JPH05508630A - 化学療法剤と組合せて投与する抗腫瘍抗体含有剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物学的に活性な抗腫瘍抗体と化学療法の組合せによる相乗作用的腫瘍療法 １、発明の分野 本発明は、悪性疾患の治療における抗体療法と化学療法の組合せの利用に関する 。それは、一部は、標準的な化学療法摂生に対して以前は応答しなかった患者が 、抗腫瘍抗体での処置と化学療法とを含む組合せ療法によって処置すると、完全 な緩解を獲得したという驚くべき発見に基づく。本発明の方法は、外因性化学化 合物と提携して腫瘍細胞を効率的に撲滅する作用をする患者の免疫系を誘導する ユニークな手段を提供する。

２　発明の背景 ２．１．　腫瘍細胞抗原と抗腫瘍抗体 腫瘍細胞は、正常細胞の相当物に欠けているかまたは少量しか存在しない成る種 の抗原を発現する。それらの大部分は、腫瘍や成る種の胚芽細胞が共有する分化 抗原である。腫瘍に十分な選択性で出現する抗原の幾つかは治療薬の可能な標的 として働くことができる。

このことは、この点で最も良く研究されるヒト腫瘍の１つである悪性黒色腫につ いて（ＨｅｌｌｓｔｒｏｍおよびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ、　Ａｃｃｏｍｐｌｉｓｈ ｍｅｎｔｓｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ−１９４Ｐｒ１ｚｅ　Ｙｅａ ｒ、　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｏｔｏｒｓ　ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｏｕ ｎｄａｔｉｏｎ、　Ｊ、Ｇ、　Ｆｏｒｔｎｅｒ　＆　Ｊ、Ｅ、　Ｒｈｏａｄｓ　 ｌ！、　Ｊ、Ｂ。

Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ　１９８ ５．　ｐ、２１６−２４０）　、並びに他の腫瘍について（Ｂｕｒｃｈｅｌｌお よびＴａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ、　Ｒ，Ｗ。

ＢａｌｄｗｉｎおよびＶ、Ｓ、　Ｂｙｅｒｓ纒、　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎ ｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｆｏｒ　ＴｕｍｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ 　Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、　Ａｃａｄｅａ＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　１９８５．　ｐ 、ｌ−１５；Ｋｅｍｓｈｅａｄ、同文献、　９．２８１−３０２　）最近概説さ れている。

正常組織よりもヒト腫瘍により多量に発現される細胞表面抗原に対して多数の抗 体が作製されている。細胞表面抗原に対する抗体は補体の存在下で腫瘍細胞に細 胞毒性となり得ること（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら。

１９６２、　Ｐｒｏｇｒ、　Ａｌｌｅｒｇｙ　９：　１５８−２４５　）　、幾 つかの抗体は抗体依存性細胞性細胞毒性を媒介し得ること（Ｐｅｌｍａｎｎら、 　１９６９．　Ａｄｖ、　［ｍｍｕ−ｎｏｌ、１１：　１１７−１９３　：　Ｍ ａｃＬｅｎｎａｎら、１９６９．　［ｍｍｕｎｏｌ、　１７：　８９７−９１０ 　；５ｋｕｒｚａｋ　ら、１９７２．　Ｊ、εＸｐ、　Ｍｅｄ、１３５：　９９ ７−１００２　：　Ｐｏ１ｌａｃｋら。

１９７２、　［ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、　９：　３１６−３２３）も十分 に確立されている。前者の場合は適当な補体源（通常はウサギまたはモルモット ）が、そして後者の場合はエフェクター細胞源（通常はマウス起源のもの）が必 要である。

腫瘍関連抗原に対する抗体がヒトエフェクター細胞の存在下でヒト腫瘍細胞を殺 すことができるという証拠（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、　１９８１゜Ｉｎｔ、　Ｊ 、　Ｃａｎｃｅｒ　２７：　２８１−２８５）は、そのような抗原に対する抗体 が補体源としてのヒト血清の存在下で腫瘍細胞を殺すことができるという証拠（ Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、　１９８５．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　 Ｓｃｉ、　８２：１４９９−１５０２　：　Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ　ら、１９８５ ．　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄＣａｎｃｅｒ　Ｔｈ ｅｒａｐｙ、　ＵＳＣＬＡ　Ｓｙｍｐｏｓｉａ　ｏｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａ ｎｄ　ＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、第２７巻、　ｐ、１４９−１６４．　 Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、Ｉｎｃ、、　ＮＹ　）と同じくらい最近である。

２．３．　放射性同位体、毒素または薬剤のキャリヤーとしての抗腫瘍抗体の療 法利用 抗癌剤を調製するための有効なアプローチは、抗体を放射性同位体で　襟識する こと（Ｌａｒｓｏｎら、　１９８３．　Ｊ、　ＣＨｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７２ ：２１０１−２１１４　：　０ｒｄｅｒ、１９８４．　Ｃｏｒｎｐｒ、　Ｔｈｅ ｒ、１０：　９−１８　ＨＣａｒｒａｓｑｕｉｌｌ。

ら、１９８４．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ　６８： 　３１７−３２８　：　ｄｅ　Ｎａｒｄｏ　ら。

１９８５、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　Ｂｉｏｌ 、　Ｐｈｙｓ、１１：　３３５−３４８）、または抗体を毒素（Ｊａｎｓｅｎら 、　１９８２．　ｒｍｍｎｏｌ、　Ｒｅｖ、　６２：　１８５−２１６　；Ｖｉ ｔｅｔｔａおよびＵｈｒ、　１９８４．　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　３７：　５ ３５−５３８）もしくは抗癌剤（Ｇｈｏｓｅら、　１９７２．　Ｂｒ１ｔ、　Ｍ ｅｄ、　Ｊ、　３：　４９５−４９９　：　Ｈｕｒｗｉｔｚら。

１９７５、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　３５：　１１７５−１１８１　；　Ｒｏｗ ｌａｎｄら、１９８５．　Ｃａｎｃｅｒ（ｍｍｕｎｏｌ、踊ｍｕｎｏｔｈｅｒ、 　１９：　ｌ−７）と接合させることを含む。抗体が特異性を与え、そして同位 体または薬剤が腫瘍を破壊する能力を提供する。しかしながら、このアプローチ の欠点は、抗癌剤も放射性同位体も両方とも正常細胞に対して高レベルの毒性を 有するという事実である。よって、腎臓、肝臓または骨髄といった種々の器官に おける非特異的な取り込みが、実質的な副作用を引き起こし得る。

ふ　発明の要約 本発明は、悪性疾患の治療における抗体療法と化学療法の組合せの利用に関する 。それは、一部は、組合せ療法の驚くべき有効性の観察結果に基づく。抗腫瘍抗 体Ｌ６またはＭＧ２１を受けた数人の患者は、その後の化学療法に応答して完全 な緩解を獲得した。しかし、その同じ患者は、Ｌ６またはＭＧ２１抗体治療を受 ける前の同様な化学療法摂生に対しては応答していなかった。

本発明の特定態様によれば、抗糖脂質抗体、例えば好ましくはＬ６モノクローナ ル抗体またはＭＧ２１モノクローナル抗体を患者に投与し、次いでその患者を標 準的な化学療法摂生で治療する。本発明の好ましい態様では、化学療法は抗体処 置の数カ月以内に投与される。組合せ療法の有効性は、悪性細胞を化学療法剤の 毒性効果に対して一層感受性にするかまたは化学療法剤と相乗作用する患者の免 疫反応を誘導する腫瘍部位の抗体に帰することができると示唆される。

４、　発明の詳細な説明 本発明は、抗腫瘍抗体での処置と標準的な化学療法とを含む治療体制に関する。

本発明の好ましい態様では、抗腫瘍抗体は腫瘍細胞の表面上の糖脂質抗原と反応 する。最も好ましい態様では、抗腫瘍抗体がモノクローナル抗体Ｌ６またはモノ クローナル抗体ＭＧ２１である。

腫瘍細胞致死における抗体／化学療法摂生の効能を説明する義務はないけれども 、数種のメカニズムが関与し得る。第一は、抗腫瘍抗体Ｌ６とＭＧ２１は投与の 数週間後に腫瘍部位に現れることが観察されている。腫瘍細胞の表面に結合する ことにより、この抗体がおそらく薬剤の取り込みを増加させることによって細胞 を化学療法的致死に対して一層感受性するのであろう。あるいは、抗腫瘍抗体で の処置は、細胞を薬剤に対して一層感受性するかまたは細胞を患者の免疫応答に 対して一層感受性するかのいずれかにより、化学療法剤と相乗作用する患者の免 疫応答を誘導することができる。

限定のためではなく開示の明確化のために、本発明の詳細な記載を次の小項目に 分けることにする： （ｉ）本発明の抗体分子の特徴づけ； （ｉｉ）モノクローナル抗体の調製：および（ｉｉｉ）生物学的に活性な抗腫瘍 抗体と化学療法との組合せによる腫瘍療法。

４．１．　本発明の抗体分子の特徴づけ事実上全ての起源の抗体を本発明に従っ て使用することができるが、好ましい態様では、該抗体は腫瘍関連抗原、例えば 糖脂質抗原、糖タンパク質抗原またはムチンを限定する。モノクローナル抗体は 連続的で豊富な供給という利点を提供する。実際、マウスを腫瘍関連糖脂質抗原 で免疫処置し、そのような抗原に対する抗体を産生ずるハイブリドーマを樹立す ることにより、多種多様なヒト腫瘍と反応しそれらを治療することかできる抗体 のパネルを迅速に確立することが可能であろう。

ＭＧ２１抗体は、１９８６年２月２０日に出願の同時係属米国特許出願第８３４ 、１６２号においても記載されている（これは参考として本明細書中に組み込ま れる）。Ｌ６抗体およびそれが限定する抗原は、１９８４年１２月２１日に出願 の同時係属米国特許出願第６８４．７５９号および１９８５年ｌＯ月１８日に出 願の米国特許第４．９０６．５６２号においてより詳しく記載されている（これ らは各々参考として本明細書中に組み込まれる）。

４．２．　モノクローナル抗体の調製 本発明によれば、当業界で既知であるいずれの方法を使っても、モノクローナル 抗体を製造することができる。そのような方法としては、ＫｏｈＬｅｒおよびＭ ｉｌｓｔｅｉｎ　（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ　２５６：　４９５−４９７）によ り最初に開発されたハイブリドーマ技術、並びにトリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハ イブリドーマ技術ＣＫｏｚｂｏｒｎら、　１９８３．　（ｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴ ｏｄａｙ　４：　７２）、εＢｖ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、　１９８ ５．　“Ｍｏｎｏ−ｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｃａｎｃｅ ｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ−、Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｉｎｃ。

９、７７−９６およびＨｕｓｅら、　１９８９．５ｃｉｅｎｃｅ　２４６：　１ ２７５−１２８１）　、並びに下に論じられるキメラ抗体技術が挙げられるが、 それらに限定されない。

本発明はマウスモノクローナル抗体を使って証明されるが、本発明はそれに限定 されない。実際、ヒト抗体を用いることもでき、それが好ましいと判るかもしれ ない。そのような抗体は、ヒトハイブリドーマを使うことにより（Ｃｏｔｅら、 　１９８３、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　８０：　２０２６−２０３０）またはＥＢＶウィルスを用いてヒトＢ 細胞を試験管内で形質転換せしめることにより（Ｃｏｌｅら、　１９８５．　“ Ｍｏｎｏｃ　１ｏｎａ　１Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈ ｅｒａｐｙ”、　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｉｎｃ、　ｐ、７７−９６）得る ことができる。事実、本発明によれば、適当な抗原特異性のマウス抗体分子由来 の遺伝子を適当な生物活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と一緒にスプライシング することによる、「キメラ抗体」の生産のために開発された技術（ＭＯｒｒｉｓ ｏｎら、　１９８４、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　８１：　６８５１−６８５５　＋　Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら 、１９８４．　Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６０４−６０８　：　Ｔａｋｅｄａら、 　１９８５．　Ｎａｔｕｒｅ　３１４：　４５２−４５４　）を使うことができ る。

下の小項目は、後述の実施例において使われる抗体をいかにして調製したかを記 載する。

抗体の特異性を特徴づけるために使われる結合アッセイは、放射能標識抗体（Ｂ ｒｏｗｎら、　１９８１．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　 ７８：　５３９−５４３）を使って実施した：培養細胞（１０・）を培地中の熱 不活性化（５６°Ｃで３０分間）ウシ胎児血清１００μ！中で４°Ｃにて３０分 間１０’ｃｐｍの＋！Ｊ−標識抗体と共にインキュベートした。５−のＰＢＳの 添加後、細胞を２５０Ｘｇで１０分間の遠心によってペレット化した。

上清を吸引し、ベレットを＋２″■についてアッセイした。非特異的結合を測定 するために、競争相手として未標識抗体１０μｇを使って平行したインキュベー ションを行った（Ｂｒｏｗｎら、　１９８１．　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　７８：　５３９−５４３）　、ある場合に は、プラスチック培養皿に付着させた細胞の単層上で同様な形式で結合アッセイ を行った。

４．２−１．　黒色腫糖脂質に対して向けられたモノクローナル抗体 黒色腫細胞の腫瘍関連糖脂質抗原に対して向けられた抗体を調製するために、Ｂ ＡＬＢ／ｃマウスを黒色腫細胞系ＳＫ−ＭＥＬ−２８により免疫処置し、次いで それらの膵臓細胞をＮ５−１細胞とハイブリダイズせしめた。ハイブリドーマ上 清を、以前に記載された通りに（Ｙｅｈら。

１９８２、　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　２９：　２６９−２７５）予め黒 色腫組織から単離してＦａｌｃｏｎ　３０３４　Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔプレートの ウェルの表面に結合させであるＧＤ３への結合についてスクリーニングした。対 照として無関係のガングリオシドを含めた。ハイブリドーマ２Ｂ２とＩＦ４は１ つのハイブリダイゼーションから誘導され、そしてハイブリドーマＭＧ２１は異 なるハイブリダイゼーションから誘導された。それらを限界希釈により２回クロ ーニングした。いずれも、ゲル拡散によれば１ｇＧ３である抗体を生産した。

セファロースＣＬ−４８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に共育結合させたスタフィロコ ッカスプロティンＡのカラム上で０．１Ｍクエン酸緩衝液、ｐＨ３，５または４ ．５での溶出により抗体をアフィニティー精製した（　Ｂｒｏｗｎら。

１９８１、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１２７：　５３９−５４６）。

黒色腫に対する抗体特異性は、抗体４．２．について発表された通りに（Ｙｅｈ 　ら、１９８２．　［ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　２９＋　２６９−２７５　 ：　Ｎｕｄｅｌｍａｎ　ら。

１９８２、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２５７：　１２７５２−１２７５ ６　）　、培養細胞を使った結合アッセイによって確立した。凍結切片における 免疫組織学的研究（Ｇａｒｒｉｇｕｅｓら、　１９８２．　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃ ａｎｃｅｒ　２９：　５１１−５１５）により特異性を確かめた。ここで、抗体 ２Ｂ２．　［Ｆ４およびＭＧ２１は転移性黒色腫の約８０％の試料を染色したが 、一方腎臓や脳を含む正常組織は染色されなかった。２Ｂ２についての特異性デ ータは発表されている（）Ｉｅｌｌｓｔｒｏｍら、１９８４．　Ｃｏｎｔｒｉｂ ｕｔｉｏｎｓ　ｔｏ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　５ｅｒｉｅｓ：　Ｇｅｎｅｓａｎｄ　 Ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅ１ｌｓ、Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ 、Ｇ、、Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ、Ｈ，。

Ｖａｎ　Ｋ１１ｅｓｔ、Ｓ、　＆　Ｍｕｎｋ、Ｋ、　ｉｉ　（Ｋａｒｇｅｒ、Ｂ ａ５ｅｌ）、ｐ、１２１−１３１　）。

４、２．２．　非小細胞肺癌糖脂質に対して向けられたモノクローナル抗体 Ｌ６モノクローナル抗体は、１９８４年１２月２１日に出願の同時係属米国特許 出願第６８４．７５９号および１９８５年ｌＯ月１８日に出願の米国特許第４、 ９０６．５６２号（これは各々参考として本明細書中に組み込まれる）中に記載 された通りに調製した。モノクローナル抗体Ｌ６の調製を下記に簡単に記載する 。

３か月齢のＢＡＬＢ／ｃマウスをヒト肺の腺癌からの体外移植細胞２９８１で免 疫処置することにより、モノクローナル抗体を産生せしめた。

免疫処置は、マウスに約１０’個の細胞を４回腹腔内注射することによって行っ た。最後の免疫処置の３日後に膵臓を切除し、培地中に懸濁し、Ｎ５−１７ウス ミエローマ細胞（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、　１９７５゜Ｎａｔｕ ｒｅ　２５６：　４９５−４９７　）と融合せしめた。融合混合物を播種し、単 一融合細胞（クローン）から生じた低密度培養物を形成させた。ハイブリダイゼ ーションに使った技術はＹｅｈらにより以前に記載されたものである（１９８２ ．　［ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　２９：　２６９−２７５）。

ハイブリッド細胞からの上滑を、ＥＬＩＳＡアッセイとオートラジオグラフィー 間接＋２３ｉ　＠識プロティンＡアッセイ（Ｂｒｏｗｎら。

１９７９、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　３１：　２０１−２０９　 ）を使って、特に細胞膜を含む免疫処置に使った腫瘍からの抽出物に対してスク リーニングした。それらの抽出物は　Ｃｏ１ｃｈｅｒらの方法（１９８１，Ｃａ ｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４１：１４５１−１４５９　）の変形（Ｙｅｈら、　１９ ８２．　［ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　２９：　２６９−２７５）を使って調 製した。抽出物を調製するために、組織をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳに懸濁した。

無傷の腫瘍については、これはスレンレス鋼製篩を通して押し出すことによって 行った。この後、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（Ｃａｌｂｉｏｃ ｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇ　Ｃａｒｐ、、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ。

ＣＡ）を含む１ｍＭ　ＮａＨＣＯｓを添加し、次いで氷上で材料をホモジナイズ した。２７．０００　Ｘ　ｇで１５分間遠心分離した後、上滑を除去し、ペレッ トをＰＢＳに再懸濁し、１分間超音波処理し、そして−７０°Ｃで保存した。

細胞膜抽出物に結合する抗体を生産するハイブリドーマをクローニングし、試験 管内で培養し、抗体特異性について更に試験した。

この試験は免疫組織学的技術（Ｇａｒｒｉｇｕｅｓら、　１９８２．　ｒｎｔ、 　Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ、　２９：　５１１−５１５　）を使って実施され、この試験では 、肺癌、他の腫瘍および正常ヒト組織の凍結切片に結合する抗体の能力を試験し た。ヒト肺癌に対して明白な特異性を有する抗体を生産したハイブリドーマを再 クローニングし、培養し、ブリスタンで感作された３か月齢のＢＡＬＢ／ｃマウ ス中に注射すると、それらは腹水として腫瘍を成長させた。

腹水中に分泌された抗体を、プロティンＡセファロース上で（Ｅｙら、　１９７ ９．　ｒｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１５：　４２９−４３６　）またはセ ファクリル５−ａｏｏ中でのゲル濾過により精製した。精製した抗体は、免疫組 織学、抗体が細胞表面に結合することを決定づけるための無傷の細胞上での結合 アッセイおよび放射線免疫沈澱試験による追加の特異性試験を含むその後の特徴 づけに使用した。

モノクローナル抗体Ｌ６は上記と同様に対応するハイブリドーマから生産された 。

４．３．　生物学的に活性な抗腫瘍抗体と化学療法との組合せによる腫瘍療法 本発明は、抗腫瘍抗体での処置と標準的化学療法での処置を含む組合せ療法に備 える。本発明の好ましい態様では、化学療法は抗体療法と同時に、または好まし くは抗体療法の後に行われる。

本発明において使用する抗体は好ましくは抗糖脂質抗体である。

本発明の特に好ましい態様では完全な抗体分子を使用することが望ましいが、別 の態様では、Ｆｖ、　Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ）２断片が挙げられるがそれに 限定されない抗体分子の断片を使用することが望ましいだろう。そのような断片 は、腫瘍細胞に結合することができ、そして抗体分子のＦｃ領域に関連する免疫 機能を最少にし且つ異ＦＪＦＣ領域に対して向けられる免疫応答の発生を最少に しながら、前記細胞を化学療法剤に対して一層感受性にすることができる。ある いは、ヒ）Ｆｃ領域を含んで成るモノクローナル抗体を、そのＦｃ領域に関連す る免疫機能を最大にするように操作することが望ましいかもしれない。従って、 本発明は、個々の臨床状況によく従うように抗体療法を適合させることを可能に する。

本発明に従って使われる化学療法摂生は、患者の悪性の処置に適当であると思わ れる任意の摂生を包含する。異なる悪性は特定の抗腫瘍抗体と特定の化学療法摂 生の使用を必要とすることがあり、それは患者ごとに決定されるだろう。本発明 は任意の悪性状態に関し、そのような悪性状態としては、乳癌および結腸癌とい った腺癌、非小細胞肺癌、白血病、リンパ腫、並びに黒色腫、星状細胞腫および 多形性神経膠芽腫を含む神経外胚葉由来の腫瘍が挙げられるが、それらに限定さ れない。

抗ｌｉ！瘍抗体療法と化学療法の組合せ療法の利用は、下の第５，６および７節 に例示される。特に、第７節に論じられる黒色腫患者は、頭蓋性腫瘍の完全な緩 解を示したが、処置に応答しなかった頭蓋内転移によって死亡した。この脳転移 に応答が無いことは、抗体が血液脳関門を透通てきないことにより説明すること ができる。本発明によれば、抗腫瘍抗体゛がそれの腫瘍細胞り的と確実に接触で きるようにすることが望ましい。従って、外来的に投与される抗体に比較的近づ きにくい腫瘍（脳腫瘍を含む）を有する患者では、抗体を腫瘍中に局所的に投与 するか、あるいは脳腫瘍の場合には、例えば浸透剤を使って血液脳関門をより浸 透性にするか、または抗体もしくは抗体断片を脳を髄液中にもしくは頚動脈経由 で投与することが望ましいだろう。

５、実施例：治療に対して以前は応答しなかった乳癌患者が組合せ療法後に完全 な緩解を獲得したに几、は、第１期のエストロゲンレセプター陰性乳癌のため１ ９８５年に乳腺腫瘤摘出術と腋窩切開術を受けた４６オの白人女性である。彼女 は手術後に局所放射線療法を受けた。彼女は２年後に放射領域の外側の左腋窩に 結節を再発した。アドリアマイシン、５−フルオロウラシルおよびシクロホスフ ァミド（ＦＡＣ）による化学療法を６カ月間受けた。５か月後、残りの乳房に広 範囲の病気が再発した。

乳房切除術を受けたが、３力月以内に再び再発した。ビンブラスチン（Ｖｉｎｂ ｌａｓｔｉｎ）／ミドマイシンＣ（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　Ｃ）で治療したが、彼 女の左胸壁上に進行性の病気を有した。この患者は広域スペクトル薬剤抵抗性を 示し、そして急速な再発が起こったため、担当医は追加の化学療法も成功しない だろうと感じた。この患者を別の治療に委ねた。

患者を評価した後、彼女は同じく薬剤抵抗性疾患を示すことが認められ、化学療 法ではもう免疫応答が起こらないように見えた。彼女をマウスモノクローナル抗 体Ｌ６で７日間処置した。彼女は優れた応答を示し、２か月後には、胸壁上の病 気の完全な消失を伴う完全な緩解傾向にあった。この緩解は短命であり、約２週 間後には再発した。彼女の以前の抗体に対する良好な応答のため、再治療した。

全く応答が見られず、彼女の病気は急速に進行し続けた。進行のため、４か月後 に別の化学療法に着手した。ミドマイシンＣ，ＶＰ−１６、カルボプラスチンお よび５−Ｆ（Ｊを投与した。彼女は以前にそれらのう女はその時点で完全な緩解 状態にあると決定された。２週間後に彼の間に何らかの相乗作用があると推測さ れる。腫瘍細胞は以前は完全に抵抗性であったのに、抗体が腫瘍細胞を化学療法 に感受性になるように誘導したと理論上想定される。別の仮定は、抗体が副療法 療法の追加が腫瘍の後退が起こるほど十分な細胞破壊を引き起こした。

６、実施例：以前は抗体療法に対して応答性であるが再発性であった乳癌患者が 、組合せ療法後に完全な緩解を獲得した Ｍ、　Ｇ、は、炎症性乳癌を有すると診断された３９才の白人女性である。

で治療した。この後、乳房に広範囲の存続性疾患を示す乳房切除術を行った。エ ストロゲンレセプターとプロゲステロンレセプターは陰性であった。多数の陽性 腋窩節があった。術後、彼女の胸壁への放射線療法と４サイクルの追加の化学療 法を行った。この化学療法を受けている間にも病気が進行した。この患者の腫瘍 の急速な進行と明白な薬剤抵抗性のため、彼女を別の処置に委ねた。

患者にマウスモノクローナル抗体Ｌ６を投与した。彼女はこの処置に良く耐えた が、胸壁上に急速に進行する病気を発生し続けた。

Ｌ６療法の３か月後、悪性の胸膜滲出を発生した。彼女をミドマイシンＣとビン ブラスチンで治療した。次の６か月に渡り、腫瘍結節の大幅な減少と胸膜滲出の 消失が起こった。彼女はこの化学療法に対して本質的に完全な応答を示した。

第５節に上述した患者と同様に、この患者の化学療法に対する応答は意外であり 、劇的であった。利用可能な最良の６薬剤を使った第一線の化学療法では彼女は 病気を進行させていた。ビンブラスチンとミドマイシンＣといった第三線の薬剤 に彼女が応答したことは非常に珍しいだろう。第５ａに記載の患者と同様、モノ クローナル抗体の使用と化学療法との間に何らかの相乗作用があったことは明ら かである。

７、実施例：黒色腫患者が組合せ療法後に完全な緩解を獲得した Ｃ、　Ｈ，は、右中央ふくらはぎに初期黒色腫を有した６５才の白人男性である 。２年後に右大腿に病気が再発したので、彼は布置径部切除とメルフアランによ る彼の脚の局所潅流を受けた。彼の布置径部に結節を再発した時は約３７カ月の 閉囲復しなかった。これを除去すると、再発性黒色腫であることが判った。次い で彼は右下肢に多数の別の結節を発生した。診察した時、彼は右下肢に多数の結 節を有していた。彼は、黒色腫によく見られる比較的遅い進行性疾患を有すると 診断された。病気が明らかに進行していると決定された時、彼に高用量のビタミ ンＡを５か月間投与した。７日間モノクローナル抗体（ＭＧ２１）を投与した後 、更に３力月間治療を続けた。彼はそれらの治療に良く耐え、多数の皮下結節の 消失を伴う遅い応答を示した。４か月後、患者はモノクローナル抗体に対して完 全な応答を有すると思われた。彼は病気が再発した時、９か月間回復しなかった 。

１■のモノクローナル抗体（ＭＧ２１）で再治療した。彼はそれに応答せず、病 気は進行し続けた。４．５力月後、病気が増大したため、再びモノクローナル抗 体での７日間の処置を受けた。彼はそれに応答せず、病気は急速に進行し、彼の 右下肢に結節が増加した。更に４か月後、別の形式の免疫療法であるＰＥＧ−Ｉ Ｌ２に着手した。これで４回治療したが、再び病気は進行し続けた。皮膚から侵 食し始め局部的痛みを引き起こす脚の大きな腫瘍のため、この患者に多数の病巣 の外科切除を行った。病気が進行し続けたので、Ｄ［ＴＣ／シスプラチン／シメ チジン／タモキシフェンを使った化学療法を始めた。彼にこの化学療法を３サイ クル行うと、彼の右下肢上の全ての腫瘍結節の完全な消失を伴うめざましい応答 を有した。この応答も幾分劇的であった。応答は黒色腫の平均３０〜４０％付近 に値し、完全な応答は５％未満である。応答持続期間は通常６か月未溝である。

この患者は、むしろ大型の疾患の消失に関してめざましい応答を有した。患者に 、　Ｌ、とＭ、Ｇ、（前掲）と同様に、これはひとが想像するよりもずっとめざ ましい応答であった。患者は脳転移を発生した時１年間は回復しなかった。彼に 外科手術と局所放射線療法を行ったが、ゆっくりした悪化を辿り、その後死亡し た。死亡の時点で、彼の脳の外側には黒色腫の形跡が見られなかった。

末梢には病気が存在しないままでの彼の脳における黒色腫の再発の発生は、化学 療法の失敗と見なすべきではない。はとんどの化学療法剤並びに抗体は中枢神経 系に入らない。それはほとんどの治療の禁足地（を域）であると考えられる。彼 の病気が中枢神経系の外側では緩解状態にあったという事実は、それらの部位に めざましい生物学的応答があったことを確証する。

ｓ、　ｍ胞系の寄託 次の細胞系はメリーランド州ロックビルのＡＴＣＣに寄託され、下記の受託番号 を付与されている。

細胞系　受託番号 ＭＧ２１　ＨＢ　９０１１ Ｌ６　ＨＢ　８６７７ 本発明を上記態様への特定の言及によって詳細に記載してきた。

しかしながら、本発明が本発明の観点の例示のつもりである開示された態様また は寄託された細胞系により範囲を限定されるものではないことは理解されよう。

実際、本明細書中に示されたり記載されたりしたもの以外の本発明の様々な変更 は、上記記載から当業者に明白となるであろう。そのような変更は添付の請求の 範囲内に含まれる。

要　約　書 生物学的に活性な抗腫瘍抗体と化学療法の組合せによる相乗作用的腫瘍療法 本発明は、悪性疾患の治療における抗体療法と化学療法の組合せの利用に関する 。それは、一部は、組合せ療法の驚くべき有効性の観察結果に基づいている。抗 腫瘍抗体Ｌ６またはＭＧ２１を投与した数人の患者が、その後の化学療法に応答 して完全な緩解を獲得した。

この同患者はＬ６またはＭＧ２１抗体処置を受ける前は同様な化学療法に対して 応答していなかった。本発明の態様では、抗糖脂質抗体、例えば好ましくはＬ６ モノクローナル抗体またはＭＧ２１モノクローナル抗体を患者に投与し、その後 、標準的化学療法で治療する。本発明の好ましい態様では、化学療法は抗体処置 の数カ月以内に行われる。組合せ療法の有効性は、悪性細胞を化学療法剤の毒性 効果に一層感受性にする腫瘍部位の抗体に帰することができると考えられる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成４年１１月、０日゛

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．（ｉ）患者の悪性細胞に結合する抗体および（ｉｉ）化学療法剤を治療の必 要な患者に投与することを含んで成る、悪性を有する患者の治療方法。
2. ２．前記抗体が糖脂質抗原に結合する、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記抗体がＬ６モノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
4. ４．前記抗原がＬ６抗原である、請求項２に記載の方法。
5. ５．前記抗体がＭＧ２１モノクローナル抗体である、請求項２に記載の方法。
6. ６．前記化学療法剤が抗腫瘍抗体の投与後に投与される、請求項１に記載の方法 。
7. ７．前記悪性が乳癌である、請求項１に記載の方法。
8. ８．前記悪性が黒色腫である、請求項１に記載の方法。
9. ９．前記悪性が結腸癌である、請求項１に記載の方法。
10. １０．前記悪性が非小細胞肺癌である、請求項１に記載の方法。
11. １１．前記抗体が投与後少なくとも一週間の期間中、悪性細胞に結合したままで ある、請求項１に記載の方法。
12. １２．前記悪性が乳癌である、請求項２に記載の方法。
13. １３．前記悪性が黒色腫である、請求項２に記載の方法。
14. １４．前記悪性が結腸癌である、請求項２に記載の方法。
15. １５．前記悪性が非小細胞肺癌である、請求項２に記載の方法。