JPH05500805A - 抗血栓症作用を有する組合せ調剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗血栓症作用を有する組合せ調剤 本発明は、カルバサイクリン誘導体（Ｃａｒｂａｃｙｃｌｉｎｄｅｒｉｖａｔｅ ）シカプロスト（Ｃｉｃａｐｒｏｓｔ）もしくはニブタロプロスト（Ｅｐｔａｌ ｏｐｒｏｓｔ）及びアセチルサリチル酸（ＡＳＳ）を含有する、血小板機能の阻 害のため、ひいては血栓症治療のための組合せ生成物に関する。

動脈内の血栓形成の場合に、また一定の条件付きで静脈内の血栓形成の場合にも 、後に凝集を伴う血小板の活性化は中心的な役割を果たしている。この血小板活 性化は、例えばトロンビン、コラーゲン、アデノシンジホスフェート、アドレナ リンによってか又は血小板活性化因子（ＰＡＦ）による、血管壁損傷及び血液凝 固活性化の場合に生じる可能性がある刺激によって惹起される。この刺激によっ て凝集の他に同時に、血小板のいわゆる顆粒中に貯蔵されている物質の血小板か らの遊離が惹起される。これらの物質のうちの数種、例えばプラスミノーゲン活 性化因子−阻害物質−１（ＦＡＩ−１）又は血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）は 、血栓症／アテローム性動脈・硬化症の疾患の病原について重要であると思われ る。

このようにしてＦＡ　Ｉ　−１は、プラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキ ナーゼ及びｔ−ＰＡの強力な阻害物質であり、かつこの性質によって血栓による 閉塞後の血液供給の回復に必要な繊維素溶解を阻害する。

ＰＤＧＦは、様々な種類の細胞（殊に平滑筋細胞）の増殖を刺激するマイトジェ ンである。この機構のためにＰＤＧＦにはアテローム形成（Ａｔｈｅｒｏｇｅｎ ｅｓｅ）での重要な役割が付与される。血小板の凝集の阻害ばかりではな（病原 物質、ＦＡＩ−１及びＰＤＧＦの遊離の阻害は、血栓塞栓症疾患及びアテローム 性動脈硬化症疾患の予防に大いに寄与することができる。

血小板凝集阻害物質として公知のアセチルサリチル酸は、血小板機能に対する弱 い阻害物質に過ぎず、かつまた弱い抗血栓剤に過ぎない。シクロオキシゲナーゼ 阻害物質としてアセチルサリチル酸は血小板の活性化の過程、即ちトロンボキサ ン形成のみを阻害する。

付加的にアセチルサリチル酸によって護管内皮細胞内でプロスタサイクリン、即 ち血小板の天然の阻害物質の形成が阻害される。従ってアセチルサリチル酸の治 療的な作用の強さは、血栓塞栓症疾患の多くの形態の治療にとって十分ではない 。

天然プロスタサイクリンの類縁物（Ｍｉｍｅｔｉｋａ）、例えば上記のカルバサ イクリン誘導体は最近、臨床的な使用に経口による形で提供されている。該物質 は、血小板の全ての本質的な活性化過程の阻害物質並びに強力な血小板阻害物質 及び抗血栓剤と見做されている。付加的に該物質はなお別の性質、例えば、その 治療的作特表千５−５００８０５　（２） 用を一定の疾患形態の場合には補助する、血管平滑筋を弛緩させる能力を有して いる。より高い投与量の場合にはカルバサイクリンの物質種類に特徴的な副作用 のプロフィールが問題となり、このことによって適用可能な最大投与量は制限さ れており、かつ血小板機能阻害作用及び抗血栓作用を完全に臨床的に利用し尽く すことは制限されている。

シカプロストとアセチルサリチル酸からの組合せ調剤及びニブタロプロストとア セチルサリチル酸からの組合せ調剤が種々の生物学的系で相乗的に作用するか又 は各作用物質の協同的な効果を示すことが、今回意外にも見出された。

２つの組合せ物は、例えばアセチルサリチル酸の抗血栓作用の強さを凌駕し、か つ、血小板を阻害するカルバサイクリン含量について、１０倍までの差で、単独 で投与されるカルバサイクリン（シカプロスト、ニブタロプロスト）の等能であ る投与量と比較して著しい投与量減少を可能にする。

従って組合せ物は、膝組合せ物の血小板作用成分の協同的な強化によって、シカ プロスト／ニブタロプロストに比較してより高い特異性及び治療範囲を有するア セチルサリチル酸と比較して、より強力な血小板阻害物質かつより強力な抗血栓 剤である。カルバサイクリンの胃を保護する性質によって、アセチルサリチル酸 によって惹起される所望されない胃腸に関する副作用が低減される。

従って本発明は、アセチルサリチル酸とシカプロスト又はニブタロプロストとか らの組合せ調剤並びに、常用の助剤及び担持剤を含有する、血小板機能の阻害の ため、ひいては血栓症治療のための医薬品に関し、この場合、カルバサイクリン を、生理的に適合する塩基との該化合物の付加塩の形で使用することもできるし 、シクロデキストリンとの該化合物のクラスレート化合物の形で使用することも できる。

ニブタロプロスト［（５Ｅ）−（１６Ｓ）−１３゜１４−ジデヒドロ−Ｌａ、ｌ ｂ−ジホモ−１６，２０−ジメチル−３−オキサ−１８，１８，１９，１９−テ トラデヒドロ−６ａ−カルバプロスタグランジン−Ｉ２コ及びそのβ−シクロデ キストリンクラスレート化合物を次の指示に従って得ることができる。

２−　［（Ｅ）−（Ｉ　Ｓ、５Ｓ、６Ｓ、７Ｒ）−７−（ジメチル−ｔｅｒｔ、 −ブチルシリルオキシ）−６−［（３Ｓ、４Ｓ）−３−（ジメチル−ｔ６ｒｔ、 −ブチルシリルオキシ）−４−メチル−ノナ−１，６−ジイニル］−ビシクロ［ ：３．３．０］−オクタン−３＝イリデン］−エタン−１−オール（Ｗ、　５ｋ ｕｂａｌｌａ、Ｅ。

Ｓｃｈｌｌｉｎｇｅｒ、Ｃ，−５−５ｔｌｒｚｅｂｅｃｈｅｒ＋Ｈ，Ｖｏｒｂｒ ａｇｇｅｎ執筆、Ｊ、　Ｍｅｄｉｃｉｒ＋ａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２９．３ １３（１９８６）；当該文献中では化合物１５ａとして記載されている）６．９ ｇとトリメチル−オルト−４−ブロモブチレート１１．５ｇからの混合物に５０ ％の苛性ソーダｍ？ａ　１７　、２　ｍ　ｌ及びテトラブチルアンモニウムハイ ドロジエンスルフェート３３７ｍｇが添加され、かつ２２℃で１６時間アルゴン 下で撹拌される。引き続き、氷水冷却の際に水２０ｍ１で希釈され、かつ１０％ のクエン酸溶液でｐＨ５に酸性化される。エーテル各３００　ｍ　ｌで３回抽出 され、有機相がゾル２００ｍ１で１回洗浄され、硫酸マグネシウム上で乾燥され 、かつ真空中で蒸発濃縮される。ヘキサン／エーテル（８＋２）を用いたシリカ ゲルでの、残留物のクロマトグラフィー後に、（５Ｅ）−（１６３）−１３，１ ４−ジデヒドロ−１ａ、ｌｂ−ジホモ−１６，２０−ジメチル−３−オキサ−１ ８，１８，１９，１９−テトラ−デヒドロ−６ａ−カルバプロスタグランジン− １２−メチルエステル−１１，１５−ビス−（ジメチル−ｔｅｒｔ、−ブチル− エーテル）７．６ｇが無色の油として得られる。

ＩＲ（ＣＨＣ１３）：２９５３．２９２５．２８５９．２２３０．１７３０．１ ２５０．８３８　ｃ　ｍ−１゜シリルエーテル分解のために上記のビスシリルエ ーテル７．２５ｇは、酢酸／水／テトラヒドロフラン（６５＋３ｓ＋ｔＯ）から の混合物６００ｍ１と一緒に２４℃で４８時間撹拌される。引き続き、真空中で 蒸発濃縮され、かつ残留物がシリカゲルでクロマトグラフィー処理される。酢酸 ／ヘキサン（３＋２）を用いて（５Ｅ）−（１６Ｓ）−１３，１４−ジデヒドロ −１ａ、ｌｂ−ジホモ−１６，２０−ジメチル−３−オキサ−１８，１８，１９ ，１９−テトラデヒドロ−６ａ−カルバプロスタグランジン−１２−メチルエス テル３．９ｇが無色の油として得られる。

ＩＲ（ＣＨＣＩｓ）：　３４００　（幅広）、２９３５．２８６５．２２３０． １７３５　ａｍ−１゜鹸化のために、メタノール３５ｍ１中の先に得られたメチ ルエステル３．６６ｇからの溶液は、０．５モルの苛性ソーダ溶液３５ｍ１と一 緒にアルゴン下で２４°Ｃで３０分間撹拌される。引き続き、水２０ｍ１で希釈 され、２０％のクエン酸溶液でｐＨ２に酸性化され、塩化メチレン各１００ｍ１ で４回抽出され、有機相がゾル５０ｍ１で１回洗浄され、硫酸ナトリウム上で乾 燥され、かつ真空中で蒸発濃縮される。残留物は、酢酸エステルを用いてシリカ ゲルでクロマトグラフィー処理される。この場合には、ニブタロプロスト［（５ Ｅ）−（１６Ｓ）−１３，１４−ジデヒドロ−１ａ、ｌｂ−ジホモ−１６，２０ −ジメチル−３−オキサ−１８，１８，１９，１９−テトラデヒドロ−６ａ−カ ルパプロスタグランジンー１２］３．４ｇが無色の油として得られる。

ＩＲ（ＣＨＣＩｓ）：　３４００　（幅広）、２９６２．２９４０．２８６５． ２２３０、１７２２ｃｍ−’。

（５Ｅ）−（１６Ｓ）−１３，１４−ジデヒドロ−特表平５−５００８０５　（ ３） ｌａ、ｌｂ−ジホモ−１６，２０−ジメチル−３−オキサ−１８，１８，１９， １９−テトラ−デヒドロ−６ａ−カルバ−プロスタグランジン−■２のβ−シク ロデキストリンクラスレート化合物。

β−シクロデキストリン４１．７５ｇが水２９８ｍ１中で８０℃で溶解され、か つエタノール２４ｍ１中の（５Ｅ）−（１６Ｓ）−１３，１４−ジデヒドロ−１ ａ、ｌｂ−ジホモ−１６，２０−ジメチル−３−オキサ−１８，１８，１９，１ ９−テトラデヒドロ−６ａ−カルパープロスタグランジン−Ｉ２１．５ｇの溶液 が１５分間で滴加される。この混合物は６０℃で４時間撹拌され、さらに夜通し 撹拌下で冷却される。

沈殿した固形物は吸引濾過され、水−エタノール（１：１）からの混合物５０ｍ １で洗浄され、かつ０．１トル及び２５℃で五酸化焼土で２４時間乾燥される。

上記カルバサイクリン類似体のβ−シクロデキストリン−タラスレート化合物の さらさらした結晶３８ｇが得られる。クラスレート化合物中のカルバサイクリン 類似体の含量は滴定によって測定され、かつ３．３％である。

シカプロスト及びそのβ−シクロデキストリンクラスレート化合物は、欧州特許 第１１９　９４９号明細書及び国際公開公報Ｗ○　８７１０５２９４に記載され ている方法に相応して得ることができる。

塩形成には、生理的に適合した塩の形成の場合に当業者に公知である無機塩基及 び有機塩基が適当である。

例えばアルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム、ア ルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、アンモニア、アミン、例え ばエタノールアミン、ジェタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル グルカミン、モルホリン、トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル−アミン等が 挙げられる。クラスレート化合物形成に有利なシクロデキストリンは、β−シク ロデキストリンである。

アセチルサリチル酸及び上記のカルバサイクリンは、通常は組合せ物の各物質に 常用の量を下回る量で使用される。本発明に相応して使用すべき量は、血栓の範 囲に依存する。

本発明による組合せ物は有利には経口投与される。

アセチルサリチル酸及びカルバサイクリンは相互に重量比５・１０−６：１〜１ ：１で存在し、この場合、カルバサイクリン投与量単位は１〜１０００μｇであ り、アセチルサリチル酸投与量単位は１〜５００ｍｇである。

例　１ ヒトの血小板豊富な血漿（ＰＲＰ）をアブレボメーター（Ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔ ｅｒ）中で３７℃でインキュベーションし、かつ凝集を生じさせるためにコラー ゲン３μｇ／ｍｌを混入した。シカプロスト及びＡＳＳ並びにこの２つの物質の 組合せ物を、活性化因子であるコラーゲンの添加１分前に上記出発物質にピペッ トで添加した。

凝集の経過をアブレボメーター中で記録した。コラーゲン添加１０分後に試料を ３０００ｒｐｍで遠心分離し、かつ上澄みをエンザイム・リンクド・イムノソル ベント・アッセイ（ｅｎｚｙｍｅ　１ｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ 　ａｓｓａｙ）　（ＥＬ　Ｉ　ＳＡ）で該試料中のプラスミノーゲン活性化因子 −阻害物質−１（ＦＡＩ−１）の含量について試験し、かつラジオイムノアッセ イ（ＲＩ　Ａ）で血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の含量について試験した。

結果： 単独で作用しない濃度１０−１０モルないしは１０−９モルのシカプロストは、 同様に作用しないかないしは弱く作用する濃度３Ｘ１０−５モル、１０−４モル 及び３ＸＩＯ−４モルのＡＳＳとの組合せ物の形で４２％、７１％及び９１％の 血小板凝集阻害が行なった（第１表）、ＦＡＩ−１の放出は同じ阻害物質濃度の 場合で３６％、５４％及び６４％まで阻害され、ＰＤＧＦの遊離は２４％、４２ ％及び５５％までが阻害された。シカプロスト／Ａ３５組合せ物の作用は、Ｍ、 Ｃ，ｌｌｅｒｅｎｂａｕｍ氏（ＣＩｉｎ、ｅｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２８　： 　１−１８，１９７７）の定義に相応して相乗的である、； 第１表 凝集並びにＦＡＩ−１及びＰＤＧＦの阻害対照標準反応の％での、コラーゲンで 刺激されたヒトの血小板の遊離（Ｎ＝６） 阻害％ 凝集　ＰＡｉ−Ｉ　ＰＤＧＦ シカプロスト１０−１０モル′　４±３　０±８　１±２１０−９モル　０±３ 　０±１２　３±３１０−８モル　９５±４７２±３８１±３１０−７モル　９ ５±３８０±５８１±１ＡＳＳ　３ｘ１０−５モル　２±１　６±１０８±２１ ０−４モル　９±３　１０±８２６±６３ｘ１０−’モル３０±６２８±４３９ ±２１０−３モル　４６±６２７±１０４７±４シカプロスト１０−１０モル ＋　ＡＳＳ　３ｘ１０−５モル４２　±１７３６±１４２４±１０シカプロスト １Ｏ−９モル ＋　ＡＳＳ　１０−４モル　７１　ｔｈ１２５４　±９４２±８シカプロスト１ ０−９モル ＋　ＡＳＳ　３ｘ１０−４モル９１　±２６４　±５５５　±６ＡＳＳ及びシカ プロストの単一投与に対して顕著（＝５％、ランゲスメンテスト（Ｒａｎｇｓｍ ｍｅｎｔｅｓｔ）　）例　２ 麻酔をかけられたモルモットに、コラーゲン（４０μｇ／ｋ　ｇ　静脈内）の注 射によって可逆性の血小板減少症を生じさせた。この血小板減少症の原因は、コ ラーゲンにより刺激された血小板の凝集体形成及び肺の中への該血小板凝集体の 塞栓形成（Ｅｍｂｏｌｉｓａｔｉｏｎ）であり、この肺の中ではさらに該血小板 凝集体は停滞し、その結果、血液中の血小板数の観察される減少（血小板減少症 ）が惹起される。管理条件下で一定した血小板減少症（それぞれの基本水準の血 小板数の平均して４０％の減少）は、血管内の血小板凝集の尺度として役立つ。

結果 単独では作用しない投与量１ｎｇ／ｋｇ／分　静脈内　のシカプロストは、弱く 阻害する投与量０．５ｍｇ／ｋ　ｇ　静脈内　のＡＳＳとの組合せ物の形で血小 板減少症の３４％の阻害を行ない、このパーセンテージは対照標準及び２つの作 用物質それぞれの単一投与に対して顕著である（第２表）。通常では上記効果は 、３倍多い投与量のシカプロストによってのみ達成される。

第２表　コラーゲンにより誘発されたモルモットの血小板減少症の阻害（平均値 ±ＳＥＭ） Ｎ　血小板減少症阻害 ％ 対照標準　８　２±６ シカプロストｌ　ｎｇ／ｋｇ／分　６　８±５３　ｎｇ／ｋｇ／分　６　３６± ４ Ａ　Ｓ　３　０．５ｍｇ／ｋｇ　＋ ａ、　ｂ シカプロスト１　ｎｇ／ｋｇ／分　８　３４±５対照標準に対して顕著（ｔ−テ スト（１−Ｔｅｓｔ）、ｐ〈ＡＳＳ／シカプロストに対して顕著（ｐ＜０．０１ ）例　３ 麻酔をかけられたモルモットの腸間膜ループ（Ｍｅｓｅｎｔｒｉａｌｓｃｈｌｉ ｎｇｅ）を準備し、かつ熱処理した食塩溶液で潅流した。生体顕微鏡検査法によ る監視下で腸間膜細動脈（２０〜５０ｍ）の血管壁を電気インパルスの連続によ って損傷させた。引き続き、上昇する濃度のＡＤＰ（アデノシンジホスフェート ）ｆｒ液の局所的な使用によって、閉塞を生じさせる血小板性血栓が細動脈の予 め損傷をうけた箇所で形成される血栓形成を確認した。この血栓形成ＡＤＰ濃度 は、血管に特異的にがつ再発する可能性をもって当該の細動脈に血栓を生じさせ る。

結果 ＡＳＳ　ｌｏｍｇ／ｋｇ　静脈内は、血栓形成ＡＤＰ濃度を変更しなかった（第 ３表）。シカプロスト１０ｎｇ／ｋｇ／分　静脈内　も同様にこの投与量の場合 に顕著には作用しなかった。上記血栓症モデルに作用しない上記投与量のシカプ ロストとＡＳＳとの組合せ物によって、１．２７＋０．５４　ｌｏｇμモル（ｂ 出発濃度の３０．９倍）という血栓形成ＡＤＰ濃度の顕著な上昇が生じた。組合 せ物のこの抗血栓症作用は、ＡＳＳのみによって達成することはできず、かつ１ ０倍高い投与量（１００ｎｇ／ｋｇ／分　静脈内。

ＡＤＰ　１．３２±Ｑ、２　ｌｏｇμモルの上昇、Ｎ＝５）の場合のみ、シカプ ロストの単一投与によって達成することができる。

第３表：モルモットの予め損傷をうけた腸間膜細動脈に閉塞を生じさせる血小板 性血栓発生への、シカプロスト、ＡＳＳ及びシカプロスト＋ＡＳＳの組合せ物の 作用（平均値＋ＳＥＭ） 血栓形成ＡＤＰ濃度 Ｎ　初期値　上昇値 ［μモル］　Ｃｌｏｇμ千ルコ １１００ｎ／ｋｇ／分５　６４．６：２３．７　＋１．３２　＝０．２０シ力プ ロスト１０ｎｇ／ｋｇ／分 対照棟準に対して顕著（を−試験、ｐ＜０．０５）ＡＳＳ／シカプロスト−回投 与量に対して顕著（２例　４ 麻酔をかけられたモルモットの外部左側の頚動脈の長さ２ｃｍの切片を注意深く 採取し、かつ小さな金属プレート上に被せた。引き続き、長さ１ｃｍにわたる血 管壁を、−１５℃に冷却した重さ２００ｇの鋼鉄スタンバ−で３分間荷重をかけ た。このようにして強力かつ局所的な血管壁損傷を大動脈に生じさせ、かつ損傷 をうけた箇所で赤色の血栓が成長した。損傷の３時間後に、損傷をうけた断片及 び対側の動脈の同じ長さの対照標準を取り、洗浄し、かつヘモグロビン試駿薬中 に導入した。２４時間後番二２つの断片のへモグビン含量を測定した。さらに、 このヘモグロビン含量の差から、赤色の血栓のヘモグロビン正味含量を血栓の大 きさの尺度として算出した。

結果 ＡＳＳ　５ｍｇ／ｋｇ　ｎＷ内　は、モルモット−頚動脈中の血栓形成に著しい 影響は与えなかった（第４表）。同様に著しくは作用しない投与量０．３ｎ／ｋ ｇ／分　静赤内　のシカプロストは、ＡＳＳと組合せ物の形で著しい抗血栓作用 を生じさせ、血栓ヘモグロビン含量は８．６μモル（中央値）の対照準に対して ８５％の差で１．３μモルに減少した。

第４表　圧力＋冷却によって予め損傷させられたモルモットの頚動脈中の血栓形 成への、シカプロスト、ＡＳＳ及びシカプロスト＋ＡＳＳの組合せ物の作用（血 栓−ヘモグロビン［Ｈｂ］含量の中央値及び四分位数）血栓Ｈｂ含量［４モル］ Ｎ中央値　Ｑ２５／Ｑ７５ 対照標準　３０８．６　５．７／１２．１ｎ、ｓ。

ノカフ′　ロスト０．３ｎｇ／ｋｇ／分　１０　１２．４　８．０／２５．０ｎ 、ｓ。

Ａ　Ｓ　３　５ｍｇ／ｋｇ　１０３．４．　−０．１／　１３．８ンカブロスト 　０．３ｎｇ／ｋｇ／分 ａ、ｂ ＋　Ａ　Ｓ　Ｓ　５ｍｇ／ｋｇ　１０　１．３　−１．２１５．１スト） 国際調査報告 ｍ。Ｉｍａａｌ　Ａｅｍｌｃａ、１１ｓ、ＰＣｒ／ＤＥ　９０１００７５０国際 調査報告 ＤＥ　９０００７５０ ＳＡ　４０４５５

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．血小板機能の阻害のため、ひいては血栓症治療のための組合せ生成物におい て、アセチルサリチル酸及びカルバサイクリン誘導体シカプロストもしくはエブ タロプロストを含有することを特徴とする、血小板機能の阻害のため、ひいては 血栓症治療のための組合せ生成物。
2. ２．アセチルサリチル酸及びカルバサイクリン誘導体が分離された投与量単位で 存在する、請求項１記載の生成物。
3. ３．アセチルサリチル酸及びカルバサイクリン誘導体が１つの投与量単位で存在 する、請求項１記載の生成物。
4. ４．アセチルサリチル酸及びカルバサイクリン誘導体が相互に重量比１：５・１ ０−６〜１：１で存在する、請求項１記載の生成物。
5. ５．カルバサイクリン誘導体投与量単位１〜１０００μｇ及びアセチルサリチル 酸投与量単位１〜５００ｍｇを含有する、請求項１記載の生成物。
6. ６．常用の助剤及び担持剤との化合物の形での、血小板機能阻害のため、ひいて は血栓症治療のための医薬品製造への、アセチルサリチル酸及びカルバサイクリ ン誘導体シカプロストもしくはエブタロプロストからなる組合せ生成物の使用。