JPH05508386A

JPH05508386A - 免疫調整剤

Info

Publication number: JPH05508386A
Application number: JP2511512A
Authority: JP
Inventors: クラーク，ジョン　アーウィン; ファー，アンドリュー　グラント; スミス，スタシア　アン
Original assignee: ワシントン　リサーチ　ファンデション
Priority date: 1989-02-10
Filing date: 1990-06-26
Publication date: 1993-11-25
Also published as: WO1992000071A1; EP0536119A4; EP0536119A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】免疫調整剤本願は１９８４年１１月２０日付出願第０６／６７３．５３４号の継続である１９８７年１月２７日付出願第０７１００６．９８５号の継続である１９８８年２月２３日付出願第０７／１５９．３５７号の部分継続出願である。

技術分野本発明は治療剤、特に免疫調節剤に係わる。

発明の背景酵素であるアルドース　レダクターゼ（＋５ｄａｃＨｓｅ　）はグルコースからソルビトールへの還元に触媒として作用し、白内障、網膜症、腎障害、末梢神経障害などのような糖尿病の合併症に至るプロセスに関与する。従って、アルドース　レダクターゼ酵素抑制物質は医療的に興味深い。最新の文献としては次のようなものがある。Ｄ、Ｄｖｏｒｎｉｋ著”Ａｌｄｏｓｅ　ＲｅｄｕｃｔａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　（アルドース　レダクターゼの抑制）”。

ＭｅＧ＋ａｖ−旧Ｉｆ、　Ｎｅｖ　Ｙｏｒｋ、　Ｎ、　Ｙ、　、　１９８７　；及び、Ｎ、　５ａｋａｉｏｔｏ等の論文″Ｐａ１ｙａｌ　ｐａ＋ｈｖａ７　ａｎｄ　ｉｆ　＋ｏｌｅ　ｉｎ　ｄｉａｈｅｊｉｃ　ｃｕ＋ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　（糖尿病合併症におけるポリオール経路とその役割）”。

ｅｄｓ、、　ＨｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ＋、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎ、　Ｙ、、　１９８８　。

最も強力な公知のアルドース　レダクターゼ抑制物質（（ａｌｄｏｓｅ　ｎｄｏｃｔａｓｅ　１ｎｈｉｂｉｔｏｄ）　ＡＲＩ）の１つはツルビニル、即ち、［４（’５）−２，３−ジヒドロ−６−フルオロスピロ−（４Ｈ−１−ベンゾビラン −４，４′　−イミダゾリジン）−２’、−５’　−ジオンコである。ツルビニル及びその類似物質、即ち、実質的に平面的なベンゼン環及びヒダントイン環が非平面的なピラン環を介して接続しているスピロヒダントイン誘導体は次に列記する米国特許の主題であり、参考のためこれら米国特許の内容を本願明細書に引用した：第４．１２７．６６５号；第４．１３０．７１４号；第４．１４７．７ ’１５号；第４．１．４７．７９７号；第４．１８１．７２８号；第４．　ｔｉｌｌ、　７２９号；第４．２３５．９１１号：第４．０６．０９８号；第４．２４８．８８２号；第４．３４８．５２６号；及び第４．４３１．８２８号。

分子構造が上記ツルビニル類似物質の定義とは異なるアルドース　レダクターゼ抑制物質も公知である：トルレスタット（ｔａｌｒｅｓｔａ＋　）　、Ｎ　−［（６−メドキシー５−　（トリフルオロメチル）チオ−１−ナフタレニル）チオキソメチル］　−Ｎ−メチルグリシン；基本構造３−ヒドロキシフラボンを有するフラボノイド類；アセチルサリチル酸（アスピリン）；ジフェニルヒダントイン（商品名　Ｄｉｌａｎｔｉｎ）　；フエノバルビタール；スリンダック；インドメサシン、　Ｉ　Ｃ１１０５５５２。

アルレスクチン（ＡＹ−２２，２０）；及びＷＦ−３Ｈ１，３〜（２，５−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−）二ニルー２−フリル）プロピオン酸。

ツルビニル、ツルビニル類似物質、及びその他のアルドース　レダクターゼ抑制物質がアルドース　レダクターゼ酵素の活性を抑制するメカニズムは、このような抑制にとって重要である正確な構造的特徴と同様に不明である。ツルビニルのような薬剤の効果が薬剤分子とここではアルドース　レダクターゼ分子に存在すると考えられるレセプター部位との相互作用によることは判明している。この相互作用における最も重要な因子は、相互に作用する原子をレセプター部位の補完的立体配座（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）に対して最も活性な３次元形状を呈するように位置させる薬剤分子の立体配座、即ち、原子及び基の３次元空間配列である。相互に作用する原子とは、電荷移動、水素結合、求電子置換及び／または核置換、疎水性相互作用などのような化学的メカニズムに直接関与することのできる原子である。相互に作用する原子としては例えば酸素、硫黄、窒素などが挙げられるがこれに限られるものでない。アルドース　レダクターゼ抑制物質の活性立体配座については分子軌道計算の理論的モデリングに基づいて仮説が設定されている。アルドース　レダクターゼ抑制作用を裏づけるものとしてこの仮説は２つの重要な構造的要因を識別している。即ち、（レセプタ部位との疎水性相互作用に関与する）芳香環または芳香環錯体と、これと連携するカルボニル基である。カルボニルはツルビニルの場合のようにＣ２０であるか、またはトルラスタットの場合のようにＣ＝Ｓである。Ｐ、　Ｆ、　Ｋａｄｏｒ等の’ＥｎＢｍｏｌａｇ７　ｏｆ　Ｃｘｒｂｏｎｙｌ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ’におけるＨ、Ｗｅｉｎｅｔ等の論文″Ａｌｄｅｋｙｄｅ　Ｄｅｈ７ｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｎｄ＾１ｄｏ／Ｋｅ＋ａ　Ｒｅｄｕｃｊａ＋ｅ″、　ｅｄｓ、、ｐＬ２４３−２５９．　Ａ、Ｒ，Ｌｉ＋ｓ、Ｎ、Ｙ。

、　１９ｇ２　；　Ｐ、　Ｆ、　Ｋａｄｏｒ及びＮ、　Ｅ、　５ｈａｒｐ１ｔｓｓの論文″Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＰｈａ＋ｍａｃｏｌｏｇ７”　、２４　：　５２１−５３１．１９８３を参照されたい。

下記の６種類のアルドース　レダクターゼ抑制物質に関してだけＸ線による結晶学的研究で解明された正確な分子立体配座が発表されている。即ち、３−ヒドロキシフラボン、アスピリン（アセチルサリチル酸）、フエノバルビタール、ジフェニルヒダントイン（商品名　Ｄｉｌａｃｌｉｎ）　、ツルビニル（Ｃ，Ｒ，Ｋｉ＋ｓｉｎｇｅｒ等、Ａｃｔａ　Ｃｒ７ｓ＋、　Ｃ４１：９８８−９９０　、１９８５）　。

トルラ　スタット（に、　ｆ、　Ｖａｒｕｇｈａｓ！等、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　６１：２１３７−２１４０．１９８３）　、及びＷＦ　−３６８１（Ｃ，Ｒ，Ｋｉｓ＋ｉｎｇｅｒ等、　ＡｃｔａＣｒｙｓｌ、　Ｃ４４：５１２−５１４．１９Ｈ）。

アルドース　レダクターゼ抑制物質のうちには抗炎症（ＡＩ）剤としても作用するものが知られている。即ち、３−ヒドロキシフラボン、アセチルサリチル酸、スリンダック、及びインドメサシンの場合と同様の構造骨格を有するフラボノイド類がそれである：さらにまた、鎮痙（ＡＣ）剤としても作用する２種類のアルドース　レダクターゼ抑制物質も知られている：即ち、ジフェニルヒダントイン及びフエノバルビタールである。

以上に述べた公知事実を、本発明の説明に供するため作成した表１に要約する。

該表の左肩に列記したのは分子立体配座が解明されている６種類のアルドース　レダクターゼ抑制物質である。中央欄にはアルドース　レダクターゼの５０％抑制に必要な化合物の近似モル濃度であるｒｃ、ｏを示しである。該表から明らかなように、ＩＣ，。値は１０−ｇ乃至１０づＭの範囲にわたっている。右欄にはこれら化合物のいくつかについて判明した他の薬学的活性、即ち、抗炎症作用または鎮座作用を示しである。

表　１ツルビニル　１０−８　（不明）アスピリン　１０−４　抗炎症ヒドロキシフラボン　１０−６　抗炎症ジフェニルヒダントイン　１０−４　鎮痙フエノバルビタール　１０″□３　鎮痙トルラスタット　１０□８　（不明）発明の要約本発明は下記の正確な３次元構造の反応性免疫調節立体配座を有する化合物を補乳類宿主に投与することによりその宿主の細胞性及び体液性（ｈｕｍｏｒａｌ　）免疫系のいくつかの様相を明確に調節する。ここに述べるツルビニル、トルラスタット、ＷＦ−３５Ｈ１及びその他の免疫調節剤はこのような反応性立体配座を有するものであるから、免疫系の正常な細胞性（ｃｅｌｌｏｌａｒｉｔｙ　）またはアラキドン酸経路の正常な代謝産物を変質させることなく遅延型過敏症、Ｔ−細胞増殖、及びＢ−細胞の抗体生成を抑制する治療に有用である。

図面の簡単な説明図１は投影平面に平行な平面Ｐ１で免疫調節立体配座を略示する正面図である。

図２は平面Ｐ１が投影平面と直交し、かつ基準原子８が観察者にむかって投影されるように図１に示した免疫調節立体配座を回転させて略示する端面図である。

図３は平面Ｐ１及びＰ２がいずれも投影平面と直交し、かつ基準原子８．１０が共に観察者にむかって投影されるように図２に示した免疫調節立体配座を回転させて略示する端面図である。

図４は図１の免疫調節立体配座をツルビニルの分子立体配座に重ねて示す。

図５は図２の免疫調節立体配座をツルビニルの分子立体配座に重ねて示す。

図６は図１の免疫調節立体配座を脱アセチル化アスピリンの分子立体配座に重ねて示す。

図７は図２の免疫調節立体配座を脱アセチル化アスピリンの分子立体配座に重ねて示す。

図８は図１の免疫調節立体配座をアセチル化アスピリンの分子立体配座に重ねて示す。

図９は図２の免疫調節立体配座をアセチル化アスピリンの分子立体配座に重ねて示す。

図１０は図１の免疫調節立体配座を３−ヒドロキシフラボンの分子立体配座に重ねて示す。

図１１は図２の免疫調節立体配座を３−ヒドロキシフラボンの分子立体配座に重ねて示す。

図１２は実験１に述べるツルビニルの正確な３次元立体配座を示す。

図１３は実験２の結果を要約するグラフである。

図１４は実験３の結果を要約すると共に、ツルビニルが遅延型過敏反応と関連する炎症を抑制することを示すグラフである。

図１５はツルビニルが投与量に応じて遅延型過敏症を抑制することを示すグラフである。

図１６は実験５に述へるように初回抗原刺激（ｎｏｒｍａｌ　ｐｒｉｍｅｄ　）を与え、ＤＮＦＢによる以後の抗原投与を行なわなかったマウスの耳介の断面を示す顕微鏡写真（約７００　Ｘ）である。

図１７は図１６と同様の、ただし緩衝液処理し、ＤＮＦＢによる２回目以後の抗原投与を行なった対照マウスのものを示す顕微鏡写真である。

図１８は図１６と同様の、ただし初回抗原刺激を与え、ツルビニル処理し、ＤＮＦＢによる２回目以後の抗原投与を行なったマウスのものを示す顕微鏡写真である。

図１９は図１６と同様の、ただし初回抗原刺激を与え、ツルビニル処理し、ＤＮＦＢによる２回目以後の抗原投与を行なわなかったマウスのものを示す顕微鏡写真である。

図２０は実験８で述べるようにツルビニルがマイトジェン（ｍｉｔｏｇｅｎ　）　Ｃａｎ　Ａ　に対するＴ−細胞の増殖応答を抑制することを示すグラフである。

図２１は実験８で述べるようにツルビニルがマイトジェンＣｏｎＡ　に対するＴ −細胞の増殖応答を抑制することを示す他のグラフである。

好ましい実施例の説明本発明は下記のような正確な３次元構造の反応性立体配座を有する１群の化合物によってこれまでにないやり方で哺乳類の免疫系を治療目的で撹乱させることができるという出願人の所見に基づく。これらの免疫調節剤は、刺激を加えられていない動物における免疫系の正常な細胞性には作用せず、病変的状態によって刺激されている免疫系を調節するだけである。このような調節には遅延型過敏（ＤＴＨ）反応の抑制、Ｔ−細胞マイトジェン反応性の抑制、及び２回目以後の抗原投与（ａｎ日ｇＢｉｃ　ｃｈａｌｌｅｎｇｃ　）に応答する抗体生成の抑制が含まれる。注目すべき点はこれらの効果が刺激されていない動物においてアラキドン酸経路の正常な代謝産物を変質させずに達成されることである。特に注目に値するのは上記調節効果が、宿主の免疫系が疾病によって刺激される前後に本発明の化合物を投与すれば達成されることである。

本発明の化合物を利用すれば、遅延型過敏症、Ｔ−細胞増殖及びＢ−細胞抗体生成を抑制することにより免疫系の特定の様相を調節することができる。従って、これらの化合物は歯根膜病、リュウマチ類似症状関節炎、アレルギー反応、炎症性成フ炎、過敏性反応、炎症、免疫処置の有害な副作用。

組織移植拒絶症、骨髄移植に伴なう対宿主性組織移植合併症などのような自己免疫疾病の治療にとって貴重である。

本発明の免疫調節剤を特徴づける反応性立体配座の正確な構造を図１〜図３に沿って以下に説明する。図１から明らかなように、芳香環１２は立体配座において２個の相互作用原子Ｘ１．Ｘ２と連携する。芳香環１２は実質的に平面的であり、この平面の約１５°以内で、好ましくは約７°またはそれ以下の範囲内で円筒対称関係にある５乃至７個の原子から成る（図１には６個の原子から成る代表的な環を示しである）。芳香環１２は単素環でも複素環でもよい。代表的な環１２はベンゼン、ピリジン、フラン及びチオフェンを含む。

芳香環１２は環路体、例えば、ナフタレンまたはアントラセン誘導体の一部でもよい。相互作用をする原子Ｘ、、Ｘ２はそれぞれ酸素、硫黄または窒素原子であってもよいが、相互作用をする原子を立体配座に配置するヒダントイン置換基、エーテルまたはその他の基でもよい。芳香環１２（または環路体）は顕著な免疫活性を与える立体配座を変質させることなく化合物の構造的安定性、可溶性、陰性電荷分布及び立体性に寄与するフッ素、塩素、臭素、（好ましくは１乃至７個、さらに好ましくは１乃至３個の炭素原子を有する）アルキル、及び／または芳香族置換基Ｙを有することができる。

本発明の免疫調節化合物の反応性立体配座は下記パラメータに基づいて画定することができる：Ｐ、＝芳香環１２によって画定される平面、Ｐ２＝２個の相互に作用する原子Ｘ　ｒ　、　Ｘ　２及び芳香環１２の中心１４によって画定される平面、Ｄ工＝芳香環１２の中心１４と一方の相互作用原子Ｘｌの核との間の距離、Ｄ２＝芳香環１２の中心１４と他方の相互作用原子Ｘ２の核との間の距離、Ｄ、＝相互作用原子Ｘ、、Ｘ、間の距離、及びα０＝各平面Ｐ、、Ｐ２と直交するベクトルの交差点における平面Ｐ１及び２２間の角度。

免疫調節化合物の反応性立体配座は下記のように上記パラメータに基づいて画定される：３．１人≦Ｄ１≦４．１人２．４人≦Ｄ２≦　２．８人３．８人≦Ｄ３≦４．２人、及び３５°≦α０≦６０’ 図２では、平面Ｐ１が投影平面と直交し、かつ芳香環１２の基準原子８が観察者にむかって投影されるように図１を回転させた端面図で示した。

図３では、平面Ｐ、及びＰ２がいずれも投影平面と直交し、かつ芳香環１２の基準原子８，１０がいずれも観察者にむかって投影されるように図２を回転させた端面図で示した。

ツルビニルによって例示される好ましい実施例の場合、この免疫調節化合物は図１，２及び図３及び上記パラメータに基づいて下記のように画定される反応性立体配座を有する＝Ｄｉ＃４．ＩＩＯ人、及び α’！＝；３８．８５゜トルレスタットによって例示される別の好ましい実施例の場合、免疫調節化合物は下記のように画定される反応性立体配座を有する：Ｄ　１＃３．１６人。

Ｄ２＃２．７［１人。

Ｄ１＃４．１５人、及び α’４５９．０゜ＷＦ−３６８１によって例示される策３の好ましい実施例の場合、免疫調節化合物は下記のように画定される反応性立体配座を有する：Ｄ＋＃３．９７人。

Ｄ　２　＃　２．４５人。

Ｄ３４４．１０人、及び α’＃４７．Ｑ’ 表２はツルビニル、トルレスタット及びＷＦ−３５８１の正確な３次元分子構造とそれぞれに固有の免疫調節特性との関係をまとめたものである。

表　２アセチル化　３，５５　２，７８　２．３２　８６．８７表２の左側の２つの欄は７種類のアルドース　レダクターゼ抑制物質（ＡＲＩ）及びそれらの他の薬学的作用を示す：即ち、抗炎症（ＡＩ）、鎮痙（ＡＣ）、及び免疫調節（ＩＲ）；アンダーラインを施した作用は本発明によるものである。免疫調節立体配座の座標及びパラメータを右側の５つの欄に示しである。ツルビニルに関しては、アルドース　レダクターゼ抑制作用に関与すると考えられる２個の酸素（図４゜５及び図１２における０１５及び０１６）を有するのでＰｌの中心１４と相互作用原子Ｘ１との間の距離を表わすＤｌの値を２通り示しである。アスピリンもアルドース　レダクターゼ抑制及び抗炎症作用に関与する可能性のある２個のカルボニル酸素（図６．　７．　８及び図９における０１及び０４）を有する。臨床的に投与するアスピリンは脱アセチル化してサリチレートとなってカルボニル酸素の１つ（０４）を失うことがよく知られている。表２はアセチル化された形と脱アセチル化されたアスピリンの双方についてその構造パラメータを示している。表中のフラボン構造は３−ヒドロキシフラボンである。抗炎症作用を有するいくつかのフラボノイド類似化合物が知られており、それらはいずれも３−ヒドロキシフラボンと同じ基本的３次元立体配座を有する。ジフェニルヒダントインにもフエノバルビタールにも相互作用原子Ｘ２が存在しないから本発明の免疫調節モデルには含まれない。トルレスタット及びＷＦ−３６１１１の反応性立体配座の座標は下記の式１及び２に基づいて説明する。

表２のデータを分析した結果を要約すると次の通りである。

１、フルドース　レダクターゼ抑制作用は公知技術が仮説として論じたように芳香環１２とカルボニル基中の相互作用原子Ｘ、の存在による；２、いくつかのアルドース　レダクターゼ抑制物質の鎮痙作用は芳香環１２と連携する相互作用原子Ｘ１を含むヒダントイン環の存在と関連する。

３、いくつかのアルドース　レダクターゼ抑制物質の抗炎症及び免疫調節作用は芳香環１２、カルボニル基中の相互作用原子Ｘ１及び第２相互作用原子Ｘ２の立体配座関係によって特定され、これら３つの要素が平面Ｐ２を芳香環１２の平面Ｐ１に対する特定の空間的及び角度的配向で画定する。

４、免疫調節化合物は反応性立体配座を有するという点で抗炎症化合物から区別される。

抗炎症及び鎮痙作用に関して発明者等は相互作用原子Ｘ２が抗炎症化合物中に存在し、鎮痙化合物中には存在したり存在しなかったりするとの所見を得た。表２に示したＰｌの中心１４とＸ２との間の距離Ｄ２の値は抗炎症化合物の場合狭い範囲（２，７４人＜　Ｄ　２　＜　２．７８人）に含まれる。なお、相互作用原子Ｘ２を持たない鎮痙化合物についてはＤ２を算出できない。

抗炎症化合物においては、相互作用原子Ｘ１及びＸ２が表２に示しである距離り、たけ互いに離れている。相互作用原子Ｘ１及びＸ２は平面Ｐ１の中心１４と共に策２平面Ｐ２を形成する。平面Ｐ１及び２２間の角度関係は平面Ｐ１及　びＰ２のそれぞれと直交するベクトル１６．１８間の角度α０によって表わされる（図３参照）。α０値も表２に示した。

公知の２つの抗炎症化合物であるアスピリン及びヒドロキシフラボンに関してＤ１値を比較すると、アスピリンのアセチル化された形でも脱アセチル化された形でもアルドースレダクターゼ抑制作用（ＡＲＩ）があることが示唆される。

しかし、Ｄ２．Ｄ、及びα０に関するデータから、抗炎症作用と相関関連にあると考えられる興味深い重要な構造上の相違が認められる。生体内においてアセチル化形式のものよりも脱アセチル化形式のものが優位にあることが判明しているので、発明者等はアスピリンの脱アセチル化立体配座に主眼を置くことにする（図６及び図７）。脱アセチル化アスピリン（サリチレート）及びヒドロキシフラボンではそれぞれＤ２＝２．７８人及ヒ２．７４Ａ、Ｄ３　＝４．２ｆ人及Ｕ４．０５人、α’＝０．６９°及び０．６９°である。これらのパラメータはアスピリン及びヒドロキシフラボンの反応部位が極めて相似した３次元立体配座を有することを示唆する。他方、ツルビニルにおける２つの反応部位は全く異なる：即ち、どちらの反応部位でもＤ２＝２．７４であるが、Ｄ、はそれぞれ４．００人または６．４１人。

α０は３１８５°または９．３９°である。

図４及び図５に示すように、ツルビニルは活性立体配座に関与すると考えられる２個のカルボニル酸素０１５及び０１６を有する。０１．のＤ１値は４．０６人、０１６のＤ１値は５．７２人である。なお、０．６は他のＡＲＩ化合物におけるり、値の範囲外であるが０１．は範囲内である。表２はｏ１６のＰ２　に関するα０が０１５のＰ２に関するα０よりもはるかに小さいことを示している。従って、０．、がツルビニルの活性原子であるというのが発明者等の結論である。

０１５はＤ２＝２．７４人、Ｄ３＝４．００人を有し、このり、値は脱アセチル化アスピリン及びヒドロキシフラボンのり、値に極めて近いが、ｏ１５を含む平面Ｐ２ではα＝３８．ｌ１５°である。ツルビニル、脱アセチル化アスピリン及びヒドロキシフラボンの３次元分子構造間の類似性に照らして、発明者等はツルビニルがアルドース　レダクターゼ抑制作用だけでなく抗炎症作用をも発揮できるものと考える。また、α０値の相違はツルビニルの抗炎症作用の性質が他の抑制剤の抗炎症作用の性質とは異なることを示唆した。

図４乃至図１１はツルビニル及び抗炎症作用を有するアルドース　レダクターゼ抑制物質の分子立体配座を示す。なお、図１及び図２に示したモデルを図４乃至図１１での化合物の分子構造に重ね合わせである。

図４及び図５においてツルビニル分子の２つの形体が本発明の免疫調節反応部位を明らかにしている。ツルビニルの正面図である図４は芳香環平面Ｐ　Ｌ　、及びＰｌの中心１４とＸｌにおけるカルボニル酸素とＸ２におけるエーテル酸素によって形成される平面Ｐ２を示す。距離座標ＤＩ、Ｄ２及びり、も示されている。図５はＸ２（０１）が観察者にむかって投影されるように作成されたツルビニルの端面図である。

図５から明らかなように、Ｐｌ及びＰ２は同一平面に存在しない。図５ではＸ、におけるカルボニル酸素が平面Ｐ１の上方に位置する。Ｐｌ及びＰ２に対する垂直線間の角度関係はα’　＝３１１．８５°である（表２参照）。図４では、ツルビニルの第２カルボニル酸素（０１６）からＰ、の中心（ＤＩ　＝５．７２人）までの距離はＯ工５　（Ｄｘ　＝４．０５人）から前記中心までの距離よりもはるかに大きい。ツルビニルを図５の端面で見ると、０．６は０１の背後にあり、ｐｔ　（α’＝９．Ｈ°）とほぼ同シ平面内ニあり、０１５　（α’　＝３８．８５°）を含む平面Ｐ１の場合とは著しく異なる。０１５　（Ｌ　）カルボニルによって示されるり、及びα０値が比較的大きい値を取ることは免疫調節作用に必要な３次元立体配座と一致する。

図６及び図７には脱アセチル化された形のアスピリンを示す。ツルビニルとは対照的に、脱アセチル化された形のアスピリンのα０値は低い。図６は脱アセチル化アスピリンの正面図である。Ｘｌにおけるカルボニル酸素０．及びＸ２における酸素０３は芳香環平面Ｐ１の中心１４と共に平面Ｐ２を形成する。図７は平面Ｐ１及びＰ２がほぼ共面関係にあり、α’＝０．６９°　（第２表参照）であることを示している。このα０値はツルビニルに見られる値α０＝　３８．８５° とは著しく異なり、このことは両化合物の作用が極めて異なることを裏づける重要な構造上の基本である。図７はまた、脱アセチル化が位［１２０における結合を断つ時に失われるアスピリンのアセチル基をも示す。なお、アセチル化アスピリンは潜在的Ｘ１位置を占めるカルボニル酸素０４を有する。

図８及び図９はアセチル化アスピリンを示す。アセチル化形状において、０４はＰｌの中心１４及びＸ２におけるエーテル酸素ｏ３と共に平面Ｐ２を形成するＸｌにおけるカルボニルである。アセチル化形状において、α’＝８６．８７°である。Ｐ２は図９に示すように平面Ｐ１とほぼ直交する。アセチル化アスピリンはアスピリンが血液中で急速に加水分解してサリチレートとなるから生体中に通常存在し続けることができない。ツルビニルのヒダントイン及びピラン構造が、Ｐ、及び２２間の角度関係をα’＝３８．８５°に維持するように酸素Ｘ、、Ｘ２を安定させることは注目に値する。この安定化効果は極めて有意義であり、アスピリンの抗炎症作用に匹敵するツルビニルの免疫調節作用を裏づけるものであると考えられる。

図１０及び図１１は３−ヒドロキシフラボンの免疫調節モデルと３次元分子構造と間の関係を示す。フラボンの平面Ｐ１及びＰ２は脱アセチル化アスピリンの平面Ｐ１及びＰ２と極めて似ている。フラボンのＣ０は脱アセチル化アスピリンと同じ０．６９であり、ツルビニルのＣ０よりもはるかに小さい。ここでもこのようなα０値の相違はツルビニルとフラボンとの抗炎症作用に差があることを示唆する。

構造式１及び２は原子の番号付はシステムであり、このシステムに基づいて表２に示したトルレスタット及びＷＦ−３６８１に関する反応性立体配座の座標を整合させた。構造式１は参考のため本願明細書に引用しているＣａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　ｆｉｌ：２１３７−２１４０．１９８３におけるに、　１．　Ｖａｒｕｇｈｅｓｅ等の論文に開示されているようにトルレスタットを示す：し、相互作用原子Ｘ工を硫黄原子Ｓ２で表わし、相互作用原子Ｘ２を酸素原子０２で表わしている。

構造式２は参考のため本願明細書に引用しているＡｃｔａ　ＣＢｓＬ　Ｃ４４；　５１２−５１４．１９８８におけるＣ、　Ｒ，Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ等の論文に開示されているようにＷＦ　−３６８ｉの分子構造を示す。

構造式２では、ＷＦ−３６８１分子中の芳香環１２をＣ４−０３−Ｃ５−Ｃ６− Ｃ７で表わし、相互作用原子Ｘ１を酸素原子ｏ２で表わし、相互作用原子Ｘ２を酸素原子０４で表わしている。

上記所見に基づき、遅延型過敏症（Ｄ　Ｔ　Ｈ）効力検定を利用してツルビニル、トルレスタット及びＷＦ−３６８１を試験した。遅延型過敏症は免疫系の細胞性要素によって調節されるむくみ、赤み、高熱及び苦痛を特徴とする広義の抗炎病反応である。発明者等は３つの化合物がいずれも遅延型過敏症反応に対して強力な、はとんど同じ抑制効果を示すことを発見した。さらに実験を重ねた結果、意外な驚くほどの態様でツルビニルがＴ−細胞増殖及びＢ−細胞抗体生成に対しても効果を示すことが判明した。注目すべき所見として、少なく、ともツルビニルとＷＦ−３６れは正常な、刺激を与えられていない動物においてはアラキドン酸経路の正常な代謝産物を変質させない。即ち、ツルビニル、トルレスタット及びＷＦ−３６８１は、アスピリンやフラボンと同様に抗炎症作用を有するが、アスピリンやフラボンとは異なり免疫系の細胞性要素及び体液性（ｈｕｍｏｒａｌ　）要素に作用する新種の免疫調節化合物である。

鎮痙作用に関しては、ツルビニル構造もジフェニルヒダントイレやフエノバルビタールと同様にヒダントイン環を含んでいるのは興味深い。発明者等は鎮痙作用にとってヒダントイン環が重要であるとの所見を得、この関係に基づいて、ツルビニルが免疫調節作用のほかに鎮痙作用を有することを予る。　Ｐ、　Ｃ，Ｈａｌｌ及びに、　Ｌ、　Ｋｅｉｍ″Ａｎｔｉｃｏｎｖｕｌｓａｎｊ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ＋ｏｒｂｉｎｉｌ　ａｎｄ　ＡＬ−１５７６：ｈ７ｄａｎ＋ｏｉｎ− ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ａｌｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ’、Ｆｅｄｅ＋ａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　４６（３）：４３３．６１１６Ａ。

１９８７を参照されたい。

ツルビニルにおいてはピラン環がＸｌとＸ２の関係及び平面Ｐ、及び２２間の関係を安定させる。この安定性はツルビニルの免疫調節作用にとって重要であると考えられる。発明者等はアルドース　レダクターゼ抑制作用を有することが報告されているツルビニル類似物質の多くが上記免疫調節立体配座を含む分子構造を有するとの所見をも得た。即ち、免疫調節作用を有するツルビニル類似物質は下記構造式二または構造式：で表わされる化合物、及び薬学的に許容できる陽イオンを有するその塩基塩であると定義できる。

上記構造式でＸは、構造式で表わされるベンズ−α、β−０または置換ベンズ−α、β−〇、ただしこの構造式でＹｌは水素１　Ｙｌは水素、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、低級アルキルまたは低級アルコキシ基（それぞれが１個乃至４個の炭素原子を有する）またはＹｌ及びＹｌは別々に取ればそれぞれが塩素、低級アルキル基または低級アルコキシ基であり、一括すれば一〇ＣＨ２（ＣＨ２）、０−でｎはゼロまたは１　；　（ＵＳＰＮ　４．１４７．７９５　；ＵＳＰ！ｌ　４．１３０．７１４）　；Ａ　ｒ　ハロ１　タは９待ＩＷに松し）丁７．−ルオトを今フーノ七ｈ／。

で置換ベンズ−α、β−０ただし、この構造式でＲ１は塩素、臭素、フッ素、または１個乃至３個の炭素原子を有するアルキルであり、Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、Ｒ２及びＲ１の他方はアミノ、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、各アルキル基は１個乃至３個の炭素原子を有する（ＵＳＰＮ　４．２４８．８８２）または構造式：で表わされるフェニルまたはフェノキシ置換ベンズ−α、β−〇ただしこの構造式でＷは６または８位置において水素、メチル、メトキシ、フェニル、フェノキシ、フッ素、塩素またはホウ素：である（ＵＳＰＮ　４．１８１．７２９）　；または構造式：で表わされるーナフ（ｎａｐｈ）−α、β−０；であるがメチル、塩素または臭素から選択された１個または２個の全く同じ置換基を有する置換ナフーα、β− 〇（ＵＳＰＮ　４．１８１．７２８）である。

または構造式：ツルビニル及びその上記類似物質は免疫調節剤として有用であり、従って、自己免疫疾患、アレルギー反応、過敏反応。

炎症、炎症性成フ炎２組織移植対宿主拒絶、免疫法の好ましくない副作用、及び骨髄移植の治療に価値がある。請求の範囲及び明細書本文に使用されている治療という表現は上記疾患の予防及び／または軽減を含む。

経口及び腸管外など種々の公知投与経路によって治療を必要とするヒト患者またはその他の哺乳宿主に本発明の免疫調節化合物を投与すればよい。一般に、これらの化合物は患者体重ｋｇ当たり１日に１乃至２５０ｍｇ投与すればよい。ただし個々の患者の病状に応じである程度投与量が調整され、いかなる場合にも医師は個々の患者に適切な投与量を決定する。

薬学的に許容される塩類は公知の方法によってツルビニル及びその類似物質から容易に調製することができる。即ち、ツルビニルまたはその類似物質を所要の薬学的に許容できる金属水酸化物またはその他の金属塩基の水溶液で処理し、得られた溶液を好ましくは減圧下で蒸発乾燥させることによって上記塩類を調製することができる。これに代わる方法として、ツルビニルまたはその類似物質の低級アルカン溶液を所要の金属アルコキシドと混合し、この溶液を蒸発乾燥させてもよい。薬学的に許容できる水酸化物、塩基及びアルコキシドとしては、ツルビニル及びその類似物質の酸性化合物と共に金属塩を形成し、治療を必要とする患者に投与しても毒性のない陽イオンを有するものが挙げられる。この目的に好適な陽イオンの例としてはカリウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウムが挙げられるがこれに限られるものではない。

化合物の投与は１回で、または複数回に分けて、化合物だけを、または薬学的に許容できるキャリアと共に行なうことができる。好適な薬学的に許容できるキャリアとしては不活性固形希釈材または充填剤、無菌水溶液、各種無毒有機溶剤などがある。ツルビニルまたはその類似物質を薬学的に許容できるキャリアと組合わせることによって形成された薬剤は錠剤、粉末、ロゼンジ類、シロップ、注射液などの形で投与される。必要に応じてこれらの薬剤にフレーバー、バインダー、賦形剤などのような補足成分を加えることができる。即ち、経口投与には、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム。

リン酸カルシウムのような種々の賦形剤を含有する錠剤を、デンプン、好ましくはポテトまたはタピオカを原料とするデンプン、アルギン酸、ケイ酸錯塩などのような崩壊剤と共に、かつポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、アラビアゴムなどのようなバインダーと共に使用すればよい。また、錠剤を製造する際には、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルクなどのような潤滑剤が有用な場合が多い。これらと同様の固形組成物は塩充填材及び硬質充填化ゼラチンカプセルに充填材として使用することもできる。

この目的に好ましい物質としてはラクトースまたは乳糖、高分子ポリエチレングリコールなどがある。経口用としてエリキシル（ｃｌ目１０の水性懸濁液が必要な場合には、主要活性成分を種々の甘味料または調味料２着色剤、必要とあれば、乳化剤または懸濁剤と組合わせ、さらに水、エタノール、プロピレングリコール及びこれらを組合わせたもののような希釈材と組合わせればよい。腸管外投与の場合、胡麻油またはビーナツツ油または水性プロピレングリコールにツルビニルまたはその類似物質を溶かした溶液、あるいは先に述べた薬学的に許容できる対応の水溶性金属塩の無菌水溶液を使用することができる。この水溶液は必要に応じて適当に緩衝処理し、液状希釈剤は予め充分な食塩水またはグリコールで等浸透圧にする。このような水溶液は特に静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内注射用に特に好適である。なお、無菌水性媒質は当業者に公知の標準的技術によって容易に得られる。また、適当な溶液を介して上記化合物を局部投与することも可能である。

上述したように調剤された本発明の化合物は例えば遅延型過敏症反応を抑制することによって免疫系を調節するために使用するものであることを説明する指示を印刷してパッケージされるのが普通である。

本発明の理解を助けるため、種々の実験の結果を以下に示す。

実験１参考のため本願明細書に引用しているＣ、　Ｒ，にｉｓｓｉｎｇｅｒ等がＡｃｔａ　Ｃ＋ｙｓｔ、　Ｃ４１：　９８８−９９０．１９８５で開示したように３− Ｄ　Ｘ線回折法を利用してツルビニルの結晶及び分子構造を検討した。

ツルビニルのサンプルはＰ［ｉ＋！ｒ　Ｉｎｃ、から提供された（Ｌｏｔ　Ｎｏ、　１．１．３９６−２３５〜ＩＢ）。アセトン及び水溶液からゆっくり蒸発させることによって結晶させた。結晶の寸法はｏ、８５Ｘ　Ｑ、　６５　Ｘ　Ｑ、　４０ｍｍであった。Ｋ　ＲＩ　Ｓ　Ｅ　Ｌ　Ｃｏ＋＋ｊｒｏｌ−ｕｐｄａｔｅｄＰｉｃｋｅｒ　Ｆ　Ａ　ＣＳ　−１回折計を使用。Ｃｕ　Ｋａ放射。細胞定数は１６の反射角度（２２°〈２θ〉４７°）からの最小自乗法によってめた。ω −２θスキヤン、２°ｍ１ｎ−’０吸収補正を適用（１，１１２乃至１．０７）、最大（ｓ１ｎθ）／λ＝０．５３０５　（ｈｏ−７，にｏ−６，１Ｏ−２２）　、５つノ標準反射からは目立ったバリエーションは認められなかった。７９２の反射波のうち７６２が独特、１９が不観察（Ｆく４αＦ）であった。ローレンツ偏光補正を適用した。劣化補正は適用しなかった。ＲＡＮＴＡＮ８０　（Ｙａｏ、１９ｇ１　）を使用する直接法によって構造を解明した。フル・マトリックス最小自乗法によってＦを細分した。非水素原子の温度係数は異方性、水素原子の温度係数は等方性であった。水素原子を差分マツプ上に位置ぎめした。Ｒ−０，０４２、Ｒｗ　＝０．０４８　（ｗ＝１／σ、）、平均及び最大Δ／σはそれぞれＱ、　ｔ１７９９及び０．９６７２であった。等方性吸光パラメータの細分値は０．０１２４　（３）であった。Ｃ，Ｎ及びＯの散乱係数をり、　Ｔ、　Ｃｒｏｔａｒ等、　Ａｃｔａ　Ｃｒｙｓｔ。

Ａ２４：３２１−２４．１９６８から得た。水素の散乱係数はＲ，Ｆ、　５Ｉｅｖａｒｊ等、Ｊ、Ｃｈｅｗ、ｐｈ艮４２　；　１１７５〜８７．　１．９６５から得た。また弗素の散乱係数はＸ線の結晶学（１９７４）のＩｎｆｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｔａｂｌｅから得た。細分処理のためのプログラムはＸＲＡＹ　７６　、１．Ｍ。

５ｔｅｖａＮ等、　Ｔｅｃｈ、Ｒｅｐ、ＴＲ−４４６，ＶｏｍｐｕＨｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｃｅｎｔｅｒ、［１ｎｉｖａｒｓｉ！ｙ　ｏｆ　１１ａ＋ｙｌａｎｄ、ＣｏＣｏ１１ｅ　Ｐａｒｋ、ＭＤ　１９７６から得た。

ツルビニルの３次元立体配座を図１２に示す。結合長及び結合角度を表３及び表４に示す。

表　３　ツルビニルの結合長（人）０（１）−Ｃ（２）　１．４５０　Ｃ（９）−Ｃ（１０）　１．３７８０（２） −Ｃ（３）　１．４８４　Ｃ（９）−０（１）　１．３７４Ｃ（３）−Ｃ（４）　１．５４０　Ｃ（４）−Ｃ（１１）　１．５３７Ｃ（４）−Ｃ（１Ｇ）　１．５１６　Ｃ（１１）−０（１５）　１．２１．７Ｃ（１０）−Ｃ（５）　１．４０３　Ｃ（１１）−Ｎ（１２）　１．３６４Ｃ（５）−Ｃ（６）　ＩＪ７０　Ｎ（１２）−Ｃ（１３）　１．４１０Ｃ（６）−Ｆ（１７）　１Ｊ８６　Ｃ（１３）−ｆ）（１６）　１．２２５Ｃ（６）−Ｃ（７）　１．３６２　Ｃ（１３）− Ｅ４）　ＩＪ４５Ｃ（７）−Ｃ（Ｉｔ）　１．３７４　Ｎ（Ｉ４）−Ｃ（４）　１．４０Ｃ（８）〜ｃ　（９）　１．３９８表　４　ツルビニルの結合角度（Ｃ０）１１（１）−Ｃ（２）−Ｃ（３）　１１１３　Ｃ（＋）−ＣＦ！ｌ）−Ｃｆｇ）　＋１５ＪＣ（２）　−Ｃ（３）　−Ｃ（４）　１１０．６　Ｃ（３）　−Ｃ（４）　−Ｎ　（＋４）　Ｉ　１１７Ｃ（３）−Ｃ（４１−Ｃ（１，１１１１１Ｑ、Ｉ　Ｃ（３）−Ｃ（４）−Ｃ（ＩＩ）　ｌｌｌ１．ＧＣ（＜１−Ｃ（１Ｇ）−Ｃ（９１１２１，２Ｃ（１０）−Ｃ（４）−１１（１４）　１１２．７Ｃ（１０）−Ｃ（９）−（１（１）　１２３．４　Ｃ（１０）−Ｃ（４）−Ｃ（［１）　１１１．９Ｃ（９）−０（１）−Ｃ（２）　１１４．５　Ｇ（４）−Ｃ０ｌ）−Ｎ（１２）　１０７．８Ｃ（１Ｇ）−Ｃ（５）−Ｃ（６）　１１．７．７　Ｃ（Ｉｔ）−Ｎ（１２）−Ｃ（１３）　１１１゜１Ｃ（５）−Ｃ（６）−Ｃ（７）　１２４．Ｉ　Ｃ（１２）−Ｎ（１３）− Ｃ（１４）　ＩＯ２，２Ｃ（６）−Ｃ（７）−Ｃ（８）　１１８．５　Ｃ（１３）４（１４）−Ｃ（４）　１１３．６Ｃ（７）−Ｃ（８）−Ｃ（９）　１１９．４　Ｎ（１４）−Ｃ（４）−Ｃ（１１）　１０Ｑ、２Ｃ（８）−Ｃ（９）−Ｃ（１０）　１２１．３　Ｃ（４）−Ｃ（１１）−０（＋、５１　１２５．８Ｃ（９）−Ｃ（１Ｇ）−Ｃ（５）　１１９．Ｉ　Ｎ（１２１−Ｃ（１１）−０（１５）　１２５．４Ｃ（４）−Ｃ（１０）−Ｃ（５）　１１９．７　Ｎ（１２）−Ｃ（１３）−０（１６）　１２５．５Ｃ（５）−Ｃ（６）−Ｆ（１７）　１１７、Ｉ　Ｎ（１，４）−Ｃ（１３）−０（１６）　１２７．３Ｃ（７）−Ｃ（６）−Ｆ（１７）　１１８．９ツルビニルの免疫調節効果が認められ、その詳細を以下に述べる一連の免疫実験に関連して明らかにする。

免疫実験第１シリーズ遅延型過敏症（Ｄ　Ｔ　Ｈ）に伴なう免疫性の炎症を抑制するツルビニルの能力を以下に述べる一連の実験で試験した。１９２３球及びマクロファージの関与を伴なう遅延型過敏症は哺乳類を新規の抗原と接触させ（即ち、この抗原で刺激し）、次いで４乃至７日後にこの哺乳類を同じ抗原と接触させる（投与する）ことにより生体内で試験することができる。典型的なりＴＨ反応は炎症反応、硬化、紅斑などの症状を含み、これらの症状は２回目以後の抗原投与から２４乃至４８時間後ピークに達し、以後ゆっくりと軽減する。

実験２生後８週間の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ？ウス（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｓ）を抗原刺激を与えるグループと与えないグループとに分けた。

抗原刺激を与えるグループに属する５匹のマウスには剃った腹部の皮フにエタノール；アセトン（３：　１）に溶かした０、１ｍｌのＱ、５％ＤＮＦＢを塗ることによって２，４−ジニトｏフルオロベンゼン（ＤＮＦ　Ｂ　；　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｇｒａｄｅｌ、約９８％、　Ｉ、ａｔ　１２９　Ｃ −［１０５５，Ｎｏ、ｄ−６１１７９）で刺激した。抗原刺激を与えないグループに属する５匹のマウスにはその腹部を剃ってエタノール；アセトン（３：　１）溶媒だけを局部的に塗った。両グループのマウスに４５後ＤＮＦＢを投与した。この投与には適当な皮フ部分、即ち、耳を選んだ。即ち、一方の耳を投与に当て、他方の耳を対照として利用した。それぞれの耳の耳介における厚さをマイクロメータ・カリバスを使用して測定した。１回目の測定は抗原刺激から４日後に行ない、この１回目の測定値を図１３の０日の位置に示した。

次いで、それぞれのマウスに抗原投与を行なったニ一方の耳にはオリーブ油に溶かした０、３５％ＤＮＦＢを１滴投与し、他方の（非投与対照）耳にはオリーブ油だけを塗った。投与した耳と投与しなかった耳の厚さくＥ　Ｔ）を毎日測定し、その結果として腫脹反応を下記式に基づいて図１３に示した：抗原非投与耳のＥＴ図１３から明らかなように、予めＤＮＦＢと接触させた（抗原刺激を与えた）動物は予めＤＮＦＢと接触させなかった（抗原刺激を与えなかった）動物に比較して２回目以後の抗原投与に対する反応がはるかに顕著であった。最大の腫脹が抗原刺激後１日に目観察された抗原刺激を与えた動物では与えない動物の９倍もの腫脹（％）が観察された。予め抗原刺激を与えた後抗原を投与した耳には紅斑も認められた。

この実験はこれらのマウスがこの新規抗原に対して炎症反応を示すことを立証し、図１３における抗原刺激及び抗原非刺激マウスの曲線がツルビニルの抗炎症効果の比較対照として利用された。

実験３実験２と並行してツルビニルの抗炎症作用を試験するための実験を行なった。３つのグループの生後８週間の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを上述した方法でＤＮＦＢと接触させた。

４日後、これらの抗原接触グループに１０．１、Ｏまたは０．１ｍｇ／体重ｋｇの濃度でツルビニル（ＭＷ−２３６，１２；　Ｈｉｘｅｒ　ＬｏｔＮｏ、１１．３９６−２３５−Ｉ　Ｂ）を経口投与した。６時間後、最初の耳側定値をめ、個々のマウスの一方の耳に抗原投与した。次いで上記濃度でツルビニルを投与して６時間後から毎日耳の厚さを測定した。上述した方法で腫脹反応を計算し、図１４に示すようなデータを得た。

図１４には、図１３に示した抗原刺激及び抗原非刺激マウスの曲線をそのまま破線で再現し、３つのツルビニル処理グループの炎症反応を実線で示した。また、耳の腫脹を抑制する効果は投与量に応じて異なった：耳の腫脹を抑制するツルビニルの効果はツルビニルの濃度が高いほど高かった。即ち、１０ｍｇ／ｋｇの濃度では耳の腫脹がほとんど完全に抑制され、このことは１０ｍｇ／ｋｇ曲線が抗原非接触曲線とほぼ一致することからも明らかである。

図１５から明らかなように、ツルビニルの投与量効果は実験３を３回繰返えして集めたデータを整理することによって特徴づけることができる。即ち、図１５はツルビニル濃度（＋ｎｇ／ｋｇ　）に対してＤＴＨ反応（％）を半対数目盛で示すグラフであり、ツルビニル投与マウスの耳腫脹（％）図１５に示すデータはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを利用する３回の実験から得られた。最大腫脹の時点、即ち、抗原投与の２時間後に測定を行なって得たデータであり、図中の各点は少なくとも９匹のマウスを表わす。このデータは抗炎症反応の抑制がツルビニル投与量に応じて異なり、ツルビニル投与量の対数に正比例して変化することを示唆している。最小自乗性適合ラインからの外挿はＤＴＨ反応の最大抑制（腫脹なし）がツルビニル１３．５ｍｇ／　ｋｇ体重の濃度で得られることを示している。ツルビニルはＤＴＨ反応を著しく抑制するから、接触度フ炎や変態細胞移植（ａｌｌｏｇｒａｆ＋　）拒絶を抑制するというような治療のための新しい抗炎症剤としての可能性を具Ｂａ１ｂ　ＣＮＣＩＴマウスＬｉｆ！５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｉｎｃ、、　Ｓｔ、　ＰｑＨｒｓｂｕｒｇｈ、　ＦＬ　）で実験２及び３を繰返えした。典型的なりＴＨ反応が投与量に応じて抑制される現象はツルビニルを投与されたこのマウスでも観察された。

実験５ツルビニル処理したマウスと２回目以後の抗原投与だけを行なった対照マウスから得た耳の組織を組織学的に検査したところ、ツルビニル処理したグループで浸潤が軽度であったが、どちらのグループでも抗原投与した耳に単核細胞浸潤が発生した。

図１６．１７．１８及び図１９には緩衝剤（図１６及び図１７）またはツルビニル（図１８及び図１９）で処理したマウスから得た耳に現われるＤＴＨ反応の組織学的特徴を示した。図１６は初回の抗原刺激を与えたのみでＤＮＦＢは投与しなかったマウスの耳を示す。皮フのコンパートメント２４だけでなく、表皮２２に単核浸潤２８が認められない。耳の中心には軟骨層２６が見える。図１７は初回抗原刺激を与え、２回目のＤＮＦＢ投与を行なってから２４時間後に緩衝剤処理を施したマウスの耳を示す。皮フのコンパートメント２４に顕著な水腫が認められ、真皮にも表皮にも（矢印２８で示す）広範囲の単核細胞浸潤も認められる。初回の抗原刺激を与え、２回目のＤＮＦＢ投与を行なってから２４時間後にソルビニル処理したマウスの組織的様相を図１８に示す。初回の抗原刺激に続いて緩衝剤処理したマウスとは対照的に、皮フコンパートメント２４の水腫ははるかに軽度であり、コンパートメント内の単核細胞も少ない。表皮２２中の単核細胞２８も少なかった。図１９には初回の抗原刺激を与え、ツルビニル処理し、ただし２回目のＤＮＦＢ投与は行なわなかったマウスの耳を示す。初回の抗原刺激を与えてから緩衝剤処理したマウスの場合と同様に、２回目の抗原刺激を行なわなかった耳には水腫が認められず、浸潤単核細胞も見られなかった。

図１８に示す組織断面はツルビニルによる腫脹抑制には軽度の細胞浸潤が伴なうことを示唆している。この軽度の反応はツルビニルが炎症メディエータの分泌だけでなく炎症部位への細胞漸増にも影響することを暗示した。発明者の知る限り、このような免疫調節はこれまでに観察されなかったものこの実験第１シリーズの結果は興味深いものであった。実験２ではＤＴＨタイプの細胞性免疫の発生がマウスのモデルで立証された。実験３及び４はツルビニルが投与量に応じてＤＴＨ反応を抑制することを立証した。ただし、実験５はツルビニルがこのような免疫反応を完全に抑制するものではないことを示唆した：即ち、２回目の抗原投与を行ない、ツルビニルで処理したマウスの耳に浸潤単核細胞が存在するということは抗原認識は起こったものの、炎症のエフェクタ・メカニズムはツルビニルによって特異的に抑制されることを示唆した。遅延型過敏反応には特異感作Ｔ　− ＩＪンバ球及びマクロファージが関与することは一般に定説となっている。マクロファージには２つの機能があると考えられる：（１）Ｔ−ＩＪンパ球に新規抗原を提示してこれを特異的に感作する（抗原認識）補助細胞として機能し、次いで（２）感作Ｔ−リンパ球によって産生させられたメディエータに反応したのちＤＴＨ中のエフェクタ細胞として機能する。この２つの機能はマクロファージ・ポピユレーションの異質性と相関させることができる：即ち、一部のポピユレーション（またはマクロファージ前駆体）はすぐれた抗原提示細胞であり、他のポピユレーションはエフェクタ細胞として前者よりも活性が強い。

そこでツルビニルが如何にＤＴＨ反応を抑制するかを解明するための実験を別に行なった。マクロファージによる抗原提示の条件が満たされればＴ〜細胞を抗原に対して感作して活性化することができる。活性化したＴ−細胞は増殖し、工Ｌ −２レセプタを圧出し、活性化Ｔ−細胞の一部はＩＬ−２を分泌する。活性化Ｔ −細胞は他のメディエータ、例えば、マクロファージ阻止因子（ＭＩＦ）、インターフエコン、及びその他の可溶因子をも分泌する。このようなＴ−細胞による産生物のうちには、例えばＭＩＦやα、βインターフェロンなどのようにマクロファージを活性化できるものがある。

活性化されたマクロファージは工Ｌ−１（内因性発熱物質）、異化性酵素（例えばコラゲナーゼ、ハイラロニダーゼ、中性プロティナーゼ）、及びＥ−シリーズのプロスタグランジンを分泌する。即ち、マクロファージはＴ−細胞に対する抗原提示に必要であるだけでなく、ＩＬ−１，プロスタグランジン及び異化性酵素を抗原投与部位において分泌することにより免疫性炎症の症候を発生させるエフェクタ細胞でもある。

免疫系はリンパ球及び単核食細胞の産生を制御すると共にその鑑別機能に影響する複雑な細胞相互作用をする複合系を含む。免疫系におけるこれらの異なる細胞ポピユレーションの相互依存は有効に機能するために必須のこれら細胞ポピユレーションの相互作用に反映されている。Ｔ−細胞機能の多くは抗原提示へのマクロファージの関与に依存する。また、Ｂ細胞は抗原に対して抗体を産生ずるのにヘルパーニー細胞を必要とする。このヘルパーニー細胞は抗原提示にマクロファージまたは補助細胞の関与を必要とする。即ち、１９２８球とマクロファージの相互作用は免疫系において中心的役割を果し、１９２８球の活性化及び増殖、Ｔヘルパー作用及びＢリンパ球抗体反応の発生、細胞障害（ＣＨｏｔｏｘｉｃ　）　Ｔ　’Ｊンパ球反応の発生、及びマクロファージ活性化に影響する。そこで哺乳類の免疫状態のこれら別のパラメータにもツルビニルが影響するかどうかを判定するための実験を行なった。以下に述べる２つの実験シリーズによってＢ細胞抗体産生及びＴ−細胞マイトジニン反応に対するツルビニルの作用を検討した。

免疫実験第２シリーズＢ細胞抗体産生に対するツルビニルの作用を調べた。

実験６ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）に対する１次反応に対するツルビニルの作用を、直接プラーク形成細胞（Ｐ　Ｆ　Ｃ）評価分析を利用して観察した。この実験ではＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに１日１１ｍｇ／ｋｇのツルビニルを経口投与した。対照グループには緩衝剤（炭酸塩緩衝液、　Ｑ、　ＱＩＭ、　ｐ　Ｈ９，５）だけを投与した。最初の投与から６時間後、マウスに２０％５ＲＢＣ溶液Ｑ、１ｍｌを腸管内投与した。４日後にマウスを処分し、膵臓を摘出し、改良力ニンガム・プラーク分析で膵臓細胞を分析した。　Ａ４．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ、Ｎａｊ＊ｒ！（Ｌｏｎｄｏｎ）　２０７：１１１１６１９６５を参照されたい。その結果を以下に要約する。

緩衝剤処理した対照グループに比較してツルビニル処理したマウスの膵臓では細胞充実性が４６％だけ高いことが認められた。即ち、ツルビニル処理グループでは２．１２±Ｌ２６Ｘ１０８細胞／牌臓；対照グループでは１．４５±０ＪＸＩＯ’細胞／牌臓であった。

ツルビニル処理マウスではＩｇＭ抗体分泌細胞の数を示す直接プラークの数が緩衝剤処理グループに比較して９４％増大した。即ち、ツルビニル処理グループでは３７２±６２プラーク／２ｘ１０ｑ細胞：対照グループでは１９１±５０プラーク／２Ｘ１０’細胞であった。膵臓の細胞充実性の差を考慮に入れ、膵臓ごとのＰＥＣデータを表わすと、ツルビニル処理マウスと対照マウスの差は次の通りである。ツルビニル処理グループ＝　３９３．０００±１２．６１７Ｐ　Ｆ　Ｃ／膵臓；緩衝剤処理対照グループ＝　１６７、００９±４３．６９ＳＰ　Ｆ　Ｃ／膵臓。

プラークには質的な相違も認められた。緩衝剤処理したマウスから得た膵臓細胞によって産生されたプラークは大きく、丸みを帯び、明瞭な５ＲＢＣ破壊ゾーンを示した。これに対してツルビニル処理マウスから得た膵臓細胞によって産生されたプラークははるかに小さく、形状が不規則で、明瞭でなかった。この観察結果をあえて説明するとすれば、ツルビニル処理された膵臓からの抗体分泌率が対照グループから得た膵臓細胞からの抗体分泌率よりも低いということである。

実験７この実験ではマウスをバクテリオファージφＸ１７４をマウスに静脈内投与した後、抗体産生に対するツルビニルの作用を分析した。バクテリオファージに特異な抗体がバクテリオファージのバクテリア破壊能力を抑制するとの所見に基づくファージ抑制分析により、バクテリオファージに対して発生する抗体を量定した。口、Ｄ、　０ｃ）ｕ等の“Ｄｉｓｕｄｅｒｓ　０ｆｔｈａ　Ｂ−ｅｅｌｌ　ｓ７＋ｔｅｍ、　ｉｎ　！ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ　ｉｎ　Ｉｎｆａｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｉｌｄｒｅｎ”　、　Ｅ、Ｒ，Ｓｌｉｅｈｍ等、ｅｄｓ、、Ｗ、Ｂ、５ｘｎｄｅｒｓ、Ｃｏ、Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈ目、　ｐ、　２３９．　、１９８０を参照されたい。データを下記式に従って得られたＫｖ値として表わした：即ち、ファーシネ活性化率＝Ｋｖ　Ｄ／Ｔ×１ｎ　Ｐａ　／Ｐ０ただし、Ｄ＝抗体希釈の逆数。

Ｔ＝６０ｍｉｎ　、Ｐａ　＝ＰＦＵの初期個数、及びＰ＝６０ｍｉｎにおけるプラークの個数。

実験６で述べたのと同じ投与スケジュールを利用して５日間にわたり毎日マウスをツルビニルで処理した。最初の量のツルビニルを投与してから６時間後、マウスに２Ｘ１０９プラ一ク形成単位（ＰＦＵ）のファージを静脈注射した。この１次免疫処理の１週間後から毎週マウスから採血し、個々のマウスの血清サンプルをバクテリアのバクテリオファージ破壊に対する抑制能力について試験した。１次免疫処理から最初の２週間に得たデータを要約すれば下記の通りである。

抗原刺激から１週間後、抗φＸ１７４バクテリオファージ抗体の血清滴定濃度に著しい相違はなかった：即ち、ツルビニル処理グループではＫｖ＝５．０±２．４；対照グループではＫＦ＝８！±３．１であった。

１次免疫処理の２週間後では、ツルビニル処理マウスから得た抗φＸ１７４バクテリオファージの血清滴定濃度は緩衝剤だけを投与された対照マウスから得たものよりもはるかに低かったコ即ち、ツルビニル処理グループではＫｖ＝１１１．４土１．１．４＋緩衝剤処理グループではにマ＝７．８±５．２であった。

所　見これらの実験結果はツルビニルが抗原投与に呼応して抗体を産生させることを示唆している。先ず、実験６及び７において実証されたツルビニルの作用はやや矛盾を含んだものであり、免疫処理後に膵臓細胞充実性を高めると共にプラーク形成反応を高めるが、抗体の血清滴定濃度（ｌｉｔｕ　）を低下させるらしい。このようなデータは８９２８球が抗原に駆動されて成熟し、形質細胞となるプロセスにツルビニルが影響を与えるということで説明することができる。このモデルでは、ツルビニル処理マウスの抗原特異８９２８球は正常な免疫処理マウスの場合に見られるように刺激されて増殖するが、ツルビニル処理マウスの場合には増殖する８９２８球が末端分化した非再現性の形質細胞にまで分化することは阻止される。Ｂ細胞成熟がこのように阻止される現象はツルビニルを投与されたマウスにおいて膵臓の細胞充実性が高められ、抗体分泌細胞の頻度が高くなることで示唆される。また、ツルビニル処理マウスから得た８９２８球によって形成されるプラークが対照膵臓細胞によって産生されるプラークよりもはるかに小さく、明瞭でないという観察結果はツルビニル処理マウスから得た８９２８球の抗体分泌率が低いことを示している。この観察結果は末端分化した形質細胞が最も高い抗体分泌率を持つという理由からもモデルと合致する。さらにまた、形質細胞の発生を阻止した末端Ｂリンパ球成熟阻止が実験７で観察されたような血清抗体レベルの低下につながると考えられる。

ツルビニルがＢリンパ球成熟の可溶メディエータの分泌を抑制することも考えられる。８９２８球の成熟に影響を与える２つのタイプの可溶メディエータの存在が報告されており、その１つは増殖に影響を与え、他の１つは８９２８球の形質細胞への成熟を刺激するとされている。ｌ！ｏｗ！ｒｄ等はマウスの胸腺層ＥＬ −４の誘導上澄中に存在するＢ細胞増殖因子について報告している。Ｍ、Ｈｏｖａｒｄ等がＪ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５５：９１４．１９８２に発表した論文を参照されたい。この因子は精製されたＢ細胞培養において抗ＩｇＭ抗体と互いに刺激し合う。この因子はＢ細胞増殖を刺激するが抗体形成細胞の産生を刺激することはないと考えられる。この因子は、Ｓｉｄｍａｎ等が１．１ｍｍｕｎｏｌ。

１３２・２０９．１９８４の論文で報告している他の可溶メディエータ、即ち、未成熟Ｂ細胞が抗体を高い率で分泌する高度分化Ｂ細胞に似た細胞へと成熟するプロセスを促進するメディエータとは全く異なる。

免疫実験第３シリーズツルビニルの免疫調節作用をさらに解明するため、１９２８球マイトジェン・コンカナバリンＡ　（Ｃａｎ　Ａ　）に対する膵臓細胞の反応に及ぼすツルビニルの影響を評価分析した。

ＣｏｎＡマイトジェンに対するＴリンパ球の増殖反応にはマクロファージと考えられる接着性補助細胞の関与が必要である。

実験８１日、２日または３日間にわたってツルビニルを経口投与してからマウスを処分した。１日の投与量は１１ｍｇ／ｋｇとした。対照マウスには緩衝剤だけを投与した。４グループのマウスを処分し、その膵臓を摘出し、これを細断して単細胞懸濁液とし、３日間または４日間にわたって濃度の異なるＣｏｎＡ　と共に培養した。それぞれの培養物に１マイクロキユリーのトリチウム（ｔｒｉｔｉａｔｅｄ　）　・チミジンを添加し、１８時間後に培養を終了した。液体シンチレーション・カウンタを使用して細胞性ＤＮＡへのトリチウム・チミジン取り込みを測定した。この実験の結果を図２０及び図２１に示し、その要約を以下に説明する。

ＣｏｎＡに対する膵臓細胞の増殖反応速度は膵臓摘出に先立つ１日、２日または３日間にわたるツルビニル投与には影響されなかった。反応は３日目に採取された培養体において比較的太きく　（Ｅ１２０）　、４日目に採取された培養体において増殖作用の著しい低下が認められた（図２１）。

ＣＧＩＩＡ投与量による反応パターンはツルビニル処理マウスでも緩衝剤処理マウスでも差はなく、３日目に採取された培養体では２μｇｍ／ｍｌのＣｏｎＡが極めて有効であり、（図２０）、４日目に採取された培養体では５μｇν’ｍｌが極めて有効であった（図２１）。

ツルビニル処理グループでも対照グループでも増殖反応速度及び投与量反応のパターンに差は認められなかったが、処分前にツルビニルを投与されたマウスではマイトジェンに対する増殖反応が弱かった。３日目に採取された培養体に関するデータは図２０に示す通りであり、次のように要約することができる。即ち、処分するまでの１日または２日にわたってツルビニルを投与したマウスは使用したＣｏｎＡ　の最少投与量である１μｍｇのＣｏｎ　Ａ　／ｍｌで最も弱い増殖反応を示し、これらのマウスでは増殖反応がそれぞれ２５％及び２２％だけ低下した。ＣＧＩＩＡの最適投与量（２μｍｇ／ｍｌ）では低下率がやや小さく、それぞれ１８％及び１１％であった。処分するまでの３日間にわたってツルビニルを投与されたマウスはＣｏｎＡ刺激に対して最低の反応を示した。Ｃ＋ｏ＋Ａ濃度１μｍｇ／ｍｌでは増殖反応が９％だけ上昇したが、２及び５μｍｇ／ｍｌのＣｏｎＡ　に対しては増殖反応がそれぞれ３０％及び２７％低下した。

ＣｏｎＡ　に対する増殖反応が低下する４日目に採取した培養体から得たデータを表わす図２１は処分までの３日間にわたってツルビニルを投与されたマウスから得た膵臓細胞の増殖反応が２５〜５８％低下したことを示している。この低下幅は処分までの２日間にわたってツルビニルを投与されたマウスからの培養体に見られた低下率５乃至１８％よりも大きかった。興味深い所見として、処分された２４時間前にツルビニルを投与されたマウスからの膵臓細胞培養体では増殖反応が３〜３０％だけ高くなった。

処分されるまでの３日間にわたってツルビニルを投与された場合のツルビニルがＣｏｎＡ　に対する増殖反応を最大限に抑制するという観察結果はツルビニルがＣｏｎＡ反応においてＴ−細胞増殖に必要な細胞の分化に影響を及ぼしていることを示唆するものである。マイトジェン反応に関する発明者等の所見と合致するモデルを想定するとすれば、急速に更新される細胞ポピユレーションの分化をツルビニルが阻止するということになる。膵臓細胞採取前の３日間にわたってツルビニル処理を行なった場合に観察された抑制効果の増大はＣｏｎＡ　に対する増殖反応を最大限を阻止できるだけターゲット細胞ポピユレーションを減少させるには３日間以上の日数が必要であることを示唆するものである。

数日間にわたる投与を必要とするＣＱＩＩＡ反応に対するツルビニルの抑制効果はＤＴＨ反応に対するツルビニルの効果が即効的であるという観察結果と対照的である。綜合的には、これらのデータはツルビニルが免疫系に対して多様な作用を行なうことを示している。

免疫実験第４シリーズ第４シリーズでは非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）との比較において免疫調節に対するツルビニル、トルレスタット及びＷＦ−３６８１の作用を分析した。以下に要約する分析は反応性立体配座を有し、マウスのＤＴＨを抑制するアルドース　レダクターゼ抑制物質がリポオキセゲナーゼまたはシクロオキシゲナーゼ経路を介して行なわれる正常なアラキドン酸代謝に影響を与えないことを示唆している。これらの経路はＮ５ＡＴＤｓによって抑制される経路である。予想した通り、トルレスタット及びＷＦ−３６８１はツルビニルと同様にこれらＡＲＩ分子のためのレセプタ部位が関与すると考えられる全く新しいメカニズムによって細胞性及び体液性免疫系の特定機能を抑制する。

実験９マウスＰ３３８Ｄの細胞に３Ｈ−アラキドン酸を加え、次いで１０−６Ｍ／Ｌの量のツルビニルの存在及び不在下にＡ　２３＋８７で刺激した。評価分析プロトコールは参考のため本願明細書にも引用したＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２５８　：１３５２２−４３５２７．１９８３にＷ、　Ｒ，）Ｉｅｎｄ！ｒｓｏｎ及びＳ、　Ｊ、　Ｋｌｅｂａｎｏｆｆが発表したものとほぼ同じであった。Ａ　２３１８７で刺激された正常細胞からのアラキドン酸代謝物の放出に対してツルビニルは全く作用しなかった。

実験１０ヒト多形核白血球（ＰＭＮｓ）を使用して炎症に伴なうＬＴＢ４放出を検討した。アスピリン及びレチン酸がＬＴＢ４産生を抑制することは公知である。正常なヒトＰＭＮｓによるＬＴＢ４産生に対してツルビニル及びＷＦ−３５８１は全く作用しなかった。

実験１１ツルビニルの存在及び不在下にヒト単核細胞の培養体におけるスーパーオキサイド産生を検討した。マイトジェン藝ホルボール・ミリステート−アセテート（ＰＭＡ）を使用して、正常細胞におけるスーパーオキサイド産生を刺激した。

１０−’Ｍ／Ｌにも及ぶ高濃度ツルビニルをもってしても正常細胞におけるスーパーオキサイド産生に対する作用は認められなかった。

実験１２あらかじめ形成されたインターロイキンＩＬ−２（ＰＨＡのようなレクチンに対する免疫細胞の反応を著しく高めるマイトジェン）の存在下に、マイトジェン・ファイトへマグルチン（ＰＨＡ）による刺激に呼応する３Ｈ−チミジン取り込みに対スるツルビニルの作用を検討するため正常なマウス胸腺細胞を培養テストした。１０−’Ｍ／Ｌもの高濃度のツルビニルをもってしてもＰＨＡによる正常なマウス胸腺細胞の刺激に呼応する３Ｈ〜チミジン取り込みに対して全（作用しなかった。

ツルビニルを投与された動物から採取した胸腺細胞をテストして、強力なマイトジェンであるコンカナバリンＡ（Ｃａｎ　Ａ　）によって刺激された時の３Ｈ− チミジン取り込みを分析した。胸腺細胞を採取する６時間前に１０μｇ／ｋｇのツルビニルをマウスに経口投与した。ツルビニル処理マウスから得た細胞における３Ｈ−チミジン取り込みは処理しなかった動物からの細胞における取り込みの約１／２であった。

実験１４４日間にわたってツルビニル処理したのち、動物の白血球をカウントした。標準の血球百分重数評価分析の結果、細胞充実性は正常であり、正常リンパ球ポピユレーションに変化は認められなかった。ツルビニルは正常動物における白血球ポピユレーションに作用しなかった。

実験１５正常マウスから腹膜細胞を分離し、ツルビニルの存在及び不在下における３Ｈ− チミジン取り込みを分析した。試験管内での対照細胞またはりポリサッカライド（Ｌ　Ｐ　Ｓ）で刺激された細胞の３Ｈ−チミジン取り込みに対しそ１０−６Ｍ／Ｌもの高い濃度のツルビニルが目立った影響を示さなかった。

実験１６ヒト単核細胞を分離し、試験管内でツルビニルの存在及び不在下における接着性をテストした。試験管内での正常なヒト単核細胞の接着性に対して１０−６Ｍ／Ｌもの高濃度ツルビニルも全く作用しなかった。

実験１７試験中でヒトのマクロファージをＬＰＳによって刺激し、）Ｈ−チミジン取り込みを測定した。正常細胞における３Ｈ−チミジン取り込みに対して１０−’Ｍ／Ｌもの高濃度ツルビニルが全く作用しなかった。

実験１８正常マウスから得た胸腺細胞を使用して３Ｈ−チミジン取り込みのＣｏｎＡ刺激を測定した。１０−’Ｍ／Ｌもの高い濃度のツルビニルでも、正常マウスの胸腺細胞におけるＣａｎＡによって刺激される３Ｈ−チミジン取り込みに影響を及ぼすことはなかった。

実験１９混合リンパ球反応に対するツルビニルの作用をテストとした。Ｂａ１ｂ　Ｃマウスの胸腺細胞と照射ずみＣ５７Ｂ６マウスから採取した膵臓細胞とを、使用した混合リンパ球反応に対し、１０−’ＭｌＬもの高濃度ツルビニルが全く作用しなかっ実験２０正常Ｂｘｌｂ　Ｃマウスの膝下リンパ節を生体内で評価分析した。Ｃ５７ＢＬ６マウスからの細胞を内証に注射されたマウスの膝下リンパ節腫脹に対してツルビニルは全く作用しなかった。

実験２１アラキドン酸経路の活性化によって起される炎症を強く刺激するＰＭＡに反応して生ずる耳の腫脹に対するツルビニルの作用をテストした。ＰＭＡに反応して生ずるマウスの耳腫脹に対してツルビニルは全く作用しなかった。これとは対照的に、細胞免疫系の活性化を必要としないアスピリンなどのような非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）はこの反応を抑制する。

実験２２アラキドン酸の局所塗布に起因する耳腫脹に対するツルビニルの作用をテストした。経口投与しても局所塗布してもツルビニルは腫脹に対して全く作用しなかった。公知のＮ５ＡＩＤであるインドメサシンを局所塗布したところ、マウスの正常な耳にアラキドン酸を塗布することで発生する腫脹を完全に抑制した。

実験２３表５は免疫実験第１シリーズに述べたプロトコールを利用してツルビニル、トルレスタット、ＷＦ−３６８！、及び各種Ｎ５ＡＩＤｓのＤＴＨへの作用を比較するために行なった実験を要約したものである。表５は４欄から成り、（左から右へ）第１欄にはテストされた薬剤、第２欄には薬剤濃度、第３欄には相対腫脹率、第４欄には効果を示した。

表　５ツルビニル　１０　μＭ　Ｏ，３０７０％６μＭ　Ｏ，６６３４％抗原投与前のツルビニル１回投与　６　μＭ　Ｏ，６８３２％抗原投与後のツルビニル１回投与　６　μＭ　Ｏ，６１３９％ＷＦ−３６８１　６　μＭ　［１，６８３２５ｆ４．２５μＭ　０．６２　３９％２．１２５μＭ　［１，９６４％トルレスタット　６　μＭ　Ｏ，７１２９％４　μＭ　Ｏ，７３２７％２　μＭ　Ｏ，７９２１９６クエルシトリン　３　μＭ　！１．１　２％アセトアミノフェン　８．５　μＭ　１．０　０”イブプロフェン　８．５　μＭ　１．Ｇ　Ｏアスピリン　８，５　μＭ　１．０　００００＝効果なしこの表から明らかなように、耳腫脹によって測定した限りではＮ５ＡＩＤｓ　（クエルシトリン、アセトアミノフェン。

イブプロフェン及びアスピリン）はＤＴＨ阻止に有効ではない。これと対照的に、ツルビニル、ＷＦ−３６８１及びトルレスタットはＤＴＥ（に対してほぼ同等の効果を示した（６μＭにおいて約３０％）。抗原投与の前後いずれに投与する場合でもツルビニルは１回の投与で有効であった。ツルビニル、ＷＦ−３６８１及びトルレスタットはいずれもその３次元構造が図１．２及び図３に示す反応性立体配座を含有する化学的に内容の明確な試薬である。

表２及び５に示した試薬のうち、反応性立体配座を有するものはすべてＤＴＨを抑制することも明らかになった。モデルに適合しない試薬例えばアスピリンはいずれもＤＴＨを抑制できなかった。従って、ツルビニル、トルレスタット及びＷＦ−３６８Ｌ及び開示のモデルの３次元立体配座を有するその他の免疫調節剤の３次元構造は免疫系を調節する自然発生部位にぴったり適合する。上記した特有の免疫調節の媒介に関与するこの自然レギュレータの正体は今のところ不明である。

好ましい実施例及び具体例との関連において以上に本発明を説明したが、当業者ならば上述した方法及び組成物に種々の変更や等価の置きかえを加えることができるであろう。従って本願に対する特許状によって与えられる保護は後記する請求の範囲及びこれと等価の記述によってのみ制限されるものとする。

ＦＩＧ、１６ＦＩＧ、ｌ７ＦＩＧ、ｌ８ＦＩＧ、Ｉ９鍔／〃ゞ国際調査報告１″″″”””””””　ＰＣＴ／ｌｌ５ＱＯ／ｌ’］３６１８

Claims

【特許請求の範囲】１．酸素，硫黄及び窒素から個別に選択された２個の原子Ｘ１，及びＸ２と連携する芳香環を含む免疫調節立体配座を有する化合物を哺乳類宿主に投与するステップから成る哺乳類宿主の免疫系を調節する方法において、免疫調節立体配座が下記のように定義されることを特徴とする哺乳類宿主の免疫系調節方法：３．１Å≦Ｄ１≦４．１Å，２．４Å≦Ｄ２≦２．８Å，３．８Å≦Ｄ３≦４．２Å，及び３５°≦α°≦６０° ただしＰ１＝芳香環によって画定される平面、Ｄ１＝平面Ｐ１と原子Ｘ１の中心間距離、Ｄ２＝平面Ｐ１と原子Ｘ２の中心間距離、Ｄ２＝原子Ｘ１及びＸ２の中心間距離、Ｐ２＝原子Ｘ１及びＸ２と平面Ｐ１の中心によって画定される平面、及び α°＝各平面に垂直なベクトルの交点において測定される平面Ｐ１及びＰ２間の毎度であり、しかも芳香環が本質的に平面的であって、この平面の約１５°以内で円筒対称関係にある５乃至７個の環原子から成る。２．化合物が遅延過敏症反応を抑制するのに有効であることを特徴とする請求項１記載の方法。３．化合物が下記の免疫調節立体配座を有することを特徴とする請求項１記載の方法：Ｄ１≒４．０６Å，Ｄ２≒２．７４Å，Ｄ３≒４．００Å，及び α°≒３８．８５° ４．化合物がソルビニルであることを特徴とする請求項３記載の方法。５．化合物が下記の免疫調節立体配座を存することを特徴とする請求項１記載の方法：Ｄ１≒３．１６Å，Ｄ２≒２．７０Å，Ｄ３≒４．１５Å，及び α°≒５９．０° ６．化合物がトルレスタットであることを特徴とする請求項５記載の方法。７．化合物が下記の免疫調節立体配座を有することを特徴とする請求項１記載の方法：Ｄ１≒３．９７Å，Ｄ２≒２．４５Å，Ｄ３≒４．１０Å，及び α°≒４７．０Å。８．化合物がＷＦ−３６８１であることを特徴とする請求項７記載の方法。１０．前記芳香環が平面の約７°以下の範囲内で円筒対称関係にあることを特徴とする請求項１記載の方法。１１．前記芳香環がベンゼン，ピリジン，フラン，及びチオフェンから成るグループから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。１２．前記芳香環がナフタレン及びアントラセンから選択される環錯体の一部であることを特徴とする請求項１記載の方法。１３．化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物、及び薬学的に許容できる陽イオンを有するその塩基性塩から成るグループから選択されることを特徴とする方法；ただし、Ｘが：Ｙ１が水素であり、Ｙ２が水素，ヒドロキシ，フッ素，塩素，低級アルキルまたは低級アルコキシ（それぞれ１個乃至４個の炭素原子を有する）であるか、またはＹ１及びＹ２が個別の形を取る場合ならそれぞれ塩素，低級アルキルまたは低級アルコキシであり、結合された形を取る場合なら−〇ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＯ−であり、ｎが０または１であるとして、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるベンズ−α，β−０または置換ベンズ−α，β−０であるか；Ｒ１が塩素，臭素，フッ素，または１乃至３個の炭素原子を有するアルキルであり、Ｒ２及びＲ３の一方が水素であり、Ｒ２及びＲ３の他方がアミノ、それぞれのアルキル基が１乃至３個の炭素原子を有するモノアルキルアミノまたはジアルキルアミノであるとして、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる置換ベンズ−α，β−０であるか；Ｗが６または８位置において水素，メチル，メトキシ，フェニル，フェノキシ，フッ素，塩素またはホウ素であり、Ａｒが６または８位置においてフェニルまたはフェノキシであるとして、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ フェニルまたはフェマキン置換ベンズ−α，β−０であるか；式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるナフ−α，β−０あるか；メチル，塩素及び臭素から選択される１個または２個の全く同じ置換分を有する置換ナフ−α，β−０であるか；または式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるアントラセン−α，β−０である請求項１記載の方法。１４．酸素，硫黄及び窒素から個別に選択された２個の原子Ｘ１及びＸ２と連携する芳香環を含む免疫調節立体配座を有する化合物であって、免疫調節立体配座が関係式３．１Å≦Ｄ１≦４．１Å，２．４Å≦Ｄ２≦２．８Å，３．８Å≦Ｄ３≦４．２Å，３５°≦α°≦６０° でありＰ１＝芳香環によって画定される平面、Ｄ１＝平面Ｐ１及び原子Ｘ１の中心間距離、Ｄ２＝平面Ｐ１及び原子Ｘ２の中心間距離、Ｄ３＝原子Ｘ１及びＸ２の中心間距離、Ｐ２＝原子Ｘ１及びＸ２と平面Ｐ１の中心によって画定される平面、 α°＝各平面に垂直なベクトルの交点において測定された平面Ｐ１及びＰ２間の角度であること、によって定義されることと、哺乳類宿主に前記化合物を投与することによって宿主の免疫系を調節するための指示書と組合わせてパッケージされることを特徴とする化合物。