JPH05505110A - 植物の病原からの保護方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 植物の病原からの保護方法 本発明は、植物の病原からの保護方法並びに、病原体誘導性プロモータにより制 御される病原体からの非病原性遺伝子（Ｅ）より成るポリヌクレオチド配列の決 定法と、ＤＮＡ塩基配列を使用可能にする病原体誘導性プロモータにより制御さ れる対応抵抗性遺伝子（Ｒ）より成るポリヌクレオチド配列の決定法に関する。

この発明はまた該方法により得られる植物に関する。

進化の間に植物に対し病原性である多くの菌およびバクテリアはただ１つの宿主 種牛で、或いは時には該宿主種の１変種中で特殊化して来た。かように、ある特 定の栽培品種の宿主に群集するが、他の栽培品種には群集しない病原種を発見す ることが出来る。後者の栽培品種は急速誘発防御機構を持つ抵抗体である。

植物への定住を成功させるために、病原は植物の現有防御機構を避けるか、停止 または無効にしなければならない。遺伝学用語では特定種の栽培品種間の相互作 用は、病原体の非病原性遺伝子（Ｅ）で符号化した蛋白質誘導分子（ｅ）が植物 の抵抗性遺伝子（Ｒ）で符号化した受容体蛋白質分子（ｒ）と相互に作用し、そ れにより防御機構を誘発する遺伝子対遺伝子モデルとして説明され、しばしば過 敏性反応（ＨＲ）として、即ち、病原体の破壊を伴う小数の植物細胞の部分的な 死として観察出来る（デ　ヴイノト、　１９８６）。

遺伝子対遺伝子の相互作用の遺伝学は、その中でも特に病原菌と植物間の相互作 用については、文献（１，Ｒ，クルード、１９８５）でよく説明されているが、 生化学的機構および分子機構については未だごく僅かしか知られていない（デ　 ヴイット、　１，９８７．　コリングおよびスルサレンコ、　１９８７）　。

非病原性遺伝子を有しない病原体または非病原性遺伝子が発現されない病原体は 宿主防御システムを誘発せず、従って、うまく定着出来る。この場合、宿主植物 は罹病し得る。

色々な種の特異非病原性遺伝子は種々の植物の病原細菌からクローン生成されて おり、それにより、病原性の品種を非病原性品種の遺伝子クローンで形質転換し てから対応抵抗性遺伝子をもつ植物遺伝子型に対する非病理性が試験された（ス タスカヴイツ他、　１９８４．　スタスカヴイツ他、　１９８７．　新宅能、　 １９８９．　ヴイヴイアン他、　１９８０．　ヒツトチン他、　１９８９）、バ クテリアの非病原性遺伝子のこの分離方法は、しかしながら、低い形質転換効率 と適当なりローニングシステムを欠くために、広い宿主範囲を有するコスミドベ クターのような菌の非病原性遺伝子には適用出来ない。自律的複製ベクターを有 する有効な形質転換システムが決定されている菌類はトウモロコシ黒穂菌のみで ある（レオング、　１９８９）　。

特異性誘導体蛋白質分子（ｅ）を符号化する病原体の非病原性遺伝子の少なくと も１配列またはその部分よりなるポリヌクレチド配列を対応抵抗遺伝子（Ｒ）を 含む植物のゲノムに導入し、該遺伝子の発現が感染部位でのみ同時に生じ、該同 時発現の誘発が広い範囲の病原体により達成されるように該遺伝子の発現を制御 する手段を供給することにより、植物を病原体から防御できることが発見された 。

少なくとも１つの病原体の非病原性遺伝子（Ｅ）より成る上記ポリヌクレチド配 列を、感染部位で少なくとも発現する抵抗性遺伝子（Ｒ）を含んでいる植物に導 入することは、全ての植物において本質的に可能であると推定できる。この場合 、植物全身における過敏性反応の誘発を避けるために、非病原性遺伝子（Ｅ）は 、病原体で誘発され感染部位でのみ発現を許すプロモータで制御されねばならな い。

過敏性反応は病原体または病原体が生み出した特定の誘発因子によってのみ活性 化され得る。この過敏性反応は他の外部の刺激では誘発されないが、或いは殆ど 誘発されず、また　−感染部位を囲む範囲に制限されねばならない。これらの制 限がなければ、活性化により植物に実質的な損傷を与える結果となる。

非病原性遺伝子（Ｅ）に対応する抵抗性遺伝子（Ｒ）を。

この対応抵抗性遺伝子（Ｒ）を含んでいない植物に導入することもまた可能であ る。これは、ブリーディング法（Ｂｒｅｅｄｉｎｇ）または遺伝子操作技法によ り達成出来る。

後者の場合、少なくとも１つの抵抗性遺伝子（Ｒ）の配列またはその一部より成 るポリヌクレオチド配列と広い範囲の病原体により誘発され得る植物プロモータ （Ｐ）を、抵抗性遺伝子（Ｒ）の生成物が感染部位にのみ発現する様に導入する ことが可能である。この場合、非病原性遺伝子（Ｅ）が健全な植物においても全 身的に発現させることさえ可能である。

遺伝子（Ｅ）と遺伝子（Ｒ）が病原体によってのみ感染部位において厳密に誘発 され得るならば、それらの遺伝子を同一プロモータで制御することもまた可能で ある。

上記の実施態様において使用される病原体で誘発されるプロモータには、 ａ）植物の病原体の全て、またはほとんどの病原体または該病原体が生み出した 非特異性誘発物質によって誘発され；ｂ）病原体によってのみ実際に誘発され得 、他の外部刺激によっては誘発されないか、または殆ど誘発されず；Ｃ）プロモ ータによって制御される遺伝子を極く局部的で非全身的にのみ発現させることが 要求される。

この発明の他の実施態様の場合、遺伝子（Ｅ）または（Ｒ）は組織特異性遺伝子 であってよく、その他の遺伝子は第１の遺伝子がその特異性遺伝子である組織に おいてのみ感染部位で病原体により誘発されねばならない。この場合、例えば、 植物の根においてのみ発現する遺伝子（Ｒ）と病原体により根部に局部的に、但 し他の組織には全身的に誘発される遺伝子（Ｒ）を導入することが可能であり、 これにより、根部を病原体から保護できる。

非病原性遺伝子（Ｅ）は菌類、バクテリア、ウィルスまたは線虫類から獲得出来 る。非病原性遺伝子を迅速に誘導出来る植物の病原菌の例としては、クラドスポ リウムフルヴム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　Ｆｕｌｖｕｍ）が挙げられる。

抵抗性遺伝子（Ｒ）は１例えば、食用トマト種（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅ ｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の植物のようなナス科（Ｓｏｌａｎｃｅａｅ　）植物内に 天然に存在するものを使用できる。この遺伝子（Ｒ）をナス科の他の仲間にブリ ーディング法で導入することが出来る。上記の他の仲間は、ストリンジェント型 制御非病原性遺伝子（Ｅ）をすでに含んでいてもよく、含んでいない場合は、該 非病原性遺伝子を遺伝子操作技法により該植物に導入することが出来る。

ブリーディング法または遺伝子操作技法で行う非病理性遺伝子（Ｅ）と抵抗性遺 伝子（Ｒ）の組み合せ並びに植物に導入するプロモータの選択は、保護すべき植 物の種類と抵抗性全植物界において、広範囲の病原体とこれらの病原体が生み出 す非特異性誘導因子により導入される病原誘発性植物プロモータが知られている 。かような植物プロモータは極めて局部的に発現し、決して全身的に発現しない ことが判明している。例えば、マトンおよびブリッソン（１９８９）は、ジャガ イモ病菌（Ｐｏｔａｔｏ　Ｉｎｆｅｃｔａｎｔ）　＋　（マリヌー他、　１９８ ７）を非特異性誘導因子により、誘発後ジャガイモ内に特異的に蓄積したｍＲＮ Ａ　（伝令ＲＮＡ）配列に対応するｃＤＮＡクローン（相補的なりＮＡ）（ｐＳ ＴＨ２）のヌクレオチド配列と、エントウ豆（４２％）（フリテンスキー他、　 １９８８）とパセリ（３７％）（ゾムジシュ、　１９８８）からの病原体誘導に よる病原関連タンパク質と誘導因子に対応するｃＤＮＡクローンとアミノ酸配列 において非常に似ている密接に関連したクローンｐＳＴＨ−２１のヌクレチド配 列を記述している。マトンとブリッソン（１９８９）は、また種々のジャガイモ の組織とトマトの葉に上記クローンｐＳＴＨ−２およびｐＳＴＨ−２１に対応す るｍＲＮＡが蓄積することを記述している。ゾムジシュ（１９８６）は、栽培パ セリ組織内の病原関連（ＰＲ）タンパク質の新規合成が菌誘導因子処理により、 いかにして達成され得るかについて記述している。このシステムにおいて。

病原関連タンパク質の合成は、対応遺伝子の急速で一時的な活性化に起因するｍ ＲＮＡの合成により誘導される。かような活性化は健全なパセリ植物を菌に感染 させた時に観察され（ゾムジシュ、　１９８８）　、この活性化はｍ　ＲＮ　Ａ が感染源周辺に大量に、但し局部的に蓄積するために達成される。一般的に、フ ィトアレキシンの合成に含まれる遺伝子は、種々のタイプの病原体とそれら病原 体の特異性誘導因子により植物内に極めて局部的に誘導される（Ｈ，ハルブロッ クとり、シューエル、１９８９；Ｊ、クスとＪ、Ｓ、ラシュ、　１９８５）。

植物からの抵抗性遺伝子（Ｒ）の検出に利用出来る１つの方法は、該遺伝子の生 成物（Ｒ）が病原体の非病原性遺伝子（Ｅ）で暗号化される特異性誘導因子のタ ンパク質分子（ｓ）と相互作用させるもので、下記のごとく記述できる。この方 法において、特異誘導因子タンパク質（ｅ）、抵抗性遺伝子生成物（１）および 抵抗性遺伝子（Ｒ）は非病原性遺伝子（Ｅ）の生成物によって隔離される。原則 として、この方法はどんな抵抗性遺伝子生成物（ｒ）および暗号化抵抗性遺伝子 （Ｒ）の分離にも、対応非病理性遺伝子（Ｅ）とその生成物（ｅ）が既知であれ ば使用できる。この方法は２次のように表現できる。抵抗性遺伝子（Ｒ）を含ん でいる植物のｃＤＮＡライブラリは発現ベクターとなり、抵抗性遺伝子（Ｒ）の 生成物、レセプター（ｒ）が発生する。ポジティブ・クローンは、特異誘導因子 のタンパク質分子（ｅ）をレセプター・タンパク質（ｒ）に結合させることによ りｃＤＮＡライブラリ内で検出する。この結合（蛋白質分子（ｅ）と蛋白質（ｒ ）との複合）は蛋白質分子（ｅ）に検出可能な標識をつけて見えるようにする。

このポジティブｃＤＮＡクローンは抵抗性遺伝子のための暗号配列を含んでいる 。完全な遺伝子（Ｒ）は抵抗性遺伝子を含んでいる植物からの遺伝子ライブラリ よりこのｃＤＮＡクローンを用いて検出できる。ｃＤＮＡまたは遺伝子クローン を用い、抵抗性遺伝子を持っていない植物−の形質転換をすることが出来る。即 ち、適当な病原体を接種しく汚染させ）で、抵抗性遺伝子の所有に関し、ポジテ ィブな形質転換因子をスクリーニングする。クローン化遺伝子（Ｒ）は、遺伝子 操作技法またはブリーディング法のいずれかの方法で植物に導入出来る。

一方、抵抗性遺伝子（Ｒ）はトランスポゾン標識、染色体歩行および遺伝子置換 の公知の方法によってクローン化出来る（Ｍ、Ｄ、ディッキンソン他、　１９！ Ｈ）。

本発明による方法で獲得した２成分、即ち遺伝子（Ｅ）と遺伝子（Ｒ）（２成分 センサーシステム）よりなる植物の抵抗性を病原体が発達させることは、全ての 病原体により誘発され得る非特異性の誘発性植物プロモータを用い、非病原性遺 伝子（Ｅ）と抵抗性遺伝子（Ｒ）を局部的に同時発現させる上で、極めて好まし くない。非病原性遺伝子（Ｅ）または抵抗性遺伝子（Ｒ）のいずれかを調節する プロモータの少なくとも１つは、明らかに望ましくない植物全体の実質的な破壊 を避けるために、感染の部位のみで誘発されることが必要である。

本発明による２成分センサーシステムは、非病原性遺伝子と抵抗性遺伝子が発現 出来る植物において非病原性遺伝子と抵抗性遺伝子のあらゆる組み合せで獲得出 来るので、植物界の全ての病原体ではないが、多数の病原体に適用可能である。

この２成分センサーシステムは、病原体に対し、現在頻繁に用いている殺虫剤の 使用を減らすための優れた解決策を提供する。いずれこのシステムにより、これ らの薬品の大部分の使用を排除し、環境を守ることが出来るようになろう。

本発明による２成分センサーシステムの調製例を以下に説明する。

例 クラドスポリウム属フルブム（Ｆｕｌｖｕｍ）の非病原性遺伝子（即ち、先に文 献でＡ９として参照した非病原性遺伝子ａｖｒ９）を非病原性遺伝子として、ト マトの栽培品種中に自然に存在する対応抵抗性遺伝子Ｃｆ９と組み合せて使用す る。

この２成分センサーシステムは種々のトマト属及びナス科の一部植物にブリーデ ィング法することにより少なくとも増殖出来、上記植物または他の系統群に遺伝 子操作技法により選択的に導入出来る。種々の菌暗号化品種の特異性誘導分子が 対応する抵抗性遺伝子を含んでいるトマト栽培品種に壊死を誘発することが確認 されている（デ　ヴイットとスピクマン。

１９８２　；デ　ヴイソト他、　１９８５）。かような品種の特異性誘導分子、 即ち非病原性遺伝子ａｖｒ９の生成物を同質になるまで精製した。この精製タン パク質を抵抗性遺伝子Ｃｆ９を含む遺伝子型のトマトの葉に注入すると、急速で 局部的な壊死が生じた。これは、他のＣｆ遺伝子を含んでいる遺伝子型の場合に は発生しない。この精製誘導分子のアミノ酸配列は決定された（ショルトンズー トマおよびデ　ヴイット、　１９８８）。

この誘導分子は、トマトのＣｆ９遺伝子型に対し、非病原性である菌類品種を含 むトマト対Ｃ，Ｆｕｌｖｕ＋ａ間のあらゆる適合相互作用において形成されたが 、但し、Ｃｆ９遺伝子型に対し、病原性である菌類品種を含んだ相互作用は全く なかった（ショルトンズートマ他、　１９８９）。壊死誘発タンパク質、即ち誘 導因子タンパク質を暗号化するｍＲＮＡを検出するために、４種のオリゴヌクレ オチド・プローブをアミノ酸配列から誘導合成させた（第１図）、これらのオリ ゴヌクレオチドはヌクレオチドの混合物（プローブＢ）またはイノシン（プロー ブＤ）または両方を組み合せたもの（プローブＡおよびＣ）のいずれかを含んで いる。４種のオリゴヌクレオチドはすべて５′末端で標識し、健全なトマト植物 から派生させたポリ（Ａ）−ＲＮＡと生体外で培養したＣ、Ｆｕｌｖｕ膳とを同 −量含み、３つの異なるトマトＣ，Ｆｕｌｖｕ＋ｉの適合相互作用を内容とする ノーサンプロティング法でハイブリダイゼーシコンし、同定する。第２図は、プ ローブＢを２つの適合相互作用、即ち栽培品種Ｃｆ４７品種４（レーン５）およ び栽培品種Ｃｆ５／品種５（レーン４）に存在する約６００のヌクレオチドのｍ ＲＮＡに交雑させた結果を示している。このｍＲＮＡは感染しなかったトマト植 物（レーン１）および生体外で培養したＣ、Ｆｕｌｖｕ＋＊　（レーン２）中で は発見されなかった。トマトＣｆ９遺伝型に対し、病原性の品種との相互作用は 期待されたが、栽培品種Ｃｆ５と品種２，４，５，９，１１（レーン５）の相互 作用においては、いかなるハイブリダイゼーションも観察されなかった。かよう にプローブＢは壊死誘発タンパク質のｍ　ＲＮ　Ａを検出し、プローブＡ、Ｃお よびＤは第２図に示すように特異性ｍ　ＲＮ　Ａを検出しなかった。

オリゴヌクレオチド・プローブＢはプライマー伸長実験に使用した。このオリゴ ヌクレオチドを５′末端において標識し、栽培品種Ｃｆ５と（第１図に示すレー ン４と５の）品種５または品種２，４，５，９．１１のいずれかとの適合相互作 用から誘導した同一量のポリ（Ａ）−ＲＮＡと交雑させた。このプライマーを逆 転写酵素で伸長させ、伸長生成物をポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧ Ｅ）で分析した。第３図は、特異性伸長生成物が栽培品種Ｃｆ５と品種５（レー ン１）の相互作用により生じたポリ（Ａ）−ＲＮＡ上に形成されたが、栽培品種 Ｃｆ５と品種２，４，５，９．１１　（レーン２）との相互作用により生じたポ リ（Ａ）−’ＲＮＡ上には形成されなかったことを示している。伸長生成物の寸 法は、約２７０ヌクレオチドであった。これは、ａｖｒ９のｍＲＮＡが壊死誘発 タンパク質の暗号配列用に約２００のヌクレオチドを所有していることを示して いる。

栽培品種Ｃｆ５と品種５（第２図、レーン４）の相互作用により生じたポリ（Ａ ）−ＲＮＡは、ラムダｇｔｌｌにｃＤＮＡライブラリーを準備するために使用さ れた。１００，０００の独立した組換え型を含むライブラリーが得られた。末端 を標識したオリゴヌクレオチド・プローブ付きの５０００のファージを含むフィ ルタを調べた結果、２つの可能なファージが分離された。１つは、弱く交雑され （ファージＡ９−１）、もう１つは、かなりよく交雑された（ファージＡ９−２ ）。

両ファージを精製し＋　ＤＮＡを分離した。このファージＤＮＡを４１１１し、 第２図に示すプロットと同一のプロットに交雑させた。約１５００のヌクレオチ ドを含有するｍ　ＲＮ　ＡにファージＡ９−１を交雑させた。該ファージはトマ トとＣ，Ｆｕｌ　−ｖｕｍ間の３相互作用点には小量存在していた。このファー ジは、第２図で観察されるｍ　ＲＮ　Ａに対応するｃＤＮＡを含んでいなかった 。

ファージＡ９−２の標識したＤＮＡを、栽培品種Ｃｆ４／品種４および栽培品種 Ｃｆ５７品種５の適合相互作用点、即ち、オリゴヌクレオチド・プローブＢによ り観察したハイブリダイゼーションに相当するパターンにおいてのみ存在した約 ６００のヌクレオチドのｍ　ＲＮ　Ａに交雑させた。従って、ファージＡ９−２ は、壊死誘発タンパク質を暗号化するｍＲＮＡのコピーを含んでいた。ファージ Ａ９−２中に存在するｃＤＮＡをサブクローン化し、その配列を決定した。挿入 は４０５塩基対の長さを有し、２０ヌクレオチドのポリ（Ａ）の尾部を含むｍ　 ＲＮ　Ａの３′末端に相当した。この挿入は壊死誘発タンパク質の全配列を暗号 化し、より長いオープンリーディングフレイム内に含まれていた。ＤＮＡ配列中 のオリゴヌクレオチド・プローブの位置とプライマー伸長生成物の寸法から、ク ローンＡ９−２の挿入は略２００塩基対をｍＲＮＡの５′末端で欠いたことが推 定された。全長のｃ　ＤＮＡを得るために、ｃＤＮＡライブラリーを、クローン Ａ９−２の挿入５′末端の７０ヌクレオチドを含む標識ＲＮＡプローブで再度検 査した。３つの異なったファージＡ９−３．Ａ９−５およびＡ９−８が得られ、 それらの挿入をサブクローン化し配列した。３つのクローンの配列は、オーバラ ップ領域においてクローンＡ９−２の配列と完全に一致していた＠４つのクロー ンは配列中の異なる位置から始まるポリ（Ａ）の尾部を含んでいる。第３図に示 したプライマー伸長実験から、最大クローン（Ａ９−３）は略３５のヌクレオチ ドを欠いていることが判った。従って、新しいプライマーは７５−１００の位置 でハイブリッド化した。このプライマーをジデオキシヌクレオチドを加えたポリ （Ａ）ＲＮＡでのプライマー伸長実験に使用した。このＲＮＡ配列により、Ａ９ −３挿入の前面にさらに２４のヌクレオチドが加えられた。その他の最終生成物 として主伸長生成物より長い５−２０のヌクレオチドが認められた。異なるｍＲ ＮＡに対するプライマーでの１回の伸長実験でただ１つの正確な寸法の不連続伸 長生成物が形成されたので、プライマー伸長による種々の最終生成物はｍＲＮＡ の劣化によって生じたものではなかった。非病原性遺伝子ａｖｒ９のｃＤＮＡ配 列と対応ｃＤＮＡクローンの構造を、第４図に示す。ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａクローンの 分離と特徴づけにより、壊死誘発タンパク質は少なくとも６３のアミノ酸の前駆 体タンパク質として形成されることが明らかになった。驚くべきことに５このＤ ＮＡ配列は、成熟誘導因子の分子配列のＣ末端に付加ヒスチジンコードンがある ことを示している。

前述したように、この誘導分子は２７アミノ酸の長さを有していた（ショルタン ートマおよびデ　ヴイット、　１９８ｇ）。タンパク質配列データを再検査した 結果、２８の位置に付加ヒスジン残基の存在が確認された。この残基は、このア ミノ酸信号が小さいためにタンパク質配列の当初分析時に見落とされたものであ る。成熟ａｖｒ９誘導因子のタンパク質分子量は３１８９ダルトンである。

ｃＤＮＡクローンＡ９−２を用いて、非病原性遺伝子ａｖｒ９のゲノミッククロ ーンをＣ，Ｆｕｌｖｕｍの品種５の（ラムダＥＭＢＬ３ベクター内）ゲノミック ライブラリーがら単離した。配列分析により、５９塩基対イントロン、推定ＴＡ ＴＡボックスおよび、プロモータとターミネータ領域内での若干の反復が判明し た。ｐＡＮ７で転換後、ゲノミッククローンを用いて品種２，４，５，９．１１ の安定した形質転換体を得た。

野生型品種２，４，５，９．１１はＣｆ９遺伝子型トマトについては病原性であ るが、しかし、形質転換体は病原性ではなかった。これは、これら形質転換体の 栽培品種についての特異性が、Ｃｆ９遺伝子型に対し、病原性から非病原性に表 現型的に転換したことを意味し、非病原性遺伝子ａｖｒ９が品種２．４，５，９ ．１１の遺伝子型から品種２，４，５．１１の遺伝子型に変化したことを示して いる。この実験により、非病原性遺伝子ａｖｒ９がＣｆ９抵抗性遺伝子との組み 合せにおいて、正に抵抗性の誘導因子であることが証明された。従って、植物内 で非病原性遺伝子（Ｅ）と対応抵抗性遺伝子（Ｒ）を局部的に同時に発現し、局 部時な壊死を生じせしめることが結論出来よう。

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同時発現が広い範囲の病原体により達成されるように規定される。広い範囲の病 原菌により導入される特異性誘導体蛋白質分子（ｅ）又はその部分を符号化する 植物病原菌からの非病原性遺伝子の少なくとも１配列を含むポリヌクレオチド配 列および植物プロモータ（Ｐ）は感染部位でのみ発現を許す。

上記方法により得られる植物および上記ポリヌクレオチド配列を含む植物。

国際調査報告 １＋１．７１０７．．１１ムー＋ａ＋ｎ＋−綽−ＰＣＴ／ＮＬ９１１０００５２ ＋−ｍ−ａ−ｍＭｅ’ｃ”−−＋ｉ−ＰＣＴ／ＮＬ　９１１０００５２Ｉ１１− 一−＾＠ｏｂ−ゆ＾崗　ＰＣτ／ＮＬ　９］、１０００５２国際調査報告

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．特異性誘導因子のタンパク質分子（ｅ）を符号化する少なくとも一つの病原 体の非病原性遺伝子（Ｅ）の配列または該配列の一部より成るポリヌクレオチド 配列を対応抵抗性遺伝子（Ｒ）を含有する植物のゲノムに導入し、該植物内にお いて前記遺伝子（Ｅ）および（Ｒ）が感染部位において同時に発現し、該遺伝子 の同時発現が広い範囲の病原体により誘発可能であるように該遺伝子を調節する 病原体からの植物の保護方法。
2. ２．特異性誘導因子のタンパク質分子（ｅ）を符号化する少なくとも一つの病原 体の非病原性遺伝子（Ｅ）の配列または該配列の一部よりなるポリヌクレオチド 配列と対応抵抗性遺伝子（Ｒ）を植物のゲノムに導入し、該植物内において前記 遺伝子（Ｅ）および（Ｒ）が感染部位において同時に発現し、該遺伝子の同時発 現が広い範囲の病原体により誘発可能であるように該遺伝子を調節する病原から の植物保護方法。
3. ３．前記感染部位における前記の同時発現を、遺伝子（Ｒ）をすでに含有してい る植物のゲノムに、−広範囲の病原体により誘発されることが出来、感染部位に おいてのみ対応非病原性遺伝子（Ｅ）の発現を許すプロモーター（Ｐ）の制御の もとに該対応非病原性遺伝子（Ｅ）を導入することにより達成する請求項の第１ 項または第２項による方法。
4. ４．前記感染部位における前記の同時発現を、一非病原性遺伝子（Ｅ）を、少な くとも感染部位において該遺伝子（Ｅ）の発現を許すプロモータ制御のもとに； 一対応抵抗性遺伝子（Ｒ）を、広範囲の病原体により誘発されることが出来、感 染部位においてのみ該病伝子（Ｒ）の発現を許すプロモータ（Ｐ）の制御のもと に；植物のゲノムに導入することにより達成する請求項の第１項または第２項に よる方法。
5. ５．前記プロモータ（Ｐ）をナス科の成員から選択したことを特徴とする請求項 の第１項乃至第４項のいずれか１項による方法。
6. ６．前記プロモータをトマトまたはナス・ジャガイモ属の成員から選択したこと を特徴とする請求項の第５項による方法。
7. ７．前記非病原性遺伝子（Ｅ）を植物の病原菌類から獲得したことを特徴とする 請求項の第１項乃至第６項のいずれか１項による方法。
8. ８．前記非病原性遺伝子（Ｅ）を植物の病原細菌から獲得したことを特徴とする 請求項の房１乃至第６項のいずれか１項による方法。
9. ９．前記非病原性遺伝子（Ｅ）を植物の寄生線虫類から獲得したことを特徴とす る請求項の第１項乃至第６項のいずれか１項による方法。
10. １０．前記非病原性遺伝子（Ｅ）を植物の病原ウィルスから獲得したことを特徴 とする請求項の第１項乃至第６項のいずれか１項による方法。
11. １１．前記非病原性遺伝子（Ｅ）をクラドスポリウム属フルプム（Ｃｌａｄｏｓ ｐｏｒｉｕｍ　Ｆｕｌｖｕｍ）から獲得したことを特徴とする請求項の第７項に よる方法。
12. １２．前記非病原性遺伝子（Ｅ）がａｖｒ９またはその一部であることを特徴と する請求項の第１１項による方法。
13. １３．前記非病原性遺伝子ａｖｒ９が第４図に示すようにヌクレオチド配列より 成ることを特徴とする請求項の第１２項による方法。
14. １４．前記抵抗性遺伝子（Ｒ）がナス科の成員である植物内に自然に存在するも のであることを特徴とする請求項の第１項乃至第１３項のいずれか１項による方 法。
15. １５．前記抵抗性遺伝子（Ｒ）がトマト・エスクレンタム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉ ｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）種の植物内に自然に存在するものであることを 特徴とする請求項の第１４項による方法。
16. １６．前記抵抗性遺伝子（Ｒ）がＣｆ９であることを特徴とする請求項の第１５ 項による方法。
17. １７．特異性誘導因子のタンパク質分子（ｅ）を符号化する植物病原体からの少 なくとも一つの非病原性遺伝子（Ｅ）の配列または該配列の一部と、広範囲の病 原体により誘発可能で感染部位においてのみ形質発現を許すプロモータ（Ｐ）よ り成るポリヌクレオチド配列。
18. １８．少なくとも一つの抵抗性遺伝子（Ｒ）の配列と、広範囲の病原体により誘 発可能で感染部位においてのみ形質発現を許すプロモータ（Ｐ）より成るポリヌ クレオチド配列。
19. １９．請求項の第１項乃至第１６項のいずれか１項による方法を用いて得られる 植物。
20. ２０．請求項の第１７項または第１８項によるポリヌクレオチド配列より成る植 物。