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｐｈｅ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ａ’　； Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ａｌａ　−Ａ’　；８２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｔｈｒ　−Ａ’　；８２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｃｙｓ　−Ａ’　； Ｈ，Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−ｖａ ｌ　−Ａｓｐ　−Ａ’　；ＨｚＮ　−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｇｌｕ　−Ａ’　； ８２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ａｓｎ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｇｌｎ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｔ　−Ｌｙｓ　−Ａ’　； ＨｔＮ　−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ａｒｇ　−Ａ’　；ＨＥＮ　−３ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｈｌｓ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｖａｌ　−Ａ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａｔ　−ｔｉｅ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｔｒｐ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｍｅｔ　−Ａ’　； Ｈ２Ｎ　−８ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｐｒｏ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａ ｌ　−Ｎｌｅ　−Ａ’　；ＨＥＮ　−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｄ　−Ｎａｌ　−Ａ ’　；またはＨ２Ｎ　−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−０ｒｎ−Ａ’。

ここに記載した変性ペプチドのアミノ酸配列のすべてにおいては、Ｚ＝ニアミド 好ましい。Ｚ＝ニアミド類似体は次の任意の請求の範囲に記載したペプチド配列 か一層好ましい。

次表の類似体では、１位のアミノ酸はアラニンであり、３位のアミノ酸は変化す る。

ＨｔＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−Ａｌａ　−Ａ’　：Ｈ，Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａ ｌ　−Ｔｈｒ　−Ａ’　；ＨＥＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−Ｃｙｓ　−Ａ’　； ８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−４ａ ｌ　−Ａｓｐ　−Ａ’　：ＨｘＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｇｌｕ　−Ａ’　； Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ａｓｎ　−Ａ’　；ＨＪ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇ ｉｎ　Ａ’　：ＨｘＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｌｙｓ　−Ａ’　；ＨＥＮ　− Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ａｒｈ　−Ａ’　；ＨＪ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｈｌｓ 　−Ａ’　；ＨＥＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｖａｌ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａ ｌａ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ａ’　；ＨＥＮ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−１１ｅ 　−Ａ’　：１（＝Ｎ　−、へｌａ　−Ｖａｔ　−Ｐｒｏ　−Ａ’　；Ｈ７Ｎ− Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ａ’　；Ｈ２Ｎ　−ＡＩａ　−Ｖａｔ　−Ｔｒ ｐ　−Ａ’　；８２Ｎ　−Ａ＋１ａ　−Ｖａｔ　−Ｍｅｔ　−Ａ’　；！１２Ｎ 　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−Ｎｌｅ　−Ａ’　；１４２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　 −Ｄ　−Ｎａｌ　−Ａ’　；または８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−０ｒｎ−Ａ ’。

これらの類似体でより好ましいのはＡ′がｈＰＴＨの４〜３４アミノ酸配列、特 にＺ＝−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２の末尾をなす誘導体を有するものである。

本発明の付加的な特定例は１位および３位のアミノ酸がセリンで、６位のアミノ 酸か原子団Ｊで置換される次の類似体を含み、原子団Ｂ′はｈＰＴＨｌまたはｂ ＰＴＨ，またはｐ　ＰＴＨもしくはぞれらのＺ＝−ＣＯＯＨまたは−Ｃｏｏ−＋ Ｍまたはアミ１へ誘導体の７〜３４活性単位の残りのペプチドの残留物、あるい はｈＰＴＨまたはｂＰＴＨまたはｐＰＴＨまたはｈＰＴＨｒ　Ｐの７〜８４配列 から個別に選択する。

ＨＪ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｔｈｒ　−Ｂ’　；Ｈ ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｂ’　；Ｈ ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｔｙｒ　−Ｂ’　；１ イ２Ｎ　−５ｅｒ−Ｖａｌ−８ｅｒ−Ｇｌｕ　−ｌｉｅ　−Ａｓｐ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−８ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ａｓｎ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−３ｅｒ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｌｙｓ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ａｒｇ　−Ｂ’　； Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ　−［！ｅ　−Ｈｌｓ　−Ｂ’　： Ｈ２Ｎ　−Ｓｅｒ　−Ｖａｌ−５ｅｒ−ＧＩＩＪ　−１１ｅ　−＝Ｖａｌ　−Ｂ 　’　、Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｉ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−！、ｅｕ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｉｎｃ　 −Ｂ’　：Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｐｒｏ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ−Ｖａｔ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｐｈｅ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｔｒｐ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｍｅｔ　 −Ｂ’　；Ｈ，Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｙ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｎｌｅ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｄ　−Ｎ ａｌ　−Ｂ’　；または Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−０ｒｎ−Ｂ’ 。

本発明の他の特定例は原子団Ｂ′をｈＰＴＨまたはｐＰＴＨもしくはそれらのＺ ＝−ＣＯＯＨまたは−Ｃｏｏ−＋Ｍまたはアミド誘導体の７〜３４活性単位の残 りのペプチドあるいはｈＰＴＨ，ｂＰＴＨ，ｐＰＴＨｌまたはｈＰＴＨｒＰの残 りの７〜８４配列の残留物から選択する次のものを含む。次の類似体の表では１ 位のアミノ酸はアラニンであり３位はセリン、さらに６位は種々のアミノ酸であ る。

Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−［１ｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　 ；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−４１ａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ　−Ｔｈｒ　−Ｂ ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１ｉｅ　−Ｃｙｓ　− Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ−Ｇｌｕ−１ｉｅ　−Ｔｙｒ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−［１ｅ　−Ａｓｐ 　−Ｂ’　：Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ−Ｇｌｕ−ｔｉｅ　−Ｇｆ ｕ　−Ｂ’　：Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１ｉｅ　−Ａ ｓｎ　−Ｂ’　；８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ　− ３ｅｒ　−Ｂ’　：８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−ｌｉｅ　 −Ｌｙｓ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ 　−Ａｒｇ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−［１ ｅ　−Ｈｌｓ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ−［ １ｅ　−Ｖａｌ　−Ｂ’　；８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ− ［１ｅ　−Ｌｅｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ−［ １ｅ　−１１ｅ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ− １ｉｅ　−Ｐｒｏ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌｕ −ｌｉｅ　−Ｐｈｅ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇｌ ｕ−［１ｅ　−Ｔｒｐ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ−Ｇ ｌｕ−１ｉｅ　−Ｍｅｔ　−Ｂ’　；ｆ（２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ −Ｇｌｕ−１ｉｅ　−Ｇｌｙ　−Ｂ’　；Ｈ＝Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅ ｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ　−Ｎｌｅ　−Ｂ’　：８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ ｅｒ−Ｇｌｕ−１ｉｅ　−Ｄ　−Ｎａｌ　−Ｂ’　：または Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−０ｒｎ−Ｂ’。

本発明の他の特定例においては、原子団Ｂ′をｈＰＴＨまたはｂＰＴＨまたはｐ ＰＴＨ，もしくはそれらのＺ＝−ＣＯＯＨまたは−Ｃｏｏ−＋Ｍまたはアミド誘 導体の７〜３４活性単位の残りのペプチドあるいはｈＰＴＨ，ｂＰＴＨ，ｐＰＴ ＨまたはｈＰＴＨｒＰの残りの７〜８４配列の残留物から選択する次のものを含 む。

Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−ｒｌｅ　−Ｐｈｅ　−Ｂ’ 　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−［［ｅ　−５ｅｒ　− Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐｈｅ 　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｔ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−５ ｅｒ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　 −Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｕ　−１１ ｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｈｌｓ　−Ｇｌｕ　− ｔｉｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｉ、ｅｕ　−Ｇｌ ｕ　−ｔｌｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｈ４ｓ　− Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　：Ｈ２Ｎ　−５ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ 　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　−Ｌ ｙｓ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ−Ｖａｌ　 −Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｔ−Ｖａ ｌ　−Ｎｌｅ　−Ｇｉｌｌ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−３ｅｒ −Ｖａｌ　−Ｄ　−Ｎａｌ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ 　−３ｅｒ−Ｖａｔ　−０ｒｎ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；８ ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐｈｅ　−Ｂ’ 　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−５ｅｒ　 −Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐ ｈｅ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ 　−５ｅｒ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　− ［１ｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌ ｕ　−［１ｅ　−ＡＩａ　−Ｂ’　；８２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｈｌｓ　 −Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｌ ｅｕ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ａｌａ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ 　−Ｈｌｓ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　− Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｕ　−Ｂ’　；または Ｈ２Ｎ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｌｕ−Ｂ’ 。

ｈＰＴＨのそれらの活性１〜３４アミノ酸配列は、特にＺ＝−ＣＯＯＨまたＩｔ −Ｃｏｏ−十ＭまたＩｔ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２（７）末尾をなすそれらのアミノ 酸配列が好ましい。

次表の類似体では、１位のアミノ酸はセリンであり、３位のアミノ酸は変化する もので、６位のアミノ酸も変化し、９位のアミノ酸はヒスチジンである。原子団 Ｄ′はｈ　Ｐ　Ｔ　ＨｌまたはｂＰＴＨまたｆ４ｐＰＴＨ１もしくｌ；ｔＺ＝− ＣＯＯＨまたバーＣ００−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ，誘導体の１０〜３４ 活性単位の残りのアミノ酸あるいはｈＰＴＨ，ｂＰＴＨ，ｐＰＴＨｌまたはｈＰ ＴＨｒＰの残りのｌＯ〜８４アミノ酸の残留物から選択する。

Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−３ｅｒ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ８２Ｎ−Ｓｅｒ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｐｈｅ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ８２Ｎ−３ｅｔ　−１１ａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−３ｅｒ　−Ｌ ｅｕ　−Ｍｅｔ　−）１ｉｓ　−Ｄ’　： Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−３ｅｒ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−円】ｅ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐｈｅ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｔ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｐｈｅ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　；または Ｈ２Ｎ−５ｅｒ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｎｌｅ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； 次表の類似体で１位のアミノ酸はセリンて、Ｂ３はセリンであり、Ｊはグルタミ ンで９位のアミノ酸Ｘしか異なっていない。

Ｄ′は上記のものである。

Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ａｌａ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｓｅｔ　−Ｄ’　； ＨＪ−Ｓｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−！ｌｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅｕ 　−Ｍｅｔ　−−Ｌｅｕ　−Ｄ’　； ＨｘＮ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｐｈｅ　−Ｄ’　； ＨＪ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅｕ 　−Ｍｅｔ　−−Ｔｙｒ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｇｌｕ　−Ｄ’　： Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｌｙｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｇｌｎ　−Ｄ’　；または Ｈ２Ｎ−３ｅｒ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｌｅ ｕ　−Ｍｅｔ　−−Ｎｌｅ−Ｄ’。

次表のアミノ酸類似体では、１位のアミノ酸はアラニンで、３位のアミノ酸はセ リンで、６位のアミノ酸Ｊはグルタミンであり、９位のアミノ酸Ｘが異なるにす ぎない。Ｄ′は上記のものである。

８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ａｌａ−Ｄ’； Ｈ２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−３ｅｒ−Ｄ’； ８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｌｅｕ−Ｄ’； ８２Ｎ−Ａｌａ、　−Ｖａｔ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐ ｈｅ　−Ｍｅｔ　−Ｐｈｅ　−Ｄ’　、 ＨＥＮ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｔｙｒ−Ｄ’； Ｈ，Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｇｌｕ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｌｙｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｔ　−５ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｇｌｎ　−Ｄ’　； ８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｎｌｅ　−Ｄ’　；または ８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−４ｉｅ　−Ｇｉｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｄ　−Ｎａｌ　−Ｄ’　。

次表の類似体では、１位のアミノ酸はアラニンであり、Ｘはフェニルアラミンで ３位および６位のアミノ酸（Ｂ、Ｊ）が異なるにすぎない。Ｄ′は上記のもので ある。

８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； Ｈ２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−５ｅｒ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ＨｚＮ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐｈｅ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ＨＥＮ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−３ｅｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−３ｅｒ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ−Ｄ’； １４２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｇｌｎ　−Ｐ ｈｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−３ｅｒ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　： ＨＪ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−１ｉｅ　−Ｐｈｅ　−Ｐｈｅ 　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ８２Ｎ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−ｒｌｅ　−Ｐｈｅ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　； ＨｚＮ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｎｌｅ　−Ｇｌｕ　−［１ｅ　−Ｐｈｅ　−Ｐｈ ｅ　−Ｍｅｔ　−）１ｉｓ　−Ｄ’　；または ＨＥＮ−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｄ　−Ｎａｌ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−Ｐｈｅ　 −Ｐｈｅ　−Ｍｅｔ　−Ｐｈｅ　−Ｄ’　。

ポリペプチド合成の詳細な説明 本発明に係るポリペプチドはこの技術で知られている合成技術により調製される 。米国特許第４．３１８．９０５および３，５３１、２５８号の技術は、特にこ こに参考として記載する。本発明の重要な特徴は生物学的に活性な合成ポリペプ チドの調製であり、少なくとも３のアミノ酸Ｂ１または６のアミノ酸、あるいは ９のアミノ酸Ｘ１もしくはそれらの組合わせを天然の、変わったまたは天然の合 成のアミノ酸類似体で置換することである。

本発明のポリペプチドは当業者に知られている任意の技術により合成することが できる。極めて有効な多くの技術の優れた摘要書はＪ、Ｍ、　Ｓｔｅｗａｒｔお よびＪ、Ｄ、　Ｙｏｕｎｇ　、ｒｓｏｌｉｄ　ＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅ　５ｙ ｎｔｈｅｓｉｓ　Ｊ　、第２版、Ｐｉｅｒｒｅ　Ｃｈｅｍ、社、米国イリノイ州 、ロツクフす−ド、（１９６９）ならびに固相ペプチド合成のためのＪ、　Ｍｅ ｉｎｅｎｈｏｆｅｒ、ｒＨｏｒｍｏｎａｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　Ｐｅｐ ｔｉｄｅＳＪ、Ｖｏｌ、　２、ｐ、４６　、　ＡＣａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　 に−７−ヨーク）　、１９７３、さらに通常の溶液合成のためのＥ、　５ｅｈｒ ｏｄｅｒおよびに、　Ｌｕｂｋｅ、ｒＴｈｅ　ＰｅｐｔｉｄｅｓＪ　、　Ｖｏｌ 、　１　、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　にコーヨーク）、１９６５に見出 すことかできる。

一般に、これらの方法は１種または２１１以上のアミノ酸あるいは適当に保護し たアミノ酸を成長するペプチド鎖に連続添加することを含む。通常、第一アミノ 酸のアミノ基またはカルボキシル基を適当な保護基により保護する。次いて保護 したかまたは誘導したアミノ酸はどちらもアミド結合を形成させるために適当な 条件下で不活性固形支持体に結合させるか適当に保護されたコンプリメンタリ− （ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）　（アミノまたはカルボキシル）基を有する次 のアミノ酸を連続して添加することにより溶液中で用いることができる。次いで この新しく添加したアミノ酸残基から保護基を除去し次いて次のアミノ酸（適当 に保護した）を添加したりする。すべての所望のアミノ酸を適当な配列で結合さ せた後、順次にまたは同時に任意の残りの保護基（および任意の固形支持体）を 除去して、最終的なポリペプチドを生成する。この一般的方法を簡単に改良して 、成長する鎖に一種以上のアミノ酸を同時に添加することかでき、例えば保護し たトリペプチドを適当に保護したジペプチドと結合させ（キシル中心をラセミ化 しない条件下）保護基を除去した後に、ペンタペプチドを形成することかできる 。

本発明に係る化合物を調製する特に好ましい方法は固相ペプチド合成を含む。

この特に好ましい方法では、アミノ酸のα−アミノ官能基を酸または塩基に反応 し易い基により保護する。かかる保護基はペプチド結合形成の条件に対して安定 であり、一方成長するペプチド鎖の破壊またはそこに含まれる任意のキシル中心 のラセミ化を起こさずに容易に除去することかできるという特徴を有する。適当 な保護基はｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏａ）、ベンジルオキシカルボニル （Ｃｂｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシ力ルポニル、ｔ−アミルオキシカル ボニル、イソボルニルオキシカルボニル、α、α−ジメチルー３．５−ジメトキ ベンジルオキシ力ルボニル、０−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ −ブチルオキシカルボニル、９−フルオロエニルメチルオキシカルボニル等であ り、中でもｔ−ブチロキシカルボニル（Ｂｏｃ）である。

特に好ましい側鎖保護基はアルギニンに対してはニトロ、ｐ−トルエンスルホニ ル、４−メトキシベンゼンスルホニル、Ｃｂｚ、Ｂｏａおよびアダマンチルオキ シカルボニルであり、チロノンに対してはベンジル、０−ブロモベンジルオキシ カルボニル、２，６−ジクロロベンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、シク ロペンチルおよびアセチルであり、セリンに対してはベンジルおよびテトラヒド ロピラニルであり、ヒスチジンに対してはベンジル、ｐ−トルエンスルホニルお よび２，４−ジニ１−ロフェニルである。

Ｃ末端アミノ酸は適当な固形支持体に付着させる。上記合成に対して有用である 適当な固形支持体は段階縮合保護基除去反応の試薬および反応条件に対して不活 性であり、用いる媒質中で不溶性であるような材料である。適当な固形支持体は クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン重合体、ヒドロキシメチル−ポリ スチレン−ジビニルベンゼン重合体等であり、特にクロロメチルポリスチレン− １％ジビニルベンゼン重合体である。化合物のＣ末端かグリシンアミドである特 定の場合に、特に有用な支持体はＰ、　Ｒｉｖａｉｌｌｅ等によりｒｌ（ｅｌｖ 、　Ｃ旧ｍ、　Ａｃｔａ、。

５４２７７２　（１９７＋）Ｊに記載されているベンズヒトリルアミノポリスチ レンージビニルヘンゼン重合体である。クロロメチルポリスチレンーンビニルベ ンゼン型の樹脂への結合は、Ｎ　ａ　ｌ　ｐ　ｈ　ａ−保護アミノ酸、特にＢｏ ｃアミノ酸（そのセシウム、テトラメチルアンモニウム、トリエチルアンニモウ ム、４，５−ジアザビシクロ（５，４，０）ウンデカ−５−エン、または同様の 塩をエタノール、アセトニトリル、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等 の中で、特にＤＭＦ中のセシウム塩として）、高い温度例えば４０°〜６０°Ｃ １好ましくは約５０°Ｃて、約１２〜４８時間、好ましくは約２４時間、クロロ メチル樹脂と反応させることにより行う。Ｎ　ａ　ｌ　ｔ　ｂ　′″−Ｂｏｃ− Ｂｏｃ−アミノ酸−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）／１−ヒドロキ シベンザトリアゾール（ＨＢ　Ｔ）媒介カップリングを約２〜２４時間、好まし くは約１２時間、約１０’〜５０℃の温度、好ましくは２５℃で、ジクロロメタ ンまたはＤＭＦのような溶媒、好ましくはジクロロメタン中で行うことによりベ ンズヒドリルアミン樹脂に結合する。連続して保護したアミノ酸の結合は業界で 良く知られているような自動ポリペプチド合成装置て行うことかてきる。Ｎ　１ １１９　ｂ・−保護基の除去は、例えばトリフルオロ酢酸を、塩化メチレンに溶 解した溶液、塩化水素をジオキサンに溶解した溶液、塩化水素を酢酸に溶解した 溶液、または他の強酸溶液の存在下で、好ましくは５０％トリフルオロ酢酸のジ クロロメタン溶液の存在下周囲温度で実施することができる。

それぞれの保護したアミノ酸は約２．５モル過剰に導入するのか好ましくカップ リングはジクロロメタン、ジクロロメタン／ＤＭＦ混合物、ＤＭＦ等、特に塩化 メチレン中、周囲温度で実施することかできる。カップリング剤は通常ＤＣＣの ジクロロメタン溶液であるか、Ｎ、　Ｎ’−ジ−イソ−プロピルカルボジイミド または他のカルボジイミド単独もしくはＨＢＴＳＮ−ヒドロキシスクシンイミド 、他のＮ−ヒドロキシイミドあるいはオキツムの存在下でもよい。他の保護した アミノ酸活性エステル（例えばｐ−ニトロフＬニル、ペンタフルオロフェニル等 ）または対称無水物を用いることができる。

固相合成の終わりに、十分に保護したポリペプチドをベンジルエステル霞の樹脂 製支持体から除去し、開裂（ｃｌｅａｖａｇｅ）は１０６〜５０°Ｃ１好ましく は約２５°Ｃの温度で、約１２〜２４時間、好ましくは約１８時間、プロリンＣ 末端を存するペプチドに対してはアルキルアミンまたはフルオロアルキルアミン を用いてアミツリシスするか、或いはグリシンＣ末端を有するペプチドに対して は例えばアンモニア／メタノールまたはアンモニア／エタノールを用いてアミツ リシスすることによる。あるいはまた、ペプチドは例えばメタノールを用いたエ ステル交換、次いでアミツリシスにより樹脂から除去することができる。保護し たペプチドはこの時点てＨＰＬＣまたはシリカゲルクロマトグラフィーにより精 製することができる。

特定のペプチド合成および精製の工程は次の実施例で記載し、表２．３および４ に要約する。

有用性 本発明の変性ペプチド類似体、すなわち３．６または９位で変性したかまたは３ ，６または９位の置換を組合わせて変性アミノ酸を有するようなＰＴＨ等の類似 体は特にヒトにおいて、副甲状腺ホルモンに関連する医学的疾病または病気の治 療のためのアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。これらの病気等 はここに記載されている。

投与 これらの化合物および組成物を投与するための正確な薬量および規制は治療を受 ける個々の被験者の要求、治療の形式、苦痛の程度または必要度および、もちろ ん開業医の判断により必然的に決まる。一般に、非経口投与は一層吸収に依存す る他の投与方法よりも低い投与量か要求される。しかし、特定の薬剤、例えばジ メチルスルホキシドは皮膚を通してポリペプチド化合物の移動を促進するよって ある。

組成物 本発明の他の面は活性成分として、本発明に係る化合物を含む医薬組成物に関し 、この医薬組成物は医薬として受け入れることかできる無毒性担体（賦形剤）と 混合して本発明に係る化合物を含む。上述したように、かかる組成物は非経口（ 皮下、筋肉内または静脈内）投与用に使用するために特に液体溶液または懸濁液 の形態で調製することがてき、膣または直腸投与での使用には特にクリームおよ び坐剤のような半固体の形態で：経口または口内投与には特に錠剤またはカプセ ルの形態で、もしくは鼻腔内には特に散剤、鼻の滴剤またはエーロゾルの形態で 調製することかできる。

組成物は単位投与量の形態で都合よく投与することができ製薬業界でよく知られ ている任意の方法、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎのｒＰｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａ ｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　Ｊ米国ペンシルベニア州イーストンのＭａｃｋ　Ｐｕｂ ｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　１９７０に記載されているような方法によ り調製することかできる。非経口投与のための組成物は普通の賦形剤として滅菌 水または生理的食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコ ール、野菜由来の油、水素添加したナフタレン等を含存することができる。膣ま たは直腸投与のための組成物、例えば座剤は賦形剤として、例えばポリアルキレ ングリコール、ワセリン、ココア乳脂等を含存することかできる。吸入投与のた めの組成物は固体で、賦形剤として例えばラクトースを含むがあるいは鼻の滴剤 の形態で投与するために水性または油性溶液である場合がある。口内投与のため には、賦形剤には糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、プ レゲリナチンド（ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔ　１ｎｅｄ）澱粉、等か含まれる。

しばしば本発明に係る化合物を長期間、例えば１回投与から１週間〜１年の間被 験者に与えることが望ましい。種々の徐放型投与形態、貯蔵型投与形態または移 植投与形態を用いることかできる。例えば、投与形態は体液中で溶解度の低い、 例えば、（ａ）リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、バモイツク酸（ ｐａｍｏｉｃ　ａｃｉｄ）　、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ −またはジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸等のような多塩基酸との酸付加塩 ：　（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウ ム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等、の多価金属カチオンを用いた、あ るいは例えばＮ、　Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンまたはエチレンジアミン から形成した有機カチオンを用いた塩：もしくは（Ｃ）例えばタンニン酸亜鉛塩 のような（ａ）および（ｂ）の組合わせのような化合物の医薬として許容し得る 無毒性塩が含まれる。さらに、本発明に係る化合物、好ましくは、前述のような 比較的不溶性の塩を注射液に適当なゲル中、例えばゴマ油とのモノステアリン酸 ゲルに配合することができる。特に好ましい塩は亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パ モエート（ｐａｍｏａｔｅ）塩等である。カプセル封入するために、注射するた めの他の形態の徐放型貯蔵組成物は、ポリ乳酸／ポリグリコール酸重合体のよう な徐々に分解する無毒性の、抗原性のない重合体で、例えば米国特許第３．７７ ３．９１９号に記載されているような重合体中に分散させた化合物または塩を含 む。また化合物または上述したような比較的不溶性の塩は特に動物に使用するた めにコレステロール基材シラスティック小球中に配合することができることが好 ましい。さらに徐放型組成物、貯蔵型組成物または移植組成物、例えばリポソー ムは文献でよく知られている。例えば、　ｒＳｕｓｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　Ｃｏ ｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅ ｍｓＪ　、　Ｊ、Ｒ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、　Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、　 Ｉｎｃ、、ニューヨーク、１９７８参照。

次の実施例は説明および例示のために与えるにすぎない。いずれにしてもこれら 例に制限されるものではない。

材料−一合成ウシＰＴＨ（１〜３４）を米国カリフォルニア化、トランスのＢａ ｃｈｅｍ、　［ｎｃ、から得た。合成ヒトＰＴＨｒＰ（１〜３４）アミドを米国 ペンシルベニア州、ウェストポイントのＭｅｒｃｋ　５ｈａｒｐ　ａｎｄ　Ｄｏ ｈｍｅから得た。合成ウシ（Ｔ　ｙ　ｒ　”）ＰＴＨ（７〜３４）アミドおよび （Ｔｙｒ”）ＰＴＨ（７〜３４）アミドを米国カリフォルニア化、ベルモントの Ｐｅｎ１ｎｓｕｌａＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、から得た。これらの ペプチドの純度はＨＰＬＣにより９５％を上回っていた。適当なペプチド組成物 はアミノ酸の定量分析により確かめた。

ＣＤ分光分析法。遠紫外線円二色性（ＣＤ）スペクトルを（＋）１０−カンファ ースルホン酸およびエビアンドステロン（ｅｐｉａｎｄｏｓｔｅｒｏｎ）で調整 したＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　ＳＡ　Ｊｏｂｉｎ　Ｙｖｏｎ円二色計で１．０ｍ ｍセルで２５±１℃のリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）中で得た。ペプチドを０．１ 〜ｏ、３ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で分析した。２２２ｎｍの残基当たり平均モル楕 円率（（Ｑ）２２２ｎｍ−、ｄｅｇ−ｃｍ”　／ｄｍｏｆ）を用いてＴａｙｌｏ ｒおよびＫａｉｓｅｒの方法（参考文献２９）によりα−らせん性の評価を得た 。

ペプチド合成および精製−一ペプチド合成を米国カリフォルニア化、フォスター シティのＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｍｏｄｅｌ　４３０ＡＰｅｐ ｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて実施した。ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｏ ＣＨ２−Ｐａｍ樹脂を固形支持体として用い、次のｔ−ＢＯＣ（タート−ブチロ キシカルボニル）アミノ酸誘導体：Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）　、Ａｓｐ　（ＯＢｚ　 １）、Ｇｌｕ　（ＯＢｚ　１）、Ｈｉｓ　（ＤＮＰ）　、Ｈｉ　ｓ　（Ｚ）　、 Ｌｙｓ　（ＣＩ　−Ｚ）　、５ｅｔ（Ｂｚ　１）　、Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）　、 Ｔｒｐ　（ＣＨＯ）　、およびＴｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）を用いた。キャッピングサ イクルを含む標準プログラム（予め形成した対称無水物および予め形成したＨＯ にここにそのまま参考として記載した米国特許第４．３１８．９０５号に見い出 される。

本発明を次の実施例により説明する。本発明は、これ等の実施例により制限され るものではない。

合成における変更を以下に記載し、表２，３および４に要約する。

標準ｔ−Ｂｏｃサイクルは活性化、溶媒交換、およびカップリンク処理のために 存在し；それぞれＡＣＴ、Ｃ０ＮＣおよびＲＶサイクルと称する。標準ｔ−Ｂｏ ｃ静的実験ファイル中の−組のベッセル（ｖｅｓｓｅｌ）サイクル割り当てを応 用バイオシステムで実施する試験および合成の最適化に基づき各アミノ酸のため に選定した。

静的実験において割り当てたサイクルの記述は「アクチベーターサイクル（ＡＣ Ｔ）Ｊ、「コンセントレータ−サイクル（ＣＯＮＣ）Ｊおよび［リアクションベ ツセルサイクル（ＲＶ）Ｊの下に後に記載する。合成のだめの他のベッセルサイ クルも含まれる。

Ａｒｇ、Ａｓｎ、およびＧｉｎを除いてすべてのアミノ酸をＤＣＭ中の０．５Ｍ 　ＤＣＣの１ミリモルを用いて対称無水物に活性化した。この反応の副産物、Ｄ ＣＵはほとんど直ちに沈殿しはじめた。各サイクルのために当てたすべての活性 化時間は８分であった。これら８分のうち４分は溶液から過剰のＤＣＭをパージ ングし、約２ｍｆｆのＤＣＭを除去するためのものであった。また、パージング はＤＣＵ沈殿を補助する溶液を冷却した。

活性化か完了した際にアミノ酸溶液をＡＣＴからＣ０ＮＣに移し換えた。移動管 の完全な洗浄を先に行い次いでベッセル間の各移動を行った。この方法は移動の 前後で管をきれいにし、サイクル間にアミノ酸を持ち越す可能性を排除した。

ａｂｏｃ４サイクル用に活性化アミノ酸溶液をＣ０ＮＣに移し変える時間はａｂ ｏｃｌ、ａｂｏｃ２またはａｂｏｃ３のだめのものより長く、この場合もａｂｏ ｃ４ＡＣＴサイクル中に取り扱われる一層大きな溶液体積のためである。ＡＣＴ の２度のＤ　ＣＭ洗浄液をすへての単一カッブリングサイクルにおけるＣ０ＮＣ に移し換えた。表２に記載する時間は初期の活性化時間およびバーノング時間を 含む。

活性化およびパージングの終りに、アミノ酸溶液をＣ０ＮＣに移し換える準備を した。移動ラインの完全な洗浄を先に行い次いてベッセル間の各移動を行った。

この方法により移動の前後で管を浄化してサイクル間の持ち越しの可能性を排除 した。

活性化したアミノ酸溶液をＡＣＴの１回のその後のＤＭＦ洗浄液と一緒にＣ０Ｎ Ｃに移し換えた。

ＨＯＢｔ−エステル活性化サイクルは対称無水物サイクルの２倍量のＤＣＵを生 じ；従って、移動後に一層広範な洗浄処理が要求された。この洗浄は２回の５０ ：５０　ＤＣＭ：ＭｅＯＨ洗浄次いで３回のＤＣＭ洗浄からなる。第１ＤＣＭ： ＭｅＯＨ洗浄はほとんどベッセルを満たし、パージング中にベッセルの上端に運 ばれだすへてのＤＣＵをこの洗浄で溶解した。第２０ＣＭ：ＭｅＯＨ溶液はフリ ットに付着したＤＣＵの除去を確実にした。残留するＭｅＯＨをその後３回のＤ ＣＭ洗浄で洗い落とした。

鰺１ 表４ コンセントレータ−サイクル　パージング計画ｃｂｏｃｌ　Ａｌａ　１３分　４ 分　２ｍＬ　１５℃／第１ＤＭＦ放出５分　２ｍＬ　後につけた ４分 Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　ｌｉｅ、　につけたＭｅｔ、　Ｍｅｔ（０）。

Ｐｈｅ、　Ｐｒｏ。

５ｅｒ（Ｂｚｌ）。

Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）。

Ｔｒｐ　”、　Ｖａｔ ｃｂｏｃ３　Ｌｅｕ　１４分　１０分　１ｍＬ　５°Ｃ／第１ＤＭＦ放出Ｔｒｐ （Ｃ）１０）１　４分’　ａｍＬ　後につけたｃｂｏｃ　４　Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ ）　６分　５分”１ｍＬ１５℃／直ちにつけたＴｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）　１分”　３ ｍＬ ｃｂｏｃ　５　Ｇｌｙ、　６．５分　６分　１ｍ１　１０℃／直ちにつけたＨｉ ｓ（Ｔｏｓ）　０．５分　− ダブルカップリング。

ｃｂｏｃ　ｌｄ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　０分　０分　−−−１０°Ｃ／ヒーターは 使ｃｂｏｃ　２ｄ　Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）　６．５分　６分　１ｍＬ　１０°Ｃ／ヒ ーターは使ｃ　ｒｅｃｐｌ　すべて単一　０分　０分　−−−−ｉｏ℃／ヒータ ーは使カップリング　用せず したアミノ酸 本　多数の短いパージング Ｕ　ヒータ一温度設定は５°Ｃである Ｃリカツブリングサイクルは標準的には存在するが、標準ｔ−Ｂｏｃ実験には割 り当てられなかった。このサイクルは簡単にカップリング溶媒としてＤＣＭを用 いて任意のアミノ酸をリカツブリングするために選定された移動サイクルである 。このサイクルは初期の溶媒ＤＣＭか異なるカップリング溶媒ＤＭＦと交換され ないのでパージングまたはヒーターの使用が含まれない。アミノ酸溶液をさらに Ｃ０ＮＣの２回のＤＣＭ洗浄と一緒にＲＶに移し換える。

ｃ　ｒｅｃｐｌサイクルは通常の単一カツブリングＡＣＴサイクルおよびｒｅｃ ｐｌ　２またはｒｅｃｐｌ　２ｒのどちらても、ＤＣＭＲＶリカツブリングした サイクルと共に用いる必要がある。

ＲＶサイクルには２つの形式があり、樹脂試料を用いるものと用いないものであ る。樹脂サンプリングサイクルは下側ＲＶ弁ブロックアップ（ｂｌｏｃｋ　ｕｐ ）から隔壁フィッティング（ｆｉｔｔｉｎｇ）を通りＲＶに至るサンプリングラ インを数回洗浄した。この洗浄はライン中の樹脂、ＴＦＡ、またはカップリング 溶液の蓄積を防止する。

樹脂−サンプリングサイクルは、サイクル塩の末尾にｒｒＪツブリング後に２つ の樹脂試料を用いている。ｒｒｒＪサイクルは設置するためにこのディスク上に 含まれる。同一の数字を有するＲＶサイクル、例えばｒｂｏｃ　ｌおよびｒｂｏ ｃ　１ｒは、後者のサイクルで樹脂サンプラーを用いることを除き、同一のサイ クルである。

実施例３ 単一カツブリングサイクルー−ｒｂｏｃ　１，２．ｌｒ、２ｒ、Ｉｒｒ、２ｒｒ すへての単一カツブリングＲＶサイクルは次の型に適合させる： １、　３３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液で８０秒間２、５０　”　１８．５分間 ３、　３回のＤＣＭ洗浄 ４、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間５、〃 ６、　５回のＤＭＦ洗浄 ７　カップリング期間 ８．５回のＤＣＭ洗浄 ２種の単一カツブリングＲＶサイクルがあり、これらはカップリング期間の長さ 、すなわち保護基を取り除いた樹脂結合ペプチドが活性化したアミノ酸と共に溶 液状態である場合の時間が変わるにすぎない。この期間は「受は取る用意をした 」段階ｃ　１サイクルおよびその関連する樹脂サンプリングサイクル、ｒｂｏｃ 　１ｒ６ ５回の広範なりＭＦ洗浄はカップリング前に樹脂ＲＶ、および関連するラインか らＤＩＥＡの完全な除去を確実にする。これによりＲＶは容易にカップリング溶 液をＣ０ＮＣから受け取る用意ができ、結果としてカップリング期間をあとに続 けることができる。

カップリング期間に次いで直ちにカップリングしてないアミノ酸およびＤＭＦを 洗浄除去するために５回のＤＣＭ洗浄を行う。第２の機能として、これらの洗浄 はサンプリング溶液を提供する。１種の樹脂試料を用いた場合、少なくとも洗浄 は試料のための媒質を提供する。ダブル樹脂サンプリングサイクル（すなわち、 ｒｒ　ｒＪサイクル）は第３および第４洗浄を用いて２種の樹脂試料を集める。

すへてのダブルカップリングＲＶサイクルは次の型を用いる＝１、　３３％ＴＦ ＡのＤＣＭ溶液で８０秒間２、５０　１８．５分間 ３．３回のＤＣＭ洗浄 ４、　１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間５、　〃 ６．５回のＤＭＦ洗浄 ７、カップリング期間 ８．３回のＤＣＭ洗浄 ９、　１Ｏ％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で４５秒間１０．１回のＤＭＦ洗浄 １１．３回のＤＣＭ洗浄 一最初の半分の終点− １２、第２カップリング期間 １３．１回のＤＭＦ洗浄 １４　５回のＤＣＭ洗浄 最初の半分のダブルカップリングサイクルは単一カップリングサイクルと同様で ある。上記表の最初の６つの処理は単一カツブリングＲＶサイクル中の同等の処 理と全く同しである。しかし１、ダブルカップリンクサイクルのためには、一層 長い全カップリング時間か必要である。ｒｂｏｃ　ｌｄおよびｒｂＯＣイＩＬ； 　ｒｂｏｃ　炎亘およびｒｂｏｃ　２ｄｒサイクルはそれぞれ２６分（第一）カ ブプリング期間を有する。

他の違いは洗浄中にカップリング相に次いで直ちに表われる。

３回のＤＭＦ洗浄はすへての余分のアミノ酸を除去し次いて樹脂を一以上の塩基 で処理する。

ペプチド樹脂はチオフェノールのジメチルホルムアミド溶液中て処理してヒスチ ジン残基を脱ブロックする（参考文献３０）。

実施例５ ペプチド樹脂からのヒスチジンのＤＮＰ基の脱保護リアクシコンベッセル中のペ プチド樹脂は樹脂をスラリーにするのに必要な最少量の精製したＤＭＦに懸濁さ せた（Ｉｇ樹脂当たり約５ｍｆｆ１）。各１モルＤｎｐヒスチジンの存在に対し ２０モルのチオフェノール（０，１０２ｍＬ／ｍｍｏＩりを添加した。ヘラセル を周囲温度で１時間振とうした。チオリシスは迅速であり恐ら＜１５分て完了し た。ＤＭＦ、水、ＥｔＯＨｌおよびＤＣＭで樹脂を完全に洗浄しペプチド樹脂を 乾燥させた。

次いてペプチド樹脂を通常の方法で開裂させた。普通少量の著しく黄色いＤｎｐ −チオフェノールは樹脂に吸収され開裂後にこれをペプチドで抽出した。Ｄｎｐ −チオフェノールは標準精製処理でペプチドから容易に除去された。

−５〜０°Ｃで６分間接触させた。

Ｎ末端ｔ−Ｂｏ　ｃ保護基を除去した後、ペプチドのブロックをはずして無水フ ッ化水素を用いて樹脂から開裂させた。

ペプチド樹脂をＨＦ中−５°〜０°Ｃで５０分間反応させた後、ＨＦを窒素流に よって１０〜１５分以内に簡単に蒸発させた。

この処理中副反応を防止するために、リアクションベッセルを一５°Ｃ〜０°Ｃ に保つことが重要であった。ＨＦを除去した後、エーテルをリアクションベッセ ルに添加してペプチド−樹脂−スカベンジャー混合物を約３０秒間かき混ぜた。

次いでエーテル溶液をガラス漏斗を介して濾過した。２回以上繰返すことで、こ のエーテル洗浄はほとんどのスカベンジャーを除去した。

ペプチドは３０％酢酸中で混合物をかき混ぜることによりペプチド−樹脂混合物 から抽出した。３０％酢酸中で溶けないこれらのペプチドに対しては、一層高い 濃度の酢酸が推奨される。

代表的に、１ｇのペプチド樹脂に対して約３０ｍＬの３０％酢酸を用いた。酢酸 抽出物をエーテル抽出で用いた同様のガラス漏斗を介して異なる濾過用フラスコ 中に濾過した。ペプチドの完全な抽出を確実にするために、約３０ｍＬの１０％ 酢酸を用いて抽出処理を繰返し７た（２回）。酢酸溶液を凍結乾燥する前に水で 希釈した。一層薄い酢酸溶液は凍結したままであるか、濃厚な酢酸水溶液は凍結 乾燥中に融解する場合がある。

次いでこの溶液を凍結乾燥して粗ペプチドを得た。

セリンを含んでいるペプチドには、ＨＦ開裂中にＮ−０シフトが発生する場合が ある。残留しているホルミル基はＩＭエタ分間処理することにより除去した。

トリプトファンのホルミル（ＣＨＯ）保護基はＨＦ−トリフルオロメタンスルホ ン酸安定種である。合成されたペプチドのＴＲＰ（ＣＨＯ）による脱ホルミル化 は強酸開裂後に別々の工程を必要とする。Ｔｒｐ（ＣＨＯ）の脱ホルミル化は最 も熟練した場合でさえ問題か生じることがあるので以下の処理に厳密に従う必要 かある。

１、　Ｔｒｐ（ＣＨＯ）含存ペプチドを６ＭグアニジンＨＣＩ中に溶解して濃度 １−１０ｍｇ／ｍｊ’とする。

２、　溶解したペプチドに対しＵＶスペクトル分析を行う。

Ｔｒｐ　（ＣＨＯ）含存ペプチドに対しては、３００ｎｍの吸光度の方が２８０ ｎｍの吸光度より大きい。

３、　ペプチド−グアニジン溶液を水浴で冷却する。電磁かき混ぜ棒を用いて、 溶液を０℃になるまでかき混ぜる。

４、　最終濃度ＩＭを生ずるのに十分なエタノールアミンをペプチドグアニジン 溶液に添加する（１ｍＬエタノールアミン／１６．６ｍＬペプチドグアニジンは エタノールアミン中で１Ｍ溶液を生ずる）。エタノールアミンを添加した後、こ の溶液のｐＨは１０〜１１の間である。

５、　０°Ｃて５分間かき混ぜ次いて濃ＨＣＩをｐＨ７に至るまで添加すること により冷却する。

６、このペプチドにつきＵＶスペクトル分析を行ってトリプトファンの完全な脱 ホルミル化を確実にする。保護されていないＴｒｐ含有ペプチドに対しては２８ ０ｎｍの吸光度の方が３００１ｍの吸光度より大きい。

７、このペプチドをゲル濾過カラムて脱塩するかあるいはグアニジノおよびエタ ノールアミンを除くために透析することかできる。あるいはまた、この溶液を精 製するために調製用高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムにがけ る。

８　予防措置 ａ、　「試験」脱ホルミル化を１ｍｇのペプチドに対し行う。

ｂ、　ヘ−７’千ドを溶解した後、適当なＨＰＬＣシステムのクロマトグラフで 分析する。カラム：Ｃ−８、緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ　、緩衝液Ｂ：０．１％ ＴＦＡ／６０％ＣＨ３ＣＮ；グラジェント２４５分間で０〜１００％Ｂ０ 仁脱ホルミル化した後、再びクロマトグラフて分析して生成物の完全性を確実に する。脱ホルミル化した生成物はわずかに短かい保持時間を存する。

脱ホルミル化した租ペプチド調製物を逆相カラム（ＤｅｌｔａＰａｋ　Ｃ＋ｓ、 ３００人）で０．１％トリフルオロ酢酸中のアセトニトリルのグラジェント（０ 〜６０％、２４ｍＡ／分）を用いて脱塩し次いて２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝 液、ｐＨ６，４中でＮａＣｌグラジェント（０−０，５Ｍ）を用いて溶出したＴ ＳＫ５３５ＣＭカラム（７，５Ｘ　１５０ｍｍ）で陽イオン交換クロマトグラフ ィーを行った。

最終的な精製はＶｙｄａｃカラム（２１８ＴＰ　１０２２）（０，２２ｘ２５ｃ ｍ）で０．１％トリフルオロ酢酸中の２５〜３５％アセトニトリルグラジェント 、１０ｍ１１分の流速を用いて逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） により行った。精製の進行はプラズマ脱着質量分析法および分析用ＨＰＬＣを用 いて行った。ペプチドの最終的純度は９５％より高かった。適当なペプチド組成 物はアミノ酸の定量分析により確かめた。

一般的処理については、Ｍ、　Ｃａｒｌｑｕｉｓｔ等のｒ（１９８４）　Ｊ、　 ｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、　Ｖｏｌ、　２９６．　ｐｐ、　１４３〜 １５１　Ｊを参照。さらに詳細な処理は以下の様である： イオン交換ＨＰＬＣのための装置はＬＫＢ２１５０　ＨＰＬＣポンプ、ＬＫＢ２ １５２　ＨＰＬＣコントローラー、ＬＫＢ２０４０グラジェント混合弁、ＬＫＢ ２１５４　ＨＰＬＣインジェクターおよびＬＫＢ２２１０レコーダーに連結した ＬＫＢ２１５１　ＨＰＬＣ可変波長検出器からなる。分離はＬＫＢＵｌｔｒｏＰ ａｃ　ＴＳＫ５３５　ＣＭ陽イオン交換カラム（１５０ｘ７．５ｍｍ直径）で実 施した。溶出はリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６，４（１，１４ｇ水酸化ナトリ ウムおよび２２．５ｍｌの１Ｍリン酸および水を加えてｌ　Ｏ００ｍ１２の最終 体積にした）中の塩化ナトリウムのグラジェント（０〜０．３Ｍ）を用いて行い 、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　ＭＦ−フィルター（ｏ、　２２　μｍ）に通して濾過し 減圧により脱気した。流速は１ｍｆ／分に設定し溶出液の吸光度を２１５ｎｍで 記録した。２ｍｌの各画分をＬＫＢ２１１２　ＲｅｄｉＲａｃフラクションコレ クターを用０て集めて評価した。精製は逆相ＨＰＬＣカラムで得た。

受容体結合性アッセイは詳細に前述した（参考文献１４゜３２）ようにイヌ腎臓 形質膜およびＵＭＲ１０６−Ｈ５ラット骨肉腫細胞において、放射性リガンドと して１１１　Ｊ−標識ＰＴＨ（１〜３４）アミドを用いて実施した。結合能力（ ＩＣｓｏ）は放射性リガンドの最大置換の半分のために必要な未標識ペプチドの 濃度として定量された。ｌμＭ以上の未標識ｂＰＴＨ（ｌ〜３４）の存在下で残 留する放射性リガンド結合として定義される非特異的結合はすべての結合価から 差し引いた。１２１′Ｉ−ＰＴＨｒＰ　（１〜３４）アミドの特異的：非特異的 結合の比は腎臓膜およびＵＭＲ１０６−Ｈ５アッセイにおいて、平均してそれぞ れ＞１０：１および３：ｌである。アデニル酸シクラーゼ活性はイヌ腎臓膜にお いて、１００μモルＧＴＰを除いて、はぼ前述のように〔α−３２ｐ）ＡＴＰの （”Ｐ）サイクリックＡＭＰへの転化により評価した（参考文献３３．３４）。

ＵＭＲ１０６−Ｈ５細胞中のアデニル酸シクラーゼ活性をほぼ記載した（参考文 献３５）ように評価した。簡単には、細胞を〔３Ｈ〕アデニンの１μＣｉ／ｍＩ ！の血清を含まないＭＥＭを用いて３７°Ｃて２時間装置して内在性ＡＴＰプー ルを標識した。

次いて細胞を０．４ｍＭ　ＩＢＭＸに１０分間さらし、次いで適当なペプチドに よりさらに１０分間周囲温度にさらした。次いて細胞を２０％ＴＣＡできれいに し、〔３Ｈ〕サイクリックＡＭＰをＳａｌｏｍｏｎ等のカラム処理（参考文献３ ６）により単離した。アデニル酸シクラーゼアッセイにおける能力（Ｋａ）は最 大の酵素活性の半分を生成するペプチドの濃度である。

ここには本発明のわずかな例を示して説明しているが、当業者には種々の変更お よび変化を３および／または６および／または９位のアミノ酸の置換で行い、本 発明の真意および範囲から逸脱することなくアゴニストまたはアンタゴニストの 医薬としての活性を有するポリペプチド類似体を生成すること力）できることは 明らかである。記載した請求の範囲内に入るすべてのかかる変性および変化はこ れにより実施される。

ＦＩＧ、ＩＡ （従来Ｊ膚林〒） 彼＆　（ｎｉｌ ：ｉ長　（ｎｍ） 二重＆　（ｎｍ） ０　１０　２０　・　３Ｑ　４０　５０ＦＩＧ、５ ノ□２・ハ（）゛＋ド：ｌｌ邸ｒ４ ＦＩＧ、−６Ａ ノｏｙベプ手’ｒ３ｇ１Ｍ ＦＩＧ、−６Ｅ １ｏ１ベプキドシ農贋間 ＦＩＧ、−６Ｆ ＦＩＧ、７Ａ ！。ｉ代７°＋ｇ；ｘｙ：Ｍ ＦＩＧ、７Ｃ ＦＩＧ、−７Ｅ ノ０之へ′７°＋ｈ′；震度Ｍ ＦＩＧ、８Ａ 要　約　書 本発明は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）　、副甲状腺ホルモン様タンパク質（Ｐ ＬＰ）または副甲状腺関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）に対してアゴニストまたは アンタゴニストまたは組織選択特性を有するポリペプチド類似体に関するもので ある。３位のセリンアミノ酸、６位のグルタミンアミノ酸、９位のヒスチジンア ミノ酸またはこれらの組み合わせを、他の天然または合成のアミノ酸によって置 換する。好ましくは、約３４アミノ酸のヒトＰＴＨフラグメントか薬理学的活性 にとって十分である。これらのポリペプチドは、ガン、骨粗霧症、高カルシウム 血症、または副甲状腺機能元通症の病気状態にあるヒトの治療処置においてアゴ ニストまたはアンタゴニストとして有用である。また、本発明は変性されたペプ チドを用いであるアッセイを実施し、所定の限界内におさまるアッセイ結果に基 いて、病気状態の治療処置に有用である変性されたペプチドを選択する方法に関 するものである。

国際調査報告 一−−＾＠−−＋１”　”’　ＦＴ／１１３１１　八〇７１＾ｔｔａｅｈｍｅｎ ｔ　ｔｏ　Ｆｏｒｍ　ＰＣＴ／１”；＾／２１ＣＩ／Ｐａｒｔ　１Ｏｂｓｅｒｖ ａｔｉ口ｎｓ　ｗｈｅｒｅ　ｕｎｉｔ　ｏｆ　１ｎｖｅｎｔｉ口ｎ　Ｌｍ　ｌ易 ｃｋｉｎＨＤｅｔａｉｌｅｄ　ｒｅａｓｏｎｓ　ｆｏｒ　ｈｏｌｄｉｎ　１ａｃ ｋ　ｏｆ　ｕｎｉｔ　ｏｆ　ｉｎｖｅｎｔｉｏｎＩｔｅｍｉ　ｅｄ　ｓｕｓ楕ａ ｒ　ｏｆ　ｃｌａｉｍｓ　ｒｏｕ　ｉｎ　ｍ

Claims (35)

【特許請求の範囲】
1. １．次式： 【配列があります】 （上式において ３位のアミノ酸Ｂは、Ｌ−セリン、またはＢがグリシンを示さない場合にはセリ ンと同等であるかセリンより大きい空間容積を有する他の天然または合成のＤ− もしくはＬ−アミノ酸から独立的に選択されたものを示し、６位のアミノ酸Ｊは 、Ｌ−グルタミンまたは他の天然もしくは合成のＤ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸あ るいはＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸との混合物から独立的に選択されたものを示 し、 ９位のアミノ酸Ｘは、Ｌ−ヒスチジンまたは他の天然もしくは合成のＤ−あるい はＬ−アミノ酸から独立的に選択されたものを示し、ただし原子団ＢがＬ−セリ ンを示しかつ原子団ＪがＬ−グルタミンを示す場合には、原子団ＸはＬ−ヒスチ ジンを示さず、また原子団ＢがＬ−セリンを示しかつ原子団ＸがＬ−ヒスチジン を示す場合には、原子団ＪはＬ−グルタミンを示さず、また原子団ＪがＬ−グル タミンを示しかつ原子団Ｘがヒスチジンを示す場合には、原子団ＢはＬ−セリン を示さず、 Ｚは、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−＋Ｍ（式中のＭ＋は医薬として受け入れることの できる陽イオンから選択されたものを示す）、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２またはヒト、 ウシまたはブタの副甲状腺ホルモン（３５〜８４）またはヒト、ウシまたはブタ の副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）（３５〜１４１）のアミノ酸 配列から独立的に選択されたものを示す）で表わされる化合物、またはその医薬 として受け入れることのできる塩を含有することを特徴とする医薬組成物。
2. ２．１位のアミノ酸がセリンであり、７位のアミノ酸がロイシンであり、１６位 のアミノ酸がＡｓｎであり、１８位のアミノ酸がメチオニンであり、ＺはヒトＰ ＴＨ（３５〜８４）のアミノ酸連鎖を示すことを特徴とする請求の範囲第１項記 載の医薬組成物。
3. ３．１位のアミノ酸はアラニンであり、７位のアミノ酸はフェニルアラニンであ り、１６位のアミノ酸はセリンであり、１８位のアミノ酸はメチオニンであり、 ＺはウシＰＴＨ（３５〜８４）のアミノ酸連鎖を示すことを特徴とする請求の範 囲第１項記載の医薬組成物。
4. ４．構造式Ｉにおいて、１位のアミノ酸はセリンであり、７位のアミノ酸はロイ シンであり、１６位のアミノ酸はセリンであり、１８位のアミノ酸はロイシンで あり、Ｚは、ブタＰＴＨ（３５〜８４）のアミノ酸残基を示すことを特徴とする 請求の範囲第１項記載の医薬組成物。
5. ５．Ｚは−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍ、または−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すこ とを特徴とする請求の範囲第１項記載の医薬組成物。
6. ６．１位のアミノ酸はセリンであり、７位のアミノ酸はロイシンであり、１６位 のアミノ酸はＡｓｎであり、１８位のアミノ酸はメチオニンであり、Ｚは−ＣＯ ＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すことを特徴とする請 求の範囲第５項記載の医薬組成物。
7. ７．１位のアミノ酸はアラニンであり、７位のアミノ酸はフェニルアラニンであ り、１６位のアミノ酸はセリンであり、１８位のアミノ酸はロイシンであり、Ｚ は−ＣＯＯＨ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すことを特徴とする請求の範 囲第５項記載の医薬組成物。
8. ８．構造式Ｉにおいて、１位のアミノ酸はセリンであり、７位のアミノ酸はロイ シンであり、１６位のアミノ酸はセリンであり、１８位のアミノ酸はロイシンで あり、Ｚは−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すこ とを特徴とする請求の範囲第５項記載の医薬組成物。
9. ９．ＢはＬ−セリンを示すことを特徴とする請求の範囲第５項記載の医薬組成物 。
10. １０．ＪはＬｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ、またはＰｈｅから独立的 に選択されたものを示すことを特徴とする請求の範囲第９項記載の医薬組成物。
11. １１．ＪはＬ−グルタミンを示すことを特徴とする請求の範囲第５項記載の医薬 組成物。
12. １２．ＢはＡｌａ，Ｐｈｅ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ、またはＴｙｒ　 から独立的に選択されたものを示すことを特徴とする請求の範囲第１１項記載の 医薬組成物。
13. １３．ＢはＬ−セリン、Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓまた はＴｙｒから独立的に選択されたものを示すことを特徴とする請求の範囲第５項 記載の医薬組成物。
14. １４．ＢはＬ−グルタミン、Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，または Ｐｈｅから独立的に選択されたものを示すことを特徴とする請求の範囲第５項記 載の医薬組成物。
15. １５． 【配列があります】 （ただし、Ａ′はヒトＰＴＨ、またはウシＰＴＨまたはブタＰＴＨもしくはそれ らのＺ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２誘導体の７ 〜３４アミノ酸配列あるいはｈＰＴＨ、ｂＰＴＨ、またはｐＰＴＨまたはｈＰＴ ＨｒＰの７〜８４配列から選択されたものを示す）、【配列があります】 【配列があります】 または【配列があります】 ただし、原子団Ｂ′はｈＰＴＨ、またはｂＰＴＨ、ｐＰＴＨもしくはこれらのＺ ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２誘導体の７〜３４ 活性単位の残りのペプチドの残留物あるいはｈＰＴＨまたはｂＰＴＨまたはｈＰ ＴＨｒＰの７〜８４配列から選択されたものを示す）、【配列があります】また は 【配列があります】 【配列があります】または 【配列があります】または 【配列があります】 （ただし、Ｄ′はヒトまたはウシまたはブタのＰＴＨもしくはこれらのＺ＝−Ｃ ＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２誘導体の１０〜３４アミ ノ酸配列、あるいはｈＰＴＨ、ｂＰＴＨ、ｐＰＴＨまたはｈＰＴＨｒＰの残りの １０〜８４配列から選択されたものを示す）から独立的に選択されたポリペプチ ド、またはその医薬として受け入れることのできる塩と、医薬として受け入れる ことのできる賦形剤とを組み合わせたことを特徴とする医薬組成物。
16. １６．Ａ′，Ｂ′およびＤ′が−ＣＯＯＨで終端するｈＰＴＨ（１〜３４）を示 すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の医薬組成物。
17. １７．Ａ′，Ｂ′およびＤ′は−ＣＯＯ−＋Ｍ（式中のＭはナトリウム、カリウ ム、カルシウムまたはバリウムから選択されたものを示す）で終端するｈＰＴＨ （１〜３４）を示すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の医薬組成物。
18. １８．１位および３位のアミノ酸はＬ−セリンであり、Ａ′，Ｂ′およびＤ′は Ｚ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２で終端するｈＰ ＴＨ（１〜３４）を示すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の医薬組成物 。
19. １９．１位のアミノ酸はＬ−アラニンであり、Ｂはセリンを示し、Ａ′，Ｂ′お よびＤ′はＺ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２で終 端するｂＰＴＨ（４〜３４）を示すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の 医薬組成物。
20. ２０．１位のアミノ酸はＬ−セリンであり、３位のアミノ酸はＬ−セリンでなく 、Ａ′，Ｂ′およびＤ′はＺ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝ Ｏ）ＮＨ２で終端するｈＰＴＨ（１〜３４）を示すことを特徴とする請求の範囲 第１５項記載の医薬組成物。
21. ２１．１位のアミノ酸はＬ−アラニンであり、３位のアミノ酸はＬ−セリンでな く、Ａ′，Ｂ′およびＤ′はＺ＝−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ ＝Ｏ）ＮＨ２で終端するｂＰＴＨ（１〜３４）を示すことを特徴とする請求の範 囲第１５項記載の医薬組成物。
22. ２２．１位のアミノ酸はセリンであり、３位のアミノ酸はセリンであり、６位の アミノ酸はＬ−グルタミンでなく、Ａ′，Ｂ′およびＤ′はＺ＝−ＣＯＯＨまた は−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２で終端するｈＰＴＨ（１〜３４）で あることを特徴とする請求の範囲第１５項記載の医薬組成物。
23. ２３．１位および３位のアミノ酸はＬ−セリンであり、６位のアミノ酸はＬ−グ ルタミンであり、９位のアミノ酸はＬ−ヒスチジンでなく、原子団Ｄ′はＺ＝− ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯ−＋Ｍまたは−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２で終端するｈＰＴＨ（ １０〜３４）を示すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の医薬組成物。
24. ２４．Ｚが−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すことを特徴とする請求の範囲第１項記載の 医薬組成物。
25. ２５．Ｚか−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２を示すことを特徴とする請求の範囲第１５項記載 の医薬組成物。
26. ２６．請求の範囲第１項記載の化合物またはその医薬として受け入れることので きる塩と、薬理学的に受け入れることのできる賦形剤とを組み合わせたことを特 徴とする医薬組成物。
27. ２７．治療処置を必要とする哺乳類を治療処置するに当り、治療に有効な量の請 求の範囲第１項記載の化合物またはその医薬として受け入れることができる塩を 、医薬として受け入れることのできる賦形剤と組み合わせて投与することを特徴 とする治療処置方法。
28. ２８．治療に有効な量の構造式Ｉで表わされる化合物を、経口、非経口、皮下、 筋肉内、静脈内、膣、直腸、頬、舌下または鼻内手段によって投与することを特 徴とする請求の範囲第２７項記載の方法。
29. ２９．前記化合物を使用して、ヒトにおけるガン、骨粗鬆症、高カルシウム血症 または副甲状腺機能亢進症の病気状態を治療処置することを特徴とする請求の範 囲第２８項記載の方法。
30. ３０．医薬組成物において有用なＰＴＨまたはＰＴＨ（１〜３４）の３，６，９ 位またはこれらの組み合わせにおいて変性されているポリペプチド配列を選択す るに当り、（ａ）３，６，９位またはこれらの組み合わせにおけるアミノ酸が異 なるＤ−もしくはＬ−天然アミノ酸または非天然アミノ酸により置換されている ｈＰＴＨ、ｂＰＴＨ、ｐＰＴＨ、ｈＰＴＨｒＰ、ｂＰＴＨｒＰ、ｈＰＴＨ（１〜 ３４）、ｂＰＴＨ（１〜３４）またはｐＰＴＨ（１〜３４）のアミノ酸配列を作 り； （ｂ）　特定の柔組織、膜または細胞を用いてアッセイを行って受容体結合性お よび活性を評価し：（ｃ）　特定の骨細胞を用いてアッセイを行って受容体結合 性および活性を評価し； （ｄ）（ｉ）特定の柔組織、膜または細胞において高い結合性（Ｂ）および高い 活性（ＡＣ）を有し、かつ高い特定の骨細胞結合性（Ｂ）および高い活性（ＡＣ ）を有するペプチドアミノ酸類似体を、病気状態の柔組織、膜、細胞または骨を 医学的治療処置するためのアゴニストとしてさらに評価するために、独立的に選 択し；あるいはまた（ｉｉ）高い結合性（Ｂ）および高い活性（ＡＣ）を有する ペプチドアミノ酸類似体を、特定の柔組織、膜または細胞における医学的治療処 置のためのアゴニストとして、また低い特定の骨細胞結合性（Ｂ）および低い活 性（ＡＣ）を有するペプチドアミノ酸類似体を、病気状態の柔組織、膜または細 胞に対するアゴニストとしてさらに評価するために、独立的に選択し；あるいは また （ｉｉｉ）特定の組織、膜および細胞において低い結合性（Ｂ）を有し、かつ病 気状態の骨に対して高い特定の骨細胞結合性（Ｂ）および高い活性（ＡＣ）を有 するペプチドを、アゴニストとして独立的に選択し；あるいはまた（ｉｖ）組織 、膜または細胞および骨細胞における高い結合性（Ｂ）および低い活性（ＡＣ＊ ）を、ホルモン異常およびガンを医学的治療処置する際のアンタゴニストとして 使用するために独立的に選択し； （ｅ）アミノ酸類似体について次の種々のアッセイまたは毒性試験を行って有用 な医薬の確認を行うことを特徴とする 変性ポリペプチド配列の選択方法。
31. ３１．工程（ｄ）（ｉ）において、特定の柔組織、膜または細胞における高い結 合性および高い活性（ＡＣ）、および高い特定の骨細胞結合性（Ｂ）および高い 活性（ＡＣ）は、基準ペプチドの約５０％またはそれ以上であることを特徴とす る請求の範囲第３０項記載の方法。
32. ３２．工程（ｄ）（ｉｉ）において、特定の柔組織、膜または細胞における医学 的治療処置のためのアゴニストとしての高い結合性（Ｂ）および活性（ＡＣ）は 基準ペプチドの約５０％またはそれ以上であり、低い特定の骨細胞結合性（Ｂ） は約５％またはそれ以下であり、骨細胞の低い活性は約１０％またはそれ以下で あることを特徴とする請求の範囲第３０項記載の方法。
33. ３３．工程（ｄ）（ｉｉｉ）において、特定の柔組織における低い結合性（Ｂ） は基準ペプチドの１０％未満であり、低い活性（ＡＣ）は約５％またはそれ以下 であり、骨の病気状態に対する高い特定の骨細胞結合性（Ｂ）および高い活性（ ＡＣ）は基準ペプチドの５０％またはそれ以上であることを特徴とする請求の範 囲第３０項記載の方法。
34. ３４．工程（ｄ）（ｉｖ）において、ホルモン異常およびガンを医学的治療処置 する際のアンタゴニストとして使用するために、組織、膜または細胞および骨細 胞における高い結合性（Ｂ）は５０％より大きく、低い活性（ＡＣ＊）は約５％ またはそれ以下であることを特徴とする請求の範囲第３０項記載の方法。
35. ３５．柔組織、膜または細胞が腎臓から得られたものであることを特徴とする請 求の範囲第３０項記載の方法。